lvaro Jos Villamizar Quintero. 1.

Defina: Gen: Porcin del DNA de diversa longitud que codifica para la sntesis de una determinada cadena polipeptdica. Exn: Porcin codificante de una cadena de DNA Intrn: Porcin no codificante de una cadena de DNA removida mediante el proceso de corte y empalme. Locus: Lugar que ocupa un gen determinado en un cromosoma. Alelo: Forma alternativa de un gen determinado el cual ocupa el mismo locus de dicho gen. Mutacin: Cambio en la secuencia del DNA, lo cual genera errores en el marco de lectura llevando a la sntesis de protenas alteradas. Estado heterocigoto: Individuo el cual tiene dos alelos diferentes de un gen en un el mismo par de cromosomas. Estado homocigoto: Individuo el cual tiene un mismo alelo de una gen en el mismo par de cromosomas. Enfermedad autosmica dominante: Causada por un gen ubicado en un cromosoma autosmica X o Y, la cual requiere solo una copia de un gen defectuoso para manifestar la enfermedad. Enfermedad autosmica recesiva: Causada por un gen ubicado en un cromosoma autosmica X o Y, la cual requiere dos copias de un gen(estado homocigoto) defectuoso para manifestar la enfermedad. DDx de atrofia medular: o Esclerosis lateral aminoatrfica. o Miastenia gravis. o Esclerosis primaria lateral. o Distrofia muscular congnita. o Miopatas congnitas: Miopatas con acumulacin de protenas. Miopatas con ncleo. Miopatas con central nuclei. Miopatas con variaciones en el tamao de la fibra.

2. Tcnicas convencionales: Guanidinium Thiocyanate-Phenol-Chloroform Extraction: La adicin de fenol y cloroformo forma un capa bifsica en la cual luego de centrifugacin la porcin hidrofobica permanecer en el fondo mientras la porcin hidrofilica permanecer en la superficie es en esta donde se encuentra el DNA, este es precipitado luego usando etanol o isopropanol juntos con altos concentraciones de sal, luego el exceso de etanol y sal es eliminado mediante centrifugacin. Esta misma tcnica se usa para la obtencin de RNA pero varan los reactivos; se usa Guanidinium Thiocyanate como una agente caotrpico, as mismo fenol, cloroformo y acetato de sodio formando

una solucin acida en la cual el RNA permanecer en el sobrenadante y el DNA en el fondo o en la interface de la solucin. Luego el RNA es obtenido del sobrenadante mediante la precipitacin con isopropanol. o Mtodo de extraccin CTAB(Cetyltrimethylammonium bromide): Se requiere moler la muestra luego de ser congelada con nitrgeno lquido, esto se hace para romper material celular, inactivar enzimas y permitir la liberacin de los cidos nucleicos, luego es mezclado con el buffer CTAB el cual precipita los cidos nucleicos, luego se usa alcohol, solventes orgnicos y centrifugacin para purificar los cidos nucleicos de sustancias inorgnicas, mientras que sustancias solubles son separadas mediantes la adicin de cloroformo y centrifugacin nuevamente. Extraccin de cidos nucleicos en fase solida: La fase solida absorbe los cidos nucleicos en un proceso dependiente del PH, contenido de sal y el buffer usado. Se basa en los principios de interacciones de enlaces de hidrogeno con una matriz hidrofilica en condiciones caotrpicas, intercambio inico en condiciones acuosas y mecanismos de exclusin de afinidad y tamao. Matriz de slice: Se basa en la afinidad de la estructura del DNA cargada negativamente por las partculas de slice cargadas positivamente. Magnetic Bead Based Nucleic Acid Purification: Separa partculas con carga magntica mediante la aplicacin de un campo magntico generado por un imn permanente.

3. PCR (reaccin en cadena de polimerasa): Mtodo por el cual se amplifica de manera rpida una segmento de DNA especfico de hasta 6kb. Proceso: Se selecciona una muestra de DNA especfico para amplificar, se requiere una Taq polimerasa la cual es una DNA polimerasa termoestable, dinucleotidos, DNA, magnesio y un buffer. Una vez preparado todo se coloca el tubo de ensayo en un termociclador el cual vara la temperatura en cada paso del procedimiento. Se aumenta la temperatura a 95 C lo cual desnaturaliza el DNA es decir separa las cadenas, luego comienza una fase de alineamiento en la cual la temperatura desciende a 40-60 C, permitiendo la unin de los primers o cebadores al segmento de DNA de inters, esto permite que la DNA polimerasa comienza con su proceso de replicacin de la hebra complementaria, la temperatura se sube a 72 C a la cual la DNA Pol trabaja a su mxima actividad esta es la fase de elongacin. o Magnesio: Cofactor de la DNA polimerasa. o Primer: Secuencia corta de oligonucletidos los cuales marcan el inicio a la DNA Pol del segmento que queremos sintetizar. o Taq polimerasa: DNA polimerasa termoestable proveniente de una bacteria termoresistente llamada Thermus aquaticus. o Dideoxinucleotidos: nucletidos los cuales carecen del grupo 3-hidroxilo (OH) en su desoxirribosa, esto implica que una vez es agregado a la cadena de DNA en crecimiento no se podrn agregar otros nucletidos, debido a la imposibilidad de formar el enlace fosfodiester con otros nucletidos. o Buffer: sustancia la cual mantiene un PH optimo al cual trababa la DNA Pol.

4. Electroforesis: Es un mtodo de laboratorio en el que se utiliza una corriente elctrica controlada con el fin de separar biomolecular segn se tamao y carga elctrica a travs de una matriz gelatinosa. o Fundamento: Cuando una mezcla de molculas ionizadas y con carga elctrica se colocan en un campo elctrico, estas experimentaran fuerza de atraccin hacia el polo de carga opuesta, las molculas cargadas positivamente se desplazan hacia el ctodo (polo negativo), y las molculas cargadas negativamente se desplazan hacia el nodo (polo positivo). Tambin intervienen fuerzas de friccin dada por el solvente lo cual dificultara la migracin hacia los polos y la energa cintica propia de cada molcula. Gel de poliacrilamida: es usada para ver secuencias de DNA de bajo peso molecular, entre 80pb y 300pb. Es til en aislamiento de pequeas secuencias lo cual representa una ventaja sobre geles como la agarosa el cual es de menor resolucin. Sin embargo la poliacrilamida es neurotxica. Gel de agarosa: Es usada para molculas grandes de 20.000 nucletidos, pero tiene un poder de resolucin menor que la poliacrilamida. Sin embargo no es un compuesto toxico. Patrn de peso molecular: Permite determinar el peso de los fragmentos de DNA en relacin a su migracin, comparndolos con patrones de peso molecular conocido.

Bibliografa 1. Hipotiroidismo congnito volumen 1, Martaluca Tamayo Fernandez, septiembre de 2008 pontifica universidad javeriana. 2. DNA, RNA, and Protein Extraction: The Past and The Present, Siun Chee Tan and Beow Chin Yiap, Journal of Biomedicine and Biotechnology, volume 2009. 3. Bioqumica de Voet, tercera edicion 2004, editorial panamericana. 4. Electroforesis de cidos nuclicos en geles de poliacrilamida, Protocolos de laboratorio UEG 2009, Duina Posso Duque.
5. Ecologa molecular, capitulo 17 gua prctica sobre la tcnica de PCR, Laura Espinosa

Asuar, Universidad Nacional Autnoma de Mexico. 6. http://emedicine.medscape.com/article/1181436-overview.