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EVOLUCIN DE LOS CULTIVOS CELULARES El cultivo de clulas tuvo su origen en el siglo XIX.

Rechlinhausen en 1866, mantuvo vivas clulas sanguneas de anfibio, pero fue la utilizacin de bloques de agar con plasma coagulado (soporte y alimento) el inicio del cultivo de clulas in vitro (Freshney, 1987). El desarrollo del cultivo de clulas de vertebrados se inici con las observaciones de Roux (1885) en cultivos de clulas de embrin de pollo; posteriormente Harrison (1907) cultiv tejido nervioso de rana el cual ms adelante fue reemplazada por plasma de pollo (Burrows 1910); posteriormente, Carrel en 1912 aplic esta tcnica para el estudio en animales de sangre caliente. Una serie de innovaciones como el desarrollo de medios de cultivo (Eagle, 1955), el uso de antibiticos, las tcnicas de tripsinizacin para el pasaje de clulas (Moscona y Moscona, 1952) y la suplementacin del medio con suero fetal bovino, permitieron el desarrollo y aplicabilidad de los cultivos de clulas de origen vertebrado. El empleo de tcnicas de fusin celular (Barski, 1960; Littlefield, 1964) estableci las bases de la gentica de clulas somticas para el anlisis de especies animales (incluyendo al hombre); igualmente la tcnica de anticuerpos monoclonales (Kohler y Milstein, 1975) ha permitido estudios en inmunologa y su aplicacin a nivel teraputico. EN QUE CONSISTE UN LABORATORIO DE CULTIVOS CELULARES Un laboratorio de cultivo celular debe contar con una infraestructura bsica en la cual se disponga de reas independientes para llevar a cabo la preparacin y esterilizacin de medios y reactivos, un espacio independiente para el proceso de lavado y preparacin de material y un rea propiamente destinada al trabajo con cultivos celulares.

Dentro de la infraestructura fsica bsica se debe contar con sistemas de refrigeracin y congelacin, incubadoras, centrfugas, balanzas, microscopios y cabinas de flujo laminar. Adicionalmente, se debe disponer de un buen suplemento de material plstico y de vidrio y con sistemas de esterilizacin apropiados para los diferentes tipos de reactivos y material utilizados. Desde el punto de vista de los sistemas de esterilizacin se pueden citar los siguientes: Calor Hmedo: Mediante el empleo de autoclaves los cuales proporcionan una temperatura de o 121 C y una presin de 15 lb. Utilizados para la esterilizacin de soluciones cuyos componentes no se degradan por ste mtodo, material plstico y de vidrio y equipos de filtracin. Calor Seco: lo constituye el uso de hornos a temperatura de 200 C por espacio de 3 horas. Es empleado para la esterilizacin de material de vidrio particularmente.
o

Filtracin: A travs del uso de equipos con membrana de nitrocelulosa o acetato de celulosa con poro de 0.22 0.1 u de dimetro, mediante la aplicacin de presin positiva o negativa. Por ste sistema se esterilizan la mayor parte de los medios de cultivo, suero, solucin de antibitico-antimictico y suplementos. CLASES DE CULTIVOS CELULARES Los cultivos celulares son el producto de la coleccin de clulas animales de diferentes rganos, colocadas en condiciones especiales propicias para su sobrevivencia y multiplicacin, manteniendo para esto todas sus funciones metablicas de una manera semejante a las que tena en el husped. Los cultivos de clulas animales se han clasificado de acuerdo a su capacidad de anclaje (adherencia), y as han sido aisladas recientemente de un rgano determinado o si provienen de clulas que han sufrido modificacin. De acuerdo a su capacidad de adherencia o no a una superficie determinada pueden crecer formando monocapa o en suspensin respectivamente, lo que est muy asociado con el tipo de clula de la cual derivan: por lo general las clulas provenientes de rganos, crecen en monocapa; igualmente existen clulas que pueden crecer indistintamente tanto en monocapa como en suspensin, ejemplo son las clulas HeLa que son clulas transformadas derivadas de cultivos en monocapa. Cuando el cultivo proviene de clulas que han sido disgregadas de un tejido original tomado de un rgano de un animal recin sacrificado, reciben el nombre de Cultivo Primario; cuando ste cultivo primario es sometido a procesos de transformacin que le confiere capacidad ilimitada de multiplicacion, reciben el nombre de Lneas Celulares. CULTIVOS EN MONOCAPA Las clulas exhiben una variedad de "comportamientos sociales", lo que hace que su multiplicacin sea inhibida cuando establecen contacto entre s, permitiendo la formacin de una monocapa que cubrir la correspondiente superficie de crecimiento. Las clulas provenientes de cultivos primarios son las que mejor crecen en sta condicin, dada su estabilidad gentica y su naturaleza diploide normal. Los recipientes para el cultivo de clulas estacionarias son cajas de Petri, frascos para el cultivo de tejido (T-25, T-75), entre otros, que pueden ser de material de plstico o de vidrio previamente tratado y su desprendimiento para transferirlas a superficies mayores se realizan con agentes proteolticos como la tripsina. Cuando se requiere la produccin de ste tipo de cultivo en una escala mayor, se debe incrementar el rea de la superficie de crecimiento, siendo ideal utilizar botellas en rotacin (roller). Mediante ste sistema, las clulas pueden crecer en toda la parte interna de la pared de la botella, usando un aparato que permite la rotacin del roller a una baja velocidad; de esta forma un roller de 1 litro que requiere 100 ml de medio, confiere una superficie de crecimiento 2 de 500 cm . Otra forma de aumentar el nmero de clulas adherentes por volumen de frasco, es utilizando microperlas (microportadores), que son compuestos en base a dextranos o a vidrio, las que flotan cuando se emplean en cultivos con agitacin, lo que le da una mayor disponibilidad de superficie para el crecimiento celular: con 100 ml de medio de cultivo, se logra una superficie 2 de 0.24 m . La relacin superficie-volumen para los rollers es de 0.2-0.7, mientras que para los microportadores es de 122-153. Existen otras consideraciones que influyen en la utilizacin de sistemas en monocapa a pesar de las ventajas que tienen los cultivos en suspensin, entre las que estn la flexibilidad para desarrollar cultivos primarios o de lneas heteroplodes, la facilidad para la remocin del medio

gastado antes de infectar las clulas y la alta concentracin que se obtiene del producto, como en el caso del virus de la Fiebre Aftosa. CULTIVOS EN SUSPENSIN Las Lneas celulares que provienen de cultivos primarios con requerimiento de anclaje a superficies, tienen la propiedad de crecer de manera estacionaria o en suspensin despus de un perodo de adaptacin. Existe evidencia experimental que los sistemas en suspensin tambin requieren de matrices que son macromolculas, que sirven de protectores a la superficie celular; stas macromolculas se encuentran en el suero, el cual contribuye igualmente con el medio de cultivo, proporcionando un sistema balanceado de nutrientes. Dentro de stas matrices est el Methocel, esencial para el crecimiento de cultivos en suspensin. Aunque el cultivo estacionario es ideal cuando se busca la elaboracin de productos extracelulares, el cultivo en suspensin es deseable cuando los productos son intracelulares o cuando se presentan problemas con la capacidad de anclaje de un determinado tipo de clula. El proceso de cultivo continuo ofrece factores econmicos decisivos (utilizacin de mejores equipos, reducida manipulacin) cuando se trata de producir cultivos a una mayor escala de operacin. CULTIVOS PRIMARIOS Los cultivos primarios tienen caractersticas especiales que los diferencian de las lneas celulares: conservan la morfologa de las clulas del rgano del que fueron aisladas, sus cromosomas tienen un nmero diploide (2n), su crecimiento in vitro es limitado y hay inhibicin por contacto. El estar ms cercanas a las clulas que las originaron, se ve reflejado en una mejor actividad y funcionalidad similar a su ambiente natural, por lo que en aislamientos primarios de cepas virales stas tienen mayor sensibilidad que una Lnea Celular ya establecida. Igualmente para la produccin de vacunas los cultivos primarios son recomendables por tener una baja probabilidad de que se transformen en malignos. Dentro de las desventajas est la de una mayor probabilidad de presentar virus adventicios o latentes, lo que implica el desarrollo de la adecuada tecnologa para el control de calidad.