BIOMETRIA HEMATICA OBJETIVOS. Determinar la cantidad de hemoglobina presente en la sangre. Determin ar el nmero de eritrocitos presentes en la sangre del paciente.

Conocer el porcen taje del volumen de los eritrocitos presentes en la sangre. Identificar el nmero de leucocitos presentes en la sangre. Hacer una correcta extensin sangunea. Realiz ar una identificacin de los glbulos blancos. INTRODUCCION. La biometra hemtica es un auxiliar en el diagnostico y seguimiento de anemias, leucemias, pacientes con q uimioterapias, sndrome febril e infecciones. La biometra hemtica tambin denominada h emograma, es uno de los estudios de rutina de mayor importancia, ya que da infor macin que de aqu se deriva i nos proporciona una idea muy confiable del estado gen eral de salud del paciente. Este estudio consta de varios parmetros HEMOGLOBINA. La hemoglobina es una mediada indirecta de la capacidad de transporte de oxigeno de la sangre. La sangre se diluye en lquido de Drabkin, que destruye los eritroc itos y convierte la hemoglobina en cianometahemoglobina. La solucin que se produc e se examina por medio de un espectrofotmetro o un colormetro. Su grado de absorba ncia es proporcional a la cantidad de hemoglobina que contenga la sangre. El mtod o fotoelctrico de la cianometahemoglobina permite hacer los clculos ms precisos de la cantidad de hemoglobina existentes. CUENTA DE ERITROCITOS. El nmero de eritroc itos contenidos en un litro de sangre se denomina concetracion de nmero de eritro citos. Es difcil lograr determinaciones

precisas de la concentracin de nmero de eritrocitos con una cama para recuento. Lo s eritrocitos se diluyen por medio del lquido para diluir eritrocitos. Los eritro citos se cuentan con el microscopio en una cmara para recuento y se calcula el nme ro por litro. MICROHEMATOCRITO. Volumen del paquete globular, despus de centrifug acin respecto del volumen sanguneo total expresado en litros/litros. El volumen to tal que ocupan los eritrocitos en un volumen dado de sangre, dividido entre el v olumen de sangre, se denomina fraccin de volumen de eritrocitos. El resto de sang re se compone de casi completamente de plasma, junto con una reducida cantidad d e glbulos blancos. RECUENTO DE LEUCOCITOS. Constituye una gua muy til sobre la grav edad de la enfermedad. En distintos procedimientos, se observa patrones especfico s de las respuestas leucocitarias. La concentracin de leucocitos es el nmero de el los que se encuentra en un litro de sangre La sangre se deposita en un lquido par a diluir leucocitos (trk), que: -destruye los eritrocitos y deja intacto a los glb ulos blancos. FROTIS SANGUINEO. La extensin se prepara repartiendo uniformemente una gota pequea de sangre sobre un portaobjetos de manera que solo se deposite ua n acapa de clulas. Despus de teirlas, las extensiones se sangre se utilizan para. D eterminar las fracciones de nmero de los tipos de leucocitos. Para detectar glbulo s rojos anormales Identificar ciertos parsitos.

TINCIONES (Wright y Giemsa) Una tincin de Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de oxidacin, as como eosina Y. La accin combinada de estos coloran tes produce el efecto de Romanowsky y da una coloracin purprica a los ncleos de los leucocitos y a los grnulos neutrfilos y de color rosado a los eritrocitos. Los co mponentes principales causantes de este efecto son el azul B (un producto de oxi dacin del azul de metileno) y la eosina Y. La amplia variacin en los colores y som bras observadas con la tincin de Romanowsky permiten distinciones sutiles de las caractersticas celulares. La naturaleza cida o bsica de las estructuras celulares d etermina su avidez por los componentes del colorante policromtico de Wright; es a s como los cidos nucleicos se tien con azul B que es el bsico y la hemoglobina con l a eosina Y que es cida. Otras estructuras se tien por una combinacin de ambos y se denominan neutrfilas. La tincin de Giemsa es un mtodo habitual para el examen de fr otis sanguneos y otro tipo de muestras biolgicas Permite la tincin diferencial de z onas con un alto contenido de ADN, y concretamente de uniones A-T. Esto permite distinguir perfectamente al microscopio ncleo celular Los ndices eritrocitarios son aquellos q se miden el tamao y su contenido de hemog lobina, su utilidad extrema es para clasificar eritrocitos, se basan en las medi ciones de la hemoglobina, el numero de eritrocitos y el hematocrito. MATERIAL Tubos de ensaye de 13X100 Pipetas de 1 y 5 ml Pipeta de shally (0.02ml) Pipeta de Thoma para globulos rojos y blancos Cmara de Neubauer

Tubo de Witrobe graduado Tubos capilares Porta y cubreobjetos Papel parafilm Cer illos Guantes Gasas Gradilla Instrumentos. Microscopio Agitador de pipetas Espec tofotometro Centrifuga Lector de hematocrito Reactivos. Liquido de Trk Etanol al 70% Liquido de Hayem Reactivo de Drabkin Solucin estantard de cianometahemoglobul ina DESARROLLO: A). Hemoglobina 1. En un tubo de ensaye agregue 4 ml de cianometahem oglobina y 0.02 ml de sangre, agitar cuidadosamente. Reposar 10 minutos y leer l a absorbancia o el % de transmitancia contra el blanco reactivo. B). cuenta de e ritrocitos. 1. Llenar con sangre bien mezclada, la pipeta de Thoma hasta la marc a 0.5 2. Limpiar cuidadosamente la parte externa de la pipeta, completar con el lquido de Hayem, hasta la marca de 101.

3. Sellar con papel parafilm, agitar durante 3 minutos, mezclar perfectamente. 4 . Colocar el cubrehematimetro sobre la cmara. 5. Descartar las primeras 4-5 gotas de la pipeta y llenar la cmara por capilaridad por uno de los bordes del cubrehe matimetro sobre la cmara. 6. Dejar reposar de 3-5 minutos., con el objetivo de 40 x se cuentan los eritrocitos contenidos en los 80 cuadros pequeos. C). Microhemat ocrito. 1. Se llena con sangre proveniente del tubo de la muestra, las 2/3 parte s de dos tubos capilares. 2. El extremo vacio de cierra con la flama o plastilin a. 3. Colocar en los canales de centrifuga, con el extremo cerrado dirigido haci a fuera, centrifugar a 12000 rpm por 5 minutos. D). Leucocitos. 1. Homogenizar l a sangre, con la pipeta de toma para glbulos blancos, aspirar sangre hasta la mar ca de 0.5, secar cuidadosamente la parte superior de la pipeta. 2. Completar con lquido de Trk hasta la marca 11, agitar 2 minutos. 3. Desechar las primeras 4-5 g otas y se carga la cmara de Neubauer. 4. Dejar reposar la cmara con la muestra dur ante 3 minutos. Observar al microscopio con el objetivo de 10x. 5. Se cuentan lo s leucocitos en cada uno de los cuadrados de 1 mm2 de las esquinas de la cmara. E ). Frotis sanguneo. 1. Se coloca un agita de sangre anticoagulada en uno de los e xtremos de un portaobjetos, se sujeta colocando pulgar e ndice en extremos opuest os, con un segundo portaobjetos se toca la gota de sangre y por capilaridad difu nde, en un ngulo de 30 se desliza rpida y firmemente en la direccin opuesta. F). Tin cin de Wright 1. En el soporte de tincin se coloca el frotis en posicin horizontal

2. Se le aade colorante de Wright, sobre el frotis de manera que quede todo cubie rto con el colorante. Se deja actuar durante 2 min. 3. Agregar sol. Amortiguador a, de manera que se forme una capa metlica, con una pipeta soplar para que la mue stra sea uniforme, se deja la muestra durante 3-6 minutos. 4. Se lava la tincin c on agua corriente y se dejas secar. G). Tincin de Giemsa. 1. Colocar el frotis en el soporte de tincin, fijar el frotis con metanol de de 10-20 minutos. 2. Se cub re el frotis con el colorante de Giemsa y 10 ml de amortiguador de fosfatos por 30 min. 3. Se lava la tincin con agua corriente y el frotis se seca al aire libre . 4. Se observa al microscopio con el objetivo de 40x. H). ndices eritrocitarios. Se calculan cada uno de los ndices.

RESULTADOS Cuenta eritrocitaria Clculos: Formula Nx200x10x400 80 Sustitucin 184x200x10x400 80 Resultado 1,840,000 Cuenta Eritrocitaria Valores de Referencia Hombres Mujeres 4.5 6.1x106 /mm3 4.0 5.3x106 /mm3 Resultado Obtenido 1.84 x106 /mm3 Hematocrito: Clculos: Hematocrito Valores de Referencia Hombres Mujeres 40.7 50.3% 36.1 44.3% HEMOGLOB INA Clculos: Resultado Obtenido 28% Formula Sustitucin Resultado Absorbancia x Standard = g/dL 0.23 x 36.7 8.4 Hemogl obina Valores de Referencia Hombres Mujeres 12 18 g/dL 12.1 15.1 g/dL Resultado Obtenido 8.4 g/dL

CUENTA LEUCOCITARIA Clculos: Formula Sustitucin Resultado Nx20(dilucin)x10(conc. de altura) 208x20x10 10,400 4 4 Cuenta Leucocitaria Valores de Referencia Hombres Mujeres 4,000 10,000 cel/mm3 4 ,000 10,000 cel/mm3 Resultado Obtenido 10.4x103 cel/mm3 Cuenta Diferencial Clulas Campos Linfocitos Monocitos Eosinofilos Basofilos 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Total 2 2 1 2 3 2 2 2 2 2 20 1 0 1 0 1 1 0 1 1 2 8 1 1 0 0 1 0 0 0 1 0 4 0 1 0 1 0 1 0 0 1 0 4 Neutrofilos Neutrofilos segmentados en Banda 4 0 5 1 5 0 4 1 5 0 5 0 5 1 5 0 5 0 5 1 48 4 Valores de Referencia Clulas Porcentaje Neutrofilos Segmentados 50 70% Neutrofilo s en Banda 0 2% Basofilos 0 2% Eosinofilos 0 4% Linfocitos 20 40% Monocitos 2 10 %

Indices eritrocitarios VCM (Volumen Corpuscular Medio) Valores de Referencia 80 100 Fl Menos de 80 Fl Mayor de 100Fl Indica Anemia Normocitica Anemia Microcitic a Anemia Macrocitica Formula Hematocrito / Cuenta Eritrocitaria x 10 = Fl Sustitucin 28% / 1.84 x106 /mm3 x 10 Resultado 152.17 Fl HCM (Hemoglobina Corpuscular Media) Valores de Referencia 27 31 Pg Menor de 27 P g Mayor de 31 Pg Indica Anemia Normocromica Anemia Hipocromica Anemia Hipercromi ca Formula Hemoglobina / Cuenta Eritrocitaria x 10 = Pg Sustitucin Resultado 8.4 g/dL / 1.84 x106 /mm3 45.6 Pg x 10 CHCM (Concentracin de Hemoglobina Corpuscular Media) Valor de Referencia 31 36 g/ dL Formula Sustitucin Resultado Hemoglobina / Hematocrito x 100 = g/dL 8.4 g/dL / 28 % x 100 30 g/dL