Manipulando a captura de luz Acompletely estratgia diferente para otimizar a utilizao de luz o de reduzir o tamanho da antena no interior das

s clulas de algas [24?]. Isto pode ser conseguido pelo crescimento da intensidade de luz elevada, mas a alterao prontamente reversvel, de modo que as clulas se esto posteriormente transferidos para a luz baixa, a antenna tamanho aumenta novamente ao longo de algumas horas [25]. Alm disso, as clulas cultivadas em altos nveis de luz pode mostrar nveis significativos de fotoinibio. Manipulao de tamanho da antena atravs de nveis de nutrientes tem recebido menos ateno. No entanto, as condies de privao de nutrients levando ao aumento da produtividade de TAGs (ver prxima seco) podem tambm causar uma reduo nos nveis de clorofila por clula [26], sugerindo que a privao de nutrientes pode ter vrias consequncias benficas para matria-prima produo. Reduo das dimenses da antena tambm tem sido conseguida por mutao de genes responsveis tanto para os componentes do a antena, ou para a regulao da biognese antena. Para exemplo, Polle et al. [27] demonstraram uma reduo de mais de trs vezes na quantidade de PSII antenna em uma estirpe de C. reinhardtii falta de clorofila b como um resultado de uma mutao que afecta a clorofila um oxigenase necessria para a sntese de clorofila b. Talvez surpreendentemente, houve pouco efeito sobre o PSI. Da mesma forma, um C. reinhardtii tenso falta de um nmero de classes de carotenoids tambm mostrou uma reduo significativa do PSII tamanho da antenna mas pouco efeito sobre o PSI [28]. Tetali et al. [29] descobriu que reduo na expresso do TLA1 (truncado luz-Har- aquisio antena gene) de C. reinhardtii conduziu a uma reduo na o tamanho da antena PSII em cerca de uma meia, e uma reduo no tamanho da antena PSI por cerca de um tero. Wobbe et al. [30?] Demonstraram uma reduo PSII antena em C. reinhardtii seguindo mutao de resduos de cistena em NAB1, uma redox-regulado protena citoslica que reprime a trans- mento da protena antena PSII mRNA LHCII. Em todos estes casos, as estirpes modificadas exibiram maior eficincia fotossinttica em altos nveis de luz. Embora estes so resultados promissores, existe a possibilidade de que tamanho da antena reduzida poderia resultar na aptido reduzida, assim comprometer a produtividade global das cepas. Embora isto possa no ser um problema se estirpes so cultivadas em fotobiorreatores onde a contaminao pode ser con- controlada, pode levar a redues significativas na geral produtividade se cepas so cultivadas em tanques ao ar livre ou pistas em que a concorrncia a partir de organismos adventcios provvel. Finalmente, uma maior eficincia de utilizao da luz poderia resultar da utilizao de culturas mistas capazes de utilizer diferentes comprimentos de onda da luz incidente. Por exemplo, a cianobactria Acaryochloris marina, que contm d clorofila, pode utilizar a luz com comprimentos de onda mais longos do que um de clorofila baseados organismos [31], permitindo que ele viver em ambientes onde comprimentos de onda compatveis com os centros de clorofila um baseados reaco j sido absorvido. Em princpio, as culturas mistas, incluindo A. marina poderia, portanto, ser capaz de utilizar o pequeno quantidade de energia luminosa em comprimentos de onda mais longos que faria caso contrrio no ser utilizada. Maximizar o contedo de TAG em algas A produo de biodiesel fromalgae no depende apenas do concentrao

de biomassa alcanado, mas tambm sobre o oleo contedo das clulas individuais. A Figura 3 fornece um esquemtica das vias bioqumicas em causa. Em geral, produtividade e teor de lipdios so inversamente condies correlatas, e estresse, tais como privao de N ou fosfato, o que limita o crescimento celular, tambm aumentar teor de lipdios [12, 32]. Por exemplo, enquanto o lpido con- tenda de C. vulgaris cultivada em nutrientes suficientes con- dies entre 14% e 30% do peso seco [33], valores de at 70% de biomassa seca tm sido relatados sob deficincia de nutrientes [12]. O princpio subjacente pio que onde existe insuficincia de N para protena produo necessria para o crescimento de carbono, o excesso de fotossntese canalizada para storagemolecules, tais como TAG ou amido (Figura 3), e protena contentmay ser reduzida. Manipulao de fornecimento de nutrients Vrios estudos recentes tm descrito as condies de crescimento que pode ser usado para a escala industrial-up de lpido produo de algas. O processo de dois estgios sugerido por Rodolfi et al. [12?] Obteve 0,2 petrleo kg/m3/d para a foto- microalgas sinttico. Neste conjunto up-, as clulas foram cultivadas primeiro sob condies suficientes de nutrientes para a biomassa acumumento seguido por privao de nutrientes para a sntese de lpidos. No entanto, um estudo realizado por Stephenson et al. [26] descobriu que o estratgia mais eficaz para alcanar altos contedos de lipdeos em C. vulgaris foi para permitir que as clulas empobrecem theirNnaturally em vez de os transferir para um meio completamente falta de N. Muitas algas podem crescer heterotrophically com uma externa fonte de carbono, em vez de fotossinteticamente (Figura 3). Isto altera a razo N: C, e, assim, tem o mesmo efeito como algas que crescem com reduo dos nveis de N sob autotrfico condies, a produo de lpidos ou seja elevada. Para exemplo, Chlorella protothecoides tinha 55% em peso de lpidos quando cresceu heterotrophically, quatro vezes maior do que sob condies autotrficas [34]. Uma outra melhoria foi visto quando os acares foram adicionados a fotossinteticamente clulas cultivadas de protothecoides C., resultando em nveis lipdicos de at 11,8 kg/m3/d [35?]. Semelhantes aos protocolos descrito acima algas foram cultivadas em duas fases: na final do log de fase, as clulas de algas cultivadas autotrfico foram transferidos para um meio contendo 45 g / l de glucose. FIGURA PAG 7. Viso geral bsica do caminho de captura de carbono e biossntese de lipdios.Somente os principais passos so indicados para maior clareza, para os percursosdetalhados ver Refs. [5, 39]. Os cidos gordos precursoras so sintetizados de novo no cloroplasto, utilizando quer carbono fixado durante a fotossntese, ou a partir de um exgeno fonte de carbono orgnico, a natureza exata do que entra no cloroplasto desconhecido em algas (linha pontilhada). Os cidos graxos livres so exportados a partir do cloroplasto e, em seguida convertido para TAG no retculo endoplasmtico (RE), onde eles brotam em corpos de petrleo no citosol. Chave: (i) = acetil-CoA carboxilase (ACCase) e sintase de cido graxo (FAS), (II) = thioesterases de cidos graxos e acil-CoA sintetases, (III) = enzimas da biossntese de TAG, incluindo acil-CoA: diacilglicerol aciltransferase (DGAT), (iv) = formao do corpo de leo, e (v) = pirofosforilase ADP-glucose e da sintase do amido.

CONTINUACAO Ao mesmo tempo, os nveis de N foram reduzidos a fim de induzir a biossntese de lpidos. Sob estas condies, 58,4% teor de leo por peso seco foi conseguido, sem alterao na composio de cidos graxos [35]. Por outro lado, a fonte de acares ou de carbono orgnico outro um problema, como o potencial de contaminao das culturas por heterofungos e bactrias. Trficos. Engenharia metablica de vias de produo de lipdios Com o advento de seqncias genmicas e moleculares ferramentas para algas, existe a possibilidade de que metablica engenharia pode fornecer importante e significativo melhorias para a produo de biodiesel de algas, para exemplo, os rendimentos crescentes de tags, ou de engenharia caminhos para novas molculas de biocombustveis. o ultimo abordagem tem sido utilizada amplamente em leveduras e E. coli (para revises ver Refs. [36,37]). Por exemplo intro- produo de um monoterpeno sintase de manjerico em Saccharomyces cerevisiae resultou uma estirpe que no s sintetizados grandes quantidades do monoterpeno, geraniol mas tambm secretada para o meio de, evitando assim o necessidade de extrao [38]. Em plantas superiores, vrios estudos exploraram os efeitos da sobre-expresso de enzimas de sntese de lipdios na produo de TAG (revisado na ref. [39]). Pequena alterao no teor de leo foi observada em plantas com nveis elevados de acetil-CoA carboxilase, a taxa passo limitante na biossntese de cido gordo (Figura 3, passo (i)), possivelmente devido a complexa regulao deste enzima. Por superexpresso contraste, de thioesterases (passo (ii)) [40] para encorajar sada de cidos gordos a partir de do cloroplasto para o citosol onde / ER so TAGs enzimas sintetizados, e de produo de TAG (passo (iii)), tais como acilCoA: diacilglicerol aciltransferase (DGAT, [41]), mostrou-se muito mais bem sucedido em creso o rendimento de molculas de combustvel. estas observaes indicam a importncia de compreender o metabolism vias envolvidas, e sua regulao subjacente, em nomeadamente, o fardo aumento da energia de qualquer novo caminho, e provavelmente mais importante, a interde- cia das vias.

No momento, estamos longe de compreender plenamente o biologia molecular detalhado e regulao do corpo lipdico metabolismo em algas, e embora bioinformtica de seqenciados genomas de algas indica que o caminho do mesmo maneiras so susceptveis de operar, tem havido pouca exper- verificao imental de atividades enzimticas putativos [5?]. No entanto, dois trabalhos recentes tm feito alguns signifi- observaes significativas [42, 43??]. Como descrito acima lipdico, acumulao pode ser induzida por privao de N. Este processo induzvel fornece uma base til experimental para alteraes de observao em transcrito do gene e protena atividades metablicas durante o acmulo de lipdios das algas. Moellering e Benning [42?] Usado esgotamento N experi- tos, em combinao com supresso de RNAi, para avaliar mudanas na composio do lpido e protena em C. reinhardtii durante a formao de gotculas de gordura (Figura 3, o passo (iv)).

Em culturas transferidos para N-empobrecido meios de comunicao, que eram capaz de confirmar que aps 72 h o contedo total de cidos gordos , numa base por clula aumentou 2,4 vezes, dos quais 65% dos os cidos gordos totais foram esterificados para TAG em corpos de petrleo, quando comparado com a cultura inicial. Isto indicou que Formao TAG aumentada pela sntese de novo de cidos cidos. Anlise protemica identificou uma "gota lipdica grande protena '(MLDP), que era altamente abundante no lpido corpos. O MLDP abundncia de ARNm transcrito tambm acompanhou o aumento correspondente em gotculas lipdicas aps Depleo N. RNAi linhas de C. reinhardtii com uma% 55-60 reduo de theMLDPtranscript produzido gotculas lipdicas que tinham um dimetro de 40% maiores do que as linhas de controlo, o que implica que a funo desta protena a de regular tamanho de gotculas de gordura. Outra forma de rendimento lipdico aumentando excluir outros 'Redundante' caminhos no organismo, assim liberando precursor metabolitos para a produo de biocombustvel desejado. Wang et al. [43?] Com sucesso medido um aumento na abundana de gotculas lipdicas TAG no reinhardtii C. starchless mutante (sta6), deficiente em ADP-glucose-pyrophosphory lase (uma enzima essencial na produo de amido; Figura 3, passo (v)). Aps 48 h de depleo de N, clulas do tipo selvagem tinha aumentou seu contedo de gotculas de gordura at 15 vezes, mas no era um aumento de 30 vezes em gotculas lipdicas no starchless sta6 algas mutante. Em ltima anlise, isso resultou em uma maior concen- clula trao ofTAGper, como aps 18 h ofNstarvation o sta6 tiveram em mdia, 17 ngTAG (103 cells1) em comparao com 10 ng (103 cells1) nas clulas do tipo selvagem.

Concluso e perspectivas de futuro Ainda estamos de alguma forma de realizar a indubitvel potencial oferecido pelo biodiesel de algas. Anlises do ciclo biolgico sugerem que - usando metodologias atuais - o processo marginal em termos de balano energtico positivo e global potencial de aquecimento global. Esquemas potenciais para o scale-up da produo de algas precisa ser informado pelo cuidadoso processo modelagem e LCA desde a fase de design. Sem cuidados avaliao ful dos balanos energticos e ambientais impactos, existe um perigo de que muitos esquemas propostos seria sem sentido do ponto de vista de sustentar- capacidade. Alm disso, a falta de dados da vida real-demnio strations significa que as avaliaes econmicas so essencialmente hipottico, e h uma necessidade premente para conduzir piloto estudos em uma escala realista e sob clima predominante condies, de modo a avaliar produtividades susceptveis de ser alcanado na prtica. Finalmente, a seleo de lipdios de alta produ- cepas Cing otimizado para as condies climticas regionais e para a produo em grande escala de biomassa de algas, e pr- ferably tambm passveis de engenharia metablica, sera crucialmente importante. No entanto, as oportunidades de inovao e tangential abordagens para enfrentar alguns dos desafios so considervel, em particular por integrao da engenharia e biologia, uma vez que nem susceptvel de produzir um adequado soluo em isolamento. Por exemplo, uma alterao na lpido de algas composio sob condies de estresse freqentemente observado, o que significa que o leo no pode ser usado directamente para produo de biodiesel [12?, 32]. No entanto, tem sido relataram que a gua doce Parietochloris microalga verde incisa aumenta no

s sua produo TAG sob N fome, mas tambm a proporo de cido araquidnico, um nutraceutical valioso, em TAGs [44]. Neste caso, o valioso subproduto poderia tornar a produo de biodiesel a partir deste vivel espcies. Assim, estabelecer a viabilidade da produo de biocombustveis de algas, independentemente da entrada de energia, vontade ser um passo importante no fornecimento de uma plataforma para optim- zao, e tambm para o estabelecimento de linhas promissoras para o future pesquisa. Este essencialmente o que aconteceu com a primeira gerao de biocombustveis que, apesar das preocupaes com a comida preos, uso da terra e assim por diante, que levou ao desenvolvimento de infra-estrutura, polticas e know-how. Agradecimentos Somos gratos a muitos colegas que integram a Iniciativa em Bioenergia Cambridge para estimular discusses que ajudaram a formular nossas idias. Pedimos desculpas aos colegas, cujo trabalho no poderia citar devido ao espao limitaes. Financiamento em nossos laboratrios vem do Reino Unido Biotecnologia e Cincias Biolgicas do Conselho de Pesquisa, Engenharia e Fsica Sciences Research Council, Natural Environment Research Council, e Trust Leverhulme.