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Biodiversidade e Conservao: Um Enfoque Molecular CENCEN-0167

Estudo da Diversidade Microbiana

Siu Mui Tsai


24/fevereiro/2010

Bactrias, Bactrias actinobactrias e fungos nas porosidades do solo.

UMA PERSPECTIVA MICROBIOLGICA


Microrganismos: Apareceram a partir de 3,8 x109 anos
Produziram na Terra condies hospitaleiras para evoluo s plantas e animais (0 6x109 anos) (0,6x10 em paralelo. Metade da biomassa na Terra: microbiana.

BIODIVERSIDADE

Presente

Organismos Celulares

A BIODIVERSIDADE AO LONGO DE 5 BILHES DE ANOS

Primeiros Eucariotos Metabolismo Oxidativo|

Fotossntese

Primeiras Clulas

4,6 4 6 Formao da Terra 5

ESTUDOS DA HEREDITARIEDADE GERARAM AS PRIMEIRAS DESCOBERTAS SOBRE O DNA

BACTRIA

SEQUENCIAMENTO DE GENOMAS

FUNGO

PLANTA INSETO

ANFBIO

PSSARO

MAMFEROS

pB POR GENOMA HAPLIDE

Base de sustentao da biosfera na Terra: atividade microbiana pois corresponde metade da biomassa total no hemisfrio. O longo tempo de existncia de microrganismos: responsvel pela ampla di l l l diversidade d id d dessa vida id microbiana, contribuindo diversas atividades e gerando uma diversidade de energia e oxidantes, q alm de fontes qumicas em diversos ambientes. Evoluo foi estudada com auxlio de: anotaes fsseis biogeoqumica filogenia molecular

A Clula Microbiana (Procarioto)


Caractersticas: Grupo metabolicamente diverso constitudo de organismos haplides maioria so unicelulares mas alguns so filamentosos; g ribossomos so pequenos; no possuem membrana nuclear.

A Clula Microbiana (Eucarioto)


Caractersticas: No possuem peptidoglicanas; membranas celulares contm cidos graxos; ocorrem estgios diplides; ribossomos so grandes; possuem membrana nuclear.

A Clula Microbiana (Procarioto)


Caractersticas: Grupo metabolicamente diverso constitudo de organismos haplides maioria so g p unicelulares mas alguns so filamentosos; ribossomos so pequenos; no possuem membrana nuclear. l

Bacteria: a maioria contm peptidoglicanas, membranas celulares possuem id graxos. b l l cidos Archaea: no contm peptidoglicanas; membranas celulares contm grupos fitanils fitanils.

O tamanho geral dos organismos

Os ribossomos nas clulas

A Clula Microbiana (Eucarioto)


Caractersticas: No possuem peptidoglicanas; membranas celulares contm cidos graxos; g ; ocorrem estgios diplides; ribossomos so grandes; possuem membrana nuclear. Protistas: heterotrficos unicelulares. Algas: Fungos: microrganismos unicelulares fotossintticos fotossintticos. filamentosos (exceto leveduras) e heterotrficos. heterotrficos

Ex.: razo baseada em DNA (mol% G+C, teor de G C G+%) ( l% G C t d G+C, G %)


Baseada na complementaridade G-C e A-T

G/C e A/T so usualmente constantes R relativa [G+C]/[A+T] varia entre genomas Razo l ti i t
geralmente baseada somente na abundncia do par G+C = teor de G+C

Mas tambm pode ser: G+C: [G+C]/[A+T+C+G]x 100


Desnaturao Reassociao

Determinao da Tm

Mtodos Bioqumicos e q Moleculares

ESTRUTURA Grosseira N Nvel de resolu e o taxo onmica Perfil G + C Caracterizao rRNA C t i RNA (T-RFLP, ARDRA) Sondas Especficas S nd s Esp fi s ITS (RISA, ARISA) Sequenciamento (homologia rRNA) box, rep, box Eric (cultivo)

ATIVIDADE

3H-Timidina

Biosensores rRNA Genes Bioreporteres (gfp, gus+) mRNA

COMUNIDADES MICROBIANAS DO SOLO

Fina

Ranjard et al. (2000)

Mtodos em Ecologia Microbiana


Mtodos Moleculares
RAPDs REP, BOX, ERIC-PCR DGGE AFLP ARDRA (16S RFLP) T-RFLP FISH ITS-PCR Sequenciamento S i t

Outros
FAME Cultivo seletivo Diversidade morfolgica

Capacidade relativa de resoluo dos p mtodos moleculares


Famlia Gnero Sub Subespcie Sequenciamento Espcie Isolado

16S rRNA Reassociao DNA-DNA ARDRA T-RNA PCR ITS-PCR AFLP RADPs Rep-PCR Rep PCR

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