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Reaces enzmicas

Actualizao em Bioqumica - curso de ps-graduao


Servio de Bioqumica da Faculdade de Medicina do Porto
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A reaco de oxidao dos nutrientes pelo O2 tem uma constante de equilbrio to elevada (>10450) que tem tendncia a ocorrer at ao esgotamento dos nutrientes. A energia libertada no processo usada para realizar trabalho muscular, qumico (biosntese) e elctrico.
O2 nutrientes ADP + Pi
trabalho mecnico biosntese transporte activo

contraco muscular

Na+

CO2 + H2O
ureia

ATP
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Porque que existem vias metablicas?

As vias metablicas existem porque existem enzimas que tm especificidade para substratos que so simultaneamente produtos de outras reaces enzmicas.

Como que as enzimas catalisam reaces qumicas?


Quando A se transforma em P formam-se intermedirios muito instveis (estados de transio) A*: a Keq [A*](eq) / [A](eq) pode ter valor muito baixo, significando que a concentrao de A* ser muito baixa.
1 Consideremos uma sequncia de reaces: A A* ...e admitamos que na reaco A P: ...e que na reaco A A*: 2 P

Keq = 10 Keq*= 10-100

No exemplo em anlise, embora na reaco global A P a Keq favorea a formao de P

Keq = [P](eq)/[A](eq) = 10
...a formao do intermedirio A* necessrio para que a reaco ocorra est prejudicada por uma Keq* de valor muito baixo
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Keq* = [A*](eq) / [A](eq)= 10-100

Em qumica (e em bioqumica) costuma representar-se esta dificuldade na formao do estado de transio (A*) como uma barreira que separa os reagentes dos produtos. A barreira tanto mais alta quando menor o valor da Keq [A*]/[A] (quanto mais alta a energia de activao) menor a estabilidade do estado de transio A* e mais lenta a reaco.

Nas reaces catalisadas o estado de transio de natureza diferente e muito mais estvel do que o que pode existir na ausncia do catalisador.

A afinidade da enzima para o estado de transio A* estabiliza o estado de transio que neste caso o complexo EA* o valor da Keq correspondente formao do estado de transio aumenta a altura da barreira correspondente formao do estado de transio diminui 6 A enzima diminui a energia livre de activao

A Keq de uma reaco independente do caminho com que essa reaco se processa. As enzimas alteram a velocidade das reaces mas no as Keq.
Consideremos a transformao no catalisada enzimicamente:

A B; Keq =

[B ] [ A]

Admitamos agora a mesma reaco catalisada enzimicamente pela enzima E tem os seguintes passos:

Quando uma determinada enzima catalisa uma determina reaco no sentido directo podemos estar seguros que tambm catalisa a reaco inversa.
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Mas, se uma determinada enzima no tm qualquer papel no sentido (directo ou inverso) em que a reaco que ela catalisa evolui, o que que determina o sentido da reaco?
A razo entre a constante de equilbrio (Keq) e o quociente de reaco (QR) permite prever o sentido global em que uma reaco tende a evoluir.

aA + bB pP + qQ

Keq = QR Keq/QR =1

1- Uma reaco est em equilbrio...

as velocidades microscpicas directa e inversa so iguais, a velocidade efectiva (macroscpica) tem valor nulo (= as concentraes de reagentes e produtos no se modificam ao longo do tempo)

2- A reaco evolui em sentido directo ... A + B P + Q se

Keq > QR QR

Keq/QR >1
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3- e evolui em sentido inverso... P + Q A + B se Keq < Keq/QR <1

Numa via metablica existem enzimas com baixa actividade cataltica e que, consequentemente, catalisam reaces em que KeqQR; as reaces catalisadas por estas enzimas so fisiologicamente irreversveis. Outras enzimas tm uma actividade cataltica elevada e, nestes casos, KeqQR.

As reaces com Keq>QR dizem-se exergnicas = expontneas (na terminologia dos qumicos)
Em sentido estrito as reaces endergnicas ( Keq < QR) so apenas uma abstraco... ... uma reaco no evolui em sentido inverso ao que ditado pela razo Keq/QR

Exergnica no sinnimo de exotrmica...

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Processos endergnicos so aqueles que, de acordo com as leis gerais da natureza, no podem ocorrer. Ser que os seres vivos so uma excepo s leis gerais?

Tal como uma bomba hidrulica pode acoplar o processo exergnico de combusto da gasolina com o processo endergnico de bombear a gua contra a lei da gravidade, tambm a bomba de sdio/potssio acopla o processo exergnico de de hidrlise do ATP 11 com o processo endergnico bombeamento de ies contra gradiente.

Existem muitas reaces enzmicas que podem ser melhor entendidas se forem pensadas como sendo alavancas... As sinttases podem ser vistas como mquinas qumicas que acoplam um processo endergnico (o brao ascendente da alavanca) com um exergnico...

A sinttase de acil-CoA uma enzima que catalisa a formao de uma ligao ster entre o grupo carboxlico de um cido gordo com o grupo tiol da coenzima A... mas esta reaco s possvel porque est acoplada com a hidrlise do ATP. 12

Chamam-se cnases s enzimas que catalisam a transferncia do fosfato terminal do ATP para um substrato ficando este fosforilado.

As cnases tambm podem ser vistas como mquinas que acoplam um processo exergnico (a hidrlise do ATP) com outro endergnico (a fosforilao do outro substrato). 13

No lumn do intestino d-se a hidrlise dos triacilgliceris por aco da lpase pancretica. Essa hidrlise a rotura das ligaes ster entre os grupos hidroxilo 1 e 3 do glicerol e o grupo carboxlico dos cidos gordos. O processo exergnico e irreversvel: a reaco inversa no pode ocorrer por aco de uma hidrlase.

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Dentro dos entercitos d-se a re-sntese dos triacilgliceris mas o processo s globalmente exergnico e pode ocorrer porque envolve a hidrlise do ATP (... para activar os cidos gordos).
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Os complexos I, III e IV da cadeia respiratria so enzimas/transportadores que acoplam um processo exergnico (as reaces de oxi-reduo que catalisam) com outro endergnico (o transporte de protes contra gradiente electroqumico). A sntase do ATP tambm uma enzima/transportador que acopla um processo exergnico (o transporte de protes a favor do gradiente electroqumico) com outro endergnico (o inverso da reaco de hidrlise do ATP; ADP + Pi ATP + H2O).

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As enzimas so protenas que podem assumir conformaes distintas em distintos ambientes. As enzimas so sensores do meio ambiente: modificaes especficas nesse ambiente modificam a sua conformao e, consequentemente, a sua actividade.

A fosforlase do glicognio tm um stio alostrico com afinidade para o AMP. A concentrao de AMP aumenta quando h dficit de ATP. Quando ligada ao AMP a fosforlase do glicognio assume uma17 conformao activa degradando o glicognio...

O receptor da insulina pode ser visto como uma enzima alostrica com o seu centro alostrico activador virado para o lado extra-celular (onde se liga a insulina) e o centro activo no lado citoplasmtico.

O receptor da insulina uma cnase (ATP + protena ADP + protena-P) que catalisa a fosforilao de certas protenas (ISR insulin receptor substrates). Os IRS fosforilados pela aco cataltica do receptor da insulina vo funcionar como activadores alostricos de outras 18 enzimas estando na origem de uma cadeia de reaces que esto na base dos efeitos da insulina.

A cnase da frutose-6-fosfato uma enzima da gliclise em que um dos substratos o ATP. Contudo, existe na enzima um local alostrico onde o ATP se liga inibindo-a. O AMP compete com o ATP pelo mesmo local de ligao impedindo a sua aco inibidora.

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s vezes a regulao da actividade de uma enzima envolve a sua modificao covalente por aco cataltica de outras enzimas.

Frequentemente essa modificao a sua fosforilao por aco de cnases ou a sua desfosforilao por aco de fosftases.

Em geral, as enzimas reguladas por estes mecanismos que esto envolvidas em processos metablicos que consomem glicose (glicognese, gliclise, lipognese e esterificao) so activas na forma desfosforilada.

A cnase do piruvato heptica inactivada por fosforilao catalisada pela 20 PKA.

Uma mesma protena pode ter actividades distintas consoante est fosforilada ou no fosforilada. A enzima bifuncional funciona como formadora de frutose-2,6bisfosfato no estado no fosforilado e como hidrlase no estado fosforilado.

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Frequentemente, enzimas com papeis metablicos antagnicos so reguladas por mecanismos semelhantes mas em sentidos antagnicos. A frutose-2,6bisfosfato aumenta de concentrao no hepatcito quando a insulina est alta.

A frutose-2,6-bisfosfato aumenta a actividade da cnase da frutose-6-P (activao alostrica) e diminui a da fosftase da frutose-1,6-bisfosftase (inibio competitiva). A frutose-2,6-bisfosfato estimula a degradao da glicose (gliclise) e inibe a sua formao (gliconeognese).

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A sntase do glicognio e a fosforlase do glicognio tm papeis opostos...

Em situao de jejum a glicagina induz, no fgado, a formao de AMP cclico que activa a PKA.

A PKA fosforila a sntase de glicognio heptica inactivando a glicognese.


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Em situao de jejum a glicagina induz, no fgado, a formao de AMP cclico que activa a PKA.

Para alm de induzir a inactivao da glicognese... a PKA catalisa a fosforilao da cnase da fosforlase do glicognio (que fica activa)... que catalisa a fosforilao da fosforlase do glicognio (que tambm fica activa) induzindo a glicogenlise.
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Dentro de certos limites de concentrao (concentraes da mesma ordem de grandeza ou inferiores ao Km) a actividade das enzimas regulada pela concentrao de substrato. A glicocnase heptica uma enzima em que o Km da glicose da mesma ordem de grandeza das concentraes de glicose no hepatcito; por isso sensvel s variaes da glicemia. ... no o caso da hexocnase cerebral; o Km da glicose na hexocnase cerebral de cerca de 50 M...
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A actividade enzmica aumenta se o nmero de molculas de enzima aumentar. A actividade de uma enzima pode ser regulada ao nvel da sua sntese. A insulina inibe a expresso
de genes que codificam enzimas envolvidas na produo de glicose (gliconeognese e glicogenlise) A glicose-6-fosftase catalisa a hidrlise da glicose-6fosfato levando produo de glicose no figado.

Quando h muita insulina


o nmero de molculas de glicose-6fosftase diminui

Quando h pouca insulina

Voice et al. (1992) BST 20:272S

o nmero de molculas de glicose-6-fosftase aumenta 26

Voice et al. (1992) BST 20:272S

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Voice et al. (1992) BST 20:272S

Glicose-6-P + H2O Glicose + Pi Pi + reagente de Ames molibdenium blue


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Estudos da ltima dcada tem vindo a mostrar como que a insulina regula (negativa ou positivamente) a expresso de genes. O receptor da insulina uma cnase que catalisa a fosforilao de protenas chamadas de substratos do receptor da insulina (IRS). O IRS-1 fosforilado activador alostrico de uma cnase que catalisa a fosforilao de um fosfolipdeo da membrana celular. fosfatidilinositol-4,5-bisfosfato + ATP fosfatidilinositol-3,4,5-trifosfato + ADP Ainda se desconhece como que a produo de fosfatidilinositol-3,4,5-trifosfato 29 tem efeito (neste caso negativo) no promotor do gene da glicose-6-fosftase.

Ainda no se sabe como que a insulina inibe a expresso do gene codificador da glicose-6-fosftase mas sabe-se que a cnase-3 do fosfatidilinositol-4,5-bosfosfato est envolvida no processo. Quando a cnase-3 do
fosfatidilinositol-4,5bisfosfato inibida (wortmannin) aumenta a sntese do RNAm correspondente G6Pase.

30 Dickens et al. (1998) JBC 273: 20144-9

Nos seres vivos a velocidade das reaces pode ser regulada por vrios mecanismos envolvendo quer o nmero de molculas de enzima presente na clula quer a capacidade cataltica dessas molculas.

Os mecanismos de regulao mais importantes so: 1) A quantidade de enzima: a sntese de uma enzima pode ser regulada ao nvel da expresso do gene que a codifica (quer ao nvel da transcrio quer da traduo) Alterao da concentrao de substrato. Modificao alostrica Modificao covalente
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2) 3) 4)

BIBLIOGRAFIA: Berg JM, Tymoczko JL & Stryer L. (2002) Biochemistry. 5th ed. Ed. por WH Freeman & Company. New York. Voet D & Voet JG. (1990) ) Biochemistry. Ed. por John Wiley & sons. New York. Nelson DL & Cox MM. (2000) Lehninger Principles of Biochemistry. 3rd ed. Worth Publishers. New York. Voice M, Scott HM, Fontes R & Burchell A. (1992) Biochem Soc Trans 20: 272S. Dickens M, Svitek CA, Culvert AA, OBrien RM & Tavar JM (1998) J Biol Chem 273: 20144-9. Schaftingen EV & Gerin I (2002) Biochem J 362: 513-32.
Esta aula foi preparada por Rui Fontes que agradece as crticas que entenderem fazer-lhe.
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