El xido ntrico es un gas simple, liberado por la conversin del aminocido Larginina en L-citrulina, por accin de la enzima sintetasa

de xido ntrico, la cual tiene una amplia distribucin en el organismo. Actualmente se le concede al xido ntrico una gran importancia en el estudio de la fisiologa normal y algunas enfermedades. Por esto se realiza una actualizacin sobre las caractersticas fundamentales de esta molcula y su participacin en la hemodinmica cardiovascular y algunas funciones hematolgicas y de defensa. Descriptores: XIDO NTRICO; HOMEOSTASIS.
Introduccin

En 1980, Furchgott y Zawadzki 1 demostraron la necesaria presencia del endotelio vascular para producir relajacin de un anillo de aorta torcica de conejo inducida por la acetilcolina, y concluyeron que sta la produca una sustancia difusible liberada por el endotelio, que se denomin Endothelium Derived Relaxing Factor (EDRF). Ya en 1979 se haba demostrado que la relacin existente entre los niveles de guanosina 3' - 5' monofosfato cclico (GMPc) en el msculo liso vascular y su relajacin estaba asociada a modificaciones del contenido intracelular de este mediador. Palmer, et al 4 identificaron (1987) el EDRF como xido ntrico (NO), el cual mediaba indirectamente la accin vasorrelajante de la acetilcolina. A partir de estos trabajos y en los ltimos aos se han sealado nuevas funciones del NO en procesos fisiolgicos y fisiopatolgicos del organismo y las consecuencias para la salud. En este trabajo se expone una actualizacin sobre las caractersticas fundamentales y la participacin que puede tener esta molcula en la hemodinmica cardiovascular y algunas funciones hematolgicas y de defensa. De ah la importancia que se le concede actualmente en el estudio de la fisiologa normal y patolgica en algunas enfermedades.
Biosntesis del xido ntrico

El xido ntrico es un gas simple que se libera por la conversin del aminocido L-arginina en L-citrulina. 10-12 Para la sntesis de NO, adems de la L-arginina como sustrato, se requiere de la presencia de calmodulina (CaM) y de 4 cofactores: flavin mononucletido (FMN), flavin adenina dinucletido (FAD), tetrahidrobloptenina (TBH) y de nicotinamida adenina dinucleotidofosfato (NADPH). Esta reaccin es catalizada por la enzima xido ntrico sintetasa (NOS) y puede ser inhibida por derivados estructurales de dicho aminocido: la

N-mono-metil-L-arginina (LNMMA), la N-nitro-L-arginina metilster (LNAME) y otros. Cuando la CaM no se encuentra unida a la enzima, los electrones donados por el NAPDH no fluyen desde el dominio reductasa hacia el dominio oxigenasa y son aceptados por el citocromo C y otros aceptores de electrones. En presencia de la calmodulina los electrones donados por el NADPH son transportados por el FAD y por FMN hacia el grupo hemo. La L-arginina se convierte en N-hidroxialanina y luego en NO y L-citrulina. En estas condiciones, la NOS produce una mezcla de aniones superxido (O2-) y xido ntrico que reacciona con peroxinitritos (ONCO -) y como resultado final tiene lugar la citotoxicidad. En ausencia de TBH la NOS genera perxido de hidrgeno (H2O2), superxido y xido ntrico. Los productos finales del NO "in vivo" son: nitrito (NO2-) y nitrato (NO3-). El mejor ndice de xido ntrico total es la suma de ambos productos, debido a que la proporcin relativa de cada uno de ellos dentro de una misma muestra resulta variable. La relacin de nitrito/nitrato puede ser medida a travs de sistemas colorimtricos que tiene un valor normal de 1.0 m. El xido ntrico, una vez formado, puede difundir hacia las clulas subyacentes, 3, 6 donde activa a la enzima guanidiciclasa (Gc) y sta provoca el aumento intracelular de GMPc, mediador de los efectos fisiolgicos. La sntesis de xido ntrico puede ser regulada por glucocorticoides y agentes antiinflamatorios no esteroideos (AINES) que reducen la produccin de este gas, as como por los propios niveles de NO a travs de mecanismos de retroalimentacin negativa. Se han identificado ms de una isoforma de NOS, constituidos por subunidades homodimricas con pesos moleculares entre 125 y 155 KDa: 1. Dos isoformas constitutivas calcio-dependientes (cNOS): la endotelial (eNOS) o tipo III y la neural (nNOS) o tipo I, presentes en diferentes tejidos (clulas endoteliales, neuronas, neuroglias y otros) que producen concentraciones fisiolgicas de NO al actuar como sealizador molecular. 2. Una forma calcio-independiente (lNOS) o tipo II, inducible en un nmero de tipos celulares como macrfagos, hepatocitos, neutrfilos, msculo liso, endotelio en respuesta a diferentes estmulos inmunolgicos tales como: interferon gamma (IFN-), factor de necrosis tumoral alfa (TNF- ) y lipopolisacrido bacteriano (LPS), los cuales generan gran cantidad de NO que puede ser txico en clulas tumorales o infectadas por virus. El conocimiento de esta amplia distribucin de las NOS ayudan a explicar

algunos de los efectos en el organismo asociados con la liberacin de xido ntrico.

Isoformas de xido ntrico sintetasa

Isoforma

Otro nombre nNOS o bNOS

Peso molecular 155 Kda

Regulacin

Localizacin

NOS Tipo I

NOS tipo II INOS

125 Kda

NOS Tipo III eNOS

135 Kda

Neuronas del SNC y SNP, neuroglias, Ca++/calmodulina islotes del pncreas. Macrfagos, Expresin hepatocitos, inducida por clulas musculares citocinas y lisas, neutrfilos y endotoxinas otros. Endotelio Ca++/calmodulina vascular, rin, plaquetas

El xido ntrico puede interactuar con diversas biomolculas y marcadores celulares fisiolgicos que provocan diferentes efectos, 2, 8 como se muestra en la siguiente tabla: xido ntrico
DNA Citosttico/citlisis Mutacin? GC-S Regulacin de mecanismos de transduccin. Activador de NO. Hb Disminuyendo la bioactividad del NO O2Cambio de la bioactividad de
NO. Dao oxidativo

Enzimas Modulacin de sus funciones

Abreviaturas: GC-S (Guanidil ciclasa soluble), O2- (anin superxido), DNA (cido desoxirribonucleico), Hb (hemoglobina).
xido ntrico y homeostasia cardiovascular

Las NOS que se identificaron primeramente en los vasos sanguneos desempean una importante funcin en los procesos fisiolgicos y patolgicos vasculares. Investigaciones realizadas por Palmer et al demuestran la accin del NO como posible regulador de la presin arterial, por su efecto vasorrelajante directo sobre los vasos sanguneos. Rubany et al comprueban adems que el principal factor responsable de la liberacin del xido ntrico por las clulas endoteliales es el roce producido por la sangre sobre esta capa de clulas, y sealan por primera vez "que el aumento de la velocidad o pulso del flujo sanguneo" produce vasorrelajacin dependiente de la liberacin de NO por las clulas endoteliales. Buse et al, en otros estudios, sugieren que al nivel de los vasos sanguneos existe un factor fsico que activa a los mecanorreceptores de la pared vascular, induciendo la sntesis de NO por las clulas endoteliales a partir de la eNOS. Demostraron adems que el xido ntrico liberado podra actuar de forma local en el msculo liso subyacente, con una vida media de pocos segundos en soluciones biolgicas. Lo expresado anteriormente indica que al aumentar la presin arterial el roce de la corriente sangunea sobre el endotelio vascular se incrementa y, por tanto, la liberacin de NO, que coincide con lo planteado por Navarro et al, 20 en cuanto a que a altas presiones de perfusin el xido ntrico principal en la autorregulacin local modulando la contractilidad migena de la pared vascular. Se considera lo anterior como el principal factor que influye en la dilatacin de los vasos sanguneos mediante el control continuo del tono liso muscular, inducido por la sntesis y liberacin de xido ntrico. En la hipertensin arterial, la disfuncin endotelial puede influir en el incremento de la resistencia vascular y producir complicaciones vasculares. En muchos modelos de hipertensin arterial, la relajacin dependiente del endotelio est reducida. Se ha observado que en ratas este efecto prevalece en los vasos sanguneos cerebrales y aorta, pero no en arterias coronarias. En pacientes hipertensos, la acetilcolina causa paradjicamente vasoconstriccin de arterias coronarias epicardacas. En modelos de ratas hipertensas (SHR), la actividad de la NOS se incrementa pero resulta ineficaz, probablemente por aumentar la desactivacin del xido ntrico. Navarro et al hallan que a largo plazo la hipertensin inducida por la administracin de inhibidores de la sntesis de No, se produce por una elevacin de la resistencia perifrica; hallazgos confirmados por Vallance et al en seres humanos al administrar inhibidores de la eNOS, y observaron un incremento de

la resistencia vascular entre 30-45 %. Este fenmeno se podra explicar por la existencia de un desequilibrio entre los agentes vasoconstrictores y el xido ntrico debido a la inhibicin de ste. Algunos autores como Tia et al y Morita et al opinan que la liberacin de xido ntrico puede ser controlada por el Sistema Nervioso y producir algunos efectos de este sistema sobre el control cardiovascular, fibras nerviosas parasimpticas que terminan en la adventicia de algunos vasos (cerebrales, retina) contienen eNOS. El NO puede ser liberado por estas fibras nerviosas y extenderse hasta la capa de msculo liso y provocar vasorrelajacin. Vincent et al y Takemura et al constatan que en animales la presencia de nNOS en los ncleos del tracto solitario (NTS) y el NO podran ser liberados por fibras nerviosas aferentes vagales hacia estos ncleos, considerndose el xido ntrico como un neuromodulador de neuronas barosensibles. Este fenmeno fue sugerido por Lewis et al al aplicar una microinyeccin de un compuesto nitroso (Snitrocistena) en el interior del NTS en ratas hipertensas, ya que se produjo inmediatamente hipotensin y bradicardia. Machado y Banagamba en estudios posteriores (en ratas) demuestran que el NO puede actuar como un neurotrasmisor desde neuronas barosensibles aferentes hacia el NTS. De esta forma es evidente el importante papel del tallo cerebral como neuromodulador sobre el control cardiovascular. Recientemente Ma y Abboud y Andrew et al comprueban que la frecuencia de las descargas tnicas de las neuronas del NTS disminuan cuando se inhiba la sntesis de xido ntrico.
xido ntrico y actividad plaquetaria

Numerosos autores han observado que de forma semejante a lo que ocurre en las clulas endoteliales, las plaquetas poseen la capacidad de generar xido ntrico (potente regulador de la funcin plaquetaria) en las que se ha demostrado la presencia de una eNOS. La liberacin basal de NO por las plaquetas, "in vitro" y posiblemente "in vivo", se ha comprobado que puede ser de ms o menos 20 nmol/L de sangre normalmente. 35 La activacin de la eNOS se inicia durante la adhesin de las plaquetas a la colgena de la pared del vaso sanguneo y la agregacin plaquetaria inducida por esta colgena, ADP y cido araquidnico. 35 37 El mecanismo de esta activacin no se conoce con exactitud, pero se afirma que el xido ntrico generado durante dicha reaccin se libera en relacin con la magnitud de la activacin plaquetaria.

En 1987 se demostr, en cultivo de clulas endoteliales, que al estimularlas con bradicinina la cantidad de NO liberado era suficiente para inhibir la adhesin plaquetaria. Adems el xido ntrico generado en los vasos coronarios y pulmonares inhibe la agregacin plaquetaria bajo condiciones de un flujo sanguneo constante. Polamowska y Adams observaron que la agregacin plaquetaria "in vitro" inducida por una variedad de agonistas es inhibida por la liberacin de NO en cultivo fresco de clulas endoteliales. Este xido ntrico caus tambin desagregacin del agregado plaquetario. Estudios en diferentes animales demostraron que la liberacin basal de NO causada por la estimulacin colinrgica y la sustancia P que inhibe la agregacin plaquetaria, inducida por varios agentes agregantes como traumas endoteliales, increment el tiempo de sangramiento. El NO liberado intraluminal procedente del endotelio vascular en seres humanos elev los niveles intraplaquetarios de GMPc. Se concluye que la activacin de la eNOS sobre las plaquetas inhibe su adhesin e induce a su desagregacin. La disfuncin endotelial puede conducir a la adhesin de plaquetas y glbulos blancos a las paredes vasculares y producir hiperplasia de la ntima vascular. Si a estos sitios disfuncionales se adhieren las plaquetas, se produce contraccin de la musculatura lisa del vaso por accin del tromboxano A2 y la serotonina; este hecho estimula la proliferacin y migracin de clulas del msculo liso vascular por accin del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF). El xido ntrico y las prostaciclinas inhiben la adhesin plaquetaria, as como la accin de la protena 1 quimiotctica de macrfagos (MPC-1) y la adhesin de monocitos. El GMPc inhibe la fosfolipasa C y A2 en las plaquetas, lo que regula la funcin de algunos receptores de plaquetas tales como el receptor del fibringeno IIb/IIIa y P-selectinas.
Efectos del xido ntrico sobre los leucocitos y procesos inflamatorios

Segn Kubes y Suzuki, el NO afecta las interacciones entre los leucocitos polimorfonucleares y las clulas endoteliales. Esto se produce por adhesin de neutrfilos a las paredes de las vnulas poscapilares. De esta manera se evidenci que el xido ntrico est relacionado con la regulacin de la adhesin de los glbulos blancos a las clulas endoteliales, fenmeno que es modulado por los mastocitos. Por tanto, el NO rige la adhesin de polimorfonucleares y contribuye mantenimiento de la integridad de la barrera

microvascular, a la vez que disminuye la permeabilidad vascular, la inflamacin y la formacin de edema. Algunos receptores de linfocitos T para antgenos virales pueden originar reacciones cruzadas con componentes de la membrana celular y producir activacin de citocinas u otros mediadores inflamatorios como el NO, el cual Kato y Zorunski consideran el mayor mediador de las funciones inmunes y desrdenes autoinmunes. Macrfagos y linfocitos activados ocasionan altos niveles de NO durante largos perodos por accin de la INOS. Lo anterior se reafirma en trabajos de Bo , Boulleme et al y Kolb , que observaron niveles elevados de xido ntrico en diferentes enfermedades autoinmunes como la esclerosis mltiple, el lupus eritematoso sistmico y la artritis reumatoidea. La posible actividad adversa o de citotoxicidad del NO, autores como Boulleme , Van Der Berg y Van Lent la explican a travs de procesos qumicos como la reaccin con intermediarios reactivos del oxgeno (ROI) y la formacin de peroxinitritos (ONOO-). En las enfermedades inflamatorias los macrfagos activados secretan ROI y NO, lo cual puede resultar en la produccin de peroxinitritos y/o radicales de OH. En esta reaccin de NO con el grupo hemo en sitios catalticos de las mitocondrias, enzimas citoplasmticas y nucleares, pueden formar uniones covalentes irreversibles. En la artritis reumatoidea la produccin aumentada de xido ntrico se evidencia por el incremento de los niveles de nitritos en el lquido sinovial de dichos pacientes. Como se observa el xido ntrico desempea una importante funcin en la modulacin de la respuesta inmune, posiblemente a travs de la regulacin diferencial de la sntesis de citocinas. Macrfagos y otros tipos celulares que pueden inducir la formacin de interferon gamma (IFN-factor de necrosis tumoral (TNF-y lipopolisacrido bacteriano (LPS), producen xido ntrico. El NO regula molculas propias del organismo que previenen efectos de deterioro potencial como son la sepsis y el choque (la inhibicin de su produccin puede ser beneficiosa para el tratamiento del choque sptico.
Otros efectos sobre el organismo

Actualmente numerosos autores estudian la participacin del NO en mltiples procesos biolgicos en el organismo (fisiolgicos y patolgicos) como: - Mediante el aprendizaje y la memoria.

Regulacin del sueo.

En la reproduccin. Progresin de lesiones ateromatosas. Puede estar asociado con trastornos patolgicos de la enfermedad de Alzheimer. En el asma bronquial posee accin vasodilatadora y acta como neurotrasmisor y mediador de la inflamacin. Disfuncin de clulas B de los islotes pancreticos en la diabetes mellitus insulinodependiente, que causa inhibicin de la secrecin de insulina.