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Forma qumica en la naturaleza

Biomolecula

Estructura en la q se encuentra

NH2, NH3

Aminocidos Protenas

Ncleo, Membrana celular, flagelo Pared celular, citosol, ncleo, flagelo Membrana celular, Ncleo, flagelo, citoplasma, ribosomas, ribosomas, capsula Membrana celular

CO2, CO, CH

OH, NH3, H2O

Lpidos, carbohidratos, almidn, aminocidos, protenas Protenas, Aminocidos, Agua, cloranfenicol, polisacridos Fosfolpidos y protenas

PO

Oz, H2O

Protenas, carbohidratos, glucosa, agua. cloranfenicol

Pared celular, ribosomas, citoplasma Citoplasma

Na

NaCl

Cl

Cl2

Cloranfenicol

Ribosomas

SO4

Aminocidos sulfurados, vitaminas, lpidos, protenas.

cistina, cistena, metionina, biotina.

Co

Enzimas

ADN

K+

Sales

Membrana celular

http://edafologia.fcien.edu.uy/archivos/Nutrientes%20del%20suelo.pdf http://www.losmicrobios.com.ar/microbios/estructura%20bacteriana.html

S.E.P.

S.E.S

D.G.E.S.T.

INSTITUTO TECNOLOGICO DE AGUASCALIENTES SUBDIRECCIN ACADEMICA DEPTO. DE INGENIERIA QUMICA Y BIOQUMICA

Microbiologa ambiental

Profesora: Roci Garca Obregn

Nombre del Alumno: Carlos Eduardo Delgado Herrera

Grupo: EA61

Nombre del Trabajo: Macronutrientes y micronutrientes

Fecha de entrega: 6 de marzo de 2012

http://www.educa2.madrid.org/cms_tools/files/6046b373-a0b6-4737-8f6b4553dfefcd53/10.-%20Fisologia%20y%20metabolismo%20bacteriano.pdf

ESTRUCTURA BACTERIANA
ltima actualizacin: Abril de 2009

INTRODUCCION

Las bacterias pertenecen al reino Procaryotae. Son elementos unicelulares sin un nucleo verdadero. Su tamao aproximado es de 1-3 micras.

Estructura de una Bacteria

ELEMENTOS BACTERIANOS

A los elementos bacterianos los podemos dividir en: Elementos obligados:


Pared bacteriana. Membrana citoplasmatica. Citoplasma. Ribosomas.

Nucloide (Nucleoide) o cromosoma bacteriano.

Elementos facultativos:

Capsula. Flagelos. Fimbrias o pili. Esporo. Glicocalix. Plasmidos. Transposones.


PARED CELULAR

Se pone de manifiesto con la tincin de Gram:


o o

Tincion desarrollada por Hans Christian Gram (18531938). Permite dividir a las bacterias en dos grandes grupos: Grampositivos y Gramnegativos .

Es una estructura compleja y fundamental para la bacteria formada porpeptidoglicanos (murena o glucopeptido), cuyo componentes bsicos son: o El N-acetilglucosamina (NAG) o El N-acetilmurmico (NAM). o Un tetrapeptido: Compuesto por aminoacidos que se alternan en sus configuraciones L y D. De estos aminoacidos, el D-glutamato, D-alanina y el acido mesodiaminopimelico no se encuentran en otra proteina conocida. El peptidoglicano representa el 5-20 % de la composicion de la pared de las bacterias Gramnegativas y el 90 % en las Grampositivas.

Componentes del Peptidoglicano

Su espesor varia segun se trate de bacterias grampositivas o gramnegativas: o En las bacterias grampositivas es una capa slida de 50-100 moleculas de peptidoglicanos o En las bacterias gramnegativas tiene un espesor de solo una o dos moleculas. Por su rigidez le da su forma peculiar a la bacteria La protege de los cambios de la presion osmtica del medio que la rodea. Es el lugar donde se localizan numerosos determinantes antignicos que permiten diferenciar a las bacterias entre si. La endotoxina de algunos grupos tambien se encuentra aqu. La pared celular se constituye (se "fabrica") mediante una serie de etapas enzimaticas en las que participan al menos 30 enzimas.

Es el sustrato donde actuan antimicrobianos como los beta-lactmicos. Participa en la division celular.

Dibujo artistico de las diferentes morfologias bacterianas. (Fuente: Museo Natura de San Diego)

MEMBRANA CITOPLASMATICA

Esta formada por fosfolipidos y proteinas, y a diferencia de las eucariotas, no contiene esteroles (excepto el mycoplasma). Las enzimas del transporte electronico se encuentran aqu (produce energia). Componentes de la capsula y la pared celular son sintetizados aqu. Es una barrera osmtica, selectiva y activa: o Acta como barrera osmtica para la clula. o Contiene sistemas de transporte para los solutos y regula el transporte de productos celulares hacia el exterior. Las bacterias gramnegativas tienen dos membranas: una interna y otra externa, mientras que las grampositivas, solo poseen una membrana (interna). Es sitio de accin de detergentes y antibiticos polipeptdicos como la polimixina (Por ejemplo: colistin).

CITOPLASMA

Formado 85 % por agua. Contiene los ribosomas y el cromosoma bacteriano.


RIBOSOMAS

Compuestos por ARN ribosomico. Su importancia radica en ser el sitio de accion de numerosos antibioticos: Aminoglucosidos, tetraciclinas, cloranfenicol, macrolidos y lincosamidas.
NUCLEOIDE O CROMOSOMA BACTERIANO

Llamado tambien equivalente nuclear. No posee membrana nuclear (de alli el termino nucleoide). Esta formado por un unico filamento de ADN apelotonado (superenrollado). Confiere sus peculiaridades geneticas a la bacteria. Regula la sintesis proteica.
CAPSULA

Estructura polisacarida de envoltura. Factor de virulencia de la bacteria. Protege a la bacteria de la fagocitosis y facilita la invasion. Permite la diferenciacion en tipos serologicos.
FLAGELOS

Estructuras proteicas, de mayor longitud que los pili. De estructura helicoidal ylocomotores (responsables de la motilidad bacteriana). Segn la posicion de los flagelos tenemos bacterias: Monotricas: un flagelo en un extremo o ambos.Logotricas: varios flagelos en un extremo o ambos. Peritricas: flagelos en toda la superficie.

Bacteria y sus flagelos

FIMBRIAS O PILI

Son estructuras cortas parecidas a pelos. Visibles solo al Microscopio Electronico. Carentes de motilidad. Los poseen fundamentalmente las Gramnegativas. Intervienen en la adherencia de las bacterias al huesped. Facilitan el intercambio de ADN durante la conjucion bacteriana. Tiene capacidad antigenica.
ESPORAS

Estructura presente en algunas especies bacterianas exclusivamente bacilares. Le permite a la celula sobrevivir en condiciones extremadamente duras. El material genetico de la celula se concentra y es rodeado por una capa protectora, que hace que la celula sea impermeable a la desecacion, al calor y numerosos agentes quimicos. Se coloca en una situacion metabolica de inercia. Puede permancer meses o aos asi. Cuando las condiciones son mas favorables se produce lagerminacion, con la formacion de una celula unica que despues se reproduce con normalidad. El esporo no se tie con los colorantes habituales y se identifica como una zona clara,

redondeada u ovalada, que contrasta con el resto de la bacteria que aparece coloreada.
GLICOCALIX

Entramado de fibrillas polisacaridas situadas en posicion extracelular. Facilita la adherencia.


PLASMIDOS Y TRANSPOSONES

Los plsmidos (plasmidios) son elementos extracromosmicos compuestos por ADN de doble cadena, con frecuencia circular, autoreplicativos y autotransferibles. Los transposones (genes saltarines o mviles) son elementos compuestos de ADN que pueden moverse de forma autosuficiente a diferentes partes del genoma bacteriano. No poseen la capacidad de autoreplicarse pero pueden transferirse a traves de plasmidios. El transposon al cambiar de posicion puede arrastrar una secuencia de ADN contigua y originar cambios fenotipicos en la bacteria.
NDICE: 1 2 2.1 2.1.1 2.1.2 2.1.3 2.1.4 2.2 2.3 2.3.1 CONCEPTOS BASICOS CLASES DE NUTRIENTES NUTRIENTES UNIVERSALES EL AGUA EL CO2 FSFORO SALES MINERALES NUTRIENTES PARTICULARES NITRGENO Y AZUFRE FIJACIN DE NITRGENO

2.4 3

FACTORES DE CRECIMIENTO MEDIOS DE CULTIVO

1 CONCEPTOS BASICOS
La nutricin es el proceso por el que los seres vivos toman del medio donde habitan las sustancias qumicas que necesitan para crecer. Dichas sustancias se denominan nutrientes, y se requieren para dos objetivos: fines energticos (reacciones de mantenimiento); fines biosintticos (reacciones plsticas o anabolismo). Las biosntesis de nuevos componentes celulares son procesos que requieren energa procedente del medio ambiente. En el captulo anterior vimos los principales modos de captacin y obtencin de energa existentes en las bacterias. Es importante tener claro desde el principio una serie de conceptos y nomenclaturas relacionados con los principales tipos de nutricin bacteriana. Puesto que, como acabamos de ver, la nutricin presenta un aspecto de aprovisionamiento de energa y otro de suministro de materiales para la sntesis celular, podemos hablar de dos clasificaciones de tipos de nutricin: 1) Desde el punto de vista de los fines de aprovisionamiento de energa, las bacterias se pueden dividir en: a) litotrofas: son aquellas que slo requieren sustancias inorgnicas sencillas (SH2 S0, NH3, NO2-, Fe, etc.). organotrofas: requieren compuestos orgnicos (hidratos de carbono, hidrocarburos, lpidos, protenas, alcoholes...).

b)

2) Desde el punto de vista biosinttico (o sea, para sus necesidades plsticas o de crecimiento), las bacterias se pueden dividir en: a) autotrofas: crecen sintetizando sus materiales a partir de sustancias inorgnicas sencillas. Ahora bien, habitualmente el concepto de autotrofa se limita a la capacidad de utilizar una fuente inorgnica de carbono, a saber, el CO2.

b)

heterotrofas: su fuente de carbono es orgnica (si bien otros elementos distintos del C pueden ser captados en forma inorgnica).

Otros conceptos: autotrofas estrictas son aquellas bacterias incapaces de crecer usando materia orgnica como fuente de carbono. Mixotrofas son aquellas bacterias con metabolismo energtico litotrofo (obtienen energa de compuestos inorgnicos), pero requieren sustancias orgnicas como nutrientes para su metabolismo biosinttico. Sean autotrofas o heterotrofas, todas las bacterias necesitan captar una serie de elementos qumicos, que se pueden clasificar (segn las cantidades en que son requeridos) como macronutrientes (C, H, O, N, P, S, K, Mg), y micronutrientes o elementos traza (Co, Cu, Zn, Mo...)([1]) En la naturaleza, estos elementos se encuentran combinados, formando parte de sustancias orgnicas o inorgnicas. Algunos de los nutrientes sern incorporados para construir macromolculas y estructuras celulares; otros solo sirven para la produccin de energa, y no se incorporan directamente como material celular; finalmente, otros pueden ejercer ambos papeles. El mundo bacteriano, como conjunto, exhibe una gigantesca versatilidad metablica de uso de nutrientes: desde autotrofos que obtienen su carbono por reduccin del CO2 y los dems elementos a partir de fuentes igualmente inorgnicas, hasta heterotrofos capaces de usar amplia gama de fuentes orgnicas de carbono. A su vez, dentro de los heterotrofos, podemos encontrar muchos y variados tipos de nutricin, desde bacterias metilotrofas que slo usan metano o metanol como fuente de carbono y energa, hasta los muy verstiles Pseudomonas, que pueden recurrir a degradar ms de 100 tipos de fuentes de C (incluyendo entre ellas sustancias tan exticas como hidrocarburos alifticos y cclicos). De cualquier modo, entre los heterotrofos, una de las fuentes ms tpicas de carbono consiste en glucosa. En los heterotrofos-organotrofos, los sustratos carbonados (con un nivel de oxidacin no muy distinto del material celular -CH2O-) entran simultneamente a: metabolismo energtico (donde la fuente de C se transforma en CO2, o en CO2 junto con otras sustancias no totalmente oxidadas);

metabolismo plstico (anabolismo = biosntesis de nuevo material celular). Aunque dentro del mundo de los procariotas se encuentre tanta variedad de nutriciones, las bacterias que pueden nutrirse solamente de sustancias inorgnicas sencillas (H2O, CO2, N2, NO3--, NH3, SO4=, fosfatos, etc.) son minora, pero sus procesos metablicos son muy interesantes. De hecho, existen tipos metablicos que slo han evolucionado en procariotas. Como paradigma de esto citaremos los microorganismos quimioautotrofos (o quimiolitoautotrofos): obtienen su energa de la oxidacin de sustancias inorgnicas sencillas, el carbono procede del CO2, y el resto de elementos a partir de sales inorgnicas, por lo que pueden vivir en soluciones de sales minerales en ausencia de luz. Lo habitual, sin embargo, es que muchas bacterias recurran, siempre que puedan, a tomar del medio ciertos compuestos ms complejos, ya que carecen de ciertas rutas biosintticas.

2 CLASES DE NUTRIENTES
Podemos clasificar los nutrientes en las siguientes categoras: Universales (es decir, aquellos que son requeridos por todos los procariotas): agua, CO2, fosfatos y sales minerales; Particulares; Factores de crecimiento.

2.1 NUTRIENTES UNIVERSALES


2.1.1 EL AGUA
Las bacterias necesitan grandes cantidades de agua. De hecho, salvo excepciones, se pueden considerar como organismos acuticos. Requieren cierto grado de humedad para crecer. Desde el punto de vista de sus posibles papeles, el agua es: el principal constituyente del protoplasto bacteriano; el medio universal donde ocurren las reacciones biolgicas; un reactante en exceso (es decir, un producto resultante de algunas reacciones bioqumicas). Las fuentes de agua pueden ser:

endgena: procedente de procesos de oxido-reduccin; exgena (la ms importante): procedente del medio, y que difunde a travs de las membranas. Ahora bien, no toda el agua de un ambiente est disponible para la bacteria: Existen determinadas sustancias que absorben y superficies que adsorben de modo ms o menos intenso molculas de agua, dejndolas inasequibles para la bacteria. Los solutos disueltos en agua (p. ej., sales, azcares) tienen afinidad por las molculas de H2O que los rodean, por lo que stas tampoco estarn a disposicin del microorganismo. La disponibilidad de agua se mide por un parmetro llamado actividad de agua o potencial de agua, indicativo del agua libre, y que se expresa como aW= PS/PW donde PS es la presin parcial de vapor de agua en la solucin problema y PW es la presin parcial de vapor del agua destilada.

Cmo medir el potencial de agua de un medio lquido determinado? Se mide la humedad relativa del aire que hay encima del medio (en frascos), y este valor se refiere al valor de 100, que es la humedad del aire encima del agua destilada. O sea, la aW = humedad relativa/100).
Las bacterias tienen valores de aW normalmente entre 0.90 y 0.99. Bacterias de hbitats oligotrficos (como Caulobacter, Spirillum) tienen aW cercanos a 1. Bacterias como Escherichia y Streptococcus, que viven en sangre y fluidos corporales, tienen aW de alrededor de 0.995. Bacterias marinas como ciertos Vibrio y Pseudomonas encuentran valores de 0.980. Ciertos bacilos Gram-positivos que resisten mejor la sequedad poseen valores de 0.950. En el extremo de resistencia encontramos ciertas bacterias xerfilas, capaces de vivir a aW muy bajos (en torno a 0.75). Muchas de estas bacterias viven de hecho en medios acuosos, pero donde gran parte del agua no est disponible por las razones arriba citadas: procariotas halfilos extremos, como la arquea Halobacterium, que habita en lagunas hipersalinas; bacterias (y sobre todo, ciertos microrganismos eucariticos como levaduras) sacarfilos, que viven en jugos y zumos con altas concentraciones de azcares.

2.1.2

EL CO2

El anhidrido carbnico es requerido por todo tipo de bacterias: Las autotrofas lo requieren como fuente de carbono, y lo reducen usando como fuente de energa la luz (en el caso de las fotoautotrofas) u oxidaciones de determinadas sustancias inorgnicas (los quimioautolitotrofos). Las arqueas metanognicas pueden usar el CO2 como aceptor de los electrones procedentes de la oxidacin del H2, proceso por el que obtienen su energa de modo litotrofo:

CO2 + 4H2 --> CH4 + 2H2O

(G'0<0)

Adems, algunas arqueas no slo usan CO2 como aceptor de electrones para obtener energa, sino que, adems lo usan como fuente de carbono celular (arqueas metanognicas autotrofas). Los heterotrofos, aunque no usan el CO2 como fuente de C ni como aceptor de electrones, necesitan pequeas cantidades para las carboxilaciones en determinadas rutas anablicas y catablicas. El origen del CO2 puede ser: endgeno: procedente de descarboxilaciones que ocurren al degradar la fuente orgnica de carbono; exgeno: el CO2 de la atmsfera o disuelto en las soluciones acuosas. Normalmente, las bacterias crecen a la concentracin de CO2 atmosfrico (0.03%), pero algunas bacterias (Neisseria, Brucella), cuando se aislan por primera vez, requieren atmsferas enriquecidas, con 5-10% de CO2. Ello parece deberse a que poseen alguna enzima con baja afinidad hacia el carbnico; sin embargo, tras varios subcultivos, suelen adaptarse a crecer a tensiones normales.

2.1.3

FSFORO

Suele requerirse en forma de fosfatos, sea orgnicos o inorgnicos. Las bacterias que pueden usar los fosfatos orgnicos (merced a la posesin de fosfatasas) no dependen absolutamente de ellos, ya que pueden recurrir igualmente a los fosfatos inorgnicos. Los fosfatos orgnicos son hidrolizados por fosfatasas extracelulares o (en las Gram-negativas) periplsmicas (p.ej., la fosfatasa alcalina). El fsforo se usa principalmente para la sntesis de los cidos nucleicos y los fosfolpidos, pero aparece tambin en coenzimas y en protenas.

2.1.4

SALES MINERALES

Las sales minerales son la fuente de aniones (p. ej. el Cl-) y de cationes para la clula. Los siguientes cationes, concretamente, se necesitan en cantidades relativamente grandes: K+, Mg++, Ca++, Fe++. El in potasio (K+): interviene en la activacin de una variedad de enzimas, incluyendo las que participan en la sntesis de protenas. En Gram-positivas est asociado con los cidos teicoicos de la pared. El in magnesio (Mg++): estabiliza ribosomas, membranas y cidos nucleicos; como cofactor en muchas reacciones, especialmente las que implican transferencia de grupos fosfato. Por ejemplo, en las reacciones que requieren ATP, el Mg++puede unir la enzima al sustrato durante el mecanismo de accin de la primera. Participa de las clorofilas y bacterioclorofilas de bacterias fotosintticas. El in calcio (Ca++): es un cofactor de ciertas enzimas, como proteinasas. El hierro (principalmente como in ferroso, Fe++) suele estar acomplejado en la naturaleza, formando sales insolubles. Las bacterias disponen de una serie de molculas, denominadas siderforos, capaces de captar ese hierro (p.ej., hidroxamatos y enterobactina). El hierro participa en muchas molculas implicadas en procesos de respiracin, como citocromos y ferroprotenas no hmicas (protenas con Fe-S); interviene como cofactor en ciertas enzimas. Aparte de estos iones que se requieren en cantidades relativamente grandes, las bacterias necesitan minsculas cantidades de otros elementos (oligoelementos), a los que tambin se denomina como micronutrientes o elementos traza: El manganeso (Mn++) es un cofactor de ciertas enzimas, y a veces puede sustituir al Mg++. El cobalto (Co++) se requiere casi exclusivamente para la vitamina B12 (de hecho, si suministramos esta vitamina al medio, la bacteria se vuelve independiente del Co+ + libre). El zinc interviene en la estabilizacin de complejos enzimticos como las ADN- y ARNpolimerasas. El molibdeno participa en las llamadas molibdoflavoprotenas, implicadas en la asimilacin de nitratos. Por otro lado, participa como cofactor, junto con el Fe, en el

complejo nitrogenasa de las bacterias fijadoras de N2 atmosfrico. El nquel participa en hidrogenasas, enzimas que captan o liberan H2.

2.2 NUTRIENTES PARTICULARES 2.3.1 NITRGENO Y AZUFRE

Se trata de elementos que pueden ser cubiertos de modo muy distinto, dependiendo del tipo de bacteria que consideremos. Concretamente, los elementos N y S (que requieren todos los seres vivos) pueden ser captados por las bacterias de modos muy distintos, dependiendo de sus capacidades biosintticas. Tanto el N como el S se encuentran en la clula en estado reducido: el radical -NH2 forma parte de los aminocidos (que a su vez son los sillares de las protenas) y de las bases nitrogenadas (que participan en los cidos nucleicos y en algunas coenzimas); el radical -SH interviene en determinados aminocidos y en coenzimas como la CoA. En qu formas qumicas entran N y S a las bacterias? La mayora de bacterias fotosintticas y muchas heterotrofas asimilan estos elementos en forma combinada inorgnica oxidada: como NO3--, merced a la actuacin secuencial de nitrato-reductasas y nitritoreductasas asimilatorias. como SO42-. Este sulfato se activa con ATP, y luego se reduce hasta sulfito y finalmente sulfhdrico, que ya tiene el estado de reduccin adecuado para la incorporacin del S. Muchas bacterias heterotrofas pueden usar alguna forma reducida de N inorgnico: amonio (NH4+) de S inorgnico: sulfuros (S2-, SH-) de N orgnico: aminocidos, pptidos de S orgnico:cistena. Muchas de las bacterias que pueden usar amonio como nica fuente de nitrgeno tambin pueden usar nitratos.

2.3.2

FIJACIN DE NITRGENO

La atmsfera contiene enormes cantidades de nitrgeno no combinado (libre) en estado gaseoso: el nitrgeno molecular o dinitrgeno (N2), que procede de microorganismos desnitrificantes (vase el captulo 10). Sin embargo, esta gran reserva slo puede servir de fuente de nitrgeno a ciertos procariotas, las llamadasbacterias fijadoras de nitrgeno o diazotrofos. Esta notable capacidad bioqumica no ha evolucionado en eucariotas. (Lo ms a que ha llegado la evolucin es a seleccionar ciertos tipos de asociaciones simbiticas entre procariotas diazotrofos y ciertos eucariotas, como p. ej., la simbiosis entre races de leguminosas y bacterias del grupo de Rhizobium). La fijacin del N2 es un proceso de reduccin que convierte el nitrgeno molecular en amoniaco, segn la siguiente ecuacin: N2 + 8H+ + 8e + 18 ATP ---------> 2NH3 + H2 + 18 (ADP + Pi) Esta reaccin est catalizada por un complejo enzimtico denominado nitrogenasa o dinitrogenasa, que consta de dos componentes: Componente I o nitrogenasa propiamente dicha; posee un cofactor de hierro y molibdeno (FeMoCo) que forma parte del centro activo. Por ello, a este componente tambin se le conoce como molibdoferroprotena. (En realidad existen dos copias del cofactor, cuya estequiometra es MoFe7S8-homocitrato)[2] Componente II o nitrogenasa-reductasa, que posee tomos de Fe acomplejados con S de determinadas cistenas (por lo que este componente se denomina a veces ferroprotena). Mecanismo del complejo dinitrogenasa: Los electrones para la reduccin llegan al complejo por medio de una ferredoxina o una flavodixina (FeS protenas no hmicas), que los transfiere al componente II, que queda reducido. El componente II reducido se une a dos molculas de ATP, y cambia su conformacin, lo que le permite unirse al componente I. Entonces se produce la transferencia de electrones desde el componente II al componente I, con hidrlisis de ATP, lo que a su vez provoca la separacin del componente II respecto del I. Una vez reducido el componente I (la molibdoferroprotena), ste transfiere los electrones (y los protones) al N2, hasta convertirlo en dos molculas de amoniaco. (El centro activo es FeMoCo). El amoniaco entra entonces en las rutas biosintticas para convertirlo en N orgnico, incorporable a las macromolculas.

Mecanismo de la nitrogenasa

Dos cosas llaman la atencin de la reaccin de la nitrogenasa: Obsrvese que la reaccin requiere un gran aporte de energa en forma de al menos 18 ATP (en ocasiones puede llegar a 24 ATP). Ello se debe a que el dinitrgeno (N N) es una molcula extremadamente inerte (su energa de disociacin es de 940 kJ), y su reduccin precisa una gran energa de activacin para transferirle 6 electrones. Parte de la actividad nitrogenasa (as como ATP y electrones) se pierden en reducir dos iones H+ hasta H2. Se desconoce la razn de este despilfarro, pero se sabe que es un efecto intrnseco de este complejo enzimtico. Un aspecto muy importante del complejo nitrogenasa es su extrema sensibilidad al oxgeno, de modo que queda rpida e irreversiblemente inactivado por este gas. Ahora bien, esto no significa que la capacidad de diazotrofa est relegada a bacterias anaerobias, ya que, como veremos en la

seccin de taxonoma, la evolucin ha inventado distintas estrategias para proteger a la nitrogenasa en fijadores aerobios: Eliminando rpidamente el O2 por una intensa respiracin (ej: Azotobacter) Produciendo capas mucosas que retardan la entrada del oxgeno a la clula (en Azotobacter, Beijerinkia) En clulas especiales dotadas de mecanismos protectores, como el heteroquiste de las cianobacterias o los bacteroides de Rhizobium dentro de los ndulos radicales de las leguminosas Proteccin conformacional: en Azotobacter: la nitrogenasa se une con protenas protectoras Debido a lo caro que resulta fijar nitrgeno, no es extrao comprobar que este proceso est regulado de forma muy estricta ante la presencia en el medio de fuentes combinadas de nitrgeno (nitratos, amonio, aminocidos): la actividad nitrogenasa se ve inhibida ante la presencia de N combinado (nitratos, amonio, aminocidos); ante N combinado, se reprime la transcripcin de los genes codificadores de la nitrogenasa y dems funciones relacionadas (genes nif). La nitrogenasa es una enzima relativamente inespecfica, ya que puede reducir otras pequeas molculas provistas de triples enlaces, como cianuros (N C-) y acetileno (HC CH). La reduccin de acetileno a etileno sirve de base al mtodo ms usual de medir la actividad nitrogenasa, el llamado ensayo de reduccin del acetileno, que se registra mediante aparatos de cromatografa gaseosa.

2.4 FACTORES DE CRECIMIENTO


Los factores de crecimiento son molculas orgnicas especficas que, en muy pequea cantidad, algunas bacterias necesitan para crecer. Salvo excepciones no tienen funcin plstica (no son sillares de macromolculas) ni sirven como fuente de energa. Suelen ser coenzimas o sus precursores, vitaminas, que determinadas bacterias no pueden fabricar por s mismas, al carecer de parte o toda una ruta biosinttica. Ejemplos: las bacterias del gnero Brucella requieren como factores de crecimiento en sus medios de cultivo la biotina, niacina, tiamina y cido pantotnico.Haemophilus necesita suplementos de grupos hemo y piridnnucletidos.

En la siguiente tabla se muestran algunas de las vitaminas y cofactores requeridos por algunas bacterias: Factor o vitamina
p-aminobenzoico (PABA) Acido flico Biotina Cobalamina (vitamina B12) Niacina (cido nicotnico) Riboflavina cido pantotnico Tiamina (vitamina B1) Complejo B6 (piridoxal, piridoxamina) Grupo Vitamina K, quinonas

funciones principales
precursor del cido flico metabolismo de compuestos C1, transferencia de grupos metilo biosntesis de cidos grasos; fijacin de CO2 reduccin y transferencia de compuestos C1; sntesis de desoxirribosa precursor del NAD; transferencia de electrones en reacciones redox precursor de FAD y FMN precursor de la CoA descarboxilaciones; transcetolasas. transformaciones de aminocidos y cetocidos transportadores de electrones (ubiquinonas, menaquinonas, etc.)

3 MEDIOS DE CULTIVO
(NOTA: esta parte del tema es para que te sirva de cara a las prcticas de la asignatura, que es el sitio ideal para aprender sobre los medios de cultivo, su fundamento y sus variedades). El conocimiento de la nutricin microbiana permite el cultivo de los microorganismos en el laboratorio. Como acabamos de ver, en general, todos los microorganismos tienen parecidos requerimientos de macro- y micronutrientes, aunque ha quedado claro que la forma en que cada nutriente es captado puede variar mucho entre unas bacterias y otras, as como la cantidad relativa de cada nutriente. Los microbilogos, en su trabajo cotidiano, estn acostumbrados a manejar multitud de recetas o frmulas correspondientes a muchos tipos de medios de cultivo. Un medio de cultivo es una solucin acuosa (bien como tal, o bien incorporada a un coloide en estado de gel) en la que estn presentes todas las sustancias necesarias para el crecimiento de un(os) determinado(s) microorganismo(s). Los medios de cultivo se pueden clasificar, en primera instancia, en tres grandes tipos: 1) Medios complejos o indefinidos: su composicin qumica exacta se desconoce, ya que son el producto de realizar infusiones y extractos de materiales naturales complejos: Ejemplos:

Digeridos crudos de extracto de carne Digeridos de extracto de levadura Digeridos de peptona de carne o de soja Digeridos de casena (de la leche). Con ellos se logra un tipo de medio rico nutricionalmente, aunque indefinido qumicamente. Si lo que pretendemos simplemente es obtener un buen crecimiento bacteriano, este tipo de medios es ideal, ya que su confeccin es fcil y rpida (basta pesar una cierta cantidad del extracto desecado, suministrado por casas comerciales, disolverlo en agua y esterilizar en autoclave, antes de inocular e incubar la bacteria con la que queramos trabajar). Estos medios contienen fuentes variadas de C y N orgnicos, sales minerales y micronutrientes. Sin embargo, con ellos no podemos tener un control nutricional preciso, ya que desconocemos la composicin qumica y proporcin exacta de los distintos nutrientes. 2) Medios sintticos o definidos: se obtienen disolviendo en agua destilada cantidades concretas de distintas sustancias qumicas puras, orgnicas y/o inorgnicas. La composicin concreta de un medio sinttico depender de la bacteria que queramos cultivar: lgicamente, un medio definido para una bacteria con grandes capacidades biosintticas ser ms sencillo que el medio definido de otra bacteria con menores posibilidades biosintticas. En la tabla siguiente se dan las composiciones de sendos medios sintticos para dos bacterias diferentes. ___________________________________________________________________________
Medio sinttico para Escherichia coli para Leuconostoc mesenteroides K2HPO4 K2HPO4 KH2PO4 KH2PO4 (NH4)2SO4 NH4Cl MgSO4 MgSO4 CaCl2 g Glucosa 1.0 g 3.0 g 0.1 g 0.1 g 0.02 25 g 2.0 g 0.6 g 7.0 g 0.6 g Medio sinttico

Glucosa sdico 20 g microelementos:

10 g

acetato

(Fe, Co, Mn, Zn, Cu, Ni, Mo) 2-10 g cada uno agua destilada 100-200 g cada uno 1000 ml aminocidos (los

20)

purinas (adenina, guanina) 10 mg cada una pirimidinas (uracilo, xantina), 10 mg cada una vitaminas: biotina, nicotnico, piridoxi pantotnico,

flico, piridoxal, piridoxamina, na, riboflavina, tiamina, PABA)...... 0.01-1 mg cada una

elementos traza 2-10 g cada uno agua destilada 1000 ml

___________________________________________________________________________
Como se puede deducir de la tabla anterior, Escherichia coli posee muchsimas capacidades biosintticas, ya que puede crecer en un medio confeccionado exclusivamente a base de glucosa y sales minerales. (An ms impresionantes son las bacterias autotrofas, que ni siquiera requieren fuente orgnica de carbono, y se apaan con medios a base de sales solamente). En cambio, Leuconostoc, a ms de fuente orgnica de C y sales similares a las necesitadas por E. coli, precisa una enorme diversidad de sustancias adicionales, incluyendo todos los aminocidos proteinogenticos, las bases nitrogenadas y un buen muestrario de vitaminas.

3) En tercer lugar, podemos fabricar un tipo de medio mezcla de los anteriores, denominado medio semisinttico: llevan algunas sustancias qumicas cuya naturaleza y cantidad conocemos, junto con sustancias de naturaleza y composicin indefinidas. Cualquiera que sea el tipo de medio, de los tres que acabamos de citar, podemos elaborar dos tipos de versiones, segn su estado aparente:

medios lquidos (por ejemplo, los dos de la tabla) medios slidos: derivan de los lquidos simplemente aadiendo a la solucin nutritiva un coloide en estado de gel, que solidifica (da consistencia) a esta solucin.

En los primeros tiempos de la Bacteriologa slo se conoca como sustancia gelificante incorporable a los medios la gelatina. Sin embargo, presenta muchos inconvenientes, ya que funde a 25oC (por encima de esta temperatura el medio se lica), y adems, muchas bacterias presentan gelatinasas que hidrolizan la gelatina. El gelificante ms usado es el agar-agar, extrado de algas rojas (p. ej. Gelidium), del cual existen versiones ms o menos purificadas (las ms puras estn ms enriquecidas en el polisacrido agarosa; son las que se emplean para los medios definidos, con objeto de evitar la introduccin de sustancias "contaminantes" inadvertidas que falseen las interpretaciones sobre el comportamiento nutricional de la bacteria). El agar presenta la gran ventaja de que una vez gelificado, no funde hasta cerca de los 100oC, lo que permite su uso para la inmensa mayora de bacterias, que son mesfilas. Un comportamiento notable del agar es que una vez fundido (a 100C), no gelifica (solidifica) hasta los 45C. En este margen de temperatura hasta el lmite de solidificacin de 45C se dice que el agar est en sobrefusin. Para cultivar ciertas bacterias (sobre todo los quimioautotrofos) se suele recurrir a un gelificante inorgnico, el silicagel o gel de slice.
Finalmente, introduciremos otra serie de conceptos relativos a medios de cultivo, que al igual que los anteriores, sern tratados con la suficiente amplitud en las sesiones de clases prcticas: Medios selectivos son aquellos que permiten seleccionar un tipo (o unos pocos tipos) de microorganismos. En el laboratorio se emplean mucho medios selectivos slidos que incorporan ciertas sustancias que inhiben el crecimiento de ciertas bacterias, pero permiten el crecimiento de otras. (P. ej. medios que llevan violeta cristal inhiben el crecimiento de bacterias Gram-positivas. Medios diferenciales son aquellos que permiten distinguir a simple vista dos o ms tipos de bacterias en funcin de su distinto comportamiento respecto de algn nutriente del medio. Ese comportamiento diferencial se traduce normalmente en un viraje de color de una sustancia indicadora presente en el medio. Ejemplos:

en el medio EMB (eosina-azul de metileno) ciertos tipos metablicos de bacterias producen cambios de color y precipitacin de sales cuando producen cidos por fermentacin de ciertas fuentes de carbono. El medio llamado agar-sangre lleva un 5% de sangre de caballo o carnero, lo cual revela la capacidad (y el tipo) de hemolisis de ciertas bacterias. Algunos medios son simultneamente selectivos y diferenciales. P. ej., el agar de MacConkey, que el alumno manejar en la segunda tanda de prcticas. Se trata de un medio de color rosado y transparente, que posee, entre otras sustancias, lactosa, peptonas, el colorante vital rojo neutro, sales biliares y violeta cristal. Este medio es selectivo contra muchas bacterias Gram-positivas debido al violeta cristal, y tambin contraselecciona muchas Gram-negativas debido a las sales biliares (que son agentes tensioactivos que desorganizan muchas membranas externas). En cambio, las Enterobacterias estn evolutivamente adaptadas a soportar sales biliares en su hbitat natural (el intestino de vertebrados superiores), y pueden crecer en este medio. En su faceta de medio diferencial, el agar MacConkey permite visualizar dos tipos de Enterobacterias segn que puedan o no fermentar la lactosa, con produccin de cidos. Las bacterias fermentadoras de lactosa (Lac+), excretan al medio gran cantidad de cidos orgnicos, lo que provoca que sus colonias, y sus alrededores aparezcan de color rojo intenso, debido al viraje del rojo neutro; adems, se forma un halo turbio a cierta distancia de estas colonias, fenmeno ocasionado por la precipitacin de las sales biliares inducida por la acidez. En cambio, las bacterias Lac-, al no poder usar la lactosa, recurren como fuente de C a las peptonas, a las que desaminan: incorporan el esqueleto carbonado, excretando iones NH4+, que alcalinizan el medio de cultivo, lo cual se traduce en que el indicador rojo neutro vira a amarillo.

NOTAS

[1] .- Quiz llame la atencin del lector no ver citado aqu el Na. De hecho, el Na no es un requerimiento universal en las bacterias; slo lo necesitan ciertos procariotas marinos, de lagunas saladas, cianobacterias y anoxifotobacterias.

[2] Existen ejemplos de nitrogenasas alternativas en las que no existe FeMo-co, sino cofactores de hierro y vanadio (FeVa-co) o cofactores con

solo sulfuro de hierro. Se supone que estas nitrogenasa funcionan solo mecanismos de apoyo cuando en el medio no hay suficiente molibdeno.
http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/11nutrientes.htm