2.
Fragmento
Los factores de transcripción son proteínas muy especializadas que reconocen secuencias específicas
de DNA en la región reguladora de todos los genes. La unión de estos factores a esta región promotora
regula, positiva o negativamente, la expresión y la subsecuente producción de la proteína codificada por
el gene en cuestión. Hay muchos distintos tipos de factores transcripcionales, pero pueden dividirse
entre constitutivos e inducibles. En términos generales los constitutivos son aquellos que regulan la
expresión basal de los genes que codifican para todas las proteínas estructurales o de mantenimiento,
es decir, las enzimas y los componentes proteicos presentes en todas las células y que son
fundamentales para la función celular en general. Los factores de transcripción inducibles son aquellos
que regulan la expresión de genes que solamente se utilizan en ciertos tipos celulares o en ciertos
momentos de la vida de la célula. Recordemos que en una célula somática diferenciada se encuentra
presente toda la información genética necesaria para formarse cualquier otro tipo celular. Esto quiere
decir que en cada célula debe existir un programa de regulación de la expresión génica que se adapte a
sus funciones particulares y su entorno.1 Los factores de trascripción forman parte importante de este
programa.
Hace casi veinte años fue descrito NF-kB como un factor nuclear capaz de unirse al enhancer k (región
reguladora) del promotor de la cadena pesada de los genes que codifican para inmunoglobulinas.2 En
un principio se creyó que este factor transcripcional era exclusivo de linfocitos B por haberse encontrado
en el núcleo de este tipo celular. Sin embargo, ahora se sabe que se expresa de manera constitutiva en
prácticamente las células del sistema inmune. A diferencia de otros factores de transcripción, que
generalmente se encuentran en el núcleo, NF-kB se localiza de manera basal en el citoplasma en un
estado inactivo y necesita un estímulo específico para traslocarse al compartimiento nuclear. Sólo en las
células B y sus progenitoras se encuentra NF-kB constitutivamente en el núcleo.
El panorama actual muestra que este factor regula la transcripción de una gran variedad de genes, en
particular aquellos involucrados en la respuesta inmune y control de la proliferación celular. NF-kB es un
homo o heterodímero constituido por diferentes subunidades que han sido agrupadas dentro de la
familia Rel.
POLII
TBP (TATA Binding Protein, proteína ligante de
TATA); masa molecular: 30-38 kDa. Es uno de
=
los componentes de TFIID (700-800 kDa en
TBP total).
= TFIIB (factor de transcripción 'B' de tipo II)
IIB
F74-1,
F74-2
F30-1, F30-2 = otra molécula de TFIIF
PROMOTOR
1. Promotor
De Wikipedia, la enciclopedia libre
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Promotor puede tener alguno de los siguientes significados:
• En genética, el promotor del ADN de un gen es la sección de ADN que controla la
iniciación de la transcripción del ARN como producto de ese gen.
ENHANCERS.
DEF1. Enhancer
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En genética, un enhancer ("potenciador") es una corta región del ADN eucarionte que
puede unirse con proteínas (factores de transcripción) para aumentar los niveles de
transcripción de genes en un grupo de genes. Un enhancer no tiene porqué estar localizado
cerca de los genes sobre los que actúa, ni siquiera en el mismo cromosoma.1 La estructura
del complejo de cromatina del ADN está plegada de un modo que, aunque el ADN esté
lejos de los genes en los nucleótidos, geométricamente está próximo al promotor y al gen.
Esto le permite interactuar con los factores de transcripción y con la polimerasa II.
Existen distintas teorías sobre el proceso de información que ocurre en los enhancers:2
"Enhancer" (potenciador): Secuencia de ADN que actúa sobre el mismo cromosoma (ver
Cis) para aumentar la transcripción de un gen próximo. El "Enhancer" puede estar situado
corriente arriba o abajo con relación al gen, es decir en la misma orientación o en la
orientación inversa. Puede actuar en cualquier orientación, ya sea en 5' o 3' en relación al
gen, y a considerable distancia del mismo.
Las HSP son unas proteínas que se encuentran muy conservadas en la historia evolutiva de
todos los seres vivos, puesto que aparecen con función y estructura muy similar en archaea,
bacterias, levaduras, plantas y animales.
Contenido
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Debido a que las HSP aumentan en cualquier situación estresante para un organismo, es
decir, en cualquier condición que supera las fluctuaciones normales de las funciones del
organismo (homeostasis), el nombre adecuado debería ser el de proteínas de respuesta al
estrés. Sin embargo, en la literatura científica predomina la denominación de proteínas del
choque térmico.
MICROARRAYS TECNICA.
1. DEF,
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Al igual que en el sur de la mancha, la sonda de hibridación puede hacerse a partir de ADN
o ARN.
Una variante del procedimiento conocido como el reverso del Norte blot se utiliza de vez
en cuando. En este procedimiento, el sustrato de ácido nucleico (que se adhiera a la
membrana) es una colección de fragmentos de ADN aislado, y la sonda se extrajo el ARN
de un tejido y radiactivamente etiquetados.
El uso de microarrays de DNA que han entrado en uso generalizado en el decenio de 1990
y principios de 2000 se parece más al procedimiento a la inversa, en la medida en que
implican el uso de fragmentos de ADN aislado, colocada en un sustrato, y la hibridación
con una sonda a partir de ARN celular . Por lo tanto, el procedimiento inverso, aunque
inicialmente poco frecuente, permitió el norte de análisis para convertirse en la expresión
de los genes de perfiles, en la que muchos (posiblemente todos) de los genes en un
organismo puede tener su expresión de seguimiento.
DEF3.
1. RNA
• El western blot es un método en biología molecular/bioquímica/inmunogenética
para la detección de proteínas en una muestra de un tejido homogeneizado o
extracto. Se utiliza una electroforesis para separar proteínas desnaturalizadas de la
masa. Las proteínas son trasferidas desde el gel hacia la membrana (originalmente
de nitrocelulosa), donde son examinadas utilizando anticuerpos específicos para la
proteína. Como resultado, se pueden examinar la cantidad de proteínas en una
muestra y comparar los niveles de presencia entre varios grupos. Otras técnicas
,también usando anticuerpos, permiten la detención de proteínas en tejidos
(inmunohistoquímica) y células (inmunocitoquímica).
En el Northern blot, se utiliza para identificar las cadenas de ARN de secuencia
semejante al ADN que se usa como sonda; a diferencia del tipo Southern que se
utiliza para identificar ADN, el método northern sirve para identificar ARN.
De manera resumida, el Western sirve para identificar proteínas y el Northern para
identificar secuencias de RNA.
Bueno, sus aplicaciones son muy variadas y un ejemplo que puedo decirte es el de
la detección del VIH. De manera simple, el western blot se utiliza para detectar las
proteínas de la membrana del virus, como dice en la descripción de arriba, estas
proteínas provienen de la muestra (generalmente sangre que ya está infectada con el
virus), las cuales son separadas por electroforesis en gel de poliacrilamida, y
posteriormente detectadas por un anticuerpo específico (específico a la proteína, es
decir, que sólo podrá unirse a esa proteína, a ninguna otra) en la membrana de
nitrocelulosa.
Bueno, espero que te sirva de algo, lo primero lo saqué de wikipedia, pero me
pareció muy escueto, por lo que decidí ampliarlo un poquito con lo que me acuerdo.
Ah, si, y el northern detecta secuencias de RNA, y tiene aplicaciones similares, ya
que como sabes, cuando hay síntesis de proteínas, existe un RNA mensajero que,
junto con el RNA ribosomal y el de transferencia, que sintetizan a la proteína en el
retículo endoplásmico... entonces también pueden detectarse un RNA mensajero
específico para una proteína de interés, como en el caso del VIH...
Bueno, espero haberte ayudado.
Northern blot o análisis Northern es básicamente una prueba para detectar la presencia del ARN mensajero en un
tejido en particular y la cual permite también determinar el tamaño de la trascripción de ese ARN mensajero. El
procedimiento se hace transfiriendo todo el ARN mensajero de un tipo determinado de tejido desde un gel a una
membrana de nylon o nitrocelulosa. La presencia de un ARN en particular se detecta hibridizando esta membrana
con una sonda de ácido nucleico, generalmente de cADN o rARN del gen de interés.
Una vez sembradas las muestras en un gel, se realiza una corrida electroforética hasta
lograr que las moléculas se separen por tamaños de manera tal que se puedan distinguir las
buscadas. Luego se transfieren los ácidos nucleicos del gel a la membrana. De esta manera
los que quedan retenidos pueden ser sometidos a ensayos de hibridación con sondas
específicas para detectar la presencia de determinadas secuencias.
Estas dos técnicas persiguen fines distintos: el Southern Blot, que detecta la presencia de
ciertas secuencias en el ADN, se usa, por ejemplo, para estudiar mutaciones en el genoma.
El Northern, en cambio, permite detectar qué genes son transcriptos en determinadas
condiciones. Hemos visto que dos células del mismo organismo se distinguen por los genes
que expresan y no por su ADN. El Southern Blot nos permite evidenciar el mismo material
genético y el Northern Blot, la expresión de diferentes genes.
Si luego queremos detectar proteínas, usaremos otra técnica similar: el Western Blot, que
deriva de la electroforesis en gel y separa proteínas mediante la utilización de anticuerpos
específicos. Una vez que la muestra con las proteínas que se quiere identificar ha corrido en
un gel, se la transfiere a una membrana especial donde las proteínas quedan "ancladas" o
adheridas. Después, se incuba esta membrana con el anticuerpo específico contra la
proteína blanco, y se revela. Con esta técnica pueden obtenerse datos aproximados del
tamaño de la proteína y su concentración en la muestra sembrada.
Def8.
Bioquimica
Autor Mary Campbell, Shawn O Farrell
Página 394
Incluye índice.
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