JAMES G.

ROBERTSON
Resumen: Las enzimas ofrecen oportunidades nicas para el diseo de frmacos que no estn disponibles para los receptores de la superficie celular, receptores nucleares hormonales, canales inicos, transportes y ADN. Revisaremos la variedad de mecanismos de inhibicin de las enzimas por los frmacos y estableceremos una base de datos de los frmacos ms vendidos que inhiben a enzimas en Estados Unidos. De un anlisis del FDA Orange Book, existen 317 frmacos en el mercado que trabajan para la inhibicin de una enzima. Estos frmacos, inhiben 71 enzimas, incluyendo 48 humanas, 13 bacteriales, 5 virales, 4 fungicas y 1 enzima protozooa. Entre, los 317 medicamentos, o bien el 65% puede ser objeto de una reaccin qumica en el sitio activo de la enzima-objetivo o que contienen un impulso estructural relacionados con el sustrato. Aproximadamente de los 71 objetivos enzimticos 25 son inhibidos irreversiblemente por frmacos, y 19 de las 25 enzimas inhibidas irreversiblemente estn modificadas covalentemente por el frmaco. En dos casos adicionales los frmacos y el sustrato forman complejos covalentes, y en otros 3 casos ms, el frmaco atrapa a una enzima covalentesustrato intermediario. 4 de las 71 enzimas son inhibidas por un estado de transicin anlogo. Adems, mtodos avanzados para determinar la estructura del estado de transicin ofrecen ahora la oportunidad de dirigir un frmaco diseado sin campaas de pruebas caras al azar. Una apreciacin total de mecanismos enzimticos muestra aparte que las enzimas se han especializado directamente hacia frmacos diseados. La secuencia del genoma humano ha prometido una revolucin en medicina. El cdigo genmico ~20000-25000 genes humanos, y miles de protenas son el resultado de genes acoplados. Muchos de estos mantienen la llave del tratamiento de enfermedades. Sin embargo, la academia y la comunidad farmacutica se enfrentan a enormes cambios en la traduccin de la revolucin genmica en medicinas tiles. Actualmente una compaa farmacutica importante puede realizar hasta 50 millones de ensayos biolgicos al ao, arriba de 0.2 millones ms que hace una dcada (2), Todava, a pesar de estos avances en genmica y ensayos tecnolgicos, no ha habido un aumento correspondiente en nuevos frmacos llegados al mercado (3). El descubrimiento de frmacos generalmente se enfoca en 6 principales categoras de objetivos de frmacos: enzimas, receptores superficiales de la clula, receptores nucleares hormonales, canales inicos, transportes y ADN. En el descubrimiento de los frmacos las clases de objetivos influencian todo desde ingeniera automtica hasta el diseo de libros qumicos. Sin embargo, los modelos de negocios y la inexorable presin de la tecnologa a menudo desenfoca las distinciones entre las clases de objetivos y como resultado, varias equivocaciones son contraproducentes para que el diseo del frmaco se establezca. Aqu, tomaremos una mirada cercana a una clase de objetivo, enzimas, y proveer una evaluacin de que hace diferente a las enzimas de otras clases de objetivos.

ENZIMAS COMO OBJETIVOS DE FARMACOS

Varios compendios sostienen la informacin que los frmacos tienen como objetivo a las enzimas (4-7), pero parece no ser la nica fuente que provee una concisa, autorizada, y actual lista de objetivos enzimticos de frmacos en el mercado. Para

establecer esta lista, a cada uno de los frmacos en el FDA, Orange Book fue revisado sistemticamente para identificar su mecanismo de accin. En la lista del FDA Orange Book hay 1278 entidades qumicas nicas que fueron aprobadas para uso teraputico en los Estados Unidos (8). Cada uno de estos tienen referencias cruzadas en 4 textos autorizados (4-7), as como en la literatura principal, esos frmacos y objetivos enzimticos son identificados. De este anlisis, hay 317 frmacos que atacar enzimas es su principal o ms probable modo de accin. Existen 71 objetivos enzimticos para esta farmacopia, incluyendo 48 enzimas humanas, 13 bacteriales, 5 virales, 4 fngicas y una protozooa. La tabla 1 provee la lista completa. Un poco de estos frmacos inhiben mas o de una enzima, y as, el total de frmacos contenidos en la tabla 1 es e 333 ya que 12 frmacos fueron contados 2 veces y 2 fueron contados 3 veces. Los profrmacos son incluidos en la cuenta total. Tambin, las isoenzimas fueron contadas como nica actividad enzimtica. Esto incluye la amina oxidasa, comnmente denominada MAO A y B de la MAO, la prostaglandina sintasa-endoperxido, tambin conocida como COX-1 y COX-2, y yoduro de iodinasa, que existe en tres isoformas conocidas como de tipo I, tipo II y tipo III. Varios de los objetivos enumerados son menos que algunos, pero se han incluido por complementar. Incluyen fosfatasa dolichyl como destino de la bacitracina y la histona acetil-transferasa como el objetivo para el cido valproico. Bacitracina es bien conocido como un inhibidor de la proteasa, pero aqu la lista da la referencia original. El cido valproico se ha utilizado durante 35 aos como un antiepilptico, pero no existe un mecanismo nico de cuentas de accin para todos sus efectos. Aqu le sugerimos que la acetil-transferasa de histonas es un objetivo importante para el cido valproico.

ESTRUCTURA DEL SUSTRATO EN FRMACOS DE ENZIMA ESPECFICA

La primera leccin a extraer de la tabla 1 es que la mayora de los medicamentos comercializados por enzimas especficas estn relacionados con la estructura de la enzima sustrato. De los 317 medicamentos que se dirigen a las enzimas en el cuadro 1, 205, o 65%, puede ser objeto de catlisis en el sitio activo de una enzima, reacciona qumicamente con un cofactor de la enzima, o que contienen un motivo estructural en relacin con el sustrato. Existen 52 antibiticos, incluyendo penicilinas, cefalosporinas y carbenaperns, que se dirigen al tipo serina carboxipeptidasa D-Ala-D-Ala, y todos ellos tienen cierta similitud estructural con la terminal D-Ala-D-Ala del peptidoglicano de la bacteria (9). Adems, todos ellos sometidos a la catlisis de la enzima y acilato del la serina del sitio activo. Del mismo modo, los tres inhibidores de B-lactamasas, que se utilizan para superar la resistencia de B-lactamasas, acilato de la serina activa el sitio B-lactamasas. Inhibidores de las bases purina y pirimidina son otro buen ejemplo. 10 enzimas en la tabla 1 son inhibidas por un total de 41 medicamentos que contienen purina-pirimidina o estructuras bsicas relacionadas. stos incluyen el ADN y ARN polimerasas, las fosfodiesterasas, ribonuclesidos-difosfato reductasa, la adenosina deaminasa, la IMP deshidrogenasa, polimerasas xantina, varios medicamentos a base de desoxinuclesidos se reconocen como sustrato para las enzimas, pero carecen de la necesaria ribitIl hidroxilo y por lo tanto poner fin a la extensin de la cadena de polinucletidos. Por lo tanto, compiten peleando por los nucletidos naturales y los residuos cclicos catalticos. Los inhibidores de la sintetasa de 17 sulfonamidas dihidropteroato son otro ejemplo. Las sulfamidas son anlogos estructurales del cido p-aminobenzoico, el sustrato de la sintasa de dihidropteroato, y actan como inhibidores competitivos de la PABA. Como un ejemplo ms, los seis inhibidores de la estatina de la HMG-CoA reductasa todas conservan un motivo de cido 3,5-dihydroxyvaleric que es un anlogo cercano o una porcin de la HMG-CoA reductasa HMG. En 2001, las estructuras cristalinas de la reductasa HMG-CoA reductasa complejo que con cada una de las estatinas comercializadas fueron determinados, y las estructuras mostraron que, efectivamente, las mitades de la HMG-como el de las estatinas se unen en el mismo bolsillo que la porcin de la HMG-CoA reductasa de HMG (10).

Muchas de las drogas-sustrato pertenecen a los principales grupos de metabolitos celulares. Los esteroides inhiben 3 (o 17)B-hidroxiesteroide deshidrogenasa, 3-oxo-5-esteroide-4-deshidrogenasa, y una monooxigenasa inespecficos. Un lpido de cadena larga inhibe la lipasa triaglicerol. Un aminocido que inhibe la tirosina 3-monooxigenasa, naftoquinonas, imitan la vitamina K e inhiben la vitamina K-epxido. Azcares que inhiben la enzima a-amilasa, una glucosidasa, una glucosidasa sacarosa, 1,4-glucano una glucosidasa, y un exo-sialidasa. Mimticos fosfato inhiben farnesiltransferasa farnesil-dIfosfata. Pptidos sintticos mimticos de pptido, y pptidos naturales inhiben la peptidil dipeptidasa A, el VIH-1 retropepsin y kellikrein plasma. Los sustratos pertenecen a la clula, y por lo tanto, no es sorprendente que los inhibidores de carcter sustrato son teraputicamente eficaces.

ESTADO DE TRANSICION DE DROGAS COMO INHIBIDORES DE ENZIMA ESPECFICA.

A principios de 1970, los investigadores comenzaron a popularizar la idea de que el estado de transicin anloga como el derecho de los inhibidores de la enzima vinculante (11). A travs de los aos 1970 y 1980, la mayora de los ejemplos conocidos son los productos naturales (12). En la dcada de 1990, esto cambi, y los inhibidores sintticos se convirtieron en el predominante, los ejemplos de los anlogos del estado de transicin son por lo menos 132 enzimas (13). Cuatro de las 71 enzimas en el cuadro 1 son inhibidas por las drogas que funcionan como anlogos del estado de transicin. La pentostatina es un producto natural, producido por Streptomyces, es un inhibidor del estado de transicin de adenosina deaminasa. Se une a la enzima glbulos rojos humanos con un k4 de 14:05 (14). Captopril, el primer diseo racional de drogas por enzimas especficas, puede considerarse como un inhibidor del estado de transicin de la peptidil-dipeptidasa A, tambin conocido como ACE (15). El diseo de captopril se bas en la estructura de un inhibidor anlogo derivado de la carboxipeptidasa A (16), e incorpora muchas de las caractersticas que se espera que participen en la qumica de reaccin. Retropepsin para el VIH (la proteasa del VIH), una variedad de tcnicas de diseo asistido de estructura de drogas tuvieron xito en el desarrollo de inhibidores. El diseo inicial del saquinavir, el primer inhibidor del VIH comercializados retropepsin, participan isosteres hidroxietilamina que funcionan como anlogos del estado de transicin (17). En una combinacin similar de anlisis mecnico y estructural, la naturaleza del estado de transicin para un exo-sialidasa, se dedujo de los efectos isotpicos cinticos (18). Utilizando la estructura cristalina de la enzima y el modelo del estado de transicin, los qumicos explcitamente han diseado dos inhibidores potentes del estado de transicin (19), oseltamivir y zenamivir, que ahora se utilizan para tratar la influenza. El diseo de inhibidores del estado de transicin es probable que sean cada vez ms frecuentes en el futuro como la teora y la tecnologa para la comprensin de los estados enzima-transicin cada vez ms generalizada (20). ste mtodo se ha utilizado para disear immucillin-H, un inhibidor de la fosforilasa 56 pM de nuclesidos de purina que se encuentren en fase de ensayos clnicos para la leucemia Ila de clulas T (www.biocryst.com). Tambin se han utilizado para desarrollar picomolar (PM) inhibidores de la fosforilasa 5-metiltioadenosina (21) y femtomolar (FM) los inhibidores de la 5'-nucleosidase metiltioadenosina (158).

FRMACOS COMO INHIBIDORES IRREVERSIBLES DE ENZIMAS ESPECFICAS

Los programas de descubrimiento de frmacos nunca se propusieron hacer programas de inhibidores irreversibles. Sin embargo, 25 de los 71 objetivos en el cuadro 1 son irreversiblemente inhibidas por los medicamentos comercializados. Esto desmiente el prejuicio general contra los inhibidores irreversibles. La mayor parte de las enzimas que son irreversiblemente inhibidas por las drogas son covalentemente modificadas por el medicamento correspondiente. En otros casos, la unin es tan justo que el inhibidor sigue estando obligado por horas o incluso das, y se puede considerar vinculante funcional irreversible. Las siguientes 25 enzimas son inhibidas irreversiblemente por las drogas. Las primeras 19 en la lista son covalentemente modificadas por la droga. Dos

enzimas, la 3-oxo-A-4-esteroide deshidrogenasa y enoil-(protena transportadora de acilo) reductasa, estn irreversiblemente inhibidas por los complejos covalentes entre el inhibidor y el sustrato. (1)

Tipo D-serina carboxipeptidasa Ala-D-Ala. Tipo serina carboxipeptidasa D-Ala-D-Ala es quizs el ejemplo ms
estudiado de un blanco de la droga inactiva de la enzima covalentemente. Todos los antibiticos B-lactmicos acilato la serina del sitio activo de la carboxipeptidasa (22,23). Que generalmente es una acilacin estable que es resistente a la hidrlisis, y por lo tanto, se elimina de manera efectiva la actividad transpeptidasa alla en la bacteria.

(2)

B-lactamasas. la forma principal de resistencia a los antibiticos B-lactmicos es la hidrlisis de B-lactmicos de Blactamasas. Mientras que el es estable intermediario acil-enzima carboxipeptidasa D-Ala-D-Ala durante horas o das, la B-lactamasa hidroliza intermediario acil-enzima en las tasas de 100-4000.

(3)

Acetilcolinesterasa. La acetilcolinesterasa es otro hidrolasa serina caracteriza por drogas orientada modificacin
covalente sitio activo (5). Varios agentes anti-colinesterasa, como la piridostigmina, actan como sustratos alternativos u objeto de ataque por el centro activo de serina. Esto lleva a la piridostigmina inducida carbamoilacion de la serina. Productos intermedios o metilcarbamoil dimeticarbamoil son mucho ms estables que el acetil-enzima que se generan con la acetilcolina, y por lo tanto, in vivo, los inhibidores de la carbamoicin puede producir la inhibicin enzimtica covalente por 3-4 h.

(4)

UDP-N-acetilglucosamina1-Carboxyvinytransferase. Fosfomicina, un anlogo de sustrato fosfoenolpiruvato, es otro ejemplo

de un antibitico que modifica covalentemente la enzima objetivo. Fosfomicina fue descubierto en los caldos de fermentacin de Streptomyces (25), y ms tarde se demostr que era un acilato de cistena del sitio activo de la UDPN-acetilglucosamina 1-Carboxyvinytransferase (26). El anillo epxido de la fosfomicina presenta una cabeza de guerra latente a la enzima que es desenmascarado por el mecanismo cataltico y, posteriormente, el covalente modifica el sitio activo.

(5)

Sintasa prostaglandina-endoperxido. La aspirina es quiz la droga de ms alto consumo en los Estados Unidos, y es un
inactivador irreversible covalente de la prostaglandina-endoperxido sintasa, tambin llamada ciclooxigenasa, o la COX. La incubacin de purificado SINTASA prostaglandina-endoperxido con (acetil-3H) aspirina lleva a la inactivacin y la modificacin covalente de un residuo de serina nico, que puede ser recuperado como el acetilserina (3H) en digestin proteoltica de la enzima (27,28).

(6)

Monooxygenasa inespecfico. Aromatasa, o monooxygenasa inespecfico, cataliza la conversin de andrgenos a

estrgenos, y fue identificado como un blanco para la terapia anti-estrgeno en 1975 (29). Exemestano, que tiene un enlace 1,2-insaturados en el anillo A de los ncleos de esteroides, produce una inactivacin dependiente del tiempo de la aromatasa, y ha formulado la hiptesis de reorientar la reaccin de la enzima de aromatizacin a la modificacin covalente de la enzima. Sobre la base de la similitud de exemestano al sustrato es un inactivador irreversibles basados en el mecanismo de la aromatasa (30).

(7)

Amino oxidasa (Flavin-que contiene). Amino oxidasa mitocondrial, comnmente llamada de la monoaminooxidasa o IMAO,
es una enzima que contiene flavina que cataliza la desaminacin oxidativa de las catecolaminas y serotonina en el

sistema nervioso central. Selegilina (o deprenil L-), contiene una funcin de acetilnicos que modifica covalentemente el tomo N5 reactivado del cofactor de flavina (31). Los lazos de drogas en equilibrio reversible con la enzima, sufre una oxidacin cataltica de un intermediario reactivo sufre una oxidacin cataltica a una modificacin intermediario reactivo, y luego produce covalentes en funcin del tiempo de la flavina (5,32). (8)

Timidilato sintasa. Timidilato sintasa cataliza la metilacin reductora de dUMP a dTMP, y es el nico medio de novo
para la sntesis de dTMP. Floxuridina, un anlogo del sustrato que contienen flor, acta como un inhibidor de la timidilato sintasa potente al estabilizar el complejo covalente TS-dump-CH2THF temary, con el inhibidor unido covalentemente a la enzima a travs del sitio activo de la cistena (5,33). ya que el bono CF estabiliza el puente C5metileno, tambin bloquea el mecanismo qumico en un estado de transicin.

CASOS ACTUALES
(9)

Ornitina descarboxilasa. La ornitina descarboxilasa cataliza la conversin de ornitina a putresina y proporciona el punto
de entrada para aminocidos en la sintesis de poliamina. El objetivo de la comerzalisacion de la droga ornitina descarboxilasa, difluorometilornitina, es un sustrato y sufre descarboxilacin PLP-dependiente en el sitio activo (65). Esto genera un reactivo intermediario que puede atacar a la lisina o aun residuos cistena para formar un complejo inhibido covalente (34). la estructura cristalina de la radiografa de Tripanosoma brucei ornitina decarboxilasa muestra que DFMO covalentemente modifica la cistena 360 de la enzima tripanosomial (35).

(10)

Alanina racemasa. La bacteria exclusivamente usa D-ala en el peptidoglicano, y expresar racemasa alanina para
sintetizar. Se pensabe primero que la alanina racemasa, era reversible con inhibicin competitiva para la D-cicloserina, pero mas tarde fue demostrado que la inhibicin de la D-cicloserina causas en funcin del tiempo (36). Recientemente la estructura de cristalina de la radiografia del complejo inhibidor fue modifica covalentemente a la enzima PLP en la enzima (37). determinada, y se demostr que D-cicloserina

(11)

H+ / K+ ATPasa. La bomba de ATPasa H+ / K+

comercializados parala bomba ATPasa H
+ + +

de las clulas parietales gstricas es responsable de bombear HCl tales como el omeprazol, esmoprazol y lanoprazol, reaccionan con
+

en el lumen extracelular, y es la fuente de cido que causa la enfermedad de reflujo gastroesofgico (38).los inhibidores / K
+

cistenas en el lumen extracelular de la bomba ATPasa H nueva enzima (5). (12)

/ K . una vez covalentemente inactivada la bomba

ATPasa H / K puede ser neutralizada por 24-48 horas, y solamente puede ser regenerada por la sntesis de una

Triglicerol lipasa. El triaglicerol lipasa cataliza la hidrlisis de la interfase del triaglicerol en la superficie de las gotas
de lpidos emulsionados, y es la enzima crtica que participan en el procesamiento de grasas de la dieta. Un inhibidor de lipasa comercializado, orlistat, o tetrahidroliptatina, forman un ester con Ser152 en porcentaje de triacilglicerol lipasa, con la incorporacin de un mol de tetrahidroliptatina de la enzima (39). La formacin del ester derivado de -lactosa como ser152 en la porcin de la enzima sugerida en el mecanismo de identificacin en la enzima de los humanos, ya que la

trada cataltica en la estructura cristalina de la radiografa de la lipasa humanos, en particular Ser152, se pueden superponer con la trada cataltica de otras proteasas de serina (40). (13)

Reductasa

ribonuclesidos-difosfato.

La

reductasa

ribonuclesidos-difosfato

cataliza

la

formacin

de

nuevos

dexosirribonucleotidos para la incorporacin del DNA. Distintas sustituciones de nucletidos han demostrado ser dependientes de tiempo, inactivadores basados en el mecanismo de reductasa ribonuclesidos-difosfato (41). Un inhibidor particular, gemcitabina, un 2`-difluoronucleosido ha sido aprobado para su uso en el cncer de pulmn de clulas pancreticas y no pequeas. Aunque la inactivacin de gemcitabina es reversible, el presunto sitio de modificacin covalente no ha sido modificado. (14)

Yoduro peroxidasa. en los estados unidos el propiltiouracilo y el metilmasol son las drogas usadas para el tratamiento del
hipertiroidismo. Ambas enzimas inhiben el yoduro de peroxidasa (42,43), y ambas contienen un tiol esencial. Las enzimas de inhibicin parecen estar involucradas en reacciones tanto con yoduro de centro y hemo de la enzima. in vitro, la inhibicin de la enzima por metimazol es considerado como un unhibidor irreversible (42), aunque bajo algunas condiciones la inactivacin no es completa y la enzima al parecer recupera la activacin de yodacin (43).

(15)

Tiroxina 5 'deiodinasa. La tiroxina 5 'deiodinasa es una familia de es una familia de tres isoenzimas codificadas por
tres genes distintos (44). Propiltiouracilo inhiben a la deiodinasa tipo 1 (45), una selenoenzima, y se piensa en el tiol PTU (45). La deiodinasa tipo 1 del citosol del hgado de rata se puede recuperar como un complejo con [ S] PTU, y 25% de la [ S] PTU sigue estando obligado despus de la dilisis, la precipitacin con cido tricloroacetico y extracciones mltiples con etanol, metanol y cloroformo (46).
35 35

(16)

Aldehdo deshidrogenasa. El aldehdo deshidrogenasa cataliza la oxidacin de una amplia variedad de endogenes y
aldehdos exgenos para agua soluble en acidos carboxlicos. Disulfiram es un inhibidor irreversible dependiente del tiempo de aldehdo deshidrogenasa (47) y es usado para el tartamiento de alcoholismo. In vitro, in vitro, S-metil-N, N-sulfxido dietythiocarbamyl, el principal metabolito del disulfiram, carbamoylates Cys302 en aldehdo deshidrogenasa humana purificada (48). La enzima carbamoylates. Puede ser regenerada en animales tratados con disulfiram (49).

(17)

Trombina. La trombina es una serina proteasa que activa las plaquetas e inicia la sealizacin intracelular de

acontecimientos que transforman la plaqueta en una clula activa de formacin de cogulos. La antitrombina es un inhibidor de la proteasa serina 58 kDa que con rectas y covalentemente inactiva la trombina (50,51). una heparina de los anticoagulantes ms utilizados, acelera la reaccin trombina-antitrombina por ~ 10000- veces, y las obras mediante la celebracin de la trombina antitrombina uno en las inmediaciones (52). Los inhibidores directos de la trombina tambin se han introducido, el ms potente de que se hirudina recombinante, que tiene un k1 de 231 FM y 3.17x10 inhibidor recombinante es funcionalmente irreversible. (18)
-5

de

AK, que se traduce en t1/2 para la disociacin de 6 h (53). La disociacin lenta significa que la inhibicin por el

Factor Xa. La antitrombina tambin es un inactivador del factor Xa, y Xa inactiva en el mismo modo que la
inactivacin de la trombina. Como en el caso de la trombina, la heparina tambin acelera la reaccin de el factor Xaantitrombina por ~ 1000 veces (52). Como en el caso de la trombina, la inactivacin es irreversible, justa para la modificacin covalente del factor Xa y el aumento de la protelisis para las especies inactivadas.

(19)

4-dioxigenasa hidroxifenilpiruvato. La dioxigenasa hidroxifenilpiruvato es una dependiente de Fe(II), la no hemo oxigenasa

que cataliza la conversin de 4-dioxigenasa hidroxifenilpiruvato a hidroxifenilpiruvato dioxigenasa. En 1991, fue descubierto la inhibicin de hidroxifenilpiruvato dioxigenasa con la degradacin de la tirosina nitisinona bloquea en la parte superior de la va catablica de la tirosina y que este tratamiento reduce la incidencia de cncer de hgado en nios con tirosinemia (54). nitisinona es un inhibidor irrevrsible que forma un complejo estable con el Fe(II) en el centro de la enzima. En el extracto de hgado de rata, la t para la disociacin de la inhiitor se estim en 101 h. en la enzima purificada a partir de Streptomyces avermitilis, l complejo fue estable durante al menos 2 das (55).

(20)

La vitamina K epxido reductasa. La enzima involucrada en las reacciones de carboxilacion que producen la activacin
del factor II, factor VII, factor IX y factor X tambin son objetivos de anticoagulantes. En particular, la vitamina K epxido reductasa es el objetivo de la warfarina , un anticoagulante oral. La warfarina inhibe el disulfuro de la actividad reductasa(56). Los micosomes tratados con warfarina no recuperan la Vitamina K epxido reductasa su actividad se expondr despus de varias dilucin y centriguciones, y por esta razn, se ha concluido que la inhibicin de la warfarina es irreversible (57).

(21)

Ile tRNA sintetasa. El aminocido tRNA sintetasa catalizan la ligadura de los aminocidos y sus afines tRNAs. La
mupirocina es un inhibidor competitivo de la escherichia Coli IIe tRNA sintetasa, con un ki de 2.5 nM contra el intercambio de pirofosfato en ATP (58). La mupirocina es un inhibidor irrevrsible como se demostr con la recuperacin de [3H] mupirocina con la enzima despus de la filtracin en gel (58,59). el complejo es estable vinculado a la dilisis para un mximo de 18 das (59).Sin embargo, la inhibicin no es covalente, y la mupirocina se puede desprender de la enzima por ebullicin en SDS (58) o por HPLC en condiciones de fase reversa (59).

(22)

ADN polimerasa ADN-dirigida. La polimerasa de ADN-dirigida se lleva a cabo como objetivos farmacolgicos
importantes debido a su papel fundamental en la replicacin. Las deoxinucleotidos inhibidores de la base se reconocen como sutrato para la enzima, y de la extensin final porque carece de hidroxi ribitol necesarias para la ligadura del siguiente nucletido. En este sentido, la consecuencia de inhibicin es irreversible. Adems, el aciclovir, que se enfoca en el virus del herpes ADN polimerasa ADN-dirigida, produce la inactivacin enzimtica irreversible, adems de la incorporacin de nuclotidos y su determinacin (60). El aciclovir produce la inactivacin en funcin del tiempo del agente cataltico y la enzima no se reactiva tras la desalacin en una columna de filtracin en gel (60).se ha sugerido que la enzima sufre un cambio conformacional irreversible que bloquea la cafdena de nucletidos que contiene en ese lugar.

(23)

3-oxo-5-4- esteroide deshidrogenasa. La enzima 3-oxo-5-4- esteroide deshidrogenasa cataliza la reduccin de la

testosterona en dihidrotestosterona. La finasterida, prescrita para el tratamiento efectivo de la hiperplasia benigna de a travs de un aducto finasterida unido a la enzima NADP- dihidroprstata, es un anlogo de la testosterona que acta como sustrato para 3-oxo-5-4- esteroide deshidrogenasa (61). El proceso cataltico del numero de recambios
-13

finasterida, que, una vez formada, acta como un inhibidor anlogo al sustrato extremadamente potente con un k i de la relacin de particin 1x10 M. la relacin de participacin para la catlisis a la inactivacin es de ~ 1, lo que

significa que el numero de recambios cataltica de la finasterida es letal para la enzima. La liberacin de [ H] dihidro-finasterida de la enzima se produce con una vida media de 1 mes a 37C (61). (24)

Enoil-acil-reductasa protena transportadora. isoniazida, el tratamiento de primera lnea para la tuberculosis, forma un
aducto con NADH unido a la enzima con enoil-reductasa acilo de cadena larga de protena transportadora (62). La filtracin en gel del complejo de la enzima-inhibidor de muetsra que [ C],isoniazida permanece fuertemente unido a la enzima (63). Esto indica qu el ainhibicion es irreversible, a pesar de que el inhibidor se une covalentemente a NADH y no a la enzima.
14

(25)

Xantina oxigenasa. Xantina oxigenasa es un complejo molibdoflavoenzima que cataliza la oxidacin de purinas de acido
urico (64,65). El tratamiento primario para la gota es menos para las concentraciones del acido urico mediante la inhibicin de la xantina oxidasa, con un ki de 630 pM (66,67).bajo condiciones catalticas, alopurinol sufre una oxidacin catalizada por enzimas alloxantina y la formacin de la enzima en un estado parcialmente cuando el centro del molibdeno sigue siendo reducido. Alloxantina sigue siendo estrictamente ligada a la reduccin de enzima, y por esta medida, la inhibicin es funcionalmente irreversible.

La reaccin de celdas intermediarias es otro mecanismo para la formacin de complejos covalentes inhibidores, aunque esto no implica enlaces covalentes entre la enzima y inhibidor. dos enzimas caen en esta categora, inosina monofosfato deshidrogenasa cataliza la oxidacin de IMP a CAMPOS mediante la formacin de un intermadiario covalente cistinil en C2 del anillo purina.(68,69).El acido mupirocina, un inhibidor no competitivo, une el NAD en el sitio del cofactor, e impide la reaccin hidrlisis, por lo tanto captura y estabiliza el complejo covalente E-XMP (68). La estructura de la de los complejos muestra que el sistema biciclicos de anillos de acido mupirocina debajo de la hipoxantina de anillo, impide el intermediario releasa (68). Las topoisomerasas de ADN de mamferos y bacterias catalizan el reordenamiento del ADN superenrollado topolgico y concatenados, y sirven como dianas para los agentes antitumoral topotecan e irinotecan, y como objetivos de los antibiticos fluoroquinoline (70-72). en la topoisomerasa 1 en humanos, la enzima cataliza la hendidura de una sola cadena y la formacin de un enlace fosfodister entre Tyr
723

REACCIN DE CELDAS INTERMEDIARIAS DE CELDAS COMO ENZIMAS-DIRIGAS A LOS FRMACOS.

y el ADN 3fosfato (73). Pruebas

bioqumicas indican que la camptotecina, el compuesto original para el irinotecan y topotecan medicamentos comercializados, se estabiliza en el complejo covalente, y varios modelos sugieren que se une cerca del punto de corte del ADN (73,74). en la topoisomerasa II, la enzima corta dos cadenas de ADN y genera extremos libres. Los enlaces covalente de la enzima como el extremo 5 cataliza los residuos en el sitio activo (75), en efecto de abrir inadecuadamente el ADN en los extremos moleculares y la apertura de una entrada a travez del ADN (76). los antibiticos quinolonas se crean para estabilizar este intermediario covalente (70).

LA BASE DE CIDO BRICO DE LOS INHIBIDORES DE LA ENZIMA-COMO LOS FRMACOS DIRIGIDOS.

El cido brico de muestra la importante propiedad de actuar como cidos de Lewis fuertes a causa de su accesibilidad
2 3

del boro (77). Que se puede convertir de una geometra plana trigonal sp a una geometra tetradrica sp por sustitucin en boro, esta iconversin es muy similar a la formacin de intermediarios tetradricos en muchas enzimas hidrolticas, y permite que los cidos bricos puedan actuar como anlogos de reaccin intermediaria con inhibidores de femtomolar (78). Bortezomib, el primer FDA propiedades potentes en el rango aprobado, inhibidor a base de cido brico, lleg al mercado en 2003. bortezomib

inhibe la degradacin de las protenas intracelulares proteasoma (79), y ha demostrado ser eficaz en los cnceres slidos y hematolgicos. Debido a la interaccin qumica con los residuos del sitio activo cataltico, inhibidores de cido brico a menudo se muestran lentos - inhibicin de la unin, y esto es cierto del bortezomib, que es un proceso lento - la unin del inhibidor tiene un Ki de 600 pM (80).

LOS INHIBIDORES NO COMPETITIVOS COMO LOS MEDICAMENTOS CON ENZIMAS ESPECFICAS.

Mientras que la mayora de enzimas - son medicamentos a base de inhibidores en sitios activos, algunas son inhibidores no competitivos que no se unen en el centro activo. Reversa de nuclesidos no inhibidores de la transcriptase, en particular la nevirapina, son un buen ejemplo. El anlisis de la cintica del pre estado estacionario ha demostrado que los nuclesidos ha demostrado que los inhibidores no nuclesidos no interfieren con la unin nucleotida o el cambio en la conformacin inducida por nucleotido vinculante (81).Mas bien unir uno a un sitio alosterico, y esto frena la velocidad de la catlisis qumica, haciendo catlisis qumica el paso mas lento en la reaccin. el cambio conformacional es debido a la unin de nucletidos es el paso ms lento. Esto ofrece una leccin de diseo de frmacos, y argumenta que el conocimiento de TGE constantes de velocidad microscpica proporciona una ventaja competitiva para el desarrollo de inhibidores enzimologistas no competitivo como las drogas. Dos inhibidores podra tener el mismo ki, pero si se retrasa la tasa de la catlisis de 10 veces ms de lo que otros, en igualdad de condiciones, ser una droga ms potente.

ACTIVADORES DE ENZIMAS COMO LAS DROGAS ORIENTADA

En principio, siempre hay dos posibilidades para el diseo de frmacos por enzimas especficas: la inhibicin o activacin de una enzima. En el sentido de un puro k cat o kcat / activador km, no hay activadores de enzima pura en el mercado. Sin embargo, en el tiempo, este enfoque puede tener xito. Investigadores de Roche han descubierto ahora que los activadores de gucokinasa kcat aumentar y disminuir el S0.5 de la glucosa, y stas pueden ofrecer un tratamiento para la diabetes tipo II (82). Los activadores se unen en un sitio glucoquinasa reglamentacin que originalmente fue descubierto en pacientes con hipoglucemia persistente hiperinsulinemia (83,84). Este resultado puede sugerir que la mejor estrategia para el desarrollo de activadores es centrarse en las enzimas altamente reguladas, o las enzimas de cooperacin como la glucoquinasa, donde la naturaleza ha proporcionado los sitios de unin que se han diseado para modular la catlisis.

LAS ENZIMAS SON UNA CLASE DISTINTA DE DESTINO

Las enzimas son catalizadores. Que hacen y deshacen los enlaces qumicos covalentes especficas. Los receptores de superficie celular, los canales inicos, transportes, hormona de receptores nucleares, y el ADN no lo hacen. Aunque esto es axiomtico, sorprendentemente, no es muy apreciada. En el descubrimiento de frmacos, la atencin se centra siempre en el caso aguardando, y la encuadernacin o vocabulario domina la percepcin, incluso para los objetivos enzimticos. Por lo tanto, debe tenerse en cuenta otra vez. Las enzimas son catalizadores, y es el evento catalitico al menos no tan importante si de no de gran porte que el enlace de eventos. La catlisis enzimtica progresa a travs de eventos vinculante, los cambios conformacionales, uno o ms estados de transicin, o productos intermedios de reaccin, y la liberacin de productos, y todos estos pasos se producen con las constantes de tipo definido, Y todos estos pasos se producen con constantes de velocidad definida. Las constantes de velocidad se definen como un modo de termodinmico que se pueden utilizar para el diseo de drogas, lo que diferencia a las enzimas diana de todas las clases de otros.

El uso ms poderosos del perfil termodinmico de una reaccin enzimtica es en descifrar el estado de transicin a travs de los efectos isotpicos cinticos, y utilizar esta informacin para el diseo de inhibidores potentes, como se ha sealado (20). Adems, los datos puramente cinticos se pueden utilizar para predecir la toxicidad potencial de la droga. Como ejemplo, una detallada o pre-estado estacionario anlisis cintico del ADN mitocondrial humano de la polimerasa se ha utilizado para predecir la toxicidad potencial de comercializarse los medicamentos antivirales. Una escala de toxicidad fue desarrollado por una especificidad de la determinacin de las constantes cinticas (kpot / kd), los factores de discriminacin, y se valora la exonucleasa para diversos medicamentos a base de nuclesidos, en comparacin con los nucletidos naturales correspondientes. Con esta informacin, es posible calcular el aumento "relativo en el tiempo necesario para replicar la geometra mitochondial", en presencia de anlogos de nuclesidos antivirales (85). Cuanto mayor sea el aumento del tiempo de replicacin, el ms txico de la droga. Este tipo de anlisis, basado en datos puramente cintica, que, de hecho, identificar los frmacos que se sabe que son txicos en la prctica clnica. Del mismo modo, es posible calcular un ndice teraputico para los anlogos de nuclesidos, en donde los factores de discriminacin para la DNA polimerasa transcriptasa reversa y se comparan.la mayora de los Drus teraputicamente efectiva se predice que tienen una alta tasa de incorporacin de la transcriptasa inversa viral (es decir, la inhibicin de la enzima buena debido a la utilizacin de enzimas virales), anuncio una baja tasa de incorporacin en el ADN humano por la polimerasa del ADN humano (es decir, baja toxicidad) (85). La relacin entre la inhibicin de la toxicidad es una medida de la utilidad teraputica Ness. el ndice teraputico, de nuevo, se puede predecir a partir de un anlisis puramente cintico, tambin est de acuerdo con la conocida eficacia de los frmacos antivirales. Este tipo de anlisis proporciona ahora un mtodo in vitro para predecir la toxicidad potencial anlogo de los nuclesidos, y complementa los experimentos con animales, que a veces no llegan a predecir la toxicidad (86). Este enfoque lgicamente cinetico podra extenderse a la inhibicin de drogas de otras enzimas que no estn relacionados con la diana teraputica. Por ejemplo, el citocromo P 450 son siempre sitios potenciales de la inhibicin de drogas debido a la funcin principal de P450 en el metabolismo de xenobiticos. Sin embargo, la mayora de los intentos por generar escalas de prediccin de la inhibicin de P450 sobre la base de estructuras de drogas no incluyen ninguna informacin sobre el mecanismo de la inhibicin, y rara vez intentan ser un espacio propicio para la exploracin.

RESUMEN
Esta breve revisin proporciona una lista actualizada de los objetivos enzimticos conocidos de los medicamentos comercializados, y pone de relieve la variedad de enfoques exitosos de diseo de drogas por enzimas especficas. una de las principales enseanzas que cabe extraer de los medicamentos comercializados es que la naturaleza ha diseado enzimas para realizar una reaccin qumica selectiva, y por lo tanto, me es probable que los frmacos ms potentes para ser descubiertas o diseadas estarn relacionados con la estructura del sustrato, la reactividad, o de la superficie potencial electrosttica de intermedio (s) o estado de transicin (s). por el contrario, la expectativa de encontrar casualmente a un medicamento potente como los inhibidores de que nunca se han previsto o diseado es significativamente menos probable, puesto que estos tipos de molculas estn en la minora de ubres comercializados. Que depara el futuro ms de 71 objetivos enzimticos para el tratamiento de las enfermedades y aplicar las lecciones de los primeros 71 acelerar el desarrollo de la prxima generacin.

TABLA 1: BASE DE DATOS DE OBJETIVOS DE LA ENZIMA PARA FRMACOS COMERCIALIZADOS

ENT 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 NOMBRE COMN DE LA ENZIMA 1,3-B-glucano sintasa 3(o 17)-B-hidroxiesteroide deshidrogenasa 3,5-cicloGMP fosfodiesterasa 3,5-ciclonucleoide fosfodiesterasa 4-hidroxifenilpiruvato dioxigenasa 3-oxo-5-a-esteroide 4dehidrogenasa Acetilcolinesterasa Adenosin deaminasa Alanina racemsa Alcohol dehidrogenasa Aldehdo deshidrogenasa (NAD) a-amilasa a-glucosidasa Amino oxidasa (contenido de flavin) Arabinosytransferasa Aracidonata 5-lipoxigenasa cido aromtico l-amino decarboxilasa B-lactamasa Carbonato deshidratasa Catecol O-metiltransferasa Ceramida glucosiltransferasa D-alanina-Dalamina ligasa Dihidrofolata reductasa Dihidrolata dihidrogenasa Dihidrpterata sintasa DNA topoisomerasa COMISIN DE ENZIMAS 2.4.1.34 1.1.1.51 3.1.4.35 3.1.4.17 1.13.11.27 1.3.99.5 3.1.1.7 3.5.4.4 5.1.1.1 1.1.1.1 1.2.1.3 3.2.1.1 3.2.1.20 1.4.3.4 2.4.2.34 1.12.11.34 4.1.1.28 3.5.2.6 4.2.1.1 2.1.1.6 2.4.1.80 6.3.2.4 1.5.1.3 1.3.99.11 2.5.1.11 5.99.1.2 EJEMPLO DE FRMACO caspofungi Trilostan Sidenalfin Teofilina Nitisinona Finasterida Piridogstimina Pentostatina Cicloserina Fomepizole Disulfram Acarbosa Miglitol Tranilcipromina Etambutol Zileuton Carbidopa Tazobactam Acetazolamida Entacapona Miglustat Cicloserina Metrotexate Leflunomida Dapsona Topotecan INDICACIN Antifngico Cncer de mama Disfuncin erctil Asma Tirosinemia Hiperplasia prosttica benigna Miasthenya grvis Lucemia celular Tuberculosis Alcoholismo Alcoholismo Diabetes Diabetes Depresin Antibacterial Inflamacin Enfermedad de Parkinson Antibacterial Glaucoma Enfermedad de Parkinson Enfermedad de Gauchers Tuberculosis Leucemia Inflamacin Antifungico Cncer de ovario NO. DE FRMACO 1 1 3 11 1 2 11 2 1 1 1 1 1 5 1 4 1 3 6 2 1 1 7 1 17 2 ORGANISMO Hongos Humano Humano Humano Humano Humano Humano Humano Bacteria Humano Humano Humano Humano Humano Bacteria Humano Humano Bacteria Humano Humano Humano Bacteria Humano Humano Hongos Humano REF 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112

27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56

DNA topoisomerasa (ATPhidrolizado) DNA-dirigido DNA polimerasa DNA-dirigido RNA polimerasa Dolicil fosfatasa Enoil-(protena transportadora de acilo) reductasa Exo-a-sialidasa Factor Xa Farnesil-difosfato farnesiltransferasa Acido fatty sintasa Glucano 1,4-a-glucosidasa Histona acetiltransferasa VIH-1 retropepsin Hidrogeno/ potasio-cambio ATPasa HMG-CoA reductasa (NADPH2) IMP dehidrogenasa Yoduro peroxidasa Isoleucina RNAt ligasa Membrana peptidasa Omitin decarboxilasa Orotidin-5-descarboxilasa fosfato Peptidil-dipeptidasa A Fosforibosilglicinamida formiltransferasa Plasma kallikrein Plasmin Prostaglandina-endoperoxido sintasa Complejo proteasoma endopeptidasa Protena-tirosina kimasa Ribonuclesido-difosfato reductasa RNA-dirigido DNA polimerasa RNA-dirigido DNA polimerasa

5.99.1.3 2.7.7.7 2.7.7.6 3.1.3.51 1.3.1.9 3.2.1.18 3.4.21.6 2.5.1.21 2.3.1.85 3.2.1.3 2.3.1.48 3.4.23.16 3.6.3.10 1.1.1.34 1.1.1.205 1.11.1.8 6.1.1.5 3.4.13.19 4.1.1.17 4.1.1.23 3.4.15.1 2.1.2.2 3.4.21.34 3.4.21.7 1.14.99.1 3.4.25.1 2.7.1.112 1.17.4.1 2.7.7.48 2.7.7.49

Ciproflaxino Aciclovir Rifapentina Bacitracin Isoniazid Oseltamivir Fondaparinux Alendronate Pirazinamida Miglitol Valproico Nelfinavir Esomeprazole Atorvastatin Micofenolate Propiltiouracila Mupirocina Cilastatina Eflomitina Allopurinol Captopril Pemetrexed Aprotimin Aminocaproico Etodolac Bortezomiba Imatiniba Gemcitabina Ribavirin Abacavir

antibacterial herpes Antibacterial Antibacterial Tuberculosis Influenza Trombosis Osteoporosis Tuberculosis Diabetes Convulsiones SIDA Sindrome de reflujo gastrofaringeo Hiperlipodemia Inmunosupresin Hipertiroidismo Antibacterial Resistencia Tripanosomas Gota Hipertensin Cncer Trombosis Trombosis Inflamacin Mieloma Leucemia Cncer Neumona SIDA

18 11 3 1 1 2 2 6 1 1 1 8 5 6 2 2 1 1 1 1 12 1 1 3 30 1 3 4 1 13

Bacteria Viral Bacteria Bacteria Bacteria Viral Humano Humano Bacteria Humano Humano Viral Humano Humano Humano Humano Bacteria Humano Parsito Humano Humano Humano Humano Humano Humano Humano Humano Humano Viral Viral

113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142

57

Serina- tipo D-Ala-D-Ala carboxipeptidasa Sodio/potasio-cambio ATPasa Escualeno monooxigenasa Esterol 14-dimetilasa Sacarosa a-glucosidasa Trombin Timidilato sintasa Tiroxina 5-deiodinasa Triaciglicerol lipasa Tirosina 3-monooxigenasa UDP-N-acetilglucosamina 1carboxilviniltransferasa Monooxigenasa inespecfica Ureasa Vitamina-K-epoxidoreductasa(warfarin-sens.) Xantina oxidasa

3.4.16.4

Cefonicida

Antibacterial Insuficiencia

52

Bacteria

143

58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71

3.6.3.9 1.14.99.7 1.14.13.70 3.2.1.48 3.4.21.5 2.1.1.45 1.97.1.10 3.1.1.3 1.14.16.2 2.5.1.7 1.14.14.1 3.5.3.5 1.1.4.1 1.17.3.2

Digitoxina Butenafina Itraconazol Miglitol Lepidurina Floxuridina Propiltiuracil Orlistat Metirosina Fosfomicin Aminoglutimida Acetohydroxamico Dicumanol Alopurinol

cardiaca congestiva Antifngico Antifngico Diabetes Trombosis Cncer Hipertiroidismo Obesidad Feocromositoma Antibacterial Cncer de mama Gastritis Cncer Gota

3 3 11 1 10 6 1 1 1 1 5 1 5 1

Humano Hongos Hongos Humano Humano Humano Humano Humano Humano Bacteria Humano Bacteria Humano Humano

144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157