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Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

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ENTREVISTA

Luiz Antnio Barreto de Castro, Presidente do CTNBio


Entrevista concedida a Lucas Tadeu Ferreira e Maria Fernanda Diniz Avidos

a dcada de 60, a agricultura mundial ganhou um forte impulso com o melhoramento gentico de plantas, que permitia aos cientistas, atravs de cruzamentos, desenvolverem espcies mais produtivas. Na dcada de 70, um advento conhecido como engenharia gentica, possibilitava aos cientistas algo ainda mais fantstico: transferir para as espcies vegetais um ou mais genes de interesse, sem alterar as suas outras caractersticas. Essa cincia, denominada biotecnologia, foi ganhando fora no decorrer dos anos e hoje uma das ferramentas mais importantes para o desenvolvimento de uma agricultura mais produtiva, saudvel e menos dependente do uso de agrotxicos. Atravs da biotecnologia, a cincia pode obter respostas rpidas e seguras na resoluo de questes importantes, como resistncia pragas, doenas e estresses ambientais, como tambm no desenvolvimento de espcies mais produtivas e com maior valor nutricional. Pode-se dizer, sem dvida, que a biotecnologia um dos instrumentos mais fortes no contexto cientfico-tecnolgico atual, para se chegar a to almejada agricultura sustentvel. Por outro lado, o desenvolvimento da biotecnologia moderna trouxe tambm novas preocupaes com as questes de biossegurana e biotica, tanto a nvel laboratorial quanto ao que diz respeito a potenciais danos ecolgicos, diante da perspectiva de liberao de Organismos Geneticamente Modificados _ OGM's, no ambiente. Em janeiro de 1995, a biotecnologia no Brasil ganhou uma forte aliada: a Lei de Biossegurana (n 8.974), regulamentada atravs do Decreto n 1.752 , que estabelece e impe condies de segurana para as pesquisas nessa rea. Alm de regulamentar as atividades de biotecnologia, essa Lei prev tambm penalidades de at 20 anos de reteno para quem desrespeit-la. A regulamentao da Lei de Biossegurana levou criao da Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana _ CTNBio, em 29 de maio de 1995. A CTNBio composta por representantes do Poder Executivo, da comunidade cientfica, do setor empresarial que atua em biotecnologia, de representantes de rgos de defesa do consumidor, e de rgos legalmente constitudos de proteo sade do trabalhador e a Comisso responsvel pela regulamentao da biossegurana, no que se refere ao uso e liberao de OGM's no ambiente. Desde a sua criao, a CTNBio julgou e proferiu deciso em 64 processos administrativos, relativos ao uso de tcnicas de engenharia gentica no pas. Vrias questes de extrema importncia para o cenrio cientfico e tecnolgico do Brasil, como clonagem, importao e comercializao de OGM`s, entre outras, fazem parte do dia-a-dia dessa Comisso, e, para falar sobre essas questes, a revista BIOTECNOLOGIA, Cincia &Desenvolvimento entrevistou, no dia 1 de julho de1998, o Presidente da Comisso, Luiz Antnio Barreto de Castro. Luiz Antnio graduado em agronomia pela Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, tem mestrado em Tecnologia de Sementes, pela Universidade do Mississipi, EUA, PhD em Fisiologia de Plantas, pela Universidade da Califrnia Davis e Pos Doutoramento em Biologia Molecular na Universidade da california Los Angeles, tambm nos EUA. O Presidente da CTNBio tem uma longa experincia como professor e cientista, j prestou vrias consultorias em nvel nacional e internacional, foi professor na Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro de 1965 a 1981 e pesquisador do Centro Nacional de Pesquisa de Recursos Genticos e Biotecnologia _ Cenargen/Embrapa, de 1981 a 1996, onde, como pioneiro, foi o responsvel pela implantao e implementao do Programa de Biotecnologia da EMBRAPA da infra-estrutura, e em especial do laboratrio de engenharia gentica e formao de equipes especializadas nessa rea. Durante a entrevista, Luiz Antonio falou sobre o funcionamento da CTNBio, e destacou a importncia da biotecnologia para o desenvolvimento da agricultura no Brasil, enfatizando que a Comisso age com muita cautela e seriedade antes de autorizar a liberao de OGM's no ambiente.

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BC&D - Qual a misso da CTNBio? Luiz Antnio - A misso da CTNBio implementar a Lei de Biossegurana, que trata de todos os aspectos relativos a Organismos Geneticamente Modificados _ OGM's, e estabelecer minuciosamente regulamentaes que a Lei no prescreve. Toda lei, em geral, ampla e trata de questes conceituais, mas no especifica detalhes, por isso, tivemos que elaborar vrias Instrues Normativas para que a Lei pudesse ser aplicada. BC&D - Quantos membros tem a CTNBio e como so escolhidos? Luiz Antnio - So 18 membros, entre representantes da sociedade cientfica, dos Ministrios da Agricultura, Sade, Meio Ambiente, Relaes Exteriores, Educao e Cincia e Tecnologia, do setor industrial, dos rgos de defesa do consumidor e da sade do trabalhador. Os representantes da comunidade cientfica so escolhidos a partir de uma ampla consulta s instituies que atuam em cincia e tecnologia. Essa consulta to ampla, que dentro das universidades, os departamentos e associaes cientficas podem mandar currculos, indicando pessoas para comporem a Comisso, que a CTNBio os considera. Essas indicaes so selecionadas pelo Ministro da Cincia e Tecnologia e indicados ao Presidente da Repblica para nomeao. Os representantes dos Ministrios so apontados pelos respectivos Ministros e, por isso, no passam por nenhum processo de seleo no Ministrio da Cincia e Tecnologia. O Ministrio da Agricultura conta com dois representantes, um da rea animal, e outro da rea vegetal. O interesse do consumidor representado pela Procuradoria de Defesa do Cosumidor. No caso da sade do trabalhador, a indicao vem do Ministrio do Trabalho ou da Sade, j que ambos tm autonomia para indicar nomes com esse perfil. Quanto aos representantes do setor industrial, as indicaes so feitas por representantes da indstria ligados biotecnologia que, em geral, se articulam para definir esses nomes. BC&D - Como a Comisso est estruturada internamente e como o processo decisrio? Luiz Antnio - A Comisso tem um regimento interno, que estabelece os seus mecanismos de funcionamento, como comparecimento s reunies, direitos e deveres de cada membro, enfim, regras que so utilizadas e aceitas pelos membros da Comisso. Os integrantes no recebem

remunerao pelo comparecimento, e ns nos reunimos, quase sempre, uma vez por ms, em reunies longas, muitas vezes de dois dias, que so precedidas de reunies de comisses setoriais especficas. A Lei estabelece que alm da Comisso Tcnica Nacional, existem trs comisses setoriais especficas, localizadas nos Ministrios da Agricultura, Sade e Meio Ambiente. Essas comisses tratam de questes inerentes a essas reas e adiantam uma posio tcnica a respeito dos assuntos de sua competn-

cia, para serem tratados na Comisso maior, a Comisso plena. Em se tratando de questes urgentes, a CTNBio convoca reunies extraordinrias. Na maioria das vezes, as decises da Comisso so tomadas por consenso, mas com freqncia temos que votar e quando votamos, a deciso sempre por maioria dos membros presentes, sendo que o Presidente s vota quando h empate, ou seja, o voto minerva. As reunies so sempre formais, e as decises publicadas no Dirio Oficial e tambm nos boletins e relatrios anuais de atividades da CTNBio. BC&D - Quais so os critrios adotados para a concesso do CQB - Certificado de Qualidade em Biossegurana s instituies interessadas? Luiz Antnio - O Certificado de Qualidade em Biossegurana - CQB leva em considerao dois aspectos principais. primeiro, a natureza da atividade da instituio, ou seja, se cientfica, industrial, de teste de produtos transgnicos , ou simplesmente de armazenamento, o que provavelmente vai acontecer agora em funo da Lei de Proteo de Cultivares, e ainda as que comercializam OGM's e seus derivados . Em segundo lugar , os organismos que so objeto das atividades. Existem regras de

segurana que so mais rgidas do ponto de vista das condies de infra-estrutura e de manuseio do organismo, em funo da sua classificao. Ns utilizamos a classificao do NIH - "National Institute of Health", dos EUA, que classifica os organismos em dois grupos: grupo 1, que de um modo geral, no so perigosos, e grupo 2, que devem ser manipulados com maior cuidado, porque podem representar riscos. As instituies interessadas no CQB preenchem um formulrio prprio da CTNBio, de acordo com as instrues fornecidas pela CTNBio . Depois, descrevem as instalaes que dispem para exercer as atividades com OGM's. A Comisso analisa esses pedidos e concede ou no o CQB, Outra exigncia para a obteno do CQB que a instituio interessada tenha um comit interno de biossegurana, para que a prpria instituio supervisione e fiscalize as suas atividades com OGM's. Esses comits tm por obrigao legal relatar CTNBio qualquer problema ocorrido no desenvolvimento de pesquisas de engenharia gentica. Hoje, no Brasil, h mais de 100 laboratrios desenvolvendo pesquisas com OGM's e muitos desses laboratrios j vm funcionando h mais de 20 anos, mesmo antes da Lei de Biossegurana, sem que nenhum acidente tenha ocorrido. No caso de indstrias e liberaes no campo, a Comisso realiza inspees freqentes, ainda que at hoje no tenha havido problemas ambientais ou de outra natureza. A Comisso j concedeu mais de 70 CQB's, mas muitas instituies ainda no o solicitaram, o que dificulta muito o nosso trabalho. Ns no temos a inteno de agir de maneira "policialesca", o que queremos que a comunidade se conscientize da importncia de ter o seu Certificado e funcione de maneira legal. Enviamos cartas para as instituies que ainda no tm o CQB, informado-as que a Lei nos obriga a intervir nas agncias de fomento, para impedir o financiamento de projetos das instituies que no possuem o CQB, ou que pelo menos, no tenham o pedido protocolado na CTNBio. Essa ao da CTNBio foi incorporada a editais, como o do PADCT - Programa de Apoio ao Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico, por exemplo, que estabelece com clareza que instituies que trabalham com engenharia gentica que no tm, pelo menos, o protocolo solicitando o CQB, no tero projetos financiados pelo Programa. Aos poucos, os outros programas vo agir da mesma maneira. A CTNBio j se reportou todas as agncias de financiamento em nvel estadual e federal, chamando ateno para essa determinao. A Comisso j comunicou tambm aos rgos de fiscalizao do Governo
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os nomes das instituies que ainda no tm o CQB, para que sejam autuadas na forma da Lei. BC&D - E quais so os critrios para aprovao de projetos de pesquisa que envolvem OGM's? Luiz Antnio - Para instituies que atuam com organismos do Grupo 1, as exigncias do ponto de vista legal so a formao de um comit interno de biossegurana e o CQB. As instituies que atuam com organismos do grupo 2, alm do CQB, tm que enviar Comisso cpias dos projetos de pesquisa que desenvolvem para que possamos avaliar o grau de risco na manipulao desses organismos. BC&D - Quantos e quais produtos j foram liberados pela CTNBio e quais esto sendo analisados atualmente? Existe algum produto geneticamente modificado ou derivado que j est sendo comercializado no Brasil? Luiz Antnio - Ns j aprovamos aproximadamente uma centena de liberaes de produtos transgnicos no campo, principalmente plantas. Dentre essas liberaes, destacam-se a soja e o milho, alm da cana-de-acar e algodo. Houve uma solicitao da ABIOVE - Associao Brasileira das Indstrias de leos Vegetais para comercializar soja transgnica resistente a herbicida no Brasil, e que foi aprovada pela CTNBio. No houve at agora nenhuma desregulamentao de produto transgnico, ou seja, nenhum produto transgnico passou por fora do processo de desregulamentao a ser tratado como um produto comum. J existe na CTNBio, um pedido de autorizao para produo comercial e consumo de soja resistente ao herbicida "Roundup" e que dever ser analisado nas prximas reunies da Comisso. importante considerar que essa soja j foi desregulamentada h alguns anos nos EUA, Canad, Argentina, e at mesmo na Europa, de modo que a posio do Brasil at certo ponto confortvel, porque quando tomamos uma deciso, j temos uma longa experincia do que aconteceu em outros pases, para que possamos avaliar e assim basear a nossa deciso. BC&D - Entre esses produtos, o senhor poderia apontar quais OGM's foram desenvolvidos por instituies brasileiras? Luiz Antnio - A nica solicitao para teste no campo de produto transgnico desenvolvido por instituio brasileira, at
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o momento, foi a cana-de-acar da Coopersucar, resistente a herbicida, mas existem trabalhos em andamento envolvendo a cooperao entre Centros da EMBRAPA e instituies estrangeiras como a Monsanto para o desenvolvimento de transgnicos no Brasil BC&D - Os produtos transgnicos liberados pela Comisso tero que ser obrigatoriamente rotulados para orientar os consumidores? Qual a sua opinio sobre a questo da rotulagem? Luiz Antnio - Existe um grande debate internacional num frum denominado

Codex Alimentarius, da FAO - Organizao das Naes Unidas para Agricultura e Alimentao, sobre a questo da rotulagem. Recentemente, houve uma reunio em Montreal, no Canad, e eu tive a oportunidade de participar, como membro da Delegao Brasileira. Durante essa reunio, os pases apresentaram as suas posies com relao questo da rotulagem de OGM's. Me parece prudente que o Brasil acompanhe o andamento dessas discusses a nvel internacional, antes de tomar posies a favor ou contra a rotulagem. O posicionamento internacional certamente vai servir de base para a Organizao Mundial de Comrcio, que vai levar em considerao a deciso do Codex Alimentarius para estabelecer as regras de rotulagem. Portanto, o que sugerimos, pela CTNBio, comisso brasileira que trata desse assunto no Codex, foi no tratar essa questo de forma definitiva, antes de haver um consenso internacional. Mas a posio da Delegao Brasileira foi no sentido de no rotular nos alimentos oriundos de produtos transgnicos, o processo que os

origimou. A razo a seguinte: a engenharia gentica apenas mais um mtodo de melhoramento gentico, semelhana de muitos que j foram usados no passado, como a radiao gama, mutagnicos qumicos etc., e que no foram objeto de rotulagem, ainda que os melhoristas clssicos tivessem menos controle dos genes que estavam sendo manipulados. Com o surgimento da engenharia gentica ns temos absoluto controle na manipulao desses genes. Eu acho que colocar no rtulo que o produto foi desenvolvido por engenharia gentica no tem nenhuma relevncia para o consumidor, do ponto de vista da segurana alimentar. O importante informar a composio qumica do alimento, os ingredientes adicionados ao produto, se tem algum efeito colateral ou prejudicial, como por exemplo alergia a determinadas protenas. O consumidor tem que saber se o que ele est consumindo seguro ou no. Dizer no rtulo que o produto foi desenvolvido por engenharia gentica s tem uma conseqncia: a desconfiana do consumidor. Por outro lado, ns estamos convencidos que algumas instituies esto dispostas a banir a engenharia gentica do planeta, como o "Greenpeace" entre outras. O problema para eles no a rotulagem e sim a tecnologia utilizada. Mas o Brasil precisa da engenharia gentica e tem que agir com cautela em relao a esse assunto. Os pases da Europa e a ndia apoiaram a rotulagem de todos os produtos e derivados de engenharia gentica. O Brasil defendeu explicitamente uma posio contrria, e foi seguido por outros pases como EUA, Canad, Austrlia, Nova Zelndia, Argentina, Chile, Coria e Japo. H uma diviso no mundo hoje: de um lado, a Europa, onde esto as grandes multinacionais produtoras de inseticidas, sobretudo na Sua, que contra a engenharia gentica. O mais curioso que um plebiscito sobre a pesquisa com DNA, que inclui produtos transgnicos, recentemente feito na Sua mostrou que a populao aprova o uso desses produtos. Portanto, importante separar o que realmente preocupao com a segurana alimentar do consumidor de outros interesses econmicos que possam estar por traz dos discursos contra a engenharia gentica. Esses subterfgios podem atrasar o avano da engenharia gentica, que muito importante para o Brasil. BC&D - O senhor acha que a sociedade brasileira j est suficientemente esclarecida para consumir produtos geneticamente modificados ou derivados? Em caso negativo, o que o senhor acha que pode ser feito nesse sentido?

Luiz Antnio - No. Eu acho que a sociedade brasileira no est suficientemente esclarecida e isso j foi amplamente discutido nas reunies da CTNBio. Recentemente, fomos criticados por uma associao de produtores do Paran, que disse que a Comisso no divulga de maneira adequada os seus trabalhos. Eu acredito que devemos tornar a Comisso mais visvel, trabalhar mais com a imprensa, divulgando informaes sobre engenharia gentica. Nossa funo, entretanto, no advogar em favor da biotecnologia e sim atuar tecnicamente com relao biossegurana. Mas importante que a sociedade saiba o que a engenharia gentica, seus limites e possibilidades e esta informao cabe a industria realizar. Poucas pessoas no mundo sabem, por exemplo, que boa parte da insulina utilizada no mundo feita por engenharia gentica, e que, se ela for banida, certamente, os diabticos sero prejudicados. A discusso sobre a engenharia gentica no pode ser emotiva. A Comisso vai procurar trabalhar na conscientizao da sociedade quanto definio da engenharia gentica. No Brasil, nunca houve uma pesquisa de opinio pblica para saber como a sociedade v essa questo, e, mesmo no mundo, a realidade que poucas pessoas sabem o que a engenharia gentica. Ela muito confundida com a "panfletagem" dos filmes de fico cientfica, como "Os meninos do Brasil", "Parque dos Dinossauros" e muitos outros. BC&D - A CTNBio, de acordo com a Lei de Biossegurana, um rgo consultivo ou deliberativo? Luiz Antnio - A Lei estabelece que a CTNBio um rgo consultivo .Atravs de relatrios conclusivos os setores do Executivo (Ministrios da Agricultura, Sade e Meio Ambiente), autorizam as liberaes de produtos transgnicos no campo, e a fiscalizam. A importao de OGM's relacionados agropecuria depende igualmente do Ministrio da Agricultura. Os rgos de fiscalizao, por sua vez, agem consultando sempre formalmente a CTNBio, e no decidem sem parecer conclusivo da Comisso, para cada caso. BC&D - Atravs de que mecanismos a CTNBio fiscaliza e detecta se produtos importados ou desenvolvidos no Brasil so transgnicos? Luiz Antnio - A CTNBio atua em conjunto com os rgos de fiscalizao. Quase sempre, os tcnicos da Comisso acompa

nham os da fiscalizao na inspeo de experimentos de campo etc. Se h necessidade de coletar amostras, o tcnico da CTNBio traz o material para ser analisado em laboratrios credenciados, para que tenhamos uma concluso tcnico-cientfica sobre a fiscalizao. Existem mecanismos que possibilitam Comisso dizer se o produto ou no transgnico. No caso da soja resistente ao "Roundup" houve uma denuncia de que o produto estava sendo contrabandeado no Rio Grande do Sul e a prpria Companhia que tem interesse no produto colocou disposio da

a melhoria da qualidade do trabalho dos fiscais progressivamente, e a sociedade pode ficar tranqila que ns estamos trabalhando com muita seriedade. BC&D - Vrios segmentos representativos da sociedade civil cobram do Governo limites ticos para pesquisas com OGM's. A CTNBio pretende elaborar um cdigo de tica para essas pesquisas? Luiz Antnio - A Lei prev que a CTNBio elabore um cdigo de tica. S que existem segmentos da sociedade voltados para a tica, que uma questo filosfica e complexa, e no pode ser decidido isoladamente por uma Comisso, essencialmente tcnica. H membros da CTNBio que acompanham todas as aes no pas e no exterior voltadas para a discusso das questes ticas relativas biossegurana. Nesse momento, h questes difceis sendo tratadas em nvel internacional na Unesco com relao, por exemplo, ao Projeto Genoma Humano. Representantes da CTNBio tm comparecido a todas as reunies dessa natureza. Nesse caso especfico, o pesquisador Genaro Ribeiro de Paiva do Cenargen - Centro Nacional de Pesquisa de Recursos Genticos e Biotecnologia, da Embrapa, que membro da CTNBio, participou pela Comisso. O Brasil tem tido uma participao bastante competente nessas reunies, pelos relatrios que temos recebido. A questo do genoma humano crtica do ponto de vista tico, porque h uma preocupao mundial com a apropriao dos genes humanos. Outra questo difcil a da clonagem humana. A Lei brasileira e a CTNBio, em particular, tem uma posio muito firme contrria clonagem humana, o que foi amplamente divulgado pela imprensa, em resposta uma solicitao feita pela Presidncia da Repblica, preocupada com a possibilidade de que a mesma tcnica utilizada na clonagem da ovelha "Dolly" fosse aplicada em humanos. A CTNBio estabeleceu uma Instruo Normativa que probe utilizar essa tcnica em humanos. preciso agir com bastante cautela em relao tica. Precisamos estar inteirados com todas as implicaes ticas da engenharia gentica, principalmente no que se refere ao ser humano, de modo que possamos orientar sociedade e as instituies para utilizar adequadamente a engenharia gentica. BC&D - Os produtos geneticamente modificados que j so comercializados em pases de primeiro mundo, como nos EUA, por exemplo, ao ingressarem no Brasil, tm que ser sub metidos a
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Comisso uma sonda especfica para identificar o gene que confere resistncia ao herbicida. Existem ainda outras formas mais simples para constatar a resistncia a herbicida, como por exemplo, pulverizar a lavoura com o herbicida e avaliar o grau de resistncia. BC&D - O senhor acredita que os rgos de fiscalizao do Governo esto preparados para identificar materiais transgnicos que entram ou so desenvolvidos indevidamente no pas? Luiz Antnio - Na verdade, ningum tem condio de olhar uma planta e dizer se ela transgnica ou no, j que igual s outras. O que os rgos fazem trazer amostras para anlises laboratoriais. Por outro lado, a CTNBio tem trabalhado para melhorar a competncia dos fiscais, principalmente do Ministrio da Agricultura, que correspondem no momento a maior parte dos pedidos de liberao no campo, atravs de treinamentos, cursos, palestras, conferncias, de tal maneira que os fiscais saibam o que a engenharia gentica, plantas transgnicas etc. Essas estratgias da CTNBio tm possibilitado

testes? Luiz Antnio - At hoje todos os produtos transgnicos que ingressaram no Brasil foram submetidos a testes. Nenhum foi desregulamentado ainda como dissemos anteriormente. Apesar de o Brasil estar um pouco atrasado no processo, ns achamos prudente analisar cada caso e no simplesmente aceitar decises que foram tomadas em outros pases. A biologia , de fato, complexa, os ambiente mudam e no devemos subestimar essas questes. melhor ser prudente e fazer avaliao de riscos do que gerenciar o acidente depois que ele acontece. BC&D - A CTNBio tem conhecimento de algum produto geneticamente modificado que tenha sido aprovado em seu pas de origem e que, ao ser liberado, causou danos sade humana e ao meio ambiente? Luiz Antnio - Em 25 anos de pesquisas com OGM's, no h registro de nenhum acidente com produtos desenvolvidos por engenharia gentica. Ao contrrio, at hoje todos os produtos desenvolvidos a partir dessas tcnicas na rea de frmacos e agricultura foram produzidos e comercializados com segurana e trouxeram via de regra benefcios a sociedade . Pode ser que no tenham tido o efeito desejado em alguns casos , mas nunca causaram danos ao homem e ao meio ambiente. A presso contrria aos transgnicos pode ter vrias explicaes, uma delas que a engenharia gentica interfere com mercados bastante poderosos. O mercado de inseticidas, por exemplo, que movimenta bilhes de dlares, vai ser muito afetado pela engenharia gentica, pela reduo de inseticidas. Para o Brasil, essa reduo ser muito significativa, devido ao grande volume de importao desses produtos, que alm de aumentar o custo de produo da agricultura, poluem o meio ambiente e matam. BC&D - O Brasil, por ter a maior biodiversidade do planeta, centro de origem de diversas espcies. O senhor acha que os OGM's podem representar riscos nossa biodiversidade? Luiz Antnio - Essa uma pergunta difcil. Sempre que analisamos as questes de biossegurana, uma das maiores preocupaes que os OGM's no sejam introduzidos nos centros de origem das espcies vegetais. O Brasil no realmente centro de origem de muitas espcies vegetais. As preocupaes so sempre maiores quando lidamos com espcies com grande capacidade de cru8 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

zamentos, como por exemplo milho e algodo, do que com espcies fundamentalmente de autofecundao, como a soja e o arroz. Da maneira como temos trabalhado, os riscos de que a biodiversidade seja prejudicada por OGM's so praticamente nulos. Esse um dos papeis da CTNBio, garantir que no haja riscos para a biodiversidade. Os riscos so maiores onde esto localizados os centros de diversidade biolgica, como por exemplo, batata e tomate no Peru, milho no Mxico, soja na sia etc. BC&D - Existe alguma instituio brasileira que esteja utilizando recursos da nossa biodiversidade no desenvolvimento de produtos geneticamente modificados? Luiz Antnio - Lamentavelmente, ainda no. A engenharia gentica ainda no comeou a trabalhar genomas complexos. Entretanto, existem instituies brasileiras e estrangeiras preocupadas em

fazer "screening" de microrganismos e outras que estudam a possibilidade de utilizao de substncias derivadas da biodiversidade, como por exemplo da fauna. Eu acho muito importante que o acesso aos recursos genticos seja regulamentado. A aprovao do Projeto de Lei de Acesso aos Recursos Genticos, conhecido como projeto da Senadora Marina Silva, que est tramitando no Congresso Nacional, extremamente urgente. Mesmo que hoje existam instituies estrangeiras usando produtos da nossa biodiversidade, infelizmente ns no temos uma lei que nos permita atuar no sentido de regulamentar essa atividade. As atividades de bioprospeco de genes, que so muito importantes, ainda no tm uma base legal. Eu tenho muita esperana que at o fim do ano o Projeto de Lei de Acesso aos Recursos Genticos tenha sido aprovado. Sempre que eu tenho a oportunidade de tratar desse assunto com parlamentares, ou mesmo na Presidncia da Repblica, eu chamo ateno para este fato. Essa uma lei que est faltando. BC&D - Para finalizar, como o senhor situa o Brasil hoje com relao aos pases de primeiro mundo no desenvolvimento de OGM's? Luiz Antnio - Eu acho que o Brasil tem competncia e um pas atraente porque tem um mercado em expanso em muitas reas, como agricultura e outras relevantes como a de frmacos. O Brasil, certamente, ser um bom parceiro em nvel internacional para desenvolvimento de OGM's, especialmente na rea agrcola, pelo fato de ns j termos introduzido uma competncia satisfatria mais em termos de qualidade do que de quantidade e tambm porque a agricultura tem um enorme potencial de expanso. Alem disto temos agora leis modernas que regulam patentes cultivares e biossegurana . No ser surpreendente se num prazo relativamente curto contratos entre instituies estrangeiras e brasileiras, como a Embrapa, venham a proliferar. Eu sempre defendi fortemente a interao internacional como o nico mecanismo possvel para viabilizar o desenvolvimento de tecnologias que constituem o estado da arte. Ns temos que trabalhar rapidamente para intensificar a interao internacional. Hoje, o Brasil um pas que no atua de forma relevante nesse sentido. Na verdade, se olharmos com cuidado, so poucos os pases relevantes. A maioria dos produtos transgnicos foi produzida nos EUA e Canad, por multinacionais. H alguns tambm na Austrlia e na Europa.

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INSETOS
CONTROLE BIOLGICO DE
Os fungos como agentes de controle biolgico Possuindo o Brasil extensas reas ocupadas por agricultura intensiva e com boas condies climticas, os insetos-praga causam danos considerveis e prejudicam boa parte da colheita. Por causa disso, a agricultura brasileira torna-se a maior usuria de pesticidas qumicos, muitas vezes antieconmicos, e, na grande maioria, txicos, que, sendo inadequadamente manipulados, resultam problemas no s para os operadores da lavoura, como em pscolheita para os consumidores dos produtos tratados. Esse pesticidas fazem surgir ainda a mdio e longo prazo, efeitos de poluio ambiental e, pelo uso de dosagens e de alvos inadequados, resistncia de artrpodes a esses produtos com o consequente o desequilbrio biolgico. Tais problemas vm reforar a necessidade de incentivos a um manejo mais racional dos agroecossistemas, com emprego de prticas integradas, inclunda a resistncia varietal de cultivares, o uso de elementos sadios de propagao vegetal e, destacadamente, o uso do controle biolgico natural e do aplicado. Assim, poderia ser diminuida a utilizao dos pesticidas qumicos e passado o manejo de prticas culturais, inclusive seu controle biolgico, a ser considerado uma necessidade de proteo fitossanitria sustentvel. Existem vrios exemplos do aparecimento de novas pragas resistentes aos pesticidas convencionais. Entre os agentes de biocontrole de insetos, os fungos preenchem um importante papel, principalmente no caso de insetos dotados de aparelho bucal sugador (Hemiptera, Homoptera). Os fungos entomopatognicos, alm de constiturem 80% das enfermidades responsveis pelos surtos epizoticos dos ecossistemas e agroecossistemas, so de mais fcil disseminao, pois algumas espcies possuem a capacidade de penetrar atravs da cutcula ntegra de artrpodes e atingir diretamente a hemocele, at mesmo no caso de cochonilhas providas de carapaa (Evans & Prior, 1990). Em se
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Leon Rabinovitch, Clara de Ftima G. Cavados & Marli Maria Lima Pesquisadores do Instituto Oswaldo Cruz - FIOCRUZ Foto cedida pelos autores.

O CONTROLE BIOLGICO DE INSETOS NOCIVOS AGRICULTURA COM O EMPREGO DE FUNGOS IMPERFEITOS OU HIMOFICETOS

tratando de fungos imperfeitos como os Hifomicetos, os propgulos viveis (condios ou fragmentos de hifas), a colonizao do inseto e a exteriorizao do fungo sobre o cadver infectado permitem a sua rpida disseminao pelo vento. Acresce ainda que os Hifomicetos e seus gneros entomopatognicos mais representativos (Figura 1) desenvolvem-se com certa facilidade em substratos de culturas artificiais (meios de cultura), como gros de arroz. Tais meios de cultura constituem substratos simples e mais econmicos para obteno de biomassa com abundante produo de propgulos. Em se tratando de microorganismos mais especficos na patogenicidade certos insetos-alvo, verifica-se um certo escape na contaminao de artrpodes, tais como visitadores, polinizadores e inimigos naturais. Entre as desvantagens dos fungos como agentes de biocontrole ocorrem certas dependncias de condies ambientais adequadas (microclima da planta) para a induo de epizootias. Caberia tambm lembrar que o emprego dos entomopatgenos nem sempre dispensa a complementao de agroqumicos desde que haja uma compatibilidade biolgica com os produtos empregados. O uso de inseticidas microbianos acha-se tambm regulamentado em diversos pases, inclusive no Brasil. Tais medidas normativas prescritas por entidades governamentais inclui o registro dos bioinseticidas e acham-se ligados segurana oferecida aos usurios, impactos no meio ambiente e implicaes na sade pblica. Algumas dessas exigncias vm limitando o emprego dos defensivos biolgicos, inclusive dos obtidos atravs da manipulao gentica. Os fungos imperfeitos de maior evidncia no Brasil como entomopatgenos Os Hifomocetos ou fungos imperfeitos caracterizam-se pela ausncia do teleomofo (forma perfeita ou sexuada) no ciclo rotineiro e so includos na classe provisria dos Deuteromicetos. Essa ausncia normal da forma sexuada ou perfeita obriga-os, no processo de evoluo, a outros mecanis-

mos de recombinao gentica, que resultam no melhoramento de estirpes entomopatognicas, com ganhos em patogenicidade e adaptao ao meio ambiente adverso. Estudos conduzidos no Instituto de Gentica da "Escola Superior de Agricultura Lus de Queiroz", da Universidade de So Paulo, em Piracicaba, revelaram que alguns desses Hifomicetos poderiam ser induzidos ao melhoramento atravs de um ciclo parassexual. Ainda um novo processo, designado de parameiose, facilita a obteno de recombinantes, que por meio de ensaios laboratoriais, vm mostrando em alguns casos, sua superioridade comparada s linhagens parentais. Em algumas regies de clima ameno, os Zigomicetos, representados, principalmente, pelos gneros Entomophithora spp., Erynia radicans, Massospora sp. e outros, embora assinalados no Brasil e que causam, no raramente, epizootias em artrpodes, possuem certas exigncias nutricionais e climticas, o que torna mais difcil o cultivo de biomassas e de condies ideais para liberao do inculo. Portanto acham-se entre os Hifomicetos os fungos importantes e principalmente constitudos por formas filamentosas (hifas) septadas e geralmente frteis (conidiforos) que servem de suporte aos condios isolados ou agregados (Figura 1) e de colorao clara/hialina (Moniliceas) ou escura (Dematiceas). Os Hifomicetos tm apresentado entre ns maior potencialidade de ser empregado no controle biolgico aplicado, tanto o clssico (patgenos exticos regio) como o aumentativo (patgenos nativos na regio). Esses entomopatgenos, alm de um ciclo de saprognese que mantm um inculo vivel em substratos orgnicos, possuem condios ou clamidosporos (Cladosporium) persistentes e viveis na rea de influncia do inseto praga. Entre os Hifomicetos de maior uso no Brasil, destacam-se os gneros: Metarrhizium spp., Beauveria spp., Nomurea rileyi e Verticillum lecanii, classificados dentre as Moniliceas e, Cladosporium spp., como nica Dermaticea. Seguem-se comentrios sobre o uso de tais fungos na agriculturabrasileira. Metarrhizium anisopliae (mais conhecida) e M. flavoviride tm potencialidade no biocontrole de gafanhotos na regio Centro-Oeste (vidos e Ferreira, 1977). A primeira espcie, M. anisopliae, tem sido o entomopatgeno mais utilizado, principalmente na agroindstria canavieira. Foi primeiramente manipulada por Metschikoff em 1897, no combate a larvas de um besouro de batata doce (Alves, 1986). O fungo constitudo de duas variedades, a anisopliae ou minor e a major, de acordo com os tamanhos dos condios, sendo a primeira a

mais utilizada entre ns. O entomopatgeno apresenta uma grande variedade gentica decorrente do processo de heterocariose, que ou resulta no aparecimento de algumas raas com diferentes graus de virulncia, especificidade a vrios insetos e adaptao a condies ambientais diversas e, com algumas estirpes, resistncia aos raios ultravioleta. Os caracteres mais considerados foram: a produo de condios em substratos naturais (arroz), boa exteriorizao em cadveres de insetos, garantindo a presena do inculo, e tolerncia aos raios ultravioleta. O ciclo de relaes patgeno-hospedeiro (M. anisopliae x cigarrinha), ilustrado na Figura 2. Aps sua introduo no controle cigarrinha-das-folhas-de-cana-de-acar, no Nordeste, o fungo passou a ser utilizado em larga escala (Guagliumi, 1970).

Figuras 1 e 2: Pulges (adultos e formas jovens) e mosca-branca (adultas e formas jovens) so controlados com aplicaes de fungo Cladosporium herbarum.

O entomopatgeno tem sido utilizado no controle das cigarrinhas-das-pastagens, Deois flavopicta e Zulia enteriana, observando-se em todos os casos que as reasfoco tratadas achavam-se abaixo do nvel de controle, o que Fawcett (1948) denominou de ponto de saturao. O problema tem se manifestado com gravidade nos Estados de Minas Gerais, Bahia e Rio de Janeiro.O fungo produz um metablito, a destruxina, incuo para o homem. O estudo de diversos isolados de M. anisopliae provenientes de algumas regies do Brasil permitiu a seleo de alguns isolados mais eficientes no biocontrole de diversos insetos-pragas (Alves, 1986). Com relao formiga sava (Atta sexdens) foi realizado um ensaio na Jari Florestal, no Amap, que apresentou um controle em 60 % dos formigueiros tratados com o fungo cultivado em gros de arroz, que foram dispostos sob a forma de iscas, protegidos contra a chuva (copinhos impermeveis invertidos) e distribudos pelos olheiros da sede do sauveiro. O isolado foi cedido pelo Dr. Aurino F. de Lima, da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (Figura 5). J existem formulaes especiais do fungo registradas no Brasil sob o nome de Metabiol e de Biomax. Outro Hifomiceto menos manipulado que o fungo anterior, porm mostrando bom potencial entomopatognico o Beauveria bassiana, que ocorre em condies naturais enzoticamente ou provocando epizootias em algumas ocasies propcias (Alves, 1986). Observao pessoal de uma epizootia ( Robbs, no publicado, 1986) foi registrada em Alegre, ES, zona nobre da cafeicultura capixaba, com ndice de ataque de 100% do fungo a adultos da broca-do-caf (Hypothenemus hampei). A epizootia do fungo deu-se por ocasio da penetrao do besouro nas cerejas ainda verdes do cafeeiro (Coffea arabica). O fato indica a otimizao da poca de infestao dos adultos para a introduo da biomassa do entomopatgeno no agroecossistema cafeeiro, em uma fase de elevada suscetibilidade do inseto, o que, consequentemente, exige a necessidade de se conhecer a bioecologia da praga para que se tenha o bom xito no controle biolgico. O fungo tambm metaboliza toxinas, no caso a beauveracina. Nos Estados Unidos, o fungo comercializado sob as denominaes de Boverin e na Unio Sovitica, de Biotrol FBB. O fungo Nomuraea rileyi vem sendo muito estudado nos ltimos anos como entomopatgeno, particularmente de larvas (lagartas) de Lepidopteros.

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Figura 3: Formiga (soldado) Atta sp. atacada pelo fungo M. anisopliae (inoculao artificial). No Brasil, os produtores de soja j conhecem a sua grande eficincia no controle biolgico natural da lagarta da soja (Anticarsia gemmatalis) coincidindo com perodos chuvosos e temperaturas amenas. A alternncia de perodos secos (veranicos) e chuvas importante na disseminao dos condios do fungo, particularmente nas fases pr-enzoticas (Alves, 1986), que nos Estados Unidos, so comercializados sob o nome de Mycar. Um Hifomiceto que muito freqentemente ataca cochonilhas (Hemiptera, Homoptera) o entomopatgeno Verticillium lecanii, descrito no Brasil por Viegas (1939); afetando a cochonilha verde (Coccus viridis) do cafeeiro e de outras plantas no Estado de So Paulo. O Entomopatgeno, alm de cochonilhas, ataca igualmente pulges e moscas brancas (Aleirodidea), Figuras 3 e 4, mantendo no agroecossistema tais populaes em nveis de equilbrio ou no limiar de no causar danos. As condies favorveis para o incio de epizootias situam-se entre 20 e 25 C, com a umidade elevada do ar, limitando as aplicaes do fungo. Na Gr-Bretanha, o fungo vem sendo bastante utilizado em estufas, contra pulges (afdios) e moscas brancas, sendo comercializado sob a denominao de Vertalec e de Mycotal, e so produtos compatveis em mistura com alguns inseticidas utilizados. Quanto ao Hifomiceto Cladosporium spp., o nico entomopatgeno includo na famlia Dematiaceae, foi assinalado por Bitancourt (1935) parasitando pulges e mosca branca em folhas de mandioca, no Estado de So Paulo, identificado como C. herbarum var. aphidicola, sendo denominado, respectivamente, de mofo e dos afdios e aleiroddeos. Viegas (1940), estudando o mesmo fungo em culturas de mandioca, nos municpios de Campinas e Piracicaba, no Estado de So Paulo, identificou-o como Cladosporium herbarum, sugerindo maiores estudos quanto taxonomia do patgeno. O mesmo autor
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nicotianae), com alta eficincia na regio do sul no obteve a mesma resposta em acerola no semi-rido do Rio Grande do Norte. Os ensaios posteriores levados a efeito em pulges (Aphididae e mosca branca (Aleyrodidae) indicam as possibilidades de explorar o potencial do Cladosporium spp. sobre insetos que excretem substncia aucarada, que tem sido como principal porta de entrada do fungo. Esse entomopatgeno poder ser classificado como oportunista. Algumas tentativas feitas para o controle da mosca branca Bemisia argentifolii na cultura do melo no tem demonstrado bons resultados, possivelmente por faltar uma estirpe mais especializada ou uma tcnica mais adequada de aplicao no campo.

verificou que, inicialmente, o fungo coloniza as gotculas aucaradas habitualmente expelidas pelos insetos (saprognese) atravs da abertura anal, passando posteriormente, para o interior do corpo e introduzindo um ciclo de parasitismo oportunista. Fawcet (1948) menciona bibliografia de Cladosporium spp. afetando diversas cochonilhas e considerando o fungo como simples saprfita, semi-parasita ou parasita fraco. Farias e Santos Filho (1992) isolaram os fungos Botrytis sp. e Cladosporium sp. atacando ninfas de mosca branca (Aleurothrixus aepim) das folhas de mandioca na Bahia, e cultivando-os em meio gar/ arroz. Os propgulos da biomassa constitudos por suspenso de condios (3x105 mL) pulverizados sobre as colnias de insetos apresentou, inicialmente, uma boa mortalidade (3 dias); aps 10 dias a contagem foi de 47,8% para Botrytis e somente de 28,6% para Cladosporium. Robbs (1994), trabalhando com uma estirpe de Cladosporium herbarum isolada de ninfas de mosca branca da mandioca, em Santa Vitria, no Estado de Minas Gerais, em plena estiagem no cerrado, obteve timos resultados (90%) sobre pulges (Aphis gossypii e Myzus persicae) e atomizou suspenses de propgulos de biomassa em cerca de 400 hectares de aceroleira (Malpighia emarginata) na fazenda da MAISA (Mossor agroindustrial S. A ) no Rio Grande do Norte. As aplicaes eram realizadas nos focos infestados e os resultados asseguraram eficiente controle biolgico dos pulges. O mesmo xito foi obtido no controle do pulgo (A. gossypii) do cajueiro ano. Atualmente a empresa vem empregando o entomopatgeno para o controle regular dos pulges da acerola e do cajueiro, banindo o uso semanal de inseticidas, para assegurar a eliminao de pulges na rea. O Cadosporium cladosporioides utilizado por Sudo e outros (1996) para o controle do pulgo do fumo ( Myzus

Bibliografia citada: ALVES, S.B., 1986. Fungos Entomopatognicos. In: S. B. Alves (coordenador). Controle Microbiano de Insetos. Ed. Manole, So Paulo, Brasil p. 73-126. VIDOS, M.F.D. e FERREIRA, L.F. 1977. Gafanhotos: a maldio milenar. Biotecnologia. Cincia e Desenvolvimento. Ano 1, n 2 (julho/agosto) p. 8-11. BITANCOURT, A.A. 1935. Relao das doenas e fungos parasitas observados na Seo de Fitopatologia durante os anos de 1933 e 1934. Arquivos Inst. Biolgico, So Paulo, 6: 205-211. EVANS, H.C. e PRIOR, C. 1990. Entomopathogenic fungi. In: D. Rosen (Editor). Armored Scale Insects: Their biology, natural enemies and control. Elsevier Science Publishers, Amsterdam, p. 3-17. FARIAS, A.R.N. e SANTOS FILHO, H.P. 1992. Controle de Alerothrixus aepim com os fungos Botrytis sp. e Cladosporium sp. na cultura de mandioca./ n: III SICONBIOL. Simpsio de Controle Biolgico. guas de Lindia. EMBRAPA-CNPDA, p.275. FAWCETT, H.S. 1948. Biological control of citrus insects by parasitic fungi and bacteria, In: The citrus industry: production of the crop. Ed. L. D. Bachelor and H. Weber. 5th edition. University of California Press, Berkley and Los Angeles. p. 627-664. GUAGLIUMI, P. 1970. A cigarrinha das pastagens ataca a cana-de-acar no Nordeste do Brasil. Brasil Aucareiro, Rio de Janeiro, 76 (4): 89-91. ROBBS, C.F. 1994. Relatrio de atividades fitossanitrias na MAISA (Mossor Agroindustrial S.A., Mossor, RN). No publicado.

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Recifes Artificiais Marinhos


INCREMENTANDO A PESCA NAS COMUNIDADES COSTEIRAS DO CEAR

Raimundo Nonato de Lima Conceio, M.Sc. Eng. de Pesca, M.Sc. Biologia Marinha Coordenador do Projeto Recifes Artificiais Diviso de Oceanografia Bitica do Laboratrio de Cincias do Mar Universidade Federal do Cear Av.Abolio 3207, Fortaleza-CE-60165-081 nonato@labomar.ufc.br Cassiano Monteiro Neto, Ph.D. Prof. do Departamento de Engenharia de Pesca Diretor da Diviso de Pesca do Laboratrio de Cincias do Mar Universidade Federal do Cear Av.Abolio 3207, Fortaleza-CE-60165-081 monteiro@ufc.br
Fotos e ilustraes cedidas pelos autores.

INTRODUO O uso de recifes artificiais para incrementar a produtividade pesqueira, tem sido uma prtica comum em pases onde a pesca representa uma das principais fontes de alimento e renda. Os primeiros registros datam do sculo XVIII, no Japo, enquanto que nos Estados Unidos, onde os recifes artificiais tinham carter meramente recreativo, seu uso para fins comerciais teve incio por volta de 1830. J na Austrlia e Frana, essa prtica mais recente, com iniciativas datando de 1960 (Meier, 1989). Na dcada de 50, Cuba comeou a utilizar recifes artificiais para incrementar a pescaria de lagostas, utilizando inicialmente estruturas com troncos de palmeiras, pneus e, mais recentemente, estruturas pr-fabricadas de concreto, conhecidas no local por casitas (Cruz et al., 1986).

No Brasil, so poucas as informaes sobre a utilizao de recifes artificiais nas pescarias. Na regio nordeste, pequenos pesqueiros particulares (marambaias) so construdos por pescadores artesanais, que aglomeram material no fundo marinho. No municpio de Itarema, Cear, as marambaias tradicionais so construdas com feixes de madeira de mangue, formando uma estrutura piramidal no fundo do mar. Sua funo principal a de proporcionar um habitat propcio para a lagosta, um dos recursos pesqueiros mais importantes do estado (Figura 1). As restries impostas pelas leis ambientais, que probem o desmatamento dos manguezais, bem como a ao de mergulhadores piratas, que destroem a construo, tm levado os pescadores de Itarema a procurar materiais alternativos de baixo custo e com boa durabilidade no meio marinho, para a construo dos recifes. Nesse aspecto, pneus velhos mostram um excelente potencial para a atividade, devido ao baixo custo de instalao e ao tempo de vida praticamente indefinido. Dentro dessa perspectiva, pesquisadores do Grupo de Estudos de Recifes Artificiais (GERA) do Laboratrio de Cincias do Mar da Universidade Federal do Cear desenvolveram uma estrutura modular feita de pneus velhos, que estimula a aglomerao e a permanncia de organismos pelgicos e bentnicos de importncia econmica (peixes, crustceos, algas e outros). O projeto j foi implantado em diversos municpios do litoral cearense e conta com o apoio da respectiva prefeitura, da Fundao Nacional de Sade (FNS), Petrobrs, IBAMA, Secretaria Estadual do Meio Ambiente (SEMACE) e Fundao Cearense de Auxlio Pesquisa (FUNCAP).

METODOLOGIA DE IMPLANTAO Os recifes artificiais construdos pelo GERA so formados por um conjunto de 16 estruturas que contm 8 mdulos com 8 pneus cada uma (64 pneus/estrutura), perfazendo um total de 1.024 pneus (Figura 2). As reas escolhidas para a instalao dos recifes localizam-se em profundidades de 20 m, em substrato arenoso de baixa produtividade pesqueira. reas potenciais para a instalao dos recifes so localizadas com a ajuda de um sistema de posicionamento global (GPS) e inspecionadas in loco por mergulho autnomo (SCUBA) para confirmar a ausncia de bancos de algas ou cabeos rochosos. A comunidade participa de todas as etapas de construo dos recifes, contribuindo com a mo de

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Figura 3: Distribuio dos recifes artificiais de pneus implementados na costa do Cear desde 1993. Notar que as estruturas esto mais concentradas no litoral leste do Estado, onde as comunidades apresentam maior nvel de organizao social e econmica.

obra e com as embarcaes para o transporte do material at a rea escolhida. Trs meses aps a instalao do recife, a pesca liberada, mantendo-se, todavia, um monitoramento constante da captura. So registrados diariamente o nmero de indivduos e o peso total das espcies capturadas por pescadores. Aps a concluso do projeto, com a elaborao do relatrio final e divulgao dos resultados, a administrao e manuteno dos recifes artificiais passa a ser de responsabilidade da prpria comunidade (Conceio et al., 1996). Muito embora os recifes desempenhem o papel de um atrator artificial de biomassa, sua capacidade produtiva limitada. Portanto, cada recife beneficia apenas uma parcela reduzida de pescadores, sendo necessrio que se implantem vrios recifes para atender s demandas da comunidade, evitando-se a sobrepesca dos estoques. RESULTADOS Entre janeiro de 1994 e janeiro de 1998, foram instalados 21 recifes artificiais em diferentes municpios costeiros do Estado do Cear (Figura 3). Os resultados apresentados correspondem aos recifes artificiais da Praia da Baleia (Itapipoca), cujo monitoramento ocorreu durante um perodo de 19 meses. Praticamente todos os recifes instalados no Cear encontram-se atualmente sob administrao das Colnias de Pesca ou Associaes de Pescadores. Os recifes da Praia da Baleia foram montados sobre fundo arenoso, com

pequenas e raras concrees calcreas, sobre as quais se fixam tufos de macroalgas, principalmente rodofceas, e colnias de hidrozorios (Cnidaria: Hydrozoa). Estudos da endofauna feitos nos primeiros meses de instalao dos recifes, revelaram a presena de poliquetos (Annelida: Polychaeta: Syllidae) e anfpodos (Crustacea: Amphipoda), estes ltimos associados s algas. A instalao dos recifes em reas despovoadas e de baixa produtividade contribui para a criao de novas reas de pesca, induzindo a uma redistribuio da biomassa a partir de reas de pesca tradicionais. Chou (1991) comenta que, devido competio das estruturas artificiais com as formaes naturais, a colocao de recifes em reas produtivas causa mais danos ao ambiente do que sua instalao em reas pobres. Aps o lanamento de um conjunto de 1.000 pneus, a rea ocupada pelos

Cangulo (Balistes vetula) fotografado no recife. Uma espcie caracterstica de recife de coral habitando as estruturas das marambaias construdas em fundo arenoso. A espcie tem aproveitamento comercial, e esteve entre as 15 mais abundantes nos recifes da praia da Baleia.

recifes foi de aproximadamente 0,5 ha, dependendo da disperso dos mdulos em cada localidade. A observao de grandes cardumes de peixes na periferia dos recifes, sugere que (mesmo ocupando uma rea relativamente pequena) sua influncia pode se expandir num raio muito alm das estruturas fsicas. Outros materiais, como o concreto e estruturas de ferro na forma de sucatas, podem ser mais eficazes na atrao de peixes que pneus velhos. Porm, representam maiores custos e sua distribuio final no fundo do mar no garante gran-

des concentraes de espcies (Brock & Noris, 1989; Chua e Chou, 1994). Entre janeiro de 1995 e julho de 1996, foram capturados um total de 7.695 indivduos e 11.521 kg, distribudos entre 27 espcies. Em termos comparativos com a produo local controlada pelo IBAMA, os recifes instalados na praia da Baleia produziram, em 1995, o equivalente a 5,5% das capturas. A diversidade de espcies observada nesse experimento aproximou-se bastante dos valores observados em recifes artificiais de pneus estudados por outros autores (Brock e Noris 1989; Chua e Chou 1994). As espcies mais abundantes em nmero de indivduos capturados foram o ariac, a lagosta, a sardinha e a cavala (Tabela 1). Considerando-se o peso total capturado, cinco espcies, a cavala (22,7%), o beijupir (18,7%), a arraia (18,5%), o ariac (15,3%) e a garajuba (3,3%) representaram 88,5% da captura. Quatro espcies (ariac, xira, paru e beijupir) foram capturadas durante todo o perodo nos recifes. Outras seis espcies, dentre elas a cavala, a garajuba, a arraia e a biquara, espcies de maior importncia comercial, apareceram a partir do 2 trimestre, enquanto que o cangulo, a moria e a carapitanga foram capturadas somente a partir do 3 trimestre. Esta sequncia de espcies pode refletir o processo contnuo de colonizao dos recifes, onde peixes pequenos recrutam primeiramente s estruturas, sendo seguidos por peixes maiores. Tambm foi observado que o peso mdio dos indivduos capturados aumentou consideravelmente do incio ao fim do perodo de monitoramento (Grfico). Stone et al. (1979) sugerem que, num primeiro momento, os juvenis recrutados pelo recife servem de alimento para espcies maiores. Porm, em um segundo momento, os juvenis sobreviventes crescem e formam um estoque prprio do recife artificial. Betancourt et al. (1984) consideram que se o recrutamento em recifes artificiais provm fundamentalmente de um contingente maior de juvenis que no encontram disponibilidade de alimento ou proteo nos recifes naturais, esses artificiais no comprometem portanto, a capacidade de auto manuteno das reas naturais. Dessa forma, deve-se reconhecer o papel importante das estruturas artificiais na reduo da mortalidade natural, preservando uma frao da biomassa natural que, possivelmente, seria perdida dentro dos processos de competio e predao na comunidade marinha.
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TABELA 1: Nmero de indivduos, por espcie, capturados por trimestre nos recifes artificiais da Praia da Baleia. Os grupos representam a frequncia de ocorrncia das espcies por trimestre, no perodo de 1995 a 1996.

Pescadores da praia da Baleia a bordo do barco de pesquisas Prof. Martins Filho do Labomar/UFC, preparando as estruturas de pneus para o lanamento no mar. Os pescadores participam de todas as etapas, desde a confeco dos mdulos at o lanamento e monitoramento da pesca nos recifes artificiais.

Pescadores da praia da Baleia a bordo do barco de pesquisas Prof. Martins Filho do Labomar/UFC, preparando as estruturas de pneus para o lanamento no mar. Os pescadores participam de todas as etapas, desde a confeco dos mdulos at o lanamento e monitoramento da pesca nos recifes artificiais. Talvez uma das maiores preocupaes ambientais sobre a instalao de recifes artificiais de pneus no mar seja o efeito a longo prazo desses materiais no meio aqutico. A hiptese de contaminao pela decomposio dos pneus no mar descartada por Pollard (1989) e Tizol (1989), j que o processo de degradao dos pneus muito mais lento que a sua colonizao e cobertura por

organismos incrustantes. Alm disso, a grande disponibilidade no mercado, o baixo custo de aquisio, o fcil manuseio e a durabilidade, fazem dos pneus um material bastante atraente para a construo de recifes artificiais. Grfico: Peso mdio total dos indivduos capturados por trimestre entre janeiro/95 e julho/96. As espcies de grande porte (arraia e beijupir), apresentam maiores flutuaes devido ao alto peso individual, enquanto que as espcies de menor porte (ariac, biquara, garajuba), apesar de apresentarem pequenas variaes no peso mdio, estas variaes so muito significativas. Nesse projeto, o custo para a implantao de um recife com 1.000 pneus ficou em torno de R$3.500,00. As variaes decorrem da maior ou menor participao dos pescadores na preparao do material e da disponibilidade das embarcaes. Esse valor pode ser considerado baixo, levando-se em conta o retorno financeiro que um recife artificial pode oferecer a mdio prazo. Membros da comunidade da Barra

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da Sucatinga, Beberibe (Cear), recebendo orientao dos tcnicos do GERA/ Labomar/UFC para a preparao das estruturas de pneus para posterior instalao no mar. Cada estrutura beneficia um grupo de pescadores da comunidade, e uma comunidade pode ter mais de um recife instalado, beneficiando assim um nmero maior de pescadores daquela regio. Muito embora a construo de recifes artificiais de pneus seja uma alternativa barata e apresente resultados positivos para o aumento da produtividade pesqueira em comunidades de pescadores no litoral do Cear, por s ss, os recifes no podem ser tomados como uma receita de bolo para resolver os problemas inerentes ao setor. Sua aplicabilidade limitada e deve ser fundamentada em um extenso programa de estudo e monitoramento, desde o momento da implantao at a manuteno das estruturas. Ao mesmo tempo, a interao participativa entre tcnicos e pescadores, que promove a integrao da comunidade no processo de gesto dos recifes artificiais, um fator decisivo para a produo sustentvel dos recursos e para o sucesso desse empreendimento. Mergulhador inspecionando os recifes artificiais instalados na praia da Caponga, Cascavel, Cear. A manuteno das estruturas feita mensalmente, para prevenir a ruptura das amarras e a consequente desagregao do recife, bem como a disperso dos pneus no fundo

do mar pela ao das ondas e das correntes. BIBLIOGRAFIA Betancourt, C.A.; Sansn, G.G. e Montes, C.A. Primeras etapas en la colonizacin de refugios artifiMergulhador inspecionando os recifes artificiais instalados na praia ciales. I da Caponga, Cascavel, Cear. A manuteno das estruturas feita Composicin mensalmente, para prevenir a ruptura das amarras e a consequente y conducta de desagregao do recife, bem como a disperso dos pneus no las comunidafundo do mar pela ao das ondas e das correntes. des de peces. 44, n. 2, p. 1051-1054, 1989. Revista de Investigaciones Marinas, v. V, n. 3, p. 77-89, 1984. Pollard, D. Artificial habitats for fisheries enhancement in the Australian BROCK, R.E. & NORRIS, J.E. An region. Marine Fisheries Review, v. 51, n. analysis of the efficacy of four artificial 4, p. 11-26, 1989. reef designs in tropical waters. Bull. Mar. Sci., v. 44, n. 2, p. 934-941, 1989. STONE, R.B.; PRATT, H.L.; PARKERJr., P.O. & DAVIS, G.F. A comparasion of CHUA, C.Y.Y. & CHOU, L.M. The use fish population on an artificial and natuof artificial reefs in enhancing fish comral reef in the Florida keys. Mar. Fish.Rev., munities in Singapore. Hydrobiologia, n. n. 41, p. 1-11, 1979. 285, p. 177-187, 1994. CHOU, L.M. Some Guidelines in the establishment of artificial reefs. Tropical Coastal Area Management, p. 4-5, 1991. CONCEIO, R.N.L. et al. - Recifes Artificiais: um incremento na produtividade em comunidades costeiras do Estado do Cear. I SEMINRIO INTERNACIONAL SOBRE PESCA ARTESANAL. Fortaleza. Setembro, 1996. Crz, R. et al. Ecologa de la langosta (Panulirus argus) al SE de la Isla de la Juventud. I - Colonizacin de arrecifes artificiales. Revista de Investigaciones Marinas, Havana, v. VII, n. 3, p. 3-17, 1986. IBAMA/CEPENE - Atratores Artificiais na Paraba. Informe CEPENE, Tamandar, n. 11, 1994. MEIER, M.H. A Debate on responsible artificial reef development. Part I. In support of public and private sector artificial reef building. Bull. Mar. Sci., v.
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Tizol, R. Manual de Arrecifes Artificiales de Neumticos. Reporte Tcnico del Centro de Investigaciones Pesqueras, n. 8, 27 p., 1989.

Membros da comunidade da Barra da Sucatinga, Beberibe (Cear), recebendo orientao dos tcnicos do GERA/ Labomar/UFC para a preparao das estruturas de pneus para posterior instalao no mar. Cada estrutura beneficia um grupo de pescadores da comunidade, e uma comunidade pode ter mais de um recife instalado, beneficiando assim um nmero maior de pescadores daquela regio.

O cajueiro encontrado praticamente em todos os estados brasileiros, contudo adapta-se melhor s condies ecolgicas do litoral do Nordeste. Existe no Pas uma tradio de aproveitamento do pednculo ou falso-fruto do cajueiro que reside na transformao em produtos variados como sucos, sorvetes, doces diversos (compota, cristalizado, ameixa, massa), licor, mel, gelias, cajuna, refrigerantes gaseificados e aguardente. H relatos de alguns desses produtos que datam do sculo XVII. Apesar de o Brasil ser o bero do cajueiro e de as misses colonizadoras encontrarem o indgena brasileiro utilizando essa espcie para diversos fins, a explorao do cajueiro com finalidade econmica, durante alguns sculos, ficou restrita ao consumo local, nas zonas produtoras. A espcie que cultivada principalmente nos estados do Nordeste, distinguindo-se o Cear como o maior produtor, no teve destaque na economia nordestina, e nem mesmo na cearense, antes das quatro primeiras dcadas do sculo XX (Leite, 1994). At o incio da dcada de 50, a produo de castanha (fruto verdadeiro) era essencialmente extrativa. As primeiras tentativas para

estabelecer plantios de cajueiro com fins comerciais foram efetuadas no municpio de Pacajus, no Cear. Nesse municpio, no Campo Experimental de Pacajus, ento pertencente ao Ministrio da Agricultura, em 1956,

o governo federal instalou uma coleo de matrizes de cajueiro para pesquisa agronmica. Posteriormente, a introduo de plantas de cajueiro ano precoce nesse campo experimental, originadas de uma populao natural do municpio cearense de Maranguape, hoje considerada o marco histrico do melhoramento gentico dessa espcie. A partir dos incentivos fiscais da Superintendncia de Desenvolvimento do Nordeste (SUDENE), na segunda metade da dcada de 60, consolidou-se o parque processador de castanha, com fbricas concentradas no estado do Cear e algumas unidades no Rio Grande do Norte e no Piau. Para abastecer essas unidades, ocorreu um notvel crescimento da rea plantada com cajueiros, que possibilitou a elevao da produo. Assim, a agroindstria do caju passou a ter importante papel econmico e social, pois, alm de empregar grande contingente de pessoas, participa de forma expressiva na gerao de divisas externas, com valores mdios anuais prximos de 150 milhes de dlares (Paula Pessoa et al., 1995). As pesquisas com cajueiro, particularmente aquelas direcionadas para obteno de material melhorado, foram ento dinamizadas, dando origem s primeiras plantas matrizes fornecedoras de sementes para o plantio comercial. At aquela poca, os cajueirais eram formados por sementes que no sofreram nenhum processo de seleo, com exceo feita para o peso e, algumas vezes, para a densidade e sanidade das sementes. Nenhum desses processos foi eficiente para assegurar a qualidade do material gentico utilizado. O desconhecimento das qualidades das plantas matrizes e polinizadoras, quando da obteno de sementes para o plantio, acarretou pomares bastante desuniformes, tanto nos aspectos morfolgicos quanto fisiolgicos, do que resultou, conseqentemente, grande variedade na produo, com valores mdios muito abaixo do potencial da espcie. Essa

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Plantio comecial de cajueiro ano precoe com irrigao. desuniformidade manifestou-se tambm no peso da castanha, afetando a indstria de processamento em termos de rendimento e nos aspectos relativos s cotaes de preo no mercado internacional. 2. TIPOS VARIETAIS Na natureza existem dois tipos de cajueiros bem definidos em relao ao porte denominados comum e ano. O cajueiro comum, que o mais difundido, possui porte elevado, com altura que varia de 8 m a 15 m e envergadura da copa que chega a atingir 20 m. Apresenta grande variao na distribuio dos ramos e no formato da copa, que vai desde ereta e compacta at espraiada (Barros, 1988). A capacidade produtiva individual do cajueiro comum muito varivel, com plantas que produzem menos de 1 kg at cerca de 180 kg de castanha por safra. Apresenta grande variabilidade no peso do fruto, que vai de 3 g a 33 g, com peso do pednculo variando de 20g a 500g. A idade mnima de estabilizao da produo das plantas superior a 8 anos, sendo normal tambm ocorrer entre 12 e 14 anos. Em todos os plantios efetuados a partir de sementes, foi

utilizado esse tipo varietal. O cajueiro tipo ano precoce, tambm conhecido por cajueiro de seis meses, caracteriza-se pelo porte baixo, altura abaixo de 4 m, copa homognea com variao no tamanho de 5,0m a 6,5m, dimetro do caule e envergadura bem inferiores ao do tipo comum e inicia o florescimento aos 6-18 meses. O peso do fruto nas populaes naturais varia de 3g a 19g e o do pednculo de 20g a 160g, o que significa dizer que so caractersticas com menor variabilidade em relao ao tipo comum. A capacidade produtiva individual tambm menor, at o momento com a mxima produo registrada de 43 kg de castanhas/safra/planta (Barros, 1988). 3. POTENCIALIDADES O sucesso na explorao econmica do cajueiro nos diferentes agrossistemas para onde ele tem sido levado depende de sistemas de produo que incluam, fundamentalmente, indivduos adaptados s condies de clima e de solo de cada situao, razo pela qual cabe ao melhoramento gentico importante papel na viabilizao da cultura, independente do ambiente onde ela for explorada. Alm da amndoa da castanha de caju (ACC), que o produto de maior interesse e maior aceitao nos mercados do mundo inteiro, o cajueiro possibilita a obteno do lquido da casca da castanha (LCC), um subproduto com grande potencial de aproveitamento industrial, principalmente na indstria qumica, mas de valor econmico efetivo atualmente muito baixo por alguns fatores tecnolgicos limitantes, razo pela qual no tem sido objeto de interesse momentneo para melhoramento. O cajueiro oferece, ainda, o falso-fruto ou pednculo, cujo potencial de aproveitamento muito expressivo pelas opes no mercado de frutas, tanto no consumo in natura como no fabrico de doces, sucos, refrigerantes, etc., mas sua expressividade econmica ainda baixa quando comparada com o volume total de produo (Barros et al., 1993), o que tem gerado os menores indicadores econmicos da cultura em termos de exportao. O aumento da lucratividade do cajueiro mediante a maximizao do aproveitamento do pednculo, notadamente no mercado de frutas, constitui o principal desafio do melhoramento gentico, ao qual cabe a responsabilidade de gerar clones que propiciem pednculos que satisfaam aos mais diferentes paladares, de forma que conquiste os mercados das regies mais desenvolvidas e economicamente mais prsperas do Pas. Isto porque os mritos de produtividade e melhoria de qualidade dos produtos podem ser obtidos por meio de alteraes no ambiente ou nas plantas cultivadas. Alteraes no ambiente envolvem diversas variveis, como neutralizao dos efeitos de elementos txicos, correo da reao e da fertilizao do solo, combate sistemtico das pragas, doenas e plantas invasoras, correo do teor de umidade do solo por meio de irrigao e, muitas vezes, drenagem, manejo do pomar, colheita, armazenamento e transporte, que envolvem sempre o emprego racional de insumos e a disponibilidade de tcnicas mais modernas de cultivo, acarretando, muitas vezes, custos elevados para o produtor. J o melhoramento gentico das plantas, por outro lado, envolve um conjunto de procedimentos com fundamentao cientfica, cujo objetivo alterar as caractersticas das cultivares, de modo que os novos materiais obtidos possibilitem aumento na produtividade e na qualidade do produto final, a menor custo e de forma mais duradoura. Para tanto, o trabalho pode ser dirigido para caracteres como tolerncia ao estresse hdrico, adaptao a elevados teores de elementos txicos do solo, resistncia a doenas e tolerncia a pragas, reduo do porte das plantas, precocidade, mudanas no comprimento do ciclo de frutificao, alteraes na constituio fsica e qumica dos frutos e pseudofrutos, de maneira que o resultado final seja a maior lucratividade para o investidor e maior satisfao para o consumidor.
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4. FASES DO MELHORAMENTO A domesticao do cajueiro e o melhoramento gentico dessa cultura no Brasil podem ser caracterizados por cinco fases distintas (Paiva et al., 1997). A primeira remonta poca da descoberta, pelos nativos, de plantas com pednculos adequados sua alimentao na forma de consumo in natura ou na elaborao de bebidas. Quando os exploradores aportaram na costa brasileira, j constataram os frutos de cajueiro sendo utilizados na culinria local. Os registros demonstram a existncia desse processo j no sculo XVII. A segunda fase data das dcadas de 40 e 50 deste sculo, marcadas pela extrao de LCC e pela transformao do pednculo em produtos diversos, em um sistema mais organizado. Datam tambm dessa poca as primeiras introdues de plantas no Campo Experimental de Pacajus (CE), oriundas de populaes naturais existentes na regio litornea do Nordeste. A terceira fase, compreendendo as dcadas de 60 e 70, caracterizou-se por plantios comerciais do cajueiro comum efetuados com sementes, a partir de incentivos governamentais de fomento cultura. Ainda naquela poca, iniciaram-se a identificao e o controle da produo de castanha de plantas individuais em propriedades particulares. Aps a identificao das plantas que se destacavam em produo, seguiu-se a formao de novos plantios com sementes colhidas dessas plantas.

que existe possibilidade de reproduo de determinado indivduo, em qualquer etapa do processo. As baixas produtividades registradas na cajucultura brasileira direcionam a seleo prioritariamente para a obteno de plantas que possibilitem resultados superiores a 1,3t/ha de castanha, em regime de sequeiro, o que pode ser alcanado com os clones comerciais de cajueiro ano precoce atualmente disponveis no mercado (Barros et al., 1984; 1983; Almeida et al., 1993; Barros & Crisstomo, 1995). No caso de clones para cultivo sob irrigao, a nfase deve ser para gentipos que possibilitem produtividades superiores a 4,5 t/ha, obtidos atualmente com os clones disponveis (Oliveira et al., 1996). Os procedimentos mais comuns adotados no melhoramento de plantas de reproduo assexuada ou vegetativa so a introduo de germoplasma, a seleo clonal e a hibridao. Alm desses, outros mtodos auxiliares tm sido utilizados com sucesso, como a induo de mutaes, induo de poliploidia e cultura de tecidos. A introduo de plantas no melhoramento do cajueiro tem sido a principal fonte de obteno de materiais mais adequados explorao comercial, enquanto a seleo de clones uma etapa do melhoramento das plantas de propagao vegetativa utilizada tanto aps a introduo de germoplasma como na hibridao. O sucesso com esta metodologia depende da presena de indivduos superiores para a formao dos clones que entraro no processo de competio. Assim, o xito do processo de seleo de clones depende da variabilidade gentica existente na populao base. A seleo feita numa populao formada por um nico clone no deve surtir efeito, uma vez que toda variao existente de origem ambiental. O melhoramento utilizado no cajueiro ano precoce no Brasil teve incio em 1965 no Campo Experimental de Pacajus. Constou de uma seleo fenotpica individual, seguida do controle anual da produo nas plantas selecionadas. Essa metodologia, embora simples e de ganhos genticos esperados reduzidos, permitiu o lanamento comercial dos clones CCP 06 e CCP 76, em 1983, e CCP 09 e CCP 1001, em 1987, que so ainda os principais clones comerciais disponveis (Barros et al., 1984; Almeida et al., 1992).

A quinta fase, em andamento, prioriza as pesquisas para atender s demandas atuais da cajucultura, com enfoque na fruticultura irrigada e no aproveitamento, tambm, do pednculo para o consumo in natura. Nesse enfoque, a seleo tem de estar orientada para plantas com caractersticas de porte baixo para facilitar a colheita manual; pednculo com caractersticas de colorao, sabor, textura, maior perodo de conservao, consistncia e teor de tanino adequados s preferncias do consumidor; castanha de tamanho e peso adequados (10g); facilidade de destaque do pednculo; rendimento 28%; facilidade na despeliculagem; colorao dentro dos padres internacionais; e amndoas resistentes formao de "bandas". Na fase de avaliao dos clones, recomenda-se test-los, tanto em condies de irrigao como de sequeiro, em diferentes ecossistemas. 5. ESTRATGIAS A escolha do mtodo ou da estratgia na conduo de um programa de melhoramento est diretamente relacionada com a biologia reprodutiva da espcie, ou seja, importante conhecer se a espcie de cruzamento ou de autofecundao. O cajueiro sendo uma espcie em que predomine a fecundao cruzada, a escolha do mtodo de melhoramento a ser empregado deve ser inerente a esse grupo de plantas. Devese enfatizar que a multiplicao vegetativa do cajueiro permite que enfoques alternativos possam ser considerados, uma vez

5. PERSPECTIVAS A fruticultura moderna, alm de tratar da aplicao de tcnicas e prticas que reduzam o custo de produo dos pomares comerciais, proporciona tambm um maior aproveitamento das frutas para o consumo in natura ou para a indstria de transformao. O cultivo do cajueiro em condies irrigadas induz a uma reflexo nos paradigmas vigentes,

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BARROS, L.M.; ARAJO, F.E.; ALMEIDA, J.I.L.; TEIXEIRA, L.M.S. (1984). A cultura do Cajueiro Ano. Fortaleza: EPACE. 67p. (EPACE. Documentos, 3). BARROS, L.M.; PIMENTEL, C.R.M.; CORRA, M.P.F.; MESQUITA, A.L.M. (1993). Recomendaes Tcnicas Para a Cultura do Cajueiro Ano Precoce. Fortaleza: EMBRAPA-CNPAT, 65p. (EMBRAPACNPAT. Circular Tcnica, 1). BARROS, L.M.; CRISSTOMO, J.R. Melhoramento gentico do cajueiro. In: ARAJO, J.P.P.; SILVA, V.V. (1995). Cajucultura: Modernas Tcnicas de Produo. Fortaleza: EMBRAPA-CNPAT, p.73-93. LEITE, L.A. de S.A. (1994). A agroindstria do caju no Brasil: polticas pblicas e transformaes econmicas. Fortaleza: EMBRAPA-CNPAT, 195 p. OLIVEIRA, V.H.; CRISSTOMO, L.A.; MIRANDA, F.R; ALMEIDA, J.H.S. (1996). Produtividade de clones-enxertos de cajueiro ano precoce (Anacardium occidentale L.) irrigados, no municpio de Mossor-RN. In: Congresso Brasileiro de Fruticultura, 14., 1996. Curitiba-PR. PAIVA, J.R.; CRISSTOMO, J.R.; BARROS, L.M.; PAIVA, W.O. (1997). Domesticao e melhoramento gentico do cajueiro (Anacardium occidentale L.) no Brasil. Informativo SBF, Braslia: 16 (2), p.19-20. PAULA PESSOA, P.F.; LEITE, L.A.S; PIMENTEL, C.R.M. Situao Atual e Perspectivas da Agroindstria do Caju. In: ARAJO, J.P.P.; SILVA, V.V. (1995). Cajucultura: Modernas Tcnicas de Produo. Fortaleza: EMBRAPA-CNPAT, p.23-42.

relacionados com sistema de cultivo de sequeiro e com a forma de aproveitamento da cultura. O sistema com irrigao para o cajueiro pode ser vantajoso medida que existe resposta diferencial entre clones a essa condio e que seja vivel economicamente. O aproveitamento do pednculo para o consumo in natura, seguindo os princpios da fruticultura moderna para maior aproveitamento dos produtos obtidos, eleva a explorao do pednculo para comercializao condio de produto principal e da castanha de produto secundrio, em face da sua boa aceitao pelos consumidores e dos preos atualmente praticados. Em avaliao recente de experimento em campo, foi efetuada ainda uma seleo preliminar, usando-se como referncia o clone CCP 76. Elegeram-se os seguintes clones, em ordem crescente de preferncia, END 157, END 189, CCP 76 e END 183 como os mais promissores para o consumo in natura. Aparentemente, os clones END 157 e END 189 superam a testemunha padro quanto consistncia do pednculo, um carter desejvel para aumentar o tempo de prateleira do produto. Testes mais acurados na rea de ps-colheita para esses clones ainda esto em andamento. Uma condio desejvel para o produtor o cultivo de clones que tenham produo mensal melhor distribuda ao longo do ano. Isto desejvel devido possibilidade de se obterem preos mais elevados no perodo de entressafra do produto. Do ponto de vista do melhoramento gentico, possvel obter e selecionar clones que, quando cultivados em condio irrigada, apresentem uma produo de pednculo com distribuio mais uniforme, haja vista a existncia de variabilidade gentica para esse carter..

6. LITERATURA CONSULTADA ALMEIDA, J.I.L. ARAJO, F.E., BARROS, L.M. (1992). Caractersticas do clone EPACE CL 49 de cajueiro. EPACE. Relatrio Anual de Pesquisa 1980/1992, Fortaleza: 160-165. ALMEIDA, J.I.L.; ARAJO, F.E.; LOPES, J.G.V. (1993). Evoluo do cajueiro ano precoce na Estao Experimental de Pacajus, Cear. Fortaleza: EPACE,. 17p. (EPACE, Documentos, 6). BARROS, L.M. Melhoramento. In: LIMA, V.P.M.S. (1988). A cultura do cajueiro no Nordeste do Brasil. Fortaleza: Banco do Nordeste do Brasil/ETENE. p.321-356 (BNB/ ETENE. Estudos Econmicos e Sociais, 35).

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O USO DE PVC NO TRATAMENTO DO CNCER


O uso de plastisol de policloreto de vinila(PVC), como tecido equivalente no tratamento de pacientes com cncer

Karin dias salamn consultora do instituto do PVC metrado e doutorado - UNICAMP So Paulo-SP Wagner Gonalves Maia Fsico-mdico Centro de ateno integral sade da mulher (CAISM) CEB-UNICAMP - Campinas-SP Jos Renato Rocha Fsico-mdico centro de Ateno Integrada Sa de da Mulher (CAISM) CEB-Campinas-SP Lcia H.I. Mei Departamento de Tecnologia de Polmeros - FEQ-UNICAMP

tualmente, na radioterapia de pacientes com cncer, utilizam-se amplamente os aceleradores lineares que produzem feixes de ftons e eltrons de alta energia. Uma caracterstica importante desses feixes que a dose liberada no tecido irradiado no tem seu valor mximo na superfcie, mas aumenta conforme o poder de penetrao do feixe, at uma profundidade que varia 0,5 a 3,0 cm da pele. A tcnica de irradiao, em geral, consiste em dirigir um ou mais feixes para o volume do tumor, de modo a produzir uma distribuio uniforme da intensidade da radiao dentro do tumor, caindo a valores mnimos nas regies circunvizinhas. No caso da radioterapia de tumores superficiais, muitas vezes exigido uma superficializao do ponto de dose mxima, seja para maximizar a dose no tumor ou mesmo para limitar a penetrao do feixe, preservando as estruturas posteriores ao tumor. Isso feito utilizando-se materiais simuladores de tecido humano, como os "bolus", com espessura varivel. Nesse trabalho, foi desenvolvido um material equivalente ao tecido mole para ser usado como "bolus" em radioterapia, principalmente para superficializar a dose em tratamentos com ftons ou eltrons. A caracterstica deste material que ele transparente e flexvel, tem boa resistncia radiao, tem baixo custo, alm de ter boas propriedades radiolgicas. Dentre as inmeras resinas plsticas estudadas, optou-se pelo poli(cloreto de vinila)-PVC devido sua versatilidade e boa relao custo/benefcio. A resina de PVC um p muito fino, de cor branca, de elevado peso molecular sendo resultante da polimerizao do cloreto de vinila, como mostra a Figura 1. Dois recursos naturais, sal e petrleo, so a base para a fabricao do PVC. Pela refinao do petrleo, obtm-se o etileno e, por eletrlise, que a reao qumica resultante da passagem de uma corrente eltrica pela gua salgada (salmoura), obtm-se o cloro. Existe uma grande quantidade de aditivos (plastificante-leos, estabilizantes, pigmentos entre outros) que, ao serem adicionados ao PVC tornam o material plstico de maior diversidade, permitindo a confeco de produtos com a transparncia do vidro ou com barreira luz, ou ainda com a flexibilidade da borracha ou a rigidez necessria para se fazer esquadrias de janelas.

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Inicialmente foi determinada a curva da % de ionizao para eltrons em funo da profundidade em acrlico e gua. Substituindo-se o acrlico pelo bolus foi obtida a curva da % de ionizao para eltrons em funo da profundidade de bolus. Utilizando-se fatores de correo obteve-se as curvas de porcentagem dose profunda (PDP) da gua e do bolus.

MATERIAIS E MTODOS O novo material foi obtido a partir da disperso do p de poli(cloreto de vinila)-PVC no plastificante ftalato de 2dietil-hexila(DOP), formando uma pasta, que ao ser aplicada uma temperatura de 160oC, transforma-se em um produto transparente e flexvel. Utilizou-se do mtodo de deslocamento em colunas de gua para se determinar a densidade especfica deste produto. Para a confeco das placas de diferentes espessuras, foram utilizados moldes de vidro plano colocados paralelamente, com espassadores, o que produz a espessura desejada. A estabilidade radiao foi verificada submetendo-as irradiao em feixes de cobalto 60 at uma dose de 78kGy, e nenhuma variao das propriedades fsicas foi verificada. Este trabalho foi desenvolvido por Pezzin e colaboradores, e no se constatou nenhum tipo de alterao do produto com a radiao. De acordo com Johns e colaboradores, os simuladores de tecido devem ser materiais que absorvam e espalhem a radiao igual ao tecido humano. Spiers e colaboradores, em 1939, mostraram que os materiais simuladores possuem a mesma densidade e contm o mesmo nmero de eltrons por grama. Como a gua e o tecido humano possuem estas caractersticas, tendo a mesma absoro de ftons e eltrons, desde ento os protocolos de dosimetria de feixes de raios X e gama, na faixa de energia usada em radioterapia, assim como em dosimetria de eltrons a altas energias, consideram a gua como material padro de referncia. Portanto, melhor ser o bolus quanto mais prximo da gua for seu comportamento com relao radiao.

Para efeito de clculo de algumas das propriedades determinadas neste trabalho houve a necessidade de se determinar a porcentagem em peso dos elementos con tidos no material bolus vinillico. Atravs de uma anlise qumica elementar, foi determinada a quantidade de carbono e hidrognio, e usando-se o sistema Schonninger determinou-se a quantidade de cloro; a quantidade de oxignio foi determinada por excluso. Para verificar-se a equivalncia da gua foram estudadas as propriedades radiolgicas, das quais algumas foram determinadas terica e experimentalmente, assim como outras determinadas apenas teoricamente. Tambm foi feita uma medida para se verificar o erro causado na dose absorvida pela introduo do material no feixe, simulando a situao de tratamento. Determinou-se as propiedade radiolgicas dentre as quais o nmero atmico efetivo e o stopping power em relao gua em feixes de eltrons que consiste no poder de frenagem do material com relao a radiao. Em algumas determinaes experimentais foram utilizados os mtodos (a), (b) e (c). Nestes mtodos foi utilizada uma cmara de placas paralelas (PTWMarkus Chamber), para medidas em eltrons e ftons 10MeV, e para o cobalto 60 foi utilizada uma cmara cilndrica de 0,6cc (PTW 23333).

A cmara foi posicionada a um profundidade correspondente ao ponto mximo de ionizao na gua. Neste caso placas do material foram colocadas sobre a cmara substituindo-se a gua pelo bolus.

A cmara foi posicionada a profundidades de 2,5cm (ponto de mximo), 5cm e 10cm em um fantom com gua. Aplicando-se feixes de ftons 10MeV e substituindo-se diferentes espessuras de gua pelo material foi obtida a % de ionizao.

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Barreiras Exportao
Barreiras protecionistas s exportaes brasileiras
Com a poltica de abertura da economia brasileira adotada pelo Governo Federal, sobretudo a partir de 1990, o setor produtivo nacional viu-se frente a frente com uma concorrncia forte e poderosa e at ento desconhecida, provocada pela acelerao repentina das importaes de produtos em geral. Para a agricultura brasileira, que est fortemente endividada, tem de arcar com custos financeiros elevadssimos, de suportar um sistema tributrio voraz, de no contar com condies financeiras favorveis para adotar tecnologia moderna nem mo-de-obra qualificada, e, o que mais verde" para manuteno do Plano Real. Essa uma atitude imediatista e mope, pois, a perdurar esse procedimento, sem a devida cautela e precauo, estaremos, no s desestruturando o nosso sistema produtivo, mas aumentando a nossa dependncia externa e causando uma profunda crise social no campo, com a acelerao do xodo rural e reflexos imediatos e, talvez, irreversveis na cidade. Sem dvida, essas importaes que foram responsveis, ao lado da poltica cambial de valorizao do Real, pelo mau desempenho do setor agrcola, que atingiu seu ponto mais crtico em 1995/96, quando a venda de produtos agrcolas caiu substancialmente. Esse processo, ento, desestruturou a pequena produo rural e seus subsetores produtivos como os de algodo, arroz, trigo, laranja, borracha natural, sisal, leite e seus derivados, entre outros, deixando-os numa crise de grandes propores. O Brasil est importando esses produtos a preos muito mais baixos que os nossos porque, em seu pas de origem, eles so subsidiados e produzidos em condies muito mais favorveis, alm de ser ofertados com juros mais baixos e maiores prazos de pagamento. Curioso que os pases desenvolvidos, que exigem de ns uma maior abertura da economia, so exatamente os que mais defendem o seu setor produtivo e, consequentemente, o emprego para seu povo. Reclamam de ns ampla e urgente abertura econmica, mas, contraditoriamente, impem-nos barreiras tarifrias e no tarifrias que impedem e dificultam a exportao de nossos produtos. Afora essas restries, impem ainda "cotas" que, quando adotadas pelo Brasil, sofrem acirrado combate, mas, quando aplicadas por eles, representam proteo contra atividades predatrias ou concorrncia desleal. Alm dessas

Jonas Pinheiro Mdico veterinario , extensinista rual, foi deputado Federal (1982/94) e atualmente Senador da Repblica pelo Estado do Mato Grosso.
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limitador, de no dispor de uma adequada infra-estrutura que d sustentao e apoio ao produtor. A adoo dessa poltica foi atroz, pois o setor teve sua capacidade de se ajustar a ela extremamente limitada, quando teve de competir com produtos importados altamente subsidiados em seu pas de origem. A liberao das importaes, sob o argumento geral de provocar um "choque de modernidade" no pas, tem tido, no caso agrcola, muito mais o objetivo de viabilizar a entrada de insumos e produtos cotados a preos bem mais baixos que os nacionais e, dessa maneira, provocar um impacto nos preos internos desses produtos, com a preocupao de assegurar a "ncora

barreiras h tambm as de ordem sanitria, que limitam ou probem a importao de produtos brasileiros, sob o pretexto de que eles no atendem s exigncias sanitrias daqueles pases. Essas medidas tarifrias e no tarifrias impostas pelos Estados Unidos e por outros pases s importaes de produtos brasileiros causam ao nosso pas prejuzos anuais da ordem de US$ 6 bilhes. Atualmente, os Estados Unidos restringem ou impedem a entrada naquele pas de cerca de 80 produtos brasileiros, como, por exemplo, de: Suco de Laranja: o importador norte-americano tem de pagar 8,55 centavos de dlar por litro de suco do Brasil; Tabaco: h uma cota de 80,2 mil toneladas; acima disso, os Estados Undos impem, para cada quilo importado a mais, uma taxa de 69,5 centavos de dlar; Acar: a cota de 162,2 mil toneladas. Para cada tonelada excedente cobrada uma taxa de 286 dlares. Fruta: as tarifas sobre as frutas variam de acordo com a poca do ano. Por exemplo: sobre o melo, so cobrados 16,4% por unidade entre 1 de agosto e 15 de setembro; sobre a uva, a taxa fica 54% mais cara entre 15 de fevereiro e 31 de maro; sobre o leo de soja, cobrada uma taxa de 20,8% em cima do valor da tonelada do produto; Calado: cobrada uma taxa de 10% sobre o valor original do produto. No caso de outros calados de couro, esse tipo de tarifa extra fica em 8, 5%; Txtil: a alquota de 38% e mais 48,5 centavos de dlar por quilo de tecido. Carne (de boi e de porco): os Estados Unidos no permitem a entrada do produto cru ou congelado. Alegam que o rebanho brasileiro tem febre aftosa e que o pas ainda no est livre da clera suna; Carne de frango: O produto no entra nos Estados Unidos porque o nosso sistema de inspeo sanitria no tem a aprovao do Departamento de Agricultura norte-americano; Camaro: necessria uma certido que autorize a exportao, cuja validade no passa de 12 meses. Como consequncia dessa poltica, no perodo de 1991 a 1996, a exportao de produtos agrcolas brasileiros para os Estados Unidos ficou estagnada em 1,3 bilho de dlares por ano, enquanto, no mesmo perodo, as vendas norteamericanas para o Brasil aumentaram 131%. Diante dessas exigncias, as autoridades governamentais brasileiras intimidam-se mais, a cada dia, pois o pas no tem a autonomia necessria

para equilibrar esse processo, autonomia esta que adviria da recuperao econmica do pas e da excelncia dos seus produtos. Tanto que temos assistido a um crescente dficit na balana comercial brasileira. No se pode negar a nenhum pas que ele tente proteger sua economia, suas empresas e seus empregos. No entanto, se os Estados Unidos, o Japo e os pases europeus se acham nesse direito, igualmente legtimo que o Brasil tambm o tenha. Na verdade, h necessidade de que se estabeleam regras equilibradas de comrcio entre os pases ou os blocos de que fazem parte, para que no haja aniquilamento de uns e domnio de outros. A agricultura um dos setores mais importantes da economia de muitos pases. Alm do seu valor econmico, tem elevadssimo valor estratgico, pois garante o abastecimento interno. Assegura-se, por ele, o equilbrio social, pela eliminao da fome - um dos maiores focos de conflito social dentro de uma Nao. Os excedentes agrcolas constituem um dos mais rentveis itens de exportao dos pases produtores, o que aumenta substancialmente a renda nacional. O processo irreversvel de abertura da economia exige do Brasil intensificao de trocas comerciais com os demais pases do globo; abertura econmica deve significar troca benfica para ambos os lados; no entanto, est sendo bvio que as naes produtoras esto querendo que importemos muito e exportemos o mnimo. O Brasil deve, ento, reagir energicamente contra toda

taxao inqua de seus produtos e, se necessrio for, adotar medidas de retaliao que compensem os prejuzos sofridos. Deve mos demonstrar que no estamos submissos aos desgnios de terceiros, sejam eles fortes quanto forem. No resta dvida de que nossos parceiros comerciais continuaro sempre a exigir maior abertura de nossa parte e que no facilitaro a venda dos nossos produtos. Necessrio se faz, ento, que o governo consolide uma poltica agrcola de longo prazo para que nossa pauta de exportaes tenha respaldo em medidas de apoio que lhe garantam disputar mercados em condies de igualdade com os demais concorrentes, salvaguardando os seus interesses internos e os de sua populao. No Congresso Nacional, tenho defendido intransigentemente essa questo e fao coro com inmeros parlamentares, que, com freqncia, se manifestam preocupados com essas distores e seus graves reflexos sobre toda a populao brasileira. imprescindvel que as autoridades que vm negociando em nome do Governo Brasileiro os acordos com outros pases, abram espao para que o agricultor brasileiro participe dessas negociaes, a fim de que seus interesses sejam devidamente resguardados para que no sejamos surpreendidos, como ocorreu com a formalizao de outros acordos, notadamente o do Mercosul, quando foram tomadas decises e assumidos compromissos prejudiciais ao setor.

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VETERINARIA

Deteco de patgenos no smen


de distribuio de smen congelado, e pela capacidade que possui um touro para produzir at 1000 doses deste material a partir de uma nica ejaculao. Atualmente, as enfermidades vricas transmitidas via smen, como a Rinotraquete Infecciosa Bovina (IBR) e a Diarria Bovina a Vrus (BVD), tm despertado um

Nivaldo da Silva Doutor em Veterinria pela Universidad Complutense de Madrid - Espanha Prof. Adjunto do Departamento de Medicina Veterinria Preventiva Universidade Federal de Minas Gerais Email: nivsilva@dedadlus.lcc.ufmg.br

Deteco de agentes patognicos em smen bovinos destinado a inseminao artificial


utilizao da inseminao artificial (I.A.) tornou possvel o intercmbio de material gentico de melhor qualidade, e atravs dessa tecnologia, uma melhora da produo de leite e carne, tanto a nvel nacional como internacional. As possibilidades da contaminao do smen por agentes patognicos (Fig. 1) e sua possvel disseminao atravs do mesmo, entretanto, se converteram em uma das principais preocupaes para criadores e autoridades sanitrias dos pases onde se emprega essa tecnologia (Afshar & Eaglesome, 1990). A tudo isso se deve, tambm, acrescentar o risco que supe o uso do smen infectado nos processos de transferncia de embries (Bielanski & Dubuc, 1994). Este alarma crescente est relacionado s implicaes epizootiolgicas da presena de vrus no smen, implicaes essas que no s se centram na infeco exclusiva da fmea receptora, ou do coletivo da explorao pecuria, como tambm na possvel introduo de viroses exticas no pas importador. Esse risco potencial de transmisso, gera uma grande preocupao sobre o intercmbio nacional e internacional deste material gentico, e em especial, sobre os mtodos de deteco dos possveis vrus vinculados atravs do smen ou dos embries, obrigando quase todos os pases a implantarem rigorosos programas sanitrios voltados para o controle das importaes. A origem dos vrus no smen pode ser extrnseca, devido a contaminao fecal do smen no momento da coleta (por exemplo, os enterovrus) ou intrnseca, devido as infeces locais ou sistmicas com a disseminao dos vrus atravs dos testculos, glndulas acessrias ou prepcio. Dessa maneira, o smen um excelente veculo para a difuso de agentes patognicos e de defeitos genticos, principalmente pela gran28 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

grande interesse nas autoridades sanitrias mundiais, principalmente por que nesses processos infecciosos os sinais clnicos so raramente evidentes, sendo de grande importncia a deteco desses vrus no smen (Philpott, 1993). Uma vez que a congelao do smen possibilita a sobrevivncia da maioria dos agentes patognicos, e o uso dos crioprotetores diminue a eficcia dos antibiticos, se faz necessrio normas oficiais para regulamentar a produo e o comrcio de material gentico livre de agentes infecciosos (Afshar & Eaglesome, 1990). Desta maneira, a Oficina Internacional de Epizootias (OIE) definiu suas diretrizes no ano de 1986. Nos Estados Unidos da Amrica (EEUU) essas normas foram padronizadas em 1989, sob controle da Associao Nacional de Repro-

duo Animal (NAAB) (Philpott, 1993) e, recentemente, a Unio Europia (EU) atravs da diretiva 93/60/EEC estabeleceu suas normas de controle. Essas exigncias esto baseadas na transmisso dessas viroses atravs do smen infectado. Por esses motivos, recomendam um rigoroso controle sanitrio sobre os touros mantidos nos centros de I.A., exigindo provas de isolamento de agentes infecciosos, ou provas sorolgicas de todos os animais com idades superiores aos seis meses. Pases do MERCOSUL esto, ainda, estudando normas para o comrcio de smen entre seus integrantes. Apesar dessas medidas, o perigo da transmisso de vrus via smen segue vigente, como consequncia da existncia nos centros de I.A. de animais clinicamente sadios ou sorologicamente negativos, porm que esto latentemente infectados pelo herpes vrus bovino tipo 1 (BHV-1) causador da IBR ou persistentemente infectados pelo vrus da BVD. Por outro lado, e especificamente no caso da IBR, ainda existe uma reconhecida demanda por smen de touros de aprecivel valor gentico e que apresentam sorologia positiva frente a este vrus. Isso obriga a um contnuo monitoramento dos seus ejaculados para a deteco do vrus e, assim, evitar o risco de transmisso por essa via. Segundo Afshar & Eaglesome (1990), os vrus da IBR e BVD esto presentes em quase todos os centros de I.A. dos EEUU e Canad, de onde provm a maioria do smen importado pelo Brasil. Por outro lado, e apesar de no dispor de muitas informaes sobre a incidncia dessas enfermidades nos pases sul americanos, pode-se considerar que pelo menos as infeces causadas

pelo BHV-1 esto presentes nesses pases, apesar de no serem rotineiramente diagnosticadas ou notificadas. Nesse sentido, no Brasil esto registrados casos de Balanopostites em touros com eliminao de vrus no smen, assim como a presena de anticorpos em doadoras e receptoras de embries. Em pases do Mercosul, o vrus da IBR est amplamente disseminado, sendo detectado em amostras de smen congelado na Argentina. O xito dos programas de controle das doenas infecciosas depende, em boa medida, da identificao e eliminao de animais infectados e ou portadores. Usualmente nesses animais, o controle feito atravs do isolamento de microrganismos em meios de cultura, cultivos celulares, inoculao em animais susceptveis ou, ento, pela deteco indireta atravs de tcnicas sorolgicas, como a soroneutralizao, fixao de complemento, imunofluorescncia indireta, hemaglutinao, imunodifuso, etc. A maioria destas tcnicas, entretanto, apresentam limitaes principalmente de ordem prtica, resultantes da sua complexidade, da infra-estrutura necessria sua realizao, ou da lentido dos procedimentos laboratoriais necessrios para a deteco e caracterizao dos agentes patognicos. Por outro lado, existem, tambm, limitaes de sensibilidade e especificidade. Por estes motivos, nos ltimos anos tm-se intensificado a busca por tcnicas de maior rapidez, preciso e confiana, que possibilitem o diagnstico das doenas infecciosas com um grau de sensibilidade e especificidade similar ou superior aos procedimentos convencionais, e cujos resultados sejam dados no mesmo dia (Rodriguez & Schudel, 1993). Desta maneira, tcnicas simples e de fcil execuo para a caracterizao de protenas e cidos nuclicos, como as imunoenzimticas - ELISA (Enzyme-linked immunoabsorvent assay) e Immmunobloting, ou as amplificaes "in vitro" de cidos nuclicos atravs da Reao em Cadeia da Polimerase (PCR), so recomendadas para substituir os mtodos convencionais de diagnstico de vrias doenas. Utilizao da tcnica de PCR para deteco de agentes patognicos no smen A amplificao "in vitro" dos cidos nuclicos (PCR) permite a obteno de milhares de cpias de uma sequncia especfica de DNA. Por isso, a PCR tem facilitado o desenvolvimento de uma variedade de sistemas, baseados na deteco de cidos nuclicos de bactrias, vrus, e outros microrganismos, bem como de alteraes genticas. Devido a

sua alta sensibilidade, especificidade e rapidez, a PCR oferece muitas vantagens sobre os mtodos convencionais de diagnstico, porque est baseada na am-

plificao especifica de um fragmento de cido nuclico, compreendido entre dois oligonucleotidos sintticos complementares (primers), respectivamente, a cada uma das duas fitas de DNA a ser amplificada. O tamanho deste fragmento definido pela distncia entre a posio de anilamento dos primers (iniciador e reverso) dentro da sequncia genmica. A PCR realizada em repetidos ciclos, cada um consistindo de trs etapas com diferentes temperaturas. Na primeira etapa, a dupla fita de DNA desnaturada a alta temperatura, resultando em uma molcula simples de DNA (DNA molde). Em seguida os primers (iniciador e reverso) se unem s suas sequncias homlogas e complementares nas regies correspondentes ("target") da molcula do DNA

molde (anilamento). Na terceira fase, a regio 3' de cada um dos primers estendida nos dois sentidos pela ao enzimtica da enzima termoestvel Taq polimerase (alongamento), formando uma nova molcula de DNA de dupla fita. As novas molculas de DNA, sintetizadas pelo processo, serviro de molde para a produo de outras cpias de DNA em outros ciclos da reao, resultando em uma amplificao exponencial (Silva, 1995). Apesar de sua simplicidade, a amplificao "in vitro" dos cidos nuclicos pode ser afetada por uma variedade de parmetros, entre eles, o desenho dos "primers", a existncia de reas de homologia na sequncia do DNA molde, as temperaturas de anilamento, concentrao de nucletidos, e principalmente pela presena de inibidores (protenas) (Erlich et al., 1989). A aplicao desta tcnica para a deteco de vrus RNA, feita mediante a sntese de uma molcula de DNA complementar (cDNA), atravs de uma reao de retrotranscripo, utilizandose a enzima transcriptase reversa (RT). Normalmente, o primer utilizado para iniciar esta sntese o mesmo que se utiliza para a amplificao especfica do DNA. Essa reao conhecida como RTPCR, e pode ser realizada no mesmo tubo de reao, evitando-se, assim, a possibilidade de contaminaes com outros DNAs por excesso de manipulaes. O produto de PCR (amplicon) pode ser detectado em gel de agarose, aps a tino com brometo de etidio. Seu tamanho comparado com pesos moleculares de referncia (DNA Ladder) e corresponde ao nmero de pares de bases (pb) de nucletidos distribudos ao longo da sequncia genmica do DNA molde. O amplicon tambm pode ser digerido por endonucleases de restrio, para confirmar se as reas do DNA amplificado correspondem aos stios de restrio dessas enzimas. A PCR em combinao com os fragmentos de diferentes tamanhos, obtidos pela digesto do DNA com enzimas de restrio (RFLP) , frequentemente, usada para classificar um grupo de microrganismos patognicos, ou definir a posio de diferentes alelos na deteco de doenas de carter hereditrio. A especificidade tambm pode ser definida atravs da tcnica de hibridao de Southern blot, na qual o produto da PCR transferido aps a eletroforese para uma membrana de nylon de carga eltrica positiva e hibridizado com uma sonda sinttica especfica, marcada com istopos radioativos ou no radioativos (Silva, 1995). Segundo Rodrguez & Schudell (1993), o emprego dessa tcnica de maior preciso e confiana, recomendada, principalmente, para o diagnstico de vrus em
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smen, e possibilita a deteco mais rpida dos vrus da IBR e BVD e de outros vrus, com menores custos e sobretudo com altas taxas de sensibilidade e especificidade (Reubel & Studdert, 1998). Apesar da ampla aplicabilidade das tcnicas de amplificao dos cidos nuclicos em smen, ela sofre algumas limitaes, devido presena de inibidores da polimerizao do DNA ou grande quantidade de protenas presentes nos diluentes usados para proteger os espermatozides, durante os processos de congelao. Assim, os processos descritos para a extrao dos cidos nuclicos de que j haviam sido sacrificados h vrios anos por apresentarem reaes sorolgicas positivas prova de ELISA (Silva et al., 1997). Falhas no isolamento do vrus da BVD podem ser atribudas aos efeitos viricidas do smen, aos baixos ttulos
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deste vrus no smen, entre 5 y 75 DI50CT/ ml, ou natural inibio da transcripo do vrus, como consequncia da presena no plasma seminal de bovinos de uma protena, a seminalplasmina. Essa ltima propriedade do plasma seminal afeta a deteco do vrus no smen quando se emprega a tcnica de RT-PCR, razo pela qual no se conhecem muitos trabalhos relacionados ao tema. Silva et al. (1995), entretanto, utilizando o procedimento de passar o plasma seminal pela coluna de Sephacryl S-400, previamente extrao do RNA viral pelo mtodo do tiosulfato de guanidina, conseguiram detectar atravs da RT-PCR, at 4 DI50 CT/ml de vrus da BVD, no smen infectado, tanto fresco como congelado. Esses autores amplificaram um fragmento de 440 pb visvel em gel de agarose a 2%, tingido com brometo de etdio, do gene da protena de infeco p80 desse vrus (Fig. 3). Essa tcnica apresentou

especificidade e sensibilidade maiores que aquelas apresentadas por outros mtodos convencionais de deteco de vrus em smen, sugerindo sua utilizao para o diagnstico dessa virose em smen fresco ou congelado, tanto nacionais como importados. Outros microrganismos foram tambm detectados em smen, a partir das tcnicas de amplificao dos cidos nuclicos. Masri et al. (1997), descreveram um rpido e especfico mtodo para deteco de Leptospiras spp a partir do smen bovino infectado. Esses autores amplificaram atravs de um nested-PCR, um fragmento de 450 pb do genoma da L e p t o s p i r a borgpetersenii serovar hardjobovis, detectando at 50 organismos/ml de smen infectado.Em outro estudo, Eaglesome et al. (1995), detectaram por PCR at 4 organismos/ml de smen infectado pelo Campylobacter fetus subsp venerealis. Na Tabela 1, encontram-se descritas as aplicaes PCR e RT-PCR, para o diagnstico de algumas das principais doenas infecciosas da reproduo de bovinos. A sensibilidade e especificidade destas tcnicas foram comparativamente maiores que as tcnicas convencionais de diagnstico. Os resultados demonstraram o potencial da PCR para a deteco rpida de microrganismos, ou mesmo para substituir conhecidos mtodos. Apesar desses aspectos amplamente favorveis, nos dias de hoje a aplicao da prova de PCR para deteco de agentes patognicos no smen e em outros materiais clnicos, est restrita a laboratrios bem equipados, dificultando, principalmente, sua ampla utilizao na prtica Veterinria. O que se espera, entretanto, que no futuro a tcnica da PCR possa ser utilizada por profissionais de campo, sob a forma de kits de diagnstico, como se faz hoje, por exemplo, com a tcnica de ELISA para o diagnstico da influenza equina ou para outras doenas.

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INTERCMBIO E QUARENTENA DE

GERMOPLASMA VEGETAL
IInIntroduo de materiais estratgicos para pesquisa agrcola nacional e onterceptao de pragas querentenrias Maria de Fatima Batista (PhD); Jos Nelson L. FOnseca (Bsc); Renata C.V. Tenente ( Ps-PhD); Marta A.S. Mendes (Msc); Maria Regina V. de Oliveira (PhD); Denise N. Ferreira (ms); Pesquisadores do cenargem. Email: exchenge@cenargen.embrapa.br Fotos cedidas pelos autores

1. Intercmbio A pesquisa agropecuria dinmica e necessita estar sempre criando e/ou adaptando novas metodologias para garantir ao povo brasileiro uma alimentao rica e saudvel. A maior parte dos produtos que fazem parte da nossa alimentao no originria do Brasil,

condies edafoclimticas, resistentes a pragas e altamente produtivas. As novas leis de propriedade intelectual, que limitam as condies de uso do germoplasma introduzido, vo, conseqentemente, reduzir o volume de germoplasma

estabelecem normas de acordo com as necessidades de cada caso. A Portaria n 224, de 3 de maio de 1977, credencia a Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria (Embrapa) por meio de sua Unidade Descentralizada - Centro Nacional de Recursos Genticos e Biotecnologia (cenargen)

mas foi introduzida aps vir por outros pases e adaptada s nossas condies. Entre esses produtos esto arroz, o feijo, milho, soja, trigo, frutferas e hortalias exticas. Com isso, a agricultura brasileira tem-se beneficiado com a introduo de germoplasma de diversas espcies vegetais, que permitiram ao pas, por meio da pesquisa, obter variedades adaptadas s nossas
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vegetal intercambiado, devido s vrias restries impostas em um acordo de transferncia de germoplasma vegetal. Para viabilizar a importao de germoplasma vegetal, estratgica para o pas e de fundamental importncia para o enriquecimento gentico dos programas de melhoramento, sem o que as pesquisas agrcolas ficariam comprometidas, necessrio que haja uma regulamentao fitossanitria que estabelea os critrios para uma importao segura e que, ao mesmo tempo, no a prejudique. A legislao brasileira sobre importao e quarentena de material vegetal baseia-se no Decreto-lei n 24.114, de 12 de abril de 1934, assim como nas portarias complementares que regulamentam o assunto e

autorizando-a a proceder o intercmbio de germoplasma e a adotar os procedimentos de quarentena, bem como a dar pareceres tcnicos nos processos de importao de germoplasma no interesse da Embrapa e de outras instituies do Sistema Nacional de Pesquisa Agropecuria (SNPA), coordenado por ela. O intercmbio e os procedimentos quarentenrios de vegetais e de solo para pesquisa ou outros fins cientficos foram normatizados pela Portaria n 148, de 15 de junho de 1992, como descrito resumidamente a seguir:

Os pedidos de importao de germoplasma das unidades da Embrapa devem ser encaminhados diretamente ao Cenargen, rea de Intercmbio e Quarentena de Germoplasma Vegetal (AIQ), que providenciar o parecer tcnico, para, junto com o requerimento e a listagem do material, obter a "Permisso de Importao" junto ao Departamento de Defesa e Inspeo Vegetal (DDIV) do Ministrio da Agricultura e do Abastecimento (MA). Os requerimentos das importaes solicitadas pelos demais rgos oficiais e particulares de pesquisa devero ser enviados Delegacia Federal de Agricultura (DFA) do seu respectivo Estado, que o encaminhar ao DDIV e este, antes de emitir a "Permisso de Importao", solicitar um parecer tcnico ao Cenargen. Os procedimentos seguintes da importao sero feitos pela DFA e a quarentena, pelo Cenargen. As espcies vegetais so classificadas em duas categorias: de livre importao e de importao restrita. Os materiais vegetais de livre importao necessitam apenas do Certificado Fitossanitrio para seu intercmbio; j os de importao restrita necessitam de declaraes adicionais no Certificado Fitossanitrio. As exigncias que devem constar nas declaraes adicionais esto estabelecidas nas portarias complementares. A Portaria n. 437, de 25 de novembro de 1985, regula as importaes de sementes e/ou mudas para o comrcio. Nesse caso, o pedido formulado DFA do Estado correspondente, que, achando necessrio, solicita parecer tcnico de alguma instituio para assegurar a importao. Os demais procedimentos so estabelecidos pelo DDIV, que prescreve as medidas de quarentena, as quais, ento, so acompanhadas e fiscalizadas, at a liberao, pela DFA do Estado. No que se refere exportao de vegetais para o comrcio, as normas esto estabelecidas na Portaria n. 93, de 14 de abril de 1989, publicado no Dirio Oficial da Unio(Brasil, 1982). 2. Quarentena A palavra "quarentena" derivada do Latim "quadraginata" e do Italiano "quaranta", que significa quarenta. No italiano, a palavra "quarantina" foi originalmente, aplicada para o perodo de 40 dias de isolamento requerido para que um navio, includos seus passageiros e a carga, permanecesse ancorado em um porto de chegada quando proveniente de um pas onde ocorressem doenas epidmicas, de modo que, naquele perodo, fossem desenvolvidos e subseqentemente detectados os sintomas de algumas dessas doenas nos passageiros, antes do seu desembarque (Kahn, 1989). Quarentena vegetal, literalmente, e por extrapolao, significaria o isolamento de plantas por 40 dias, como perodo de incu-

bao para o aparecimento e deteco de sintomas de doenas. Na verdade, este procedimento constitui apenas uma frao das diversas aes que podem ser utilizadas em um programa de excluso de organismos indesejveis (Kahn, 1989). A quarentena vegetal tem como objetivo prevenir a introduo de organismos nocivos em reas isentas, utilizando a excluso como estratgia no controle contra pragas exticas, sendo aplicada a produtos de importao e exportao (Kahn,

1989), Marques et al., 1995). Portanto, a quarentena deve ser encarada como uma das facetas nos programas nacionais de controle ou manejo integrado de pragas. As suas aes so baseadas em atos legislativos e em procedimentos tcnicos, cuja eficcia depende fundamentalmente da existncia de pessoal treinado e de estrutura operacional adequada. O servio de quarentena tambm deve envolver uma ativa cooperao de toda a comunidade, medida em que as restries impostas pela
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legislao sejam devidamente aceitas e acatadas integralmente. A quarentena de produtos importados utiliza aes reguladoras para excluir pragas que possam infestar ou contaminar materiais vegetais. Se no forem interceptadas, essas pragas podero ser disseminadas e causar grandes prejuzos ao pas importador. A quarentena de produtos para exportao utiliza procedimentos para proteger a agricultura dos pases importadores, de acordo com os regulamentos ou condies especificadas por estes (Kahn, 1989). O uso da excluso para prevenir a introduo de uma determinada praga pode ser simplificado como um esforo para eliminar ou reduzir severamente sua populao, por meio de medidas reguladoras, ao longo de sua trajetria de entrada (Foster, 1991). A quarentena deve basear-se em evidncias biolgicas e nunca ser resultante de presses polticas ou econmicas. A primeira e bsica preocupao deve ser o conhecimento da situao dentro e fora do pas em relao ocorrncia de pragas, com o objetivo de determinar riscos potenciais e estabelecer medidas de precauo por ocasio da introduo de plantas ou partes de plantas. Por outro lado, a quarentena, particularmente a de germoplasma, no deve funcionar como uma barreira que venha prejudicar o trabalho dos melhoristas ou mesmo o comrcio de germoplasma melhorado; a sua funo deve ser a de "filtro", a fim de evitar a entrada de pragas exticas que eventualmente possam estar associadas ao material introduzido. As medidas de quarentena no devem ser estticas ou definitivas, elas devem ser alteradas sempre que as condies mudarem ou novos fatos se tornarem evidentes. Assim, restries podem e devem ser includas dependendo da situao.

de germoplasma, sem, contudo, contrariar a legislao vigente. Procedimentos mais rgidos so adotados quando, por evidncias biolgicas, os riscos so considerados grandes.

cultivos; perda de mercados de exportao; pela presena de pragas de importncia quarentenria no Pas; aumento dos gastos com controle de pragas; impacto sobre os

Em geral a atitude dos melhoristas em relao entrada de germoplasma no pas visivelmente liberal, enquanto a dos responsveis pela quarentena tende a ser conservadora (Kahn, 1989). O Cenargen tem adotado um enfoque positivo quanto introduo e quarentena
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O importante fazer chegar ao melhorista o germoplasma indispensvel ao seu programa de melhoramento, com o menor risco possvel de introduo de novas pragas.O valor da quarentena vegetal no pode ser demonstrado experimentalmente (Neergard, 1977 citado por Marques et al., 1995), mas pode ser avaliado em funo das conseqncias desastrosas resultantes da introduo de pragas exticas em reas produtoras. Estas conseqncias podem ser de diversas naturezas, como danos e perdas de

programas de manejo integrado de pragas em execuo ou em desenvolvimento; danos ao ambiente, pela frequente necessidade de aplicao de defensivos; para o controle da espcie introduzida; custos sociais, como desemprego, por causa da eliminao ou da diminuio de um determinado cultivo em uma regio; ou reduo de fontes de alimento importantes para a populao (Brasil, 1995). O movimento desordenado de material vegetal inevitavelmente envolve riscos de introduo de pragas em reas no contaminadas. Importaes inadvertidas de material vegetal tem causado srios prejuzos agricultura

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brasileira. Exemplos mais conhecidos so: o cancro-ctrico, causado pela bactria Xanthomonas campestris pv. citri (Hasse) Dye, que exigiu gastos acima de 5 milhes de dlares para sua erradicao, que mesmo assim continua presente em So Paulo e em outras partes do pas; o vrus da tristeza do Citrus, que na poca da sua introduo

por essa praga j ultrapassam R $500 milhes, porm o impacto causado no ambiente pelo uso excessivo de agrotxicos inestimvel (M.R.V. de Oliveira, comunicao pessoal). A quarentena faz-se, ento, imprescindvel em todo o processo de intercmbio de germoplasma.

baseada nas caractersticas morfolgicas, utilizando-se para isso bibliografia especfica. Laboratrio de Nematologia - Material sendo preparado para anlise de nematides. O germoplasma, quando na forma de sementes, sempre fumigado com fosfeto de alumnio (fosfina) por uma ou duas vezes,

Procedimentos quarentenrios realizados em germoplasma vegetal: As atividades de intercmbio e quarentena realizadas pela Embrapa/Cenargen iniciaram-se em 1976 (Warwick et al. 1983; Rocha et al. 1984, Marques et al. 1995), tendo movimentado at 1997, 324.712 acessos de germoplasma vegetal (Tabela 1) e impedido a introduo e disseminao de numerosas espcies de pragas exticas no pas (Batista et al., 1995; Mendes & Ferreira, 1994; Tenente et al., 1994 e 1996). Inspeo no ponto de ingresso do germoplasma: O Germoplasma, ao chegar, inspecionado no ponto de ingresso, que pode ser um aeroporto, ou porto, correio ou posto de fronteira, por um inspetor da DFA. O inspetor examina as condies sanitrias e a documentao do material. Satisfeitas as exigncias legais o material liberado pela DFA para cumprir os procedimentos quarentenrios no Cenargen. Quarentena em germoplasma vegetal no Cenargen: Os acessos de germoplasma, quando chegam rea de Intercmbio e Quarentena de Germoplasma Vegetal (AIQ), do Cenargen, so examinados quanto a presena de bactrias, fungos, nematides, vrus, virides, caros e insetos, em laboratrios especializados, por uma equipe de fitopatologistas, entomologistas e tcnicos com experincia em quarentena. Laboratrio de Entomologia: todo germoplasma vegetal primeiramente examinado quanto a presena de caros e insetos. Os mtodos utilizados so: inspeo visual, uso de refletor com lente de aumento, observao sob microscpio estereoscpio e peneiramento de sementes (para caros). A identificao das espcies dependendo do estgio de desenvolvimento das pragas contaminantes, enquanto que os materiais introduzidos na forma de propagao vegetativa so tratados com soluo de defensivos qumicos. Fitopatologia: As anlises nos laboratrios de Micologia, Bacteriologia, Virologia e Nematologia so realizadas por amostragem, pois as tcnicas utilizadas normalmente destroem os materiais. No caso de sementes, so retiradas amostras que variam de 2 a 10% para ser divididas entre os laboratrios. Em outras formas de propagao vegetativa tais como bulbos, estacas, mudas e rizomas, as anlises so realizadas em 100% do material. Laboratrio de Micologia: Para deteco de fungos em sementes ou partes da planta, so utilizados os mtodos tradicionais de plaqueamento em papel de filtro ou em meio de cultura, lavagem das sementes em gua e sedimentao, aprovados pelo "International Seed Testing Association" (ISTA), e descritos detalhadamente em Mendes & Ferreira (1994). Tcnicas de biologia molecular, tais como RFLP e RAPDS/ PCR, so ferramentas adicionais para caracterizar patgenos de trigo, milho e sorgo a nvel de DNA genmico (Urben, 1994; Ferreira et al., 1996).

dizimou parte dos nossos pomares; o fungo Peronosclerospora sorghi (Weston & Uppal) C. G. Shaw em sorgo; a ferrugem do cafeeiro, causada pelo fungo Hemileia vastatrix Berk & Br., introduzida no Brasil em 1970 e que quando no controladopode causar perdas em torno de 30 por cento na produo, o que eqivale a, aproximadamente, 500 milhes de dlares (Mnaco, 1978); o moko da bananeira, cujo agente etiolgico a bactria Pseudomonas solanacearum (Smith) Smith., raa 2; e o inseto Anthonomus grandis Boheman, o bicudo do algodoeiro, o qual causou perdas de at 100% em algumas regies do pas, principalmente no Nordeste. Recentemente foram detectados dois novos patgenos da cultura de soja: o nematide do cisto, Heterodera glycines I Ichinohe, em 1992 (Mendes & Dickson, 1993), e Diaporthe phaseolorum (Cke. & Ell) Sace. f. sp. meridionalis agente do cancro da haste, em 1988, que tornaram uma ameaa a essa cultura com nveis de perdas que vm atingindo 100% em determinadas reas (Yorinori, 1990). A mosca-branca, Bemisia tabaci raa B (=Bemisia argentifolii) entrou no pas no incio da dcada de 90, e hoje est disseminada em 17 estados da Federao, atacando inmeras culturas de importncia econmica. Os prejuzos causados
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Laboratrio de Bacteriologia: Para a deteco de bactrias nas sementes so empregados os seguintes mtodos: plantio de sementes em solo esterilizado dentro de cmara mida para observao dos sintomas em plntulas; plantio de sementes em papel germinador e incubao a 100% de UR; e plaqueamento de extrato de sementes em meio seletivo (Schaad, 1982 e Bradbury, 1986). A identificao das espcies so baseadas em testes fisiolgicos e bioqumicos. Laboratrio de Nematologia: Uma ou mais tcnicas so empregadas rotineiramente para extrao de nematides de sementes, de solo ou de partes vegetativas, So elas: funil de Baermann modificado, peneiramento, centrifugao, flutuao, sistema de bandejas e exame direto sob microscpio estereoscpico (Southey, 1986; Zuckerman et al., 1970). As espcies so identificadas com base nas suas caractersticas morfomtricas e morfoanatmicas, de acordo com literatura especfica (Mai et al., 1975; Tenente e Manso, 1987). Isolamento em meio de cultura especfico para deteco de fungos. Laboratrio de Virologia: As seguintes tcnicas so empregadas para a deteco e

impostas pelos regulamentos fitossanitrios so consideradas como impedimento ao comrcio internacional. Entretanto, a utilizao de medidas quarentenrias coerentes com o risco que representa a importao de cada produto, pode facilitar a comercializao entre os pases (Ganapathi, 1994). As medidas quarentenrias comumente utilizadas so: inspeo fitossanitria e interceptao de pragas em pontos de entrada, quarentena de ps-entrada e proibio, restrio ou requisio de tratamentos quarentenrios para a importao de produtos provenientes de pases onde espcies de pragas de importncia quarentenria so assinaladas. Pode-se tambm solicitar que os produtos sejam provenientes de reas livres de pragas (Brasil, 1995). A inspeo fitossanitria uma medida quarentenria que possibilita a interceptao de organismos nocivos associados ao material vegetal, assim que este chega ao pas. A inspeo do material vegetal tambm fornece algumas informaes para se estimar o risco que representa a importao de um dado produto de um pas ou regio. A identificao dos organismos detectados de fundamental importncia para se decidir sobre o procedimento que deve ser adotado em relao ao material importado. Quando pragas quarentenrias so detectadas durante a inspeo de produtos, uma das trs aes seguintes normalmente tomada: realizao de tratamentos, devoluo do lote importado ao pas de origem ou destruio dos produtos infestados (Baker et al., 1993). Para que um tratamento seja considerado quarentenrio, todos os organismos associados ao material vegetal devem receber doses letais sem que o material seja danificado. So poucos os tratamentos que podem realmente alcanar os altos nveis de controle exigidos pelos regulamentos quarentenrios. Tratamentos quarentenrios efetivos podem auxiliar a evitar o movimento de pragas e facilitar as restries impostas para a importao de produtos vegetais provenientes de pases onde ocorrem pragas de importncia quarentenria (MacDonald & Mills, 1994). 4. Pragas de importncia quarentenria para o Brasil As medidas quarentenrias so baseadas nas listas de pragas de importncia quarentenria formuladas para cada pas ou para grupo de pases geograficamente prximos. As pragas de importncia quarentenria para o Brasil esto contidas nas listas A1 e A2 aprovadas pelo Comit de Sanidade Vegetal dos pases do Cone Sul (COSAVE), publicada no Dirio Oficial (Brasil, 1996). As espcies includas nas listas A1 e A2

devem ser revisadas periodicamente, devendo ser includas e/ou retiradas as pragas, de acordo com relatos da literatura de novas ocorrncias. A lista A1 contm as espcies no registradas no Brasil e que podem vir a causar perdas econmicas s culturas, se introduzidas. Na lista A2, esto as pragas de distribuio geogrfica localizada e que esto sob controle oficial. Praga quarentenria: qualquer espcie, raa ou biotipo de vegetal, animal ou agente patognico nocivo a vegetais ou a produtos vegetais, ausente no pas ou, se presente, no amplamente distribuda e sob controle oficial. Praga de qualidade: A praga de qualidade ou nociva uma praga no-quarentenria, que afeta diretamente o uso proposto dos vegetais ou produtos vegetais, causando perdas econmicas importantes. Cada vez mais, enfatiza-se a importncia dos pases justificarem seus regulamentos fitossanitrios. A meta atual que os servios de quarentena aprimorem o processo utilizado para identificar quais so as pragas para as quais as barreiras fitossanitrias so justificveis, isto , as que apresentam importncia quarentenria, em meio aos milhares de organismos contra os quais as medidas fitossanitrias no podem ser biologicamente sustentadas. Por isso, o processo para determinao de quais as espcies que devem ser consideradas pragas

identificao de vrus ou virides: plantio a de sementes em solo esterilizado em quarentenrio para a observao se sintomas, uso de plantas indicadoras, sorologia (imunodifuso e ELISA), microscopia eletrnica ("leaf deep", seces ultrafinas), RPAGE (Reverse Polyacrylamide Gel Electrophoresis) e NASH (Nucleic Acid Spot Hybridization), descritos detalhadamente em Batista et al (1995). 3. Medidas quarentenrias De acordo com o suplemento ao Dirio Oficial n 195, do Ministrio da Agricultura, e do Abastecimento (Brasil, 1995), medidas fitossanitrias referem-se a "qualquer legislao, "standard", diretriz, recomendao ou procedimento oficial que tem o propsito de prevenir a introduo e/ou disseminao de pragas quarentenrias, assim como o seu controle e erradicao" (Ferreira, 1997). Comumente as restries quarentenrias

quarentenrias, deve ser claro e consistente (Hopper, 1991). Preparao do teste NCM Elisa para deteco de vrus. Para decidir que espcies sero definidas como pragas de importncia quarentenria para um pas ou regio, uma srie de informaes deve ser considerada (EPPO, 1993). Por exemplo, necessrio avaliar o potencial das espcies exticas em causar prejuzos no pas em questo. Esse processo o componente preliminar da Anlise de Risco de Pragas (ARP) (Baker et al., 1993; Hopper, 1991 e 1993).
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Bacillus
ENTOMOPATOGNICOS
Dos Bacillus estomapatognicos, o que se espera?
lgumas bactrias entomopatognicas do gnero Bacillus - as que ocorrem naturalmente no meio ambiente ou as modificadas geneticamente - so matrias-primas para a industrializao de inseticidas bacterianos. Seus efeitos eletivos sobre as larvas de mosquitos so to pronunciados, que as indstrias de inseticidas convencionais buscam ampliar suas utilizaes com o objetivo de controlar pragas da agricultura e vetores de agentes etiolgicos de doenas humanas e vegetais. Bactrias produtoras de corpos para-esporais As bactrias do gnero Bacillus tm como caracterstica a produo natural de esporos. Enquanto dentro da clula, mergulhados no citoplasma, os esporos so chamados endsporos e o conjunto denominado de esporngio. No possuindo o esporo, a clula bacteriana encontra-se na sua forma vegetativa. Os Bacillus patognicos para insetos podem sintetizar estruturas glicoproticas slidas denominadas de cristais de dendotoxina, cristais de toxina, cristais de protena ou pr-toxina, de localizao justaposta ao esporo. so chamados corpos para-esporais. Essas protenas so codificadas por diferentes genes (ver Tabela 1). Numa mesma clula, podem ser encontradas uma ou mais dessas glicoprotenas, como, por exemplo, a linhagem B.thuringiensis sorovar israelensis, onde podem ser encontrados at cinco tipos diferentes de protenas, todas com atividade contra larvas de mosquitos. O que faz essas protenas permanecerem juntas dentro desse corpo so interaes complexas do tipo pontes de hidrognio e ligaes dissulfeto. As protoxinas, como todas as protenas, so formadas por duas regies: uma poro C-terminal e outra N-terminal. Quando
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Leon RAbinovitch, Clara de Ftima G. Cavados & Marli Maria Lima Pesquisadores do Instituto Oswaldo Cruz - FIOCRUZ Foto cedida pelos autores.

ativadas por proteases intestinais, elas perdem a poro C-terminal, restandolhes a N-terminal como parte ativa. As diferentes protenas encontradas nas subespcies de B.thuringiensis diferem entre si pela sequncia de aminocidos integrantes da cadeia peptdica, da natureza dos aminocidos e dos acares. Das vrias espcies do gnero, algumas poucas como B. thuringiensis, B. sphaericus, B. popilliae, B. larvae, B. lentimorbus e B. laterosporus, tm a propriedade de sintetizar pr-toxinas ativas contra insetos. Essas espcies so as entomopatognicas, e tem atividade sobre insetos das ordens Diptera, Lepidoptera e Coleoptera, mas atuam somente sobre a fase larvar, nunca sobre os adultos. As pr-toxinas, quando ingeridas, so solubilizadas pelo pH alcalino do trato intestinal do inseto-alvo e clivadas pelas proteases intestinais, tomando-se peptdios de menor tamanho. Estes so colhidos por receptores especficos encontrados no epitlio, e iniciam um processo de destruio tecidual,

Figura 1: Corte ultrafino de Bacillus sphaericus ATCC 1593 entomopatognico, vendo-se a d-endotoxina (c) com a forma de um paralelogramo prxima do esporo da bactria (e). Cortesia de K.R. Arajo da Silva e M.N. Meirelles, Instituto Oswaldo Cruz.

que colabora para a paralisao muscular, levando o inseto morte. Esta tambm pode ocorrer em funo de uma segunda causa associada primeira, que a multiplicao bacteriana na hemolinfa, determinando um processo septicmico. A multiplicao celular, nesse caso, est relacionada germinao do esporo no inseto, a sua multiplicao quando na forma vegetativa e, desta, voltando para esporo. H indcios de que isso ocorra em B. sphaericus, por exemplo. Entretanto, o B. thuringiensis sorovar thuringiensis capaz de produzir e excretar uma estrutura termo-resistente a 120C, no protica, a b-exotoxina, que atua ao nvel da DNA polimerase, inibindo-a. O espectro de ao dessa muito mais amplo que o a da d-endotoxina, atua sobre ordens de insetos como Diptera, Lepidoptera, Coleoptera, Orthoptera, Hemiptera, Hymenoptera, Acari, entre outras. A inespecificidade da d-exotoxina faz com que ela no seja utilizada na industrializao de inseticidas. Curiosamente, na espcie B.sphaericus, existem estirpes cristalognicas (Figura 1), produtoras de um corpo paraesporal, que, basicamente, contm duas protenas denominadas P51 e P42, que apresentam uma ao sinrgica entre si; e estirpes acristalognicas, que possuem uma pequena atividade entomopatognica. Essa atividade est relacionada com a produo durante a fase vegetativa de uma protena denominada mtx1, que apresenta peso molecular estimado de 100 Kda. Alm dessa, tambm j se sabe da existncia de uma outra protena, igualmente sintetizada durante a fase vegetativa mtx2, com peso molecular estimado em 32 Kda, cuja ao no inseto est sendo investigada. Com relao aos outros Bacillus que apresentam atividade

entomopatognica, a espcie B. laterosporus possui toxicidade somente para larvas de mosquitos, porm, quando comparada produzida por B. thuringiensis e por B. sphaericus, pode ser considerada de baixa toxidade . J as outras espcies entomopatognicas no possuem potencial para ser utilizadas como inseticidas biolgicos, por apresentarem caractersticas que dificultariam seu uso comercial, como, por exemplo, necessidade de hospedeiro para sua multiplicao (B. popilliae e B. lentimorbus) . Outros so patognicos para insetos benficos como as abelhas melferas (B. larvae). Enquanto isso, as espcies B. thuringiensis e B. sphaericus atingiram o pdio de industrializao, isto , apresentam um nmero grande de vantagens, comparativamente s desvantagens, como mostrado no Quadro 1. Importncia Econmica Embora os inseticidas bacterianos base de pr-toxina de Bacillus sejam uma realidade, o seu mercado na esfera mundial ainda pequeno e no ameaa os inseticidas convencionais no bacterianos, como os preparados com derivados orgnicos fosforados, clorados e piretrides. Pesquisa Bsica e Aplicada com Bacillus Entomopatognicos Considerando que os Bacillus inseticidas oferecem, em geral, uma segurana elevada para seus empregos como produtos industrializados, as prprias empresas produtoras de inseticidas investem diretamente no melhoramento da performance das bactrias entomopatognicas ou dos produtos base de suas pr-toxinas. Entre as linhas de pesquisa que visam ao melhoramento das linhagens, encontramos a engenharia gentica que, para o caso, utiliza veculos como ferramentas de transporte dos genes das protenas txicas. Vrios genes de protenas de B. thuringiensis e B. sphaericus tm sido transferidos para diferentes veculos, como, por exemplo, as cianobactrias Caulobacter crescentus e Ancylobacter aquaticus. E testes de atividade, feitos com esses microrganismos recombinantes, tm mostrado que eles possuem atividade txica significante para larvas de insetos dos gneros Aedes e Culex. Embora a expresso da toxina ainda seja pequena, as caractersticas das clulas podem prolongar sua ao inseticida. Busca-se tambm a transferncia e expresso de genes de prtoxinas entre B. thuringiensis e B. sphaericus, de modo a ampliar a eficcia e as vantagens de uma ou outra dessas espcies contra larvas de mosquitos, ou a eficcia de B. thuringiensis sorovar kurstaki contra lagartas de Lepidoptera.
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resenciamos uma era onde o domnio do conhecimento diretamente convertido em poder de negociao; onde o efetivo desenvolvimento da Cincia ocupa um lugar determinante no processo de globalizao. Muito tem sido escrito a respeito da Cincia. Fato que parece bastante bvio, uma vez que o desenvolvimento da Cincia tem sido, e continuar sendo, a base da nossa sobrevivncia e da melhoria da qualidade de vida de nossa sociedade. Exemplos concretos dessas afirmaes podem ser encontrados nossa volta a todo momento. O que parece necessitar de uma urgente reflexo objetiva e correta a forma de como a Cincia chamada "de ponta" foi ou tem sido conduzida em pases desenvolvidos e em pases em diferentes estgios de desenvolvimento. Essas colocaes tm um nico objetivo: otimizar as atividades cientficas e torn-las efetivamente produtivas, ou seja, que elas possam contribuir para o desenvolvimento da Cincia e para o mercado. Nas ultimas dcadas, os investimentos estratgicos referentes s atividades da pesquisa cientfica tm sido concentrados, essencialmente, na rea de formao de recursos humanos, com vistas a gerar uma massa crtica de cientistas. Atualmente, essa estratgia no suficiente e no pode ser justificada. Isso feito, dever ocorrer uma limitada sustentao cientfica, social e poltica. Necessitamos de efetivas geraes de processos e produtos associados s suas decorrentes regulamentaes da propriedade intelectual. Uma idia inovadora. Uma atividade intelectual, gerada a partir de transformaes e/ou de adies e derivaes de informaes existentes, que permitam visualizar de forma ampla o espao que a idia poder ocupar no setor produtivo. Isso feito, viabilizar a efetivao do processo inventivo. Como consequncia, a avaliao das hipteses de forma experimental, a regulamentao, a multiplicao e a produo. Em seguida, a obteno de
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um processo ou produto. Atividades cientficas dissociadas dessa sequncia, com algumas poucas excees em nossa histria, devero estar condenadas a contribuies de pouca expresso e com chances reduzidas como contribuies efetivas. No caso da Cincia, o termo ainda utilizado: Cincia fundamental e aplicada, simplesmente no faz nenhum sentido. Na verdade, sempre fez pouco sentido. A no

ser para justificar a falta de vontade e/ou a incapacidade de efetivar um compromisso com o setor produtivo. Nesse contexto, reflito com prementes objees a respeito de pesquisas cientficas, as quais denomino "atividades de meio". So atividades que normalmente envolvem repeties de protocolos referentes a processos e/ou produtos, em sua grande maioria devidamente patenteados. Atividades algumas vezes necessrias, quando devidamente avaliadas; entretanto, exercidas com intensidade maior do que a devida, principalmente em pases em desenvolvimento. No processo de inovao tecnolgica, existe uma situao com chances de chegar a um processo e/ou produto. A idia, inovadora ou no inovadora. Entretanto, seguida de uma efetiva avaliao prtica do processo. Nesse aspecto, a pesquisa fundamental e aplicada formam uma atividade nica. Algumas reflexes necessrias que podem servir como base para tomadas de

deciso: 1) Como a gerao de processos e produtos tecnolgicos vm ocorrendo em pases desenvolvidos? Sua quase total maioria tem sido produzida por indstrias. Tecnologias desenvolvidas em Universidades e/ou instituies de pesquisa e absorvidas pelas indstrias e/ou empresas tecnolgicas. 2) Como esse processo vem ocorrendo em pases em desenvolvimento? Inicialmente, pases em desenvolvimento devem ser enquadrados em diferentes estgios de desenvolvimento. Transferncia e/ ou adaptao de tecnologia: uma atividade exercida com grande intensidade. Gerao de alta tecnologia? Onde esto nossos exemplos? Qual o nmero de patentes de processos e/ou produtos na rea tecnolgica? Qual o espao existente? Qual a contribuio da alta tecnologia para os diferentes estratos sociais? Quais as demandas recebidas por parte de pases desenvolvidos e de indstrias associadas nossa pesquisa denominada "de ponta"?. Deveremos estar condenados importao de tecnologia? Esses exemplos de questes gerais podem ser respondidos de forma objetiva, tendo como base estratgias previamente fundamentadas. Sem dvida, temos muitas janelas de opes. Entretanto, necessitamos de modificaes em nosso modelo, forma de idealizao e conduo das atividades cientficas. No obstante, efetivao de qualquer estratgia, devero preceder definies polticas efetivas, capazes de serem operacionalizadas. Em adio, essas modificaes somente podero ser alcanadas a partir de uma inicial reflexo sobre os interesses e as atividades individuais, a sua correlao com as atividades sociais e o mercado, e ntima associao com aspectos da propriedade intelectual. Essas mudanas tm sido impostas pelo mundo atual e no esto associadas unicamente a pases em desenvolvimento, mas tambm tm sido foco de profundas reflexes nas atividades cientficas conduzidas nos pases desenvolvidos .

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Prezados leitores (as),

SEO DE CARTAS

Os leitores que desejarem entrar em contato com BIOTECNOLOGIA Cincia & Desenvolvimento podero enviar sua correspondncia via Internet, fax ou carta para esta seo. A critrio do editor, as mensagens podero ser publicadas resumidamente. Nossos endereos so: Redao de BIOTECNOLOGIA Cincia & Desenvolvimento SRTV/Sul - Quadra 701 Ed. Palcio do Rdio II, sala 215 Cep 70340-902 - Braslia - DF Tel.: (061) 225-1512 ou (061) 225-0976 Fax (061) 224-2830 Home-page: http://www.biotecnologia.com.br E-mail: kl3@biotecnologia.com.br

" com grande interesse que venho lendo as mais diversas matrias publicadas na revista BIOTECNOLOGIA Cincia & Desenvolvimento. Gostaria tambm de inform-lo que a matria sobre BRAQUITERAPIA, publicada na ltima edio, foi de grande importncia para meus estudos, j que no meu curso de graduao tenho uma matria relacionada a radiaes. Assim como houve na ltima edio a propaganda a respeito da BIOLATINA-98, gostaria que, se possvel, houvesse mais propagandas em relao a congressos, eventos, cursos relacionados rea da sade, etc. Certamente tudo isso de grande importncia aos graduandos na rea da sade. Antecipadamente agradeo-lhes pela ateno e mais uma vez devo parabeniz-los pela publicao da revista BIOTECNOLOGIA." Juliana Alves Batista Graduando em biomdicina pela UNIARARAS. Prezada Juliana, Agradecendo sua gentil carta, informamos que j se encontra, em nossa Homepage, uma seo de Eventos sempre atualizada. ... "Sou estudante de Engenharia Florestal, 3 ano, na Universidade de Braslia, e gostaria de sugerir, no querendo mudar a linha de matrias da revista, mas quem sabe, matrias um pouco mais ligadas rea Florestal? Tecnologias aplicadas ao desenvolvimento sustentvel de sociedades e meio-ambiente; Recuperao de reas degradadas por queimadas e

por desastres naturais? Que tal?" Daniel Lara Prezado Daniel, agradecemos seu e-mail, informamos que sua sugesto j foi encaminhada. ...Na portuniade, realssamos a importncia que a Bayer tem demonstrado no interesse quanto a proteo do meio ambiente o que muito nos orgulha enquanto educadores e seres humanos.'' Prof. Marco Antonio Lucidi Diretor Geral do Centro Federal de Educao. prezado professor, o programa Agrovida, da Bayer, recentemente merecedor dos maiores elogios. "A Grfica Auriverde e a Livraria da ABRASCO, convidam para o pr-lanamento do livro "Regulamentao da Biossegurana em Biotecnologia", de autoria do Prof. Silvio Valle, Especialista em Biossegurana e Coordenador dos Cursos de Biossegurana da Fundao Oswaldo Cruz. A publicao contm, de forma atualizada, as principais regulamentaes da Moderna Biotecnologia no Pas, prefaciada pelo Dr. Marco Maciel..." Agradecemos o convite e parabenizamos o autor pela importante e oportuna publicao. Comunico que o professor Srgio Batista Alves Lanou j a segunda edio do livro " Controle Microbiano de Insetos". Trata-se da maior obra em lngua portuguesa, no gnero e rea de especialidade, que j foi feito no Brasil. Prof. Luis F. Angeli.

O prof. Srgio um importante pesquisador na ESALQ. O e-mail dele : sebalves@carpa.ciagri.usp.br Para maiores informaes sobre a referida obra." "Gostaramos que publicassem com frequncia reportagens sobre tcnicas para a obteno de plantas transgnicas resistentes herbicidas, insetos e doenas. Cesar Bezerra de Sena Agripec Comunicamos ao prezado leitor que o assunto em questo j se encontra devidamente pautado para as prximas edies." "Adorei a revista Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento. Sou acadmica de Biologia e precisei responder um questionrio de Biotecnologia. Fiquei apavorada por no ter encontrado nada nos livros da faculdade, mas graas a Deus eu encontrei muitas respostas aqui. Nanda" "A Presidncia do INMETRO, agradece a gentileza recebida e parabeniza os responsveis e colaboradores pela perfeitas edies da revista Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento. A forma tcnica interessante e ilustrativa que compe os seus artigos, oferecem aos interessados as informaes tecnolgicas e cientficas de forma inteligente, bonita e agradvel. Nossos cumprimentos, JLIO SERGIO MIRILLI Chefe de Gabinete da Presidncia do INMETRO

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Neuroestimulao E Dor
ESTIMULAO ELTRICA DO SISTEMA NERVOSO PARA O MANEJO DA DOR CRNICA INTRATVEL

Osvaldo Vilela Filho: Chefe, Servio de Neurocirugia Funcional e Esterotxica, INCER Diretor, do Instituto Do CrebroINCER ( Servio de Neuricirurgia e Neurologia di Instituto de Ortopdico de Goinia) Neurocirurgio, Servio de Neurocirgia, Hospitalar das Clnicas, Facudade de Medicina, Universidade Federal de Gois ( HC-FM-UFG) Goinia-GO

Cludio F. Corra: Neurocirurgio, Servio de Neurocirurgia, Hospital 9 de lulho- Neurocirurgio, Ambulatrio de Dor, Hospital das Clnicas, Facudade de Medicina, Universidade de So Paulo (HC-Fm-USP) So Paulo-SP. Fotos cedidas pelos autores

dor uma importantssima modalidade sensorial, desempenhando, entre outros, o papel de alerta, comunicando ao organismo que algo est errado. A dor crnica, porm, no tem qualquer funo de alerta e gera acentuados estresse e incapacidade. , sem sombra de dvida, a maior causa de afastamento do trabalho, gerando um enorme nus para a nao. Trata-se, assim, de um problema que demanda prontos cuidados. Uma vez esgotado todo um arsenal de terapias conservadoras, e se o paciente assim o desejar, o tratamento cirrgico considerado. Uma das modalidades cirrgicas disponveis a da neuroestimulao, na qual certas estruturas do sistema nervoso, perifrico ou central, so eletricamente estimuladas, na tentativa de produzir alvio da dor. Os mtodos de estimulao eltrica remontam aos tempos antigos. J na Antiguidade, descargas de peixes eltricos foram utilizadas com finalidade teraputica (Egito, 2750 a .C). Scribonius Largus, em 46 a .C, foi, aparentemente, o pioneiro em fazer uso da estimulao eltrica para o tratamento da dor, ao avaliar os efeitos benficos dos peixes eltricos no manejo da dor provocada pela gota. A despeito de seu to longo uso, porm, s em 1965, com a publicao da Teoria da Comporta por Melzack e Wall, passou a neuroestimulao a ser aplicada com rigor cientfico. este palpitante tema que abordaremos a seguir.
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I - ASPECTOS BSICOS: Dor uma experincia sensorial e emocional desagradvel, podendo ser consequente a um estmulo virtual ou potencialmente lesivo aplicado aos nociceptores (dor nociceptiva ou somtica), leso do sistema nervoso (dor por injria neural, neuroptica ou por desaferentao), a fenmenos de natureza puramente psquica (dor psicognica) ou a uma associao desses mecanismos (dor mista). , essencialmente, uma manifestao subjetiva, variando sua apreciao de indivduo para indivduo. Dependendo de sua durao, pode ser ela tambm classificada em aguda e crnica. Dor nociceptiva aquela que vivenciamos a todo instante. Depende da ativao dos nociceptores por estmulos mecnicos, trmicos ou qumicos nxicos, fenmeno este denominado transduo e da transmisso dos impulsos a gerados pelas vias perifricas e centrais intactas da dor. Os nociceptores nada mais so do que terminaes nervosas livres das fibras amielnicas (C ou IV) e mielnicas finas (A-delta ou III), as quais correspondem aos prolongamentos perifricos dos neurnios pseudounipolares situados nos gnglios espinhais ou de alguns nervos cranianos (trigmeo, facial, glossofarngeo e vago). Os prolongamentos centrais dessas clulas adentram a medula espinhal (ou o tronco cerebral) pela raiz dorsal (e tambm, em escala bem menor, pela raiz ventral) e, aps curso no trato dorsolateral ou de Lissauer, penetram no corno dorsal

(lminas de Rexed I, IIo e V, principalmente) e fazem sinapse com as clulas de origem das vias da dor. As vias nociceptivas podem ser divididas em dois grandes grupos: lateral e medial. As vias do grupo lateral, filogeneticamente mais recentes, quase totalmente cruzadas e representadas pelos tratos neoespinotalmico, n e o t r i g e m i n o t a l m i c o , espinocervicotalmico e sistema pssinptico da coluna dorsal, terminam, predominantemente, no ncleo ventrocaudal (ventral posterolateral - VPL + ventral posteromedial - VPM) do tlamo, de onde partem as radiaes talmicas para o crtex somestsico; por serem essas vias e estruturas somatotopicamente organizadas, esto elas envolvidas com o aspecto sensitivo-discriminativo da dor. As vias do grupo medial, filogeneticamente mais antigas, parcialmente cruzadas, terminam direta (tratos paleoespinotalmico e paleotrigeminotalmico) ou indiretamente (tratos espinorreticular e espinomesenceflico e sistema ascendente multissinptico proprioespinhal) nos ncleos mediais (dorsomedial) e intralaminares (centro-mediano, parafascicular e central lateral) do tlamo medial, aps sinapse na formao reticular do tronco cerebral e na substncia cinzenta periaquedutal (PAG), de onde partem as vias reticulotalmicas (emitem colaterais para o sistema lmbico e para a substncia cinzenta periventricular _ PVG); no so organizadas somatotopicamente e esto relacionadas ao aspecto afetivo-motivacional da dor.

J h muito se suspeitava, devido a uma srie de observaes clnicas, que, alm de sistemas responsveis pela transmisso e reconhecimento da dor, os organismos fossem tambm dotados de sistemas responsveis por sua modulao. S em 1965, porm, um mecanismo modulatrio foi objetivamente proposto (Teoria da Comporta). Melzack e Wall sugeriram a existncia de uma espcie de comporta no corno dorsal, que, quando aberta, permitiria a transmisso dos impulsos dolorosos e, quando fechada, bloquearia a passagem dos mesmos. A ativao das fibras mielnicas grossas (Aalfa e A-beta), responsveis pela conduo do tato, presso, propriocepo e sensibilidade vibratria, excitaria interneurnios inibitrios para os aferentes primrios nociceptivos, fechando a comporta; a estimulao das fibras C e A-delta, por outro lado, condutoras das sensibilidades dolorosa e trmica, inibiria esses interneurnios inibitrios, assim permitindo a abertura da comporta e a ativao das vias da dor pelos aferentes primrios nociceptivos. Como consequncia dessa proposta, uma nova avenida para o tratamento das sndromes dolorosas foi aberta: a estimulao eltrica de nervos perifricos (Wall & Sweet, 1967), do funculo posterior da medula espinhal (Shealy, 1967) e do ncleo ventrocaudal (VC) do tlamo (Mazars e Hosobuchi, 1973). Em 1969, Reynolds descreveu um novo sistema modulatrio: a substncia cinzenta periventricular-periaquedutal (PVG-PAG). A estimulao eltrica da mesma produzia analgesia suficiente para permitir a realizao de laparotomia em ratos. Posteriormente, determinou-se a riqueza dessa regio em terminais, receptores e clulas opiides e que a microinjeo de morfina nesse stio produzia analgesia similar quela produzida por sua estimulao, ambas passveis de reverso pela administrao de naloxone, um antagonista opiide. Concluiu-se, dessa forma, que a analgesia produzida pela estimulao de PVGPAG e a analgesia produzida por opiides compartilham do mesmo substrato antomo-funcional. Foi utilizada clinicamente, pela primeira vez, por Richardson e por Hosobuchi, em 1977. A estimulao eltrica e a microinjeo de morfina em duas outras reas, bulbo rostroventral - BRV (ncleos rafe magno, magnocelular e reticular paragigantocelular lateral) e tegmento pontino dorsolateral (locus ceruleus e subceruleus), tambm produzem profunda analgesia. Uma srie de estudos acabou por desvendar os mecanismos envolvidos: dessas estruturas originam-

se, respectivamente, as vias rafe-espinhal, serotoninrgica, e retculo-espinhal, noradrenrgica, que se projetam bilateralmente nos funculos dorsolaterais da medula espinhal, onde, ao nvel dos cornos dorsais, inibem os neurnios de origem das vias nociceptivas. A seco bilateral dos funculos dorsolaterais da medula espinhal e a injeo intratecal de antagonistas serotoninrgicos e noradrenrgicos revertem a analgesia produzida pela estimulao eltrica ou pela microinjeo de opiides em PVG-PAG, BRV e tegmento pontino dorsolateral. Tais resultados sugerem que a analgesia produzida pela estimulao de PVGPAG mediada pelo BRV e tegmento pontino dorsolateral. Conexes recprocas entre essas estruturas foram determinadas. Vrias outras estruturas, quando eletricamente estimuladas, podem aliviar o sofrimento provocado pela dor: tlamo medial e VC, lemnisco medial, cpsula interna, crtex motor (Tsubokawa, 1991) e somestsico, ncleo caudato e substncia nigra, entre outros. Vilela Filho, 1996, props a existncia de um circuito envolvendo diversas reas cerebrais, o qual, estimulado, inibiria a atividade nociceptiva no tlamo medial e nas vias reticulotalmicas. Os seguintes seriam os neurotransmissores, estruturas e vias envolvidos: VPL/VPM (glutamato) Crtex Somestsico (glutamato) Crtex Motor (glutamato) Putmen Anterior (substncia P) Plido Medial / Substncia Nigra

Reticulata (gaba) _o Tlamo Medial / Formao Reticular Mesenceflica (via reticulotalmica _ neurotransmissor ?) Tlamo Medial. E ainda: Substncia Nigra Reticulata (?) Substncia Nigra Compacta (dopamina) Putmen (substncia P) Plido Medial / Substncia Nigra Reticulata (gaba) _o Tlamo Medial. A essas vias e estruturas denominou Circuito Modulatrio ProsencfaloMesenceflico _ CMPM ( = excitao; o = inibio) Dada a existncia tanto de sistemas transmissores como de sistemas moduladores da dor, depreende-se que a sensao e a intensidade da mesma dependem do equilbrio entre esses dois sistemas. A excitao dos nociceptores, fenmeno inicial imprescindvel para o aparecimento da dor nociceptiva, pode ser breve ou prolongada, continuada. Nesta ltima eventualidade, a dor torna-se crnica. o que ocorre, por exemplo, na osteoartrite crnica, na dor oriunda da coluna por problemas mecnicos, na artrose, na invaso ssea por cncer, na lombociatalgia provocada por uma hrnia discal ou na neuralgia do trigmeo. A remoo do fator causal usualmente elimina a dor; infelizmente, isso nem sempre possvel. Vrios termos so utilizados pelos pacientes para descrev-la, todos eles sugerindo leso tissular: aguda, em facada, em pontada, em choque, latejante, lacerando, esmagando, etc. A dor nociceptiva usualmente responsiva aos antiinflamatrios, analgsicos co
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muns e opiides, fisioterapia e interrupo transitria (bloqueios anestsicos) ou permanente (cirrgica) das vias da dor em algum ponto do sistema nervoso perifrico ou central. Dor por injria neural (DIN), diversamente da nociceptiva, aquela que decorre da leso do sistema nervoso perifrico ou central, tendo como principais causas: leso traumtica de nervo perifrico, polineuropatia, amputao, traumatismo raquimedular e doena cerebrovascular. Curiosamente, nesses casos, a dor surge em uma rea de dormncia, iniciando-se comumente dias, meses ou mesmo anos aps a atuao do fator causal, o qual, usualmente, no pode ser removido. A DIN pode se apresentar com trs componentes: 1- Dor constante, frequentemente descrita como em queimao, formigando (dormente) ou doda, sempre presente; 2- Dor intermitente, descrita como aguda, em facada ou em choque, mais comum nas leses do sistema nervoso perifrico, mas tambm na leso medular e rara na leso enceflica e 3- Dor evocada, sob a forma de alodnia ou hiperpatia, mais comum nas leses enceflicas, mas no infrequente nas leses medulares ou perifricas. Os componentes intermitente e evocado costumam responder s mesmas estratgias usadas para tratar a dor nociceptiva; a dor intermitente pode ser tambm tratada, assim como algumas dores nociceptivas (neuralgia trigeminal e occipital), com anticonvulsivantes. A dor constante, porm, usualmente refratria a essas medidas e responsiva ao tratamento com bloqueadores da recaptao da serotonina e fenotiaznicos; a interrupo cirrgica da via neoespinotalmica ou neotrigeminotalmica costuma agravla. Sua fisiopatologia incerta. Parece, porm, que a leso das vias neoespino ou neotrigeminotalmica seja essencial para o seu aparecimento. Acredita-se que a dor intermitente se deva a impulsos ectpicos gerados no stio de leso do sistema nervoso, seja por irritao por cicatriz local ou por efapse e que tais impulsos trafeguem pelas vias "normais" da dor. A dor evocada parece decorrer da estimulao de receptores por estmulos incuos (alodnia) ou leve a moderadamente nxicos (hiperpatia), os quais, em virtude dos rearranjos sinpticos decorrentes da leso neural, so processados de maneira anormal no sistema nervoso central; parece tambm ser transmitida pelas vias "normais" da dor. De natureza ainda mais incerta a dor constante, vrias hipteses tendo sido propostas na tentativa de explic-la. Vilela Filho, 1996, criticou as hipteses
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mais difundidas e props que a DIN seria decorrente da hiperatividade do tlamo medial secundria hipoatividade do Circuito Modulatrio ProsencfaloMesenceflico. Tal hipoatividade seria consequente leso de qualquer estrutura / via participante deste circuito ou das vias ativadoras do mesmo, ativao esta provavelmente mediada pelo trato espinotalmico anterior e talvez, tambm, pelo neoespinotalmico. II - INDICAES, CONTRA-INDICAES E SELEO DE PACIENTES: A melhor estratgia para se tratar qualquer tipo de dor a remoo do fator causal. o que se faz, por exemplo, quando se procede a uma apendicectomia em um paciente com apendicite, ou quando se resseca um disco intervertebral herniado em um paciente com lombociatalgia. Se a remoo do fator causal no for possvel, como na invaso ssea por cncer ou na dor que se segue doena cerebrovascular e ao traumatismo raquimedular, ou quando, mesmo aps sua eliminao, ocorre persistncia da dor (sndrome ps-laminectomia no paciente com hrnia discal, por exemplo), o tratamento sintomtico deve ser institudo. Aps se tentar as mais diversas manipulaes farmacolgicas com possibilidade de aliviar o tipo de dor referido pelo paciente, fisioterapia, acupuntura, bloqueios anestsicos, infiltrao de trigger-points, biofeedback,

psicoterapia e suporte psicolgico / psiquitrico / familiar, se a dor ainda persistir, for incapacitante e o paciente, plenamente esclarecido sobre os riscos e insucessos relacionados com o procedimento cirrgico que lhe for recomendado, o desejar, o tratamento cirrgico pode ser considerado. Tambm relevante nesta considerao a durao da dor. A neuralgia ps-herptica, por exemplo, pode resolver espontaneamente at 6 meses (e mais raramente, at 1 ano) aps o seu incio. Por isso, o tratamento cirrgico deve ser reservado para aqueles pacientes com durao da dor superior a 6 meses. Para o tratamento da dor, podemos optar por procedimentos modulatrios (os correntemente em uso so: neuroestimulao de nervos perifricos, medula espinhal, VC / lemnisco medial / cpsula interna, PVG-PAG e crtex motor e bomba de infuso de drogas) ou destrutivos (interrupo das vias nociceptivas). Como j mencionado anteriormente, a dor nociceptiva e os componentes intermitente e evocado da DIN podem ser aliviados por mtodos destrutivos; o componente constante da DIN, porm, usualmente agravado pelos mtodos ablativos direcionados s vias nociceptivas do grupo lateral, embora possa ser beneficiado por aqueles procedimentos destinados a interromper as vias nociceptivas do grupo medial, como a talamotomia medial e a tratotomia mesenceflica medial e, tambm, pela leso da zona de entrada da raiz dorsal

medular ou bulbar, destinada destruio das bursting cells a presentes, em decorrncia de leso infligida ao sistema nervoso perifrico. Dentre as drogas utilizadas para infuso intratecal por bomba, destacamse os opiides, e, mais recentemente, tambm o baclofeno e a clonidina. Os opiides (morfina, fentanil, alfentanil) so mais frequentemente usados para o tratamento da dor oncolgica, o baclofeno, para o tratamento da DIN e a clonidina, para o tratamento de ambas. Doravante, concentrar-nos-emos apenas nos mtodos estimulatrios, objetivo do presente artigo. Ao contrrio dos mtodos destrutivos, a neuroestimulao apenas inibe ou excita estruturas, preservando sua integridade. Assim, na eventualidade de sua falha no controle da dor, o sistema de estimulao implantado pode ser simplesmente ignorado ou retirado, sem que quaisquer estruturas nervosas tenham sido irremediavelmente lesadas. A estimulao de PVG-PAG est indicada para o tratamento de dor nociceptiva (dor oncolgica, dor da osteoartrite, dor da artrose, etc), dos componentes intermitente e evocado da DIN provocada por leso do sistema nervoso perifrico ou central e da dor mista com componente nociceptivo (exemplo: sndrome ps-laminectomia, indubitavelmente a maior indicao para esse tipo de procedimento). A estimulao do crtex motor (ECM) foi originalmente proposta por Tsubokawa et al, em 1991, para o tratamento da DIN enceflica ("dor talmica"). Mais recentemente, tem sido tambm empregada na DIN perifrica, sobretudo no territrio do trigmeo, com evidente sucesso, e na DIN medular, com resultado controverso. Por se tratar de um mtodo ainda novo, para o qual a experincia internacional ainda bastante limitada e com o qual os presentes autores no tm qualquer experincia, sugerimos que ele seja usado no tratamento do componente constante da DIN enceflica (caso a estimulao de VC seja ineficaz ou quando estudo por imagem pr-operatrio revelar encefalomalcia na regio talmica objeto da estimulao) e do componente constante da DIN perifrica facial, caso a estimulao do gnglio de Gasser e / ou de VC (VPM) sejam ineficazes. A estimulao produtora de parestesia (nervo perifrico, medula espinhal e VC / lemnisco medial / cpsula interna) est indicada para o tratamento do componente constante da DIN. importante ressaltar que este mtodo inadequado para tratar as dores de linha mdia baixas e as dores do tronco (dorsal

ou lombar). A estimulao dos nervos perifricos (ENP) est teoricamente indicada para o tratamento do componente constante nas mononeuropatias (leso isolada do trigmeo, ulnar ou citico, por exemplo). Os resultados com este mtodo, porm, tm sido frustrantes, sobretudo para a leso do citico, razo pela qual foi praticamente abandonado. Quando usado, o eletrodo usualmente implantado junto ao nervo, proximalmente leso nervosa. Uma exceo a esses maus resultados a estimulao percutnea do gnglio de Gasser para o tratamento da DIN perifrica facial, para cujo problema constitui a primeira opo cirrgica, e para o tratamento da DIN enceflica com dor predominantemente facial. A estimulao da medula espinhal (EME) a primeira opo cirrgica para o tratamento do componente constante da DIN perifrica no facial e da DIN medular. A localizao do eletrodo no espao epidural depende da localizao da dor (membro inferior, superior ou nuca e regio occipital). A principal indicao para este mtodo tem sido a sndrome ps-laminectomia. ineficaz no tratamento da DIN enceflica. A estimulao de VC o tratamento inicial de escolha para o componente constante da DIN enceflica (considerando-se que haja um tlamo para ser estimulado) relativamente localizado ou predominante em um segmento corpreo (hemiface, membro superior ou membro inferior). Caso a dor seja mais difusa, fazemos a opo pela estimulao do lemnisco medial ou da perna posterior da cpsula interna. Este mtodo pode ser tambm utilizado para o tratamento da DIN perifrica e medular, caso a estimulao do gnglio de Gasser ou a EME sejam ineficazes ou tecnicamente no factveis (exemplo: extensa fibrose epidural ou cirurgia vertebral prvia com instrumentao ampla). Finalmente, mais de um alvo pode ser estimulado ao mesmo tempo. No infrequente a estimulao simultnea de PVG-PAG e de VC em um mesmo paciente, desde que o quadro doloroso por ele apresentado requeira os dois procedimentos, como , por exemplo, o caso de uma paciente com DIN enceflica apresentando dor constante e evocada. To importante quanto a definio de qual o melhor procedimento modulatrio para cada tipo e localizao da dor, a determinao se o paciente como um todo candidato neuroestimulao. A regio a ser operada deve ser previamente investigada com exame por imagem. O estudo do encfalo por resso-

nncia magntica ou, pelo menos, por tomografia computorizada deve ser realizado antes de se proceder estimulao cerebral profunda (VC / lemnisco medial / cpsula interna ou PVG-PAG), ECM ou estimulao do gnglio de Gasser. Leso do giro pr-central, por exemplo, previne a ECM. Encefalomalcia na regio talmica ou na rea ao redor da poro inferior do terceiro ventrculo faro com que a tentativa de estimulao de VC ou de PVG, respectivamente, sejam pura perda de tempo. A distoro do cavo de Meckel por cncer ou alguma outra doena impede que um eletrodo seja a introduzido para a estimulao do gnglio de Gasser. A regio da coluna onde ser introduzido o eletrodo para EME tambm deve ser avaliada por radiografia e tomografia ou ressonncia. Obliterao demonstrvel do espao epidural a esse nvel impossibilita a introduo do eletrodo na rea desejada. Sob o ponto de vista cognitivo e de linguagem, o mnimo que se espera do paciente que ele possa se comunicar com o cirurgio e compreender o que lhe dito, que possa avaliar adequadamente a intensidade de sua dor e a resposta da mesma ao tratamento, que consiga perceber e localizar a parestesia produzida pela maioria dos mtodos estimulatrios e que possa compreender como usar o sistema de estimulao. Algumas doenas sistmicas podem contra-indicar a neuroestimulao: discrasia sangunea (risco de hemorragia), infeco (risco de contaminao do hardware implantado) e hipertenso arterial sistmica no controlada (risco de hemorragia). Os pacientes portadores de marcapasso cardaco, pelo risco de interferncia, provavelmente no devem ser submetidos neuroestimulao. Para que a cirurgia possa ser indicada, fundamental que a queixa de dor do paciente encontre subsdios nos exames neurolgico e complementares e que uma etiologia para a dor possa ser claramente definida. Todos os pacientes candidatos cirurgia devem passar por uma profunda avaliao psiquitrica e psicolgica. Aqueles pacientes com transtorno do humor caracterizado por profunda depresso, com transtornos da personalidade caracterizados por hipocondria e histeria e aqueles com sndrome de somatizao e psicose devem ser desencorajados a prosseguir com a cirurgia. Tais pacientes costumam descrever continuamente sua dor como lancinante, excruciante, pontuando-a como acima de dez numa escala de zero a dez. Costumam queixar-se de intensa dor de longa data, j tendo procurado
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assistncia nos mais diversos centros e especialistas; seu exame neurolgico usualmente irrelevante quanto aos achados e os exames complementares, inteiramente normais ou com achados insignificantes. De modo geral, apresentam uma longa lista de cirurgias prvias de indicao duvidosa (colecistectomia, hemorroidectomia, histerectomia, reparo de hrnia inguinal, descompresso do tnel do carpo, etc), sugerindo uma hiper-reatividade a desconfortos relativamente leves. s vezes, at apresentam alguma patologia significativa, como uma hrnia discal lombar, para a qual j foram submetidos a uma srie de cirurgias, mas queixam, concomitantemente, de uma srie de outras dores de longa data, como: cefalia, cervicalgia, dorsalgia. Muitas vezes, possvel se estabelecer a concomitncia de um evento negativo relevante em suas vidas e o incio da dor. Outras vezes, esto envolvidos em um processo pericial ou litigioso maiores. Hosobuchi preconiza o teste da infuso venosa de morfina, placebo e naloxone para a identificao dos candidatos estimulao cerebral profunda. Aqueles pacientes que apresentam completo alvio da dor com a administrao da morfina, mas no com a de placebo e reverso da analgesia pela injeo de naloxone (a dor de base provavelmente nociceptiva), seriam candidatos estimulao de PVG-PAG. Pacientes com significativa analgesia administrao de placebo seriam considerados inadequados para a cirurgia. Ausncia de resposta injeo de morfina indicaria ser o paciente tolerante a ela (uso crnico de morfina) ou portador de DIN; neste caso, a administrao sequencial de naloxone dirimiria as dvidas: a ausncia de sndrome de abstinncia indicaria tratar-se a dor de DIN (indicao para a estimulao de VC) e a presena da sndrome, de tolerncia morfina. Finalmente, aqueles pacientes com analgesia parcial produzida pela morfina, reverso da mesma com naloxone e ausncia de sinais de sndrome de abstinncia, seriam provavelmente portadores de dor mista (nociceptiva e por injria neural), e portanto, candidatos estimulao simultnea de VC e PVGPAG. Young, em um estudo no qual um grupo de pacientes foi submetido a este teste antes da cirurgia e outro grupo, no qual o teste no foi realizado previamente, no foi capaz de demonstrar qualquer significativa diferena no resultado neuroestimulao entre estes grupos, concluindo que tal teste seria desnecessrio. Tasker, por sua vez, props a utilizao do teste da infuso venosa de tiopental sdico: alvio significativo da
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dor ocorre nos pacientes com DIN, mas no naqueles com dor nociceptiva. Vilela Filho, 1996, 1997, revendo uma srie de 60 pacientes com DIN submetidos a estimulao cerebral profunda, concluiu que os principais fatores de risco para o insucesso da estimulao de VC so: pacientes com pronunciado deficit sensitivo, pacientes nos quais a EME foi ineficaz em aliviar a dor, a despeito de tecnicamente adequada (parestesia cobrindo a rea da dor), e pacientes com DIN enceflica secundria a infarto supratentorial apresentando dor evocada e leso restrita ao tlamo posterior tomografia ou parestesia desagradvel EME ou dor intermitente associada. Em suma, o candidato ideal neuroestimulao aquele paciente altamente motivado, lcido, coerente, sem handicap motor maior, bem ajustado ao meio social e familiar, sem psicopatologia maior e com dor de etiologia bem definida, no qual os exames neurolgico e complementares so congruentes com a queixa apresentada. III - MECANISMO DE AO: A) ESTIMULAO DOS NERVOS PERIFRICOS (ENP): O nervo perifrico constitudo por fibras amielnicas ( C ) e mielnicas finas (A-delta), responsveis pela conduo da temperatura e da dor e por fibras mielnicas grossas, envolvidas com a conduo do tato, presso, propriocepo e sensibilidade vibratria (fibras A-alfa e A-beta) e da motricidade. Estudos eletrofisiolgicos determinaram que essas fibras apresentam diferentes limiares de excitabilidade. Aquelas com menor limiar (mais facilmente excitveis) seriam as A-alfa, seguidas em ordem decrescente pelas fibras A-beta, motoras, A-delta e C. Desta forma, um estmulo eltrico de baixa intensidade estimularia preferencialmente as fibras A-alfa e Abeta, poupando as fibras C e A-delta. Uma vez ativadas, estas fibras mielnicas grossas excitariam interneurnios inibitrios situados nas lminas superficiais do corno dorsal (sobretudo na lmina IIo), os quais inibiriam, prsinapticamente, os aferentes primrios nociceptivos, conforme a Teoria da Comporta de Melzack e Wall, e tambm, pssinapticamente, as clulas de origem das vias nociceptivas, inibindo, desta forma, a transmisso dos impulsos nociceptivos no corno dorsal e, assim, produzindo analgesia. Uma das maiores dificuldades com este mtodo que as fibras motoras so tambm frequentemente estimuladas, pro-

vocando contrao involuntria. Isto se deve ao fato dos limiares de excitabilidade para as fibras mielnicas grossas sensitivas e motoras serem bastante prximos. Na estimulao do gnglio de Gasser, o que se faz estimular diretamente as clulas sensitivas de origem das fibras Aalfa e A-beta, no sendo sua resposta usualmente contaminada por contraes musculares; da seu maior sucesso teraputico. Fibras mielnicas grossas prganglionares so tambm estimuladas nesse caso. B) ESTIMULAO DA MEDULA ESPINHAL (EME): A EME obtida com a da colocao de um eletrodo no espao epidural posterior. Por imaginar-se que a nica estrutura medular estimulada por esse mtodo fosse o funculo posterior, tambm denominado coluna dorsal, costumavase design-lo estimulao da coluna dorsal. Sabe-se hoje, porm, que, alm do funculo posterior, so estimulados os cornos dorsais, as zonas de entrada das razes dorsais e as razes dorsais. Da a mudana da designao desse procedimento para EME. O mecanismo envolvido no alvio da dor obtido pela EME ainda objeto de extensa especulao e pesquisa. O modelo experimental mais frequentemente usado para o seu estudo, atualmente, o da ligadura parcial do nervo citico em ratos. Esse procedimento determina o aparecimento de DIN em 20-40% dos ratos. O reflexo flexor, obtido pela estimulao incua da regio plantar da pata traseira ipsolateral ao nervo ligado, passa a apresentar um menor limiar de excitabilidade e uma maior amplitude, o que corresponderia, no ser humano, alodnia. Nesse modelo, o registro com microeletrodo dos neurnios do corno dorsal lombo-sacro ipsolateral evidencia aumento da atividade espontnea e evocada dessas clulas e a microdilise do espao extracelular da mesma regio demonstra aumento da concentrao do glutamato e aspartato (neurotransmissores excitatrios dos aferentes primrios nociceptivos) e diminuio da concentrao do cido gamaaminobutrico (neurotransmissor inibitrio presente nos interneurnios inibitrios das lminas superficiais do corno dorsal). A EME (eficaz em cerca de 50% desses animais), quando efetiva, normaliza o limiar de excitabilidade e a amplitude do reflexo flexor e a atividade anormal dos neurnios do corno dorsal. Duas principais hipteses foram propostas para explicar a analgesia produzida pela EME.

De acordo com uma delas, a EME ativaria, antidromicamente, as grossas fibras mielnicas do funculo posterior da medula espinhal, cujos colaterais, arborizando no corno dorsal, excitariam os interneurnios inibitrios, os quais, por sua vez, inibiriam os aferentes primrios nociceptivos e os neurnios de origem das vias dolorosas. Uma srie de dados laboratoriais suportam essa hiptese. A microdilise do lquido extracelular do corno dorsal revela, nos casos em que a EME eficaz, aumento da concentrao do gaba e da glicina (neurotransmissor inibitrio) e diminuio da concentrao de glutamato e aspartato. Quando a EME ineficaz, porm, tais alteraes bioqumicas no ocorrem. Nesses casos, a associao da administrao de baclofeno (agonista gabargico) intratecal (dosagem: metade de sua mnima dose efetiva quando utilizado isoladamente) EME eficaz em normalizar o reflexo flexor. Tambm efetiva a associao da EME administrao intratecal de agonista da adenosina. Curiosamente, o gaba e a adenosina tm uma distribuio similar no corno dorsal, predominando em suas lminas externas. Assim, parece que ambos os sistemas, gabargico e adenosinrgico, so importantes na mediao do efeito da EME. Essas duas drogas j foram tambm usadas, com sucesso, em seres humanos, associadas EME, para o tratamento de DIN perifrica. Segundo a outra hiptese, a EME excitaria, ortodromicamente, as fibras do funculo posterior da medula espinhal, as quais emitiriam colaterais para o sistema modulatrio do tronco cerebral (PAG, bulbo rostroventral, tegmento pontino dorsolateral), de onde partiriam as vias descendentes inibitrias para os neurnios nociceptivos do corno dorsal. A determinao do aumento da concentrao de serotonina na microdilise do lquido extracelular do corno dorsal aps a EME em animais intactos, mas no em animais descerebrados, e o aumento do cido 5-hidrxi-indolactico (metablito da serotonina) no lquor de seres humanos submetidos a EME, favorecem essa hiptese. Essas duas hipteses, naturalmente, no so mutuamente exclusivas, podendo ambos os mecanismos atuar simultaneamente. Se os mecanismos at ento propostos para a analgesia produzida pela EME e ENP fossem realmente operantes, esperar-se-a que esses mtodos fossem tambm teis para tratar a dor por nocicepo, haja vista a inibio da transmisso nociceptiva no corno dorsal por eles ocasionada. Na realidade, po-

rm, no o que ocorre. A EME e a ENP so teis para o tratamento do componente constante da DIN e no da dor nociceptiva. Modesti & Waszak demonstraram a inibio de neurnios nociceptivos do tlamo medial pela EME. O mesmo ocorre com a estimulao do tlamo ventrocaudal (VC). Poder-se-a hipotetizar, ento, que, tanto a ENP como a EME, ativariam as grossas fibras mielnicas, as quais, transitando pelo nervo perifrico, funculo posterior da medula espinhal e lemnisco medial, chegariam a VC e, ativando o circuito modulatrio prosencfalo-mesenceflico, promoveriam a analgesia pela inibio da hiperatividade do tlamo medial. C) ESTIMULAO DE VC / LEMNISCO MEDIAL / CPSULA INTERNA: Vrias hipteses foram sugeridas para explicar a analgesia produzida pela estimulao de VC. Tsubokawa e Gerhart, entre outros, propuseram que a estimulao de VC produziria alvio da dor pela ativao antidrmica de colaterais do trato neoespinotalmico enviados para o bulbo rostroventral (BRV). Essa estrutura, assim estimulada, inibiria os neurnios nociceptivos do corno dorsal por meio da excitao das vias descendentes serotoninrgicas e noradrenrgicas dos funculos dorsolaterais da medula espinhal. Gerhart e Yezierski sugeriram que a analgesia obtida pela estimulao de VC seria secundria excitao do crtex somestsico, o qual, por sua vez, inibiria os neurnios do corno dorsal contralateral pela ativao do trato corticoespinhal e das vias extrapiramidais. Foi tambm proposto que a estimulao de VC ativaria, pela excitao antidrmica do lemnisco medial, certas clulas pseudounipolares dos ncleos dos fascculos grcil e cuneiforme, as quais inibiriam os neurnios nociceptivos do corno dorsal pelo mecanismo da comporta anteriormente descrito (vide EME). Como se pode notar, a analgesia produzida pela estimulao de VC, de acordo com as hipteses acima, depende da integridade dos funculos dorsolaterais e dorsal da medula espinhal. Vilela Filho e Tasker (1994) e Vilela Filho (1994), porm, revisando sua srie de 16 pacientes com DIN medular submetidos estimulao de VC, observaram que o tratamento produziu excelente alvio da dor em 3 dos 4 pacientes apresentando seco medular completa. Tais resultados e uma srie de outras

evidncias experimentais por eles apresentadas contrariam frontalmente as hipteses supracitadas. Adams sugeriu que a estimulao de VC ativaria fibras inibitrias oriundas do crtex parietal para o tlamo e a medula espinhal. A possibilidade da inibio pela via crtex somestsico- medula espinhal ser operante j foi debatida no pargrafo anterior. A inibio talmica pela ativao do crtex somestsico tambm parece-nos improvvel, visto que, segundo Steriade, as fibras corticotalmicas so, sem exceo, excitatrias. Mazars, por sua vez, props que a estimulao de VC atuaria compensando a falta de impulsos sensoriais atingindo o circuito talamocortical em pacientes com DIN. Tal hiptese, porm, presume um efeito excitatrio para a estimulao de VC, o que est em desacordo com a opinio geral de que o efeito final da estimulao de VC inibitrio. Benabid demonstrou que a estimulao de VC inibe neurnios nociceptivos do tlamo medial, achados estes tambm relatados por Tsubokawa e Moriyasu, e sugeriu, considerando a ausncia de clulas "marcadas" em VC pela administrao de peroxidase de rabanete no tlamo medial, a longa latncia para a inibio (100 a 200 milissegundos, no rato) e a no reverso da inibio pela administrao de naloxone, que tal inibio seria mediada por uma via multissinptica no opiide. As vias e estruturas provavelmente envolvidas, porm, no foram citadas. Vilela Filho, 1994, sugeriu que a analgesia produzida pela estimulao de VC seria decorrente da ativao de uma via multissinptica inibitria para o tlamo medial, modulando a hiperatividade nociceptiva a presente. Baseado em uma srie de evidncias clnicas e laboratoriais, props as estruturas, vias e neurotransmissores envolvidos nessa modulao, conjunto este que, posteriormente (1996), passou a designar Circuito Modulatrio Prosencfalo-Mesenceflico _ CMPM (vide tpico "Aspectos Bsicos"). Em resumo, o alvio da dor produzido pela estimulao de VC se deve inibio do tlamo medial, mediada pelo CMPM. D) ESTIMULAO DO CRTEX MOTOR (ECM): Trata-se de uma tcnica neuroestimulatria relativamente nova, tendo sido os primeiros pacientes operados (dor talmica) reportados por Tsubokawa, introdutor do mtodo, em
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1991. Segundo Tsubokawa, um infarto tlamo-supratalmico tornaria as clulas nociceptivas do crtex somestsico desaferentadas e, em consequncia, hiperativas. A ECM, por uma via intracortical, excitaria clulas nonociceptivas (exemplo: clulas tteis) do crtex somestsico, as quais inibiriam as clulas nociceptivas hiperativas, o que resultaria em analgesia. Curiosamente, nos casos em que a ECM foi efetiva, os pacientes referiram parestesia na rea da dor, sugerindo que a ativao de clulas no-nociceptivas do crtex somestsico essencial para o alvio da dor. Trata-se de uma hiptese bastante interessante. No explica, porm, como a ECM poderia ser efetiva no caso do envolvimento do crtex somestsico pelo infarto. Nessa eventualidade, no haveria clulas nociceptivas deaferentadas no crtex somestsico. Alternativamente, sugerimos, a ECM poderia aliviar a dor por bloquear a hiperatividade do tlamo medial, via ativao de parte do circuito modulatrio prosencfalo-mesenceflico (crtex motor putmen anterior plido medial / substncia nigra reticulata _o tlamo medial e formao reticular mesenceflica tlamo medial; = excitao, _o = inibio). E) ESTIMULAO DE PVG-PAG: Em animais de experimentao, a injeo de opiides em PVG-PAG produz uma analgesia comportamental similar quela produzida pela estimulao eltrica das mesmas, analgesia esta dosedependente e passvel de reverso com a administrao sistmica de naloxone. Tais fatos sugerem que a analgesia produzida pela estimulao de PVG-PAG seja mediada pela liberao de opiides endgenos. Em seres humanos, a estimulao de PVG-PAG, mas no a de VC, determina um aumento da concentrao liqurica de beta-endorfina e metionina-encefalina (opiides endgenos). Hosobuchi e Richardson relataram que a analgesia produzida pela estimulao de PVGPAG pode ser, pelo menos parcialmente, revertida pela administrao endovenosa de naloxone e que a estimulao continuada pode determinar tolerncia, tolerncia esta que cruzada com a da administrao exgena de morfina. Young, porm, contestou tais achados, sobretudo o da tolerncia cruzada. Estudos experimentais demonstrando que a analgesia produzida pela estimulao da PAG ventral mediada por opiides, mas no a da PAG dorsal e a significativa variabilidade entre os diferentes autores
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quanto ao local de PVG-PAG a ser estimulado, podem explicar os achados contraditrios quanto reversibilidade da analgesia pelo naloxone e quanto tolerncia cruzada com a administrao exgena de opiides. Em geral, acreditase que, tambm nos seres humanos, a analgesia produzida pela estimulao de PVG-PAG seja mediada pela liberao de opiides endgenos.

(serotoninrgica), localizadas no bulbo rostroventral (ncleo rafe magno, magnocelular e paragigantocelular lateral), e reticuloespinhal (noradrenrgica), localizadas no tegmento pontino dorsolateral (locus ceruleus e subceruleus). Os axnios dessas clulas trafegam por ambos os funculos dorsolaterais da medula espinhal e terminam nas lminas I, IIo e V dos cornos dorsais, regio rica em interneurnios inibitrios (sobretudo encefalinrgicos) e local de origem de grande parte das vias da dor. Os neurnios rafe e reticuloespinhais bloqueiam a transmisso nociceptiva no corno dorsal, provavelmente, por quatro mecanismos distintos: inibio pr-sinptica dos aferentes primrios nociceptivos, inibio pssinptica dos neurnios de origem das vias nociceptivas e excitao de interneurnios inibitrios e inibio de interneurnios excitatrios para as clulas de projeo nociceptivas. O fato das vias rafe e reticuloespinhais serem bilaterais justifica plenamente a analgesia bilateral obtida por essa tcnica. IV - TCNICA CIRRGICA: O processo envolve trs etapas distintas: implantao do eletrodo, estimulao-teste e internalizao do hardware. Exames pr-operatrios de rotina so realizados em todos os casos (hemograma, coagulograma, glicemia, uria e creatinina sricas, EAS, radiografia de trax e eletrocardiograma). Os pacientes so usualmente internados no dia anterior cirurgia. Antibioticoterapia profiltica com cefuroxima (1.5 grama endovenosa a cada oito horas) instituda cerca de 30 minutos antes do incio do procedimento. A primeira etapa (implantao) usualmente realizada sob anestesia local e sedao venosa com agentes anestsicos de curta durao, administrados com bomba de infuso. Para tal fim, nossa preferncia tem recado sobre o propofol, um fenol de ao hipntica que, se mantido em nveis mnimos suficientes para manter o paciente dormindo, ele se encontrar plenamente desperto 5 a 10 minutos aps a suspenso da infuso da droga. Exceto no caso da ECP, em que o paciente mantido completamente desperto durante todo o procedimento, na estimulao dos demais alvos ele mantido em hipnose durante a introduo do eletrodo, inciso e suturas, e desperto durante a fase de checagem fisiolgica do alvo por estimulao. A utilizao de agentes anestsicos de curta durao nesses casos, portanto, em muito agiliza a cirurgia, minimizando o tempo

Em seres humanos, a estimulao de PVG-PAG, mas no a de VC, determina um aumento da concentrao liqurica de beta-endorfina e metionina-encefalina (opiides endgenos). Hosobuchi e Richardson relataram que a analgesia produzida pela estimulao de PVGPAG pode ser, pelo menos parcialmente, revertida pela administrao endovenosa de naloxone e que a estimulao continuada pode determinar tolerncia, tolerncia esta que cruzada com a da administrao exgena de morfina. Young, porm, contestou tais achados, sobretudo o da tolerncia cruzada. Estudos experimentais demonstrando que a analgesia produzida pela estimulao da PAG ventral mediada por opiides, mas no a da PAG dorsal e a significativa variabilidade entre os diferentes autores quanto ao local de PVG-PAG a ser estimulado, podem explicar os achados contraditrios quanto reversibilidade da analgesia pelo naloxone e quanto tolerncia cruzada com a administrao exgena de opiides. Em geral, acreditase que, tambm nos seres humanos, a analgesia produzida pela estimulao de PVG-PAG seja mediada pela liberao de opiides endgenos. Segundo a hiptese em voga, a estimulao de PVG-PAG ativaria as clulas de origem das vias rafe-espinhal

despendido. Aps a adequada implantao do eletrodo no alvo desejado, ele fixado dura-mter (ECM), glea (estimulao cerebral profunda _ ECP), aponeurose (EME) ou tecido subcutneo (estimulao do gnglio de Gasser), sendo sua poro excedente alojada no subcutneo e conectada a um cabo que exteriorizado por contra-abertura maior distncia possvel da inciso original, para minimizar o risco de infeco. Exceo feita para a estimulao do gnglio de Gasser, em cujo caso o eletrodo-teste exteriorizado diretamente por seu stio de entrada; nesse caso, a preocupao com a infeco do eletrodo menor, j que ele ser posteriormente substitudo por outro. Na ECP (estimulao de VC / lemnisco medial / cpsula interna ou de PVG-PAG), o eletrodo tambm fixado ao orifcio craniano (trepanao ou drillhole) utilizando-se uma "rolha" de silastic ou metilmetacrilato. Cerca de 24 horas aps a implantao, e j em sua acomodao (enfermaria ou apartamento), tem incio a etapa de estimulao-teste, que usualmente dura de trs a sete dias. Nessa fase, o cabo exteriorizado conectado a um transmissor de radiofrequncia e a estimulao, uni ou bipolar, instituda. O objetivo definir, juntamente com o paciente, qual contato ou combinao de par de contatos do eletrodo (o eletrodo mais usado em todos os procedimentos o tetrapolar) e quais os parmetros de estimulao (intensidade, frequncia e durao do pulso de estmulo) produzem o mximo alvio da dor, com o mnimo de efeitos indesejveis. Naqueles pacientes em que o alvio da dor obtido com a estimulao foi considerado inadequado, o eletrodo retirado. Por outro lado, os pacientes com alvio da dor superior a 50%, passam para a prxima etapa: internalizao. Sob anestesia geral, aps removido o cabo exteriorizado e todas as rigorosas medidas usuais de assepsia e antissepsia, a ferida para implantao do eletrodo reaberta (no caso especfico da estimulao do gnglio de Gasser, o eletrodo teste, previamente retirado aps controle radiogrfico de sua posio, substitudo por um eletrodo tetrapolar definitivo, implantado, guiado por fluoroscopia, na mesma posio anterior). Uma outra inciso cirrgica realizada na face anterior do trax ou abdmen, onde uma loja preparada para a implantao do receiver ou estimulador. Para a ECP, ECM, EME cervical e estimulao do gnglio de Gasser, tal loja comumente preparada na regio infraclavicular, e para a EME baixa, na regio inguinal. Um cabo ento

conectado ao eletrodo e, atravs de um guia oco (provido pelos kits de neuroestimulao, similar quele usado para a passagem do catter peritonial na derivao ventrculo-peritonial) subcutneo conectando as duas feridas, passado para a loja torcica ou abdominal, onde conectado ao receiver ou estimulador. Uma ferida intermediria entre as anteriores pode se fazer necessria para facilitar este procedimento. O paciente recebe alta hospitalar no dia seguinte ao da internalizao do sistema. Existem dois sistemas para

um nico estimulador, como, por exemplo, para a estimulao combinada de VC e PVG). As suas principais desvantagens so: necessidade de frequente troca de bateria, uso mais trabalhoso, no poder ser molhado, poder ter seu funcionamento comprometido pela transpirao excessiva, intolerncia ao uso da antena pelos pacientes com alodnia na rea do implante e incapacidade de manipulao por pacientes com handicap motor ou mental. Finalmente, embora ainda no disponvel no mercado para uso geral, h o sistema hbrido, que combina ambas as tecnologias (TIME, da Neuromed). Passaremos, agora, descrio da tcnica cirrgica utilizada na implantao do eletrodo nos diferentes alvos. A) ESTIMULAO DO GNGLIO DE GASSER (EGG): Com o paciente em decbito dorsal, aps assepsia e antissepsia, uma agulha de Touhey n 15 introduzida percutaneamente, 2.5 centmetros lateral comissura labial, e utilizando como reparo anatmico o ponto de interseco entre um plano coronal passando 3 centmetros anterior ao tragus e um plano sagital passando pelo bordo interno da pupila, dirigida, sob fluoroscopia, para o forame oval, situado, habitualmente, no ponto de interseco entre o clvus e a pirmide petrosa (fluoroscopia lateral). Atingido o alvo, um eletrodo monopolar (VERIFY, da Medtronic) introduzido pela agulha de Touhey, at ultrapassar sua extremidade distal. Estimulao com alta frequncia (usualmente 25 a 100 Hertz) ento realizada. O objetivo a obteno de parestesia que cubra completamente a rea da dor com a menor intensidade de estmulo possvel. Contrao muscular (masster) e/ou parestesia fora da rea da dor so geralmente consideradas inaceitveis pelo paciente. Obtida a resposta desejada, a agulha cuidadosamente retirada, sob acompanhamento fluoroscpico, enquanto o eletrodo mantido em posio. Radiografia de crnio nas incidncias anteroposterior, perfil e Towne realizada imediatamente aps o trmino do procedimento, para documentar a posio do eletrodo. Como mencionado anteriormente, esse eletrodo posteriormente retirado e, na fase de internalizao, um eletrodo tetrapolar (DBS, da Medtronic) implantado na mesma posio anterior, conforme controle radiogrfico. B) ESTIMULAO DA MEDULA ESPINHAL (EME):
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estimulao disponveis no mercado. O estimulador (gerador de pulso) totalmente implantvel (ITREL, da Medtronic) contm uma bateria de ltio (durao: 2.5 a 4.5 anos, dependendo da frequncia de uso e dos parmetros de estimulao), ativado e controlado por telemetria percutnea e pode ser ligado ou desligado pelo paciente O sistema ativado por radiofrequncia (XTREL, da Medtronic) tem trs componentes: um receiver passivo, implantado sob a pele, uma antena e um transmissor externo alimentado por bateria alcalina. A antena conectada ao transmissor e deve ser posicionada exatamente sobre o receiver para que o contato seja adequado. O paciente tem amplo acesso aos parmetros de estimulao e combinao dos contatos do eletrodo. Esse sistema, comparado ao totalmente implantvel, tem um menor custo, maior potncia, capacidade para dirigir eletrodos com mais de quatro contatos e para a programao independente de dois canais _ MATTRIX RF SYSTEM, da Medtronic e DUAL PADDLE OCTRODE SYSTEM, da Neuromed (dois eletrodos com quatro ou mais contatos podem ser usados com

A EME particularmente til no tratamento da dor em extremidades, no sendo, em geral, adequada no tratamento da dor axial. Pode ser realizada por duas tcnicas: percutnea e a cu aberto. A EME percutnea a preferida destes e da maioria dos outros autores, podendo ser realizada na maioria dos casos. Em sua execuo, um princpio bsico deve ser lembrado: quanto maior a quantidade de cabo do eletrodo no espao epidural, menor a possibilidade de migrao do mesmo. Por isso, o nvel de insero cutnea do eletrodo deve ser, no mnimo, a dois nveis abaixo daquele do alvo desejado. Assim, para dor em membros inferiores, o nvel de puno T12/L1 ou L1/L2 e para dor em membros superiores, T2/T3 ou T3/T4. Com o paciente em decbito ventral, aps assepsia e antissepsia, e sob fluoroscopia lateral, a agulha de peridural, provida pelo kit de neuroestimulao, introduzida, com o bisel voltado para cima, na linha mdia do nvel desejado, at se atingir o espao epidural, o qual pode ser usualmente reconhecido pela manobra da gota pendente ou da perda sbita de resistncia. Um guia arterial de Seldinger (tambm provido pelo kit) ento introduzido pela agulha, at ultrapassar sua extremidade distal. Estandose realmente no espao epidural, encontrar-se- uma pequena resistncia ao avano do guia. Caso o guia se encontre no espao subaracnideo, ele normalmente pode ser avanado livremente, sem resistncia, em cujo caso, se retirado, ocorreria, quase certamente, extravazamento de lquor e a estimulao com o eletrodo nesse local, provocaria respostas sensitivas e motoras com intensidades de estimulao menores do que as habituais. Confirmando-se por esses meios, e pela fluoroscopia em perfil, a presena do guia no espao epidural, o intensificador de imagem ajustado para a incidncia posteroanterior. O guia de Seldinger retirado e o eletrodo, introduzido no espao, mantendo-se a agulha em posio. A estimulaoteste ento iniciada. Sob fluoroscopia e estimulao, a posio do eletrodo vai sendo modificada at que se obtenha parestesia cobrindo toda a rea da dor, com a menor intensidade de estmulo possvel e sem a presena de efeitos indesejveis (resposta motora, parestesia fora da rea da dor). Para a dor unilateral, a posio ideal do eletrodo , geral56 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

mente, de 1 a 3 milmetros lateral linha mdia, e para a dor bilateral, na linha mdia. Caso se planeje implantar dois eletrodos, a puno epidural para ambos deve ser executada antes da introduo dos mesmos, para no se correr o risco de les-los no procedimento da puno. Atingido o alvo, radiografia em duas incidncias realizada para documentao da posio do eletrodo. Sob acompanhamento

fluoroscpico, a agulha vai sendo cuidadosamente retirada, enquanto se mantm o eletrodo em posio. A EME a cu aberto, s vezes, pode ser a nica alternativa em pacientes com cirurgia prvia na rea em que se est planejando implantar o eletrodo, dados os riscos da tcnica percutnea nessa eventualidade. Alm disso, parece ser mais segura nos casos em que se planeja implantar um eletrodo em C1/C2. A vantagem adicional do mtodo, segundo seus defensores, a menor incidncia de migrao do eletrodo e, pela possibilidade de se utilizar eletrodos mais largos, a obteno de parestesia em reas mais amplas. A cirurgia obedece aos princpios bsicos de qualquer laminectomia. A quantidade de osso a ser removida, porm, mnima, podendo ser, inclusive, desnecessria na colu-

na cervical. Uma vez ressecado o ligamento amarelo, um ou dois eletrodos tetrapolares em placa (RESUME, da Medtronic ou LAMITRODE, da Neuromed) so colocados no espao epidural, e a ferida suturada por planos. Para dor em membros inferiores, o local habitual de implantao T9/T10 ou T10/T11; para dor em membros superiores, em C4/C5, C5/C6 ou C6/C7; e para dor occipital, cervical ou em ombros, em C1/C2. A EME, por qualquer mtodo, um procedimento inadequado para o alvio da dor da parede torcica ou abdominal, haja vista que a estimulao, nos nveis adequados , produz ativao tanto sensitiva (percebida pelos pacientes como uma faixa constrictiva desagradvel) quanto motora, prevenindo qualquer efeito teraputico til. Infelizmente, a ativao de fibras da parede torcica ou abdominal pode ser um achado proeminente quando se est tentando produzir parestesia em outras reas; nessa eventualidade, o posicionamento estritamente mediano do eletrodo minimiza essas respostas indesejveis. Uma das indicaes mais frequentes para EME a chamada sndrome ps-laminectomia, causa comum de dor lombar e em membros inferiores. Para o sucesso teraputico, deve-se procurar obter parestesia tanto na regio lombar quanto no membro ou membros comprometidos. A obteno de parestesia lombar, porm, uma tarefa extremamente difcil e, quando possvel, vem usualmente acompanhada pela indesejvel estimulao da parede torcica e abdominal. Law demonstrou que as fibras lombares podem ser mais seletivamente ativadas com dois eletrodos octapolares paralelos, colocados de cada lado e a uma mnima distncia da linha mdia, no nvel T9/T10. C) ESTIMULAO CEREBRAL PROFUNDA (ECP): Com o paciente preferencialmente em posio sentada, o anel estereotxico fixado, sob anestesia local, tbua externa do crnio (Sistema Estereotxico Micromar, modelo MT-03B). Para a obteno das coordenadas das comissuras anterior (AC) e posterior (PC) e da parede lateral do terceiro ventrculo (no plano axial em que aparece PC), temos utilizado a tomografia computorizada de crnio como mtodo de imagem de eleio, a qual deve ser realizada com o anel estereotxico j em

posio. As coordenadas de AC e PC so usadas para alimentar um software desenvolvido pelo Departamento de Neurofisiologia da Universidade de Toronto, o qual fornece uma srie de mapas talmicos sagitais, milimetrados e ampliados, baseados no atlas de Schaltenbrand e Bailey, mapas estes que so "esticados" ou "encolhidos", de modo que correspondam distncia intercomissural de cada paciente (variao: 20 a 30 mm). Neles esto delineados todos os ncleos talmicos, ambas as comissuras (AC e PC), o ponto mdiocomissural e o zero do sistema estereotxico, entre uma srie de outras estruturas, de modo que as coordenadas do alvo desejado so obtidas pela mera leitura dos mapas digitalizados, no sendo necessrio nenhum clculo. De posse das coordenadas desejadas, o paciente levado para a sala cirrgica, onde posicionado em decbito dorsal e com o dorso elevado, de modo que se sinta o mais confortvel possvel. Uma tricotomia restrita e assepsia e antissepsia so realizadas. O arco estereotxico, contendo o guia para o eletrodo, acoplado ao anel j colocado e, sob anestesia local, um punch cutneo e drill-hole parassagital pr-coronal so executados. A distncia dessa perfurao da linha mdio-sagital depende da lateralidade do alvo a ser abordado: no caso de VC, encontra-se 15 milmetros lateral a esta linha. Um eletrodo de estimulao bipolar (Tasker stimulation electrode, da Diros Technology Inc.) adaptado em seu guia e dirigido para o alvo. Tem incio, ento, o mapeamento fisiolgico. Iniciamos a estimulao (na trajetria do eletrodo) em um ponto 10 milmetros acima da posio estimada do alvo, a qual repetida a intervalos de 2 milmetros, at um ponto situado 10 milmetros abaixo do mesmo. A cada sesso de estimulao, o paciente argudo sobre a sensao por ele experimentada. Nesse momento, de extrema relevncia que nos lembremos que VC somatotopicamente organizado, com o homnculo em posio quadrpede e estando a cabea voltada medialmente, os membros inferiores, lateralmente, e os membros superiores, em posio intermediria. Dessa forma, a face, o membro superior e o membro inferior esto representados, em mapas sagitais, respectivamente, 12-14, 14-15 e 15-17 milmetros lateralmente linha mdia. Tais medidas, porm, podem sofrer variao, dependendo da largura do terceiro ventrculo (largura mdia = 7.7 milmetros) e de processos patolgicos afetando o tlamo.

O objetivo do mapeamento fisiolgico de VC, lemnisco medial (LM) e cpsula interna (CI) a determinao do ponto cuja estimulao produz parestesia na rea da dor. Desses trs alvos, o mais eficaz parece ser VC. Quando se necessita produzir parestesia em reas mais amplas, porm, devemos fazer a opo pelo LM ou pela CI, haja vista que, a estimulao de VC s produz parestesia em reas mais restritas (Exemplo: membro superior ou membro inferior, mas no em ambos). Para a CI, usamos as coordenadas sugeridas por Adams (0 a 4 mm anterior a PC, 20 a 25 mm lateral linha mdia e 1 mm inferior a 5 mm superior linha AC-PC). Para o LM, adotamos o alvo sugerido por Tasker (logo abaixo da linha AC-PC, 12 a 14 mm lateral linha mdia). Alm da estimulao com macroeletrodo, outros autores utilizam o registro e estimulao com microeletrodo para o mapeamento fisiolgico. Ao nvel da CI e LM, h um silncio, no sendo possvel a registrar nenhuma atividade celular, naturalmente por causa da ausncia de clulas nesses feixes de fibras. Ao nvel de VC, porm, h um intenso rudo, pela riqueza em clulas tteis. Tais clulas podem ser ativadas por estmulo ttil aplicado em seu campo receptivo e, quando estimuladas, parestesia produzida em seu campo receptivo. Apesar do registro com microeletrodo ser um magnfico mtodo para o estudo das estruturas cerebrais, sob o ponto de vista prtico, os resultados da ECP obtidos com ele ou apenas com a estimulao com macroeletrodo so basicamente idnticos. Embora a resposta esperada estimulao de VC seja a parestesia (obtida com baixa amperagem, comumente inferior a 0.5 miliamperes em VC, LM e CI), nos pacientes com dor por injria neural (DIN), a estimulao pode no produzir resposta (ex: infarto talmico) ou pode induzir parestesia em local no esperado (ex: parestesia em face em um plano 17 mm lateral linha mdia, onde se esperaria obter resposta em membro inferior) ou mesmo causar dor, resposta bastante incomum estimulao de VC. O registro com microeletrodo, por outro lado, pode evidenciar a presena de bursting cells, clulas deslocadas (como acima, clulas com campo receptivo em face no plano 17 mm lateral linha mdia) e, finalmente, campos receptivos anormais (ex: grande campo receptivo em ombro, rea com mnima representao em VC e, portanto, local onde campo receptivo s raramente encontrado). Todas essas alteraes, que podem ou no estar presentes em pacientes com DIN, sugerem uma reorganizao

somatotpica de VC causada pela leso do sistema nervoso. As coordenadas que utilizamos para PVG so aquelas propostas por Richardson (2 mm anterior a PC, 2 mm lateral parede lateral do terceiro ventrculo e ao nvel da linha intercomissural (AC-PC) ou por Tasker (como as de Richardson, mas 5 mm anterior a PC). Segundo esses autores, baseados em estudos de autpsia, o ponto ideal para a estimulao de PVG encontra-se no bordo medial do ncleo parafascicular (ncleo talmico intralaminar). O registro com microeletrodo tem pouca validade para esse alvo. O mapeamento por estimulao, nos poucos casos em que alguma resposta obtida, produz uma sensao "morna", de bem estar, prazer, alvio da dor e aumento da presso arterial e frequncia cardaca. Os parmetros de estimulao usados so: 50-100 Hertz de frequncia e 5-8 volts. Como o mapeamento fisiolgico pouco ajuda na maioria das vezes, o eletrodo implantado para teste com base nos parmetros anatmicos. Hosobuchi props as seguintes coordenadas para a estimulao de PAG: 23 mm lateral linha mdia, 0-2 mm posterior a PC e 2-3 mm inferior linha AC-PC. Na experincia dos presentes autores e na de alguns outros (no h um consenso), a estimulao de PAG, to eficaz nos animais de laboratrio, provoca, no ser humano, sensao de horror, medo, vertigem, um extremo malestar mal definido e efeitos oculomotores, distrbios estes da oculomotricidade que podem tornar-se permanentes com a estimulao crnica. Por essa razo, no temos utilizado esse alvo. Terminado o mapeamento fisiolgico, o eletrodo utilizado na explorao do alvo retirado, e um eletrodo tetrapolar (DBS, da Medtronic) para estimulao crnica implantado no stio escolhido. D) ESTIMULAO DO CRTEX MOTOR (ECM): Com o paciente em decbito dorsal ou lateral, aps assepsia e antissepsia, sob anestesia local, uma inciso linear parassagital (1-4 centmetros lateral linha mdio-sagital) ou uma inciso oblqua paralela topografia estimada do crtex motor realizada, dependendo da rea a ser estimulada: crtex relacionado ao membro inferior e crtex relacionado ao membro superior e face, respectivamente. A posio aproximada do crtex motor pode ser determinada por mtodos de topografia cranioenceflica (mtodos de Championniere, Poirier, Chipault e Kroenlein) ou com base em
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reparos anatmicos relacionados com o sulco central, conforme demonstrao por tomografia computorizada ou ressonncia magntica de crnio. Uma craniotomia com cerca de 3-4 centmetros de dimetro efetuada e o eletrodo tetrapolar (plos espaados 10 mm e possuindo 5 mm de dimetro) colocado no espao epidural. A exata posio do crtex motor pode ser determinada por dois mtodos distintos. Atravs do potencial evocado somato-sensitivo, utilizando-se o eletrodo tetrapolar para registro, pode-se documentar uma onda caracterstica, denominada N20, presente no crtex somestsico, que, ao cruzar o sulco central para o crtex motor, apresenta uma fase reversa, passando de negativa para positiva; trata-se de um critrio bastante confivel. O outro mtodo o da estimulao bipolar com baixa frequncia (1-2 Hertz): a resposta esperada a contrao de um msculo localizado na rea da dor. Conhecendo-se o homnculo motor, possvel, j antes da estimulao, colocar o eletrodo em placa na topografia mais adequada: face medial do hemisfrio, para dor em membro inferior e convexidade, para dor facial e em membro superior. Alguns pacientes se queixam de dor no stio de estimulao. Nesses casos, faz-se uma inciso na dura-mter ao redor do eletrodo e logo a seguir, a sutura, o que alivia esse problema (denervao da duramter sob o eletrodo). Estabelecidos o stio ideal e a melhor combinao de contatos para estimulao, o eletrodo ancorado dura com um ponto. A intensidade de estimulao usada durante a etapa de estimulao-teste menor do que aquela necessria para produzir contrao muscular. Nos casos em que a ECM efetiva em aliviar a dor, curiosamente, os pacientes referem uma leve sensao de parestesia estimulao. V - RESULTADOS: O resultado da neuroestimulao pode ser classificado em excelente (alvio da dor superior a 75%), bom (51-75% de alvio), regular (26-50% de alvio) e ruim (alvio inferior ou igual a 25%). Tal classificao baseia-se em trs parmetros fundamentais: escala analgica visual, quantidade e qualidade das drogas analgsicas utilizadas e atividades de vida diria. A compa rao entre os ndices pr e psoperatrios fornece o resultado do tratamento institudo. Mais importante que o resultado imediato, aquele verificado aps um longo follow-up. Kumar refere que tende a haver uma queda do sucesso inicial
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nos dois primeiros anos aps a cirurgia, a partir de quando os resultados tendem a se estabilizar. Por sucesso, ndice de sucesso ou resultado satisfatrio, queremos nos referir queles pacientes com alvio da dor superior a 50% (resultados bom e excelente) aps dois anos de follow-up. O ndice de sucesso da EGG de 40-50%. particularmente bem sucedida nos pacientes com neuralgia trigeminal atpica secundria a procedimentos cirrgicos na face ou a trauma (54%). Os piores casos so os de pacientes com neuralgia facial ps-herptica (10%). J os pacientes com dor facial secundria a leso cerebral apresentam resultado intermedirio (33% de resultado satisfatrio). A EME proporciona resultados satisfatrios em 50-60% dos casos. Os pacientes mais beneficiados so aqueles com sndrome ps-laminectomia e distrofia simptica reflexa e os com piores resultados, aqueles com neuralgia ps-herptica, amputao e leso medular (naqueles pacientes com dor apenas segmentar, o resultado pode ser bom). Corra, porm, relata sucesso em 2/3 de seus pacientes com neuralgia ps-herptica intercostal, aps um follow-up de 8 a 18 meses. Os sucessos da ECP podem ser analisados quanto ao tipo de dor tratada e quanto ao stio de estimulao. 42% dos pacientes com dor por injria neural (DIN) e 61% daqueles com dor nociceptiva obtiveram resultado satisfatrio com a ECP, conforme metaanlise recentemente publicada por Levy. Ainda segundo a mesma fonte, nos pacientes com DIN, a estimulao de VC foi bem sucedida em 56%, e a de PVG-PAG, em 23%; j nos pacientes com dor nociceptiva, a estimulao de PVG-PAG produziu resultado satisfatrio em 59%, e a de VC, em 0%. De modo geral, os melhores resultados so obtidos nos casos de sndrome ps-laminectomia, DIN perifrica (inclusive avulso de plexo braquial) e cncer, e os piores resultados naqueles com DIN medular e enceflica. Na srie de 60 pacientes de Tasker e Vilela Filho, curiosamente, os ndices de sucesso para a DIN perifrica e DIN enceflica foram bastante similares. Existem ainda poucos pacientes em todo o mundo submetidos ECM. Os resultados iniciais, porm, nos parecem animadores. O ndice global de sucesso reportado 69%, chegando a 89% nos pacientes com DIN no territrio do trigmeo. Os piores resultados foram registrados nos pacientes com DIN medular (33%, embora o nmero de pacientes seja bastante pequeno). Para os paci-

entes com DIN enceflica, usualmente to refratrios a qualquer tratamento, resultados satisfatrios tm sido obtidos em mais de 50% dos casos. Trata-se, sem dvida, de um mtodo bastante promissor. VI - COMPLICAES: A incidncia global de complicaes da ordem de 13%. Mortalidade, relacionada apenas ECP, foi relatada em 1.6% dos casos. Dficit neurolgico significativo foi observado em 2.2% dos pacientes submetidos ECP, e em 1 entre 700 pacientes submetidos EME (secundrio a hematoma epidural). Hematoma intracraniano foi reportado em 3% dos casos de ECP. Complicaes relacionadas ao hardware implantado so relativamente frequentes: infeco, 8%, eroso do tegumento sobre o hardware, 1.8%, migrao do eletrodo, 6% e falha mecnica do equipamento, 9%. VII - CONCLUSES: A despeito de seu uso com critrio cientfico j h cerca de 30 anos, a neuroestimulao para o tratamento da dor crnica tem ainda uma longa estrada a percorrer. Trata-se de um mtodo laborioso, devendo ser realizado apenas por profissionais adequadamente treinados e em centros bem equipados para esse fim. Os resultados, primeira vista no muito animadores, no podem ser vistos sob o mesmo prisma dos demais procedimentos cirrgicos. A estimulao cerebral profunda, por exemplo, pode ser o ltimo recurso disponvel, no momento, para o tratamento de pacientes que j tentaram tudo o mais e esto incapacitados por dor crnica. Uma chance de sucesso de 60%, na verdade, extremamente significativa para quem no tem mais ao que ou a quem recorrer. A incidncia de complicaes significativas, felizmente, bastante baixa, bem como a mortalidade. A identificao do alvo ideal a ser estimulado para cada tipo especfico de dor, o reconhecimento dos fatores de risco para a estimulao e a adoo da avaliao psicolgica e psiquitrica como parte obrigatria do screening pr-operatrio, associados aos contnuos avanos no diagnstico por imagem (favorecendo uma melhor identificao do alvo a ser abordado), na tecnologia dos sistemas implantveis e na compreenso dos mecanismos celulares e moleculares envolvidos na modulao da dor, temos certeza, tornaro a neuroestimulao um procedimento dia a dia mais eficiente e atraente.