DNA polimerasas procariotas: caractersticas y funcin. DNA polimerasas eucariticas. Orgenes de replicacin. Iniciacin de la replicacin. Elongacin de las cadenas de DNA. Replicacin de los telmeros: telomerasa. Mutaciones, mutgenos y reparacin del DNA.
REPLICACIN TRANSCRIPCIN
TRADUCCIN
Tema 12
2C 2C 2C MITOSIS
M G2 G1
2C
4C
S
SINTESIS DE DNA (replicacin)
interfase 4C
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Caractersticas de la replicacin
Replicacin: proceso mediante el cual se hacen copias fieles del DNA que garanticen la transmisin y conservacin de la informacin gentica
Se necesita un grado exquisito de precisin. Existen sistemas complejos que aseguran que la informacin se transmite intacta. Las enzimas que sintetizan del DNA han de copiar molculas de millones de bases con gran fidelidad y velocidad. Han de actuar sobre un sustrato de DNA muy compactado y unido con otras protenas En la replicacin intervienen multitud de protenas y enzimas Los mecanismos utilizados y las propiedades fundamentales del proceso de replicacin son idnticos en todos los organismos.
Tema 12
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Luque y Herraez. Texto Ilustrado de Biologa Molecular e Ingeniera Gentica. Harcourt 2001.
En organismos procariotas la replicacin tiene lugar de forma bidireccional desde un nico origen.
Los organismos eucariotas replican su material gentico de forma bidireccional desde muchos orgenes.
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6 "Bioqumica. Libro de texto con aplicaciones clnicas". Devlin, T.M. Ed. Revert. Bioqumica. Stryer, L. Ed. W.H. Revert. .
Las polimerasas sintetizan DNA siempre en sentido 5 3 Una cadena se sintetiza de manera continua: cadena conductora o adelantada La otra cadena ha de sintetizarse por fragmentos: cadena retrasada o rezagada Fragmentos de Okazaki: fragmentos cortos (200 a 2000 nt) que posteriormente sern unidos por una DNA ligasa
5 3 3 5
Cadenas parentales
Para la reaccin de polimerizacin se requiere: a) Una hebra desapareada que acte como molde b) Una cadena cebadora o prmero que aporte un extremo 3-OH libre, al cual se aade un nuevo nucletido c) Un nucletido trifosfato: se incorpora el nucletido con el fosfato en alfa y se libera pirofosfato
a) Hebra molde
c)
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b) prmero o cebador
"Biochemistry" . Garrett, R.H. and 8 Grisham, Saunders College Publ
Severo Ochoa
1/2 of the prize USA New York University, College of Medicine New York, NY, USA b. 1905 (in Luarca, Spain) d. 1993
Arthur Kornberg
1/2 of the prize USA Stanford University Stanford, CA, USA b. 1918 d. 2007
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http://nobelprize.org/
Reaccin de polimerizacin
Pirofosfato (PPi)
Hebra creciente
Hebra molde
Lehninger Principios de Bioqumica", 4 ed. Nelson, D.L. y Cox, M.M. Omega. 2006
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Reaccin de polimerizacin
Hebra creciente Hebra molde
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Hebra creciente
La actividad correctora de pruebas (35 exonucleasa) de las DNA polimerasas elimina el nucletido mal apareado
Nucleasas o DNasas: enzimas que degradan el DNA Exonucleasas: degradan desde un extremo del cido nucleico. Actividad exonucleasa 5----3 3---5 Endonucleasas: degradan en sitios internos
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DNA pol I Funciones de limpieza y reparacin. Eliminar el cebador y sustituir el RNA por DNA
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1) 4)
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3)
Lehninger Omega. 2006 14
Ori C: 245 bp
Cajas DnaA
Cajas DnaA
Unin de DnaA a sus sitios de fijacin. Fusin de la doble hlice Asociacin secuencial de protenas que desenrollan el DNA y forman la horquilla de replicacin: La helicasa DnaB, ayudada por DnaC se sita en la burbuja de replicacin La primasa DnaG se une al complejo, formando el primosoma La unin posterior de la DNA pol III lleva a cabo la replicacin del DNA
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Lehninger Principios de Bioqumica", 4 ed. Nelson, D.L. y Cox, M.M. Omega. 2006
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La sntesis de las cadenas adelantada y retardada estn coordinadas Ambas hebras son producidas por un dmero de la DNA pol III
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La hebra retardada forma un bucle que aproxima los dos puntos de polimerizacin. "Bioqumica" . Mathews, C.K.
2. La DNA polimerasa III alarga los cebadores sintetizando nueva cadena de DNA
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Replicacin en eucariotas
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En el genoma humano hay cientos de focos de replicacin, cada uno con muchos orgenes
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ORC
G1
Cdc6 cdt1
MCM2-7
Complejo prereplicativo
Inicio de la replicacin
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DNApol : rellena los huecos que dejan los prmeros al ser eliminados
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"Bioqumica" 3 ed. Mathews, C.K. Van Holde, K.E y Ahern, K.G. Ed. Addison Wesley. 2002.
En eucariotas hay varias DNA polimerasas: la que sintetiza los prmeros, la que sintetiza la conductora y acaba los fragmentos de Okazaki, y otras
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Bioqumica bsica de Marks. Un enfoque clnico. McGraw-Hill Interamericana, 2006. 22
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3 5
polimerizacin
5 Telmero 3
3 5
+
3 5
Eliminacin del prmero y ligacin de los fragmentos de okazaki
3 5
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5 3
Qu consecuencias tiene el acortamiento de los telmeros? En cada ronda de replicacin se van perdiendo secuencias telomricas (cromosomas ms cortos) y los cromosomas se hacen inestables: se unen a otros cromosomas o sufren reorganizaciones que alteran el material gentico
Telomerasa un componente proteico (subunidad cataltica hTERT) y una molcula de RNA aade secuencias telomricas en el extremo 3 del DNA (~transcriptasa inversa) la molcula de RNA de la Telomerasa sirve de molde para aadir repeticiones de 6 nucletidos al extremo 3 de los telmeros. este alargamiento permite aadir un prmero ms externo sobre el que la DNApol puede aadir dNTPs En ausencia de telomerasa, a medida que las clulas se van dividiendo (y envejeciendo) se van acortando los telmeros La telomerasa es inactiva en la mayor parte de las clulas somticas La telomerasa se activa en muchas clulas tumorales Papel en el envejecimiento(reloj biolgico), la proliferacin y el cncer
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Telmero humano
dC T
dG TP
El componente proteico de la telomerasa alarga el saliente 3 usando como molde la hebra de RNA de la propia telomerasa
3 5
AATCCCAATCCCAATCCC 5 TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG 3
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Errores en la replicacin
LESIONES
SISTEMAS DE REPARACIN
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A diferencia de las escinucleasas las endonucleasas AP solo cortan la hebra daada por un punto situado en 5 de la lesin
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Lehninger Principios de Bioqumica", 4 ed. Nelson, D.L. y Cox, M.M. Omega. 2006
Dmeros de timina
La excinucleasa se diferen cia de las dems nucleasas en que corta la hebra daada por dos puntos, en 5 y en 3 de la lesin
Tanto E.coli como el hombre poseen sistemas homlogos para reparar este tipo de lesin Tema 12
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La reparacin es posible porque la hebra molde est marcada previamente por metilacin de la A de todas las secuencias GATC presentes en ella (en E Coli)
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