Anda di halaman 1dari 42

Factor de transcripción

Un factor de transcripción es una proteína que participa en la iniciación de la


transcripción del ADN, pero que no forma parte de la ARN polimerasa. Los
factores de transcripción actúan reconociendo sitios en el ADN o a otro factor,
o a la ARN polimerasa.
Los factores de transcripción pueden ser activados o desactivados
selectivamente por otras proteínas, a menudo como paso final de la cadena de
transmisión de señales intracelulares.
Los complejos de transcripción en las células eucarióticas son mucho más
complejos que en procariotas debido al mayor tamaño del genoma eucariótico,
por lo que el complejo de transcripción en eucariotas necesita un mayor
número de etapas para ensamblarse. Debido a que ninguna ARN polimerasa
eucariótica se una a las secuencias promotoras si no es ayudada, el ADN de
los promotores ha de ser un lugar de unión principal de varios factores de
transcripción.

[editar] Tipos de factores de transcripción


[editar] Factores de transcripción y clases de genes
Los factores de transcripción son generalmente específicos de cada clase de
genes. Los factores de transcripción reconocen y se unen a secuencias
determinadas cerca del sitio de iniciación de la transcripción.

 Las secuencias a las que se unen los factores de transcripción de los


promotores de genes de clase I varían enormemente de organismo a
organismo.
 Los factores de transcripción de los genes de clase II se unen a
secuencias de promotores situados antes del sitio de iniciación de la
transcripción. La secuencia TATA es la más frecuente.
 Los sitios de unión de los factores de transcripción de los genes de la
clase III se localizan dentro de la región transcrita del gen, y se denominan
regiones internas de control. Las regiones internas de control se unen a
varios factores y forman un complejo de transcripción estable al cual se une
la ARN polimerasa III. Los complejos de transcripción estables permanecen
ensamblados a lo largo de muchos ciclos de transcripción.
 Los factores basales de transcripción son necesarios para iniciar la
síntesis de ARN en todos los promotores. Junto con la ARN polimerasa
constituyen el aparato de transcripción basal.
 Los factores genéricos reconocen promotores de genes expresados
constitutivamente.
 Los factores específicos reconocen promotores de genes específicos
de tejido. Un ejemplo serían los genes T-box.

2.
Fragmento

Los factores de transcripción son proteínas muy especializadas que reconocen secuencias específicas
de DNA en la región reguladora de todos los genes. La unión de estos factores a esta región promotora
regula, positiva o negativamente, la expresión y la subsecuente producción de la proteína codificada por
el gene en cuestión. Hay muchos distintos tipos de factores transcripcionales, pero pueden dividirse
entre constitutivos e inducibles. En términos generales los constitutivos son aquellos que regulan la
expresión basal de los genes que codifican para todas las proteínas estructurales o de mantenimiento,
es decir, las enzimas y los componentes proteicos presentes en todas las células y que son
fundamentales para la función celular en general. Los factores de transcripción inducibles son aquellos
que regulan la expresión de genes que solamente se utilizan en ciertos tipos celulares o en ciertos
momentos de la vida de la célula. Recordemos que en una célula somática diferenciada se encuentra
presente toda la información genética necesaria para formarse cualquier otro tipo celular. Esto quiere
decir que en cada célula debe existir un programa de regulación de la expresión génica que se adapte a
sus funciones particulares y su entorno.1 Los factores de trascripción forman parte importante de este
programa.
Hace casi veinte años fue descrito NF-kB como un factor nuclear capaz de unirse al enhancer k (región
reguladora) del promotor de la cadena pesada de los genes que codifican para inmunoglobulinas.2 En
un principio se creyó que este factor transcripcional era exclusivo de linfocitos B por haberse encontrado
en el núcleo de este tipo celular. Sin embargo, ahora se sabe que se expresa de manera constitutiva en
prácticamente las células del sistema inmune. A diferencia de otros factores de transcripción, que
generalmente se encuentran en el núcleo, NF-kB se localiza de manera basal en el citoplasma en un
estado inactivo y necesita un estímulo específico para traslocarse al compartimiento nuclear. Sólo en las
células B y sus progenitoras se encuentra NF-kB constitutivamente en el núcleo.
El panorama actual muestra que este factor regula la transcripción de una gran variedad de genes, en
particular aquellos involucrados en la respuesta inmune y control de la proliferación celular. NF-kB es un
homo o heterodímero constituido por diferentes subunidades que han sido agrupadas dentro de la
familia Rel.

3. Modelo del complejo de preiniciación de la transcripción


de los genes eucarióticos de tipo II
(1) Componentes del complejo:
molécula de DNA, en la región próxima al punto
DN = de inicio de la transcripción (de -50 a +40 nt,
A aproximadamente)

= RNApol-II (RNA polimerasa II)

POLII
TBP (TATA Binding Protein, proteína ligante de
TATA); masa molecular: 30-38 kDa. Es uno de
=
los componentes de TFIID (700-800 kDa en
TBP total).
= TFIIB (factor de transcripción 'B' de tipo II)
IIB

= TFIIE (factor de transcripción 'E' de tipo II)


E56-1,
E56-2
E34-1, E34-2 = otra molécula de TFIIE

= TFIIF (factor de transcripción 'F' de tipo II)

F74-1,
F74-2
F30-1, F30-2 = otra molécula de TFIIF

TFIIH (factor de transcripción 'H' de tipo II).


= Posee actividad helicasa (desenrolla la doble
hélice) y proteína quinasa (fosforila la RNApol).
T
FIIH
Nomenclatura:
TF = Transcription Factor, factor de transcripción (factor de
iniciación de la transcripción); una proteína que
participa en el comienzo de la transcripción como
mediador en la unión de la RNApol al DNA o en la
activación de la RNApol.
II = de tipo II, hace referencia a los TF que participan en la
transcripción realizada por la RNA polimerasa II (genes
de tipo II: todos los que codifican proteínas y la mayoría
de los que codifican los snRNAs).
H = la letra permite nombrar cada uno de los factores en
concreto.
(2) Modelo tridimensional del complejo, visto desde distintos ángulos
(como si fueran las 6 caras de un cubo que envolviera al modelo):

DEF. 1. Factores de transcripción que participan en la regulación


de muchos genes diferentes
- Sp1
- NF-Y
2. Factores de transcripción estructurales, que cooperan con
muchos otros factores de transcripción- HMGs

PROMOTOR
1. Promotor
De Wikipedia, la enciclopedia libre
Saltar a navegación, búsqueda
Promotor puede tener alguno de los siguientes significados:
• En genética, el promotor del ADN de un gen es la sección de ADN que controla la
iniciación de la transcripción del ARN como producto de ese gen.

2. Promotor del ADN


De Wikipedia, la enciclopedia libre
Saltar a navegación, búsqueda
El promotor de un gen es la sección de ADN que controla la iniciación de la transcripción
del ARN como producto de ese gen. Dicha sección, es decir, el promotor está compuesto
por una secuencia específica de ADN localizado justo donde se encuentra el punto de inicio
de la transcripción del ARN y contiene la información necesaria para activar o desactivar el
gen que codifica. El promotor está presente tanto en Procariotes como Eucariotes.

En los Procariotes [editar]


El promotor es la secuencia que señala el comienzo de la transcripción del ADN a ARN, y
es por ello el lugar de enlace de la ARN polimerasa. El promotor se encuentra en una de las
dos hebras del ADN, y la orientación y posición del promotor dictará cual de las dos helices
del ADN servirá como el templado.

Muchos promotores necesitan de proteínas activadoras antes de que puedan unirse


eficazmente a su respectiva polimerasa.

Generalmente, el enlace de la ARN polimerasa con el promotor es lo que facilita a que la


helice de ADN se abra para permitir la subsecuente transcripción a ARN.

En los Eucariotes [editar]


A diferencia de los procariotes, que solo tienen una polimerasa, los eucariotes tienen tres
ARN polimerasa distintas. Por tal motivo, cada una de las polimerasas tiende a reconocer
secuencias de promotores específicas. Igualmente, los procesos de regulación son más
complejos que en los procariotas incluyendo la posición de las secuencias reguladoras del
ADN con respecto a los promotores. Los promotores tienen secuencias de nucleótidos
definidas, donde las más conocidas son la caja TATAAT y la caja TTGACA. Los
promotores se localizan en los extremos 5'-terminales de los genes. La ARN polimerasa se
une a las secuencias de dichos promotores iniciando el proceso de la transcripción. La
secuencia mínima con capacidad promotora de la transcripción recibe el nombre de
promotor mínimo.
Obtenido de "http://es.wikipedia.org/wiki/Promotor_del_ADN"

ENHANCERS.

DEF1. Enhancer
De Wikipedia, la enciclopedia libre
Saltar a navegación, búsqueda
En genética, un enhancer ("potenciador") es una corta región del ADN eucarionte que
puede unirse con proteínas (factores de transcripción) para aumentar los niveles de
transcripción de genes en un grupo de genes. Un enhancer no tiene porqué estar localizado
cerca de los genes sobre los que actúa, ni siquiera en el mismo cromosoma.1 La estructura
del complejo de cromatina del ADN está plegada de un modo que, aunque el ADN esté
lejos de los genes en los nucleótidos, geométricamente está próximo al promotor y al gen.
Esto le permite interactuar con los factores de transcripción y con la polimerasa II.

Existen distintas teorías sobre el proceso de información que ocurre en los enhancers:2

DEF2. )enhancer: potenciador.


Secuencia de ADN bicatenario de los organismos eucariotas
a la que se unen activadores y otros factores que
aumentan la transcripción de un gen. Su localización con
respecto al gen transcrito es muy variable; puede estar
situado antes del extremo 5’ del promotor (upstream),
después del extremo 3’ del gen (downstream) o dentro de
la zona codificante de éste
http://www.medtrad.org/Panacea/Actual/n16_tradyterm_Claros-S...

"Enhancer" (potenciador): Secuencia de ADN que actúa sobre el mismo cromosoma (ver
Cis) para aumentar la transcripción de un gen próximo. El "Enhancer" puede estar situado
corriente arriba o abajo con relación al gen, es decir en la misma orientación o en la
orientación inversa. Puede actuar en cualquier orientación, ya sea en 5' o 3' en relación al
gen, y a considerable distancia del mismo.

Proteina heat shock

DEF1. Proteína de choque térmico


De Wikipedia, la enciclopedia libre
Saltar a navegación, búsqueda
Las proteínas de choque térmico (HSP, del inglés Heat Shock Proteins), son un conjunto
de proteínas que producen las células tanto de organismos unicelulares como pluricelulares,
cuando se encuentran en un medio ambiente que le provoca cualquier tipo de estrés.

Las HSP son unas proteínas que se encuentran muy conservadas en la historia evolutiva de
todos los seres vivos, puesto que aparecen con función y estructura muy similar en archaea,
bacterias, levaduras, plantas y animales.

Contenido
[ocultar]

• 1 Descubrimiento de las HSP


• 2 Producción de las HSP por las células
• 3 Mecanismo de acción de las HSP

• 4 Proteínas de respuesta al estrés y chaperonas moleculares

Descubrimiento de las HSP [editar]


En 1962, F.M. Ritossa observó en células de las glándulas salivales de la Drosophila
melanogaster, la mosca de la fruta, cómo el cromosoma presentaba pocos minutos después
de ser sometidas a incrementos en la temperatura ambiental, engrosamientos en diferentes
lugares del ADN. Estos abultamientos del ADN correspondían a la amplificación de genes
que codificaban proteínas que fueron posteriormente identificadas por A. Tissières como
proteínas del choque térmico, que tenían distinto peso molecular, pero entre las que
sobresalía una de 70.000 daltons y que se conoce como la HSP70.

Producción de las HSP por las células [editar]


La expresión de las HSP, presentes en pequeñas cantidades en todas las células, está
aumentada por muchos factores de estrés como:

• Aumento de temperatura: Un incremento de unos 5 grados de la temperatura


normal de la célula desencadena una rápida síntesis de proteínas de choque térmico,
siendo en pocos minutos entre el 15 y el 25% de las proteínas celulares HSP.
• Disminución de temperatura.
• Cambios en la presión osmótica.
• Presencia de sustancias tóxicas, como toxinas, quimioterapia, drogas, alcohol.
• Aumento de presión.
• Ambiente con pH extremos.
• Presencia de metales pesados.
• Traumatismos.
• Isquemia.
• Radiaciones ionizantes.

Debido a que las HSP aumentan en cualquier situación estresante para un organismo, es
decir, en cualquier condición que supera las fluctuaciones normales de las funciones del
organismo (homeostasis), el nombre adecuado debería ser el de proteínas de respuesta al
estrés. Sin embargo, en la literatura científica predomina la denominación de proteínas del
choque térmico.

Mecanismo de acción de las HSP [editar]


Las proteínas son macromoléculas que están compuestas por la unión de cientos de
aminoácidos en cadenas que se pliegan para adquirir una conformación tridimensional. Esta
conformación terciaria es la que permite a la proteína realizar su función. Las situaciones
de estrés como el calor, altera la conformación terciaria de las proteínas, desplegando las
cadenas de aminoácidos, exponiendo los aminoácidos hidrofóbicos al agua y provocando la
pérdida de función de la proteína. Este fenómeno se denomina desnaturalización de las
proteínas. Las proteínas desnaturalizadas se agregan al atraerse entre sí por sus
aminoácidos hidrofóbicos. Las HSP ayudan a la célula a conservar o degradar las proteínas
desnaturalizadas, uniéndose a ellas para evitar que se agreguen, marcándolas para luego
destruirlas, o manteniendo las cadenas de polipéptidos desplegadas en un estado
competente, para que una vez que el estrés haya cedido, puedan volver al plegamiento
inicial, recuperar su conformación tridimensional y por lo tanto recuperar su función.
Aunque en el estado competente la proteína no puede realizar su función por no estar
plegada en su estructura terciaria, los aminoácidos que componen la proteína siguen unidos
en su estructura primaria, dispuestos para adquirir la conformación tridimensional.

Proteínas de respuesta al estrés y chaperonas moleculares [editar]


Las HSP siempre están presentes en las células, aunque su concentración aumenta en
situaciones de estrés. Un tipo de HSP son las chaperonas, que son unas proteínas que
ayudan al plegamiento de otras recién sintetizadas en la síntesis de proteínas. Estas
chaperonas no forman parte de la estructura primaria de la proteína funcional, sino que sólo
se unen a ella para ayudar en su plegamiento, ensamblaje y transporte celular a otra parte de
la célula donde la proteína realiza su función. Los cambios de conformación tridimensional
de las proteínas pueden estar afectados por un conjunto de varias chaperonas que trabajan
coordinados, dependiendo de su propia estructura y de la disponibilidad de las chaperonas.
Obtenido de "http://es.wikipedia.org/wiki/Prote%C3%ADna_de_choque_t%C3%A9rmico"
DEF2. Las proteínas del choque térmico (HSPs), son moléculas que se expresan en una
célula en respuesta a diferentes estímulos o condiciones de estrés1 y modulan procesos
metabólicos importantes necesarios para el mantenimiento del equilibrio celular2. Su
función como chaperonas moleculares durante el plegamiento, ensamblaje y traslocación de
proteínas es esencial en organismos procariotes y eucariotes1. Las HSPs se han clasificado
en cuatro familias denominadas HSP90, HSP70, HSP60 y HSPs pequeñas de acuerdo a su
estructura, secuencia de aminoácidos, peso molecular y su grado de homología1.

Dentro de la familia HSP70 se encuentra la HSP73 que se ubica en el citosol y es expresada


constitutivamente, tiene 90% de homología con la HSP72 la cual es inducible bajo
condiciones de estrés3. Se ha descrito que la expresión de HSP72 en células tumorales o
células infectadas por virus es importante para la generación de respuesta inmune celular
específica4-6. HSP72 se expresa en la membrana plasmática de células tumorales de
diferentes tipos de cáncer7 y estimula de forma específica la respuesta inmune. Estas
observaciones sugieren que esta proteína modula una vigilancia inmune que activa
linfocitos T, proporciona una línea de defensa adicional contra la infección y
transformación maligna5 y aumenta la sensibilidad a lisis mediada por células NK
efectoras4. Adicionalmente, se ha evaluado la expresión de HSP72 relacionada con
infecciones virales. Se ha descrito un incremento en la expresión de HSP72 en linfocitos B
transformados por el virus de Epstein Barr (EBV), dependiente de la presencia del virus8.
Sin embargo, en estos estudios no son claras las diferencias en la expresión de HSP72 en
células infectadas y no infectadas, la cual puede estar alterada como consecuencia del estrés
dado por la infección viral o por la transformación neoplásica9.

MICROARRAYS TECNICA.

1. DEF,

Técnicas y métodos de investigación en nutrición humana


Autor Alberto (ed.) Mijn de la Torre

Página 40

Acerca de este libro


1 reseńa
Escribir reseña
Añadir a mi biblioteca
Buscar en este libro
Ir

Comprar este libro


Amazon.com
Casa del Libro
Muchoslibros.com

Encuentre este libro en una biblioteca


(España)
Información del editor
Publicado por Editorial Glosa, S.L.
La reproducción de estas páginas ha sido autorizada.
Copyright
Modo HTML básico
Marcar esta página como ilegible
Técnicas y métodos de investigación en nutrición humana
Autor Alberto (ed.) Mijn de la Torre

Página 41

Acerca de este libro


1 reseńa
Escribir reseña
Añadir a mi biblioteca
Buscar en este libro
Ir

Comprar este libro


Amazon.com
Casa del Libro
Muchoslibros.com

Encuentre este libro en una biblioteca


(España)
Información del editor
Publicado por Editorial Glosa, S.L.
La reproducción de estas páginas ha sido autorizada.
Copyright
Modo HTML básico
Marcar esta página como ilegible
Técnicas y métodos de investigación en nutrición humana
Autor Alberto (ed.) Mijn de la Torre

Página 42

Acerca de este libro


1 reseńa
Escribir reseña
Añadir a mi biblioteca
Buscar en este libro
Ir

Comprar este libro


Amazon.com
Casa del Libro
Muchoslibros.com

Encuentre este libro en una biblioteca


(España)
Información del editor
Publicado por Editorial Glosa, S.L.
La reproducción de estas páginas ha sido autorizada.
Copyright
Modo HTML básico
Marcar esta página como ilegible
Técnicas y métodos de investigación en nutrición humana
Autor Alberto (ed.) Mijn de la Torre

Página 43

Acerca de este libro


1 reseńa
Escribir reseña
Añadir a mi biblioteca
Buscar en este libro
Ir

Comprar este libro


Amazon.com
Casa del Libro
Muchoslibros.com

Encuentre este libro en una biblioteca


(España)
Información del editor
Publicado por Editorial Glosa, S.L.
La reproducción de estas páginas ha sido autorizada.
Copyright
Modo HTML básico
Marcar esta página como ilegible
Técnicas y métodos de investigación en nutrición humana
Autor Alberto (ed.) Mijn de la Torre

Página 44

Acerca de este libro


1 reseńa
Escribir reseña
Añadir a mi biblioteca
Buscar en este libro
Ir

Comprar este libro


Amazon.com
Casa del Libro
Muchoslibros.com

Encuentre este libro en una biblioteca


(España)
Información del editor
Publicado por Editorial Glosa, S.L.
La reproducción de estas páginas ha sido autorizada.
Copyright
Modo HTML básico
Marcar esta página como ilegible
Técnicas y métodos de investigación en nutrición humana
Autor Alberto (ed.) Mijn de la Torre
Página 45

Acerca de este libro


1 reseńa
Escribir reseña
Añadir a mi biblioteca
Buscar en este libro
Ir

Comprar este libro


Amazon.com
Casa del Libro
Muchoslibros.com

Encuentre este libro en una biblioteca


(España)
Información del editor
Publicado por Editorial Glosa, S.L.
La reproducción de estas páginas ha sido autorizada.
Copyright
Modo HTML básico
Marcar esta página como ilegible
Técnicas y métodos de investigación en nutrición humana
Autor Alberto (ed.) Mijn de la Torre

Página 46

Acerca de este libro


1 reseńa
Escribir reseña
Añadir a mi biblioteca
Buscar en este libro
Ir

Comprar este libro


Amazon.com
Casa del Libro
Muchoslibros.com

Encuentre este libro en una biblioteca


(España)
Información del editor
Publicado por Editorial Glosa, S.L.
La reproducción de estas páginas ha sido autorizada.
Copyright
Modo HTML básico
Marcar esta página como ilegible
Técnicas y métodos de investigación en nutrición humana
Autor Alberto (ed.) Mijn de la Torre
Página 47

Acerca de este libro


1 reseńa
Escribir reseña
Añadir a mi biblioteca
Buscar en este libro
Ir

Comprar este libro


Amazon.com
Casa del Libro
Muchoslibros.com

Encuentre este libro en una biblioteca


(España)
Información del editor
Publicado por Editorial Glosa, S.L.
La reproducción de estas páginas ha sido autorizada.
Copyright
Modo HTML básico
Marcar esta página como ilegible
REVERSE NORTHERN BLOTS

DEF1. Blot del Norte


De Wikipedia, la enciclopedia libre
Saltar a navegación, búsqueda
El norte blot es una técnica utilizada en biología molecular de investigación para estudiar
la expresión génica. Se toma su nombre de su similitud con la mancha del Sur técnica,
llamado así por el biólogo Edwin Southern. La principal diferencia es que el ARN, en
lugar de ADN, se analizan en el norte de la mancha. Ambas técnicas de uso de
electroforesis y detección con una sonda de hibridación. El norte blot técnica fue
desarrollada en 1977 por James Alwine, David Kemp, y George Stark en la Universidad de
Stanford [1].

Los geles se puede ejecutar en cualquiera de agarosa o desnaturalización de poliacrilamida,


siendo esta última preferible para los pequeños fragmentos de ARN. Al contrario que en el
sur de la mancha, el formaldehído se añade al gel y actúa como un desnaturalizante de
agarosa. Para poliacrilamida, urea es el desnaturalizante.

Al igual que en el sur de la mancha, la sonda de hibridación puede hacerse a partir de ADN
o ARN.

Una variante del procedimiento conocido como el reverso del Norte blot se utiliza de vez
en cuando. En este procedimiento, el sustrato de ácido nucleico (que se adhiera a la
membrana) es una colección de fragmentos de ADN aislado, y la sonda se extrajo el ARN
de un tejido y radiactivamente etiquetados.

El uso de microarrays de DNA que han entrado en uso generalizado en el decenio de 1990
y principios de 2000 se parece más al procedimiento a la inversa, en la medida en que
implican el uso de fragmentos de ADN aislado, colocada en un sustrato, y la hibridación
con una sonda a partir de ARN celular . Por lo tanto, el procedimiento inverso, aunque
inicialmente poco frecuente, permitió el norte de análisis para convertirse en la expresión
de los genes de perfiles, en la que muchos (posiblemente todos) de los genes en un
organismo puede tener su expresión de seguimiento.

DEF2. Northern blot


De Wikipedia, la enciclopedia libre
Saltar a navegación, búsqueda
Northern blot es una técnica de detección de moléculas de ácido ribonucleico (ARN) de
una secuencia dada dentro de una mezcla compleja (por ejemplo, un ARN mensajero para
un péptido dado en una extracción de ARN total).Para ello, se toma la mezcla de ARN y se
somete a una electroforesis en gel a fin de separar los fragmentos en base a su tamaño. Tras
esto, se transfiere el contenido del gel, ya resuelto, a una membrana cargada positivamente
en la cual se efectúa la hibridación de una sonda molecular marcada radiactiva o
químicamente.1

El nombre de la técnica deriva de la propia de la detección de ácido desoxirribonucleico


(ADN), denominada Southern blot en honor a su descubridor; de este modo, al
desarrollarse la técnica equivalente para ARN se empleo el punto cardinal opuesto
(«northern», septentrional en inglés, frente al meridional «southern»).

DEF3.

Def5. el western blot se utiliza para la inmunodetecciòn de proteìnas.


DETEC
es mu especìfico, consiste en correr una muestra que contiene una mezcla de proteìnas en
un gel, aqui ayudados de electricidad puedes hacer migrar a las proteìnas de acuerdo a su
punto isoelectrico y a su peso molecular, de tal manera que quedan todas separaditas como
banditas, ahora este gel lo tomas y lo pones junto a una membrna de nitrocelulosa (por
ejemplo) y mediante electricidasd las transfiers nuevamnte hacia la membrana la cual la
incubas con un anticuerpo contra una proteina (especìficamente) de las miles o ceintos que
podian existir en tu mezcla proteica... y asi puedes sanber si dicha proteìna se encuentra o
no y si se enceuntra en qeu proporciones se encuentra,,,,, ... el norther blot en cambio es con
RNA como ya sabes, aqui se corre el RNA en gel y este se poen encontacto con una cadena
de rna(marcado con una molecula flourescente o radioaactiva) que sea complementaria de
ese RNA que estas buscando y si se pega, quiere decir que tienes cierto rna o no....

1. RNA
• El western blot es un método en biología molecular/bioquímica/inmunogenética
para la detección de proteínas en una muestra de un tejido homogeneizado o
extracto. Se utiliza una electroforesis para separar proteínas desnaturalizadas de la
masa. Las proteínas son trasferidas desde el gel hacia la membrana (originalmente
de nitrocelulosa), donde son examinadas utilizando anticuerpos específicos para la
proteína. Como resultado, se pueden examinar la cantidad de proteínas en una
muestra y comparar los niveles de presencia entre varios grupos. Otras técnicas
,también usando anticuerpos, permiten la detención de proteínas en tejidos
(inmunohistoquímica) y células (inmunocitoquímica).
En el Northern blot, se utiliza para identificar las cadenas de ARN de secuencia
semejante al ADN que se usa como sonda; a diferencia del tipo Southern que se
utiliza para identificar ADN, el método northern sirve para identificar ARN.
De manera resumida, el Western sirve para identificar proteínas y el Northern para
identificar secuencias de RNA.
Bueno, sus aplicaciones son muy variadas y un ejemplo que puedo decirte es el de
la detección del VIH. De manera simple, el western blot se utiliza para detectar las
proteínas de la membrana del virus, como dice en la descripción de arriba, estas
proteínas provienen de la muestra (generalmente sangre que ya está infectada con el
virus), las cuales son separadas por electroforesis en gel de poliacrilamida, y
posteriormente detectadas por un anticuerpo específico (específico a la proteína, es
decir, que sólo podrá unirse a esa proteína, a ninguna otra) en la membrana de
nitrocelulosa.
Bueno, espero que te sirva de algo, lo primero lo saqué de wikipedia, pero me
pareció muy escueto, por lo que decidí ampliarlo un poquito con lo que me acuerdo.
Ah, si, y el northern detecta secuencias de RNA, y tiene aplicaciones similares, ya
que como sabes, cuando hay síntesis de proteínas, existe un RNA mensajero que,
junto con el RNA ribosomal y el de transferencia, que sintetizan a la proteína en el
retículo endoplásmico... entonces también pueden detectarse un RNA mensajero
específico para una proteína de interés, como en el caso del VIH...
Bueno, espero haberte ayudado.

Def6. Northern blot


Una técnica de laboratorio que se utiliza para identificar y localizar las secuencias de ARNm que son
complementarias a un fragmento de ADN o ARN llamado sonda.

Northern blot o análisis Northern es básicamente una prueba para detectar la presencia del ARN mensajero en un
tejido en particular y la cual permite también determinar el tamaño de la trascripción de ese ARN mensajero. El
procedimiento se hace transfiriendo todo el ARN mensajero de un tipo determinado de tejido desde un gel a una
membrana de nylon o nitrocelulosa. La presencia de un ARN en particular se detecta hibridizando esta membrana
con una sonda de ácido nucleico, generalmente de cADN o rARN del gen de interés.

Def7. ¿Cómo estudiar la expresión de diversos genes? Southern,


Northern y Western Blot
Existen diferentes técnicas que emplean la separación en gel por electroforesis como primer
paso para identificar la presencia de determinadas moléculas dentro de una muestra. Una de
ellas fue inventada por Edward M. Southern en 1975 para la detección de ADN. Una vez
finalizada la corrida en el gel, se realiza la transferencia (o blotting) de las muestras a una
membrana para su posterior revelado. Luego se utilizó el mismo sistema para detectar ARN
y se lo denominó Northern Blot (en clara alusión al nombre del científico inventor de la
técnica basada en ADN).

Estas dos técnicas consisten en una electroforesis seguida de transferencia y emplean


secuencias específicas (sondas) complementarias a la molécula de ácido nucleico a
identificar. Es decir, ambas utilizan la hibridación de ácidos nucleicos para la detección de
las moléculas buscadas. Los principios generales son los mismos, pero hay diferencias en el
procedimiento debidas principalmente a que el ARN se degrada mucho más fácilmente que
el ADN; esto hace necesario tomar muchas más precauciones.

Una vez sembradas las muestras en un gel, se realiza una corrida electroforética hasta
lograr que las moléculas se separen por tamaños de manera tal que se puedan distinguir las
buscadas. Luego se transfieren los ácidos nucleicos del gel a la membrana. De esta manera
los que quedan retenidos pueden ser sometidos a ensayos de hibridación con sondas
específicas para detectar la presencia de determinadas secuencias.

Estas dos técnicas persiguen fines distintos: el Southern Blot, que detecta la presencia de
ciertas secuencias en el ADN, se usa, por ejemplo, para estudiar mutaciones en el genoma.
El Northern, en cambio, permite detectar qué genes son transcriptos en determinadas
condiciones. Hemos visto que dos células del mismo organismo se distinguen por los genes
que expresan y no por su ADN. El Southern Blot nos permite evidenciar el mismo material
genético y el Northern Blot, la expresión de diferentes genes.

Si luego queremos detectar proteínas, usaremos otra técnica similar: el Western Blot, que
deriva de la electroforesis en gel y separa proteínas mediante la utilización de anticuerpos
específicos. Una vez que la muestra con las proteínas que se quiere identificar ha corrido en
un gel, se la transfiere a una membrana especial donde las proteínas quedan "ancladas" o
adheridas. Después, se incuba esta membrana con el anticuerpo específico contra la
proteína blanco, y se revela. Con esta técnica pueden obtenerse datos aproximados del
tamaño de la proteína y su concentración en la muestra sembrada.
Def8.

Bioquimica
Autor Mary Campbell, Shawn O Farrell

Página 394
Incluye índice.
Más información sobre este libro
Índice
1 reseńa
Escribir reseña
Añadir a mi biblioteca
Buscar en este libro
Ir

Comprar este libro


Cengage Learning Editores - Editor
Amazon.com
Casa del Libro
Muchoslibros.com - $31.19, en stock

Encuentre este libro en una biblioteca


Información del editor
Publicado por Cengage Learning Editores
La reproducción de estas páginas ha sido autorizada.
Copyright
Modo HTML básico
Marcar esta página como ilegible
GEN REPORTERO.
DEF1.
Bioquimica
Autor Mary Campbell, Shawn O Farrell

Página 396

Incluye índice.
Más información sobre este libro
Índice
1 reseńa
Escribir reseña
Añadir a mi biblioteca
Buscar en este libro
Ir

Comprar este libro


Cengage Learning Editores - Editor
Amazon.com
Casa del Libro
Muchoslibros.com - $31.19, en stock

Encuentre este libro en una biblioteca


Información del editor
Publicado por Cengage Learning Editores
La reproducción de estas páginas ha sido autorizada.
Copyright
Modo HTML básico
Marcar esta página como ilegible

Anda mungkin juga menyukai