GOBIERNO DE CHILE MINISTERIO DE SALUD SUBDEPARTAMENTO DE SALUD VALDIVIA HOSPITAL BASE VALDIVIA Subdireccin Ejecutiva Mdica Depto.

de Apoyo Clnico y Teraputico Subdepartamento de Laboratorio Central

MANUAL TOMA DE MUESTRAS LABORATORIO CENTRAL AO 2008

INDICE Pgina 3 3 4 7 8 11 12 14 17 19 20 21 22 27 29 30 30 31 31 32 33 36 38 38 38 39 42

I.II.III.IV.V.VI.VII.VIII.IX.X.XI.XII.-

INTRODUCCIN OBJETIVOS CONSIDERACIONES GENERALES TOMA DE MUESTRA SECCIN HEMATOLOGA TOMA DE MUESTRA INMUNOQUIMICA Y HORMONAS TOMA DE MUESTRA PARA DETERM. CON TEC. INMUNOFLUORESCENCIA TOMA DE MUESTRA SECCIN CITOQUIMICOS TOMA DE MUESTRA SECCIN PARASITOLOGA TOMA DE MUESTRA SECCIN DE V.D.R.L. TOMA DE MUESTRA SECCIN ORINA TOMA DE MUESTRA SECCIN KOCH TOMA DE MUESTRA Y CONDICIONES ESPECIALES SECCIN BACTERIOLOGIA *UROCULTIVO *CULTIVOS L.C.R, CAVIDADES SEROSAS, LIQUIDO PLEURAL *MUESTRAS DEL TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR *MUESTRAS OCULARES *SECRECIN TICA. *MUESTRAS DE SENOS PARANASALES *MUESTRAS DEL TRACTO RESPIRATORIO INFERIOR *CULTIVO CUANTITATIVO DE ASPIRADO ENDOTRAQUEAL *INFECCIN DE PIEL Y TEJIDO SUBCUTANEO *CULTIVO CUANTITATIVO EN QUEMADOS *COPROCULTIVO *LEUCOCITOS FECALES - ROTAVIRUS *REACCIN AGLUTINACIN *NORMA DE INDICACIN Y TOMA DE MUESTRA PARA HEMOCULTIVOS *DIAGNOSTICO DE INFECCIN RELACIONADA CON EL CATETER VENOSO CENTRAL

I. INTRODUCCIN

Los resultados de los procedimientos bioanalticos que realiza el equipo de trabajo del Laboratorio Central, deben ser de calidad y para ello es importante todo el proceso previo a la fase analtica. Es necesario garantizar una buena calidad en la fase preanaltica que incluye una adecuada: o o o o o Indicacin del examen, Preparacin del paciente. Obtencin de la muestra. Manipulacin de la muestra Conservacin y transporte de la muestra.

Todo el personal que participa en los diferentes procesos referidos a esta fase tiene que disponer de la capacitacin, habilidades y experiencia necesarias para ejecutar las actividades requeridas. Una muestra mal tomada da resultados intiles que confunden al profesional que la solicita y puede n llegar a constituir un riesgo para el paciente.

II. OBJETIVOS El presente documento se aplica a las muestras de diagnstico que se envan desde el lugar de obtencin de muestras hasta el Laboratorio Central de Hospital Base Valdivia, y su objetivo es: o Preservar la integridad de las muestras con la finalidad de mantener la estabilidad de las propiedades biolgicas que la componen. o Exponer una serie de requisitos en relacin a preparacin del paciente, toma de muestra y criterios de rechazo. o Referir los documentos que deben ser enviados con las muestras. o Cumplir las condiciones y requisitos de seguridad para minimizar el riesgo que puede implicar en el personal que transporta las muestras. o Conseguir que los resultados que puedan obtenerse de las determinaciones realizadas sobre cada una de las propiedades biolgicas sean iguales o tan prximo posibles a su valor verdadero.

III. CONSIDERACIONES GENERALES

INDICACION DE UN EXAMEN El profesional autorizado para indicar un examen debe hacerlo en la solicitud correspondiente, indicando en forma clara y con letra legible todos los datos requeridos. El Laboratorio Central cuenta con formularios para: 1.- Solicitud de Examen Laboratorio Central. 2.- Solicitud Examen Microbiologa. TRAZABILIDAD DE LA MUESTRA En la actualidad el Laboratorio Central cuenta con un sistema de cdigo de barra para la identificacin de la muestra en las siguientes secciones o o o o o o o o Hematologa y Coagulacin, Qumica sangunea Inmunologia Qumica orina Virologa Examen orina V.D.R.L. Citoqumicos

Importante: La identificacin de la muestra debe coincidir la solicitud por lo tanto los datos del paciente y el tipo de muestra deben ser corresponder. CONDICIONES BIOSEGURIDAD PRECAUCIONES ESTANDAR Con el objetivo de prevenir la transmisin de microorganismos por la va parenteral y en el contacto con secreciones de pacientes en la fase preanaltica, se debe aplicar la Norma N6 Precauciones Estndar del Comit I.I.H. de Hospital Base Valdivia, con especial nfasis en relacin a: o Lavado de manos. o Uso de barreras protectoras. o Transporte de muestras. o Manejo de derrames.

GENERALIDADES OBTENCION MUESTRA

La preparacin del paciente se realiza segn tipo de muestra y examen solicitado (ver en manual segn seccin correspondiente).

El Laboratorio Central recibe todo tipo de fluidos corporales: Sangre: es el tipo de muestra ms frecuente, se analiza. Sangre total. Plasma. Suero. Orina. Otros fluidos como: Lquido amnitico. Lquido asctico. Lquido pleural. Lquido cefalorraqudeo. Lquido seminal, etc.

MUESTRAS DE SANGRE Sangre: es el tipo de muestra ms frecuente, se analiza. Sangre total. Plasma. Suero. La muestra de sangre se obtiene por puncin venosa o arterial de acuerdo a procedimiento establecido e cada Subdepartamento Clnico, con tcnica asptica y precauciones estndar segn n Norma N 6-7 y 8 de Comit I.IH. TUBOS AL VACIO PARA TOMA DE MUESTRA SANGRE
COLOR TAPA ANTICOAGULANTE MUESTRA DE SANGRE
ACCION DEL ANTICOAGULANTE

APLICACIN

OBSERVACIO N

* CELESTE

CITRATO DE Na EDTA

PLASMA

CAPTURA Ca.

COAGULACION

* LILA

SANGRE TOTAL

CAPTURA Ca.

HEMATOLOGIA

Tambin se usa para Det. Amonio

VERDE

HEPARINA

PLASMA

INHIBE TROMBINA CAPTURA Ca.

QUIMICA

NEGRO

OXALATO

PLASMA

COAGULACION

GRIS

FLUORURO

SUERO

INHIBE ENOLASA

QUIMICA

Para Det. Lactato

de

* ROJO

SIN ANTICOAGU LANTE

SUERO

QUIMICA - INMUNO ENDOCRINO. PRUEBAS SEROLOGICAS QUIMICA - INMUNO ENDOCRINO. PRUEBAS SEROLOGICAS Contiene gel separador suero, elementos celulares.

ROJO C/ AMARILLO

SIN ANTICOAGU LANTE

SUERO

* Solo estos son utilizados en Laboratorio Central. FACTORES QUE INCIDEN EN EL RESULTADO DE UN EXAMEN DE LABORATORIO EN LA FASE PREANALITICA Factores dependientes del enfermo: - Ayuno - Medicamentos. - Ejercicio. - Actividad sexual. Factores dependientes de la toma de muestra: - Agitacin. - Hemlisis. - Traslado de la muestra (influyen entre otros temperatura, tiempo, etc). - Contaminacin - Coagulacin - Anticoagulantes.

CONDICIONES QUE PROVOCAN EL RECHAZO DE UNA MUESTRA Inadecuada identificacin de la muestra. Volumen de sangre inadecuado. Utilizacin de tubos de recoleccin inadecuados (Ej.: Ca). Hemlisis. Transporte inadecuado. Sustancias interferentes.

IV.- TOMA DE MUESTRA SECCIN HEMATOLOGIA I.- Sistema al vaco venoject. Tubo tapa Lila: 3 ml. de sangre total con EDTA como anticoagulante. a) Hemogramas. - Rcto. Plaquetas. - Rcto. Eosinfilos. - Rcto. Reticulocitos - Rcto. Leucocitos. - Hto. y Hb. - Formula leucocitaria

Inmediatamente despus de la toma de la muestra, la sangre debe mezclarse muy bien con el anticoagulante invirtiendo el tubo por lo menos 10 veces pues esto evita la coagulacin parcial o total. Tubo tapa negra: 1 ml. de sangre total con Citrato de Sodio b) - V.H.S: No se aceptan muestras hemolizadas ni coaguladas. El volumen debe ser exacto. Tubo tapa celeste: c) Pruebas de coagulacin: o T.T.P.A o Anticoagulante lupico. o T.P + INR o Factor VIII. o Fibringeno. o Factor Von Willebrand Antignico.

Tubo tapa celeste 3.5 ml. si son varias las determinaciones. Tubo tapa celeste 2 ml para procesar pruebas de rutina bsica T.P., T.T.P.A. La muestra debe ser tomada en ayuno estricto y llevada inmediatamente al Laboratorio. El volumen debe ser exacto hasta donde esta indicada la marca en el tubo.

ESTABILIDAD DE LAS MUESTRAS: Hemograma y V.H.S : 8 horas Coagulacin : 2 horas

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Punciones con scalp, deben solicitarse adaptadores para venoject en el Laboratorio, es importante comenzar por los tubos con anticoagulante y agitarlos de inmediato.

V.- TOMA DE MUESTRA SECCIN INMUNOQUIMICA Y HORMONAS Datos generales El paciente debe estar en ayunas (mnimo 12 hrs.), a excepcin de los casos en que el mdico indique en la solicitud de examen, una situacin diferente. El traslado de las muestras al Laboratorio, debe hacerse inmediatamente una vez tomadas (las clulas sanguneas consumen e intercambian algunas sustancias presentes en la sangre, alterando su concentracin). I.- Para las siguientes determinaciones: Tomar 5 ml. de sangre sin anticoagulante. (Tubo venoject tapa roja, de 5 ml.)

Glicemia. Uremia. Creatinina. Colesterol total Colesterol HDL Triglicridos. Protenas totales. Albumina. Ac. rico. Calcio. Fsforo. Bilirrubina. G.O.T. G.P.T. Fosfatasas alcalinas. LDH. Amilasa. CK Total. CK-MB. Eletrolticos Na K Cl. Ltio. Amonio (*) Lactato. Hb Glicosilada A1c. pH y Gases Arteriales. pH y Gases Venosos. Ph Liq. Pleural. Test de Tol. de Glucosa. Perfil Lipdico. Clearence de creatinina. T3. T4.

T4 Libre. TSH. ATPO (Ac. Antitiroideo) ATG (Ac. Antitiroideo) LH. FSH. Progesterona. Prolactina. Parathormona. Estradiol. Cortisol. Insulina basal. Insulina Post prandial. BHCG. Alfa fetoprotenas. PSA Total. CEA. Ca 125. Ca 15-3. Ca 19-9. Ferritina. B2 Microglobulina. Digoxina. Fenitona. Carbamazepina. Fenobarbital. Ac. Valproico. Teofilina. Methotrexato. IgG. IgA. IgM. IgE.

C3. C4. PCR. Factor Reumatoideo. Titulo ASO. Eosinfilos Nasales. ANA. ENA. DNA. Anticuerpo Anticardiolipina ACA. 17-OH Progestorona. Electroforesis de Protenas. Monotest. Electroforesis de Hb.

(*) Amonio (autorizado solo a algunos Servicios Clnicos, coordinar con el Laboratorio ).

Nota: Microalbuminuria (orina 12 hrs. de la noche). Recuento de Eosinfilos. o Secrecin nasal o bronquial: se toma con trula, se hace extendido en portaobjeto (pedir en Laboratorio). Los siguientes exmenes no se procesan en el da: Electroforesis de Hemoglobina (tubo para Hemograma = tapa lila).
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 Exmenes: E.N.A., A.N.A., D.N.A., A.C.A. (tomar un tubo tapa roja extra) 17 OH Progesterona. Electroforesis de Protenas. II.- CLEARENCE CREATININA. Se necesita: 3 ml. de sangre sin anticoagulante. (tubo tapa roja) Orina de 24 hrs. (hospitalizados) enviar alcuota 30 ml. indicando diuresis. Datos de peso y talla del paciente. RECOLECCION DE ORINA DE 24 HRS. (Ambulatorio) 1.- Comenzar a las 7 de la maana del primer da; eliminando toda la orina de la primera miccin de la maana. 2.- Luego juntar toda la orina del da y la noche, incluyendo la primera orina del da siguiente (la de las 07:00 hrs. de la maana), en un envase limpio. 3.- Durante la recoleccin, dejar los envases con las muestras en un sitio fresco. 4.- Traer toda la orina al Laboratorio en envases limpios. III.- GASES EN SANGRE: Deben tomarse en jeringa desechable heparinizada; mnimo 1 ml. de sangre. La muestra debe venir en anaerobiosis (sin burbujas y sellada la punta de la jeringa con un tapn rojo de plstico hermtico). NO debe venir con la aguja. El transporte de la muestra al Laboratorio debe hacerse de inmediato y la jeringa debe venir en hielo.

IV.- LACTATO Y AMONIO: Llamar al anexo 633311 (seccin inmunoqumica) para coordinar la realizacin de estos exmenes. Lactato: Tomar una muestra de sangre por puncin venosa, en un tubo con fluoruro de sodio (tubo tapa gris) pedir al Laboratorio. Una vez tomada la muestra enviar de inmediato al Laboratorio, indicando en la solicitud de examen, la hora de extraccin de la muestra. Transportar la muestra al laboratorio en hielo. Amonio: Extraer la muestra de sangre por puncin venosa con ligadura solo en la puncin y soltar inmediatamente (vena sin estasis) en un tubo con EDTA (tubo tapa lila). La hemlisis y el traumatismo vascular interfieren en el resultado de la determinacin. Enviar la muestra de inmediato al Laboratorio, transportada en hielo, indicando en la solicitud de examen, la hora de extraccin de la muestra.

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V.- OTRAS DETERMINACIONES EN ORINA: o Creatinina o Calcio o Nitrgeno Ureico o Fsforo o Amilasa o cido rico

Enviar una alcuota (aprox. 30 ml.) de la muestra de orina de 24 hrs., con la diuresis anotada en la solicitud de examen.

VI.- TOMA DE MUESTRA PARA DETERMINACIN CON TECNICAS DE INMUNOFLUORESCENCIA 1.- Virus respiratorios. 2.- Bordetella pertusis. 3.- Chlamydias sp.
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La muestra establecida por el Laboratorio es el aspirado nasofaringeo en pacientes peditricos; en casos especiales de pacientes adultos en que este procedimiento no sea recomendable, se sugiere obtener la muestra mediante desgarro profundo. Preparacin del paciente : El paciente debe tener un ayuno de 6 horas como mnimo antes de tomar la muestra. Eventualmente se realiza determinacin de Chlamydia en secrecin conjuntival, secrecin endocervical, secrecin uretral. Esta muestra se debe obtener con trula estril y se debe rotar sobre el portaobjeto, entregado por el Laboratorio, siempre en un solo sentido. Rotular con lpiz grafito el nombre del paciente en la zona esmerilada y enviar de inmediato al Laboratorio. TOMA DE MUESTRA PARA ESTUDIO SEROLGICO DE AGENTES INFECCIOSOS Toxoplasma IgG / IgM. Rubeola IgG / IgM. Citomegalovirus IgG / IgM. Virus Epstein Barr / IgM. Hepatitis A, B, C. Mycoplasma pneumoniae / IgM. V.I.H.

PREPARACION DEL PACIENTE: El paciente debe tener al menos 4 horas de ayuno, antes de tomar la muestra. OBTENCION DE LA MUESTRA: Colectar mnimo 4 ml de sangre sin anticoagulante (tubo de tapa roja) por puncin venosa. Si las muestras provienen de localidades lejanas al Laboratorio Central, no se debe enviar sangre total. En estos casos se separa el suero por centrifugacin y se enva en un tubo con cierre hermtico al Laboratorio. Si no se enva de inmediato, se debe conservar el suero congelado ( -20 C.) hasta su envo al Laboratorio. Rotular los tubos con el nombre y los 2 apellidos del paciente. En el caso de la muestra para V.I.H: La solicitud mdica del examen para V.I.H. debe venir con el nombre completo del paciente, tal como lo solicita el formulario y se debe adjuntar OBLIGATORIAMENTE A LA PLANILLA para deteccin de V.I.H. La planilla, en triplicado debe traer las iniciales y obligatoriamente el RUN, la direccin, fecha de nacimiento y claramente detallado el grupo de pesquisa del paciente, sobre todo si es embarazada. Adems debe indicar nombre del Hospital o Consultorio que enva los exmenes y la identificacin de quien toma las muestras y completa la planilla.
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La muestra que es sangre total sin anticoagulante debe venir bien rotulada: el rtulo de los tubos de muestra debe traer el nombre y dos apellidos del paciente o si viene con iniciales debe traer adems el RUN del paciente, para evitar duplicidad de iniciales. Las muestras deben ser enviadas de inmediato al Laboratorio de lo contrario se debe extraer el suero y congelarlo a -20C hasta su envo. Las muestras as obtenidas, se deben colocar en una gradilla para tubos dentro de un recipiente a prueba de filtraciones, y enviado de inmediato al Laboratorio. TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS: Colocar las muestras en un recipiente secundario (con gradillas de tubos) a prueba de filtraciones y termo refrigerado plstico y enviar de inmediato al Laboratorio. VII.- TOMA DE MUESTRA SECCIN CITOQUIMICOS 1.-LQUIDO AMNITICO: La muestra debe ser tomada por el mdico y vaciada en dos tubos estriles tapados hermticamente. En lo posible, no debe estar contaminada con sangre ni meconio y debe venir protegida de la luz. Enviar de inmediato al Laboratorio, con los datos del paciente, nombre y dos apellidos en una gradilla porta tubos, la cual debe estar dentro de una caja termo aislante. 2.- CITOQUMICOS DE LQUIDOS: LCR., ASCTICO, PLEURAL, ARTICULAR, PERITONEAL Debe ser tomada por el mdico y vaciada en dos tubos: * Tubo con anticoagulante (tapa lila) para el recuento celular total y diferencial. * Tubo sin anticoagulante (tapa roja) para el examen fsico qumico. Evitar la contaminacin con sangre pues se introducen errores significativos en la concentracin de protenas y recuento celular. Enviar rpidamente al Laboratorio, rotulada con los datos del paciente, nombres y dos apellidos en gradilla para tubos, la cual debe estar dentro de una caja termo aislante. La determinacin de pH en estos lquidos se debe tomar en jeringa heparinizada en condiciones anaerbicas (sellada con tapn de goma) transportar de inmediato al Laboratorio sobre hielo.

3.- QUMICOS EN DEPOSICIONES: PH Y BENEDICT, SUDAN III Tomar una pequea muestra de deposiciones en un envase limpio y rotular con los datos del paciente. Se debe enviar de inmediato al laboratorio, rotulada con los nombres y dos apellidos del paciente, junto a la solicitud de examen. 4.- CAROTENOS: Carotinemia Basal:
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 El paciente debe estar en ayunas. Tomar una muestra de sangre, en tubo sin anticoagulante (mnimo 5 ml) el cual debe venir protegido de la luz. Enviar rpidamente al laboratorio, rotulado con los datos del paciente, nombre y dos apellidos, junto a la solicitud de examen.

5.- LQUIDO SEMINAL: Retirar material para recoleccin de muestra en Laboratorio.

Instrucciones: Abstinencia sexual de 3 a 7 das previos al examen. La mejor forma de obtener la muestra es por masturbacin. La muestra debe ser obtenida en un frasco estril y llevada de inmediato al Laboratorio, mantenindola a temperatura corporal. El paciente debe indicar la hora de obtencin de la muestra. Idealmente se debe obtener la muestra en un lugar cercano al Laboratorio La muestra debe venir rotulada con los nombres y dos apellidos del paciente adjuntando la solicitud de examen.

VIII.- TOMA DE MUESTRA SECCIN PARASITOLOGIA

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1.- COPROPARASITOLGICO SERIADO: Mtodo Muestra : Burrows (P.A.F.) : Deposiciones en frasco con fijador, entregado por Laboratorio Central.

INSTRUCCIONES: a) Requisitos: Muestra de deposicin debe obtenerse en un recipiente limpio, evitando el contacto con orina o sangre, con la paletita provista en la tapa del frasco. Si es de un lactante, obtenerla de la parte central del paal, recin emitida. Tomar 3 muestras, da por medio, en el mismo frasco. Tapar hermticamente. El volumen mximo de deposicin debe ser aproximadamente igual a la cantidad de fijador que contiene el frasco. El paciente no debe haber ingerido en los ltimos 10 das: antibiticos, quimioterpicos, purgantes oleosos, antiparasitarios, carbn ni bario. Conservacin: Las muestras fijadas pueden ser almacenadas en un lugar fresco y si es posible en refrigerador a 4 C, por no ms de 1 semana antes de enviarlas al Laboratorio, previamente rotuladas con los datos del paciente. 2.- BSQUEDA DE TRICHOMONAS VAGINALIS: En la Mujer: - Muestra de flujo vaginal. En el Hombre: - Muestra de orina recin emitida. * Enviar de inmediato al Laboratorio, rotuladas con los datos del paciente. 3.- TEST DE GRAHAM: Instrucciones: Se entregan al paciente 5 portaobjetos ya preparados con las siguientes instrucciones: "En el momento de usar, desprender la cinta por el extremo doblado y aplicar el scotch en la regin perianal y entre las nalgas. Pegar nuevamente el scotch bien estirado en el portaobjetos, envolver en el papel y escribir en el envoltorio el nombre, apellido y RUN del paciente. Tomar las 5 muestras en das seguidos. Una vez obtenidas las 5 muestras, enviar rpidamente al Laboratorio. 4.- SANGRE EN DEPOSICIONES: TEST DE WEBER Se le entrega al paciente material para recoleccin de muestra, con las instrucciones las cuales debe leer inmediatamente para aclarar dudas si es necesario. El paciente debe poner una pequea cantidad de deposicin en las reas indicadas en la tarjeta, durante 3 deposiciones consecutivas, que pueden ser el mismo da o en das seguidos.
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 El paciente no debe ingerir carnes ni pescado, 48 hrs. antes de obtener las muestras. Rotular con los datos del paciente. Enviar de inmediato, una vez obtenidas las 3 muestras, al Laboratorio. Test inmunolgico (solo pacientes hospitalizados) Solicitar envase de toma de muestras e instrucciones en la Recepcin de exmenes del Laboratorio Central. NO REQUIER DIETA PREVIA. Se debe sumergir el aplicador adosado a la tapa celeste en 3 o 4 sitios diferentes de una muestra de deposicin. Tapar y enviar rpidamente al Laboratorio. 5.- ELISA PARA HIDATIDOSIS (IgG) PREPARACION DEL PACIENTE: El paciente debe tener al menos 4 horas de ayuno antes de tomar la muestra. OBTENCION DE LA MUESTRA: Colectar mnimo 4 ml de sangre sin anticoagulante (tubo tapa roja) por puncin venosa, rotular con nombre y dos apellidos, enviar al Laboratorio. Si las muestras provienen de localidades lejanas al Laboratorio Central, NO se debe enviar sangre total. En estos casos se separa el suero por centrifugacin y se enva en un tubo con cierre hermtico al Laboratorio. Si no se enva de inmediato, se debe conservar el suero congelado. ROTULAR LOS TUBOS CON EL NOMBRE Y LOS DOS APELLIDOS DEL PACIENTE.

TRANSPORTE DE LA MUESTRA: Para transportarlas colocar las muestras en un recipiente secundario (con gradilla de tubos) a prueba de filtraciones y termo refrigerado de plstico y enviar de inmediato al laboratorio. LAS MUESTRAS DEBEN LLEGAR SEGN LAS CONDICIONES ANTES SEALADAS, COMPLETANDO EL FORMULARIO ESPECIFICO PARA LA REALIZACIN DEL EXAMEN.

6 .- BSQUEDA DE: Criptosporidium e Isospora belli: Las instrucciones son las mismas dadas para la muestra de coproparasitolgico seriado.

7.- DIAGNSTICO DE: Pneumocystis jirovesic: La muestra es, secrecin nasofarngea en nios y en el adulto, expectoracin inducida, complementada con lavado broncoalveolar si la anterior es negativa y el diagnstico es sugerente.

INSTRUCCIONES EXPECTORACIN INDUCIDA:

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a) El paciente debe estar bien hidratado, por lo tanto, nebulizar con suero fisiolgico 5 a 10 minutos antes de tomar la muestra. b) Dar mucolticos. c) Realizar un aseo prolijo de la cavidad oral, incluyendo lengua (cepillar) d) Finalmente provocar la tos con kinesiterapia o pedir al paciente que elimine un desgarro profundo. e) Las muestras deben ser seriadas, mnimo 3, tomadas el mismo da o en das seguidos en frascos estriles. Las muestras deben ser enviadas rpidamente al Laboratorio, rotuladas con los datos del paciente.

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IX.- TOMA DE MUESTRA SECCIN DE V.D.R.L. DIAGNOSTICO SEROLOGICO DE SIFILIS: 1. OBTENCION DE LA MUESTRA: I.- Pruebas no treponemicas: V.D.R.L. en sangre : El paciente debe encontrarse en ayunas o a lo menos 2 horas despus de las comidas, para evitar sueros quilosos. Tomar mnimo 3cc de sangre en un frasco sin anticoagulante (tapa roja). Rotular el frasco con nombre y dos apellidos del paciente. V.D.R.L. en LCR.: Extraer en forma asptica 1 ml de lquido cefalorraqudeo, mediante puncin lumbar, en frasco estril. Identificar la muestra con nombre y dos apellidos del paciente. II.- PRUEBAS TREPONEMICAS: MHA-TP: El paciente debe encontrarse en ayunas o a lo menos 2 horas despus de las comidas, para evitar sueros quilosos. Tomar mnimo 3 ml. de sangre en un frasco sin anticoagulante (tapa roja). Rotular el frasco con nombre y dos apellidos del paciente. 2. TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS: Al enviar las muestras, se debe adjuntar una planilla en triplicado que debe contener los siguientes datos: N RUN. Nombres y dos apellidos del paciente. Ficha clnica. Procedencia y direccin. Grupo de pesquisa. Especificar si es 1 o 2 examen o control. Fecha de coleccin y envo de muestras. La muestra debe ser enviada de inmediato al Laboratorio, en gradilla porta tubos la cual debe estar dentro de una caja termo aislante. Si las muestras no son enviadas el mismo da al Laboratorio y no es posible separar el suero, guardarlas en refrigerador (no congelar) hasta su envo al da siguiente. Cuando es posible separar el suero, ste debe mantenerse refrigerado hasta su envo al Laboratorio, destacando sueros quilosos. Al enviar las muestras para MHA-TP, se debe adjuntar una Solicitud de hemoaglutinacin MHA-TP que debe contener los siguientes datos: N RUN. Nombres y dos apellidos del paciente. Ficha clnica. Procedencia.
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 Antecedentes serolgicos y clnicos del paciente. La muestra debe ser enviada de inmediato al Laboratorio, en gradilla porta tubos la cual debe estar dentro de una caja termo aislante. Si las muestras no son enviadas el mismo da al Laboratorio y no es posible separar el suero, guardarlas en refrigerador (no congelar) hasta su envo al da siguiente. Cuando es posible separar el suero de la muestra, este debe mantenerse refrigerado hasta su envo al Laboratorio, descartando sueros quilosos.

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X.- TOMA DE MUESTRA SECCIN ORINA

Para los exmenes que a continuacin se indican, la toma de muestra es la siguiente: 1.- Envase limpio y seco. 2.- Limpiar genitales con solucin antisptica suave y enjuagar con abundante agua. 3.- Dejar escurrir el 1 chorro de orina a la taza del bao y recolectar el segundo chorro chorro medio en el envase (la orina debe ser de la primera miccin de la maana). 4.- El ltimo chorro de orina tambin se descarta a la taza del bao. Ejemplos de exmenes: - Acides Titulable - Cuerpos Cetnicos - Orina completa - pH - Pigmentos biliares - Protenas de Bence Jones - Cloruro Frrico (Fe Cl3) - 2-4 DNPH

ORINA DE 24 HORAS Para obtener esta muestra debe comenzarse en la maana, la primera orina es descartada, desde ese momento, todas las orinas emitidas deben ser recolectadas en un envase, en un plazo que comprende 24 hrs., o sea hasta la primera orina del da siguiente. La orina, en el transcurso de recoleccin, debe ser refrigerada (4 C) o en la puerta del refrigerador. Ejemplo: - Proteinuria Cuantitativa - Glucosuria - Urea urinaria Orina de 24 Horas o muestra aislada: - Amilasuria - Creatininuria - Electrolitos NOTA: Las muestras deben llegar en envase de boca ancha hermtico, rotuladas con nombre completo y legible, adems, deben llegar en bolsas plsticas separadas de la solicitud de examen. Un buen resultado depender de la rapidez de envo de la muestra desde el subdepartamento al laboratorio. - Nitrgeno Ureico - Fosfato - Calcio

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Hasta 2 horas puede retrasare el envo hacia el laboratorio, en ese intertanto la muestra debe estar refrigerada; despus de 4 horas los elementos estructurales en la orina se destruyen y el resultado del sedimento no ser copia fiel de la realidad del paciente.

XI.- TOMA DE MUESTRA SECCIN KOCH 1.- EXPECTORACION: Envase - Ad-hoc (plstico negro con tapa transparente) a) Para pesquiza de T.B.C. Pulmonar: 2 muestras 1.- 1 Inmediata (despus de la consulta) 2.- 1 Matinal (al despertar del da siguiente) b) Para control de tratamiento T.B.C. Pulmonar: 1 muestra matinal. 2.- ORINA: 6 muestras en das hbiles. Primera miccin matinal, 2 chorro, mnimo 100 ml. idealmente, frasco estril. Traer diariamente cada muestra al Laboratorio. 3.- CONTENIDO GSTRICO: 3 muestras en ayunas, en das seguidos, No se utiliza esta muestra para control de tratamiento. 4.- PUNCIONES CAVIDADES CERRADAS (LCR., Sinovial, Pleural, etc.) Cantidad: Lo mximo posible, en frasco estril. 5.- BIOPSIAS: (Muestra de tejido, hueso, etc.) En frasco estril con suero fisiolgico agua destilada; en ningn caso, en fijadores como formalina. 6.- PUS: Cantidad suficiente, en frasco o trula estril. 7.- HEMOCULTIVO KOCH: Slo para pacientes VIH (+). 3 Muestras de 10 ml de sangre c/u, tomadas en jeringa cebadas con heparina. Enviar a Laboratorio.

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EN GENERAL: Todo tipo de muestra para estudio bacteriolgico de Koch debe ser protegido de la luz, en casos indispensables conservadas a 4C y ptimamente derivadas lo antes posible a Laboratorio Central para su procesamiento.

XII.- TOMA DE MUESTRA Y CONDICIONES ESPECIALES DE EXMENES SECCIN BACTERIOLOGIA OBJETIVO DE TOMA DE MUESTRA Obtener una muestra de acuerdo a la localizacin, que permita un ptimo rendimiento del examen bacteriolgico, libre de contaminacin. Si la calidad de la muestra es poco adecuada, se producir informacin que es clnicamente intil y causa potenciales errores en el manejo del paciente. DESTINADA A: - Profesionales Mdicos, Dentistas, Enfermeras, Matronas, Tecnlogos Mdicos. - Internos y Alumnos de Medicina, Enfermera, Obstetricia y Tecnologa Mdica. CONSIDERACIONES GENERALES: 1. Para obtener el mximo rendimiento de los exmenes bacteriolgicos, se debe acortar el tiempo transcurrido entre toma de muestra y siembra en el laboratorio. En especial cuando se sospecha de microorganismos lbiles (Ej. Neisseria sp., Haemophylus sp.). 2. La toma de muestra para cultivo bacteriolgico debe ser realizada por personal capacitado , con tcnica asptica y uso de material estril. 3. La peticin de examen debe ser realizada en el formulario Solicitud de examen microbiolgico, el cual se debe completar en todos sus puntos. 4. El laboratorio provee de medios de transporte inmediatamente al laboratorio, los cuales podran ser.
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para exmenes que no pueden ser enviados

Amies o Stuart: medio de transporte para todo tipo de secreciones tomadas con trula Cary Blair: medio de transporte utilizado para coprocultivos. Los medios de transporte deben mantenerse refrigerados para evitar desecacin, sin embargo se debe tener la precaucin de mantenerlos a temperatura ambiente al momento de la toma de muestra. La muestra una vez en el medio de transporte se mantiene a temperatura ambiente, hasta ser enviada al Laboratorio con un plazo mximo de 72 horas.
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Exmenes cuantitativos no deben ser tomados con medio de transporte. El tipo de medio de transporte puede variar de acuerdo a la disponibilidad de los proveedores, lo que ser avisado cada vez en recepcin de muestras.

5. En las muestras que s solicite TINCIN DE GRAM se debe adicionar una muestra en tubo estril sin e medio de transporte.

CRITERIOS DE RECHAZO DE MUESTRAS o o o o Muestras mal rotuladas. Tiempo de transporte ms prolongado que lo recomendado, o enviadas en fijador. Uso de recipientes no estriles. Cantidad de muestra insuficiente. SOLICITUD EXAMEN BACTERIOLGICO 1. Nombre: 2. RUT: 3. N Ficha: 4. Sexo: 5. Fecha Nacimiento: 6. Servicio: 7. Sala: 8. Tipo de muestra: Debe registrarse el mtodo de obtencin de la muestra 9. Examen solicitado: 10. Diagnstico: 11. Tratamiento Antibitico: 12. Mdico solicitante: 13. Fecha de solicitud: UROCULTIVO Muestra: Orina Muestra de orina para urocultivo: es la muestra ms frecuente procesada en los laboratorios de microbiologa. El 20-22% de los urocultivos tienen un resultado positivo. Presencia de bacterias en orina puede corresponder a varios sndromes clnicos: Bacteriuria asintomtico, Cistitis, Sndrome uretral agudo, Pielonefritis aguda. Obtencin de la muestra: o Es una etapa fundamental en el procesamiento de los urocultivos ya que la posibilidad de contaminacin con bacterias de la flora comensal de piel, perin y uretra distal, es muy alta e induce a la generacin de resultados falsamente positivos.

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Recomendaciones: o Preferentemente se debe obtener la primera orina de la maana, por tratarse de una muestra ms concentrada. o Si esto no es posible el paciente debe abstenerse de orinar dur ante las 3 horas previas a la toma de la muestra. o No se debe forzar la ingestin de lquidos previo, ya que esto diluye la orina, pudiendo alterar el recuento bacteriano. o Volumen recomendado a recolectar: 25 a 30 ml. o Volumen mnimo: 3ml. Mtodos de obtencin de la muestra: Existen diferentes mtodos de obtencin de muestra de orina, de acuerdo al tipo de paciente, adulto o peditrico y al uso o no de catter urinario.

TIPO DE MUESTRAS

METODOS NO INVASORES

METODOS INVASORES

ORINA DE 2 CHORRO

ORINA POR RECOLECTOR

CATETER VESICAL

PUNCION SUPRAPUBICA

CATETERIZACIN VESICAL

ORINA DE SEGUNDO CHORRO: Es el mtodo ms frecuente usado. Esta muestra se puede contaminar frecuentemente con flora de la piel, uretra y vagina en mujeres, por lo cual previo a su obtencin se debe realizar lavado genital con trula, agua y jabn.

Paciente Hospitalizado o La muestra debe ser tomada por personal capacitado. o Previo a la toma de muestra se debe realizar lavado genital del paciente, con rin limpio, trulas limpias, guantes de procedimientos y jabn antisptico presentado en dispensador. o Luego del aseo genital, el paciente debe orinar y en segundo chorro obtener orina directo en frasco de urocultivo o en rin estril.

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Paciente ambulatorio

Indicaciones para Urocultivo.

TECNICA PARA MUJERES Primera orina de la maana, segundo chorro previo aseo genital. Retencin mnima de cuatro horas.

Lvese las manos cuidadosamente con agua y jabn, enjuagar con abundante agua y secar con una toalla limpia.

Sintese en el inodoro (WC). lo ms atrs que pueda. Separe los labios genitales (vulva) con una mano y proceda a asearse toda la zona genital con agua corriente y jabn, lavar bien la vulva de delante hacia atrs, repitiendo el proceso cuatro veces. Enjuague con abundante agua, para eliminar los restos de jabn. Seque bien con papel higinico. Abrir el recipiente estril dejando la tapa boca arriba. Los dedos no deben tocar el borde del frasco o superficie interior del frasco

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El frasco debe sujetarse para que no tome contacto con piernas, vulva o ropa del paciente. Orinar y eliminar el primer chorro de orina en el WC, tras lo cual y sin interrumpir la miccin se recoger el resto de la orina en el recipiente estril. Llenar hasta la mitad. NO DEBE RECOGER NI LA PRIMERA, NI LA LTIMA PARTE DEL CHORRO DE ORINA.

Una vez recogida la muestra de orina, tapar el frasco con su tapa. Colocar nombre al frasco y traer al laboratorio antes de una hora.

TCNICA PARA HOMBRES Primera orina de la maana, segundo chorro previo aseo genital. Retencin mnima de cuatro horas.

Lavase las manos cuidadosamente con agua y jabn, enjuagar con abundante agua y secar con una toalla limpia

Abrir el recipiente estril dejando la tapa boca arriba. Los dedos no deben tocar el borde o superficie interior del frasco.

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Retraer completamente el prepucio (piel del pene). Limpiar el glande (extremidad del pene) con jabn neutro. Eliminar los restos de jabn enjuagndolo con agua corriente Orinar desechando el primer chorro de orina, tras lo cual y sin interrumpir la miccin se recoger el resto de la orina en el recipiente estril. Llenar hasta la mitad. NO DEBE RECOGER NI LA PRIMERA, NI LA LTIMA PARTE DEL CHORRO DE ORINA.

Una vez recogida la muestra de orina , tapar el frasco con su tapa Colocar nombre al frasco y traer al Laboratorio antes de una hora.

ORINA OBTENIDA MEDIANTE RECOLECTOR:

En caso de lactantes, utilizar recolector de orina.

Existe el riesgo de contaminar con la flora perineal, por lo cual se debe realizar aseo genital previo a la instalacin del recolector.
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til si resultado es negativo o si se obtiene recuento significativo de una sola cepa Si el nio no ha orinado en 30 minutos, se debe cambiar nuevamente el recolector, previo a lo cual se debe realizar aseo genital.

Procedimiento: Realizar lavado clnico de manos Abrir la bolsa Retirar el papel que recubre el adhesivo, teniendo cuidado de no manipular la parte interna. Fijar la bolsa, pegando los bordes en los labios mayores en el caso de las nias y en la zona de alrededor del pene en caso de los nios Cambiar la bolsa cada 30 minutos en caso de que la muestra sea para Urocultivo, volviendo a lavar la zona. Colocar nombre al recolector. Colocar dentro de un frasco estril. Enviar la muestra a Laboratorio.

ORINA OBTENIDA A TRAVS DE CATETER VESICAL PERMANENTE La toma de muestras para exmenes se debe realizar con tcnica asptica. Se obtiene a travs de puncin del catter. La superficie externa del catter debe limpiarse y desinfectarse con trula de algodn con alcohol 70 y esperar 30 segundos que seque. La puncin se efecta en un ngulo de 30 en el sitio distal de la sonda vesical, previa a su conexin con el sistema recolector. El estudio bacteriolgico de la orina se realizar segn clnica del paciente. El circuito debe mantenerse cerrado y puede pinzarse el catter slo algunos minutos para obtener muestras de orina. Se debe consignar el uso de sonda foley en solicitud de examen para cultivo.

SITIO DE PUNCION

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Puncin vesical: es el mtodo de referencia para la obtencin de orina a cultivar ya que evita la contaminacin con flora uretral; sin embargo, se reserva para casos especiales por ser un procedimiento invasor.

El procedimiento debe ser realizado por profesional capacitado, de acuerdo a indicacin mdica del Subdepartamento. Cateterizacin vesical transitoria: se considera una alternativa a la puncin vesical pero es tambin un procedimiento invasor y puede generar arrastre retrgrado de microorganismos. Transporte de la muestra La orina es un buen medio de cultivo que permite la multiplicacin de los microorganismos incrementando el recuento bacteriano, por lo que las muestras deben procesarse antes de 2 horas de obtenidas. Si no es posible lo anterior, debe refrigerarse a 4C hasta 24 horas sin que se altere el recuento bacteriano.

LQUIDO CEFALORRAQUIDEO La muestra de LCR debe ser obtenida por un mdico entrenado en la tcnica de puncin lumbar. Procedimiento: 1.- Lavar la regin lumbar del paciente con agua y jabn. 2.- Realizar antisepsia de la piel segn Norma N 3 (Uso de antispticos y desinfectantes, Comit IIH), mediante la realizacin de movimientos concntricos que van desde el lugar donde se realiza la puncin hacia fuera. Esperar tiempo de latencia del antisptico. 3.- Proceder a la puncin lumbar con tcnica asptica. 4.- Recolectar el LCR. en tres frascos estriles. Utilizar el segundo frasco para el estudio microbiolgico ya que el primero tiene ms posibilidades de contaminacin. 5.- La cantidad de LCR. afecta directamente la sensibilidad del diagnstico bacteriolgico. En general, cantidades de 1-3 ml. de LCR para estudio bacteriolgico, son adecuadas. Transporte: Se debe realizar a la mayor brevedad posible, en tubos estriles con tapa rosca y/o frasco estril, ya que la mayora de los microorganismos causantes de meningitis son sensibles a los cambi s de temperatura y o desecacin.

LIQUIDO DE CAVIDADES SEROSAS El lquido pleural, peritoneal, pericrdico y sinovial son normalmente estriles.
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En procesos infecciosos aumenta su volumen y dan lugar al desarrollo de diversos microorganismos.

Toma de muestra: Estas muestras se obtienen generalmente por puncin percutnea, por lo tanto, se debe realizar una rigurosa limpieza de la piel y antisepsia de la zona que se va a puncionar, para evitar la contaminacin de la muestra con flora cutnea y minimizar el riesgo de infeccin del paciente asociado al procedimiento. La muestra debe ser obtenida por un mdico experimentado en la tcnica y un asistente, ambos vestidos con ropa estril, guantes y mascarilla. Transporte de la muestra : Las muestras deben ser conducidas a la mayor brevedad posible al Laboratorio, a temperatura ambiente, en frasco estril. LQUIDO PLEURAL Toma de muestra: Debe ser realizada por un mdico entrenado en la tcnica de toracocentesis. La puncin aspirativa debe realizarse bajo rigurosa tcnica asptica. Transporte: Enviar la muestra rpidamente al Laboratorio a temperatura ambiente, en frasco estril.

MUESTRAS DEL TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR SECRECIN FARNGEA: Toma de Muestra: a) Cultivo corriente: 1.- Buena iluminacin y exposicin de la faringe del paciente. 2.- Deprimir la lengua con baja lengua. 3.- Frotar la trula contra la pared posterior de la faringe y amgdalas, tocando cualquier exudado. 4.- Evitar tocar la lengua.
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b) Cultivo en sospecha de Difteria: - Tomar dos muestras con trula, utilizando baja lengua, pasndola por el reborde de la pseudo membrana. Transporte: a) Cultivo Corriente y sospecha de Difteria: - Menos de 2 horas; enviar la trula en un tubo estril seco. - De 2 a 24 hrs.; enviar la trula en medio de transporte b) Cultivo Neisseria meningitidis, Neisseria gonorrhoeae: - Sembrar inmediatamente en Thayer Martin, si no es posible, introducir la trula en tubo con medio de transporte y mantener a temperatura ambiente. SECRECIN NASAL: La portacin nasal de Staphylococus aureus est presente en el 20-25 % de individuos sanos en la comunidad y con frecuencia en el ambiente hospitalario aumenta, por lo tanto, no est indicada la muestra de rutina en el personal del hospital, solo en un brote intrahospitalario, bien documentado, mediante alguna tcnica epidemiolgica que permita establecer que se trata de la misma cepa. Muestra: Secrecin nasal Toma de muestra: Introducir una trula humedecida en solucin salina estril y rotar en el vestbulo de ambas fosas nasales (tabique y cara interna de aletas nasales). Transporte: Introducir la muestra en medio de transporte. (Amies, Stuart). Llevar al laboratorio a temperatura ambiente a la brevedad posible.

MUESTRAS OCULARES Muestra: Secrecin ocular Raspado conjuntival

Toma de Muestra: - Tomar la muestra para cultivo antes de la aplicacin de anestsico tpico. - Tomar la muestra con extremo cuidado, con la ayuda de otra persona que inmovilice la cabeza del paciente. - Obtener la secrecin con trula estril, del fondo de saco inferior, en el ngulo interno del ojo o del extremo interior del prpado.
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- Rotar la trula suavemente, para que toda la superficie del algodn se empape de la secrecin purulenta. Transporte de la muestra: Introducir la trula en medio de transporte (Amies, Stuart) y mantener a temperatura ambiente.

SECRECIN TICA Muestra: a) Fluido de odo obtenido por timpanocentesis. b) Secrecin del conducto auditivo externo. Cuando se presenta exudado, es mejor recolectar pus con una trula fina. Toma de la muestra: a) Timpanocentesis: La muestra debe ser tomada por un otorrinolaringlogo. b) Secrecin del conducto auditivo externo: - Antes de tomar la muestra proveniente de odo externo, hacer aseo cuidadoso de la piel de disminuir las posibilidades de arrastrar bacterias presentes normalmente en esa zona. - Dirigir la trula en sentido oblicuo de atrs hacia adelante y de abajo hacia arriba. modo de

Transporte: * Cultivo aerbico: Transportar la muestra a temperatura ambiente en medio de transporte (Amies, Stuart), antes de 2 horas al laboratorio. * Cultivo Anaerbico: Transportar la muestra en medio de transporte anaerbico comercial. MUESTRA DE SENOS PARANASALES Muestra: Aspirado obtenido por puncin de los senos paranasales. Toma de Muestra: - La muestra debe ser obtenida por un otorrinolaringlogo. - Limpiar la mucosa nasal en el punto de la aspiracin para eliminar organismos contaminantes. - Obtener el aspirado por puncin asptica con jeringa.
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Transporte: * Cultivo Aerbico: Depositar la muestra en medio de transporte (Amies, Stuart) enviar a Laboratorio Central a temperatura ambiente. * Cultivo Anaerobio: Enviar de inmediato al laboratorio en medios de transportes comerciales para anaerobios, a temperatura ambiente.

MUESTRA DEL TRACTO RESPIRATORIO INFERIOR Recoleccin: Esta muestra puede ser obtenida de un paciente conciente, que comprenda las indicaciones. 1.- Obtencin de 01 muestra previo al inicio de la terapia antimicrobiana. 2.- El paciente debe lavarse los dientes y realizar enjuagues con agua para limpiar cavidad oral. 3.- Mediante tos espontnea o provocada, eliminar el esputo en un frasco de boca ancha. El mdico, kinesilogo o enfermera, debe asistir al paciente durante la obtencin de la muestra. Transporte: No debe demorar ms de dos horas. En caso contrario, la muestra debe ser refrigerada, aunque esto tiene el inconveniente de disminuir el recuento bacteriano de algunos microorganismos ms sensibles. Ejemplo Haemophyllus sp.

CULTIVO CUANTITATIVO DE ASPIRADO ENDOTRAQUEAL (Diagnstico Bacteriolgico de Neumona Asociada a Ventilacin Mecnica. Revisado el consenso nacional de l Sociedad Chilena de Infectologa con relacin a diagnstico de a NAVM se concluye que: Se recomienda el uso de criterios microbiolgicos cuantitativos para el diagnstico de la NAVM. A pesar de que las ventajas diagnsticas de esta estrategia sobre el uso exclusivo de criterios clnicos y radiolgicos podra ser marginal, este enfoque permite al menos reunir informacin epidemiolgica sobre
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microorganismos prevalentes y resistencia antimicrobiana en una unidad, reducir y racionalizar el uso de antimicrobianos y discriminar casos con mayor o menor probabilidad de NAVM. Se recomienda especficamente el uso de cultivo cuantitativo del ASPIRADO ENDOTRAQUEAL (AET). Esta modalidad de diagnstico tiene una sensibilidad y especificidad comparables a las estrategias diagnsticas basadas en estudios fibrobroncoscpicos como Lavadobroncoalveolar y tiene la ventaja de su universalidad de aplicacin, bajo costo e independencia de equipos humanos y tcnicos restringidos para su obtencin.

CULTIVO CUANTITATIVO DEL ASPIRADO ENDOTRAQUEAL (AET) INDICACION: Todo paciente con sospecha de Neumona asociada a ventilacin mecnica (NAVM ), conexin a ventilacin mecnica ms de 48 horas y presencia de criterios clnicos radiolgicos, en el cual no se hayan efectuado cambios de tratamiento antimicrobiano durante las ltimas 72 horas.

OBTENCION DE LA MUESTRA: La muestra debe ser obtenida con tcnica asptica. El procedimiento debe ser realizado por profesional capacitado en procedimientos sobre la va area. Se obtiene introduciendo sonda de aspiracin por el tubo endotraqueal y conectando el otro extremo de la sonda a tubo de aspiracin. No se debe instilar suero fisiolgico con el fin de facilitar la recoleccin ya que se diluye la muestra (recuerde que se trata de un cultivo cuantitativo). Si las secreciones son espesas, se deben aplicar aspiraciones intermitentes hasta conseguir la muestra. La muestra debe ser enviada inmediatamente a seccin bacteriologa Laboratorio Central. Se debe especificar claramente en solicitud de examen: Examen solicitado: CULTIVO CUANTITATIVO ASPIRADO ENDOTRAQUEAL.

RECEPCIN DE MUESTRA: Cultivo cuantitativo de aspirado endotraqueal ser recepcionado en el siguiente horario hbil: Lunes a Jueves: 08:00-16:30 horas Viernes: 08:00 horas a 15:30 horas. Muestras recepcionadas en otros horarios sern tratadas e informadas como cultivo cualitativo.
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INFORME DE LABORATORIO E INTERPRETACION DE RESULTADOS El informe de laboratorio incluye recuento bacteriano de cada microorganismo aislado. Un recuento mayor o igual a 10 ufc/ml se asocia a NAVM en aproximadamente cuatro quintos de los casos, valor predictivo positivo ( VPP) 82% y los recuentos inferiores sealan la probable ausencia de neumona a pesar de la sospecha, valor predictivo negativo (VPN) 83%.
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Un recuento menor a 10 ufc/ml est asociado a una menor probabilidad de NAVM, lo que permite plantear la exclusin del diagnstico. Esta interpretacin es vlida, si no se han realizado modificaciones a la terapia antimicrobiana en las ltimas 72 horas. Recuento intermedio entre estos valores (mayor de 10 que deben quedar a criterio de los mdicos tratantes. INFECCION DE PIEL Y TEJIDO SUBCUTNEO HERIDAS Y LCERAS: Indicacin de cultivo: El diagnstico de infeccin, es clnico y se basa en la presencia de sntomas y signos clnicos en el sitio de la lesin. El cultivo se solicita slo: 1.- Con diagnstico de infeccin. 2.- Si se requiere confirmar la etiologa con fines epidemiolgicos. 3.- Si el clnico decide que el estado del paciente amerita un tratamiento antibitico sistmico. La infeccin puede ser superficial o profunda, dependiendo de las estructuras comprometidas. Infeccin superficial: existe compromiso de dermis, epidermis y celular subcutneo. Infeccin profunda: estn involucradas adems, la facia y msculo, pudiendo o no comprometer cavidades u rganos. Lo anterior, determina que la muestra, se tome de manera diferente en ambos casos. y menor a 10 ) seala VPN y VPP variables
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* Cultivo aerbico superficial: 1.-Limpiar la herida por arrastre mecnico, con suero fisiolgico. 2.- Frotar con trula estril el centro y bordes internos de la lesin en zig-zag. 3.- Enviar inmediatamente al Laboratorio, de lo contrario poner muestra en tubo de medio de transporte. * Cultivo aerbico profundo:
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1.-Limpiar la superficie daada con suero estril. 2.-Tomar muestra con jeringa de la parte ms profunda de la herida, cuando sea posible tomar un trozo de tejido y depositarlo en un frasco seco y estril para su envo al laboratorio. 3.-Enviar al laboratorio inmediatamente, si no es as, poner la muestra en medio de transporte ABCESOS CERRADOS: 1.- Realizar limpieza de la piel de la lesin y luego antisepsia con antisptico segn Norma N 3 Comit IIH. 2.- Realizar puncin del absceso con aguja y jeringa y aspirar la secrecin, obteniendo mnimo 0.5cc. 3.- Enviar al laboratorio en la misma jeringa, tapada con un tapn estril.

CELULITIS O FLEGMONES SIN PERDIDA DE CONTINUIDAD DE LA PIEL: 1.- Realizar limpieza de la piel de la lesin y luego antisepsia con antisptico segn Norma N 3 Comit IIH. 2.- Introducir 0.5 a 1.5cc de suero fisiolgico estril con jeringa con aguja N 21, estril. 3.- Aspirar y enviar en la misma jeringa de inmediato al laboratorio. Si esto no es posible, conservarlas a temperatura ambiente hasta su envo. No refrigerarlas.

DIAGNSTICO DE LOS PROCESOS SUPURADOS EN TRAUMATOLOGA TOMA DE MUESTRA: A) Procesos cerrados (Abscesos): previa antisepsia de la piel con povidona yodada, puncionar con jeringa estril con aguja de dimetro ancho. La muestra se vaca a tubo o frasco estril. B) Procesos abiertos: (heridas, fstulas, procesos abiertos) la muestra se toma con trula estril de la parte ms central de la lesin de preferencia del fondo de la lesin, con el fin de evitar la contaminacin de la muestra con microorganismos de la piel o del medio ambiente. En caso que el pus sea muy abundante, se puede aspirar con jeringa. En ambos casos, solicitar Gram y Ziehl Nielsen, segn criterio mdico.

DIAGNSTICO DE LA ARTROPLASTA INFECTADA DE CADERA 1.- Puncin aspirativa: Si existen evidencias clnicas y radiolgicas de infeccin protsica, la puncin aspirativa articular para obtener lquido para cultivo, es una ayuda valiosa para el estudio diagnstico. Para un mejor rendimiento del procedimiento, conviene realizarlo bajo fluoroscopia (la sensibilidad es de 50 a 70% y especificidad de 80%). Tomar una muestra y vaciar en frasco de hemocultivo y enviar a Laboratorio Central.
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IMPORTANTE: Si desea Tincin Gram, enviar fraccin de muestra en jeringa o frasco estril. ARTRITIS SPTICA Lquido articular: Tomar una muestra de lquido articular e inocular directamente en frasco de hemocultivo. Si existe sospecha de artritis de etiolo ga tuberculosa, debe tomarse la muestra adicionada de heparina; 1 gota de solucin de heparina al 5% estril, para 5 ml de lquido.

OSTEOMIELITIS AGUDA 1.- Muestra intraoperatoria de tejido sinovial o tejido seo: Las muestras de tejido seo o sinovial, obtenidas por procedimiento quirrgico, deben ser inoculadas en frasco de hemocultivo. 2.- Muestra por puncin percutnea: Las muestras osteoarticulares, por puncin percutnea bajo visin radiolgicas, deben ser inoculadas en frasco de hemocultivo. . IMPORTANTE: En aquellos pacientes en quienes se sospecha una bacteremia simultnea, obtener muestra de sangre para hemocultivos. NOTA: 1.- En aquellos pacientes con mltiples focos seos infecciosos, tomar 1 muestra desde la lesin ms representativa de cada miembro. 2.- Muestra intraoperatoria: Tomar slo una muestra representativa, posterior a aseo con suero fisiolgico y previo a la antisepsia del aseo quirrgico (no tomar muestras pre -aseo ni post-aseo quirrgico). 3.- Pacientes con nico foco de infeccin, tomar slo una muestra representativa del sitio. En caso de infeccin de prtesis de cadera, tomar 1 muestra de cpsula y 2 de membranas. 4.- Transporte: Las muestras tomadas, deben ser enviadas inmediatamente al Laboratorio Central.

CULTIVO CUANTITATIVO EN QUEMADOS I INTRODUCCIN:

Infeccin de la quemadura: Multiplicacin en el tejido quemado, de microorganismos que previamente lo colonizaban o llegaron por va hematgena, e invasin del tejido sano vecino o a distancia a partir de l.
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El cultivo cuantitativo, en biopsia de tejido, en conjunto con el anlisis histopatolgico, permiten colaborar al diagnstico de infeccin profunda de la quemadura. Indicacin: Paciente que requiera escarectoma y exista sospecha de infeccin dada por: Signos clnicos: Fiebre, deterioro del estado general, taquicardia, dolor en zona de quemadura, cambio local como profundizacin, eritema perifrico, secrecin purulenta.

II.- TCNICA TOMA DE MUESTRA o Realizar limpieza superficial de la lesin con suero fisiolgico, y luego remocin de tejido superficial. o Tomar la muestra de la zona ms comprometida. o Realizar incisin paralela de 2 cms. de largo y 1 cm. de ancho, con margen que incluya piel sana y profundidad que abarque tejido sano o vital. Luego dividir longitudinalmente el trozo de tejido en 2 porciones. Porcin 1: depositar en frasco seco y enviar a Anatoma Patolgica. Porcin 2: Retirar margen de piel sana, depositar en frasco estril seco y enviar inmediatamente a Seccin Bacteriologa, Laboratorio Central.

Envo de la muestra: Las muestras se recibirn antes de las 12:00 A.M. de lunes a viernes en Anatoma Patolgica y Laboratorio Central. Debe ser enviada antes de las 10:00 A.M. a Anatoma Patolgica, si el informe de la biopsia se desea obtener durante el da.

En el momento de inscribir el paciente en la tabla quirrgica, se debe avisar al Laboratorio Central (anexo 633312) y a Anatoma Patolgica (anexo 7321), la fecha y hora del procedimiento, con el fin de programar la realizacin del examen. Por ser ambas tcnicas en implementacin en ambas unidades, se recibir muestra de 1 paciente cada da.

INFORME: Bacteriologa: * Se informa recuento de unidades formadoras de colonias por gramo de tejido (UFC/gr. tejido), identificacin y antibiograma de la cepa. * Se establece lmite de 100.000 UFC/gr. Tejido, como valor predictivo de invasin bacteriana.
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TRACTO GENITAL FEMENINO Secrecin Vaginal: Recoleccin de la muestra: 1.- Colocar el especulo sin lubricante. 2.- Introducir una sonda a travs de la vagina, conectada a una jeringa que contenga 2 ml. de suero fisiolgico. 3.- Hacer lavado vaginal con el suero. 4.- Colocar el producto del lavado en tubo estril. Secrecin Cervical: Tomar la muestra de exudado endocervical haciendo rotar la trula. NOTA: En caso de solicitar de una misma paciente: Cultivo y examen al fresco, se deben enviar dos trulas y las peticiones de examen por separado. TRACTO GENITAL MASCULINO Secrecin Uretral: Toma de muestra: - Dos trulas: - Gram. - Cultivo. Si hay secrecin abundante, se toma la muestra con trula desde el inicio de la uretra posterior. Si la secrecin es escasa introducir la trula unos 2 cm. por la uretra, girarla en ambos sentidos, permitiendo que absorba secrecin y luego retirarla. Transporte: La muestra debe transportarse a temperatura ambiente de inmediato al Laboratorio.

COPROCULTIVO Solicitud de la muestra: Con el fin de orientar el diagnstico bacteriano, siempre se debe consignar la edad del paciente.
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Toma de muestra: - Trula de algodn o sonda rectal. Estas tcnicas se utilizan especialmente en el nio menor. Si se obtiene la muestra con trula, sta debe humedecerse en el medio de transporte Cary Blair, e introducirse por el ano aproximadamente 2 cm. hacindola girar suavemente. Si se utiliza sonda rectal, se debe emplear una sonda nelaton fina y se aspira con jeringa. Cantidad: Cuando la deposicin es lquida se deben obtener entre 1 - 5 ml. En caso de que la muestra se obtenga con trula de algodn, tratar de que sta se impregne de deposicin. Transporte: Si el transporte al laboratorio demora menos de 2 horas, no se toman medidas especiales. Si este tiempo es mayor, la muestra se i troduce en medio de transporte Cary Blair y se mantiene a temperatura n ambiente.

LEUCOCITOS FECALES - ROTAVIRUS

Tomar deposiciones frescas diarreicas, mnimo 1 cc, Laboratorio.

en frasco estril, enviar rpidamente a

REACCIN AGLUTINACIN

Extraer 5 cc. de sangre sin anticoagulante, en tubo venoject tapa roja. Enviar al Laboratorio.

NORMA DE INDICACIN Y TOMA DE MUESTRAS PARA HEMOCULTIVOS. OBJETIVO:

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Obtener una muestra de sangre que permita un ptimo rendimiento del examen, libre de contaminacin. DEFINICIONES : HEMOCULTIVO: Es un examen microbiolgico que permite la deteccin en el laboratorio, de una bacteremia, lo cual contribuye a adecuar la terapia antimicrobiana de acuerdo al microorganismo aislado y a la sensibilidad in vitro que ste presente, ya que la terapia, generalmente se plantea en forma emprica. Hemocultivos positivos pueden indicar: 1.-Bacteremia real por agente patgeno : Bacteremia primaria: sin foco evidente de infeccin en otro sitio. Bacteremia secundaria: existe foco de infeccin primaria con el mismo agente, como: o o o o Infeccin del tracto urinario Infeccin respiratoria Infeccin de herida operatoria Otros.

2.-Bacteremia transitoria: o o Instrumentacin de mucosas contaminadas. Ciruga de reas contaminadas.

3.-Contaminacin: La incidencia de bacteremia, vara de acuerdo al tipo de infeccin que la origina, por ejemplo: Porcentaje de Bacteremia: Endocarditis bacteriana Neumonia Bacteriana Artitis sptica Neutropnicos febriles 20-30 Meningitis bacteriana Haemophilus influenzae tipo b 80 % Neisseria meningitidis 33 % Streptococcus pneumoniae Nios febriles menores de 2 aos

77-100 % 20-30 % 10-60 % % 45-55 %

52 % 6 %

LA DETECCIN EN EL LABORATORIO DE UNA BACTEREMIA DEPENDE DE NUMEROSOS FACTORES:

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-Indicacin del examen -Nmero de muestras cultivadas -Volumen de sangre cultivada -Dilucin de cultivo -Aditivos del medio. INDICACION CLINICA DE HEMOCULTIVO : -Infeccin del SNC. -Lactante menor de 03 meses con hipertermia (mayor de 39.5) -Sndrome febril de ms de 04 das de evolucin, sin foco clnico evidente. -Pleuroneumonas. -Paciente inmuno deprimido, con fiebre -Sospecha clnica de septicemia. -Cardiopata, con fiebre, sin foco clnico evidente. -Osteoartritis aguda. -Celulitis facial en nio menor de 05 aos. NMERO DE MUESTRAS CULTIVADAS: La mayora de las bacteriemias, con excepcin de las asociadas a endocarditis bacteriana e infecciones intravasculares y las que se producen en los nios, son intermitentes y de baja magnitud. Se ha demostrado que en un episodio bactermico la positividad de una, dos y tres muestras para hemocultivo es de 91%, 98% y 99% respectivamente, al no existir diferencia significativa al tomar 2 o 3 muestra se indicar: Adultos: 2 muestras. Nios : 2 muestras. Paciente con sospecha de Endocarditis bacteriana: obtener 2 muestras para hemocultivo, si estos van negativos a las 24 horas, obtener un segundo set de 2 hemocultivos ms. En ningn momento est recomendada la obtencin de una muestra de sangre para hemocultivo en forma aislada, disminuye la positividad diagnstica y la evaluacin de contaminacin. VOLUMEN DE MUESTRA: Adultos: Por la baja incidencia de las bacteremias en los adultos, existe una relacin directa entre el volumen de sangre cultivada y el porcentaje de bacteremias detectadas, por lo tanto, se recomienda tomar un volumen total de 20 ml en las 2 muestras, (07-10ml por muestra). Nios: El volumen es variable segn edad: Edad Recin Nacidos Lactantes de 1mes a 2 aos Mayores de 2 aos Adolescentes
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Volumen 1-2 ml 2 a 3 ml 5ml 10ml

INTERVALO DE TOMA DE MUESTRA: Se ha documentado que el mejor momento para obtener la muestra de sangre es entre 2 horas a 30 minutos antes del peak febril, lo cual generalmente coincide con un periodo de calofros. Ambas muestras pueden ser obtenidas en el mismo momento, de diferentes sitios de puncin, no siendo necesario fijar plazos determinados entre una muestra y otra. En pacientes con terapia antimicrobiana la muestra debe ser obtenida inmediatamente antes de la prxima dosis de antimicrobiano. Se debe obtener los 2 hemocultivos en un periodo en mximo de 24 horas. . EVITAR CONTAMINACION: Debido, a que el aislamiento de microorganismos habituales de la flora bacteriana de piel, puede plantear problemas en la interpretacin del examen, se hace necesario extremar las precauciones en la toma de muestra, para evitar su contaminacin. Se recomienda: -Tcnica asptica en la toma de la muestra. -Lavado de piel del paciente con agua y jabn. -Uso de antisptico. Se sabe que los porcentajes de contaminacin se reducen, cuando los frascos que se usan, estn cerrados con tapn de goma a travs del cual se inyecta la sangre. La contaminacin de hemocultivos no debe superar el 3%, por lo cual, siempre se deben considerar las medidas anteriores. Frascos para hemocultivo: Sern entregados a cada subdepartamento por Laboratorio Central. Conservar entre 2C y 25C, en un lugar seco, fuera de la luz directa del sol. Se debe examinar cada frasco antes de usarse para ver si presenta indicios de dao, contaminacin o deterioro como: derrames, turbidez, decoloracin u oscurecimiento o el tampn hinchado o hundido, si es as, el frasco se debe devolver a Laboratorio Central. En el momento de la toma de muestra, el frasco de cultivo debe estar a temperatura ambiente. Toma de muestras: La muestra debe extraerse utilizando tcnica asptica para reducir la posibilidad de contaminacin, de acuerdo a Norma de toma de muestras para hemocultivos. Para la toma de muestra se puede utilizar sistema de extraccin al vaco. Los frascos deben identificarse con el nombre del paciente en el lugar sealado en la etiqueta, cuidando no escribir sobre el cdigo de barras. Recepcin de muestras: La recepcin se realizar las 24 hrs. del da. Informe:
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Informe final negativo, se enviar al 5 da de cultivo. Informes positivos, se comunicarn inmediatamente. DIAGNSTICO DE INFECCIN RELACIONADA CON EL CATTER VENOSO CENTRAL

A pesar de todos los avances de infecciones intrahospitalarias, diseos de catteres, la vigilancia epidemiolgica sigue mostrando que las bacteriemias asociados a catteres endovenosos sigue siendo un problema importante. Ante cuadro febril asociado a catteres venosos centrales y la sospecha de infeccin corresponde hacer diagnstico. Existen muchas definiciones para SEPSIS por catter, que incluyen desde la infeccin de la herida cutnea a nivel de la insercin del catter hasta el shock sptico. De acuerdo al Consenso Nacional se considera la siguiente definicin: INFECCION DEL TORRENTE SANGUNEO RELACIONADA AL CATETER: Bacteremia o fungemia en un paciente con un dispositivo vascular con uno o ms hemocultivos perifricos positivos, con manifestaciones clnicas de infeccin (fiebre, calofros y/o hipotensin y sin otra fuente aparente de infeccin del torrente sanguneo. Al menos una de las siguientes condiciones: 1. Cultivo positivo del extremo del catter: mayor o igual a 15 ufc en su extremo distal, con identificacin del mismo microorganismo que en la sangre. 2. Hemocultivos cuantitativos simultneos a travs del catter y por venopuncin con una razn mayor o igual a 4:1(sangre por catter vs sangre perifrica). De acuerdo a lo anterior la confirmacin diagnstica se realiza mediante diagnstico microbiolgico, por medio de procedimientos: 1. No conservadores: cuando esta indicado el retiro del catter. 2. Conservadores: cuando por condiciones tcnicas o clnicas del paciente no se ha indicado el retiro de catter. Paciente neutropnico con catteres permanentes. Catteres de nutricin parenteral. Implantes vasculares Catter doble lumen dilisis. Paciente sin otra posibilidad de acceso vascular. En la indicacin del mtodo de cultivo se debe considerar adems la patogenia de las infecciones relacionadas a dispositivos intravasculares: La piel y la conexin son las principales fuentes de la colonizacin del catter. CATTERES DE CORTA DURACIN: La colonizacin es fundamentalmente de la superficie externa, por microorganismos de la piel del sitio de insercin y es el mecanismo predominante en los primeros 10 das de instalacin. CATTERES DE LARGA DURACIN:
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Predomina la colonizacin de la superficie interna del C.V.C. en catteres con ms de 15 das de instalacin.

MTODO NO CONSERVADOR: CULTIVO DE PUNTA DE CATETER (TCNICA SEMICUANTITATIVA DE MAKI): Sigue siendo el mtodo ms utilizado. No requiere gran equipamiento y es de bajo costo. Slo recupera microorganismos desde la superficie externa del catter, su mxima utilidad es para el diagnstico de bacteremia relacionada a catteres de corta duracin. I.- INDICACIONES: Paciente con catter venoso central que presente fiebre mayor de 38 C, sin foco infeccioso aparente, que lo explique. Signos de infeccin, a nivel de la herida cutnea, donde se inserta el catter.

II. TOMA DE MUESTRA: Lavado clnico de manos. Uso de guantes estriles: 1. Instalar campo estril. 2. Cerrar conexin del catter. Con una pinza y tijera estril cortar punto que fija el catter a la piel y traccionar suavemente hacia el exterior. Cortar con tijera estril 3 cm de la punta del catter, partiendo desde algunos milmetros bajo el nivel subcutneo del catter. Guardar la punta del catter en un tubo estril de boca ancha. Enviar al Laboratorio Central antes de 2 horas. Paralelamente se deben tomar 2 hemocultivos de va perifrica del paciente.

INTERPRETACIN DE RES ULTADOS: Si se informa desarrollo menor de 15 colonias (15 UFC), se interpreta como contaminacin del catter al momento de retirarlo. Si se informa desarrollo igual o mayor de 15 colonias (> o = 15 UFC) se interpreta como una infeccin del catter, la cual puede ser la causa del cuadro clnico del paciente, si adems se ha aislado el mismo microorganismo que en los hemocultivos perifricos.

MTODO CONSERVADOR HEMOCULTIVOS CUANTITATIVOS Permiten el diagnstico microbiolgico de sepsis, por catter venoso central y est indicado para no remover el catter venoso central. Por este mtodo se deben tomar muestras de sangre desde va perifrica y va central, con el fin de comparar recuento de co de microorganismo cuya interpretacin definir si el paciente presenta una bacteremia asociada a catter venoso central.
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I.- TOMA DE MUESTRA Preparacin de la piel, lavado por arrastre con jabn antisptico. Lavado clnico de manos con jabn antisptico, uso de guantes estriles. Extraer de vena perifrica 2 hemocultivo de la forma habitual y enviar al laboratorio. Extraer con el 1 hemocultivo, 1 ml. de sangre en jeringa heparinizada, (0,05 ml. de Heparina), luego tapar con tcnica asptica. Identificar con el nombre del paciente y lugar en que se obtuvo. Enviar de inmediato al laboratorio. Extraer 1 ml. de sangre por catter venosos central y eliminar. Extraer 1 ml. de sangre en jeringa heparinizada (0,05 ml. de heparina) por el catter central, luego tapar con tcnica asptica lo mas cercano al paciente. Identificar con el nombre del paciente y lugar en que se obtuvo. Enviar de inmediato al laboratorio.

II.- INTERPRETACIN DE RESULTADOS Se informa recuento de colonias por 1 ml. en hemocultivo perifrico y recuento de colonias por hemocultivo central. (UFC/ml = unidades formadoras de colonias por ml). Si el recuento de colonias en hemocultivo central es 4 veces superior a hemocultivo perifrico, se interpreta como bacteriemia por catter venoso central, si adems se ha aislado el mismo microorganismo por ambas vas. Sensibilidad: 94% y Especificidad: 100%. Recuento central mayor de 100ufc/ml, con hemocultivo cuantitativo perifrico negativo. Sensibilidad: 82% y Especificidad: 100%

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