ESTUDOS PRELIMINARES SOBRE MODELAGEM E SIMULAO DE

PROCESSOS FERMENTATIVOS NO ESTADO SLIDO

Orientador: Prof. Luiz Augusto da Cruz Meleiro
Aluno: Vitor Renan da Silva



1. INTRODUO
Fermentao no Estado Slido (FES) pode-se definir como a fermentao
tendo o substrato composto por uma Matriz Slida com teor muito reduzido de gua
livre. A gua contida no substrato pode ser a da prpria matriz slida ou ser
adicionada por meio de suporte. [1,2,3]
O meio ao qual ocorrer a fermentao deve:
Ser constitudo por partculas com grande rea de contato por unidade de
volume (ideal entre 10
3
e 10
6
m
2
L
-1
) proporcionando ao microorganismo
um adequado crescimento microbial na interface slido-gs;
Conter ou ser capaz de absorver nutrientes necessrios aos
microorganismos (Carboidratos, Nitrognio e Sais Minerais). [1]
A aplicao da FES abrange a bioremediao e a biodegradao de
compostos txicos: pesticidas e herbicidas; obteno de produtos nobres a partir de
resduos agrcolas como: hormnios vegetais, cidos orgnicos, antibiticos, etc.
[1,2,3,4]


2. ASPECTOS DA FES
A FES apresenta, em relao a outros mtodos fermentativos, grandes
vantagens como o grande rendimento produtivo, pouca produo de resduos e
exige equipamentos simples de fermentao. Para um bom aproveitamento, deve-se
levar em conta vrios fatores, dentre os quais: a seleo criteriosa do
microorganismo e do substrato; controle dos parmetros da fermentao e a
purificao do produto (bem como o reaproveitamento dos microorganismos se
possvel). [3]
A escolha dos microorganismos fermentadores crucial, pois a partir do
metabolismo destes que se obtm o produto. Para a FES os fungos filamentosos
so os mais aplicados, pois estes apresentam um crescimento por hifas permitindo
uma maior penetrao e aderncia ao substrato; necessitam de pouca gua livre e
suportam altas presses osmticas e as enzimas destes so pouco diludas (devido
ao baixo teor de gua da matriz slida) tendo a um maior rendimento. [1]
Dentre os parmetros, deve-se levar em conta fatores fsico-qumicos e
bioqumicos, como: pH; temperatura de incubao; transferncia de massa (O
2
, CO
2
,
etc.) e de energia (calor na fermentao); suplementao de nutrientes ao substrato
(N, P, etc.); agitao e aerao; umidade relativa do sistema; e ouros. Devido a
grande heterogeneidade do sistema torna-se difcil a sua avaliao, pois se tm as
formaes de muitos gradientes ao longo de todo substrato. [1,2,3]

2.1 TEMPERATURA
Quaisquer processos biolgicos so dependentes da temperatura, j que este
fator pode afetar na: desnaturao das protenas, ativao e/ou inibio das
enzimas, promoo ou inibio de subprodutos do metabolismo celular, vida til dos
microorganismos, rendimento da fermentao, etc. [2]

2.2 pH
A influncia deste fundamental uma vez que, dependendo da acidez ou
basicidade do meio, pode-se ter a ativao ou desativao das enzimas usadas na
fermentao, bem como afetando o metabolismo dos microorganismos. O controle
deste parmetro muito complicado devido heterogeneidade do sistema e a
consistncias do material. Para Amenizar este efeito, faz-se um substrato com
capacidade de tamponamento ou adicionam-se solues-tampo durante a etapa de
umidificao do substrato. [2], [6]

2.3 GUA ATIVA
Este parmetro fornece a quantidade de gua livre disponvel para o
metabolismo dos microorganismos. definida como a razo entre a presso de
equilbrio de vapor do substrato em relao gua pura, mesma temperatura.
Cada microorganismo tem um teor adequado de a
w
: leveduras ficam na faixa de
80% e bactrias ficam em torno de 90%. Para fungos, este valor na mdia de 70%,
mas para fungos filamentosos, como o Gibberella fujikuroi, os processos esto
sendo levados a at 98% e 99,8% (nesta taxa, tem-se um favorecimento da
esporulao) mas para taxas menores, o que se favorece o crescimento micelial
ou germinao dos esporos.[6]
A gua necessria para a execuo do metabolismo, pois o meio
dispersor intracelular e na respirao as clulas secretam lquidos. A partir da gua
livre pode controlar a produo e a excreo celular. Logo, para uma efetiva
fermentao, deve-se ter um teor de gua adequado.[3]

2.4 TEOR de C e N no SUBSTRATO
Fontes fundamentais para o desenvolvimento microbiolgico, os compostos
de Carbono representam essencialmente a fonte de energia os microorganismos e o
Nitrognio composto bsico para as enzimas e funes vitais celulares (DNA,
RNA, ATP, etc.).[2]
Para um grande rendimento na fermentao, deve-se conhecer as
necessidades dos microorganismos, que tipo de compostos de Carbono (desde
monossacardeos como a glicose, maltose; at a polissacardeos) e de Nitrognio
(desde nitrogenados simples como a uria, amnia; at compostos organonitrados
complexos com ou sem impurezas (S, P, etc.)) estes podem extrair os nutrientes
necessrios para o seu metabolismo. [2]

2.5 AGITAO e AERAO
Para a fermentao, da maior importncia o fluxo e a distribuio de O
2
dentro da matriz slida e o refluxo de CO
2
(relaciona-se isso a transferncia de
massa). A necessidade de O
2
para os microorganismos para o metabolismo
celular (respirao) e para a produo de substncia essncias ao microorganismo
(enzimas, etc.). [2,5]
Devido heterogeneidade do substrato, pode-se formar gradientes de o2 ao
longo de todo o deste, dificultando a fermentao; a agitao pode amenizar estes
gradientes, mas pode interferir a vida til dos microorganismos, logo este parmetro
deve ser bem avaliado ao longo do processo e combinado ao pr-tratamento do
substrato (nesta fase, busca-se a maior homogeneizao e capilaridade possvel por
meio de triturao, moagem, prensagem, processos hidroliticos, etc.). [1,2]

2.6 ESTIMATIVA da BIOMASSA
o que determina o crescimento microbiolgico ao longo do tempo de
fermentao. Devido heterogeneidade do sistema a sua avaliao complicada.
Para ter-se estimativas parte-se de dados relativos biomassa:
Medidas metablicas: taxa de consumo de O
2
e CO
2
;
Composio da biomassa: protenas, cidos nuclicos, glucosamina e outros;
[1,4]



3. SUBSTRATO
O substrato um meio slido que contem, ou aglutina sobre a sua matriz os
nutrientes necessrios para o metabolismo dos microorganismos. Entre muitas
fermentaes em Estado Slido, que tem no substrato como fonte de nutrientes e
no s como suporte, podese citar a produo de esporos de Aspergillus niger em
sabugo de milho umedecido com soluo de sacarose para a produo de cido
ctrico, ou bagao de cana umedecido por uma soluo de glicose para produo de
cido ltico. Como se observa, o meio j contm nutriente necessrio para o
metabolismo ou/e pode ser acrescido de outras fontes, seja fonte natural ou
sinttica. Como se mostrou acima, os materiais utilizados para substrato so
provenientes de matrias-primas, produtos ou resduos agroindustriais, por terem
pouco valor comercial, serem contaminantes do ambiente e por possurem
nutrientes teis fermentao. [2], [6]
O substrato deve ter algumas caractersticas para melhor rendimento da
fermentao: conter e/ou reter nutrientes para a fermentao; e possuir grande
acessibilidade do microorganismo a todo o meio (grande distribuio de
microorganismos), que pode ser avaliada pela porosidade, o tamanho e o formato
das partculas do substrato.
Deve-se determinar um valor timo para as partculas de substrato: ao avaliar
o tamanho, por exemplo, quanto menor a partcula maior a rea superficial (para
uma mesma massa de substrato) e com isso maior grau de
transformao;entretanto, diminui a porosidade e a circulao de ar (bem como a
dissipao de gases e calor gerados) fica comprometida, diminuindo o rendimento
da fermentao. A porosidade influencia na capacidade de absoro de gua, que
faz o transporte de enzimas e metablitos por entre o meio e os microorganismos.
Geralmente o substrato necessita de um pr-tratamento para melhor
adaptao das condies necessrias ao crescimento do microorganismo e a seu
metabolismo. Entre os processos de pr-tratamento:
Esmagamento, moagem e peneiramento: para regular a granulometria do
meio;
Complementao de nutrientes e correo de pH (adicionam-se outras fontes
de nutrientes, principalmente de N; e as solues tampo);
Embebio, para regular o teor de umidade;
Hidrlise cida ou alcalina de material celulsico, visando facilitar a atuao
enzimtica;
Esterilizao, removendo contaminantes do substrato.


4. CINTICA DA FES
Pela Cintica da fermentao descreve-se de forma analtica o
desenvolvimento do processo ao longo de todo o tempo de fermentao. Pode-se
apresentar dados do processo como: crescimento da biomassa, velocidade do
crescimento, rendimento do processo, calor gerado, etc. [1,2]
Esta abordagem, apresentada na TESE FES [1], abordagem simples
apresentada no livro do Soccol. uma abordagem mais estatstica, fazendo-se
regresses no lineares para alguns pontos experimentais para determinar
diretamente a funo de X(t)


4.1 CLCULO CINTICO para FERMENTAES

4.1.1 CRESCIMENTO DA BIOMASSA

Esta forma mais geral para clculo de qualquer processo fermentativo.

dX = f (X, S, T,...)
dt
X concentrao de Biomassa;
S concentrao de Substrato;
T Temperatura;
t Tempo.

Por Monod (1942) surge a primeira relao Biomassa-Substrato
(A)

=
MAX
S
K
S
+ S
Taxa de Crescimento Especfico;

MAX
Taxa de Crescimento Especfico
Mximo;
K
S
constante de afinidade Biomassa-
Substrato;
S concentrao de Substrato
= 1 dX
X dt
A partir disto, defini-se:
(B)


D (B) pode-se determinar inmeras fases do desenvolvimento da
Fermentao:
LAG: fase quando = 0 , com baixa reproduo microbiolgica;
Crescimento Acelerado: >0 , onde se inicia a reproduo acelerada da
biomassa;
Fase exponencial: =
MAX
;
Desacelerao do Crescimento:
MAX
> > 0 , queda na taxa de crescimento
microbiolgico;
Negativa: < 0 , a mortalidade se sobrepe ao crescimento populacional.

4.1.1.1 FASE EXPONNCIAL [1] [2]

Fase de maior importncia da Fermentao, pois nesta que se tem taxa
mxima de crescimento biolgico e, por conseqncia, a maior atividade
fermentativa. Nesta etapa = CTE. Ento integrando em (B):

X concentrao de Biomassa
Ln X = t
X
0

(C)
X
0
concentrao de Biomassa inicial;
taxa de crescimento especfico;
t tempo

Segue-se abaixo alguns parmetros para a fase exponencial:

1. Tempo de duplicao: a partir de (C) e fazendo X = 2X
0
tm-se:

(D)

2. Rendimento de Biomassa/Substrato Y x/s:
t
d
= 0,639

MAX

X Concentrao de Biomassa;
Y
x/s
= X - X
0
S
0
- S
X0 Concentrao de Biomassa inicial;
S Concentrao de Substrato;
S0 Concentrao de Substrato inicial;
(E)

3. Produtividade da Biomassa: dado por g
biomassa
h
-1

P = X (F)

4. Clculo Respiromtrico

Esta uma das medidas diretas em FES, j que os mtodos citados acima so
inaplicveis devido heterogeneidade do sistema e a impossibilidade de separao
da Biomassa do Substrato. O principio bsico resume-se :


(G)
O
2
consumido = O
2
entra - O
2
sai
Trabalhando na forma de Volume e fazendo as seguintes consideraes:
Na F
s
considera-se somente saindo O
2
, CO
2
e N
2
;
Na F
E
considera-se ar puro, logo s O
2
e N
2
;
Considerando que na fermentao no se usam microorganismos
nitrofixadores, logo [ N
2
]
E
=[ N
2
]
S


Considerando a composio do ar de :
20,9% de O
2
e 79,1% de N
2
; define-se
Vo
2E
volume de O
2
que entra;
Vo
2E
= 20,9 Fe (H)
Vn
2E
volume de N
2
que entra;
Fe vazo de ar que entra no
fermentador;
Vo
2S
volume de O
2
que sai;
Vn
2E
= 79,1 Fe (I)
Vn
2S
volume de N
2
que sai;
Vco
2S
volume de CO
2
que sai;
Fs vazo gasosa que sai do
fermentador
Vo
2S
= %O
2
Fs (J)



Vn
2S
= %N
2
Fs (K)



Vco
2S
= %CO
2
Fs (L)

Sabendo, por uma das condies iniciais, que Vn
2E
= Vn
2S
determina-se
igualando (I) = (K) :

Fs = 79,1 Fe
(100 - %O
2
- %CO
2
)
(M)


Substituindo (H) e (M) em (G) obtem-se a expresso que determina o
consumo de O
2
da Biomassa ao longo do tempo avaliado :


Vo
2C
= [ 20,9 - 79,1 Fe ] Fe
(100 - %O
2
- %CO
2
)





5. TIPOS DE REATOR [6]

A FES mais comumente empregada em regime de Batelada, onde o meio
adicionado ao reator, ocorrendo ento a inoculao do mesmo por um determinado
perodo de tempo. O produto pode ser extrado por suspenso do meio com gua
solues-tampo ou solventes (como no caso de enzimas, cidos, lcool) ou secado
e armazenado (produo de bioinseticidas ou protena microbiana).
Para a produo de cido Giberlico, comum o uso de reatores em
Batelada Alimentada, onde ocorre adio de nutrientes (sacarose) ao meio em
determinados instantes para diminuir o efeito inibidor ocasionado pelo substrato
massa microbiana. Dentre alguns reatores, pode-se citar:

Reatores de Vidro: frascos de Erlenmeyers (mais ao nvel de laboratrio), frascos
de Fernbach (utilizado at em escala industrial para a produo de esporos);
Bandejas: construdas de vrios materiais, vrios tamanhos (altura em mdia de
2 a 10 cm) , podendo ter o fundo intacto (como os frascos) ou ter o fundo com
tela perfurada, fazendo uma melhor circulao de ar (tanto superficial como e
pelo interior do meio). Apresenta uma rea superficial e uma capacidade de
alocao do meio muito maior que os frascos, e pode trabalhar com aerao
forada ou o uso de ar natural;
Tanque circular: o meio fica alocado em tanques rotatrios com grandes
dimetros (mdia de 7m) com agitadores helicoidais, dentro do tanque com
condies controladas. A batelada toda automatizada: alimentao,
esterilizao, agitao, aerao, inoculao e retirada do produto. O custo
elevado, a agitao pode trazer danos ao meio, e a manuteno do equipamento
custosa.


6. CIDO GIBERLICO


6.1 INTRODUO
O Acido Giberlico um hormnio natural em plantas, importante promotor e
regulador do crescimento vegetal. Pode ser obtido atravs de Fermentao
Submersa (Fsm) ou atualmente, pela Fermentao em estado Slido (FES) com
melhor produtividade e menor custo de produo que a Fms. O GA
3
obtido atravs
da fermentao aerbica do fungo Gibberella fujikuroi. Na FES, o substrato uilizado
para o crescimento deste fungo formado por resduos agroindustriais (EX: casca
de caf com bagao de mandioca; farelo de trigo,...).

6.2 PROPRIEDADES
Slido cristalino, pouco solvel em gua e muito solvel em metanol, etanol,
acetona. instvel em solues aquosas, e nestas solues, o seu pH em media
de 3 a 4.
Quimicamente , o GA
3
formado por um cido tetracclico
dihidroxilactnico com duas ligaes duplas CC


CH3
5. O
6.
7. CH
2
4.
3. C
2. O
1. O

Forma molecular; FONTE: ARTECA, 1995


6.3 USO
O seu uso em quantidades de ppm por muda, limitado agricultura, em
estufa de flores e pode ser usado como potencial a outros campos:



USO BENEFICIO
Uva Favorece ao aumento do tamanho dos cachos
Manga Atraso do florescimento
Cana Melhora a produtividade, mais sulco forma-se
POTENCIAL BENEFICIO
Bacillus subtilis Aumenta a produo de amilase
Saccharomyces C. Estimula a respirao
Ervilha Crescimento dos frutos


6.4 EFEITOS EM PLANTAS
O GA
3
pode induzir a Florao, mesmo em condies no indutivas. O GA
3

pode ser aplicado para substituir uma condio especfica do meio ambiente, sem a
qual a planta no traria produtividade. til para as plantas de dias longos (DL) para
induo floral (com o uso do GA
3
, reduz-se oeste tempo de induo floral).
Outra influncia o favorecimento da formao de flores masculinas.
Normalmente, em dias longos (DL) que se tem a formao de flores masculinas;
com o uso do GA
3
, favorece o crescimento das flores masculinas com menor tempo,
favorecendo a polinizao das flores femininas (que produzem os frutos).
A influncia das giberelinas (dentre ela a do GA3) sobre a germinao das
sementes evidente: influncia na quebra da dormncia e no controle da hidrlise
da das reservas nutritivas, da qual o embrio depende para o seu desenvolvimento.
A ao mais visvel do GA
3
no crescimento vegetal, especialmente no
alongamento do caule e no desenvolvimento foliar. A aplicao de GA
3
promove o
crescimento mesmo em condies adversas, como pastagens em dias de baixas
temperaturas, favorecendo assim a pastagem e reduzindo os gastos com raes,
fenos que seriam utilizados para alimentao de rebanhos nestes perodos, como no
Inverno do Sul do pas.

6.5 FORMAO DE GA
3
NO PROCESSO FERMENTATIVO
A produo fermentativa de GA3 classificada como de metablito
secundrio, ou seja, s tem-se a sua produo em condies restritas de meio
Conforme grfico da produo de GA3 por tempo, pode-se identificar as
etapas da fermentao:

No inicio, no a formao de GA3, pois inicio da fermentao, fase de
adaptao da biomassa, fase lag.de 0 a 24 horas;
Fase crescimento ocorre gerao de Nitrognio, produo de enzimas
consumo do Nitrognio limitante, fase que a biomassa atinge um crescimento
acelerado, no se forma Ga3 ainda, forma-se mximo de Nitrognio ativo
(enzimas), consome-se toda a fonte de Nitrognio Limitante (Uria, outros),
de 24 a 78 horas em mdia.







-20 0 20 40 60 80 100 120 140 160
0,0000
0,0001
0,0002
0,0003
0,0004
P
r
o
d
u

o

G
A
3
Tempo (H)
GA3



Comea-se a gerar GA3 significativamente e atinge um mximo de produo
nesta fase, aps extinguir toda a fonte de Nitrognio. A biomassa atinge seu
valor mximo na fermentao, aumenta o consumo e a liberao de gases,
de 78 a 140 horas ;
Cresce-se a produo, medida que a biomassa vai se esvaindo, assim
como a fonte de Carbono (no limitada), fase de desacelerao e decaimento
produtivo, apo 7 dias de fermentao, no representado no grfico.



7. MODELAGEM DA PRODUO DE GA3 EM FES

Os trabalhos de determinao da cintica de fermentao desta produo
foram vistos das seguintes vertentes:

Modelos Fenomenolgicos: baseiam-se na formulao de hipteses e
correlaes tericas e/ou empricas para explicar os fenmenos e o
comportamento das variveis do processo observados experimentalmente.
Faz-se aplicao das equaes de balano ou da conservao (massa,
energia e quantidade de movimento), equaes de velocidade (onde
aparecem s taxas cinticas: produo do metablito, crescimento da
biomassa, gerao de resduos, etc.) e se necessrio s equaes
termodinmicas (Presso, temperatura, concentrao) com as equaes de
equilbrio termodinmico ;
Modelo Estatstico ou logstico: faz-se uma regresso de dados
experimentais, e com os parmetros ajustados, determina-se s taxas de
produo, consumo, gerao em intervalos de tempo, utilizando uma mdia
(neste intervalo, considera-se a taxa como constante, geralmente).

7.1. MODELO ESTTISTICO
Modelo utilizado na tese [1]. Neste trabalho, foram feitas fermentaes em
dois sistemas em especial: colunas de aerao forada e reator em escala piloto.
Para cada tipo, foram feitas vrias condies de fermentao a fim de obter uma
melhor produtibilidade.
Segue-se abaixo uma descrio do sistema que foi utilizado para avaliao
dos parmetros cinticos, bem como os valores experimentais reproduzidos pela a
autora nos seus ensaios.

SUBSTRATO ANLISE DO FERMENTADO
Mistura de casca de caf com bagao de mandioca (j pr-tratados), fazendo
que a razo de C:N fique em mdia de 43:1. O ph inicial entre 5,0 e 5,4, a umidade
bem como os valores da aerao foram variados com a finalidade de obter o melhor
comportamento produtivo. Aparecem as otimizaes das colunas e as adaptaes
de sistemas para o reator, conforme descritos na tese.
Anlises de fermentado que foram feitas nos ensaios, seguindo:
UMIDADE: analise termogravimtrica 100-105 C;
AW : um medidor especifico de AW, conforme retrata a tese;
pH : uso de potencimetro;
Perda de Peso de Substrato: diferena de peso entre antes e depois;
Protena Real: precipitao da Protena real (mtodo de Stutzer) e
quantificao do Nitrognio Real (mtodo de Kjeldhal);
Aucares solveis totais: mtodo espectrofotomtrico (Somogyi-Nelson);
GA3 e Biomassa.

CINTICA DA PRODUO DE GA3 EM COLUNAS DE AERAO FORAADA
Os parmetros bsicos avaliados, para a elaborao do perfil da cintica de
fermentao, e utilizados nos clculos foram: Biomassa, substrato e produto. Outros
parmetros monitorados foram umidade, atividade de gua, pH e perda de peso
do substrato. Fatores como Temperatura e aerao j eram pr-estabelecidos.
Houve variao da umidade e de A
W
, mas nada registrado, devido a aerao. O pH
ficou entre 5,2 e 5,5,. A perda de peso seguiu o modelo de Monod. Fase de maior
crescimento microbiano, maior consumo. Os dados experimentais seguem abaixo:

Tempo (h) X S P Rs Rp
0 1,122 76,665 0,000 - - -
24 1,677 64,226 0,153 0,0167 0,518 0,006
48 5,872 38,742 0,206 0,0522 1,062 0,002
72 10,791 37,504 0,315 0,0254 0,052 0,005
96 15,764 36,886 0,417 0,0158 0,026 0,004
120 19,276 36,443 0,711 0,0084 0,018 0,012
14 21,743 35,519 0,925 0,005 0,039 0,009
168 24,185 28,664 0,74 0,0044 0,286 -0,008

X biomassa: g / (kg MS)
S substrato: g / (kg MS)
P produo de GA
3
: g / (kg MS)
taxa diria de crescimento especifico
Rs consumo horrio de substrato
Rp produo horria de GA
3
MS matria seca (substrato fermentado seco)


Os clculos foram feitos como se descreveu no tpico 3.1.1.1; onde o foi
levantado para cada intervalo de 24 horas (neste tempo, o foi estimado como
constante). De equao (C) tem-se:

2 2
1 ln 2 ln
t t
X X

=
(1)

onde o ndice 2 refere-se ao valor posterior ao 1 (24horas depois)
Os outros parmetros definem-se:

1 2
2 1
t t
S S
Rs

=
(2)

1 2
1 2
t t
P P
Rp

=
(3)


Outras taxas (rendimento Yx/s P) podem ser avaliadas da mesma forma, j
que os valores so avaliados na forma de faixa mdia, neste caso seria de 24 horas.
Conforme visto na tabela, o max foi no tempo de 48 horas.
Como levantar experimentalmente os valores de X seria muito trabalhosa
parta mais valores de tempo, ajustou-se uma curva terica que relaciona X com
tempo. Conforme artigo de Gelmi (4) e compara uma equao genrica sigmoidal
(5), pode-se levantar as constantes por regresso linear dos poucos dados
experimentais e formular uma funo da Biomassa por tempo.


t
e
Xo
X
X
t X

|
.
|

\
|
+
=

1
max
1
max
) (
(4)
t c
e
b
a
a
t X

|
.
|

\
|
+
=
1 1
) (
(5)


a Xmax , b Xo, c

Pode-se avaliar a dependncia da Biomassa com outro parmetro importante,
o CO
2
acumulado. A avaliao da Biomassa com o O
2
mais complicada devido ao
fator da aerao fazerse renovar o O2, enquanto tem-se uma taxa de consumo. As
medidas de CO2 foram feitas de 15 em 15 min com o acoplamento de um
cromatgrafo gasoso.
A dependncia da Biomassa X e do CO2 acumulado na fermentao foi
linearizada num grfico de Biomassa (valores estimados pela eq. (5)) por CO
2

acumulado.

=
t
prod
acum
dt
dCO
CO
0
2
2
(6)

z CO y X
acum
+ = ) ln(
2


onde y e z so coef. angular e linear da reta gerada por esta linearizao
(com valores conhecidos de CO
2acum
e de X)

Para o sistema de Reator em escala piloto, foram feitas as mesmas
abordagens, mesmos clculos, o que mudou foi s o rendimento

Produo em reator em condies de coluna aerada:
Tempo (h) Xexp Xestimada exp estimada P Rp
0 1,098 1,098 - - 0,000 -
24 1,285 1,309 0,007 0,007 0,000 0,0000
48 7,631 8,858 0,074 0,08 0,182 0,0076
72 14,959 12,514 0,028 0,014 0,500 0,0132
96 18,743 16,402 0,009 0,011 0,915 0,0173
120 19,324 18,097 0,001 0,004 1,193 0,0116
144 19,402 19,220 0,000 0,003 1,071 -0,0051

Os parmetros acima seguem as mesmas unidades da tabela anterior.
Fermentao com 2000g substrato seco, umidade de 77% pH de 5,2 e vazo
inicial de ar 0,48 L/(h*gMS)
Nesta fermentao o Aw ficou entre 0,981-0,992 e a umidade 0,75-0,78. e a
temperatura ficou entre 28 e 30 C.
Em nenhuma situao citou-se valores de Nitrognio real do sistema, nem
qual a fonte geral de nitrognio, o que se leva a concluir que o nitrognio para a
fermentao esta contido diretamente no substrato (casca de caf e bagao de
mandioca), na proporo de 43:1 conforme informado na tese.
X experimental o coletado da amostras; j o estimado segue a equao
sigmoidal ajustada (5). O exp foi determinado utilizando a relao (1), agora como
o estimado foi levantado no esta claro na tese, ou se o estimado o que usa ao
eq. (1), ou se ambas usam a eq. (1), s mudando X (exp usa Xexp e estimado usa
Xestimada).
8. MODELO FENOMENOLGICO


8.1 DESCRIO DO MODELO
O modelo avaliado segue a referncia [7]. Este trabalho foi realizado em colunas
de vidro com suporte inerte (Amberlite IRA-900) utilizando Gibberella fujikuroi como
fungo fermentador. O substrato composto basicamente por Amido (fonte de
Carbono) e Uria (fonte de Nitrognio) tendo o nitrognio como substrato limitante
do processo, ou seja, em condies reduzidas. As equaes diferenciais obtidas
partiram do balano de massa, levando em conta as seguintes variveis como
funes temporais:

Biomassa Total (X
T
): aquela que mensurvel, passiva de medio;
Biomassa Ativa (X): aquela que esta efetivamente metabolisando e produzindo;
Uria (U): o substrato limitante, e de onde se tira o Nitrognio para o
metabolismo celular;
Nitrognio (N): o quanto deste nutriente esta sendo utilizado e/ou gerado
(metabolismo, gerao de enzimas e consumo para obteno de produtos);
Amido (S): fonte bsica de energia para o metabolismo celular;
GA
3
(GA3): produto desejado da fermentao;
CO
2
e O
2
(CO2 e O2): gerao e consumo de gases devido ao processo
metablico do fungo.

Parmetro como Temperatura, pH e Aw so fundamentais para a
fermentao, e as equaes descritas a seguir so dependentes destes fatores, que
influncia nas constantes cinticas principalmente. Como efeitos do sistema, o
suporte inerte e que no sofre degradao ao longo da fermentao (aprecivel) e
os efeitos de transferncia de massa so reduzidos.
As consideraes feitas acerca do sistema foram:

A transferncia de O2 negligenciavel;
N2 avalivel no substrato o meio limitante (condio de operao da
fermentao);
A fonte de Carbono abundante;
T e Aw so constantes no processo, o que na prtica razovel;
Parmetros modelados so constantes no processo (em virtude da T e Aw o
serem, principalmente).

As equaes a seguir representam bem a fase estacionria e a exponencial,
sendo imprecisas para a fase de decaimento. Mas as mudanas na biomassa ativa
so representadas por taxas, como a taxa de morte descrita as seguir e as taxas de
manuteno, que restringem o metabo9lismo, pois parte da energia obtida que seria
destinada a gerao de produto, resduos, acaba sendo utilizada para manuteno
das funes vitais do microorganismo.





8.2 MODELAGEM

Biomassa

Segue-se a biomassa total, tanto a reprodutvel, como a morta:

X
dt
dX
T
=


onde a taxa de crescimento especifica da biomassa com a fermentao, que
ser descrita adiante.

Biomassa Ativa

Representa a biomassa que permanece metabolisando na fermentao, parte
viva dos microorganismos do meio

X Kd X
dt
dX
=


onde o Kd representa a taxa de morte de primeira ordem, forma de representar a
queda da biomassa, numa fase de decaimento.

Uria

Fonte orgnica do nitrognio para o metabolismo microbiolgico.

k
dt
dU
=


onde k representa uma taxa constante da degradao da uria com o tempo de
fermentao, o seu consumo em si.

Nitrognio

Componente essencial para ao metabolismo dos microorganismos, e sendo fonte
limitante deste sistema, tem-se todo o destaque.

(

=
N X
Y
X
k
dt
dN
/
47 . 0


O fator de 0,47 e referente porcentagem de nitrognio contido na estrutura da
uria.
A constante Y
X/N
o parmetro de converso do substrato limitante, que o
nitrognio pela biomassa. Nesta formulao, este considerado com constante, mas
a sua definio de:

No N
Xo X
Y
dN
dX
N X

=
/

Amido

Fonte energtica para os microorganismos, componente bsico para a produo
dos seus metablitos (junto com o nitrognio), tem seu consumo estabelecido:

(

=
S X
S
Y
X
X m
dt
dS
/

A constante Y
X/S
o parmetro de converso do substrato em excesso, que o
amido-fonte de carbono; pela biomassa. Da mesma forma que o parmetro de
converso anterior, para a formulao abordada, este parmetro constante. Este
se define como:

So S
Xo X
Y
dS
dX
S X

=
/

O parmetro m
S
definido como a taxa de manuteno do microorganismo,
refere-se ao consumo de parte da fonte de energia que no se destina para o seu
crescimento, mas para a realizao de funes vitais celulares como o trabalho
osmtico para manter os gradientes de concentraes de substncias entre o
interior da clula e o seu meio ambiente, para a mobilidade da clula dentro do
meio,e outros. Parmetro definido como constante.

GA
3


Representa o produto, um metablito secundrio. Definida como funo da
concentrao de Biomassa Ativa.

3
3
GA Kp X
dt
dGA
S
=


O parmetro b ser definido abaixo, j o parmetro kp representa uma taxa
de degradao do GA3, de primeira ordem, conforme observao experimental.

CO
2
e O
2


So os gases que compem o ciclo biolgico da fermentao, e por ser
diretamente relacionado com os microorganismos, apresentar uma taxa de
manuteno m
co2
e m
o2
para suas expresses.

(
(

+ =
2
2
/
2
CO X
CO
Y
X
X m
dt
dCO

(
(

+ =
2
2
/
2
O X
O
Y
X
X m
dt
dO

Taxas cinticas

Os parmetros m e b que aparecem nas equaes acima representam as taxas
de crescimento especifico do meio e taxa de converso do metablito desejado
(GA3) em funo do substrato limitante, respectivamente.
A equaes algbricas que definem estes parmetros so empricas, mas
apresentam boa reprodutibilidade para estes parmetros. Estas so definidas em
funo do substrato limitante, o Nitrognio.

N
MAX
k N
N
+

Modelo de Monod

N K
i
MAX
+
=
1

Onde todas as constantes inerentes s equaes acima so experimentais.

O sistema avaliado para estas equaes seguiu condies especificas de T e
Aw. Valores experimentais foram apresentados para Aw = 0,992 e T = 25 C. O meio
para o crescimento da biomassa partiu de pH = 4,5 em um suporte inerte com
umidade de 10%e 5,1 g deste suporte foram misturados com 5,9 mL de soluo de
nutrientes esterilizada.
A mistura foi alojada em uma coluna de vidro co 20 cm de altura e 2,5 cm de
dimetro contendo 1,4 mL de soluo micelial suspensa em soluo salina (descrita
na referncia [7]). A densidade aparente da mistura dentro da coluna de 0,68
g/cm
3
.




8.3 ESTIMATIVA DOS PARAMETROS

A estimativa de parmetros segue inicialmente com uma estimativa inicial de
parmetros singulares ao processo, baseados nas curvas de gs acumulados. Os
parmetros inicialmente avaliados foram: max, m
CO2
, m
O2
e Kd.

Estimativa inicial:

O possvel alcance de valores de max foram obtidos das curvas do logaritmo
natural do CO
2
acumulado, conforme a mesma abordagem dos valores de Biomassa
em funo de CO
2
, proposto por Gelmi [8].
Para estimar os valores de m
CO2
e m
O2
, seguiu-se o procedimento abaixo:

1. Depois do consumo do nitrognio limitante, desprezado o termo de
crescimento da biomassa e a equao da biomassa simplifica-se para:

X Kd
dt
dX
=


2. Assumindo que a taxa de morte kd seja constante, a soluo analtica fica:

( ) ( ) to t Kd Xo X = exp


3. Repetindo o mesmo processo para o balano de CO
2
:

( ) ( ) to t Kd Xo m X m
dt
dCO
CO CO
= = exp
2 2
2


4. Integrando a equao acima que esta explicita em t, tem-se:

( ) ( ) to t Kd
Kd
Xo m
Kd
Xo m
o CO CO
CO CO

+ = exp
2 2
2 2



5. O mesmo obtem-se para O
2
, fazendo o mesmo clculo:

( ) ( ) to t Kd
Kd
Xo m
Kd
Xo m
o O O
O O

+ = exp
2 2
2 2


6. O CO
2
o, O
2
o e Xo so termos correspondentes aos valores estimados no
tempo to. Os parmetros do modelo (max, m
CO2
, m
O2
e Kd) foram ajustados com o
procedimento dos mnimos quadrados do Excel.


Calibrao Final

Uma rotina de otimizao no linear com o Matlab, fiminsearch, foi utilizada
para obter os mnimos quadrados para todos os parmetros do modelo. As
estimativas iniciais para max, m
CO2
, m
O2
e Kd foram calculadas no primeiro passo.
Para o restante dos parmetros, quando possvel, os valores iniciais foram retirados
de literatura. Medidos os valores de X, S, GA
3
, CO
2
e O
2
, foram comparados com os
valores simulados obtidos pela integrao das equaes diferenciais para computar
os erros quadrticos. Cada um dos erros foi dividido pelo valor mximo dessa
varivel e a quantidade de dados experimentais disponveis.
Uma avaliao para diferentes condies de T e Aw revelam que T afeta
sensivelmente m
S
, m
CO2
, m
O2
e o coeficiente de rendimento Y
X/O2
. Para a Aw, os
parmetros mais afetados foram os coeficientes de rendimento: Y
X/O2
, Y
X/CO2
e Y
X/N
. Os menos sensveis a T e Aw foram m
CO2
, k e K
N
.Usando um critrio de
sensibilidade analtica, v-se que o coeficiente mais importante Y
X/N
. Este afeta o
X, na variao de N, no consumo de S, na produo de CO
2
e consumo de O
2
.
Outro parmetro muito influente foi Kd, afetando X, produo de GA
3.


8.3 RESULTADOS DAS SIMULAES

0 50 100 150
0,00
0,01
0,02
0,03
0,04
0,05
Biomassa
Biomassa total
Biomassa viva
Biomassa experimental
B
i
o
m
a
s
s
a

(
m
g
/
g

S
.
I
.
)
Tempo (h)

0 50 100 150
0,00
0,05
0,10
0,15
0,20
0,25
0,30
Consumo Amido
A
m
i
d
o

(
m
g
/
g

S
.
I
.
)
Tempo (h)
Amido
Amido experimemtal


0 50 100 150
0,0000
0,0001
0,0002
0,0003
0,0004
0,0005
Produo GA3
GA3 simulado
GA3 experimental
G
A
3

(
m
g
/
g

S
.
I
.
)
Tempo (h)

0 50 100 150
0,000
0,001
0,002
0,003
0,004
Consumo de Uria
Variao do Nitrognio Real
U
r

i
a

e

N
i
t
r
o
g
e
n
i
o





(
m
g
/
g

S
.
I
.
)
Tempo (h)
Uria
Uria experimental
Nitrogenio Real


0 50 100 150
0,00
0,05
0,10
0,15
0,20
0,25
Vario dos Gases
Fermentao
O
2
CO
2
O
2
experimental
CO
2
experimental
G
a
s
e
s

A
c
u
m
u
l
a
d
o
s
(
g
/
g

S
.
I
.
)
Tempo (h)


REFEFERNCIAS

[1] Tese de Doutorado C. M. M., Machado, 2002,
pg:(17,18,19,20,21,2425,26,272829);
[2] Livro SSF in Biotechnology: Fundamentals and Applications, A.
Pandey , C. Soccol et al. Ed. API Nova Dli 2001, pg:
(3,8,11,12,21,22,23,24,25,27,28,32,3334,35,36,40,41,42);
[3] Solid-state Fermentation, A. Pandey , Biochemical Engineering
journal, 2002.
[4] Some engineering aspects of Solid-state Fermentation, K.S.M.S
Raghavarao, et. Al., Biochemical Engineering journal, 2002.
[5] Livro BIOTECNOLOGIA, Eng. Bioqumica Vol. 3, W. Borzani et. Al,
1975, ed. Edgard Blcher Ltda., So Paulo, Capitulo 9 G. Brunello e B, V,
Concone;
[6] Livro BIOTECNOLOGIA INDUSTRIAL, Eng Bioqumica Vol. 2, Schimidell
W. et Al, 2001 1

Edio, ed Edgard Blcher Ltda., So Paulo, Cap 13
V.L.Del Bianchi et Al;
[7] Modeling Gibberella fujikuroi growth and GA3 production in solid-state
fermentation Gelmi, C.; Correa, R. P.; Agosin, E. Process Biochemistry, 2001
[8] Solid substrate cultivation of Gibberella fujikuroi on an inert support
Gelmi, C.; Correa, R. P.; Agosin, E. Process Biochemistry, 2000