Anda di halaman 1dari 20

PEMERIKSAAN HIV

A. Dasar Teori Hiv (Human Immunodefeciency Virus) adalah virus yang menyerang system kekebalan tubuh manusia yang kemudian menimbulkan AIDS (Acquired Immuno Deficiency Syndrom) yaitu kumpulan gejala penyakit akibat menurunnya system kekebalan tubuh yang diakibatkan oleh virus HIV, dan viris HIV ini dilapisi dengan selubung lipid yang berasal dari membaran sel inang. Pada beberapa viral, glikoproteinnya terdapat pada selubungnya. 1. Metode Minividas a. Prinsip Dengan menggunakan pembacaan Enzyme-Linked Flourescence Immuno Assay (ELFA) bila sampel mengandung virus HIV akan mengikat antibodi, dengan dengan pembacaan fluorescence maka akan akan ada photidiode yang berfungsi

bantuan enzim alkali phosphatase dirangsang melalui filter dan lensa sebagai detector dalam pembacaan hasil.

b. Tujuan Sebagai kerangka acuan pemeriksaan HIV (MInividas) di RSUD Kelas C Kab. Ciamis

Untuk mengetahui adanya virus HIV dalam serum pasien.

c. Alat dan Bahan Serum Alat Minividas Reagen strip HIV 5 Duo Ultra Clinipet 100 Mikroon Clinipet 50 Mikroon

d. Cara Kerja Siapkan serum pasien yang akan diperiksa Siapkan alat Minividas meliputi : a) Nyalakan UPS b) Tekan power switch (pada bagian belakang) c) Warming-up kurang lebih 10 menit d) Tunggu sampe pada layar tampil menu utama dari Minividas Untuk persiapan sampel, pada menu utama pilih status screen

Letakan reagen strip pada section yang di hendaki (A atau B), letakan pula SPRnya, lalu tambahkan serum 150 mikroon pada reagen strip

Pilih posisi yang dihendaki, missal A1 (dengan menekan angka 1 pada keyped) Pilih sampel ID, masukan identitas sampel, lakukan hal sama untuk sampel lebih dari satu

Tekan Previous Screen Selanjutnya pilih Assay HIV 5, kemudian kembali dengan menekan Previous Screen

Tekan tombol start, tunggu hasil sampai 2 jam Setelah 2 jam pelaoporan hasil dari pemeriksaan akan tercetak secara otomatis pada printer internal.

e. Diagnosa Labolatorium Pemeriksaan Immunologis


1. HbsAg

a. Prinsip
Jika alat tes (strip) dicelupkan pada serum maka akan terjadi perubahan warna, pertambahan garis, atau tanda tertentu (positif), yang menunjukkan ditemukannya antigen HBsAg di

dalam serum. Yang berbentuk strip umumnya akan menunjukkan dua garis merah bila terdapat antigen HBsAg sebagai tanda positif Hepatitis B. b. Tujuan Untuk medeteksi adanya antigen HBsAg yang terdapat dalam serum pasien c. Alat dan bahan - serum/plasma - New Spot HBsAg Test Device d. Cara kerja a. Masukkan serum pada tabung b. Celupkan strip pada serum tersebut c. Angkat, tunggu beberapa saat d. Baca hasilnya

d. Interpretasi hasil

2. Anti HBs

a. Prinsip b. Tujuan
Untuk medeteksi adanya antigen HBsAg yang terdapat dalam serum pasien c. Alat dan bahan - serum/plasma New Spot HBsAg Test Device

d. Cara Kerja a. Masukkan serum pada tabung b. Celupkan strip pada serum tersebut c. Angkat, tunggu beberapa saat d. Baca hasilnya

Pemeriksaan Klinik
1. SGOT (Metode Kinetik-IFCC)

a. Prinsip L-aspartat bereaksi dengan 2-oksoglutarat dengan bantuan enzim AST membentuk okaslosetat dan L-glutamat. Oksaloasetat yang terbentuk akan mereduksi NADH dengan bantuan enzim malat dehidariogenasetat (MDH)

membentuk L-malat dan NAD+. Aktivitas katalitik AST ditentukan dengan mengukur penurunan absorban pada panjang gelombang 340 nm. b. Cara kerja Pipet sampel 100 mikroon, masukan nke dalam tabung reaksi Tambahkan 1000 mikron reagen Kocok, inkubasi selama 1 menit kemudian baca pada menit ke-1, 2,

3. Baca pada panjang gelombang 340 nm.

c. Alat dan Bahan Serum Spektrofotometer Reagen Tabung reaksi Pipet 100b dan 1000 mikroon

2. SGPT (metode Kinetik-IFCC)

a. Prinsip

L-alanin bereaksi dengan 2-oksoglutarat dengan bantuan enzim ALT membentuk piruvat dan L-glutamat. Piruvat yang terbentuk akan mereduksi NADH dengan bantuan enzim laktat dehidariogenase (LDH) membentuk Llaktat dan NAD+. Aktivitas katalitik ALT ditentukan dengan mengukur penurunan Absorban pada panjang gelombang 340 nm. b. Alat dan Bahan Serum Spektrofotometer Reagen Tabung reaksi Pipet 100b dan 1000 mikroon

c. Cara Kerja Pipet sampel 100 mikroon, masukan nke dalam tabung reaksi Tambahkan 1000 mikron reagen Kocok, inkubasi selama 1 menit kemudian baca pada menit ke-1, 2, 3. Baca pada panjang gelombang 340 nm

2. Metode HIV test (Rapid Test)

A. Prinsip Dengan menggunakan pembacaan protein rekombina HIV dan protein HIV multi rekombina akan mendeteksi antibody terhadap HIV-1 dan HIV-2 dalam serum, plasma atau darah B. Tujuan Untuk mengetahui adanya virus HIV dalam serum pasien

C. Alat dan Bahan Serum Rapid Test Buffer

D. Cara Kerja a. Teteskan 10 mikroon (1 tetes) serum/plasma atau 20 mikroon (2 tetes) darah kesumur sampel b. Tambahkab 1 tetes (40 mikroon) buffer uji HIV

c. Baca hasil uji setelah 15 menit, berupa munculnya garis berwarna merah-ungu di posisi C atau T

3. Metode SD BIOLINE HIV-1/2 A. Penjelasan pengujian SD BIOLINE HIV-1 / 2 3.0 tes adalah tes immunochromatographic untuk diferensial dan deteksi kualitatif dari semua isotypes (IgG, IgM, IgA) antibodi spesifik terhadap HIV-1 subtipe termasuk O dan HIV-2 secara bersamaan, dalam serum manusia, plasma atau darah utuh. SD BIOLINE HIV 1 / 2 3.0 pengujian berisi strip membran, yang procoated dengan rekombinan antigen HIV-1 capture (gp 41, p24) pada daerah uji band I dan dengan rekombinan HIV-2 menangkap antigen (gp 36) pada tes 2 wilayah band masingmasing. Antigen HIV-1/2 rekombinan (gp 41, p24 dan gp36)-koloid emas conjugate dan sampel specimen bergerak disepanjang membran cromatografi kedaerah tes (T) dan membentuk garis, terlihat sebagai antigen-antibodi-antigen emas mulai membentuk kompleks dengan tingkat sensitifitas dan spesifisitas tinggi. Perangkat tes 1,2 dan C sebagai uji jalur I (HIV-1), uji jalu 2 (HIV-2) dan jalur control pada permukaan perangkat. Kedua baris tes dan jalur jendela hasilnya tidak sebelum dimasukan kedalam sampel. Garis control gigunakan untuk control prosedual. Garis control harus selalu muncul jika prosedur tes dilakukan dengan benar dan reagen tes line control bekerja.

B. bahan yang disediakan

SD BIOLINE 3,0 test kit berisi item berikut untuk melakukan pengujian tersebut. 1. Perangkat Uji individual foil bersaku dengan pengering yang 2. Uji pengencer 3. kapiler pipet, lancets (Option) 4. Paket masukkan

C. Kewaspadaan / penyimpanan Kit dan stabilitas


1. Perangkat uji harus disimpan di l ~ 30 C Jangan simpan di kulkas.

2. Perangkat uji sensitif terhadap kelembaban serta panas. 3. Lakukan tes segera setelah melepaskan perangkat tes dari kantong foil. 4. Jangan menggunakannya melampaui tanggal kedaluwarsa. 5. Rak-hidup kit seperti yang ditunjukkan pada kemasan luar. 6. Jangan menggunakan test kit jika kantong rusak atau segel rusak. 7. Jangan perangkat tes.

D. Peringatan 1. Untuk secara in vitro diagnostik hanya menggunakan. 2. Jangan makan atau merokok sambil menangani spesimen.
3. Pakailah sarung tangan pelindung saat menangani spesimen.Cuci tangan dengan

bersih sesudahnya. 4. Hindari percikan atau pembentukan aerosol. 5. Bersihkan tumpahan dengan seksama menggunakan disinfektan yang sesuai.

6. Dekontaminasi dan membuang semua spesimen, kit reaksi dan berpotensi terkontaminasi bahan, seolah-olah limbah infeksius, dalam wadah Biohazard. 7. Jangan mencampur dan pertukaran spesimen yang berbeda. 8. Antikoagulan seperti heparin, EDTA dan natrium sitrat tidak mempengaruhi hasil tes. 9. Gunakan sampel hemolitik, arthritis faktor-berisi sampel dan lipidemic, icteric sampel dapat menyebabkan hasil tes palsu.

E. Spesimen pengumpulan, penyimpanan dan pencegahan A. Seluruh darah

Koleksi oleh venipuncture 1. Kumpulkan seluruh darah ke dalam tabung koleksi (mengandung antikoagulan seperti heparin, EDTA dan natrium sitrat) oleh venipuncture. 2. Jika spesimen darah tidak segera diuji, mereka harus didinginkan pada C. 3. Bila disimpan di, spesimen darah harus digunakan dalam waktu 3 hari.
4. Untuk periode penyimpanan lebih lama dari 3 hari, pembekuan dianjurkan. Mereka

harus dibawa ke suhu kamar (l "C) sebelum digunakan. 5. Menggunakan spesimen darah dalam jangka panjang tetap lebih dari 3 hari dapat menyebabkan nonspesifik reaksi. Koleksi menggunakan lanset 1. Bersihkan area yang akan lanced dengan kapas alkohol.

2. Tekan ujung jari dan menusuk dengan pisau bedah steril yang disediakan. 3. Ambil pipet kapiler yang disediakan, membenamkan ujung terbuka di drop darah dan kemudian melepaskan tekanan untuk menarik darah ke dalam pipet capillaly untuk garis hitam. B. Plasma atau Serum 1. [Plasma] Kumpulkan seluruh darah ke dalam tabung koleksi (mengandung antikoagulan seperti heparin, EDTA dan natrium sitrat) oleh venipuncture dan kemudian centrifuge darah untuk mendapatkan spesimen plasma.

[Serum] Kumpulkan seluruh darah ke dalam tabung koleksi (TIDAK mengandung antikoagulan seperti heparin, EDTA dan natrium sitrat) oleh venipuncture, biarkan untuk menetap selama 30 menit untuk koagulasi darah dan kemudian centrifuge darah untuk mendapatkan spesimen serum supernatan.
2. Jika plasma atau serum spesimen tidak diuji segera, mereka harus didinginkan di 2 ~ 8

C Untuk

periode

penyimpanan

lebih

lama

dari

Weeks,

pembekuan

dianjurkan. Mereka harus dibawa ke suhu kamar (l ~ 30 C) sebelum digunakan. 3. Plasma atau spesimen serum yang mengandung endapan dapat menghasilkan hasil tes tidak konsisten. Spesimen tersebut harus diklarifikasi sebelum pengujian.

F.

Prosedur pengujian

1. Lepaskan perangkat uji dari kantong foil, letakkan dipermukaan yang datar kering.

2.

Menggunakan pipet kapiler]

Tambahkan Zola? dari spesimendarah ke dalam

yang

diambil dengan pipet kapiler ZOLLQ

sampel Sumur (s). ATAU,

(Menggunakan mikropipet) Tambah Loy, Q plasma atau serumspesimen (ZOMQ dari spesimen darah) ke sampel baik (S).
3. Tambahkan 4 tetes (sekitar 120plZ) pengencer sampel uji ke dalam Yah (s). 4. Sebagai tes mulai

bekerja, Anda

akan

melihat warna

ungubergerak di

jendela mengakibatkan pusat alat uji.


5. Menginterpretasikan hasil tes dalam 5 ~ 20 menit.

Perhatian: Jangan

membaca hasil

tes setelah

20 menit.Membaca terlambat dapat

memberikan hasil yang salah.

G.

Interpretasi dari uji


1. Sebuah

band warna ini

akan muncul bekerja dengan

di

bagian kiri benar. Band

jendela untuk ini adalah

menunjukkan (C).

bahwa hasil tes

kontrol baris

2) Warna band Akan muncul di bagian tengah dan kanan Window hasil. Band-band ini tes baris 2 dan l tes garis (2, 1). Kehadiran garis kontrol saja (C) dalam jendela hasil menunjukkan hasil negatif.

2.

Hasil Positif

a. Kehadiran dua garis sebagai garis kontrol (C) dan garis uji MC1) dalam jendela hasil menunjukkan hasil yang positif untuk HIV-1.

b. Kehadiran dua garis sebagai garis kontrol (C) dan garis uji 2 (2) dalam jendela hasil menunjukkan hasil yang positif untuk HIV-2. c. Kehadiran tiga garis sebagai garis kontrol (C), garis uji 1 (1) dan garis uji 2 (2) dalam hasilnya Jendela menunjukkan hasil yang positif untuk HIV-1 dan / atau HIV-2.

Jika intensitas warna garis uji 1 lebih gelap dari satu garis tes 2 di jendela hasil, anda dapat menafsirkan hasil sebagai HIV-1 positif.

Jika intensitas warna garis uji 2 lebih gelap dari satu garis uji 1 di Window hasil, anda dapat menafsirkan hasil sebagai HIV-2 positif.

Perhatian: Meskipun hasil positif dan HIV-2 pada satu pasien adalah kasus yang jarang terjadi, itu mungkin karena ada homologi dalam urutan asam amino antara HIV-1 dan Untuk menentukan jenis virus atau mendiagnosis koinfeksi akurat, Anda harus melakukan konfirmasi uji sebagai Western Blot dll. 3. Hasil tidak valid Tidak adanya kontrol baris (C) dalam jendela hasil menunjukkan hasil yang tidak valid. Para arah tidak mungkin telah diikuti dengan benar atau tes mungkin telah memburuk. Hal ini direkomendasikan bahwa spesimen akan kembali diuji.

H.

Keterbatasan pengujian 1. Meskipun hasil positif dapat mengindikasikan infeksi HIV-l atau Virus, diagnosis AIDS hanya dapat dilakukan atas dasar klinis, jika seorang individu memenuhi definisi kasus untuk AIDS didirikan oleh Centers for Disease Control. Untuk sampel berulang kali diuji sebagai positif, tes tambahan lebih specic harus dilakukan.

2. pengujian immunochromatographic saja tidak dapat digunakan untuk mendiagnosa AIDS bahkan jika antibodi melawan dan / atau HIV-2 yang hadir dalam spesimen pasien, 3. Sebuah hasil negatif tidak menghilangkan kemungkinan HIV-1 dan / atau HIV-2 infeksi. Para spesimen mungkin berisi rendahnya tingkat antibodi terhadap HIV-1 dan / atau HIV-2.

I. Karakteristik kinerja 1. Sensitivitas dan Spesifisitas 699 spesimen diuji oleh SD BIOLINE HIV-1 / 2 3.0 dan komersial terkemuka tersedia Anti-HIV l / 2 ELISA kit. Hasilnya menunjukkan bahwa SD BIOLINE HIV-I / 2 3. () Adalah Yah berkorelasi dengan ELISA komersial kit Lainnya. SD BIOLINE PHV-1 / 2 3.0 menunjukkan sensitivitas 100% (187/187) dan specicity dari 99,8% (511/512).

Jumlah Hasil Metode Hasil Positif Negatif Komersial Positif 187 0 187 Negatif 1 511 512 ELISA 2. Presisi a. RUN INTRA: reproduktifitas ini ditentukan dengan menguji 3 berbeda ulangan dari 4 spesimen yang berbeda yang mengandung konsentrasi yang berbeda dari antibodi

dengan 3 banyak berbeda SD BIOLINE HIV-1 / 2 3.0 secara bersamaan. Presisi bertekad untuk menjadi 100%. b. INTER RUN: reproduktifitas itu ditentukan pada hari yang berbeda dengan menguji 10 ulangan dari 4 spesimen yang berbeda yang mengandung konsentrasi yang berbeda dari antibodi dengan SD BIOLINE HIV-1 / 2 3.0. Presisi bertekad untuk menjadi 100%.

J. Bibliografi dari bacaan yang disarankan 1. M.S. Saac M.H010dniy, R Kuritzhes, dll:. Spidol viral load HIV dalam praktek klinis. Alam Medecine, Volume 2, Nomor 6, Juni 1996. 2. Hawa M. Lackritz, M. D. Glen A. Satten, Ph.D. dll: Perkiraan risiko penularan Human Immunodeficiency Virus oleh Darah disaring di Amerika Serikat, Joumal dari Medecine Volume 333, Nomor 26. 3. Lee Ratner, William Haseltine, Roberto Patarca, dll: urutan nukleotida lengkap dari Virus AIDS, Alam VOL. 313, 24 Januari 1985. 4. V.S. Ivanov, Z.K. Suvorova, L.D. Tchikin, A.T. Kozitch dan V.T.Ivanov: Metode Efektif untuk imobilisasi peptida sintetik yang meningkatkan sensitivitas dan spesifisitas ELISA prosedur Jurnal Metode imunologi, 153 (1992) 229-233. 5. Mi J dalam Sohn, Young Hae Chong, Ji Eun Chang, Young lk Lee: Ekspresi dan sederhana pemurnian human immunodeficiency virus-l epitop gag derivedfrom suatu rekombinan antigen dalam E. coli dan penggunaannya dalam ELISA. Jurnal Bioteknologi 34 (1994) 149-155. Referensi SD BIOLINE HIV-l / 2 3.0

Jumlah Hasil 188 51l 699

4. Metode Western Blot


1. Menyiapkan sampel yang akan diteliti, apakah itu limfosit T, fibroblas atau seldarah tepi Sampel harus

dijaga tetap dingin 2. Menyiapkan buffer supaya pH dapat berada pada jangkauan yang stabil 3. Menyiapkan antibodi yang akan digunakan sebagai pelacakMonoklonal antibodi maupun poliklonal antibodi dapat digunakana Antibodi monoklonal adalah yang lebih baik digunakan, karena :-Sinyal yang lebih baik Spesifisitas yang lebih tinggi Hasil yang lebih jernih pada proses pembuatan film western blot Antibodi Poliklonal Mengenali lebih banyak epitop
4. Melakukan Lisis pada SelKita perlu melisis sel untuk mengeluarkan protein yang

diinginkan dari sel Untuk melisis sel dapat digunakan detergen SDS dan RIPA.Bila yang diinginkan adalah sebuah protein yang terfosforilasi, maka perlu ditambahkan inhibitor fosfatase agar gugus fosfat pada protein tersebut tidak dibuang. Cara melisis : sentrifuge dan ambil pellet yang terbentuk Jaga agar tetap dingin dengan menggunakan kotak es Tambahkan buffer lisis, lalu kumpulkan dalam tabung eppendorf, jaga agar tetap dingin
5. Gel Elektroforesis adalah Gel yang biasa dipakai misalnya SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate-

polyacrylamide gel electrophoresis) untuk memisahkan protein berdasarkanukurannya

dengan adanya arus listrik Akrilamid 10% juga ditambahkan Kerja SDS-PAGE ini adalah dengan mendenaturasi polipeptida setelah terlebih dahulu polipeptida tersebut dibuang struktur sekunder dan tersiernya Sampel terlebih dahulu dimasukkan ke dalam sumur gel Satu jalur biasanya untuk satu marker Protein sampel akan memiliki muatan yang sama denganSDS yang negatif sehingga bergerak menuju elektroda positif melalui jaring-jaring akrilamid Protein yang lebih kecil akan bergerak lebih cepat melewati jaring-jaring akrilamid Perbedaan kecepatan pergerakan ini akan terlihat pada pita-pita yang tergambar pada tiap jalur
6. Transfer GelAgar protein tersebut dapat diakses oleh antibodi, maka protein tersebut harus

dipindahkan dari gel ke sebuah kertas membran, biasanya nitroselulosa atau PVDF Membran ini diletakkan di atas gel, dan tumpukan kertas penyerap diletakkan di atasnya Larutan buffer kemudian akan merambat keatas melalui reaksi kapiler dengan membawa protein-proteinnya Cara lain untuk mentransfer protein adalah dengan menggunakan teknik elektroblotting Teknik ini menggunakan arus listrik untuk menarik protein dari gel ke membrane Selain itu, diperlukan pula sebuah prosedur untuk mencegah terjadinya interaksi antara molekul-molekul yang tidak diinginkan agar hasil yang diperlukan lebih jernih (to reduce noise) Caranya adalah dengan menempatkan membran pada BSA(Bovine serum albumin) atau non-fat drymilk dengan sedikit detergen tween 20 sehingga serum tersebut akan menempel pada pada daerah yang tidak ditempeli protein sampel Hal ini bertujuan untuk membuat antibodi hanya akan dapat menempel pada binding site protein target Setelah itu, barulah membran dengan protein sampel tersebut diinkubasi dengan antibodi

7. Deteksi-Deteksi dilakukan dengan antibodi yang telah dimodifikasi bersama dengan

sebuah enzim yang disebut reporter enzyme Proses deteksi biasanya berlangsung dalam dua tahap, yaitu A. Antibodi Primer Antibodi yang digunakan di sini adalah antibodi yang pertama kalidihasilkan sistem imun ketika terpajang protein target Antibodi terlarutkemudian diinkubasi bersama kertas membran paling sedikit selama 30 menit.
B. Antibodi Sekunder Setelah diinkubasi bersama antibodi primer, kertas mebran dibilas

terlebih dahulu barulah diinkubasi dengan antibodi sekunder Antibodi sekunder adalah antibodi yang spesifik untuk suatu spesies pada antibody primer Misalnya, anti-tikus hanya akan berikatan pada antibodi primer yang berasal dari tikus. Antibodi sekunder biasanya berikatan dengan enzim reporter seperti alkaline fosfatase atau horseradish peroxidase Antibodi sekunder ini kemudian akan menguatkan sinyal yang dihasilkan oleh antibodi primer Sekarang, proses deteksi dapat dilakukan dengan satu langkah saja, yaitudengan menggunakan antibodi yang dapat mengenali protein yang diinginkan sekaligus memiliki label yang mudah dideteksi a. Analisisa Colorimetric detection Metode ini digunakan bila substrat dapat bereaksi dengan reporterenzyme sehingga dapat mewarnai membran nitorselulosa b. Chemiluminescent Metode ini digunakan bila substrat merupakan molekul yang bila bereaksi dengan antibodi sekunder atu dengan reporter enzyme akan teriluminasi Hasilnya kemudian diukur dengan densitometri untuk mengetahui jumlahprotein yang terwarnai Teknik terbarunya yang paking canggih

disebutEnhanced

Cheiluminescent

(ECL)

Teknik

inilah

yang

paling

banyakdigunakan sekarang c. Radioactive detectionMetode ini menggunakan X-ray yang bila mengenai label akanmenciptakan region gelap Namun metode ini sangat maha dan beresikotinggi terhadap kesehatan Fluorescent detectionPelacak yang mmepunyai label yang dapat mengalami fluorosensi lalukemudian dideteksi oleh fotosensor seperti kamera CCD yang