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PRACTICA N 13 NUCLELO: CICLO CELULAR DURANTE LA MITOSIS INTRODUCCION: El nucleolo fue descubierto por Fontana en 1781 en el sistema nervioso

de la vbora y se distingui por la coloracin de impregnacin argntica. En estas clulas se detectaron nucleolos teidos con nitrato de plata y se encontr que una fibrilla se impregnaba de plata la cual se denomino nucleolonema el cual contena el NOR. En 1960 Gordn determina que el ncleo estaba relacionado con la sntesis de protena. El NOR es la regin organizadora del nucleolo y su composicin es citoqumicamente muy diferente al resto de los cromosomas que presentan regin NOR. Los organizadores nucleolares son las constricciones secundarias de ciertos cromosomas en las que los numerosos genes del NOR codifican los ARN ribosmicos 18S y 28S, los cuales inducen la formacin de los nucleolos. Estas constricciones secundarias S forman parte de los ARNr se transcribe muy activamente, lo cual inhibe la condensacin del cromosoma a ese nivel. En el hombre los organizadores nucleolares se encuentran en los cromosomas 13, 14, 15, 21 y 22 todos los cuales son acrocntricos y tienen satlites, todos los cromosomas que tienen la regin NOR presenta satlites.

Metacntric o CLASIFICACION DE LOS CROMOSOMAS DE ACUERDO A LA POSICION DEL CENTROMERO. Submetacntrico

Acrocntric o

Telocntrico

ESTRUCTURA DEL NUCLEOLO 1.- parte cromosomita 2.- parte o zona fibrilar 3.- parte o zona granulada.

ADN 7%

Histonas proteinitas 6% COMPOSICIO N DEL NUCLEOLO

RNA 11%

Protenas residuales 55%

Protenas no histonicas 21%

CICLO NUCLEOLAR DURANTE LA MITOSIS: La mitosis es la divisin celular mas citocinesis y produce dos clulas hijas idnticas, los cromosomas replicados se disponen d manera que cada clula nueva recibe un complemento completo. Por convencin, se han establecido cuatro fases en el proceso de la mitosis: profase, metafase, anafase y telofase, siendo la profase la de mayor duracin; de manera que si el tiempo requerido para una divisin mittica es ms o menos 10 minutos, la profase dura unos 6 minutos. Durante la interfase el material cromosmico se halla disperso formando unos finsimos filamentos o cordones denominados cromatina, es lo nico que puede verse en el ncleo en esta etapa. OBJETIVOS: Observar bajo el campo del microscopio cuerpos pre-nucleolares mediante el mtodo de coloracin por impregnacin argntica. MATERIALES: Bistur. Estiletes. Gotero o pipeta pasteur. Hoja de afeitar. Laminas cubre objetos. Lamina porta objetos. Lpices con punta. Lunas de reloj. Mechero. Microscopio. Papel filtro. Pinzas. Placa petri. Tijeras. REACTIVOS: Formol al 10%. Hidroquinona al 1%. Nitrato de plata al 2%.

MATERIALES BIOLOGICOS. Bulbos de cebolla con races meristemticas. PROCEDIMIENTO: COLORACION DEL NUCLEOLO IMPREGNACION ARGENTICA. EN CELULAS VEGETALES POR

Fijar races meristemticas de cebolla en una mezcla de formol al 10% e hidroquinona al 1% en proporcin 1:1, por una a dos horas a temperatura ambiente.

Lavar las raicillas con agua destilada por tres veces en un tiempo total de 10 minutos.

Luego introducir en una solucin acuosa de nitrato de plata al 2%, mantenindolo a 700C en oscuridad durante 10 a 15 horas generalmente toda la noche.

Lavar las raicillas con agua destilada en un tiempo total de 30 minutos. Reducir la temperatura de las raicillas en forma gradual hasta temperatura ambiente en un tiempo de 1 a 2 horas en la misma mezcla que se utilizo para la fijacin. Lavar las raicillas con agua destilada en un tiempo total de 30 minutos, cambiando el agua. Colocar las raicillas en el centro de las laminas porta objetos incorporando 2 a 3 gotas de acido actico al 50%. Cortar 2 a 3 mm. del pice de las races y descartar el resto. Cubrir con un cubre objetos, luego realizar golpeteos con un lpiz de punta en forma concntrica desde la parte central hacia la parte lateral del cubre objetos, estos golpeteos se efectan con el fin de que las clulas se disocien. Proceder al aplastado o squash colocando dobleces de papel filtro o absorbente entre el dedo pulgar y la preparacin, presionar fuertemente de tal manera que las clulas queden en un solo plano. Proceder a la observacin al microscopio con aumentos de 10x y 40x.

Fotografas a 40x:

Telofase

Interfase

Metafase

Anafase

Anafase

Anafase

CUESTIONARIOS: 1. A que se denomina regin NOR?

Es la regin organizadora del nucleolo y su composicin es citoquimicamente muy diferente al resto de los cromosomas. Son constricciones secundarias de ciertos cromosomas. Los numerosos genes del NOR codifican al ARN ribosmico 18S y 28S los cuales son los que inducen a la formacin de los nucleolos. 2. Cul es la estructura y composicin del nucleolo? La estructura del nucleolo esta dada por las siguientes pargtes: - Parte cromosmica que dar origen al nucleolo. - Parte o zona fibrilar. - Parte o zona granular. En cuanto a su composicin qumica esta dada por: - DNA 7%. - RNA 11%. - Histonas proteicas 6%. - Protenas no histonicas 21%. - Protenas residuales 55%. 3. Qu es Silencio Gnico? El trmino silenciamiento gnico se utiliza habitualmente para describir el apagado de un determinado gen, y es un mecanismo general que ocurre durante la regulacin de la expresin gnica. A travs de este mecanismo, la maquinaria celular impide la expresin de un gen que debera estar encendido en circunstancias normales. 4. Esquematice el ciclo nucleolar dentro del ciclo celular.

BIBLIOGRAFIA: _ Vilee, C .& E. Solomon, 1992;Biologia ;Int-McGraw Hill 4: 95-96;7:166-172; 8:181197

Silvia Alvarez, Mara Jos Novoa Bermudez y Alberto Boveris. Ctedra de Fisicoqumica, Facultad de Farmacia y Bioqumica, Universidad de Buenos Aires.1994 _ BERNAL PUENTES, D.C 2003 Manual de laboratorio de biologa celular para ciencias de la salud _ HARPER, MURRIA, Bioquimica , Mexico

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