Faculdade de Medicina da Universidade de Lisboa Mdulo II.

I Sistemas Orgnicos e Funcionais | Ano lectivo 09/10

Receptores de membrana e mecanismos de transduo de sinais

Um frmaco uma substncia qumica que, quando aplicada a um sistema fisiolgico, afecta o seu funcionamento. De um modo geral, h quatro tipos de molculas reguladoras que normalmente actuam como alvos farmacolgicos primrios: 1. Receptores 2. Enzimas 3. Molculas transportadoras 4. Canais inicos

1. Receptores
Elementos (sensores) que estabelecem comunicao qumica e coordenam, assim, a funo de todas as clulas no organismo; Protenas transmembranares que reconhecem e aos quais se ligam substncias qumicas endgenas (como hormonas, neurotransmissores), de modo especfico e reversvel; A ligao traduz-se numa determinada resposta, com modificao do comportamento celular transduo de sinal alteraes metablicas, da expresso gentica,

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2. Canais inicos
Possuem um receptor na sua estrutura; Podem ser ocupados por: - Antagonistas (bloqueiam o canal, impedindo a passagem de ies); - Agonistas (modulam actividade do canal, aumentando ou diminuindo a permeabilidade, consoante o canal inico em causa).

3. Enzimas
Frmaco um substrato anlogo, que inibe competitivamente a enzima (ex. captopril age sobre enzima conversora de angiotensina); Molcula do frmaco ligam-se irreversivelmente e no competitivamente enzima (ex.: aspirina); Frmaco actua como falso substrato: sofre aco enzimtica e transformado quimicamente, originando um produto metablico que normalmente no produzido e que altera via metablica normal); Nota: Alguns frmacos necessitam de ser degradados enzimaticamente para ficarem activos prfrmacos.

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4. Molculas transportadoras
Semelhantes a canais inicos, embora geralmente dem passagem a molculas de maiores dimenses; So importantes no transporte de molculas polares (e, por isso, pouco lipossolveis) atravs das membranas celulares; A actividade das molculas transportadoras est muitas vezes associada a fenmenos de simporte ou antiporte, com transporte de Na+ na mesma direco ou na direco oposta da molcula co-transportada, respectivamente; Exemplos: 1. Transportadores de glicose e aminocidos para o interior das clulas; 2. Transportadores de Na+ e Ca2+ para o exterior das clulas; 3. Transportadores de neurotransmissores (ou precursores de neurotransmissores) pelos terminais nervosos.

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Agonista vs. Antagonista

1- Agonista
Ligando que se liga ao receptor e desencadeia uma resposta biolgica. Para que haja resposta, a ligao ao receptor tem de ter uma determinada afinidade (que garanta ligao ao receptor) e eficcia (que traduza resposta desencadeada); Quando o agonista uma molcula hidrossolvel (ex.: hormonoas peptdicas), liga-se a receptores membranares e o sinal desencadeado pela ligao transmitido e amplificado pela activao de molculas intracelulares 2s mensageiros (ex: AMPc, GMPc, IP3) resposta rpida, ao nvel da actividade enzimtica; Se o agonista for lipossolvel (ex.: hormonas esterides), entra na clula, atravessando a bicamada fosfolipdica da membrana, para se ligar a receptores intracelulares. O complexo ligando-receptor actua sobre o DNA, desencadeando uma resposta mais lenta, ao nvel da expresso genica por modificao da sntese proteica.

2- Antagonista
Substncia que se liga ao receptor, mas no desencadeia resposta biolgica; Tem afinidade (porque estabelece ligao), mas no tem eficcia (j que no produz nenhuma resposta celular); Utilizados terapeuticamente para corrigir situaes de hiperactividade/hiperfuno (antagonistas bloqueiam o receptor e diminuem, assim, a sua actividade).

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Tipos de receptores
De acordo com a estrutura e mecanismo de transduo, existem 4 tipos de receptores: 1. Receptores ionotrpicos ; 2. Receptores metabolotrpicos; 3. Receptores associados a protenas cinases; 4. Receptores intranucleares.

R ec ep to r es ionotrpicos

R ec ep to r es metabolotrpicos (associados protena G - GPCR's) *

Membrana

R ec ep to r es acoplados a cinases

R ec ep to r es nucleares
Intracelular (alguns situam-se no citosol e migram para o ncleo, na presena do ligante)

Localizao

Membrana

Membrana

Caractersticas gerais

Canais inicos controlados por ligantes

Acoplados sistemas efectores por Protena G

Receptores de membrana para mediadores essencialmente proteicos

Responsveis pela regulao da transcrio gnica

Efector Escala de tempo

Canal inico Milissegundos Receptores para neurotransmissores de aco rpida (ex.: receptor nicotnico de acetilcolina)

Canal ou enzima Segundos Receptores para neurotransmissores de aco lenta (ex.: receptor muscarnio de acetilcolina e receptores adrenrgicos)

Protenas cinases Horas

Transcrio gnica Horas

Exemplos

Receptores para insulina, citocinas, factores de crescimento

Receptores para hormonas esterides, hormonas tiroideias

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* Receptores metabolotrpicos ou GPCRs (associados protena G) Cadeia polipeptdica (at 1100 aminociodos); Constitudos por -hlices transmembranares com 2 domnios: - Domnio N-terminal (extracelular); - Domnio C-terminal (intracelular). Denominao deve-se ao facto de interagirem com nucletidos guanina, na forma dos compostos GDP e GTP

Funes: - Aco e secreo hormonal; - Transmisso nervosa; - Quimiotaxia (migrao de clulas, sobretudo leuccitos, em direco a um gradiente qumico); - Exocitose; - Embriognese; - Crescimento e diferenciao celulares; - Funes sensitivas (olfacto, paladar, viso); - Infeco viral.

Reconhecem receptores de protena G (GPCRs) activos Estabelecem comunicao intermdia entre receptores transmembranares (GPCRs) e os efectores (canais inicos ou enzimas-alvo). Constituda por trs subunidades: - Subunidade (tem actividade enzimtica: converte GTP em GDP); - Subunidade ; - Subunidade ; Existem dois tipos de subunidade : 1. Subunidade s estimula produo de AMPc; permanentemente activada por toxina da Vibrio cholerae; 2. Subunidade i inibe produo de AMPc; permanentemente inibida por toxina da Bordella pertussis; Alvos principais da protena G:
1. Adeninil-ciclase (sistema adeninil-ciclase/AMPc) VIA PROTENA CINASE A 2. Fosfolipase C (sistema fosfolipase C/fosfato de inositol) - VIA PROTENA CINASE C 3. Guanilato ciclase (sistema guanilato-ciclase/GMPc) - VIA PROTENA CINASE G 2+ + 4. Canais inicos (sobretudo Ca e K )

Protena G

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NOTA:
A fosforilao o mecanismo regulador de grande parte dos processos metablicos em clulas eucariticas. Cinases enzimas que catalisam preferencialmente reaces de fosforilao, com converso de ATP a ADP (ATP ADP + Pi), reaco muito favorvel por ser muito exergnica. Fosfatases catalisam geralmente reaces de desfosforilao, que no envolvem passagem de ATP a ADP, visto tratar-se de uma reaco pouco favorvel do ponto de vista energtico. O ATP o dador mais comum de grupos fosfato.

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1. VIA PROTENA CINASE A

Ligao do ligando ao receptor GPCRs GTP hidrolisado a GDP

Protena G activada

Subunidade cessa activao de adenil-ciclase

Deixa de ser produzido AMPc, a partir de ATP

Libertao do GDP

GTP liga-se subunidade

Reassociao da subunidade com subunidade e

Subunidade separa-se das restantes

Dissociao do complexo ligando-receptor

Formao do complexo -GPT

Formao do complexo -

Activao de adenilciclase

Activao de alvos (enzimas, canais inicos)

Sntese de AMPc, a partir de ATP

4 AMPc activam Protena Cinase A (PKA)

PKA liberta as 2 subunidades catalticas (vo fosforilar outras protenas)

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Protena Cinase A (PKA) constituda por dois tipos de subunidades: 1. Subunidade reguladora (R); 2. Subunidade cataltica (C);

Na ausncia de AMPc PKA forma o complexo R2C2 (enzimaticamente inactivo)

Na presena de AMPc (4 molculas) Dissociao do complexo R2C2: 1 subunidade R2; 2 subunidades C livres, aptas a fosforilar protenas-alvo.

Exemplo:
As respostas luta ou fuga que, em situaes de stress, preparam o msculo para a aco so o resultado da actividade da Protena Cinase A. Nestas situaes, a glndula supra-renal produz a hormona adrenalina (ou epinefrina) que lanada na corrente sangunea e activa receptores -adrenrgicos do corao e do msculo liso. Com a activao dos receptores, aumenta a produo de AMPc e PKA activada, fosforilnado protenas-alvo, provocando assim aumento da frequncia cardaca, dilatao das pupilas, mobilizao de energia (liplise dos adipcitos, glicogenlise e gliconeognese) e aumento do fluxo sanguneo no msculo esqueltico.

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1. VIA PROTENA CINASE A (imagens)

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2. VIA PROTENA CINASE C

Ligao ligando-receptor PGCRs

Mecanismo de transduo pela Protena G (semelhante ao da vida PKA)

Activao da fosfolipase C (PLC)

Formao de dois 2s mensageiros

PLC catalisa hidrlise de PIP2 (difosfato fosfatidinositol)

DAG (Diacilglicerol)

IP3 (Trifosfato de inositol)

IP3 desfosforilado a inositol, que se liga ao cido fosfatdico, convertendo-se em PIP2 (pronto p/ novo ciclo).

Protena Cinase C (Ca dependente) activada 2+ pelos nveis de Ca , pelo DAG e pla fosfatidilserina

2+

Difunde-se pelo citosol e liga-se a um receptor prprio na membrana das vesculas do RE

Protena Cinase C (PKC) activa vai fosforilar enzimas especficas no citosol

Libertao de Ca no citosol

2+

Ca2+ e calmodulina contribuem para juno de vesculas com membrana plasmtica nos processos de exocitose

NOTA:
Ltio (Li3+) inibe passagem de IP3 a inositol.

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3. VIA DA PROTENA CINASE G (PKG)

O sistema da protena cinase G GMPc-dependente, ou seja, a produo da protena PKG estimulada pelo aumento dos nveis de GMPc (2 mensageiro) no citosol, por aco da guanil ciclase. A protena cinase G formada por aco de GMPc vai fosforilar enzimas no citosol, provocando, entre outros efeitos, relaxamento muscular e vasodilatao, aumentando o aporte de sangue e a disponibilidade de oxignio. O monxido de azoto (NO) um composto amplamente utilizado que estimula esta via, ao aumentar a actividade da guanil ciclase.

Monxido de azoto (NO)

estimula

Guanil ciclase

Estimula produo de GMPc, a partir de ATP

Activao da Protena Cinase G (PKG)

4. CANAIS INICOS
Receptores acoplados protena G podem controlar directamente canais inicos, sem interveno de segundos mensageiros, estabelecendo-se interaco entre a subunidade da Protena G e o canal inico. Exemplos: receptores de acetilcolina1 do msculo cardaco e receptores para analgsicos opiides2 nas clulas neuronais controlam permeabilidade dos canais de io K+.

Neurotransmissor que causa vasodilatao, diminuio da frequncia cardaca e reduo de fora de contraco cardaca
2

Grupo de frmacos que actuam nos receptores opiides neuronais. Eles produzem aces de insensibilidade dor (analgesia) e so usados principalmente na terapia da dor crnica e da dor aguda de alta intensidade.
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REGULAO DOS NVEIS INTRACELULARES DE CLCIO

A concentrao intracelular de clcio, [Ca2+]i desempenha um papel importante na regulao da funo celular (enzimas cinases e fosfatases, canais, transportadores, factores de transcrio, protenas das vesculas sinpticas,...) Intracelularmente, a maior parte do Ca2+ est retido em organelos (RE-retculo endoplasmtico, RSretculo sarcoplasmtico, mitocndrias) e os nveis de Ca2+ livre no citosol so mantidos baixos para impedir a precipitao de compostos carboxilados e fosforilados, que forma sais muito pouco solveis quando se combinam com Ca2+. Estas baixas concentraes so conseguidas atravs de mecanismos de transporte que expulsam Ca2+ da clula. O nvel de Ca2+ intracelular determinado por 3 mecanismos reguladores que controlam:

1. Entrada de Ca2+
Canais de Ca2+ controlados por voltagem (semelhantes aos canais de Na+ e K+); Canais de Ca2+ regulados por ligantes (a maioria so activados por neurotransmissores
excitatrios);

2. Sada de Ca2+ da clula

Ca2+ transportado activamente por uma ATPase dependente de Ca2+; Tambm pode ocorrer troca de Na+-Ca2+ (troca de 3 Na+ por 1 Ca2+; o gradiente
electroqumico de Na fornece energia necessria para sada do Ca , sem hidrlise de ATP)
+ 2+

3. Libertao de Ca2+ contido nos organelos celulares

A principal via pela qual os ies Ca2+ so libertados do RE/RS o receptor de trifosfato de inositol (IP3R). O receptor activado pelo trifosfato de inositol (IP3), um dos 2 mensageiros resultantes da activao da PLC (fosfolipase C), que, uma vez activado, funciona como canal de Ca2+, permitindo que os ies sejam libertados no citosol.

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O papel da calmodulina na funo reguladora do clcio Na maioria dos casos, necessria uma protena ligante que sirva de intermedirio entre Ca e as protenas funcionais que este regula.
2+

Um exemplo dessas protenas intermedirias a calmodulina (dmero com 4 stios de ligao para Ca2+). Quando todos os centros de ligao esto ocupados, expe um domnio hidrofbico aderente que se dispe ao redor de regies especficas das protenas alvo de regulao, induzindo alteraes de conformao. O complexo Ca2+-calmodulina estimula uma vasta gama de enzimas, canais inicos e outras protenas-alvo, como, por exemplo, as protenas cinases dependentes de calmodulina (CaM cinases). As CaM cinases fosforilam muitas protenas diferentes e esto envolvidas na regulao do metabolismo energtico, da permeabilidade inica e da sntese e libertao de neurotransmissores.

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