Las pruebas de control de calidad se realizan para determinar las especificaciones mnimas que deben tener los sueros hemoclasificadores ABO y Rh as como para la antiglobulina humana ( suero de Coombs ).
Quines establecen estos criterios? Existen normas que establecen cuales son las especificaciones que deben cumplirse en estos reactivos. * NOM-003-SSA2-93 * NOM-017-SSA1-93 (ABO) * NOM-018-SSA1-93 (Rh) * NOM-019-SSA1-93 (Suero de Coombs)
Reactivos a evaluar:
* Anti-A * Anti-B * Anti-AB * Anti-D * Antiglobulina Humana Lectinas ? - Potenciadores: Albmina ? LISS ? Bromelina ?
Cuales son los criterios para valorar y aceptar estos reactivos? Se revisarn los siguientes aspectos: Fisicoqumicos Tcnicos
Aspectos Fisicoqumicos: * Nombre del producto * Lote y fecha de caducidad * Temperatura de almacenaje * Volumen * pH * Olor y color del suero * Color de la etiqueta, rosca y bulbo * Instructivo
Aspectos Tcnicos:
Avidez: - Es la fuerza global de la interaccin entre dos molculas. - Es el tiempo en que se inicia la aglutinacin. - La avidez depende tanto de la afinidad como de la valencia de las interacciones.
IgM tiene 10 sitios de unin idnticos que podran unirse a 10 determinantes antignicos en una superficie celular dando lugar a una interaccin polivalente con una mayor avidez.
Grupo sanguneo
A1 A2 A1B A2B| B A1B A2B A1 A2 B R1r R2r D dbil
Anti-B
ANTI-AB
Anti-D
Especificidad: Capacidad de un Ac para reconocer un Ag distinguiendo pequeas diferencias en la estructura qumica. Cada antisuero se hace reaccionar con las diferentes clulas y no debe existir aglutinacin inespecfica.
ESPECIFICIDAD
REATIV O Anti-A Anti-B Anti-AB Anti-D Control Rh Coombs Lectina A1 Lectina H POS ? NEG ? NEG ? NEG POS CEL. A1 POS NEG POS CEL. A2 POS NEG POS CEL. B NEG POS POS CEL. O NEG NEG NEG POS NEG NEG NEG POS NEG R1r rr E+ E-
Antgenos Eritrocitarios
Grupo A1
Ag A Ag A Tipo 2 Tipo 3 Ag H Ag A Tipo 2 Ag A Tipo 4 Ag B Ag H
Grupo A2
Grupo B
Ag H Ag A Ag H Ag H Tipo 3 Ag A Tipo 2 Ag B
Ag A Tipo 4 Ag H
Ag B
Ag A
Grupo O
Grupo A1B
Tipo 2
Grupo A2B
TTULO: La concentracin de un Ac especfico en el suero para un Ag en particular se calcula determinando cuntas diluciones seriadas del suero se pueden realizar antes de que se dejen de observar uniones. Mide la capacidad del antisuero para reaccionar con sus respectivas clulas (Ag).
TTULOS MNIMOS QUE DEBEN TENER LOS DIFERNTES ANTISUEROS Antisuero Anti-A Grupo sanguneo
A1 A2 A1B A2B B A1B A2B A1 A2 B A1 A1B A2 E+ R1R2
Ttulo mnimo
256 128 128 8 256 64 128 256 64 256 64 64 8 32 64
Anti-B
Potencia: Mide la fuerza del antisuero con la que es capaz de reaccionar con los Ags respectivos. A partir del resultado de las aglutinaciones en la titulacin, se anota lectura por grado de aglutinacin de 0 a 4+, a cada uno de estos se les asigna un valor numrico (computo).
Puntos
12
10 Gran cantidad de conglomerados pequeos con nmero moderado de eritrocitos libres Conglomerados definidos pero finos (cmulos de 20 eritrocitos o menos) Eritrocitos dispersos que pueden contener ocasionalmente algn conglomerado pequeo Los eritrocitos se mueven libremente. No hay conglomerados visibles 08 05 02 0
LA CALIDAD EMPIEZA DESDE QUE AMANECE Y YO AUN SE EN QUE MOMENTO SE TERMINA USTEDES SI?
* Avidez:
Se determina usando la tcnica en placa y a temperatura ambiente. La aglutinacin se debe iniciar en el tiempo mximo que se especifica para cada subgrupo, contando a partir del momento en que se pone en contacto suero y eritrocitos. Las pruebas de avidez se realizarn de rutina a los antisueros en uso diariamente antes de empezar a trabajar y a una muestra de antisuero de cada nuevo lote.
Mezclar en un rea de 25mm diam. 1 gota eritrocitos + 1 gota de antisuero Rotar la placa de lado a lado
Nota: Tomar el tiempo con un cronometro desde el momento de la mezcla hasta el momento de inicio de la aglutinacin.
El producto debe estar libre de aglutininas diferentes a las especificadas en la etiqueta y libre de partculas, de efectos o sustancias indeseables. Se debe realizar diariamente a los antisueros de rutina, antes de empezar a trabajar y a una muestra de cada nuevo lote.
Especificidad
Eritrocitos 2-5%
Reactivo
Anti-A Anti-B Anti-AB Anti-D Control Rh Suero de Coombs
A1
A2
R1r
rr
E+
E-
+ +
+ +
+ +
+ + -
- Colocar igual volumen de la suspensin de eritrocitos y del reactivo. - Centrifugar 30 seg a 3400 rpm. - Leer. Los reactivos debern contener nicamente las aglutininas especificadas en la etiqueta. - El Rh se llevar hasta Coombs.
Ttulo (Potencia): La titulacin se har a una muestra de antisuero de cada nuevo lote. La titulacin se realiza siempre por duplicado y los resultados debern ser reproducibles. Si existen diferencias en las lecturas de 2 tubos con la misma dilucin, deber repetirse la prueba.
Ttulacin
( ABO Y Rh )
1:1
1:2
1:4
1:8
1:16
1:32
1:64
1:128
Mezclar y
1:256 1:512
Ttulo ( Potencia ) Resuspender suavemente las clulas y bajo iluminacin apropiada, leer macroscpicamente y sin demora ( los negativos se llevaran hasta Coombs ) El ttulo es el recproco de la mayor dilucin del suero que da una lectura de 1+. Ej. Si la dilucin es 1:512 el ttulo es de 512.
DILUCIONES
Ej. 1 Eritrocitos al 5% 5 ml E + 95 ml SS 5 ml E --------- 95 ml SS X --------- 3 ml SS 3x5 95 X = 0.15 ml E Ej. 2 Eritrocitos al 10 % 10 ml E + 90 ml SS 10 ml E --------- 90 ml SS X --------- 2 ml SS 2 x 10 90 X = 0.22 ml E
DILUCIONES
Ej. 3 Eritrocitos al 40 % 40 ml E + 60 ml SS 40 ml E --------- 60 ml SS X --------- 3 ml SS 3 x 40 60 X = 2.0 ml E Ej. 4 Eritrocitos al 0.8 % 0.8 ml E + 99.2 ml SS 0.8 ml E --------- 99.2 ml SS X --------- 3 ml SS 3 x 0.8 99.2 X = 0.02 ml E