Asesoras y Proyectos Agrcolas

ECOPLANT SERGIO ANTONIO TOLEDO VIVAS INGENIERO AGRONOMO PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATOLICA DE VALPARAISO E-MAIL: asesorias@ecoplant.cl WWW.ECOPLANT.CL ORLANDO JORQUERA CORTES BIOQUIMICO UNIVERSIDAD DE CHILE

CORAZON ACUOSO EN MANZANOS

INTRODUCCION El corazn acuoso es un serio desorden fisiolgico que ha sido reportado en todas las zonas de cultivo del manzano. Es un desorden interno que generalmente no altera la apariencia externa de la fruta, hasta que ocurre un quiebre severo del tejido. Comnmente esta prdida es evaluada por inspeccin visual de manzanas cortadas en dos mitades, desde una muestra al azar. El cultivo puede tener serias prdidas econmicas si se detecta corazn acuoso porque podra resultar en una baja completa de la partida de la fruta a comercializar. Por otra parte, si el desorden no se detecta y las manzanas son almacenadas puede ocurrir un pardeamiento interno y una depresin del tejido produciendo un producto invendible. An despus de 100 aos de estudios, las causas de este desorden fisiolgico (corazn acuoso) no han sido bien definidas. Las causas propuestas tienen incluida maduracin, temperatura, prcticas culturales (fertilizacin, riego, poda, etc...), calibre variedad o cultivar, nutricin mineral, alteracin morfolgica y otros factores. Este desorden usualmente esta asociado con un problema vascular en manzanas, relacionado con el sorbitol, carbohidrato de mayor traslocacin en manzanas el cual no puede ingresar a la clula; quedando en los espacios intercelulares, donde el menor potencial osmtico retiene agua.

Como consecuencia, el dao causado por este desorden aparece como un rea acuosa y traslcida. En casos severos, la medula adyacente al corazn y todo el cortex tambin es afectado. El tejido afectado tiene un elevado contenido de agua, disminuyen los niveles de azucares reductores y pectinas, aumentan productos anaerobios, hay un mayor contenido de sorbitol que en tejidos normales y en general existe un desequilibrio metablico con respecto a manzanas normales. La intencin de este escrito es reunir la ltima informacin en cuanto a causas y tcnicas de pronstico de corazn acuoso, adems de una pequea contribucin de los autores en forma crtica de lo que se conoce y lo que se podra llegar a realizar para que en un futuro prximo se incentiven los fondos privados para llevar a cabo investigacin.

PARAMETROS BIOQUIMICOS EN MANZANAS QUE PRESENTAN CORAZON ACUOSO

1.1 RELACION DEL SORBITOL EN LA GENERACION DE CORAZON ACUOSO. ( Toledo, S., Jorquera, O., (1995) ) El desorden fisiolgico llamado corazn acuoso, esta ntimamente relacionado con el cambio de potenciales dentro del fruto. Es de conocimiento generalizado, que los frutos que presentan este desorden han sufrido un desequilibrio en el transporte de un carbohidrato conocido como sorbitol, azcar de mayor traslocacin en el fruto. Es importante destacar que la mayora de los carbohidratos por no decir todos ingresan a la clula para formar parte de una serie de funciones (reserva, estructural, precursores metablicos, etc...). Cuando un fruto daado por corazn acuoso es analizado, se observa que el tejido afectado presenta una mayor concentracin de sorbitol en los espacios intercelulares, es decir, se aprecia o se sabe que el carbohidrato no ingres a la clula (o sali de ella). Este gran flujo de sorbitol que no es ingresado a la clula, es un problema que no tiene explicacin por el momento. Como supuestas causas se plantea el manejo inadecuado de la fertilizacin, poda, riego, etc. Pero el punto no es decir, que debido a una mala practica cultural, se desata este desorden, el punto esta en encontrar y estudiar la

ruta bioqumica de este carbohidrato y detectar en que momento y porqu la clula no es capaz de ingresar este gran flujo de azcar, quedando el sorbitol en los espacios intercelulares , con lo que el potencial hdrico baja bruscamente en esa zona, lo cual desata un flujo de agua desde la zona de menor potencial a la de mayor, es decir, en otras palabras el agua sale de la clula quedando en los espacios intercelulares con lo cual aparece el tpico signo de corazn acuoso, observndose una zona acuosa y traslcida en torno al corazn de la manzana ( haces conductores o red vascular del fruto ). Son muchos los que intentan encontrar alguna tcnica que sea capaz de pronosticar o determinar, la forma de detectar o sealar el grado de dao causado por este desorden. Es lgico pensar, luego de lo expuesto con anterioridad en este tem, que una de las formas de pronosticar corazn acuoso, sera midiendo las concentraciones de sorbitol en el fruto. Es as como encontramos, que en algunas tesis y publicaciones nacionales, una de las formas recurrentes para determinar corazn acuoso consiste en tratar de encontrar alguna relacin entre los niveles endgenos de sorbitol en el fruto y el momento de aparicin del desorden o el grado de dao relacionado con las concentraciones de este carbohidrato. En forma general se concluye que los niveles endgenos de sorbitol en el tiempo, no pueden relacionarse en forma directa con la aparicin de corazn acuoso, ya que las manzanas sanas, presentan niveles similares (en cuanto a concentracin de sorbitol ) comparadas con manzanas afectadas. Es lgico pensar esto o anticiparse a estos resultados, ya que si pensamos que el desencadenante de este desorden no son las concentraciones de sorbitol dentro del fruto. Si no que una falla en el mecanismo de difusin de este azcar por lo cual no puede ingresar a la clula y es este el punto critico del problema, por lo tanto si los estudios o experiencias realizadas, se basan en los niveles de sorbitol dentro del fruto no se podr nunca determinar el momento o el nivel de dao producido, a menos que se lograra detectar en que momento, el sorbitol comienza a no ingresar a la clula o se midiera en el tiempo la concentracin de sorbitol a nivel intercelular, lo que prcticamente es muy difcil. Hay que tener claro que los niveles endgenos de sorbitol, en manzanas (enteras) sanas y afectadas es el mismo, lo que cambia es la zona donde se concentra el azcar.

1.2.- BIOSINTESIS DEL ETILENO Y ACUMULACION DE POLIAMINAS. Biosntesis de etileno y contenido de poliaminas, fueron determinadas en manzanas normales y afectadas. La fruta y contiene altas 1- carboxilico). La actividad de ACC sintetasa y la enzima formadora de etileno ( EFE ) en fruta afectada por corazn acuoso, fue ms alta que en la fruta normal. La actividad de la EFE en pulpa severamente afectada fue inhibida, resultando una acumulacin de ACC y una baja produccin de etileno. AdoMet frutos normales y afectados. Se ha encontrado que las manzanas afectadas tienen una alta concentracin interna del etileno. El alto contenido de etileno en fruta afectada por corazn acuoso puede ser un resultado del estrs causado por una alta concentracin de sorbitol. El estrs osmtico causado por una alta concentracin de sorbitol tiene relacin con los niveles de poliaminas. La biosntesis de etileno y poliaminas, usan el mismo sustrato, AdoMet y producen el mismo producto, metiltioadenosina. En general el etileno tiene mltiples efectos asociados con senescencia, inicio de madurez, induce perdida de clorofila en hojas y promueve senescencia. Por el contrario las poliaminas son inhibidores de la senescencia, ellas inhiben el aumento de RNAasas, proteasas, peroxidasas; reduce el periodo de senescencia de protoplastos, induce sntesis de DNA y actividad mitotica, promueve la sntesis de macromolculas, estabiliza la membrana de los tilacoides, mantiene alto el contenido de las protenas y previene la perdida de clorofila en hojas. Como el etileno y las poliaminas tienen efectos opuestos, se ha investigado la relacin de estos dos tipos de compuestos, en (S- Adenosil metionina), se mantuvo en estado estacionario, aun cuando el etileno y las poliaminas, fueron activamente sintetizadas en cantidades que presenta corazn acuoso, produce ms etileno de putrescina, espermidina, ACC (cido 1-

aminociclopropano - 1 carboxilico) y MACC ( cido 1- (malonilamino) ciclopropano

el tejido de manzanas con corazn acuoso para incrementar, el entendimiento de este importante desorden en manzanos. Despus de 12 semanas de almacenaje de la fruta, la actividad de la EFE en pulpa severamente afectada por corazn acuoso fue drsticamente inhibida resultando una acumulacin de ACC y una baja produccin de etileno. El sistema de conversin de ACC a etileno puede ser daado en pulpa afectada con corazn acuoso en este estado. Tambin la concentracin interna de oxigeno en tejido afectado es bajo. La formacin de etileno desde ACC requiere oxigeno. Si l oxigeno es limitante la conversin de ACC a etileno puede ser inhibida y acumular ACC y bajar la produccin de etileno. La actividad de la EFE no fue inhibida tanto en epidermis o en pulpa de manzanas con un dao no severo. CONTENIDO DE POLIAMINAS: En la epidermis de manzanas afectadas con corazn acuoso, PUT (putrescina) y SPD (espermidina) se incremento, mientras SPM (espermina) decreci con el tiempo de almacenaje. Pero todos permanecieron mas altos que en manzanas normales. Similares resultados fueron observados en la pulpa. Los niveles de poliaminas fueron generalmente ms bajos en la pulpa que en el tejido epidermal. La pulpa afectada contiene niveles ms altos de poliaminas, que pulpa no afectada de manzanas con dao suave, pero ambas fueron mas altas que en pulpa de fruta normal. La gran acumulacin de poliaminas en tejido con corazn acuoso es inexplicable, pero puede ser esperado por el alto contenido extracelular de sorbitol en manzanas con corazn acuoso. Autores han mostrado que este nivel por sobre lo normal (extracelular) es causado por un estrs osmtico, los cuales vuelven a incrementar los niveles de PUT y SPD (intracelular). CONTENIDO DE AdoMet ( S- adenosilmetionina ) Fruta con corazn acuoso, presenta un mayor contenido de ACC y poliaminas que los frutos normales. Sin embargo, el nivel de AdoMet en epidermis o en la pulpa fue el mismo para ambos tipos de frutos. Estos datos indican que el paso entre metionina y AdoMet no

es una etapa limitante dentro del ciclo. No hay cambio en el nivel de AdoMet, este se observo uniforme mientras que el etileno y las poliaminas fueron activamente sintetizados. AdoMet es el sustrato para ambas sntesis (ACC y poliaminas), pero esta condicin aparentemente no altera el nivel de este sustrato. Similares resultados fueron reportados en hojas de manzanos sometidos a estrs hdrico. La produccin de etileno en manzanas sanas desde mediados de octubre a febrero, indico que los frutos estaban en estado de preclimacterio al iniciar el ensayo. Con el aumento del tiempo de almacenaje (0C), las manzanas mostraron un aumento y luego una cada de etileno, asociado con el climacterio. El etileno en la fruta no afectada alcanzo su peack alrededor de las 9 semanas de cosechadas. En contraste en las manzanas que presentaban corazn acuoso, la produccin de etileno tuvo su peack alrededor de las 6 semanas postcosecha. La produccin total de etileno fue ligeramente ms alta en frutas afectadas, que en frutos normales, pero la tasa de este incremento fue similar para los dos grupos de frutas. El tejido epidermal produjo ms etileno en ambos tipos de manzana (daadas y con dao inicial). En forma anloga, el tejido epidermal produjo ms etileno que la pulpa de manzanas normales. La tasa de incremento en la produccin de etileno y el tiempo peack, en cada tejido analizado (epidermis, pulpa) fue el mismo que en las manzanas enteras. El peack de produccin de etileno en cada tejido afectado ocurri 6 semanas post-cosecha, mientras que en manzanas normales, el peack fue 9 semanas despus de cosechadas. Para cada tejido en manzanas con corazn acuoso se produjo ms etileno total, que el correspondiente tejido en fruta normal. Despus de 9 semanas de almacenaje, la produccin de etileno declin rpidamente, especialmente en fruta severamente daada. El anterior peack de etileno indic que las manzanas, que presentan corazn acuoso estn ms aventajadas fisiolgicamenteque las manzanas normales. El contenido de ACC, ACC sintetasa y la actividad de la EFE de todos los tejidos analizados fueron muy bajas en la cosecha, limitando la produccin de etileno. Ha sido reportado que el tejido de fruta en preclimacterio le falta la capacidad no solo para

sintetizar ACC sino tambin para la conversin de ACC a etileno. La concentracin de MACC se incremento en forma paralela con la alta tasa de sntesis de ACC. La epidermis contena ms cantidad de ACC y MACC que la pulpa. El contenido de MACC en epidermis o pulpa fue considerablemente ms alto que ACC libre. El nivel de MACC en todos los tejidos se increment durante el almacenaje y no mostr el modelo exhibido por los otros componentes examinados. En general, la actividad seguida por la EFE presenta el mismo modelo que la ACC sintetasa. La reduccin del nivel de ACC en tejido normal durante largos periodos de almacenaje (12 a 15 semanas), puede ser esperado por la rpida y estable conversin de ACC a etileno, como ha sido reportado por otros autores. El tejido que presenta corazn acuoso contiene ms ACC y MACC que los tejidos normales. La actividad de la ACC sintetasa y la EFE fue tambin ms alta en manzanas afectadas que en manzanas normales. Colectivamente los datos presentados aqu indican que la fruta afectada por corazn acuoso contiene altas concentraciones de PUT, SPD, ACC, MACC y producen ms etileno que la fruta normal. La actividad de la ACC sintetasa en fruta afectada fue tambin ms alta que en la fruta normal, esperado probablemente por el estrs osmtico inducido por el alto contenido de sorbitol en fruta que presenta corazn acuoso. La EFE en pulpa severamente afectada por corazn acuoso fue inhibida, posiblemente debido a los bajos niveles internos de oxigeno, que puede resultar en la acumulacin de ACC y baja produccin de etileno. No se observaron cambios en el nivel de AdoMet entre fruta afectada y la normal, aunque el etileno y las poliaminas fueron activamente sintetizadas. 1.4.- VARIACION EN LA COMPOSICION DE LIPIDOS. Los glicolpidos, fosfolpidos y esteroles fueron determinados en manzanas normales y manzanas afectadas con corazn acuoso. Frutos con corazn acuoso contenan altas Las razones de cidos grasos cantidades de glicolpidos, fosfolpidos y esteroles.

insaturados/saturados de ( 18:3 / 18:1 + 18:2 ) fueron ms bajas en tejidos afectados con corazn acuoso que en tejidos normales. La razn de esteroles libres y fosfolpidos fue

alta, mientras que la razn de fosfatidilcolina v/s fosfatidiletanolamina fue baja en manzanas afectadas. Los lpidos de membrana fueron alterados en fruta con corazn acuoso. Segn los datos mostrados en el ensayo anterior, la diferencia entre los valores de fosfolpidos, glicolpidos y esteroles son muy pequeas. Similares resultados se encontraron entre las razones de los cidos grasos insaturados/saturados as como la razn de fosfatidilcolina/fosfatidiletanolamina. Lo ms probable, es que haya problemas a nivel de protenas de membrana, ya sea en transportadores de sorbitol que no tengan una regulacin metablica interna o que haya una modificacin en la concentracin de estos transportadores. Tambin puede ocurrir que el nivel de sorbitol deshidrogenasa (SDH) en el espacio extracelular no tenga el nivel msico suficiente para catalizar la transformacin de sorbitol a fructosa, implicando la acumulacin de sorbitol en ste y por consiguiente la salida de agua desde la clula hacia el espacio extracelular y la generacin de corazn acuoso. ( Toledo, S., Jorquera, O., (1995) ).

TECNICAS

PARAMETROS

FISICOS

BIOQUIMICOS

PARA

LA

DETERMINACION DE CORAZON ACUOSO EN MANZANAS. 1.- DETERMINACION VISUAL. Esta tcnica consiste en evaluar el dao de la fruta mediante una inspeccin visual, realizando un corte longitudinal al fruto y observando en el centro el tejido adyacente al ovario. Esta tcnica presenta las siguientes caractersticas: a) Tcnica que solo indica si el fruto presenta o no presenta dao. b) No predice c) Es una tcnica destructiva d) Es econmica e) De fcil realizacin e interpretacin f) No establece el nivel de dao en forma estandarizada

2.- RELACION DE ABSORCION DE RAYOS X CON LA DENSIDAD Y CONTENIDO DE AGUA EN MANZANAS. Consiste en usar tomografa computarizada de rayos x para visualizar una regin interna del fruto. Se mide un coeficiente de absorcin de rayos x, este vara de acuerdo al contenido volumtrico de agua en la seccin escaneada del fruto. Caractersticas: a) No es destructivo b) Mide las caractersticas de calidad interna de la fruta asociados con la distribucin del contenido volumtrico del agua c) Es de elevadsimo costo d) Requiere personal altamente calificado e) No predice

3.-

TRANSMICION DE LUZ EN LA DETECCION DE CORAZON ACUOSO

(MAQUINA DE VISION). Consiste en hacer pasar luz de cierta longitud de onda a travs del tejido. El tejido normal debido a la presencia de espacios areos causa una intensa dispersin de la luz. La luz dispersada es reducida en la fruta que presenta corazn acuoso, transmitiendo mayor energa. Esta luz transmitida es detectada mediante un sistema de cmaras acopladas a un computador. Caractersticas: a) No es destructivo b) Alto costo c) Puede diferenciar distintas etapas de corazn acuoso d) Pierde eficacia a medida que avanza el tiempo de post-cosecha e) Requiere personal especializado

f) Este mtodo logra separar correctamente un buen porcentaje de la fruta que presenta corazn acuoso g) No predice

4.- TEST DE FLOTACION (DENSIDAD). Las manzanas con corazn acuoso presentan una alta densidad especfica debido al desplazamiento de aire de los espacios intercelulares. El test de flotacin consiste en hacer flotar manzanas en una solucin de densidad conocida logrando separar frutos que presentan corazn acuoso de los que no presentan, para esto se han descrito volmenes o densidades desde un patrn de fruta conocido. Caractersticas: a) Este mtodo logra separar correctamente un buen porcentaje de la fruta que presenta corazn acuoso. b) No logra discernir el grado de severidad del dao c) Presenta como limitacin la pequea diferencia entre densidades de fruta daada comparada con la sana d) Bajo costo e) No predice 5.- DETERMINACION DE ETILENO. Se puede determinar por cromatografa gaseosa con columna de almina y acoplado con detector de ionizacin de llama.

Caractersticas: a) De moderado costo b) Necesita de personal calificado c) Es destructivo ( necesita pequeas cantidades de tejido ) d) Nos permite anticipar el posible desorden

6.- DETERMINACION DE POLIAMINAS (HPLC, COLORIMETRICA). Esta tcnica utiliza cromatografa liquida de alta presin (HPLC). Otra forma es mediante una reaccin bioqumica entre las poliaminas y una enzima especifica, dando un producto coloreado. Caractersticas: a) Costo moderado b) Destructiva c) Personal especializado d) Permite anticipar el posible dao COMENTARIOS FINALES: 1.- An falta mucho tiempo y dedicacin para establecer las verdaderas causas de este desorden 2.- Existen evidencias de tcnicas y parmetros bioqumicos que podran llegar a estimar y predecir este desorden 3.- Las empresas y universidades deben adoptar nuevas tecnologas que permitan llegar con un producto de alta calidad a los mercados ms exigentes

4.- Existen alternativas de bajo costo o moderado costo factibles de incorporar o adaptar a los medios nacionales. BIBLIOGRAFIA Shiow, y. , Wang and Miklos Faust, ( 1992 ), Variation in lipid composition of apples in relation to watercore , J. Amer. Soc. Hort. Sci, 117 ( 5 ), 829-833. Shiow, y. , Wang and Miklos Faust, ( 1992 ), Ethylene biosynthesis and polyamine accumulation in apples with watercore , J. Amer. Soc. Hort. Sci, 117 ( 1 ), 133-138. Throop, J.A., Aneshansley, D.J., Upchurch, B.L., ( 1994 ), Camera system effects on detecting watercore in Red delicious apples , ASAE, 37 ( 3 ), 873-877. Tollner, E.W., Hung, Y.C., Upchurch, B.L., Prussia, S.E., ( 1992 ), Relation x-ray absorption to density and water content in apples , ASAE, 35 ( 6 ), 1921-1928. Upchurch; B.L., Throop, J.A., ( 1994 ), Effects of storage duration on detecting watercore in apples using machine vision , ASAE, 37 ( 2 ), 483-486. Conn,E.E., and Stumpf , P.K., outlines of biochemistry 5/E , John Wiley & Sons, 5 Ed., ( 1987 ), 693 pg.

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