ESPECTROFOTOMETRIA

Mtodo analtico baseado na propriedade que tm

muitas espcies de absorver radiaes ultravioleta e
visvel.
ESPECTROFOTOMETRIA
Quando a luz absorvida por uma amostra, a energia radiante do
feixe de luz diminui. Aenergia radiante, P, a energia por segundo por
unidade de rea do feixe de luz.
FONTE
DE LUZ
Seletor de
comprimento de onda
(monocromador)
Amostra
Detetor
de Luz
P
o
P
b
Transmitncia (T): definida como a frao da luz original que passa
pela amostra:
T=
P
P
o
Portanto, T est entre 0 e 1. A transmitncia percentual
simplesmente 100T e fica entre 0 e 100%.
ESPECTROFOTOMETRIA - LEI DE BEER
Absorvncia (A): T A
P
Po
log log =
|
|
.
|

\
|
=
Se nenhuma luz absorvida, P = P
o
e A = 0. Se 90% da luz so
absorvidos, 10% so transmitidos e A= 1.
Relao entre transmitncia e absorvncia:
P/P
o
%T A
1 100 0
0,1 10 1
0,01 1 2
ESPECTROFOTOMETRIA - LEI DE BEER
caminho tico b
P
o
P
Espcie absorvente de
concentrao c
Lei de Beer: A= abc
ESPECTROFOTOMETRIA - LEI DE BEER
Lei de Beer: A= abc
- A absorvncia diretamente proporcional concentrao, c, de
espcies absorventes de luz na amostra.
- Aabsorvncia adimencional.
- A grandeza a chamada de absortividade e caracterstica de cada
substncia que nos indica a quantidade de luz absorvida num
determinado comprimento de onda.
- Quando a concentrao, c, da espcie dada em mol/l, e o caminho
tico, b, dado em cm, a grandeza a chamada absortividade molar e
representada por c (psilon).
ESPECTROFOTOMETRIA - LEI DE BEER
Lei de Beer: A= abc
A
b
s
o
r
v

n
c
i
a
concentrao
Curva Analtica
ESPECTROFOTOMETRIA - LEI DE BEER
Lei de Beer: A= abc
Padres de Fe(fenantrolina)
3
2+
para anlise espectrofotomtrica. Os
bales volumtricos contm Fe na faixa entre 1 mg/Lat 10 mg/L.
DESVISOS DA LEI DE BEER
A
b
s
o
r
v

n
c
i
a
concentrao
Curva Analtica
- Uma linha reta passando pela origem denota a obedincia estrita a
lei de Beer.
- Quando a absorvncia varia de maneira no linear com respeito
concentrao, h um desvio da lei de Beer.
DESVISOS DA LEI DE BEER
- Desvios Reais: limitaes da lei de Beer.
- Desvios Aparentes:
Qumicos
Instrumentais
ou
DESVISOS DA LEI DE BEER
Desvios Reais
- Interao entre os centros absorventes: interaes
alteram a distribuio de carga das espcies, fazendo variar
a energia necessria para a excitao.
- Variao do ndice de refrao com a concentrao:
para baixas concentraes, n praticamente constante,
entretanto para concentraes mais altas, o ndice de
refrao pode variar sensivelmente.
DESVISOS DA LEI DE BEER
Desvios Qumicos
- Associao, dissociao ou reao da espcie
absorvente.
- Equilbrio qumico facilmente afetado por diluio,
variao de concentrao de um componente etc.
ESPECTROFOTOMETRIA DIRETA
- Baseia-se na medida da absorvncia e a a relao desta medida
com a concentrao da espcie de interesse.
- Deve-se fixar a faixa espectral mais apropriada para a medida
da absorvncia.
- Normalmente a medida de absorvncia realizado em um
correspondente a um mximo de absoro: a variao da
absorvncia por unidade de concentrao maior neste ponto
(maior sensibilidade); melhor obedincia lei de Beer; medidas
de absorvncia menos sensveis incerteza no ajuste do
instrumento ao .
ESPECTROFOTOMETRIA DIRETA
450 500 550 600 650 700
0,00
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
A
b
s
o
r
v

n
c
i
a
comprimento de onda (nm)
Espectro do complexo Cr(III)- EDTA
ANLISE DE MISTURA
DETERMINAO ESPECTROFOTOMTRICA SIMULTNEA
- Cada centro atua de modo independente sobre a radiao.
- A lei de Beer pode ser estendida a mistura de vrios
componentes.
- Cada espcie possui absortividade diferente e as absorvncias
se adicionam.
- Para uma mistura de dois componentes I e II em certo :
II II I I
bc a bc a A + =
CARACTERSTICAS DAS REAES
USADAS NA ESPECTROFOTOMETRIA
Normalmente, o constituinte a determinar deve ser convertido
em uma espcie absorvente mediante uma reao apropriada.
N
S
N N
HO
Zn
+2
N
S
N N
O
N
S
N N
O
Zn
+
+ 2 H
+
2
CARACTERSTICAS DAS REAES
USADAS NA ESPECTROFOTOMETRIA
- Sensibilidade: quanto maior a sensibilidade, menor a quantidade de
substncia com ele determinvel.
- Seletividade: reao com a menor quantidade de espcies.
- Reprodutibilidade: quantidades constantes do analito devem
produzir quantidades constantes de substncia absorvente.
- Estabilidade: as solues no devem sofrer alteraes com o
tempo.
- Obedincia Lei de Beer: so mais convenientes.
O ESPECTROFOTMETRO
- Sistema para medir a absorvncia da luz.
lmpada
lentes/
fenda
monocromador
Compartimento
para amostra
detetor
amplificador
processador
PARTES DO ESPECTROFOTMETRO
Fontes de Luz
- Lmpada de tungstnio: fonte de radiao visvel e
infravermelho prximo. Opera numa temperatura de 3000 K e
produz radiao til na faixa de 320 a 2500 nm.
- Lmpada de arco deutrio: usado na espectroscopia
ultravioleta. Neste tipo de lmpada uma descarga eltrica
dissocia o D
2
e emite radiao de 200 a 400 nm.
- Lmpada de vapor de mercrio ou gs xennio: regies
visvel e ultravioleta.
- Globar: um basto de carbeto de silcio aquecido prximo a
1500 K pela passagem de uma corrente eltrica, obtendo-se uma
fonte de radiao infravermelho (4000 a 200 cm
-1
).
PARTES DO ESPECTROFOTMETRO
Monocromadores
- Filtros
- Prismas
- Rede de Difrao
PARTES DO ESPECTROFOTMETRO
Monocromadores - Prisma
PARTES DO ESPECTROFOTMETRO
Monocromadores - Rede de Disperso
Dispositivo constitudo de uma srie de ranhuras muito
prximas, paralelas e eqidistantes traadas sobre uma placa
de vidro, metlica ou de um polmero.
PARTES DO ESPECTROFOTMETRO
Monocromadores - Rede de Disperso
Dispositivo constitudo de uma srie de ranhuras muito
prximas, paralelas e eqidistantes traadas sobre uma placa
de vidro, metlica ou de um polmero.
PARTES DO ESPECTROFOTMETRO
Monocromadores - Filtros
Operam transmitido faixas espectrais mais limitadas.
PARTES DO ESPECTROFOTMETRO
Compartimento para a amostra
Para a espectroscopia UV-visvel, uma amostra lquida
geralmente colocada numa clula chamada de cubeta que possui
faces planas, normalmente de slica fundida.
PARTES DO ESPECTROFOTMETRO
Detetores
Um detetor produz sinal eltrico quando ele golpeado
por ftons.
PARTES DO ESPECTROFOTMETRO
Detetores - Tubo Fotomultiplicador
ESPECTROFOTMETRO - FEIXE
SIMPLES
ESPECTROFOTMETRO - FEIXE DUPLO
Permite correo automtica para as mudanas da
intensidade da fonte, da sensibilidade do detetor com o
tempo e comprimento de onda.
ESPECTROFOTMETRO - FEIXE DUPLO
ESPECTROFOTMETRO MULTICANAL
ESPECTROFOTMETRO MULTICANAL
Anlise Quant it at iva
Espcie a ser analisada deve absor ver luz em conhecido
de absor o deve ser dif er enciado de out r as
subst ncias pr esent es na amost r a
Ex: Anlise de Fe
2+
(incolor ) em amost r a desconhecida
Fe
2+
+ 3 f er r ozina
2-
(f er r ozina)
3
Fe
4-
max. = 562 nm
1. Pr epar o de um br anco
cont m t odos os r eagent es
pr esent es na soluo da espcie a
ser analisada, menos a espcie a ser
analisada
subt r ai-se Absor bncia do
br anco da Absor bncia da amost r a
ant es de r ealizar -se os clculos
2. Const r uo da cur va de
calibr ao
medida da absor bncia de vr ias
solues de concent r ao conhecida
da espcie a ser det er minada
ANLI SE DE UMA MI STURA
quando exist e mais de uma espcie absor vedor a (X,Y,Z)
soma das absor bncias das vr ias espcies
A = c
x
b[ X] + c
Y
b[ Y] + c
z
b[ Z] + ...
VANTAGENS
Reduo dos er r os exper iment ais
Maior exat ido, det er minaes em baixas concent r aes
Simplicidade de execuo
Pode ser aplicado em condies que mt odos pot enciomt r icos
ou gr avimt r icos no exist am (amost r as biolgicas, p.e.)
Vant agens par a det er minaes de r ot ina r apidez de
execuo
Baixo cust o dos espect r of ot met r os