Institut fr Biochemie und Molekulare Medizin

KV: DNA Michael Altmann

Herbstsemester 2007/2008

bersicht VL DNA 1.) 2.) 4.) 5.) 6.) 7.) 8.) 9.) Lernmittel 1-3 Struktur der Doppelhelix Bildung eines Polynukleotidstranges Komplementre Basenpaarung Verschiedene DNA-Typen DNA schmelzen und renaturieren Nukleosom DNA-Verpackung in Chromosomen

3.) Die 4 Bausteine der DNA

10.) Menschlicher Chromosomensatz whrend der Metaphase 11.) Das Metaphasenchromosom besteht aus 2 Schwester-Chromatiden 12.) Mitose und Meiose 13.) Chromosomen und DNA-Gehalt

Lernmittel 1 (und Quelle der meisten Folien)

Kapitel: 16, 17, 18, 20, 21, 22, 23

Lernmittel 2
http://e-learning.studmed.unibe.ch/Gen_Kurs/START.HTM

Lernmittel 3
Atelier (Raum S279 im Dept. Chemie und Biochemie, Freiestr. 3 )
Posten (Plakate) zu den einzelnen Themen Skripten: http://ntbiouser.unibe.ch/trachsel/teaching/MB%20Atelier/Atelier.html (Atelier-Broschren; bitte nicht aus dem Kursraum mitnehmen!) Videos zu verschiedenen Techniken (PCR, DNA-Isolierung, etc.) Computer mit Internet-Anschlsse fr Schnell-Recherchen Diskussionen / Fachsprechstunden: siehe Wochenbltter

Struktur der DNA-Doppelhelix

Rechtsdrehende Doppelhelix (B-Struktur) Die beiden Helices legen sich antiparallel zueinander Je eine Windung alle 10 Basenpaare Struktur in den 50er Jahren dank Untersuchung an DNA-Kristallen / Rntgenbeugungsanalysen und chemischen Analysen bestimmt (Crick & Watson ->siehe zur Geschichte der Molekularbiologie)

Die 4 Bausteine der DNA

Nukleosid = Base + Zucker (Desoxy-Ribose) Nukleotid = Phosphosurerest als Ester an Nukleosid (ber 5-OH) gekoppelt RNA und DNA-Bausteine unterscheiden sich in 2-OH Position und Base U (RNA) statt T In der DNA: A = T; C = G

Bildung eines Polynukleotidstranges

Polaritt (und Syntheserichtung): 5->3 Bausteine fr Synthese von DNA: DesoxyNucleosid-Triphosphate (dNTPs) Pro Bausteine werden 2 energiereiche Bindungen (Sureanhydride) gespalten

Komplementre Basenpaarung

Wasserstoffbrcken halten die Doppelhelix zusammen 1 Purinbase paart jeweils mit einer Pyrimidinbase: A mit T und G mit C Die Basen bestehen aus aromatischen Ringen -> delokalisierte -Elektronen (absorbieren UVLicht bei 260 nm)

Verschiedene DNA-Typen

B-Form: aus Raumgrnden liegen die glykosidischen Bindungen eines Basenpaars nicht genau diametral zueinander -> abwechselnd kleine und grosse Furchen (Bindungsstelle fr Proteine) A-Form (auch rechtsgngig): wasserfrei Z-Form (linksgngig): abwechselnd Purin- und Pyrimidinbasen

DNA schmelzen und renaturieren

Denaturierung

Renaturierung Hybridisierung

Die Doppelhelix kann mit Hitze denaturiert werden (die beiden Helices getrennt) Bei Abkhlung finden die komplementren Basen wieder zueinander Das Schmelzen kann photometrisch gemessen werden, da die Lichtabsorption bei 260 nm im denat. Zustand zunimmt Weitere Faktoren, die die Stabilitt der Doppelhelix beeinflussen: Positiv geladene Ionen (zB. Na+) neutralisieren neg. Ladungen pH-Wert (beeinflusst H-Brcken)

Nukleosom

Histone = kleine basische Proteine, um die sich die DNA wickelt. Es bildet sich jeweils ein Oktamer aus 8 Proteinen bestehend (je 2x H2A, H2B, H3 und H4 Proteinketten). Ein weiteres Histon-Protein (H1) hlt den DNA-Proteinkomplex zusammen (nicht gezeigt). Jedes Nukleosom deckt etwa 200 Basenpaare ab (147 + ca. 50 bergang). Um die DNA abzulesen, mssen die Histone (zumindest vorbergehend) von der DNA getrennt werden.

DNA-Verpackung in Chromosomen

Dank Proteine wird eine hohe Verpackungsdichte der DNA erreicht (Faktor 104) Chromosom = DNA + Proteine (Histone + Nichthistone) Besonders gut sichtbar sind sog. Metaphasenchromosomen whrend der Zellteilung

Menschlicher Chromosomensatz whrend der Metaphase

Menschlicher Chromosomensatz (diploid): 22 autosomale Chromosomenpaare + 1 Paar Geschlechtschromosomen (X, Y) = (2x) 3x109 Basenpaare

Das Metaphasenchromosom besteht aus 2 Schwester-Chromatiden

Der Zellzyklus

Verdoppelung der DNA

1n, 2c
n = Ploidie; c = Anzahl Chromatiden

Mitose

Meiose

2. Teilung

1n, 2c 1. Teilung

1n, 1c

2n, 4c

Crossing-over

Chromosomen und DNA-Gehalt Mitose 2n2c

S-Phase

2n4c
Anaphase

2n2c

2x

Meiose 2x 1n1c
Befruchtung

2n2c
S-Phase

2n4c

1n2c
Anaphase I (Reduktionsteilung)

2x
Anaphase II

1n1c

4x