Instituto de Qumica de So Carlos IQSC Universidade de So Paulo

Gliclise Fermentaes alcolica e ltica

Bioqumica Avanada Profa. Dra. Fernanda Canduri

Contedo
Digesto de carboidratos Viso geral da gliclise As reaes da gliclise Fermentao: destino anaerbico do piruvato
Fermentao homoltica Fermentao alcolica Energtica da fermentao

Controle da gliclise Metabolismo de outras hexoses

Frutose Galactose Manose

A via das pentoses-fosfato

A digesto de carboidratos inicia-se na boca iniciaDurante a mastigao, a -amilase salivar atua brevemente sobre o amido da dieta, rompendo ligaes (1 4) Amilopectina e glicognio possuem ligaes (1 6), e sendo assim, o produto da digesto da -amilase contm uma mistura de molculas de oligossacardeos menores e ramificados. A digesto dos carboidratos cessa temporariamente no estmago, devido ao pH que inativa a -amilase salivar

A digesto subsequente ocorre no intestino delgado

No intestino delgado, o contedo gstrico neutralizado pelo bicarbonato secretado pelo pncreas, e a -amilase pancretica continua o processo digestivo A digesto final dos carboidratos ocorre pela ao de enzimas da mucosa intestinal dissacaridases e oligossacaridases A absoro de monossacardeos pelas clulas da mucosa intestinal o duodeno e o jejuno superior absorvem a maior parte dos acares da dieta

Viso geral da gliclise

A glicose presente no sangue resultado da quebra de polissacardeos, como o glicognio do fgado, ou o amido e o glicognio da dieta. Ou ainda de sua sntese a partir de precursores no glicdicos a gliconeognese A glicose entra na clula por meio de transportador especfico Enzimas da gliclise esto localizadas no citosol da clula

A gliclise pode ser dividida em dois estgios:

1. Investimento de energia. A glicose fosforilada e clivada para gerar duas molculas de triose gliceraldedo-3-fosfato (GAP). Processo que consome 2 ATPs. 2. Recuperao de energia. As duas molculas de gliceraldedo-3-fosfato (GAP) so convertidas em 2 molculas de piruvato com a produo de 4 ATPs, tendo um saldo lquido de 2 ATPs.

1 - Investimento de energia

2 - Recuperao de energia

A reao total
Glicose + 2 NAD+ + 2 ADP + 2 Pi 2 piruvato + 2 NADH + 2 ATP + 2 H2O + 4 H+ O NADH formado nesse processo deve ser reoxidado continuamente para manter a via abastecida com seu principal agente oxidante, o NAD+.

As reaes da gliclise
Hexoquinase a primeira utilizao do ATP Reao 1: transferncia de um grupo fosfato do ATP para a glicose, formando glicose-6-fosfato (G6P)

A primeira reao

Mudana conformacional da hexoquinase na presena da glicose

A hexoquinase catalisa a fosforilao de hexoses como D-glicose, Dmanose e D-frutose

O segundo substrato para a hexoquinase o complexo Mg2+-ATP

A segunda reao
A reao 2 a converso da G6P em frutose-6-fosfato (F6P) por meio da fosfoglicose-isomerase (PGI) faz a isomerizao de uma aldose para uma cetose

Fosfofrutoquinase: segunda utilizao de ATP

Na reao 3, a fosfofrutoquinase (PFK) fosforila F6P para formar frutose-1,6-bifosfato (FBP ou F1,6P) Esta enzima catalisa o ataque nucleoflico do grupo C1OH sobre o tomo eletroflico -fsforo do complexo Mg2+-ATP A fosfofrutoquinase desempenha um papel fundamental no controle da gliclise porque catalisa uma das reaes determinantes do fluxo dessa via Pode ter a atividade aumentada pelo AMP e inibida pelo ATP e citrato

A terceira reao

As trs primeiras reaes da gliclise

Aldolase
A aldolase catalisa a quarta reao Cliva a frutose-1,6-bifosfato para formar duas trioses gliceraldedo-3-fosfato (GAP) e diidroxiacetona-fosfato (DHAP)

Triose-fosfatoTriose-fosfato-isomerase (TIM)

Somente um dos produtos da reao, o gliceraldedo-3fosfato, continua na via glicoltica Ambos, gliceraldedo-3-fosfato (GAP) e diidroxiacetona fosfato (DHAP), so ismeros cetose-aldose, assim como a F6P e a G6P GAP e DHAP so interconvertidos por uma reao de isomerizao com um intermedirio enediol

Reao de isomerizao pela TIM

A triose-fosfato-isomerase catalisa esse processo na reao 5 da gliclise, a reao final da etapa 1.

Balano da etapa 1 da gliclise

Uma molcula de glicose foi transformada em duas molculas de GAP 2 ATPs foram consumidos na gerao de intermedirios fosforilados O investimento de energia ainda no foi compensado

Gliceraldedo- fosfatoGliceraldedo-3-fosfato-desidrogenase (GAPDH)

Formao do primeiro intermedirio de alta energia A reao 6 a oxidao e a fosforilao do GAP por NAD+ e Pi catalisada pela GAPDH Reao exergnica que promove a sntese do acilfosfato de alta energia, 1,3-bisfosfoglicerato (1,3-BPG) acil-fosfato compostos com alto potencial de transferncia de grupos fosfato

Sntese do 1,3-bifosfoglicerato 1,3Reao 6 primeira reao da segunda etapa

FosfogliceratoFosfoglicerato-quinase (PGK)
Primeira gerao de ATP A reao 7 produz ATP junto com 3-fosfoglicerato (3PG), em uma reao catalisada pela fosfogliceratoquinase Esta mesma quinase realiza a reao inversa, que uma transferncia de grupo fosfato do ATP para o 3PG, formando 1,3-BPG.

fosfoglicerato-quinase

A reao realizada pela PGK

Acoplamento entre as reaes de GAPDH e PGK

Uma reao levemente desfavorvel pode ser acoplada a uma reao altamente favorvel, de forma que ambas ocorram no sentido direto Nas reaes 6 e 7, o 1,3-BPG o intermedirio comum
GAP + Pi + NAD+ 1,3-BPG + ADP 1,3-BPG + NADH 3PG + ATP G0 = +6,3kJ/mol G0 = -18,5 kJ/mol G0 = -12,2 KJ/mol

GAP + Pi + NAD+ + ADP

3PG + NADH + ATP

Exemplo de fosforilao ao nvel do substrato

FosfogliceratoFosfoglicerato-mutase
Na reao 8, o 3-fosfoglicerato convertido em 2fosfoglicerato (2PG) pela fosfoglicerato-mutase (PGM). As mutases catalisam a transferncia de um grupo funcional de uma posio para outra em uma mesma molcula. Esta reao uma preparao para a prxima reao da via.

Enolase
Formao do segundo intermedirio de alta energia Na reao 9, o 2-fosfoglicerato desidratado a fosfoenolpiruvato (PEP)

Piruvato quinase (PK)

Segunda gerao de ATP Na reao 10, a reao final, a PK acopla a energia livre da clivagem do fosfoenolpiruvato a sntese de ATP durante a formao do piruvato

Piruvato quinase (PK)

A reao altamente exergnica, fornecendo energia livre suficiente para promover a sntese de ATP Outro exemplo de fosforilao ao nvel do substrato O alto potencial de transferncia de grupo fosfato do PEP reflete a alta liberao de energia livre ao converter o produto enolpiruvato em piruvato.

Avaliao da etapa 2 da gliclise

O investimento da primeira etapa pago em dobro na segunda etapa Duas unidades C3 fosforiladas so transformadas em dois piruvatos, com a sntese acoplada de 4 ATPs GLICOSE + 2 NAD+ + 2 ADP + 2 Pi 2 PIRUVATO + 2 NADH + 2 ATP + 2 H2O + 4H+

Os trs destinos metablicos comuns do piruvato

Fermentao: o destino anaerbico do piruvato

O piruvato deve ser convertido em um produto final reduzido para reoxidar o NADH oxidado pela reao de GAPDH
Em leveduras, o piruvato descarboxilado para produzir CO2 e acetaldedo, o qual reduzido na presena de NADH, produzindo NAD+ e etanol fermentao alcolica A fermentao ocorre em vrios microrganismos

Nos msculos, em condies anaerbicas, o piruvato reduzido a lactato para gerar novamente NAD+ em um processo conhecido como fermentao homoltica

Na gliclise anaerbica, a energia livre de oxidao dissipada sob a forma de calor.

Fermentao homoltica
Nos msculos, durante atividade fsica vigorosa, a demanda de ATP alta e o suprimento de O2 baixo A lactato desidrogenase catalisa a oxidao de NADH e a reduo do piruvato produzindo NAD+ e lactato Esta reao reversvel, de forma que as concentraes de piruvato e lactato so prontamente equilibradas

Fermentao homoltica

O processo geral pode ser representado como: GLICOSE + 2 ADP + 2 Pi 2 LACTATO + 2 ATP + 2 H2O + H+

Fermentao homoltica
O lactato pode ser exportado da clula como convertido novamente a piruvato Grande parte do lactato transportado pelo sangue at o fgado, onde usado para sintetizar glicose

Fermentao alcolica
Nas leveduras, o piruvato convertido em etanol e em CO2 O etanol o ingrediente ativo dos vinhos e destilados de bebidas O CO2 produzido faz crescer o po

As duas reaes consecutivas

A descarboxilao de piruvato a acetaldedo e CO2 pela piruvatodescarboxilase A reduo de acetaldedo a etanol pela lcooldesidrogenase, na presena de NADH

Energtica da fermentao
Para a fermentao homoltica
GLICOSE 2 LACTATO + 2 H+ G0 = -196 kJ/mol

Para a fermentao alcolica

GLICOSE 2 CO2 + 2 etanol G0 = -235 kJ/mol

Energtica da fermentao
A fermentao resulta na produo de 2 ATPs por glicose, ao passo que a fosforilao oxidativa produz at 38 ATPs por glicose A velocidade de produo de ATP pela gliclise anaerbica pode ser at 100 vezes mais rpida que a da fosforilao oxidativa Quando o msculo consome ATP, ele volta a ger-lo quase completamente pela gliclise anaerbica No h desperdcio de glicose, pois o lactato aerobicamente reconvertido em glicose pelo fgado

O ciclo de Cori - o lactato aerobicamente reconvertido em glicose pelo fgado

Controle da gliclise
Enzimas que operam longe das condies de equilbrio so potenciais pontos de controle Identificao dos modificadores alostricos das enzimas que catalisam as reaes determinantes da velocidade da via efeito sobre a cintica da enzima Variao da concentrao dos metablitos

Variaes fisiolgicas reais de energia livre associadas a cada reao da via

Reao
1 2 3 4 5 6+7 8 9 10

Enzima
Hexoquinase PGI PFK Aldolase TIM GAPDH + PGK PGM Enolase PK

G (kJ/mol)
-20,9 +2,2 -17,2 +22,8 +7,9 -16,7 +4,7 -3,2 -23,0 -27,2 -1,4 -25,9 -5,9 +4,4 -1,1 -0,6 -2,4 -13,9

Apenas trs reaes funcionam com grandes variaes negativas de energia livre no msculo cardaco Hexoquinase Fosfofrutoquinase Piruvato quinase So pontos de controle da via As outras reaes funcionam prximo ao equilbrio, sendo sensvel s mudanas na concentrao dos intermedirios da via, e acomodando-se s mudanas no fluxo geradas pelas etapas determinantes da velocidade

Hexoquinase (HK), Fosfofrutoquinase (PFK) e Piruvato quinase (PK) so pontos de controle da via

Alguns efetores das enzimas que agem longe do equilbrio

A fosfofrutoquinase o principal ponto de controle da via glicoltica

Regulao pela frutose 2,6difosfato (F2,6P):
a PFK uma enzima bifuncional (quinase-fosfatase) F2,6P o ativador mais potente da PFK consequentemente, inibidor da frutose 1,6-bifosfatase as aes recprocas asseguram que ambas as rotas no estejam completamente ativas ao mesmo tempo

Metabolismo de outras hexoses

As hexoses frutose, galactose e manose so combustveis metablicos importantes Estes so convertidos em intermedirios glicolticos, os quais so metabolizados pela via glicoltica

Viso geral do metabolismo de outras hexoses

A via das pentoses-fosfato pentosesTambm denominada desvio hexose-monofosfato O NADP gerado pela oxidao de G6P por meio de uma via alternativa a gliclise - a via das pentoses-fosfato Presente nos tecidos mais envolvidos na biossntese de lipdeos, como fgado, glndulas mamrias, tecido adiposo e crtex adrenal Presente em microrganismos fermentativos

A via das PentosesPentosesFosfato

Via das pentoses-fosfato pentosesCompreende trs estgios: 1. reaes oxidativas que produzem NADPH e ribulose-5-fosfato (Ru5P) 2. Reaes de isomerizao e epimerizao que transformam Ru5P em ribose-5-fosfato ou xilulose-5-fosfato 3. Reaes de clivagem e de formao de ligaes carbono-carbono

Via das pentoses-fosfato pentoses1

Reaes no-oxidativas

Reaes oxidativas

Reaes de isomerizao e epimerizao da ribuloseribulose-5-fosfato

isomerizao

epimerizao

Reaes de clivagem e de formao de ligaes carbonocarbono-carbono

transketolase

+ R5P

Diferentes modos de ao da via das pentoses-fosfato pentoses1. R5P e NADPH so necessrios: toda Ru5P so convertidas a R5P. Via oxidativa 2. R5P o mais requerido: R5P sintetizado pelas vias oxidativa, e no oxidativa 3. A clula precisa de NADPH e ATP: G6P convertido a R5P (via oxidativa), e este convertido a F6P e GAP, e usados na via glicoltica