Apostila CI04

1 curso de inverno
tpicos em fisiologia comparada

12 a 30 jul 2004
departamento de fisiologia instituto de biocincias - usp http://www.ib.usp.br/cursodeinverno
1 curso de inverno tpicos em fisiologia comparada
idealizao alunos de ps-graduao do departamento de fisiologia ib/usp
elaborao adriano alonso pereira da cunha andr frazo helene james fernando malta da silva jessica ruivo maximino jos eduardo de carvalho marcelo alves da silva merari de ftima ramires ferrari rodrigo pavo
apoio pr-reitoria de cultura e extenso comisso de ps-graduao instituto de biocincias
agradecimentos gustavo eiji kaneto gisele ortoli
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ndice
NEUROTRANSMISSORES ...................................................................................................1 RECEPTORES E SINALIZAO CELULAR ........................................................................3 ROTEIRO DE AULA PRTICA ..........................................................................................5 EVOLUO DO SISTEMA NERVOSO .................................................................................6 MECANISMOS CENTRAIS DO CONTROLE CARDIOVASCULAR....................................12 ROTEIRO DE AULA PRTICA ........................................................................................15 HIPERTENSO E EXERCCIO FSICO: UMA BREVE INTRODUO...............................19 CONSIDERAES SOBRE A NEUROFISIOLOGIA DA MEMRIA ..................................22 ASPECTOS FISIOLGICOS DAS TOXINAS DE ANIMAIS AQUTICOS E TERRESTRES .............................................................................................................................................29 AS TOXINAS DE ANMONAS DO MAR COMO FERRAMENTAS PARA ENTENDER A FISIOLOGIA DE RGOS, TECIDOS E SISTEMAS..........................................................32 ROTEIRO DE AULA PRTICA ........................................................................................35 A DEPRESSO METABLICA NOS ANIMAIS ..................................................................37 TERMORREGULAO EM INSETOS................................................................................40 A RANA E O RATO: UM ESTUDO COMPARATIVO DAS CAPACIDADES METABLICAS EM TECIDOS MUSCULARES DE DUAS ESPCIES DE VERTEBRADOS .......................43 ECOFISIOLOGIA DE LAGARTOS ......................................................................................49 COMPORTAMENTO E FISIOLOGIA DE FORMIGAS ATTA ..............................................51 RELGIO BIOLGICO DE MAMFEROS: MECANISMOS MOLECULARES E CONTROLE DA RITMICIDADE INTERNA DO ORGANISMO. ................................................................54 SISTEMA DIGESTRIO......................................................................................................56 MECANISMOS DE OSMORREGULAO EM ANIMAIS. ..................................................59 EXERCCIO TERICO-PRTICO ....................................................................................63
NEUROTRANSMISSORES
Lotte Marianne Pires Renault Laboratrio de Neurocincias e Comportamento
Neurotransmissores (NTs) so mensageiros qumicos utilizados na comunicao entre clulas do sistema nervoso. Podem ser categorizados por sua origem / estrutura qumica (ex: monoaminas, peptdeos). Neurotransmissores podem ser excitatrios ou inibitrios, no que concerne s suas aes imediatas sobre a clula-alvo. Entre os mais comuns NTs excitatrios, esto glutamato e acetilcolina. Aes inibitrias so mediadas por GABA e peptdeos (como opiides). No entanto, o resultado final destas aes no necessariamente a ativao ou inibio da projeo. Como exemplo, podemos considerar que a ao de uma projeo liberando NTs excitatrios, como glutamato, sobre interneurnios inibitrios, resultar na ativao destes e em ao inibitria sobre as reas-alvo destes interneurnios. Por outro lado, a ao de uma projeo liberando opiides (portanto, inibitria) sobre interneurnios inibitrios GABArgicos resulta na inibio destes e conseqente liberao das reas-alvo dos interneurnios. O resultado final destas aes um mosaico de ativaes / inibies. Isto ocorre em diversos nveis. Deve-se considerar que uma clula recebe uma enorme quantidade de sinapses, e que o resultado final sobre sua atividade uma somatria determinada pelo balano de efeitos intracelulares e pela posio das projees recebidas (sabe-se, por exemplo, que sinapses mais distantes do corpo celular tm efeito mais pronunciado sobre o disparo final, o que denominado cable effect). Alm disso, ao nvel de um ncleo, a atividade final pode resultar em modulao do disparo basal (em reas que exibem disparo rtmico espontneo, os chamados marcapassos), ativao / inibio generalizada, ou inibio parcial paralelamente ativao seletiva de algumas reas dentro do ncleo. Ou seja, ativao e inibio convivem lado a lado no SNC. Porque a inibio de uma rea dentro de um ncleo, ou mesmo de regies como um todo, seria interessante? A comunicao neuronal resulta na percepo sensorial, codificao de informaes e planejamento de aes. Estes processos so maciamente dependentes da ativao e inibio de clulas ao longo de diferentes vias por diversos NTs. Sabe-se que informaes so mantidas no SNC pelo reforo das sinapses em projees neuronais, e que sua codificao dependente de como estes neurnios disparam ao longo do tempo. Estas projees formam uma gigantesca rede, o que permite a ocorrncia de associaes. Se necessrio ao indivduo, no entanto, comparar a situao em que se encontra presentemente com outras vivenciadas no passado que contenham elementos semelhantes, necessrio que apenas uma parcela desta rede seja ativada, enquanto que muitas outras seriam mantidas silentes pela ao de interneurnios inibitrios. De fato, estudos de neuroimagem em tempo real em fatias cerebrais demonstraram que o hipocampo, uma rea do SNC que pea crucial no processamento de memria, permanece sob inibio a maior parte do tempo, e apenas sinais
excitatrios recorrentes atravs de uma das suas maiores aferncias levam sua subseqente ativao. Porm, esta ativao no generalizada: algumas reas so mantidas sob inibio, enquanto outras encontram-se ativas. Ou seja, ocorre uma ativao seletiva. Ativaes seletivas em regies do cerebelo, gnglios da base e medula tambm esto relacionadas preciso de movimentos. Na percepo visual, o processo de inibio lateral permite a definio das bordas de uma imagem. Assim, a presena de atividade inibitria est na base da coordenao refinada da atividade nervosa. Por outro lado, a liberao de interneurnios inibitrios previne ativaes patolgicas, como atividade epilptica. Alm disso, devemos recordar que o custo energtico da atividade neuronal representa uma porcentagem alta do metabolismo basal de um indivduo, o que torna interessante queda neste gasto, mantendo uma parte deste sistema silente. A coordenao refinada definida por este mosaico de ativao / inibio foi definida ao longo de um lento processo de evoluo do sistema nervoso. Sabe-se que alguns NTs, como acetilcolina, GABA, serotonina e peptdeos (como substncia P) j se encontravam presentes em estgios iniciais da escala evolutiva. Alguns receptores, como o colinrgico do tipo nicotnico, com seus caractersticos sete domnios transmembrnicos, so altamente conservados ao longo da escala evolutiva. Em aneldeos e artrpodes, cujo sistema nervoso ganglionar, possvel observar neurnios ativados e inibidos por diferentes NTs. Em um estudo clssico, Kandel e col. mapearam um circuito neural em neurnios gigantes de lula, demonstrando a modulao sobre clulas marcapasso e controle inibitrio. Sabe-se que a modulao de gnglios marcapasso pela rede de interneurnios j ocorre em cnidrios. A necessidade por esta modulao refinada tornou-se ainda maior, conforme aumentou o tamanho do sistema nervoso, ao longo da escala evolutiva, com o processo de encefalizao, o agrupamento de clulas em ncleos, at o surgimento dos sistemas nervosos de vertebrados. Neste grupo, o agrupamento de gigantescas populaes de neurnios em ncleos, respondendo a mltiplos sistemas de neurotransmissores, aumentou consideravelmente a flexibilidade de aes, percepo sensorial e capacidade de arquivamento de informaes. Em uma comparao algo grosseira, poderse-ia dizer que, em sistemas mais complexos, a ativao macia sinalizaria um estado de alerta, enquanto ativaes mais seletivas e precisas levariam seleo dos sinais sensoriais.
RECEPTORES E SINALIZAO CELULAR

Merari de Ftima Ramires Ferrari Laboratrio de Neurotransmisso
Este tpico abordar algumas das possveis vias de transmisso da informao de uma clula para a subseqente, assim como a sinalizao celular com nfase no sistema nervoso central. Sem pretenso de esgotar o assunto, trataremos tambm das vias de sinalizao intracelular at a regulao da transcrio gnica, assim como interaes entre receptores e alguns sistemas de neurotransmisso. Alm de discutirmos alguns fatores que modulam a resposta final, particularmente no que diz respeito regulao neural da presso arterial. Para que o transmissor obtenha sucesso em transmitir a informao para as clulas subseqentes, necessria a interao deste com seu receptor especfico. Existem basicamente 4 tipos de receptores: os ionotrpicos, os metabotrpicos, os acoplados a enzimas (como a tirosina-quinase) e os intracelulares A forma de ao destes receptores varia enormemente: 123Os ionotrpicos so mais rpidos e geralmente atuam na despolarizao celular embora tambm possam agir modulando a transcrio gnica. Os receptores acoplados protena G (metabotrpicos) desencadeiam cascatas intracelulares envolvendo a adenilil ciclase ou a fosfolipase C. Os receptores associados a enzimas, seja com atividade enzimtica intrnseca ou acoplados tirosina quinase, tambm desencadeiam cascatas intracelulares fosforilar as MAP quinases e agir sobre fatores de transcrio. 4Os receptores intracelulares so ativados por substncias capazes de atravessar a membrana citoplasmtica como os estrgenos e o xido ntrico. Todos os receptores mencionados podem atuar tanto na resposta rpida, que a despolarizao celular, e/ou agir nas respostas a longo prazo, atravs de regulao da transcrio gnica, por meio dos fatores de transcrio. A localizao dos receptores muito importante para a eficincia da transmisso do estmulo. Existem os receptores na membrana ps e pr-sinptica, alm dos j mencionados intracelulares. Os receptores na membrana ps-sinptica podem transmitir a resposta ao ncleo das clulas, regular a atividade de receptores vizinhos e/ou regular a despolarizao neuronal. Na membrana prsinptica, os receptores podem controlar a liberao de neurotransmissores, e os receptores intracelulares medeiam a resposta a longo prazo. A presena de receptores muito importante para a interao da clula com o meio em que se encontra. Desta forma, todos os grupos celulares conhecidos possuem molculas receptoras de alguma natureza. Existem muito poucos estudos filogenticos com nfase nos diversos tipos de receptores. Sabe-se que receptores ionotrpicos esto presentes em clulas pertencentes aos trs grupos filogenticos (eucariontes, bactrias e arqueobactrias). Os estudos da evoluo de receptores podendo
metabotrpicos restringem-se a poucos trabalhos que demonstraram protenas com 7 domnios transmembrnicos e que se utilizam de fosforilao para transmitir o sinal, anlogas aos receptores acoplados protena G, identificadas em protozorios e em metazorios ancestrais. Bibliografia: Receptores Acoplados Protena G: Bennett, M.R. (2000) The concept of transmitter receptors:100 years on. (2000) Neuropharmacology 39:523-540. Milligan, G. & White, J.H. (2001) Protein-protein interations at G-protein-coupled receptors. Trends in pharmacological sciences 22(10): 513-518. Clapham, D. E. & Neer, E.J. (1997) G protein subunits. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 37:167-203. Receptores Ionotrpicos: Engelman H.S. & MacDermott, A.B. (2004) Presynaptic ionotropic receptors and control of transmitter release. Nat. Rev. Neurosci. 5(2):135-45. Evoluo de Receptores: Martinac,B. & Kloda, A. (2003) Evolutionary origins of mechanosensitive ion channels. Prog. Biophys. Mol. Biol. 82(1-3):11-24. Parmentier, M.L.; Galvez T.; Acher F.; Peyre B.; Pellicciari R.; Grau Y.; Bockaert J. & Pin, J.P. (2000). Conservation of the ligand recognition site of metabotropic glutamate receptors during evolution. Neuropharmacology 39(7):1119-31. New, D.C. & Wong, J.T. (1998) The evidence for G-protein-coupled receptors and heterotrimeric G proteins in protozoa and ancestral metazoa. Biol. Signals Recept. 7(2):98-108. Fatores de Transcrio: Papavassilov, A.G. (1995) Transcription factors. N. Engl. J. Med. 332(1):45-47. Wang, L.L.; Chan, S.H.H. & Chan, J.Y.H. (2001) Fos protein is required for the re-expression of angiotensin II type 1 receptor in the nucleus tractus solitraiui after baroreceptor activation in the rat. Neuroscience 103(1): 143-151. Revises sobre o controle cardiovascular pelo SNC: Lawrence, A.J. & Jarrott,B. (1996) Neurochemical modulation of cardiovascular control in the nucleus tractus solitarius. Progress in Neurobiology 48:21-53 van Giesbergen, P.L.M.; Palkovits, M. & de Jong, W. (1992) Involvement of neurotransmitters in the nucleus tractus solitarii in cardiovascular regulation. Physiological Reviews 72(3):791-824. Sites relacionados: http://www.cis.upenn.edu/~krice/receptor.html http://www.gene-regulation.com http://www.cerebronosso.bio.br
ROTEIRO DE AULA PRTICA AVALIAO DE NEUROTRANSMISSORES E SEUS RECEPTORES

Merari de Ftima Ramires Ferrari Laboratrio de Neurotransmisso 1. Analisar o padro de marcao dos seguintes neurotransmissores em tecido nervoso: Tirosina hidroxilase (enzima da cadeia de sntese das catecolaminas dopamina, noradrenalina e adrenalina). Neuropeptdeo Y Oxido Ntrico Sintase (enzima que converte l-arginina em citrulina e xido ntrico, um neurotransmissor no convencional). Glutamato GABA Colina acetil transferase (enzima de sntese da acetilcolina) Vasopressina Protena Fos (produto do gene de expresso primria c-fos)
2. Observar filmes radioautogrficos com a marcao de receptores no sistema nervoso central: Receptor alfa-2 adrenrgico Receptores Y Receptores nicotnicos
3. Observar a marcao do RNAm em filme radioautogrfico: Tirosina hidroxilase Neuropeptdeo Y e seus receptores Oxido ntrico sintase Colina acetil transferase Receptores nicotnicos Protena Fos
Questes para reflexo: 1. Quais as vantagens de estudar o RNA, o neurotransmissor e o receptor? 2. Havendo alteraes em um dos componentes do sistema, haver necessariamente alterao na resposta final?
EVOLUO DO SISTEMA NERVOSO

Adriano Alonso Pereira da Cunha Rodrigo Pavo Laboratrio de Neurocincias e Comportamento
INTRODUO Neste mdulo discutiremos a evoluo do sistema nervoso atravs de uma abordagem comportamental e neuroanatmica. Sero apresentados experimentos que avaliam as capacidades sensoriais, motoras e cognitivas de animais de diferentes nveis da escala filogentica. Ao mesmo tempo em que apresentaremos as estruturas neuroanatmicas que estariam diretamente relacionadas com essas funes. Uma vez descritos e comparados os sistemas nervosos desses diferentes grupos, sero apresentadas as teorias mais consistentes sobre seus padres evolutivos. Antes de iniciarmos a discusso relacionada ao sistema nervoso, faamos uma breve reviso dos conceitos evolutivos. A evoluo estaria ocorrendo de uma forma natural e no determinada, pois no sabemos qual ser a caracterstica que ir acrescentar valor adaptativo aos indivduos, ou seja, quais caractersticas sero filogeneticamente conservadas. Podemos comparar a evoluo a gotas sucessivas de gua que percorrem caminhos diferentes ao serem jogadas em uma rocha, no se pode prever qual caminho elas iro percorrer e nem onde iro cair devido a mudanas na umidade, vento, etc. Cada caminho diferente, nessa analogia, seria uma linhagem que pode ter originado os animais atuais, mostrando toda a diversidade de seres que existem hoje. Cada organismo tem feies neuroanatmicas distintas que, em ltima instncia, refletem sua relao com o meio. O estudo evolutivo do sistema nervoso feito essencialmente atravs de evidncias indiretas. Isso porque esse sistema no fossilizvel e o comportamento de seres extintos pode apenas ser inferido. As caractersticas do sistema nervoso desses seres, como complexidade dos circuitos, conexes sinpticas, organizao cortical e subcortical so inacessveis; o que observvel o volume da caixa craniana e as impresses nela gravadas. Assim, o estudo do sistema nervoso e do comportamento baseiam-se na premissa de que capacidades funcionais de sistemas filogeticamente mais antigos so refletidas em animais originrios dessas linhagens primitivas.
Imagem de crnio fossilizado de Captorhinus aguti: informaes sobre o sistema nervoso so restritas em registros dessa natureza. Vale a pena lembrar que essa concepo sobre animais primitivos e derivados, que parece estar intimamente relacionada com a capacidade de processar informao e de agir favoravelmente para beneficio individual, no pode ser diretamente interpretada como superioridade. Uma pequena
massa cerebral pode ser mais vantajosa do que uma grande, dependendo das circunstncias envolvidas. Um crebro grande e capaz de lidar com muita informao tem gasto energtico maior, ampla necessidade de O2. Limitaes a esses fatores podem beneficiar animais com crebros pequenos e mais econmicos. Dois princpios nortearam a configurao dos sistemas nervosos dos grandes grupos de animais: (1) a capacidade de integrar mais informao sensorial e motora e (2) o sistema ter dimenses reduzidas, com menor nmero de neurnios envolvidos. O resultado da atuao conjunta desses padres resultou em sistemas eficientes, capazes de processar informaes diversas e de gerar comportamentos complexos. Definidos os elementos bsicos da evoluo do sistema nervoso, apresentaremos agora uma discusso filogentica do tema, apresentando alguns grupos, suas estruturas enceflicas e comportamentos. Um ser vivo que capaz de coletar as informaes do meio em que vive, e, em seguida, demonstrar uma resposta interna ou externa. Esse ser vivo apresentaria portanto ao menos um sistema sensorial e um sistema efetor. Esse ser vivo poderia ser um homem, que ao sair de casa, entra em contato com vento, e ao sentir essas condies do meio, efetua respostas, sejam estas internas (apresenta um temor involuntrio e piloereo) ou externas (decide voltar para o interior de sua casa para buscar um agasalho). Mas no, quem descreveu esse ser vivo no estava se referindo a um ser humano, mas sim a um organismo unicelular, uma ameba. O estmulo era substncia p que est usualmente associada a bactrias, das quais as amebas se alimentam. A resposta foi citocinese, os pseudpodos da ameba direcionavam-se no sentido do gradiente de concentrao da substncia p, ou seja, em direo a bactria. Integrao funcional entre estmulo e resposta, funo exercida pelo sistema nervoso. Porm, o termo sistema nervoso no pode ser adotado para esse organismo. Esse termo s ser aplicvel em nveis superiores da escala filogentica. O primeiro organismo a apresentar um sistema nervoso verdadeiro pertenceu ao grupo dos cnidrios. considerado um sistema nervoso verdadeiro porque apresenta clulas especializadas para a conexo entre reas diferentes, os neurnios. O sistema desses animais permitiu uma comunicao efetiva entre as diferentes partes do animal. Apresenta alta densidade de clulas sensoriais, principalmente nos tentculos, e integra estmulos apresentados aos quimiorreceptores com respostas musculares, proporcionando a esse animal uma movimentao adequada no sentido de alcanar sucesso em suas atividades. Dentro dos invertebrados, um grupo bastante interessante o dos insetos himenpteros. Peguemos por exemplo, a formiga. So animais que apresentam alto grau de cefalizao, com conexes razoavelmente densas para receptores sensoriais (existem receptores complexos acoplados a olhos compostos altamente eficientes pelo menos nas castas aladas, rainha e macho). Alm disso, estes animais apresentam organizao social complexa, com a existncia de diversas castas com tarefas especficas. Toda essa complexidade foi possibilitada pelo desenvolvimento de uma estrutura nervosa ampla e eficiente.
O anfioxo pertence ao grupo do protocordados, grupo que considerado originrio dos cordados. O sistema nervoso desse animal bastante reduzido: o encfalo minsculo e est ligado rgos sensoriais rudimentares ou ausentes. Os estmulos processados por esse sistema so essencialmente tteis; no consegue reconhecer comida ou perigo distncia. Os cordados (grupo que inclui todos os vertebrados e grupos mais primitivos como urocordados e cfalocordados) apresentam a maior riqueza de estruturas neuroanatmicas e de comportamentos. Grupo originrio de ancestral invertebrado (no se sabe de qual grupo, diversas teorias consistentes afirmam a origem em diferentes grupos), teve obviamente alterao do seu sistema nervoso. Organizaes neuronais do grupo filogeneticamente mais antigo (invertebrado) foram reorganizadas e possivelmente suplementadas por estruturas adicionais. Os vertebrados apresentam um plano nervoso comum, com concentrao de reas sensoriais na cabea (=cefalizao, j presente no ancestral invertebrado) e organizao de tecido nervoso juntamente ao eixo cordal (estrutura que mais adiante na escala filogentica ser denominada medula espinhal). Os sistemas nervosos dos vertebrados foram alterados progressivamente na escala filogentica. Apesar de contarmos com um registro fssil incompleto para propor estudos evolutivos mais consistentes, provvel que tenham existido ancestrais em que os sentidos de olfato e viso surgiram consecutivamente, permitindo que o sistema percebesse estmulos distantes. So desconhecidos tambm os ancestrais em que apareceram os sentidos de gustao, equilbrio, dor e temperatura. Sabe-se que a audio apareceu mais recentemente. Os peixes atuais mais primitivos, os ciclostomados, tem um sistema nervoso com o padro bsico de componentes motores e sensoriais, tronco cerebral, corpo estriado e telencfalo. Conforme os organismos se tornaram mais complexos (complexidade aqui pode ser entendida como um maior nmero de palavras para se descrever o animal), cada nova capacidade sensorial teve que ser integrada centralmente com as outras sensaes. E o encfalo teve seu tamanho aumentado. Os peixes primitivos tornaram-se predadores mveis. Essa maior mobilidade deve ter exercido presso evolutiva para o aumento de algumas regies do encfalo. O sistema nervoso e o comportamento dos peixes eram simples, mas superior ao dos grupos primitivos devido a maior quantidade de informao e de movimento que estava sendo integrada. Acredita-se que as alteraes observveis no sistema nervoso de peixes caverncolas (que tiveram reduo das reas relacionadas com o processamento visual, como o tecto ptico, e aumento de reas relacionadas com o olfato, como o trato olfativo e as reas telenceflicas associadas) sejam semelhantes s alteraes que teriam ocorrido nesses peixes primitivos que se tornaram mveis: a alterao do padro de estmulos e respostas que tem que ser processado diferenciada, e o sistema acaba sendo moldado pelo processo evolutivo para atender esse processamento e aumentar a eficincia. como se houvesse uma conversa entre o processo evolutivo e os sistemas sensoriais e sistema nervoso.
Representao de encfalos de vertebrados: peixe (bacalhau), anuro (sapo), rptil (crocodilo), ave (ganso) e mamferos (gato e homem) Os anfbios foram o grupo vertebrado que conquistou ambientes terrestres. As barbatanas transformaram-se em membros. O encfalo ainda era pequeno, simples e cilndrico. Olfato continuou sendo importante e a viso era til para reconhecimento de padres. Tato, equilbrio e audio foram retidas. Os rpteis apareceram posteriormente e desenvolveram ampla gama de estruturas. Alguns desenvolveram uma armadura para proteo, como nas tartarugas; outros atingiram tamanhos enormes, como os dinossauros. Suas respostas comportamentais eram estereotipadas e limitadas, mas seus encfalos tubulares eram capazes de processar maior integrao sensrio-motora do que o de anfbios. Uma pequena quantidade de neocrtex foi adicionada ao paleocrtex. Alguns rpteis podiam agarrar objetos, usar os membros como armas e ficar de p e correr sobre as pernas traseiras. O julgamento dos rpteis em resposta s necessidades de comida e de defesa contra inimigos era superior a dos anfbios. Os arcossauros, dinossauros e seus descendentes, os crocodilos e
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aves, em muitos aspectos eram superiores aos rpteis modernos como lagartos e cobras, em relao ao tamanho do crebro e comportamento. Os rpteis dependem principalmente da viso e do olfato, pouco da audio, para informao distante. Muito dos dados da viso so processados na retina e no tronco cerebral, e relativamente menos no prosencfalo, dessa forma o crebro propriamente dito ainda pequeno em relao aos mamferos. Rpteis da linhagem que deu origem aos mamferos, os sinpsidas, de tamanho prximo ao de um camundongo, foi um dos primeiros grupos rpteis a aparecer. Eles esto extintos agora, e j tinham passado sua densidade e diversidade mxima antes de aparecerem os primeiros dinossauros. Mais tarde, os terpsidas surgiram. Eles existiram durante o tempo desde os primeiros rpteis at os mamferos, e tinham caractersticas anatmicas desses dois grupos. Em um mundo ocupado pelos rpteis andando durante o dia e descansando durante a noite, sinpsidas e terpsidas tornaram-se noturnos. Eles expandiram seus sentidos de olfato e audio distncia, pois eles andavam geralmente noite. Viso por cones provavelmente regrediu parcialmente, mas os bastonetes foram preservados, assumindo o mesmo padro de viso observado em mamferos modernos. A melhora da audio necessria para a sobrevivncia resultou em aumento da rea responsvel pelo processamento desse tipo de informao, e por uma encfalo maior com sinapses no tronco cerebral, tlamo e crebro propriamente dito. O olfato, porm, diferenciado em relao aos demais sentidos, pois no tem retransmisso com o tronco cerebral e tlamo. Os animais fazendo a transio entre rpteis e mamferos tiveram que integrar os sentidos de olfato, viso e audio, e mais uma vez houve presso para aumentos relativos e absolutos do crebro. As aves originaram-se de grupos reptilianos, podem ser considerados rpteis com penas ao invs de escamas crneas. Seus encfalos so relativamente maiores aos de rpteis do mesmo tamanho, mas esse aumento no de neocrtex (relativo aos mamferos). O neocrtex primordial das aves pode ser incorporado a ncleos telenceflicos subcorticais. A estratgia evolutiva observada nas aves diverge da estratgia dos mamferos. A maior parte das aves tem boa viso, mas olfato menos importante para criaturas voadoras do que para criaturas terrestres. Os centros visuais apresentam-se aumentados, assim como reas relacionadas coordenao do vo. Tecido neural adicional foi necessrio para o desenvolvimento de comportamentos definidos geneticamente de naturezas complexas. A habilidade dos pssaros para voar milhares de quilmetros para refgios de inverno e para voltar toda primavera um exemplo desse comportamento inato, assim como a construo de ninhos, comportamentos de corte e hbitos alimentares. Com o declnio do nmero de rpteis, mamferos placentrios de hbito insetvoro ganharam espao. Esses animais e os que deles derivaram tornaram-se diurnos. A necessidade de reintegrar o sistema visual de alto desempenho e o novo desenvolvimento dos cones resultaram em aumento de entrada de informaes, e um encfalo maior. Mamferos mantiveram o tamanho do crebro estvel durante longo perodo.
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Essas informaes geram uma impresso de evoluo progressiva, de que animais cada vez mais desenvolvidos foram originados conforme o passar do tempo. A evoluo, porm, seguiu caminhos diferenciados, no s progressivamente (pelo aumento da capacidade integrativa sensriomotora), mas tambm regressivamente (reduo dessa capacidade) e estavelmente, de acordo com as presses seletivas exercidas pelo meio. Existem animais que mantiveram sua estrutura bsica por longos perodos de tempo, mesmo que algumas delas tivessem encfalos pouco desenvolvidos, mas que eram capazes de manter-se em ambientes diferentes, resistentes e flexveis a alteraes efetivas do meio. Os mamferos possuem hoje grande diversidade e habitam os mais variados ambientes com uma ampla gama de comportamentos. O encfalo de mamferos aumentou enormemente, permitindo que o homem tenha se tornado o vertebrado dominante no planeta, mas o aumento do tamanho total no significa o mesmo tenha ocorrido com cada parte. A maioria dos mamferos no-humanos tem um sistema olfatrio aumentado medido pelo tamanho do bulbo olfatrio, cheirar relativamente mais importante para esses animais do que para os primatas mais prximos ao homem, nos quais essa rea regrediu. Em seres humanos temos uma regio neocortical muito desenvolvida, acompanhada por uma expanso do cerebelo e tronco.
Bibliografia: Sarnat, B H & Netsky M G (1981). Evolution of Neurvous System. Oxford University Press. Maturana H R & Varela F J (1988). The Tree of Knowledge: The biological roots of Human Understanding. New Science Library Shambhala. Bullock T H (1977). Introduction to Nervous Systems. W.H. Freeman and Company Anderson P A V (1989). Evolution of the First Nervous Systems. Plenum Press. Sites http://www.ib.usp.br/~gfxavier/geoclima.html (texto sobre evoluo utilizado no curso Fisiologia I do curso de Biologia) http://www.fortunecity.com/campus/biology/752/snc.htm (Anatomia Comparada do Sistema Nervoso Central Humano e de Ratus norvegicus)
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MECANISMOS CENTRAIS DO CONTROLE CARDIOVASCULAR

Jessica Ruivo Maximino Laboratrio de Neurotransmisso
1. INTRODUO
A perfuso tecidual garantida pela manuteno da fora motriz da circulao em nveis adequados e razoavelmente constantes ao longo de toda a vida dos indivduos, estejam eles em repouso ou desenvolvendo diferentes atividades comportamentais. Os nveis de presso arterial (PA), gerados pela atividade cardaca e vascular so controlados por diversos sistemas inter-relacionados que realizam funes especficas. Assim, conhece-se alguns mecanismos de ajuste da PA: Mecanismo de controle a curto-prazo da PA (Mecanismos neuro-humorais) Mecanismos de controle a longo-prazo da PA (Mecanismos de fluidos corporais)
2. CONTROLE DA PRESSO ARTERIAL PELO SISTEMA NERVOSO CENTRAL O Sistema Nervoso Central (SNC) tem um papel importante na regulao do sistema cardiovascular, por controlar tanto a atividade do sistema nervoso autonmico quanto a liberao de fatores hormonais circulantes. O SNC modifica agudamente a PA e os batimentos cardacos, facilitando a homeostase e as respostas apropriadas ao meio ambiente (WYSS et al tem um papel fundamental na regulao a curto-prazo da PA. iniciado em terminaes nervosas localizadas no seio carotdeo e no arco artico, as quais captam K ., 1990). W et al
1990) e algumas reas enceflicas parecem ter uma grande importncia na regulao cardiovascular. envolvido na recepo e integrao de mltiplos processos viscerosensoriais, incluindo o controle L &J , 1996). Ele o principal
no arco artico, dos quimiorreceptores dos corpos carotdeos e das aferncias provenientes do (M 1981). & R , 1971; IPSKI ., 1975 ;
IRIELLO ALARESU
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O NTS influencia o controle cardiovascular atravs de suas projees para ncleos medulares (OTAKE, 1993), rea postrema (SAPER et al.,1983), locus coeruleus (LC) e ncleos hipotalmicos, como o ncleo paraventricular do hipotlamo (PVN) (SAWCHENKO & SWANSON, 1982). Assim, alm do NTS outros centros bulbares esto envolvidos no controle cardiovascular, como neurnios da poro caudal (CVL) e da poro rostral (RVL) da medula ventrolateral (VLM), reas da formao reticular nesta regio do SNC. A CVL recebe projees diretas do NTS que, por sua vez, envia projees inibitrias RVL. A RVL envia projees para os neurnios pr-ganglionares simpticos na coluna intermdio lateral da medula espinhal exercendo dessa forma, efeito modulatrio sobre o tono do sistema nervoso simptico (revisado por DAMPNEY, 1994). Essas projees constituem o barorreflexo, assim, a circuitaria do barorreflexo ativada em decorrncia da variao da PA. O NTS rico em variedade e quantidade de neurotransmissores, sendo que a participao destes no controle neural da PA vem sendo muito discutida (VAN GIERSBERGEN et al., 1992; LAWRENCE & JARROT, 1996). Mais de trinta neurotransmissores bem como seus respectivos receptores so descritos no NTS, sendo que o papel funcional de cada um deles ainda no foi adequadamente demonstrado. Alm disso, possvel que interaes entre sistemas de neurotransmisso neste ncleo ampliem a capacidade de modulao das respostas que acontecem aps determinado estmulo pressrico. O LC, localizado na ponte tambm tem participao relevante nas respostas reflexas autonmicas e neuroendcrinas em decorrncia de alteraes da PA. O LC envia projees para diversas reas do encfalo e medula espinhal (FOOTE et al., 1983), recebendo aferncias principalmente da medula oblonga (ASTON-JONES et al., 1986). Outro ncleo importante no controle da PA o PVN, localizado bilateralmente ao terceiro ventrculo, o PVN recebe e envia projees diretas para o NTS podendo modular o processamento bulbar do controle cardiovascular (SAWCHENKO & SWANSON, 1982). A estimulao deste ncleo pode causar tanto efeito pressor quanto depressor. O efeito difere para cada rgo alvo. O fato de existir projees diretas do PVN para a coluna intermdio lateral e do NTS para o PVN, pode-se relacionar esse circuito com o barorreflexo (SAWCHENKO & SWANSON, 1982). No SNC diversos mediadores qumicos participam do controle/modulao da PA, tais como as catecolaminas, o neuropeptdeo Y (NPY), a angiotensina II (Ang II), o gaba, o glutamato, a vasopressina entre outros. Referncias Bibliogrficas: ASTON-JONES, G., ENNIS, M., PIERIBONE, V.A., NICKELL, W.T., SHIPLEY, M.T. The brain nucleus locus coeruleus: restricted afferent control of a broad efferent network. Science , 7;234 (4777):734-737, 1986. CIRIELLO, J. & CALARESU, F.R. Projections from buffer nerves to the nucleus of the solitary tract: an anatomical and electrophysiological study in the cat. J. Auton. Nerv. Syst., 3(2-4): 299-310, 1981. DAMPNEY, R.A.L. Functional organization of central pathways regulating the cardiovascular system. Physiol. Rev., 74(2): 323-364, 1994. FOOTE, S.L., BLOOM, F.E. & ASTON-JONES,G. Nucleus locus coeruleus: new evidence of anatomical and physiological specificity. Physiol. Rev.,63(3): 844-914, 1983.
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KUMADA, M., TERUI, N. & KUWAKI, T. Arterial baroreceptor reflex: its central and peripheral neural mechanisms. Prog. Neurobiol., 35(5):331-61, 1990. LAWRENCE, A.J. & JARROTT, B. Neurochemical modulation of cardiovascular control in the nucleus tractus solitarius. Prog. Neurobiol., 48(1): 21-53, 1996. LIPSKI, J., MCALLEN, R.M. & SPYER, K.M. The sinus nerve and baroreceptor input to the medulla of the cat. J. Physiol., 251(1): 61-78, 1975. MIURA, M. & REIS, D.J. The paramedian reticular nucleus: a site of inhibitory interaction between projections from fastigial nucleus and carotid sinus nerve acting on blood pressure. J. Physiol., 216(2): 441-460, 1971. OTAKE, K., NAKAMURA, Y. & EZURE, K. Projections from the commissural subnucleus of the solitary tract onto catecholamine cell groups of the ventrolateral medulla. Neurosci. Lett., 12;149(2):213-216, 1993. SAPER, C.B., REIS, D.J. & JOH, T. Medullary catecholamine inputs to the anteroventral third ventricular cardiovascular regulatory region in the rat. Neurosci. Lett.,11;42(3):285-291, 1983. SAWCHENKO, P.E. & SWANSON, L.W. Immunohistochemical identification of neurons in the paraventricular nucleus of the hypothalamus that project to the medulla or to the spinal cord in the rat. J. Comp. Neurol., 1;205(3):260-272, 1982. VAN GIERSBERGEN, P.L., PALKOVITS, M. & DE JONG, W. Involvement of neurotransmitters in the nucleus tractus solitarii in cardiovascular regulation. Physiol. Rev., 72(3):789-824, 1992. WYSS, J.M., OPARIL, S. & CHEN, YUI-CHEN The role of the central nervous system in hypertension. In: Hypertension: Pathophysiology, Diagnosis and Management, edited by J. H. Laragh and B.M. Brenner. New York: Raven, p.679-701, 1990. Site interessante: www.pubmed.com
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ROTEIRO DE AULA PRTICA NEUROANATOMIA

Jessica Ruivo Maximino Laboratrio de Neurotransmisso
OBJETIVO: Apresentar o Sistema Nervoso (SN) e suas possveis divises didticas. O SN um todo. Sua diviso em partes tem um significado exclusivamente didtico, pois vrias delas esto intimamente relacionadas do ponto de vista morfolgico e funcional. O SN pode ser divido levando-se em conta critrios anatmicos, funcionais e embriolgicos. DIVISO DO SISTEMA NERVOSO COM BASE EM CRITRIOS ANATMICOS
C Crebro Cerebelo Tronco Enceflico lico
Sistema Nervoso
Enc falo
Mesencfalo falo Ponte Bulbo
Sistema Nervoso Sistema Nervoso Perif rico
Medula espinhal Espinhais Nervos Cranianos Gnglios nglios Terminaes Nervosas es
Sistema Nervoso Somtico Sistema Nervoso Visceral
Aferente Eferente
Aferente Eferente
Simptico Parassimptico
DIVISO DO SISTEMA NERVOSO COM BASE EM CRITRIOS EMBRIOLGICOS Telencfalo Diencfalo
Prosencfalo Mesencfalo Rombencfalo
Crebro Mesencfalo
Metencfalo Mielencfalo
Rombencfalo
1) Crnio: sustentao e proteo para o Sistema Nervoso Central.
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2) Encfalo (crebro, cerebelo e tronco enceflico). a) Para o tecido sseo no entrar em contato com o tecido nervoso existem membranas fibrosas chamadas meninges, que so: dura-mter, pia-mter e aracnide.
b) Crebro (Telencfalo + Diencfalo): giros e sulcos (as artrias e veias ficam localizadas preferencialmente nos sulcos). Lobos (frontal, parietal, temporal e occipital) c) Cerebelo d) Tronco Enceflico: mesencfalo, ponte e bulbo e) Tlamos: Comunicao
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3) Pares de Nervos Cranianos I - bulbo olfatrio / trato olfatrio II - nervo ptico / trato ptico III - nervo culomotor IV - nervo troclear V - nervo trigmeo VI - nervo abducente VII - nervo facial VIII - nervo vestbulo coclear IX - nervo glossofarngeo X - nervo vago XI - nervo acessrio XII - nervo hipoglosso

4) Cauda eqina 5) Vrtebra: Msculo e medula 6) Observar a reconstituio do encfalo
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Referncias: Machado, A.B.M. Neuroanatomia Funcional. 2a edio. So Paulo. Ed. Atheneu, 2000.
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HIPERTENSO E EXERCCIO FSICO: UMA BREVE INTRODUO

Regiane Xavier de Moraes Laboratrio de Neurotransmisso
Neste tpico ser sucintamente abordado a interao do exerccio fsico com a hipertenso, alm de atualidades e tendncias em pesquisa na rea da fisiologia do exerccio e doenas cardiovasculares. O sedentarismo pode contribuir para o aparecimento e/ou agravamento de doenas cardiovasculares como a hipertenso. De acordo com 3 Consenso brasileiro de hipertenso (1998), 15 a 20% da populao brasileira est acometida. Atualmente 90 a 95% dos idosos so hipertensos. Durante os ltimos tempos, o exerccio fsico, bem como as suas implicaes e conseqncias, tem sido extensamente estudado por cientistas de todo o mundo. Usualmente, os exerccios, aerbicos e/ou de resistncia, mais recomendados e utilizados so a caminhada e corrida em esteiras rolantes, a natao em piscinas, a musculao com pesos e pedalar em bicicletas ergomtricas. Em animais normalmente so utilizados a roda de corrida espontnea, a esteira para corrida induzida e a natao. Estas pesquisas buscam compreender as aes do exerccio no organismo, quais os mecanismos centrais e perifricos que as norteiam e, principalmente, quais os benefcios que poucas horas de mudana na rotina diria podem causar tanto para uma pessoa ou animal saudvel como para os acometidos por patologias. A realizao do exerccio fsico provoca uma srie de respostas fisiolgicas nos diversos sistemas corporais, em particular no cardiovascular e nervoso. Objetivando manter a homeostasia celular, diante do aumento das necessidades metablicas, h incremento do dbito cardaco, redistribuio do fluxo e aumento da perfuso sangunea para a musculatura em atividade. Sabe-se que exerccios fsicos regulares, quando so adequadamente prescritos, e de baixa intensidade podem provocar alteraes autonmicas importantes que influenciam o sistema cardiovascular. Dentre estas, a atenuao da hipertenso arterial tanto em humanos quanto em ratos espontaneamente hipertensos (SHR). A atividade fsica contribui para a melhora do controle barorreflexo e reduo de 8 a 11 mmHg da presso arterial sistlica e diastlica, respectivamente, em indivduos hipertensos (Hagberg, et al.,2000). Estudos mostram que a diminuio da presso arterial deve-se diminuio do dbito cardaco que est associado diminuio da frequncia cardaca ps exerccio (bradicardia de repouso) (Vras-Silva, et. al.,1997). Entretanto, alguns autores propem que exerccios crnicos provocam queda na resistncia vascular sistmica e, consequentemente na reduo da presso arterial (Nelson, et al.,1986). O treinamento fsico normaliza o tnus simptico, que controla a frequncia cardaca em SHRs (Gava, et al.,1995) e diminui a atividade nervosa simptica em humanos, ou seja, estes resultados sugerem que a atividade fsica pode modular a atividade nervosa simptica para o corao e vasos perifricos, explicando, em partes, a queda pressrica.
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Modulaes especficas da frequncia cardaca durante o exerccio constituem um mecanismo muito preciso de manuteno do suprimento do fluxo sanguneo para o crebro, corao, pele e msculos em atividade. Os neurotransmissores vasopressina (AVP) e ocitocina (OT) so produzidos em neurnios magnocelulares do Ncleo Paraventricular do Hipotlamo (PVN) que envia e recebe projees do Ncleo do Trato Solitrio (NTS). O PVN e o NTS so importantes centros de controle cardiovascular (Michelini e Morris, 1999). A AVP facilita a resposta taquicrdica durante a atividade fsica. Contraditoriamente, a OT diminui a taquicardia e contribui para a bradicardia. Desta forma, estes neurotransmissores possuem efeitos especficos e opostos no controle da frequncia cardaca. Este balano entre o estmulo excitatrio (AVP) e inibitrio (OT) prov a eficincia do ajuste fisiolgico requerido momentaneamente, j que a taquicardia necessria para suprir a maior demanda de fluxo sanguneo e metablica da musculatura em atividade durante o exerccio. Assim, no NTS de indivduos treinados, a AVP e OT atuam como moduladores da frequncia cardaca durante a atividade fsica por potencializar ou moderar, respectivamente, a taquicardia (Michelini, 2001). importante enfatizar que as vias vasopressinrgicas e ocitocinrgicas do tronco enceflico no so os nicos mecanismos centrais envolvidos na gnese da taquicardia. Assim, projees descendentes vasopressinrgicas e ocitocinrgicas do PVN para o NTS so parte do mecanismo central de modulao do reflexo barorreceptor no controle da frequncia cardaca durante o exerccio e outras condies ambientais (Michelini, 2001). Podem ser observadas ainda outras alteraes cardiovasculares decorrentes do treinamento fsico tais como a hipertrofia cardaca. Exerccios aerbicos, por meio do aumento de volume sanguneo, podem estimular adaptaes na morfologia cardaca, metabolismo energtico e funes. Estes podem produzir hipertrofia cardaca ecntrica, na qual o aumento da massa ventricular proporcional ao aumento da cmara cardaca (Frohlic, et al.,1992). Trata-se de uma resposta fisiolgica e compensatria fundamental para suportar o aumento da carga de trabalho. Para que tal modificao acontea ocorre no msculo cardaco aumento da sntese proteica, aumento da espessura das miofibrilas, aumento de filamentos contrteis dentro da fibra muscular, etc. Estas alteraes estruturais, morfo-funcionais e metablicas do corao induzidas pelo exerccio resultam em maior volume de ejeo sistlica, que torna-se mais vigorosa, e maior esvaziamento ventricular. Entretanto, a hipertrofia cardaca pode se instalar em resposta a certos estados patolgicos crnicos como e hipertenso arterial. Na hipertrofia concntrica o aumento da massa ventricular no proporcional ao aumento da cmara cardaca. Desta forma o trabalho cardaco feito contra uma excessiva resistncia ao fluxo sanguneo. O corao hipertrofiado pode falhar e tornar-se incapaz, em casos mais graves, de prover o fluxo sanguneo normal para o indivduo hipertenso. Em suma, o exerccio fsico crnico de intensidade baixa a moderada possui implicaes clnicas importantes j que pode reduzir ou mesmo abolir a necessidade de uso de medicamentos anti-hipertensivos, diminuindo, desta forma, o custo do tratamento, extinguindo efeitos colaterais e
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principalmente promovendo melhora na qualidade de vida de indivduos hipertensos. Assim pode ser tido como uma importante conduta no farmacolgica no tratamento da hipertenso arterial. Referncias Bibliogrficas Citadas FROHLIC, E.D., et al. The Heart in Hypertension. N. England. J. Med. v.327, p. 998-1008, 1992. GAVA, N.S.; VRAS-SILVA, A.S.; NEGRO, C.E.;et al. Low-Intensit Exercise Training Attenuates Cardiac -adrenergic Tone During Exercise in Spontaneously Hypertensive Rats. Hypertension. v.26 (2), p.1129-1133, 1995. HAGBERG, J.M.; PARK, J.J.; BROWN, M.D. The Role of Exercise Training in the Treatment of Hypertension: an Update. Sports Med, v. 30, p. 193206,2000. MICHELINI, L.C. Oxytocin in the NTS - a New Modulator of Cardiovascular Control During Exercise. Annals New York Acad. Sci. v.940,p.206-220,2001. MICHELINI, L.C.; MORRIS, M. Endogenous Vasopressin Modulates the Cardiovascular Responses to Exercise. Annals New York Acad. Sci. v.897, p. 198-221,1999. NELSON, L.; JENNINGS, G.L.; ESLER, M.D.; et al. Effect of Changing Levels of Physical Activity on Blood-pressure and Haemodynamics in Essential Hypertension. Lancet, v. 2, p. 473476, 1986. VRAS-SILVA, A.S.; MATTOS, K.C.; GAVA, N.S.; et al. Low-intensity Exercise Training Decreases Cardiac Output and Hypertension in Spontaneously Hypertensive Rats. Am J Physiol: Heart Circ Physiol, v.273(6 Pt2), p. H2627-H2631, 1997. Referncias Bibliogrficas Sugeridas DUFLOTH, D.L.; MORRIS, M.; MICHELINI, L.C. Modulation of Exercise Tachycardia by Vasopressin in the Nucleus Tractus Solitarii. Am.J.Physiol. v.273,p.R1271-R1282, 1997. KRAMER, J.M.; BEATTY, J.A.; PLOWER,E.D.; WALDROP, T.G. Exercise and Hypertension: a model for Central Neural Plasticity. Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. v.29(1-2), p.122-6, Jan, 2002. KRAMER, J.M.; PLOWEY,E.D.; BEATTY,J.A.; LITTLE,H.R.; WALDROP,T.G. Hypothalamus, Hypertension and Exercise. Brain Res Bull. v.53(1), p.77-85,2000. McARDLE, W.D.; KATCH,F.I.; KATCH, V.L. Fisiologia do Exerccio: Energia, Desempenho e Funo. p190-225.Guanabara Koogan: RJ. NEGRO, C.E.; RONDON,M.U.P.B. Exerccio Fsico, Hipertenso e Controle Barorreflexo da Presso Arterial. Rev Bras Hipertens. v.8(1),p.89-95,jan-mar,2001. NEGRO, C.E.; RONDON,M.U.P.B; KUNIYOSHI,F.H.S.; LIMA, E.G. Aspectos do Treinamento Fsico na Preveno de Hipertenso Arterial. Rev Hipertenso. v.4 (3), 2001. SILVA, G.J.J.; BRUM,P.C.; NEGRO,C.E.; KRIEGER,E.M. Acute and Chronic Effects of Exercise on Baroreflexes in Spontaneously Hypertensive Rats. Hypertension. v.30(3),p. 1997. TURNER, D.L. Cardiovascular and Respiratory Control Mechanisms During Exercise: an Integrated View. J.Exp.Biol. v.160, p.309-340, 1991. Sites Relacionados www.cardiol.br www.sbh.org.br
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CONSIDERAES SOBRE A NEUROFISIOLOGIA DA MEMRIA

Andr Frazo Helene Laboratrio de Neurocincias e Comportamento
1. Proposta: aula terica com durao de uma a duas horas tratar de forma sucinta da expresso da memria no SNC bases de neuroanatomia funcional tcnicas de abordar experimentalmente o problema da relao crebro-funo sistemas de memria apenas aula com utilizao de projetor digital 2. Objetivo: 3. Conceitos:
4. Material didtico: Texto de apoio A atividade e o funcionamento do SNC esto diretamente ligados sua capacidade de gerar a partir basicamente da ativao individual de clulas neuronais processos que em ltima instncia permitem gerar atitudes to sofisticadas quanto dirigir um carro, lembrar o nome de uma cidade ou tomar uma deciso, considerando diferentes informaes e expectativas simultaneamente. A proposta presente aqui pretende abarcar estas questes, tentando aproximar propostas experimentais e a vida cotidiana, sempre com um enfoque de anlise formal da natureza antomofuncional das funes expressadas pelo SNC. Sistemas de memria O uso de um termo nico pode sugerir que memria um sistema unitrio, uma entidade independente qual um nico sistema responde. No entanto, quando falamos de memria temos de nos referir a muito mais do que apenas um sistema simples e unitrio. Sob o termo "memria" esto presentes todos os processos de reteno, gerenciamento e evocao de informaes, sejam estes por perodos de tempo que podem ser to curtos quanto fraes de segundo at perodos to longos como uma vida inteira. Informaes estas que abarcam a capacidade de arquivar informaes as mais variadas: sobre ns mesmos e sobre nosso ambiente. A noo de que memria pode ser dividida em diferentes componentes antiga e muito baseada na observao de casos clnicos neurolgicos, que sempre tiveram papel vital ao longo da histria dos estudos da memria. Um dos mais clssicos casos clnicos foi estudado e descrito por Brenda Milner e William Scoville e publicadas em 1957, sobre o paciente H.M.. Aps passar por uma cirurgia realizada por Scoville para extirpao de um foco epilptico grave, que envolveu a remoo bilateral de parte considervel de seu crtex temporal medial e hipocampo (Figura 1), o paciente H.M. apresentou um caso de perda de suas capacidades de formao de novas memrias (amnsia). Apesar desta no ser a nica origem possvel de casos de amnsia (pacientes com a doena de
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Korsakoff tambm apresentam um quadro de amnsia, apesar de terem leses em estruturas no corticais), as sndromes amnsicas se mostram de natureza extremamente seletiva. Pacientes amnsicos embora no consigam se lembrar da maioria dos eventos que experienciam tem muitas de suas funes de memria preservadas. Por exemplo, a capacidade de aprendizagem de novas habilidades, motoras ou perceptuo-cognitivas esto mantidas, mesmo que no acompanhadas da capacidade de reconhecer isto por parte do paciente, exatamente pela seletividade apontada. Da mesma forma, a capacidade de manter informaes por curtos perodos de tempo tambm est mantida, favorecendo o conceito de modularidade de funes presente no sistema (Figura 2).
Quantos tipos de memria existem? O estudo dos processos de memria vem se beneficiando do conceito de modularidade de funes, isto , da noo de que memria compreende um conjunto de habilidades mediadas por diferentes mdulos do sistema nervoso, que funcionam de forma independente, porm cooperativa. O processamento de informaes nesses mdulos dar-se-ia de forma paralela e distribuda, permitindo que um grande nmero de unidades de processamento influencie outras em qualquer momento no tempo, e que grande quantidade de informaes seja processada concomitantemente. Memria de longa durao Memria de longa durao se refere a qualquer reteno de natureza perene e duradoura. Esta pode ser dividida em duas diferentes modalidades, ou mdulos. A primeira, chamada de declarativa, se refere habilidade de armazenar e recordar ou reconhecer de maneira consciente e passvel de declarao fatos e eventos. Esta tipicamente descrita pela declarao verbal (de onde advm o nome declarativa) mas tambm pode se dar atravs de reconhecimento ou de uma imagem. No exemplo do caso H.M. exatamente esta modalidade de memria que foi perdida, fazendo com que o paciente no se "lembre". Assim esta modalidade de memria poderia ser descrita como um "saber que" (Figura 3). Diferentemente, a memria implcita (ou procedimental), se refere capacidade de aprender novas habilidades motoras ou perceptuo-cognitivas (Figura3). Estas, por seu carter no consciente de execuo e aquisio, so tarefas que demandam treino longo e repetitivo e que muito
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dificilmente podem ser adquiridas de outra forma que no pela execuo em si da tarefa em questo. Sua evocao se d, necessariamente, pela execuo da habilidade e poderia ser descrita como "saber como". exatamente esta habilidade que est preservada em pacientes amnsicos, tal como o caso do paciente H.M..
Memria Operacional (inicialmente descrito como "de curta durao") Memria operacional um conceito hipottico que refere-se ao arquivamento temporrio da informao para o desempenho de uma diversidade de tarefas cognitivas. Embora ela seja usualmente identificada com (e mesmo tratada como sinnimo de) memria de curta durao, esta ltima mostrou-se por demais simples para lidar com os tipos de reteno de informao por curtos perodos de tempo evidenciados experimentalmente. Assim, desenvolveu-se o conceito de memria operacional como um sistema de capacidade limitada e com mltiplos componentes, responsveis no s pela manuteno de informaes por curtos perodos mas tambm pela capacidade de selecionar estmulos relevantes no ambiente e entre as informaes de longa durao (Figura 4).
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A essncia da memria Sabe-se hoje que a aquisio de memria basicamente se d pela modulao das sinapses, nome dado ao processo pelo qual duas clulas nervosas se conectam (Figura 5). A partir da descrio das sinapses, conceito primeiramente proposto por Wilhem Waldeyer e posteriormente demonstrado por Ramn y Cajal, mudanas na organizao de conexes sinpticas tm sido exaustivamente associadas aos processos de aprendizagem e memria em uma diversidade de espcies de invertebrados e vertebrados, favorecendo a interpretao sobre a ubiqidade destes mecanismos nos processos de arquivamento de informaes. Sendo assim, podemos descrever memria pela facilitao - e pela eliminao seletiva - de ligaes entre clulas neuronais, que desta forma se agrupam funcionalmente em agregados (ns) e propiciam a conexo posterior destes entre si, tambm por modulao de conexes sinpticas, gerando a possibilidade destes ns representarem em si o arquivamento de uma informao.
Para termos uma idia do que representa na prtica esta caracterstica associativa do funcionamento do sistema nervoso na gerao de memrias, assim como para vislumbrarmos o poder de arquivamento de informaes deste sistema, vale ressaltar que estima-se que tenhamos cerca de cem bilhes de clulas neuronais (ou neurnios) no nosso sistema nervoso. Mais ainda, que cada uma destas clulas tem em mdia vinte mil conexes (sinapses) com outras clulas. Ou seja, sendo o sistema nervoso um sistema que traz em si a riqueza de poder arquivar informaes atravs de conexes entre cada uma de suas clulas componentes, o sistema nervoso humano tem em si uma ordem de grandeza inimaginvel resguardada em sua estrutura. Levando adiante o fato de sabermos que memrias se estruturam em redes de conexes sinpticas de neurnios podemos montar um mapa mais claro do que estamos falando. Haveria, no sistema nervoso, uma grande quantidade de unidades dedicadas de processamento inerentemente plstico, cada qual devotada a uma tarefa especfica mas simples. Quando ativadas, essas unidades excitam e inibem outras ao longo de uma rica rede de conexes. Algumas acabam por gerar ligaes associativas cuja fora pode ser alterada em funo de diferentes fatores. Seguindo o raciocnio,
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novas informaes geram novas ativaes, gerando novas conexes que sero somadas quelas j existentes, tornando-se assim um novo "ramo" de ativao a partir de um n anterior. Nessas redes, conjuntos de ns podem representar informaes da memria compartilhadas entre diferentes arquivamentos (Figura 6).
Topologia da Memria Para entender melhor a formao e a topografia de memrias til pensar que o crtex sensorial primrio e as reas motoras do crtex so repositrios de uma forma em muito inata de memria, chamada de memria filtica, ou "memria das espcies". No nascimento estas reas j contm em sua estrutura de conexes sinpticas as "experincias" essenciais selecionadas evolutivamente ao longo do tempo, sendo basicamente informaes de natureza simples sobre sensao e movimento. Sem dvida podemos chamar esta estrutura bsica de conexes sinpticas de memria, uma vez que so informaes que adquiridas, esto armazenadas e podem facilmente ser evocadas. Um bom exemplo disso pode ser visto no comportamento de mamar dos bebs, um comportamento extremamente complexo, que envolve a utilizao de grande nmero de msculos sincronizadamente e que certamente ser evocada pela estimulao correta. Poder caracterizar memria frente observao da forma como esta se estrutura topologicamente no sistema nervoso traz em si a possibilidade de ampliarmos a abrangncia do debate sobre memria. O sistema nervoso, em seu processo histrico de interao com o ambiente, reage no apenas a estmulos, mas tambm s contingncias espaciais e temporais entre os estmulos, e tambm destes com suas respostas - inicialmente seguindo regras bsicas j determinadas em suas estruturas sinpticas inatas e colhendo informaes de resposta de maneira muito abrangente e inespecfica. Com o acmulos destes registros sobre ocorrncias anteriores o sistema passa a ser treinado, identificando regularidades na ocorrncia desses eventos, formando memrias e, conseqentemente, passando a poder gerar previses (probabilsticas) sobre o ambiente. Desta forma, passa a agir antecipatoriamente frente ao ambiente. Uma das conseqncias deste processo o desenvolvimento de intencionalidade; ou seja, como resultados almejados podem ser previstos com base em registros sobre regularidades passadas, o sistema pode gerar aes que levem
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a resultados desejados, ao invs de simplesmente esperar que eles ocorram desta forma quase que aleatoriamente. Consideraes possveis A busca por regularidades no ambiente gera a possibilidade de previso que se identificadas adequadamente agiro diretamente no sucesso das decises que sero tomadas. Por outro lado, centrar esforos na busca de regularidades observando pistas no informativas no ambiente tero o resultado oposto: tomadas de deciso equivocadas. No entanto muitas vezes a deteco de regularidades se torna extremamente difcil, seja por uma inadequao do treino ao que fomos expostos, seja pela prpria natureza do estmulo em questo. Por exemplo, um indivduo neurtico, em ltima anlise no capaz de discriminar entre estmulos realmente perigosos e aqueles inofensivos. Exatamente por isso tem medo de gatos, cachorros, elevador, de outras pessoas, ou as mais variadas condies de estimulao incua. Da mesma forma, o neurtico pode se tornar incapaz de escolher entre ocupaes realmente importantes e desnecessrias, dedicando um tempo enorme a atividades como lavar as mos ou no pisar em faixas na rua. Este efeito, de produo de neuroses, possvel de ser replicado em animais de laboratrio. Ivan Pavlov, cientista russo nascido em 1849 e que teve importncia decisiva nos estudos da psicologia experimental, produziu animais neurticos. Aps condicionar cachorros a salivarem frente apresentao de um crculo mas no de uma elipse (associando temporalmente estes estmulo oferta e no oferta de alimento), Pavlov passou a aproximar a forma da elipse ao do crculo (Figura 7). O limite ao qual os animais conseguiam diferenciar adequadamente os dois estmulos era de elipses quase circulares de proporo entre o tamanho dos eixos que a compunham de 7 para 8. A partir deste ponto, elipses mais circulares (no caso com propores de 8 para 9, por exemplo) se tornaram indissociveis dos crculos, para os animais. Esta exigncia era demasiada para a capacidade de discriminao do animal. A saliva punha-se a correr inicialmente diante da elipse, depois diante do crculo e, finalmente, diante de qualquer um deles ou mesmo de ambos, sem distino. O co punhase a ganir e latir ferozmente para a tela, tentava saltar da mesa e cortar as amarras com os dentes. Da por diante o animal passou a ser intil para experimentao. Salivava ao ver a experimentadora, a sala de experincias ou ainda qualquer outro estmulo. Aparentemente a capacidade de discriminao do animal sofrera colapso quase completo, tornando-o, dessa forma, um animal neurtico.
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No entanto este um exemplo simplista do que passamos no dia a dia ao longo de nossas vidas. Apesar de ser importante identificarmos situaes simples e especficas possivelmente perigosas, tais como mentir na frente de crianas apesar de repreend-las severamente quando mentem (fazendo com que a criana no consiga detectar qual o estmulo importante na situao, j que mentir no parecer ser), as preocupaes validas so em geral de natureza muito mais abrangentes. Diferente de outros animais, temos crebros extremamente generalistas. Ou seja, estamos aptos a desenvolver diferentes habilidades frente s demandas de nosso ambiente. Na prtica talvez jamais sejamos to bons para lembrar onde guardamos as coisas como os animais especialmente adaptados a guardar alimento antes do inverno o so, de maneira a poder ach-los durante a poca de frio. No entanto seremos muito melhores em tarefas variadas nas quais estes animais no teriam sucesso algum, ao mesmo tempo em que teremos um desempenho satisfatrio em uma tarefa de recordao. Isto depende somente do treino ao qual seremos expostos para tanto, e aqui temos de entender treino como muito mais do que apenas uma vivncia curta para desempenho de uma tarefa, temos de considerar todos os estmulos aos quais passamos ao longo de nossa vida.
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ASPECTOS FISIOLGICOS DAS TOXINAS DE ANIMAIS AQUTICOS E TERRESTRES

Dr. Joacir Stolarz de Oliveira Laboratrio de Imunoqumica do Instituto Butant
O fascnio apresentado por animais aquticos e terrestres devido, em grande parte, pela imensa variedade de formas anatmicas e matizes de cores apresentados por seus corpos e tambm pela grande capacidade de adaptao aos diferentes ambientes em que vivem, seus diferentes hbitos de vida e suas relaes com os outros seres. Outra caracterstica bastante marcante e que aparece desde microorganismos at alguns vertebrados a capacidade de produzir e/ou acumular substncias txicas, as toxinas1, que so empregadas em diversas estratgias envolvidas na defesa contra predadores, no ataque a presas potenciais, alm da sua utilizao na comunicao qumica intra e interespecfica. Dentro deste contexto, atualmente conhecido uma enorme diversidade e complexidade de toxinas que compem os venenos2 e as peonhas3 de organismos, tanto aquticos (marinhos e de gua doce) como terrestres. Algumas peonhas foram desenvolvidas para a captura de presas como ocorre, por exemplo, nas glndulas de serpentes, escorpies e aranhas, nos nematocistos de guas vivas e anmonas do mar e nos arpes (ferres) de moluscos marinhos do gnero Conus. Outras, esto voltadas quase que exclusivamente para a defesa em ambientes altamente competitivos, como por exemplo quelas que so encontradas em peixes (peixe-pedra, peixe-escorpio, etc.) e em alguns anfbios. J os venenos so encontrados desde organismos unicelulares, como algas e dinoflagelados, e ao longo dos muitos filos que compreendem os metazorios como os chaetognatos, nemertneos, esponjas, moluscos, muitos peixes (peixe-porco, balistes, baiacus, etc.) e mesmo em aves, como s pertencentes ao gnero Pithoui (Pitus da Papua Nova Guin) e mamferos monotremados, o ornitorrinco (Ornithorhynchus anatinus). No que diz respeito natureza qumica das toxinas, tanto de peonhas quanto de venenos, esta pode ser a mais diversa possvel, variando desde compostos de baixos a elevados pesos moleculares, proticos ou no, polares ou apolares, termoestveis ou termolbeis, etc. Muitos compostos no proticos podem ser encontrados, como por exemplo os politeres produzidos por dinoflagelados marinhos e que acumulam-se em moluscos bivalves filtradores, e as molculas heterocclicas como as toxinas guanidnicas (tetrodotoxina e saxitoxina) encontradas em moluscos, Toxinas so substncias txicas com maiores ou menores aes especficas em sistemas biolgicos e que ocorrem em peonhas e venenos (Meier & Stocker, 1989). Venenos (do ingls, poison) so produtos metablicos produzidos ou armazenados em rgos de um determinado organismo e que afetam a um outro quando estes so ingeridos, podendo tambm atuar de modo artificial por via parenteral. (Freyvogel & Perret, 1973). Peonhas (do ingls, venom) substncias originadas em glndulas especializadas e que esto associadas a ductos excretores, possuindo ou no uma estrutura inoculadora (Freyvogel & Perret, 1973).
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crustceos, equinodermos e peixes. Estas substncias, algumas vezes podem chegar ao homem atravs da cadeia alimentar, podendo provocar srios casos de envenenamentos alimentares.Tambm so conhecidas aminas, presentes nas peonhas de aranhas, alcalides encontrados nas peles de anfbios, etc. De uma maneira em geral, compostos proticos apresentam-se mais freqentemente e em maior quantidade nas peonhas e venenos, e por sua vez, so as molculas mais investigadas do ponto de vista farmacolgico. Muitos peptdeos e protenas so encontrados em escorpies, aranhas, anmonas moluscos e anfbios. Devido imensa diversidade qumica encontrada nas toxinas muitas estratgias e tecnologias de purificao e elucidao estrutural tiveram que ser desenvolvidas, sendo que somente mais recentemente com a popularizao e um maior acesso a equipamentos de elevado custo (como os empregados em espectrometria de massas e na anlise protemica) e a busca por novas molculas visando ao emprego na biotecnologia que muitas toxinas puderam ser caracterizadas. Alm disto, no que diz respeito s toxinas proticas, o avano da biologia molecular veio possibilitar a clonagem, expresso e a conseqente obteno de tais substncias em grandes quantidades, permitindo a realizao de estudos estruturais e de estrutura-funo, empregando tcnicas de ressonncia nuclear magntica e de cristalografia. Do ponto de vista fisio-farmacolgico as aes das toxinas podem ser as mais variadas. Dentre elas destacam-se as aes neurotxicas, hemolticas, cardiotnicas, necrticas, antimicrobianas, enzimticas, etc. A cincia que trata das substncias txicas produzidas ou acumuladas em organismos vivos, suas propriedades e seu significado biolgico para o organismo envolvido a Toxinologia (Meier & Stocker, 1989)4. A Toxinologia emprega muitos dos conhecimentos desenvolvidos em diferentes subreas da Biologia como a Fisiologia, Farmacologia e a Ecologia para auxiliar na investigao das toxinas, visando elucidao dos mecanismos de ao destas substncias, suas aplicabilidades tanto na cincia como medicina ou na indstria e, em alguns casos, busca por terapias cada vez mais eficazes a serem empregadas em casos de envenenamentos. A presente aula tratar dos principais grupos de animais considerados venenosos e/ou peonhentos, sejam eles terrestres ou aquticos, destacando suas principais toxinas produzidas e/ou acumuladas, bem como alguns aspectos relativos aos mecanismos de ao e interaes fisioecolgicas envolvidas. Bibliografia: Freitas, J. C. Nomenclatura em Toxinologia. Relaes com a comunicao qumica entre organismos e propriedades biolgicas das toxinas. Mem. Inst. Butantan, 53(2): 191-195. Freyvogel, T. A. & Perret, B. A., 1973. Notes on Toxinology. Experientia, 29 (11): 1317-1452. Meier, J. & Stocker, K. 1989. Review article: On the significance of animal experiments in Toxinology. Toxicon, 27(1): 91-104. Sugestes de leitura:
Freitas (1991) simplifica: Toxinologia refere-se ao estudo das toxinas.
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Freitas, J. C.; Rangel, M.; Oliveira, J. S.; Zaharenko, A. J. & Rozas, E., (2003) An outline on marine toxinology studies in the Brazilian coast. Comments on Toxicology, 9: 1-22. Halsted, B. (1967). Poisonous and venomous animals of the world, vol. 2. US Governmental Printing Office, Washington. 844p. Kaul, P. N. (1990). Drugs Molecules of Marine Origin. Progress in Drug Research, 35: 521-557. Lozoya, A. V. (1994). Envenenamientos por animales - animales venenosos y urticantes del mundo. Ediciones Diaz de Santos S.A., Madrid. 342p. Oliveira, J. S. & Freitas, J. C. (2001). Produtos Naturais Marinhos: caractersticas dos envenenamentos alimentares e substncias de interesse farmacolgico. Higiene Alimentar, 15 (80/81): 22-33. Rash, L. D. & Hodgson, W. C. (2002). Pharmacology and biochemistry of spider venoms. Toxicon, 40: 225-254. Rochat, H. & Martin-Euclaire, M. F. (2000). Animal Toxins Facts and Protocols. Birkhuser Verlag, Berlin. 365p.
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AS TOXINAS DE ANMONAS DO MAR COMO FERRAMENTAS PARA ENTENDER A FISIOLOGIA DE RGOS, TECIDOS E SISTEMAS.
Andr Junqueira Zaharenko Laboratrio de Produtos Naturais Marinhos
As anmonas do mar so animais que pertencem ao filo Cnidaria e a classe Anthozoa. Todas as anmonas, assim como os celenterados em geral, possuem estruturas celulares microscpicas, similares a arpes, denominadas de nematocistos, responsveis pelo papel de paralisar presas e tambm atuam na defesa dos animais. Estas estruturas contm potentes neurotoxinas paralisantes que agem sobre crustceos e peixes pelo simples contato com esses animais. Essa estratgia de vital importncia para os mais distintos animais, desde esses cnidrios, passando por moluscos predadores, escorpies, aranhas e at serpentes. Todos esses tipos de animais produzem toxinas proticas e peptdicas em glndulas especializadas e as injetam, a partir de estruturas tambm especializadas na inoculao, como ferres, presas e, no caso dos cnidrios, nematocistos. Durante muitos anos os cientistas em geral se debruaram em tentativas de purificar e elucidar os mecanismos de ao das toxinas, ainda que por dcadas as limitaes tecnolgicas e operacionais dificultassem essa tarefa. Um dos aspectos mais importantes que devemos nos focar, quando vamos tentar investigar quais so os possveis mecanismos de ao e alvos das toxinas, exatamente qual o tipo de animal predado pelo nosso objeto de estudo. As anmonas, por exemplo, predam em geral peixes e crustceos planctnicos. Essas presas, por sua vez, so de rpida locomoo e poderiam facilmente escapar de um predador que tambm no fosse rpido na captura. Quando pensamos nos ambientes ocupados pelas anmonas, logo devemos nos ater ao fato de que esses animais so ssseis, ou seja, vivem fixos em um substrato rochoso e basicamente no se movem. Se as presas das anmonas so animais de rpida locomoo, as toxinas direcionadas a sua captura devem ter um efeito o mais efetivo e letal possvel. Seguindo nessa linha de raciocnio, os alvos mais conhecidos onde as toxinas anmonas atuam so: na conduo nervosa e na contrao muscular das presas. Toxinas que bloqueiam a neurotransmisso, levando a paralisia seguida de morte, so as molculas mais investigadas nesse grupo de animais at hoje. Remetendo aos conhecimentos bsicos de fisiologia e biologia celular, sabemos que um potencial de ao (PA) evocado basicamente pela mudana de voltagem do interior de uma clula nervosa atravs da entrada de ons sdio (despolarizao) e a sada de ons potssio na mesma. Este ltimo processo um pouco mais tardio e permite o restabelecimento da voltagem inicial no interior da clula (repolarizao), o chamado potencial de membrana. A seqncia desses eventos, controlados refinadamente pelos canais para Na+ e K+ dependentes de voltagem, leva a transmisso do impulso eltrico, com consequncias fisiolgicas importantes para a comunicao neuronal e a contrao muscular. Para uma reviso completa, a leitura do captulo 11 (pginas 523-547) do livro
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MOLECULAR BIOLOGY OF THE CELL (Alberts et al., 3a e 4a edies; 1994, 2002) bastante recomendada. Durante a passagem de um PA de um neurnio a outro, temos no neurnio pr-sinptico, durante a despolarizao, a abertura de canais para Ca2+ dependentes de voltagem prximos ao boto sinptico. Quando se abrem, esses canais permitem o influxo de Ca2+ que provoca, subsequentemente, a alterao da concentrao intracelular desse on e a ativao de maquinarias secretrias de neurotransmissores. Vesculas contendo neurotransmissores so liberadas na fenda sinptica e estes ligam-se aos respectivos receptores ps-sinpticos, propagando o PA ou desencadeando eventos secundrios importantes para a fisiologia celular. A contrao muscular desencadeia-se da mesma maneira, apenas diferindo na sequncia de eventos ps-sinpticos desencadeadas pela ligao da acetilcolina (no caso de mamferos, por exemplo) ou do glutamato (no caso de crustceos e invertebrados) nos respectivos receptores das fendas sinpticas. importante ressaltarmos que nesse caso no h um neurnio ps-sinptico e sim uma musculatura inervada por um neurnio pr-sinptico. Essa reviso de conceitos bsicos importante quando nos deparamos com os mecanismos de ao de neurotoxinas de anmonas e de outros animais peonhentos. A maioria dos peptdeos de anmonas descritos e estudados age em canais para Na+ ou para K+ dependentes de voltagem. Retardam o processo de inativao dos canais de Na+ e bloqueiam os canais de K+, produzindo um influxo enorme de ons Na+ e uma diminuio drstica da sada de ons K+ nas clulas. Isso faz com que o PA tenha sua amplitude e durao aumentadas dramaticamente. Para a fisiologia celular, a liberao de neurotransmissores passa a ser tremenda, levando a contraes musculares que no cessam, paralisando um animal que tenha sofrido injees diretas dessas toxinas em seus tecidos. Existem, atualmente, cerca de 10 subtipos de canais de Na+ dependentes de voltagem (os chamados, Nav) distribudos nos sistemas nervosos central e perifrico, tecido cardaco, medula espinhal e msculo esqueltico. So protenas transmembranares que diferem levemente em termos de seqncias primrias e parmetros cinticos. Como nosso grupo de pesquisa vem trabalhando h longos anos com neurotoxinas de anmonas do mar, recentemente publicamos um trabalho no qual a comparao dos efeitos de 3 toxinas praticamente idnticas difere pouco dependendo dos subtipos de Nav ensaiados (Oliveira et al., 2004). Ou seja, isso mostra que a atuao das molculas em seus stios de ligao sutilmente modulada por alguns aminocidos em suas estruturas. Dependendo do subtipo de Nav ensaiado, havia efeitos preferenciais ou no de cada uma das toxinas. Durante a aula expositiva os resultados sero apresentados e discutidos com os alunos. A leitura do trabalho de Oliveira et al., 2004- EM PUBLICAO, tambm requerida. Conforme os diferentes tipos de toxinas so purificados e caracterizados, cada vez mais essas molculas so empregadas como ferramentas farmacolgicas, para em laboratrio induzirem seus efeitos e ajudarem os cientistas a investigar diferentes aspectos da fisiologia.
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Muitas companhias farmacuticas revendem toxinas com esse propsito, a preos elevadssimos. Acessando o site www.alomone.com e clicando em Ion Channel Modulators e Neurotoxins, podemos ver a lista de diferentes toxinas com seus respectivos preos. Embora companhias farmacuticas forneam toxinas como substncias para pesquisa bsica, muitas delas vm investindo milhes de dlares no desenvolvimento de frmacos a partir dessas molculas. Como exemplo, existem peptdeos que bloqueiam especificamente canais de K+ dependentes de voltagem expressos em linfcitos-T. Esse tipo de bloqueio leva a uma supresso do sistema imune e, conseqentemente, esse tipo de toxina torna-se altamente atrativo como um remdio para tratar artrite reumatide e rejeio a rgos transplantados. Na reviso apresentada por Chandy et al., 2001, os alunos podem acompanhar os avanos recentes nesse sentido. Finalizando, queremos mostrar que a partir de prottipos naturais pode-se obter substncias altamente eficazes para o estudo da fisiologia e que sirvam tambm como modelos para o desenvolvimento de medicamentos. Bibliografia: Alberts, B. et al. 1994. Molecular Biology of the Cell. Garland Publishing. New York. 3rd edition. 1294p. Chandy, K.G.; Cahalan, M.; Pennington, M.; Norton, R.; Wulff, H. & GUTMAN, G.A. (2001). Potassium channels in T lymphocytes: toxins to therapeutic immunosupressants. Toxicon. 39: 1269-1276. Oliveira, J. S.; Redaelli, E.; Zaharenko, A. J.; Cassulini, R. R.; Konno, K.; Curia, G.; Pimenta, D.C.; Freitas, J. C.; Clare, J. J. & Wanke, E. (2004). Binding of sea anemone toxins to Nav 1.1-1.6 Sodium Channels: Unexpected Contributions from Differences in the IV/ S3-S4 Outer Loop. Journal of Biological Chemistry. ARTIGO ACEITO, EM PUBLICAO.
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ROTEIRO DE AULA PRTICA

Andr Junqueira Zaharenko Laboratrio de Produtos Naturais Marinhos
Durante a aula prtica, os alunos acompanharo procedimentos de fracionamento de peonhas totais pela tcnica cromatogrfica de gel-filtrao. Basicamente, a metodologia consistir conforme descrito abaixo: Purificao da peonha por gel-filtrao em gel de Sephadex G-50 e estimativa do contedo protico: O fracionamento da peonha liofilizada de anmona ser realizado atravs de uma coluna (1,9cm X 131cm) empacotada com gel Sephadex G-50 (Pharmacia LKB- Biotechnology, Uppsala, Sweden), para se obter as fraes neurotxicas e hemolticas j detectadas neste tipo de fracionamento. A peonha previamente centrifugada e liofilizada (cerca de 1-2g de material seco; 200mg de protena) ser dissolvida em 10-20mL de tampo acetato de amnio 0,1M, pH 7,0 e aplicada ao topo da coluna, equilibrada e eluda por gravidade com o mesmo tampo. Cerca de 60 fraes de 10mL cada uma foram coletadas, agrupadas e liofilizadas. A absorbncia de cada frao, uma medida relativa da quantidade de protena contida em cada uma, ser registrada diretamente na sada da coluna, atravs da passagem do efluente por um detector de UV (Spectra/ ChromTM Flow Thru UV Monitor com unidade ptica de 280nm e UV Monitor Controller, Spectrum, Austria) antes de entrar no coletor de fraes. A informao, captada pelo detector, integrada e registrada permanentemente em papel (Spectra/ Chrom TM 1 Channel Recorder, Spectrum, ustria). O registro direto na sada da coluna permite o acompanhamento constante do processo de filtrao em gel, desta maneira, otimizando o processo de coleta. Para estimar-se a quantidade de protena presente na peonha e nas fraes obtidas, durante esta etapa e nas subseqentes, ser empregado um kit que se baseia no mtodo de dosagem do cido bicinconnico (BCA) seguindo-se o protocolo do manual do fabricante (Pierce, Rockford, USA). Utiliza-se albumina srica bovina como padro. Purificao por cromatografia de fase reversa (RP-HPLC) da frao neurotxica (FR III): Esta etapa ser realizada no Laboratrio Especial de Espectrometria de Massa (LEEM) do Centro de Toxinologia Aplicada (CAT/CEPID- FAPESP) do Instituto Butantan. O conjunto da frao neurotxica (FR III) obtida de cromatografias por filtrao em gel vai ser ressuspendido em gua Milli-Q (Millipore Inc.) e injetado em um sistema de purificao Shimadzu de HPLC constitudo por um detector UV-VIS SPD-10A VP, bombas LC-10AD VP e um sistema controlador SCL-10A VP (Shimadzu Corp., Japan). As amostras so ento cromatografadas em uma coluna C-18 de fase reversa ODS (4.6 x 150 mm, 5m; Hi-Q) com um gradiente linear de 10 a 60% do solvente B composto de acetonitrila + 0,1% de cido trifluoroactico (CH3CN / 0,1%TFA) com fluxo de 1,0 mL/min durante 40min, atravs de monitoramento em UV 214 nm. O solvente A composto de 0,1% de TFA em gua Milli-Q.
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Todos os picos obtidos so coletados manualmente e individualmente ou agrupados em fraes para serem posteriormente submetidos espectrometria de massa e ensaios biolgicos. Monitoramento de atividade neurotxica das amostras em nervo sensorial de crustceo. Tcnica de sucrose-gap: A preparao ser realizada utilizando-se nervos sensoriais de crustceos decpodos braquiros da espcie Callinectes danae (siri azul), coletados no canal de So Sebastio. Testaremos o efeito de neurotoxinas isoladas de peonhas de anmonas sobre o potencial de ao axonal de nervo de siri. O procedimento consiste na separao do 2o ou 3o par de patas provocando-se autotomia por compresso do artculo proximal (base-squio). Como o nervo ocupa uma posio aproximadamente central no pereipodo, o mesmo exposto at o dctilo, removendo-se um a um os artculos por seco das membranas artrodiais, apdemas musculares e separao dos cndilos articulares. Tcnica de sucrose-gap - Essa tcnica consiste no isolamento eltrico de uma rea superficial do nervo, na regio entre os eletrodos de registro, atravs de lavagens sucessivas com uma soluo de sacarose 1M. So feitas 10 lavagens com sacarose a fim de remover ons da superfcie do nervo, deixando a rea eletricamente isolada, impedindo a passagem de corrente na superfcie do nervo. O potencial de membrana pode ser medido de uma cmara contendo KCl para outra com salina. Assim, eletrodos antes e aps a barreira de sacarose registram tanto a voltagem produzida pela corrente inica que passa atravs da membrana e no interior das fibras nervosas durante o potencial de ao, como o potencial de repouso. A cmara de acrlico que utilizada no experimento para estimulao e registro dos potenciais de ao contm 8 sulcos escavados, unidos centralmente por um sulco onde se encontra apoiado o nervo e, para isolar um sulco do outro adiciona-se vaselina. Os eletrodos de estimulao se encontram nos sulcos 1 (positivo) e 2 (negativo), enquanto que os de registro nos sulcos 5 e 8, separados por dois sulcos contendo sacarose 1M para isolamento. Os cinco primeiros sulcos so preenchidos com soluo fisiolgica de C. danae e o ltimo com soluo de KCl isosmtica (0,46M). Para amplificao dos sinais obtidos utilizamos um pramplificador modelo CP511AC (Grass Instruments Co., Warwick, USA). Os dados sero adquiridos atravs de um microcomputador tipo PC e processados atravs do programa WinWCP (Strathclyde Electrophysiology Software, University of Strathclyde, Glasgow, UK http://www.strath.ac.uk/Departments/PhysPharm/ses.htm).
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A DEPRESSO METABLICA NOS ANIMAIS

Laura Saade Haddad Laboratrio de Metabolismo Energtico e Adaptabilidade
Existem diversos fatores que limitam a existncia e sobrevivncia de um organismo na natureza, podendo ser biticos, como a falta de recursos alimentares, relaes intra-especficas, competio interespecficas, etc..., ou abiticos, os quais incluem fatores climticos como calor, luz, umidade, interaes entre temperatura e umidade, oxignio, e outros. Frente a modificaes nestes fatores, como quedas de temperatura, calor intenso, seca, escassez de oxignio e hipersalinidade, os animais podem reagir de trs formas: 1- Migrar para um ambiente mais favorvel 2- Enfrentar estas condies ativamente 3- Evit-las mantendo-se inativos at o retorno a condies mais amenas. Na maioria dos casos, estas mudanas nos fatores abiticos esto associadas escassez de recursos alimentares, assim muitos animais adotaram a estratgia de evitar tais obstculos sobrevivncia entrando em depresso metablica, na qual podem permanecer em jejum e inativos por perodos prolongados e com uma drstica reduo no consumo de energia, ou seja, na taxa metablica. A depresso metablica uma reduo da taxa metablica padro ou de repouso para nveis ainda inferiores podendo variar entre uma reduo de 60 a 99%, o que sobrevivncia de estende o tempo de um indivduo quando as condies ambientais so desfavorveis, sendo a
sobrevivncia de um organismo diretamente relacionada com o grau de depresso metablica alcanado. Este estado j foi relatado nos principais filos animais, de invertebrados a todas as classes de vertebrados e caracterizado por uma reduo geral da atividade: os movimentos cessam, a alimentao e digesto param, a freqncia cardaca e respiratria diminuem. Existem diversos tipos de depresso metablica, como a estivao, que est associada ao perodo de seca, a anaerobiose facultativa `a diminuio no teor de oxignio e a hibernao ao frio invernal. Na tabela 1 temos diversos exemplos de animais e alguns tipos de depresso metablica: Fenmeno Estivao Anaerobiose facultativa Hibernao Animal Lesma terrestre Sapo/r do deserto Peixe pulmonado Molusco marinho Tartaruga de gua doce Camundongo Morcego Esquilo terrcola % da taxa metablica de repouso 10-30 17-30 10-20 5-10 5-20 1.5-3 1-4 4-8
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Existem tambm animais que realizam uma depresso metablica diria (torpor dirio), mas este fenmeno est fortemente associado economia de energia durante o perodo de repouso, tendo em vista que estes animais tem um consumo energtico bastante elevado durante o perodo de atividade. o caso de algumas aves e mamferos pequenos, como beija-flores e respectivamente. Dentre os animais capazes de reduzir to drasticamente seu metabolismo, alguns podem faz-lo perante uma condio adversa repentina, inesperada, como a seca numa poca do ano em que isto no freqente (encistamento em Artemia). Outros exibem uma dormncia sazonal, ou seja, o fenmeno de depresso metablica se repete com periodicidade, ano aps ano, em determinada estao. Nestes casos, a depresso metablica intrnseca, ou seja, o animal se antecipa condio ambiental desfavorvel, ingere grandes quantidades de alimento, geralmente sob a forma de lpides, e prepara todo o maquinrio enzimtico para a entrada em hipometabolismo. Mesmo quando mantidos em laboratrio e com comida disponibilizada ad libitum estes indivduos recusam o alimento durante a dormncia, denunciando o carter intrnseco do fenmeno. morcegos,
Esquilo do rtico hibernando
Lesmas Otala lactea estivando
O sapo Scaphiopus couchii saindo da estivao Nesta aula sero abordados com maior profundidade os ajustes metablicos dos animais para a entrada e sada da depresso metablica sazonal, bem como a regulao deste fenmeno.

Referncias bibliogrficas de apoio:
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1-Para uma viso geral do fenmeno de depresso metablica: Guppy, M., Fuery, C.J. and Flanigan, J.E. (1994). Biochemical Principles of metabolic depression. Comp. Biochem. Physiol. 109B. 175-189. Guppy, M. and Withers, P. 1990. Metabolic depression in animals: physiological perspectives and biochemical generalizations. Biol. Rev. 74: 1-40. Schimidt-Nielsen, K. (1996). Fisiologia Animal:Adaptao e meio Ambiente. 6ed. Editora e Livraria Santos, So Paulo. P276-282. 2- A depresso metablica em diferentes animais: Hailey, A. and Loveridge, J. P. (1996). Metabolic depression during dormancy in the African tortoise Kinixys spekii. Can.J.Zool. 75:1328-1355. Storey, K.B. (2002). Life in the slow lane: molecular mechanisms of estivation. Comp. Biochem. Physiol. 133, 733-754. Souza,S.C.R., Carvalho, J.E., Abe, A.S. Bicudo, J.E. P.W. and Bianconcini, M. S. C. (2004). Seasonal metabolic depression, substrate utilization and changes in scaling patterns during the first year cycle of tegu lizards (Tupinambis merianae). J. Exp. Biol. 2004 207: 307-318. 3-Para uma reviso sobre a regulao da depresso metablica: Storey, K. B. and Storey, J.M. (2004). Metabolic rate depression in animals: transcriptional and translational controls. Boyer, B.B. and Barnes, B.M. Molecular aspects of mammalian hibernation. BioScience Vol. 49 No. 9 pp. 713-724 4-Para uma reviso geral sobre bioqumica: Nelson, D.L., Cox, M. (2000). Lehninger Principles of Biochemistry. 3rd edition; Worth Publishers: New York, N.Y.
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TERMORREGULAO EM INSETOS
Denise Loli Laboratrio de Metabolismo Energtico e Adaptabilidade
PARTE 1 INTRODUO -TERMORREGULAO NOS INSETOS EM GERAL A maioria dos insetos torna-se progressivamente lenta e incapaz de voar a baixas temperaturas. Porm, alguns insetos conseguem aquecer seus msculos de vo e ficar ativos mesmo em ar muito frio (Schimdt-Nielsen, 2002). Tais insetos apresentam assim endotermia e so capazes de realizar regulao da temperatura corprea em uma larga faixa de temperaturas ambiente. A maioria desses animais regula a temperatura torxica mas no a temperatura abdominal (Withers, 1992). O aquecimento dos msculos do vo, no trax, antes da decolagem, ocorre, principalmente, em grandes insetos, como gafanhotos, grandes mariposas, borboletas, mamangavas, vespas e abelhas, que apresentam vo com alta potncia mecnica (Schmidt-Nielsen, 2002). H muito tempo se conhece a endotermia em insetos. Em 1837, 6 anos aps o incio do uso de termopares na medio da temperatura corprea em insetos por Nobili & Meloni (1831 apud Heinrich, 1974), Newport (1837 apud Heinrich, 1974)) relatou que as mariposas e mamangavas podem elevar a sua temperatura torxica acima da temperatura ambiente por meio de atividade muscular. O aquecimento pr-vo foi descrito por Dotterweich (1928 apud Heinrich, 1974) e, em 1965, Heath & Adams (1965 apud Heinrich, 1974) mostraram que a mariposa Celerio lineata estabiliza sua temperatura torxica durante o vo em uma larga faixa de temperaturas do ambiente. Desde ento, vrios aspectos da termorregulao em insetos e outros animais foram estudados e revisados. Para ilustrar as diferentes estratgias fisiolgicas, anatmicas e comportamentais de termorregulao, usaremos como exemplo o caso das abelhas, que so insetos sociais que realizam termorregulao individual e colonial. PARTE 2 - CASO ESPECFICO: ABELHAS Em abelhas em repouso, suas temperaturas corpreas so prximas s temperaturas ambientais, porm, quando as abelhas saem para o forrageamento (vo para coleta de nctar, plen, resina, barro etc) ou quando incubam sua cria, so capazes de regular as temperaturas corpreas por meio de produo interna de calor. Dessa forma, a temperatura do corpo mantida constante e independente da temperatura ambiente. Assim, as abelhas so denominadas insetos endotrmicosheterotrmicos ou endotrmicos facultativos (Heinrich & Esch, 1994) A termorregulao possibilita: elas) o vo em baixas temperaturas (as abelhas realizam aquecimento pr-vo) defesa contra predadores (h casos de abelhas que torram predadores capturados por

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incubar a cria (possibilitando condies adequadas para o desenvolvimento das larvas e
pupas e criando um microhbitat adequado para a colnia como um todo [termorregulao colonial]) vantagem competitiva (insetos que conseguem procurar recursos em horrios diferentes de seus competidores) Vantagens do comportamento de termorregulao em abelhas: propiciou o desenvolvimento de uma vida social propiciou a conquista de diferentes ambientes, como os desertos, as florestas tropicais,
o rtico etc (Michener, 1974; Heinrich & Esch, 1994) PARTE 2.1. - TERMORREGULAO INDIVIDUAL Sero discutidos os mecanismos endgenos de produo de calor e os diversos fatores que influenciam na termorregulao. Mecanismos endgenos de produo de calor A forma mais comum de gerao de calor no msculo o tremor muscular, que envolve o funcionamento controlado de ATPases do sistema contrtil muscular (Hochachka & Somero, 1984). A termognese por tremor muscular comum em mamferos, aves e em alguns insetos, sendo aparentemente uma resposta generalizada dos endotermos ao frio. Uma segunda maneira de aumentar a liberao metablica de calor envolve os processos que resultam em termognese por no tremor. A termognese por no tremor relatada em mamferos placentrios, alguns marsupiais e poucas aves (Withers, 1992). Os processos envolvidos englobam aqueles de liberao de calor como aqueles gerados por ciclos fteis e aqueles originados do metabolismo do tecido adiposo marrom (TAM) de mamferos. Heinrich (1993) apresenta ampla reviso sobre as estratgias e mecanismos de termorregulao em insetos. Belzunces et al (1996) investigaram os efeitos de compostos adrenrgicos na termorregulao de abelhas melferas mantidas a 22C e com temperatura torxica monitorada por infravermelho. Segundo esses autores, um mecanismo do tipo beta-adrenrgico parece estar envolvido na termorregulao de abelhas melferas e particularmente na termognese. O sistema circulatrio ineficiente para as trocas gasosas, entretanto auxilia na reteno de calor no trax, por meio de mecanismo de contracorrente (Heinrich & Esch, 1994). Outros fatores influenciando a termorregulao Alm dos mecanismos endgenos, h tambm outros fatores que influenciam a pilosidade cor tamanho corpreo sexo hbito de vida termorregulao das abelhas, como: -
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PARTE 2.2. - TERMORREGULAO COLONIAL EM INSETOS SOCIAIS O desenvolvimento das larvas e das pupas (a cria) favorecido se a temperatura do favo da colnia for relativamente constante e independente da temperatura ambiente. Essas condies favorveis dentro da colmia podem ser devido a estruturas internas e externas do ninho, do local onde o ninho est alojado e da fisiologia das abelhas (termorregulao) (Michener, 1974; Engels et al, 1995). Considerando as abelhas, diversos grupos realizam termorregulao colonial, como as abelhas melferas do gnero Apis, as mamangavas (Bombus) e as abelhas nativas sem ferro (por exemplo os meliponneos). Este tpico ser discutido e apresentado na forma de diversos exemplos. PARTE 3 - TPICO DE DISCUSSO Evoluo da endotermia Bibliografia: Belzunces, L.P.; Vandame, R. & Gu, X. (1996) Modulation of honey bee thermoregulation by adrenergic compounds. Neuroreport 7(10):1601-4. Dotterweich, H. (1928) Zool Physiol Tiere 44: 399 apud Heinrich, B. (1974) Thermoregulation in endothermic insects. Science 185: 747-56. Engels, W.; Rosenkrakranz, P. & Engels, E. (1995) Thermoregulation in the nest of the neotropical stingless bee Scaptotrigona postica and the hypothesis on the evolution of temperature homeostasis in highly eosocial bees. Studies on Neotropical fauna and Environment 30(4):193204. Heath, J.E. & Adams , P.A (1965) Nature 205: 309 apud Heinrich, B. (1974) Thermoregulation in endothermic insects. Science 185: 747-56. Heinrich, B. (1974) Thermoregulation in endothermic insects. Science 185: 747-56. Heinrich, B. (1993) The Hot-Blooded Insects. Cambridge, MA. Harvard University Press. Heinrich, B. & Esch, H. (1994) Thermoregulation in bees. American Scientist 82:164-170. Hochachka, P.W. & Somero, G.N (1984) Biochemical Adaptation. Priceton University Press. Michener, C.D. (1974) The social behavior of the bees. Cambridge. Belnap Press of Harvard University Press, 404p. Newport, G (1837) Philos Trans R Soc Lond 127(2): 259 apud Heinrich, B (1974) Thermoregulation in endothermic insects. Science 185: 747-56. Nobili & Meloni (1831) Ann Phys Chim 48: 198 apud Heinrich, B (1974) Thermoregulation in endothermic insects. Science 185: 747-56. Schmidt-Nielsen, K. (2002) Fisiologia animal: adaptao e meio ambiente. Santos Livraria Editora, So Paulo. Withers, P.C. (1977) Measurement of VO2, VCO2 and evaporative water loss with a flow through mask. J Appl Physiol 42(1): 120-3. Withers, P.C. (1992) Comparative animal physiology. Saunders College Publishing, USA. Sites interessantes: http://zool33.uni-graz.at/schmickl/Selforganization/Thermoregulation/Bee_thermoregulation/bee_thermoregulation.html http://www.beekeeping.com/ http://www.hup.harvard.edu/reviews/HEITHE_R.html http://www.webbee.org.br/
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A Rana E O RATO: UM ESTUDO COMPARATIVO DAS CAPACIDADES METABLICAS EM TECIDOS MUSCULARES DE DUAS ESPCIES DE VERTEBRADOS
Jos Eduardo de Carvalho Laboratrio de Ecofisiologia e Fisiologia Evolutiva
1. INTRODUO Os estudos comparativos nos oferecem uma valiosa ferramenta para se entender de forma integrada como certas caractersticas fisiolgicas so modificadas em reposta s mudanas que surgem ao longo da escala evolutiva. Eles nos permitem ainda compreender como, por exemplo, as diferenas comportamentais esto correlacionadas com as caractersticas fisiolgicas que do suporte aos padres tpicos de atividade em diversos organismos. Se focarmos as modificaes que ocorrem em nvel celular podemos identificar diferentes alvos que esto sujeitos a modificaes na capacidade de ciclagem de energia que, em ltima, estaro relacionadas com a capacidade para a atividade. Dentre as principais alteraes podemos destacar os ajustes (1) na concentrao de estoques energticos intracelulares, (2) na proporo e tamanho das fibras musculares, (3) na capacidade tamponante dos msculos, (4) na quantidade de mitocndrias e (5) nos nveis e tipos de enzimas das vias glicoltica e aerbia. Dessa forma, analisar de modo comparativo os processos metablicos relacionados com a manuteno da homeostase energtica nos tecidos musculares contribui para o entendimento das relaes entre a fisiologia e o desempenho. Nesta aula realizaremos um estudo comparativo simples entre as atividades mximas das enzimas lactato desidrogenase (LDH) da via glicoltica, e da citrato sintase (CS) do Ciclo de Krebs , em amostras em um tecido muscular do rato e da r. Ao final, faremos uma discusso sobre os principais achados. 2. ABORDAGEM EXPERIMENTAL Material Biolgico Utilizaremos a poro vermelha do msculo gastrocnemius do rato e da r. Todas as solues sero fornecidas j preparadas; entretanto, suas composies so apresentadas no final do texto. Preparao das Amostras Pese cerca de 100mg de cada msculo e retalhe o tecido com uma tesoura, tomando-se o cuidado de mant-los sobre gelo. Adicione os fragmentos no tubo de homogeneizao e acrescente 9 volumes de tampo de homogeneizao gelado (multiplique a massa de tecido pesado em gramas por 9 para ter o volume de tampo a ser pipetado em mL). Homogeneize a mistura no Ultra Turrax (Ika Labortecnik) a 20.000 rpm, mantendo-se o tubo sob gelo. A seguir, introduza o sonotrodo do sonicador U-200S control (Ika Labortecnik) na soluo homogeneizada e ligue o aparelho 3 vezes por 10 segundos, com intervalos de 10 segundos entre cada vez, na amplitude de 50% e ciclo de 0,5. Este procedimento dever romper todas as membranas celulares e mitocndriais, liberando para a soluo as enzimas compartimentalizadas. Prepare dois frascos para uma diluio adicional de cada amostra de tecido. Dilua a amostra em 1:10 vezes (este extrato ser utilizado na medida da atividade
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da LDH) e 1:5 vezes (este extrato ser utilizado na medida da atividade da CS) utilizando o tampo de homogeneizao. Medida da Atividade Mxima da LACTATO DESIDROGENASE ( LDH ) A enzima LDH a responsvel pela seguinte reao:
O C C CH3
PIRUVATO
O O O + NADH + H +
LDH
C OH C CH3
O H
+ NAD +
LACTATO
A atividade da LDH ser medida por espectrofotometria, a 25oC, atravs do monitoramento contnuo das alteraes de absorbncia, a 340nm, dada pela oxidao do NADH quando o piruvato consumido. Para isso, misture as solues identificadas no protocolo abaixo:
soluo
volume a pipetar na cubeta ( L )
Imidazol HCl - 50mM (pH 7,0) 880 DTT 100mM 50 NADH 15mM 10 Amostra diluda 1:10 10 o Misturar, esperar atingir 25 C e ler a absorbncia por 3 minutos a 340nm CONTROLE Piruvato 40mM 50 2 Misturar e ler a absorbncia por 3 minutos a 340nm EXPERIMENTAL
[ final no ensaio ] ( mM ) 50 5 0,15
Anote os valores de variao de absorbncia por minuto da reao aps a adio de piruvato, descontadas as variaes observadas na reao controle.
Medida da Atividade Mxima da CITRATO SINTASE (CS) A enzima CS a responsvel pela seguinte reao:
O O C C CH2 C O
OXALACETATO
C O O + ACETIL-CoA + H2O O
CS
CH2 OH C CH2 C O
CITRATO
O + CoA-SH O
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A quantidade de oxalacetato usado por unidade de tempo uma medida da atividade cataltica da CS. O uso de oxalacetato ser medido em espectrofotmetro, a 25oC, pelo aumento da absorbncia a 412nm, devido produo de coenzima-A ligada ao DTNB. Para isso, misture as solues identificadas no protocolo abaixo:
soluo
volume a pipetar na cubeta ( L )
Tris HCl - 50mM (pH 8,0) 885 Acetil-CoA 3mM 100 DTNB 1mM 100 Amostra diluda 1:5 20 o Misturar, esperar atingir 25 C e ler a absorbncia por 3 minutos a 412nm CONTROLE Oxalacetato 20mM 25 0,5 Misturar e ler a absorbncia por 3 minutos a 412nm EXPERIMENTAL
oxalacetato, descontadas as variaes observadas na reao controle. Clculos
[ final no ensaio ] ( mM ) 50 0,3 0,1
Anote os valores de variao de absorbncia por minuto da reao aps a adio de
A atividade enzimtica usualmente expressa em unidades de atividade enzimtica (U) por grama de tecido fresco. A unidade U representa a quantidade, em micromoles, de substrato convertido em produto por minuto na soluo (U = mol.min-1). Para o clculo da atividade enzimtica nas condies do ensaio devemos utilizar a seguinte equao:
U.g
tecido fresco
-1
( Abs.min-1 ) x V ----------------------- = mol . min-1 . g x d x v x amostra
tecido fresco
-1
onde: Abs = alterao de absorbncia por minuto d = distncia percorrida pela luz na soluo ( mm ) V = volume do ensaio ( L ) v = volume da amostra no ensaio ( L ) = coeficiente de absoro molar ( L.mol-1.mm-1 ) amostra = concentrao de massa da amostra ( g.L-1 ) As unidades so expressas no sistema SI (Sistema Internacional de Unidades). O coeficiente para o NADH igual a 6,22.102 L.mol-1.mm-1 e a distncia d = 10mm.
Para propsitos prticos, usamos a concentrao da substncia em mmol.L-1 ( = mol.mL-1). Ento, para o NADH, x d = 6,22 L.mmol-1 ( = mol.mL-1). Para o DTNB, a 412nm, essa mesma relao equivalente a 13,6. A razo V / v nos informa, em outras palavras, qual a diluio da amostra no ensaio. J a concentrao de massa da amostra( amostra ) representa a diluio feita na homogeneizao. Como os tecidos de um modo geral apresentam cerca de 80% de gua, normalmente aceito que 1g de tecido equivale a 1mL. Assim, podemos simplificar a equao acima para facilitar o clculo de atividade enzimtica:

( Abs.min-1 ) ------------------x diluio no ensaio x diluio na homogeneizao 6,22 ( se usado o NADH) (ou 13,6 se usado o DTNB)
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U.g
tecido fresco
-1
...lembrando ainda que foi feita uma diluio extra da amostra (1:10 para a medida da atividade da LDH e 1:5 para a medida da atividade da CS), e esta deve ser levada em conta neste momento multiplicado-se o valor desta no resultado final. Assim, utilize a equao acima para calcular a atividade das enzimas LDH e CS nos tecidos musculares do rato e da r. Anote os resultados obtidos e guarde-os com carinho. 3. AGORA PENSE NISSO... 1. Que tipo de informao possvel obtermos com a anlise da atividade mxima das enzimas LDH e CS e por que estas enzimas foram estrategicamente escolhidas para este estudo ? 2. Baseado neste estudo, quais seriam suas explicaes para as diferenas encontradas entre o rato e r ? 3. O que devemos levar em considerao quando comparamos o rato e a r durante o desempenho desses animais na atividade locomotora ? 4. Ao final dessa aula, quais as principais concluses que voc pode extrair desse tipo de estudo comparativo ? possvel pensar em adaptao neste nvel de abordagem ?
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4. INFORMAES ADICIONAIS Esquema das Principais Vias Metablicas Energticas no Msculo de Vertebrados
TRIACILGLICE
GLICE
CIDO
ACIL-
CO NADH+
NAD
COENZIM
piruvato desidroge
Composio do Tampo de Homogeneizao Imidazol 20mM; PMSF 1mM; EDTA 2mM; NaF 20mM e Triton X-100 0,1% (pH 7.4) Abreviaes da solues DTT: Ditiotreito DTNB: cido Dithionitrobenzico NADH: Nicotinamida Adenina dinucleotdeo, forma reduzida PMSF: Fenilmetilsulfonil fosfato

5. SUGESTES DE LEITURA Metodologia Bergmeyer, H.U. (1983) Methods of Enzymatic Analysis, vol 2. Enzymes. Verlag Chemic, Wheinheim. Passonneau, J.V and Lowry (1993). Enzymatic Analysis: a practical guide. Humana Press, Totowa, N.J.
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Teoria Bevier, C.R. (1995) Biochemical correlates of calling activity in neotropical frogs. Physiol. Zool. 66: 1118-1142. Gleeson, T.T. (1991) Patterns of metabolic recovery from exercise in amphibians and reptiles. J. Exp. Biol. 160: 187-207. Glesson, T.T. (1996) Post-exercise lactate metabolism: a comparative review of sites, pathways and regulation. Annu. Rev. Physiol. 58: 565-581. Hochachka, P.W. (1994) Muscles as Molecular and Metabolic Machines. CRC Press, Inc. Hochachka, P.W. & Somero, G.N. (2002) Biochemical Adaptation. Mechanism and Process in Physiological Evolution. Oxford Univ. Press, New York. McNab, B.K. (2002) The Physiological Ecology of Vertebrates. A View from Energetics. Cornell Univ. Press, New York. Kemper, W.F.; Lindstedt, S.L.; Hartzler, L.K.; Hicks, J.W. & Conley, K.E. (2001) Shaking up glycolysis: sustained, high lactate flux during aerobic rattling. Proc. Natl. Acad. Sci. 98: 723-728. Pough, F.H.; Magnusson, W.E., Ryan, M.J. Wells, K.D. and Taigen, T.L. (1992) Behavioral energetics. In: Ferder, M.E. and Burggren, W.M. (eds.) Enviromental Physiology of the Amphibians. The Univ. Chicago Press. Chicago. pg: 395-436. Suarez, R. K. (1996) Upper-limits to mass-specific metabolic rates. Annu. Rev. Physiol. 58: 583-605 Suarez, R.K. (1998) Oxygen and the upper limits to animal design and performance. J. Exp. Biol. 201: 1065-1072. Wells, K.D. (2001) The Energetics of Calling in Frogs. In: Ryan, M.J. (ed.). Anuran Communication. Smithsonian Inst. Press. Washington.
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ECOFISIOLOGIA DE LAGARTOS
Renata Brandt Nunes Laboratrio de Ecofisiologia e Fisiologia Evolutiva
A ecofisiologia pode ser interpretada como o estudo de como os organismos funcionam e respondem a mudanas em seus ambientes naturais. Neste contexto, a aula tratar principalmente das implicaes fisiolgicas das mudanas de temperatura nos Squamata, com nfase nos lagartos, pois bastante profunda a influncia deste fator na vida destes animais. Ser importante recordar a terminologia relacionada regulao da temperatura, como os conceitos de endotermo e ectotermo assim como pecilotermo e homeotermo; e ainda heliotermos, tigmotermos; a diferena entre ser termorregulador e termoconformador; o que a temperatura preferencial e conceitos relacionados aos limites de temperatura de atividade. A aula em si ser baseada na discusso sobre os mecanismos morfolgicos e fisiolgicos da termorregulao e a relao com aspectos da histria natural dos lagartos no contexto metablico e dependente de temperatura, como distribuio e seleo de microhabitat; atividade diria e sazonal; comportamento; alimentao, digesto e dieta; reproduo; infeco e balano hdrico. Sugestes de Leitura Bennet, A.F. (1980). The thermal dependence of lizard behaviour. Animal Behaviour, 28: 752-762. Deeming, D.C. & Fergusson, M.W.J. (1991). Physiological effects of incubation temperature on embryonic development in reptiles and birds. In Egg incubation: its effects on embryonic development in birds and reptiles, eds D. C. Deeming & M. W. J. Fergusson, 147-171. Cambridge: Cambridge University Press. Espinoza, R.E. & Tracy, C.R. (1997). Thermal biology, metabolism and hibernation. In: The biology, husbandry and health care of reptiles. Ackerman LJ ed. Volume 1, Biology of Reptiles. T.F.H. Publication, Neptune City, NJ. Huey, R.B. (1982). Temperature, Physiology, and the Ecology of Reptiles. In: Biology of the Reptilia vol 12. Gans C. et al. eds, Academic Press. McNab, B.K. (2002). The Physiological Ecology of Vertebrates: a view from energetics. Cornell University Press. Packard, G.C. (1991). The physiological and ecological importance of water to embryos of oviparous reptiles. In Egg incubation: its effects on embryonic development in birds and reptiles, eds D. C. Deeming & M. W. J. Fergusson, 213-228. Cambridge: Cambridge University Press Pough, F.H. (1980). The advantages of ectothermy for tetrapods. American Naturalist 115:92112. Pough, F.H. & Gans, C. (1982). The vocabulary of reptilian termorregulation. In Biology of the Reptilia vol 12. Gans C. et al. eds, Academic Press. Pough, H.F.; Andrews, R.M.; Cadle, J.E.; Crump, M.L.; Savitzky, A.H. & Wells, K.D. (1998). Herpetology. New Jersey: Prentice Hall, Inc. Links Interessantes Pginas de pesquisadores, com informaes sobre as linhas de pesquisa e links para outras pginas de herpetologia. http://rydberg.biology.colostate.edu/faculty/profile.php?name=Packard http://lamar.colostate.edu/~packard/ Gary Packard
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http://faculty.washington.edu/hueyrb/index.html - Laboratory of Evolutionary Physiology, dirigido por Raymond B. Huey. Dispe ainda de conselhos para estudantes de ps-graduao ou interessados em fazer ps-graduao http://uts.cc.utexas.edu/~varanus/ - Piankas Lab Page. Pgina do Laboratrio do Eric Pianka. http://www.omnh.ou.edu/personnel/herpetology/vitt/ - Laurie J. Vitt http://compphys.bio.uci.edu/bennett/bennett.htm Albert F. Bennet http://oeb.indstate.edu/faculty/Angilletta.htm Michael J. Angilletta Jr. Cursos de Ecofisiologia na Internet http://wildlife.wisc.edu/courses/401/ - University of Wisconsin Madison http://www.eeb.uconn.edu/courses/eeb296/ - University of Connecticut http://bioweb.wku.edu/faculty/Crawford/526.html Western Kentucky University Informaes gerais sobre lagartos http://tolweb.org/tree?group=Diapsida&contgroup=Amniota Tree of Life, com cladogramas e discusses sobre filogenia de todos os grupos de seres vivos. Este link direciona para o grupo dos diapsida. http://www.ucmp.berkeley.edu/diapsids/diapsids.html UCPM Berkeley, cladogramas e todo tipo de informao biolgica (incluindo fsseis) sobre a diversidade da vida, este link direciona para o grupo dos diapsida
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COMPORTAMENTO E FISIOLOGIA DE FORMIGAS Atta

Pedro Ribeiro Laboratrio de Ecofisiologia e Fisiologia Evolutiva
As sociedades dos insetos so conhecidas por se constiturem de indivduos especializados em diferentes tarefas. Em certas espcies de formigas, esta especializao est relacionada com o aparecimento de diferenas surpreendentes no tamanho entre indivduos de uma mesma colnia, geralmente associadas a tarefas diferentes (Bonabeu, 1997). Temos, por exemplo, em colnias do gnero Atta formigas cuja largura da cpsula ceflica pode variar de 0,8mm at 3,0mm. Simplificando, podemos subdividir estes diferentes tamanhos em quatro grupos, de acordo com suas funes. Assim, temos as jardineiras e babs que so as menores operrias da colnia e tm a funo de cuidar das hifas e das formas imaturas. J as generalistas, de cpsula ceflica com aproximadamente 1,4mm so responsveis por vrios tipos de atividades dentro do ninho, como a preparao de vegetais, que deve ser feita antes da incorporao dos mesmos esponja, descarte de lixo e reconstruo das esponjas de fungo. Temos ainda a no menos importante casta das forrageadoras com 2,2mm de cpsula ceflica, essas formigas exploram o meio externo ao ninho e so responsveis pela coleta de vegetao. Por ltimo, temos as defensoras ou soldados, com cpsula ceflica de 3,0mm, como o prprio nome sugere so elas as responsveis pela defesa do ninho contra invasores, principalmente de outras formigas. (Adam e Ratnieks, 2001; Roces e Holldobler, 1994; Andrade et al., 2002; Carvalho, 1972; Wilson, 1980; Wilson, 1971). A diviso de tarefas no completamente rgida, sendo que a colaborao entre os indivduos de diferentes castas propicia o surgimento de padres de comportamentos caractersticos de um superorganismo, favorecendo a colnia de uma forma global (Hlldobler e Wilson 1984). A manuteno do equilbrio homeosttico de uma colnia requer uma rpida percepo de fatores desestabilizadores externos ou internos e uma comunicao que possibilite a reorganizaao na direo do equilbrio. Alm da flexibilidade na troca de tarefas entre as diferentes castas de formigas operrias variaes do meio ambiente promovem comportamentos que conduzem ao reequilbrio do microambiente da colnia. Kleineidam e Roces em 2000, observaram em ninhos de formigas cortadeiras Atta vollenveideri diferentes comportamentos em funo da idade da colnia. Os ninhos de colnias grandes, maduras, asseguram um bom micro-clima para o crescimento do fungo. Essas colnias constroem montes de terra ao redor das entradas do ninho cuja arquitetura promove a ventilao preservando a concentrao de CO2 em baixos nveis. Alm disso, esses montes de terra impedem a entrada da enxurrada nos olheiros. As colnias jovens, pequenas e que ainda no construram montculos protetores se vem obrigadas a fecharem todas as sadas do ninho para proteg-lo do excesso de chuva. Quando fecham as entradas a concentrao de CO2 aumenta rapidamente, a taxa de respirao da colnia reduz-se, a respirao do fungo simbitico tambm reduzida e o crescimento da colnia fica comprometido. Contudo, atravs do fechamento, as operrias impedem a inundao e garantem a continuidade da colnia.

Freqentemente a homeostase de uma colnia envolve processos complexos
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de
comportamentos onde aspectos individuais e sociais interagem para suprir, com maiores benefcios, as necessidades energticas da colnia (Roces, 2002). Em colnias de Atta cephalotes, a primeira formiga forrageadora que encontra uma nova fonte de alimento, corta um fragmento de folha bem menor do que cortaria numa situao de forrageamento bem estabelecida. Dessa forma, essa primeira formiga diminui o tempo de corte e chega mais rapidamente ao ninho onde passar as informaes da fonte para suas irms. Assim, a coleta total para a colnia aumenta atravs do recrutamento embora a primeira forrageadora tenha prejudicado sua performance. Num primeiro momento, o recrutamento torna-se mais importante que a atividade individual de corte. Essa capacidade individual de distinguir as diferentes situaes de forrageamento possibilita maior rapidez no reequilbrio energtico da colnia (Roces, 1993). A velocidade com que as operrias modificam seu comportamento em resposta aos estmulos externos varia de acordo com o tipo de comportamento e o contexto. O grau de flexibilidade pode variar com o tamanho e a idade da colnia, as operrias de colnias jovens parecem mais versteis, mais flexveis em suas tarefas, mas a colnia como um todo menos homeosttica. Uma vez que a proporo entre as castas muito mais frgil em colnias jovens, e os mecanismos de suporte, como a mudana de tarefas no 100% eficiente (Lenoir, 1979a; Gordon,1987). Todo processo de homeostase de uma colnia que envolve novas organizaes e mudanas de comportamentos, individuais ou sociais, depende de um sofisticado mecanismo de comunicao qumica. As intercomunicaes ocorrem atravs de emanaes de substncias qumicas (feromnios) exaladas de diferentes partes do corpo das formigas e percebveis por suas irms, atravs das antenas que so rgos de percepo qumica. Esses avisos qumicos tm, de acordo com as substncias desprendidas e circunstncias do momento, funes diferentes como: alarme de invaso, chamados para os cuidados com a prole, recrutamento para a busca de alimentos e muitas outras ainda no bem conhecidas (Hlldobler e Wilson, 1990). Alm de se comunicar atravs de feromnios as formigas so capazes de perceber diversas variaes ambientais entre elas as de temperatura e umidade. Uma vez identificadas essas variaes as operrias podem modificar o seu comportamento. Desta maneira, a colnia, aparentemente, reconhece a existncia de um problema e passa a se comportar de forma a tentar corrigi-lo. (Roces e Kleineidam, 2000). Nesta aula nos basearemos na descrio e discusso de experimentos realizados em nosso laboratrio. Estes experimentos mostram a plasticidade comportamental que formigas Atta sexdens rubropilosa podem apresentar em diversas situaes. Referncias G.H. & Ratnieks, F.L.W. (2001). Task partitioning, division of labour and nest compartmentalization collectively isolate hazardous waste in the leafcutting ant Atta cephalotes. Behav. Ecol. Sociobiol. 49: 387-392. Andrade, A.P.P.; Forti,L.C.; Moreira,A.A.; Boareto, M.A.C.; Ramos, V.M. & Matos, C.A.O.(2002). Sociobiology vol. 40, n 2, 2002. Adam,
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Autuori, M. (1941). Contribuio para o conhecimento da sava. (Atta ssp Hymenoptera Formicidae) I- Evoluo do sauveiro Atta sexdens rubropilosa Forel, 1908. Autuori, M. (1942). Contribuio para o conhecimento da sava (Atta ssp. Hymenoptera). (Formicidae) III- Excavao de um sauveiro (Atta sexdens rubropilosa. Forel, 1908). Arq. Inst. Biol. 13: 137-148. Autuori, M. (1947). Contribuio para o conhecimento da sava (Atta ssp. Hymenoptera Formicidae) IV- O sauveiro depois da 1 revoada (Atta sexdens rubropilosa,Forel.1988). Arq. Inst. Biol. 18: 39-70. Bergmeier, T. e al. 1948. Combate sava. Biologia- Formicidas- Extintores- Cuiabanas Ed. Chac. e Quint. S. Paulo, n 42, 35. Bonabeau, E.; Theraulaz, G.; Deneubourg, J.L.; Aron, S. & Camazine S., 1997. Self- organization in social insects. Trends in Ecology and Evolution.12 (5): 188-193. Carvalho, A.M.A. (1972). Alguns dados sobre a diviso do trabalho entre operrias de Atta sexdens rubropilosa, Forel, 1908 em colnias iniciais mantidas em laboratrio. Tese de doutorado, Instituto de Psicologia, Universidade de So Paulo, So Paulo Carvalho, J. H. (1935). Ligeiras notas sobre o combate sava. Min. Agric., Dept. Nac. da Prod. Vegetal Serv. Defesa Sanitria Vegetal. Publicao n 3 18 pp. Cherret, J.M. (1968). The foraging behaviour of Atta Cephalotes ( l.). ( Hymenoptera: Formicidae). I. Foraging pattern and plant species attacked in tropical rain forest. Journal of Animal Ecology, 37: 387-402. Detrain, C & Pasteels, J.M. (1992). Caste polyethism and collective defense in the ant, Pheidole pallidula: the outcome of quantitative differences in recruitment. Behav. Ecol. Sociobiol. 29:405-412. Gordon, D.M. (1999). Ants at work: How an Insect Society is Organized. The Free Press, Simon and Schuster, de Nova York, USA. Haines, B. L. (1978). Element and energy flows through colonies of the leaf-cutting ant, Atta colombica in Panama. Biotropica, 10 (4): 270-277. Hlldobler, B. & Wilson, E.O. (1990). The Ants. The Belknap Press of Harvard University Press, Cambridge, Massachusetts 732 pp. Hlldobler, B. and F.O. Wilson 1994. Journey to the ants. Library of Congress Cataloging- inPublication data. USA. 228 pp. Kerr, W. (1961). Acasalamento de rainhas com vrios machos em duas espcies da tribo Attini (Hymenoptera, Formicoidea). Rev. Brasil. Biol. 21(1): 45-48 Mariconi, F.A.M. (1970). As savas. Editora Agronmica Ceres, So Paulo, Brasil. 167 pp. Mariconi, F.A.M.; Berti Filho, E. & Fontes, L.R. (1996). Anais do Simpsio sobre Formigas Cortadeiras dos Pases do Mercosul. Fundao de Estudos Agrrios Luis de QueirozPiracicaba, So Paulo, Brasil. 139 pp. Mueller, U.G. & Wcislo, W.T. (1998). Nesting biology of the fungus-growing ant Cyphomyrmex longiscapus Weber (Attini, formicidae). Oliveira Filho, M.L. (1934). Combate sava. Bol. Agric. 35: 541-610. Ribeiro, P.L. & Navas, C.A. (2004). A study on the influence of relative humidity in the selection of a garbage disposal location in Atta sexdens rubropilosa, Forel, 1908 (Hymenoptera- Formicidae) (submetido). Roces, F. & Nuez, J. (1995). Thermal Sensitivity During Brood Care in Workers of Two Camponotus Ant Species: Circadian Variation and Its Ecological Correlates. J. Insect. Physiol. 41(8): 659669. Roces, F. & Hlldobler, B. (1994). Leaf density and a trade-off between load-size selection and recruitment behavior in the ant Atta cephalotes. Oecologia 97: 1-8. Roces, F & Kleineidam, C. (2000). Humidity preference for fungus culturing by workers of the leafcutting ant Atta sexdens rubropilosa . Insectes soc. 47: 348-350. Stahel, G. & Geijskes, D.C. (1940). Observations about temperature moisture in Atta- nests. Rev. Entomol. 11: 766-775. Wilson, E.O.(1971). The Insects Societies The Belknap of Harvard University Press. Wilson, E.O. (1980a). Caste and Division of Labour in Leaf-cutter Ants (Hymenoptera: Formicidae: Atta) Behavioural Ecology and Sociobiology. 7: 143-156.
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RELGIO BIOLGICO DE MAMFEROS: MECANISMOS MOLECULARES E CONTROLE DA RITMICIDADE INTERNA DO ORGANISMO.

Pedro Augusto Carlos Magno Fernandes Laboratrio de Cronofarmacologia
Aspectos Abordados: O intuito desta aula ser passar um pouco da evoluo dos relgios biolgicos ao longo das espcies at chegarmos aos mamferos onde o estudo ser aprofundado. Discutiremos os mecanismos moleculares que controlam a ritmicidade interna do relgio central e como ele sincronizado por fatores externos como, por exemplo, o ciclo claro/escuro ambiental. O relgio biolgico central transmite as informaes rtmicas ambientais para diversos osciladores internos que, por sua vez, promovem respostas fisiolgicas que se refletem em padres comportamentais especficos. Para ilustrar este processo tomarei por base o controle do relgio sobre a produo rtmica dos glicocorticides e da melatonina. Aproveitando para fazer um gancho com a minha rea de pesquisa que consiste na investigao da inter-relao entre as glndulas pineal e adrenal durante um processo inflamatrio crnico. Introduo: Os seres vivos, na sua forma mais simples, como os seres unicelulares, at sua forma mais complexa, como os vertebrados, so estruturados no tempo e no espao. A maioria dos parmetros bioqumicos, fisiolgicos e comportamentais dos organismos apresenta flutuaes dirias que persistem sob condies constantes, indicando que osciladores endgenos foram incorporados aos sistemas em resposta s variaes do ciclo claro-escuro ambiental (Menaker et al., 1997). No centro dos sistemas que controlam e regulam os ritmos circadianos dos vertebrados esto trs estruturas que se interconectam num eixo circadiano central, que so: os ncleos supraquiasmticos (NSQ), a retina e as glndulas pineal e adrenal (Menaker et al., 1997). Estes otimizam as atividades bsicas dirias, a vida reprodutiva e algumas respostas sazonais. O sistema mnimo requerido para adaptao s variaes ambientais seria um relgio endgeno, independente do meio ambiente, um sistema sensor que pudesse detectar as alteraes rtmicas do meio ambiente e um ou mais elementos sincronizadores, que teriam como funo o ajuste do meio interno e das funes vitais s variaes ambientais. Recentemente, foram descritos os mecanismos moleculares do relgio central (NSQ) e de relgios biolgicos locais, chamados de servo relgios (Reppert e Weaver, 2002). Tambm conhecida a forma como a retina capaz de detectar luz e enviar a informao ftica para os NSQ (Provencio et al., 2000) e o papel de diversos marcadores internos como, por exemplo, o da melatonina hormnio produzido e liberado pela glndula pineal- como marcador do escuro e o dos glicocorticides -produzidos ritmicamente pela
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glndula adrenal- como antecipadores do perodo de atividade, agindo portanto sobre o ciclo viglia/sono dos indivduos. Bibliografia: Cronobiologia:Princpios e Aplicaes (2003) - Organizadores: Nelson Marques e Luiz MennaBarreto; editora Fiocruz. Menaker, M.; Moreira, L.F. & Tosini, G. (1997). Evolution of circadian organization in vertebrates. Braz. J. Med. Biol. Res., 30: 305-313, 1997. Reppert, S.M. & Weaver, D.R. (2002). Coordination of circadian timing in mammals. Nature 418: 935941. Provencio, I; Rodriguez, I.R.; Jiang, G.; Hayes, W.P.; Moreira, E.F. & Rollag, M.D. (2000). A novel human opsin in the inner retina. J. Neurosc. 20: 600-605. Lang, V. & Sizonenko, PC. (1988) Melatonin and human adreno-cortical function. In: Miles, A., Philbrick, D.R.S. Thompson, C (eds) Melatonin, clinical perspectives. Oxford University Press, pp 62-78. Sites Recomendados: www.nature.com www.pubmed.com
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SISTEMA DIGESTRIO
Carlos Eduardo Cruz Laboratrio de Fisiologia Molecular do Trato Digestivo
ASPECTOS EVOLUTIVOS - CONSIDERACOES INICIAIS Protozorios e e alguns organismos multicelulares (como esponjas) no apresentam um trato digestivo, e a digesto ocorre intracelularmente. Embora isto possa parecer uma caracterstica primitiva, j foi verificado em Paramecium que a digesto intravacuolar est associada uma acidificacao e alcalinizacao sequencial, de uma maneira similar ao que ocorre no sistema digestivo de vertebrados. O movimento do alimento e fluidos ao longo do canal alimentar realizado por clulas ciliares no sistema digestivo de muitos invertebrados. O transporte de secrees digestivas tambm pode ser ajudado atravs do movimento ciliar nos cecos e dutos glandulares. medida que o tamanho das partculas de alimento e o dimetro do trato digestivo aumentaram, os clios perderam a sua eficincia, estando ausentes em alguns grupos como nematides e insetos, favorecendo a participao de movimentos musculares no transporte do alimento. Na maior parte dos invertebrados, h a formao de regies mais especializadas como cecos e regies glandulares responsveis pela secreo, excreo e absoro de nutrientes. Moluscos e artrpodos apresentam glndulas salivares altamente desenvolvidas. Em aneldeos o arranjo geral dos rgos e tecidos similar ao observado em vertebrados. Em moluscos, j ocorre a formao de estruturas hepticas apresentando diferentes tipos celulares, e que so responsveis pela absoro, digesto intracelular, secreo, excreo e armazenamento, e produzem algumas enzimas digestivas que so secretadas para a regio estomacal. A digesto, fermentao microbiana e a sntese de nutrientes so complementadas pela presena de endosimbiontes em muitas espcies de vertebrados, estando bem documentada em aneldeos, moluscos, equinodermos e insetos. Buchner (1965) verificou que a presena de algas nas clulas que revestem o trato digestivo de muitos invertebrados serve para garantir ao hospedeiro O2, carboidratos, uma regio de armazenamento de alimento, alm servir de mecanismo de excreo de CO2, PO4 e compostos nitrogenados.
O SISTEMA DIGESTIVO SEGUE CINTICAS ENZIMTICAS DE REATORES QUMICOS De uma perspectiva fisiolgica, sistemas alimentares podem ser agrupados em trs categorias com base em como eles processam o alimento em um reator qumico, ou local de digesto qumica. O trato digestivo dos celenterados, por exemplo, funciona como um reator em batelada (tipo batch), pois no recebe alimento continuamente, ou seja, necessrio que parte do alimento seja processado e eliminado antes da entrada de mais alimento. No estmago de ruminantes, por outro lado, ocorre a digesto autocataltica, atravs da presena de microorganismos simbiontes, e este funciona como um
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reator contnuo de mistura em estado estacionrio (do tipo CFSTR), pois i. recebe entrada contnua de substratos, ii. o seu contudo retirado continuamente e iii. a corrente de sada possui as mesmas caractersticas do contedo do tanque do reator, sem variao ao longo do tempo. O intestino delgado de mamferos funciona como um reator tubular em estado estacionrio (do tipo plug flow), aonde a concentrao dos reagentes e a velocidade de consumo destes reagentes variam ao longo de seu comprimento, considerando que nesta regio ocorre a absoro de nutrientes. Este tipo de reao qumica ocorre durante a digesto cataltica, aonde enzimas digestivas endgenas atuam na hidrlise do alimento. CLASSIFICAO DE ENZIMAS DIGESTIVAS As enzimas digestivas foram amplamente conservadas ao longo da cadeia evolutiva. Independentemente do organismo em questo, estas podem ser divididas, de uma maneira simplificada, em proteases, carboidrases e lipases. As proteases, que atuam sobre cadeias peptdicas de diferentes tamanhos, so divididas em endopeptidases, quando hidrolisam os peptdeos internamente, ou exopeptidases, quando a hidrlise feita pela cadeia amino- ou carboxi- terminal. Tais enzimas tambm so classificadas de acordo com os aminocidos que participam do processo cataltico no stio ativo, podendo ser subdivididas em cistena-, serina-, aspartato- e metaloproteinases. Tripsinas, quimotripsinas, elastases, pepsinas, quimosinas e colagenases, por exemplo, so endopeptidases que catalisam a hidrlise de diferentes aminocidos, que podem ser bsicos, como arginina e lisina (no caso das tripsinas), ou catalisar a hidrlise do grupo carboxila de aminocidos aromticos, como fenilalanina e triptofano (no caso das quimotripsinas). Dentre as exopeptidases, podemos destacar as aminopeptidases, carboxipeptidases A e B e dipeptidases. As aminopeptidases hidrolisam aminocidos a partir do grupo amina das cadeias peptdicas e so classificadas com base na sua dependncia por ions metlicos (geralmente Zn+2 ou Mn+2) e especificidade ao subtrato. As carboxipeptidases hidrolisam aminocidos a partir do grupamento carboxila da cadeia peptdica, e podem ser classificadas, de acordo com o seu mecanismo cataltico, em serina, metalo- e cistena carboxipeptidases. As protenas so sequencialmente hidrolisadas por endopeptidases extracelulares que atacam ligaes peptdicas ao longo da cadeia protica, e exopeptidases, que hidrolisam aminocidos terminais. Oligo- e dipeptdeos so posteriormente hidrolisados por enzimas presentes em microvilosidades com borda em escova (ligadas diretamente membrana ou associadas ao glicoclix) ou presentes no contedo das clulas intestinais absortivas. A maioria das endopeptidases secretada como zimgenos inativos, e so ativadas no lmen do trato digestivo, protegendo assim os tecidos do hospedeiro contra ataque proteoltico. Os polissacardeos so inicialmente clivados por alfa-amilases na maioria dos organismos estudados. Amilose, amilopectina e glicognio so hidrolisados por alfa-amilases para formar maltose, isomaltose, maltotriose e outros oligossacardeos de ligao alfa-1,4. Maltase posteriormente atua nas
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maltoses, mas incapaz de hidrolisar as ligaes alfa-1,6 de isomaltose, o que realizado pela isomaltose ligada s clulas epiteliais intestinais. Alfa-amilase, maltase e sacarase so classificadas como alfa-glicosidases, pois catalisam a hidrlise da ligao glicosdica alfa-1,4 de oligossacardeos e di-holosdeos. As beta-glicosidases hidrolisam ligaes covalentes beta-1,4 entre holosdeos, como celulose, hemicelulose e celobiose. Embora enzimas endgenas de vertebrados consigam hidrolisar as ligaes alfa-1,4 e alfa-1,6 em amido e glicognio, elas no so capazes de hidrolisar as ligaes beta-1,4 encontradas em celuloses e hemiceluloses, ou as ligaes alfa-1,4 de pectinas e galactanos, sendo esta digesto realizada atravs da atividade microbiana. Quitina pode ser digerida por vrios grupos de vertebrados, incluindo mamferos, aves e rpteis, alm de ser digerida por microorganismos. Todos os dissacardeos, com exceo da quitobiose, so hidrolisados a monmeros por dipeptidases presentes nas membranas das microvilosidades intestinais. As esterases, diferentemente de lipases, geralmente hidrolisam lipdeos que esto em soluo. As lipases descritas na maioria dos vertebrados hidrolisam triglicerdeos na ligao ster C-1 e C-3, liberando dois cidos graxos e um beta-monoglicerdeo. Esterases hidrolisam monosteres tais como lecitina e colesterol, liberando lisolecitina, colesterol e os seus respectivos cidos graxos. Os lipdeos clivam cidos graxos de cadeia longa mais rapidamente do que esterases, cuja especificidade parece ser mais dependente do tipo de lcool do que da estrutura do cido graxo. As lipases j foram encontradas em secrees salivares, farngeas e gstricas em diversos grupos animais, mas so secretadas principalmente pelo pncreas na maioria dos vertebrados e parecem ser as enzimas mais importantes para a digesto lipdica. As esterases tambm so predominantemente enzimas pancreticas em vertebrados. Sais biliares e fosfolipdeos (principalmente lecitina) contribuem para a emulsificao e absoro das gorduras da dieta, e tambm servem como via principal de excreo de colesterol e produtos finais do catabolismo da hemoglobina. Todos os sais biliares parecem ser derivados de colesterol. Em peixes e anfbios, eles consistem primariamente de lcoois sulfatados, e conjugados de taurina e glicina em vertebrados acima destes grupos evolutivos. Uma vez iniciado o processo de emulsificao, a lisolecitina, produto da hidrlise de lecitina, e os produtos finais da hidrlise de triglicrides, tambm agem como detergentes fortes. BIBLIOGRAFIA BSICA Withers, P.C. Comparative Animal Physiology, Saunders College Publishing, 1992 Randall, D.J. Animal Physiology Mechanisms and Adaptations, Freeman and Company, 1997 Schmidt-Nielsen, Fisiologia Animal Adaptao e Meio Ambiente, Editora Santos, 1996
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MECANISMOS DE OSMORREGULAO EM ANIMAIS.

James Fernando Malta da Silva Luis Alberto Valotta Prof. Dr. Luiz C. Salomo Laboratrio de Osmorregulao COMENTRIOS GERAIS adaptado de R. Gilles (1979) por Luis Alberto Valotta James Fernando Malta da Silva
A vida na Terra dependente de gua. Os seres vivos so sistemas bioqumicos altamente sofisticados organizados em torno das propriedades desta molcula. A gua constitui-se no principal meio onde as interaes moleculares indispensveis vida ocorrem. Tambm se constitui no veculo que transporta as molculas para diferentes locais onde essas interaes podem ocorrer. Alm dos muitos compostos orgnicos encontrados como solutos nos seres vivos, os ons inorgnicos tambm so de fundamental importncia: participam como cofatores em muitas reaes enzimticas; formam os gradientes qumicos os quais podem atuar como estoques de energia potencial; e influenciam na permeabilidade das membranas biolgicas a outros solutos. Os diversos solutos encontrados nas clulas vo, por outro lado, influenciar a mobilidade osmtica da gua e, portanto, iro desempenhar um papel proeminente na manuteno da arquitetura celular. Alm disso, muitos dos sistemas enzimticos que controlam as interaes qumicas caractersticas da vida esto localizadas em estruturas altamente organizadas. Isto aponta a importncia da manuteno da estrutura celular e volume nas reaes as quais envolvem estas enzimas como catalisadores. Basicamente, as clulas podem ser vistas como mquinas qumicas extremamente complexas nas quais a localizao e a concentrao de vrias espcies moleculares interatuantes devem ser precisamente controladas no sentidos de manter atividade tima. Em tal contexto, o controle e a manuteno do volume celular podem ser considerados requisitos essenciais a vida. Alm disso, o problema da regulao de volume celular um dos elementos cruciais na conquista de diferentes bitopos e no estabelecimento de organismos em ambientes aquticos com flutuaes de salinidade. De acordo, a vida foi originada em algum tipo de oceano e a capacidade de controlar o volume celular um dos principais pr-requisitos para a invaso de outros tipos de habitats como os ambientes de gua doce e terrestre. Os organismos que habitam este meio desenvolveram adaptaes osmticas especficas habilitando a sua manuteno em suas comunidades. H vrias maneiras atravs das quais o problema da manuteno do volume celular pode ser resolvido. O organismo pode isolar-se completamente do meio externo, evitando dessa forma o ganho ou a perda de gua. Esta soluo no foi mantida por um grande nmero de espcies ao longo da evoluo. Trocas com o meio externo so
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necessrias para satisfazer as necessidades celulares. Alguns esporos bacterianos podem sobreviver por longos perodos com um contedo baixo de gua e sem trocas com o seu meio ambiente; nesta situao, entretanto, seus processos vitais so essencialmente suspensos. Na maioria dos organismos, a gua atravessa a membrana celular por difuso em resposta a gradientes osmticos. H duas maneiras de evitar mudanas no volume celular enquanto mantm-se a possibilidade de trocas entre o fludo intracelular e o meio ambiente. O primeiro mtodo consiste no controle da Concentrao Osmtica (CO) do fludo intracelular em relao a eventuais modificaes do meio externo. O segundo mtodo implica no controle da CO do fludo que circunda as clulas em quaisquer condies externas. A ltima soluo foi adotada por diversos eucariotos e foi denominada por Florkin (1962), de a regulao anisosmtica extracelular. Embora a existncia de um fludo extracelular diferente do meio externo foi observada precocemente na evoluo, a efetiva regulao deste meio (os fludos corpreos) um atributo de apenas alguns grupos zoolgicos altamente evoludos. Pode ser encontrado em alguns vermes e moluscos, mas, essencialmente, ocorre em artrpodes e em vertebrados. Alm disso, muitos dessas espcies so incapazes de manter o estado osmtico de seu sangue quando a CO do ambiente varia. Os mais eficientes reguladores anisosmticos formam a categoria denominada dos assim chamados animais homeostticos; essas espcies podem manter a CO do seu sangue estacionria independente das condies externas. Alm de alguns crustceos e peixes, representantes deste grupo so encontrados entre rpteis, aves, e mamferos. Os ons inorgnicos Na+ e Cl- so predominantes como efetor osmtico sanguneo na maioria dos reguladores anisosmticos. Uria usada por alguns vertebrados inferiores. Este composto orgnico encontrado essencialmente em ciclostomados e em elasmobrnquios, mas tambm tem um papel em vrios anfbios e rpteis. O controle da CO do meio interno em reguladores aniososmticos alcanada por diferentes mecanismos, sempre envolvendo o transporte de sais, e localizada em vrios rgos. Os rgos transportadores de sal podem ser morfologicamente muito diferentes variando, por exemplo, de um rim de mamfero brnquia de um crustceo ou a papila anal de algumas larvas de inseto. fundamental considerar que, com a exceo da glndula nasal de sal encontrada em aves e rpteis, as quais parecem ser ligeiramente diferentes devido aos seus mtodos de controle, os rgos transportadores de sal so construdos basicamente em modelos fisiolgicos muito similares: todos realizam transporte ativo de sdio o qual uma das foras motrizes para o movimento de gua, o contratransporte implicado no processo de sada de Na+ sempre NH4+, H+ ou K+ e a ultraestrutura desses rgos bem semelhante. Alm disso, apresentam importantes dobramentos das membranas celulares, grandes espaos intercelulares e elevada densidade de mitocndrias essencialmente localizadas prxima s membranas de trocas. possvel que esses mecanismos derivem a partir de um mecanismo bsico de transporte de Na+ o qual controla o outro e mais primitivo processo de manuteno do volume celular; que , o controle da CO do fludo intracelular. Como mencionado anteriormente, h apenas alguns animais homeostticos. Em todos as outras espcies, as clulas tm que, algumas vezes, se defrontar com importantes mudanas na CO de seu meio ambiente. Alm disso, os eficientes mecanismos de controle da CO sangnea que atuam
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em espcies homeostticas podem estar encobertos sob certas condies ou podem apresentar uma certa demora em responder a uma nova situao. Isto aponta para a importncia dos mecanismos de controle osmtico do fludo intracelular na manuteno do volume celular. O processo responsvel para o balano da CO pode manter o gradiente osmtico entre os fludos intracelular e extracelular ou atuar no sentido de manter esses dois meios prximos a condies isosmticas. A primeira soluo encontrada em clulas vegetais, em esponjas de gua doce e em protozorios. Clulas vegetais so envolvidas por paredes celulares rgidas para evitar o inchamento resultante do influxo osmtico de gua. O problema do influxo de gua em esponjas de gua doce e em protozorios resolvido pela existncia de vacolos contrteis, cuja funo primria remover qualquer excesso de gua. Na maioria das espcies de animais eucariticas, os fludos intra e extracelulares so mantidos prximos da condio isosmticas. Os mecanismos implicados neste processo foram denominados por Florkin (1962) como mecanismos de regulao isosmtica intracelular. Trabalham para manter o equilbrio osmtico apesar da presena de solutos aninicos no-difusveis no interior das clulas; estas partculas geram uma presso osmtica a qual, de outra forma, iria induzir o inchamento e a lise das clulas de animais por possurem membranas facilmente distensveis. Alm disso, estes mecanismos so de fundamental importncia na resposta regulatria de volume que estas clulas so capazes de desenvolver aps mudanas na CO de seu meio ambiente. Em todos os tecidos e clulas estudados at o momento, eles implicam no controle ativo do montante de vrios efetores osmticos intracelulares entre os quais os ons inorgnicos Na+, K+ e Cl- e os aminocidos livres possuem um papel proeminente. Os mecanismos de regulao isosmtica intracelular foram encontrados em tecidos e clulas de muitas espcies de vrios grupos zoolgicos incluindo protozorios, invertebrados, e vertebrados. importante notar que muitos desses organismos ou no possuem, ou possuem de forma muito frgil, a capacidade de regulao anisosmtica extracelular. Pode-se, portanto, concluir que a regulao isosmtica em nvel celular um processo mais primitivo o qual apareceu precocemente e persistiu ao longo da evoluo. Processos de regulao anisosmticos devem ter sido adquiridos posteriormente, adicionando s espcies que o possuam um novo leque de possibilidades. Bibliografia Geral. ALBERTS, B., BRAY, D., LEWIS, J., RAFF, M., ROBERTS, K. & WATSON, J.D. Molecular Biology of The Cell (3rd edition). Garland Publishing Inc. (1994). BURGGREN, W. W., FRENCH, K., RANDALL, D. J. Eckert Physiology: Mechanisms and Adaptations (5th edition). W H Freeman & Co. 2002. FLORKIN, M. La regulation isosmotique intracellulaire chez les inevertebrs marins euryhalins. Bull. Acad. R. Belg. Cl. Sci., 48, 687-694, 1962. GILLES, R. (Editor) Mechanisms of osmoregulation in animals: maintenance of cell volume (1st edition) John Wiley & Sons. 1979. GUPTA, B. L., MORETON, R. B., OSCHMAN, J. L. & WALL, B. J. Transport of ions and water in animals (1st edition). Academic Press. 1977. HILL, R. & WYSE, G. Animal Physiology (2nd edition) Addison-Wesley Pub Co. 1989. PROSSER, C. L. (Editor) Comparative Animal Physiology, Environmental and Metabolic Animal Physiology (4th edition) John Wiley & Sons. 1991. SCHMIDT-NIELSEN, K. Animal Physiology : Adaptation and Environment (1st edition) Cambridge University Press. 1997.
62
STONE, G., JOHNSTON, I. A.& WILLMER, P. J. Environmental Physiology of Animals (2nd edition). Blackwell Science Inc. 2000 STRANGE, K. (Editor) Cellular and Molecular Physiology of Cell Volume Regulation (1st edition). CRC Press. 1994. WITHERS, P. C. Comparative Animal Physiology (1st edition). Harcourt Brace. 1992. Peridicos Indexados. Advances in Comparative Physiology and Biochemistry. American Journal of Physiology. Annual Review of Physiology. Cellular Physiology and Biochemistry. Comparative Biochemistry and Physiology. Environmental Physiology and Biochemistry. Experimental Physiology. General Physiology and Biophysics. International Review of Physiology. Journal of Cellular and Comparative Physiology. Journal of Cellular Physiology. Journal of Comparative Physiology. Journal of Experimental Biology. Journal of Experimental Zoology. Journal of General Physiology
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EXERCCIO TERICO-PRTICO
Balano Osmtico em Ambientes Marinho, de gua Doce e Xrico.
elaborado por Prof. Dr. Luiz Carlos Salomo Introduo Nos animais aquticos, especialmente nos animais marinhos e estuarinos, as variaes da salinidade do meio podem resultar em variaes nas concentraes inica e osmtica do sangue e fludos extracelulares. Animais marinos hiposmticos esto sujeitos ao efluxo de gua e influxo de ons, contrariamente aos animais de gua doce, que por serem hiperosmticos, esto sujeitos ao influxo de gua e efluxo de ons, alterando a Concentrao Osmtica (CO) do sangue e lquidos tissulares. H dois padres bsicos de resposta dos animais a tais variaes na salinidade, isto , osmoconformao e osmorregulao. No primeiro caso, a CO do sangue, hemolinfa ou lquidos extracelulares varia linearmente com a variao da CO do meio. No segundo caso, a CO se mantm constante apesar das variaes na salinidade do meio. Entre estes dois casos extremos, osmorregulao e osmoconformao, ocorrem respostas intermedirias. Para se saber o padro de resposta osmtica, em laboratrio, geralmente submetem-se os animais a meios de diferentes salinidades, ou seja, de composies inicas diferentes e determinam-se as concentraes inicas e a CO do sangue destes animais nestas diferentes condies experimentais. J no ambiente terrestre, em que a grande vantagem a maior disponibilidade de oxignio, o balano hdrico de outra natureza e, muitas vezes, obtido tanto por ajustes fisiolgicos como comportamentais. Tal que se observa, por exemplo, no banco hidromineral do rato canguru Dipodomys merriami. Entre os mamferos, 40% das espcies pertence a Ordem dos roedores, a mais numerosa. Distribue-se por todo planeta, mas principalmente na Amrica do Sul. Adaptaram-se aos diferentes ambientes, das regies polares ao equador, das montanhas as praias e do deserto aos pntanos. A maioria dos roedores terrestre, mas alguns so arborcolas ou semi-aquticos. A maior parte dos roedores de pequeno porte, isto , de 10 a 20 cm de comprimento e de 50 a 500 g de massa corporal. Alguns, no entanto, como uma espcie de porco espinho (Hystrix cristata) do norte da frica chega a atingir massas corpreas de 20-50 kg. A presena dos roedores tem relevante papel ecolgico por serem a principal fonte de alimento para aves e mamferos carnvoros, havendo uma relao bem estabelecida entre o tamanho da populao de roedores e suas presas. A relao com os homens no se limita destruio da agricultura ou transmisso de doenas. So teis como animais de laboratrio, por consumirem certos insetos e por propiciarem o arejamento do solo cavando galerias subterrneas. Entre os mamferos, so os roedores que ocuparam os mais diferentes ambientes com relao disponibilidade gua. Esto presentes nos desertos mais ridos onde a gua no est disponvel, mas que tambm se tornou dispensvel para eles. Nesse sentido, deve-se ressaltar as pesquisas de
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Schmidt-Nielsen (1964) sobre os hbitos e a fisiologia renal do rato canguru que vive numa regio to inspita, quanto disponibilidade de gua, que poucas outras espcies lhe fazem companhia. Respostas osmticas em Perna perna A Tab. 1 apresenta resultados em experimentos realizados com o molusco bivalve Perna perna. Os mexilhes Perna perna foram coletados em costes nas proximidades de So Sebastio e foram transferidos para tanques de cimento amianto e mantidos em gua de mesma salinidade do local de coleta, isto , 1000 mOsm/kg H2O por cerca de 24 h. A seguir foram distribudos em tanques de cimento amianto contendo gua do mar diluda com gua destilada, obtendo-se, assim, as diferentes salinidades experimentais. Em cada salinidade experimental foram colocados mexilhes com cunha entre as valvas e sem cunha. A hemolinfa dos animais com cunha foi coletada aps 6 h de exposio aos diferentes meios, tempo previamente determinado considerando ser este perodo o suficiente para as trocas osmo-inicas. Nos animais sem cunha, as amostras foram obtidas aps 24 h. O objetivo das cunhas era o de manter a livre exposio das partes moles do animal aos meios experimentais. Manteve-se arejamento contnuo durante todo o experimento.
Tabela 1. Concentrao osmtica da hemolinfa de Perna perna, com cunha e sem cunha mantidos em diferentes salinidades. Valores em mOsm/kg H2O. As concentraes osmticas foram determinadas pelo abaixamento do ponto de congelamento conforme descrito por Salomo (Bolm Fisiol. Animal, Univ. S. Paulo, 4: 143-152, 1980).
Meio c/ cunha s/ cunha 250 V 910 410 417 650 560 598 620 700 685 730 850 864 860 1000 1016 1020 1150 1150 1160 1300 1320 1315
Estes resultados podem ser visualizados na figura abaixo:

Respostas osmticas em Macrobachium olfersii
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Exemplares de Macrobrachium olfersii foram coletados no Rio Guaec, cuja salinidade prxima de zero, transportados para o laboratrio em condies que garantiam a sua higidez, onde foram mantidos em tanques de cimento amianto, com gua do mesmo local de coleta, continuamente arejada. Aps um perodo de permanncia em meios iguais aos dos locais de coleta, os animais foram transferidos para tanques com gua do mar diluda a fim de se obter as diferentes salinidades desejadas (concentraes osmticas). A Tab. 2 indica os valores da concentrao osmtica dos oito diferentes meios experimentais e da hemolinfa dos camares Macrobrachium sp. E a figura 2 mostra estes dados plotados e ajustados por uma funo polinomial de 3 grau.
Tabela 2. Concentrao osmtica (mOsm/kg H2O) da hemolinfa de M. olfersii e dos diferentes meios em que foram mantidos. As concentraes osmticas foram determinadas pelo abaixamento do ponto de congelamento em um osmmetro Fiske.
Meio Hemolinfa 0 430 150 480 300 500 450 510 600 550 750 580 900 650 1000 800
Discusso 1. Como voc definiria o comportamento osmtico de M. olfersii e de P. perna? 2. No caso de P. perna, em que sentido a introduo da cunha altera a resposta osmtica? Qual o significado fisiolgico desta alterao? 3. Que tecidos ou rgos seriam mais sensveis ao estresse osmtico? Por que? 4. Em que nveis compartimentais estes fenmenos podem ser abordados? 5. O que se pode dizer acerca da eurialinidade destes dois animais, a partir dos resultados obtidos?
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6. A resposta osmtica de P. perna variao de salinidade pode ser expressa por uma funo do tipo y = ax + b, enquanto que a do M. olfersii seria por uma funo do tipo y = ax3 + bx2 + cx + d. Qual o significado fisiolgico destas representaes? 7. No caso de P. perna com cunha e sem cunha, o que seria uma abordagem reducionista e uma abordagem holstica, sistmica ou integrativa? Osmorregulao no rato canguru O balano hidromineral no rato canguru se torna crtico em razo do ambiente inspito em que vive fazendo-o depender apenas da pouca gua contida nos alimentos e da gua metablica. A Tab. 3 resume o balano hdrico do rato canguru. Ganho gua metablica gua livre nos alim. Bebida 90% 10% 0% Evaporao Respirao Urina fezes Perdas 16% 54% 25% 5%
A perda de gua atravs da pele, por evaporao, reduzida mas chega a 16% enquanto que mais da metade da perda total ocorre atravs do trato respiratrio. As glndulas sudorparas esto ausentes da superfcie do corpo dos roedores, sendo encontradas apenas em determinadas reas, como nas partes sem plo das patas. O estudo da perda de gua atravs da respirao levou Schimidt-Nielsen a descrever um fenmeno interessante que ocorre em outros animais. A Tab. 4 mostra as diferentes formas de indicar a quantidade de gua, na forma de vapor, presente no ar em diferentes temperaturas. Vapor de gua Temperatura (C) 0 10 20 30 40 50 100 37 mmHg 4,6 9,2 17,5 31,7 55,1 92,3 760 46,9 kPa 0,61 1,23 2,34 4,24 7,38 12,33 101,33 6,28 % de 1 atm 0,6 1,2 2,3 4,2 7,3 12,2 100 6,2 mg H2O/L ar 4,8 9,4 17,3 30,3 51,1 83,2 598 43,9
Como se v nesta Tabela o ar saturado na temperatura do corpo (37 C) contm cerca de 2,5 vezes mais gua na forma de vapor do que o ar saturado na temperatura ambiente (20 C), isto ,
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43,9 e 17,3 mg/L, respectivamente. Assim, se o ar exalado for resfriado a perda de gua por esta via seria menor. De fato a temperatura do epitlio nasal mais baixa do que de outras regies do corpo e, portanto, h economia de gua. Este mecanismo, encontrado em outros mamferos e em aves, denominado de mecanismo de contra-corrente nasal. No homem a temperatura do ar exalado est prxima daquela do corpo. Logo, no h economia de gua. A Fig. 3 mostra a quantidade de gua recuperada de gua em duas condies: a 15 C e 25 % de umidade relativa do ar (u.r.) e a 30 C e 25 %
A perda de gua pelas fezes minimizada graas reabsoro retal de gua e a eliminao de fezes desidratadas. Desde que a regulao de gua est intimamente associada temperatura, certos hbitos encontrados em animais que vivem em regies desrticas, como o rato canguru, esto associados a este fenmeno. Os seguintes hbitos so encontrados neste animal: hbitos noturnos durante o dia permanecem em galerias onde a temperatura relativamente mais baixa; reduo das atividades uma vez que a produo de calor inevitvel sempre que h contrao muscular, o animal mantmse em atividades reduzidas durante o dia. A Fig. 4 resume as estratgias utilizadas pelo rato canguru para sobreviver num ambiente de grande restrio hdrica.
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Produo de urina concentrada Esta talvez seja a mais importante adaptao fisiolgica do rato canguru. A concentrao osmtica da urina deste animal superior a 6000 mOsm/kg H2O. um valor elevado, embora valores superiores a 9000 mOsm/kg H2O possam ser considerados em outros roedores de regies desrticas. (Lembre-se que a concentrao osmtica da urina humana varia de cerca de 60 a 1200 mOsm/kg H2O) Rim capaz de produzir urina mais concentrada que o plasma s encontrada em mamferos e aves. O truque simples, como diz Schimidt-Nielsen, para a produo de urina concentrada reside num fenmeno conhecido com efeito multiplicador de contra-corrente. Esquemas deste fenmeno so encontrados em praticamente todos os livros de fisiologia. No entanto, valeria a pena ressaltar que os elementos essenciais deste mecanismo so: (1) ala de Henle longa; (2) fluxo em sentido contrrio nos dois ramos da ala; (3) transporte ativo; (4) um ramo que reabsorve ativamente soluto deve ser impermevel gua. Discusso 1. Que relao h entre umidade relativa do ar e o balano hdrico do rato canguru? 2. Que relao h entre a temperatura ambiente, balano hdrico e temperatura corporal? 3. Em que o mecanismo de contra-corrente nasal difere do mecanismo multiplicador de contracorrente encontrado no rim? 4. Em que se assemelha coriza observada no ser humano nos dias frios com aquele observado nos animais com focinho frio? 5. Aves e mamferos so capazes de produzir urina concentrada. Por que?
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Bibliografia FYHN, H. J. Rodents. In: Maloiy, G. M. O. (Editor). Comparative Physiology of Osmorregulation in Animal. London, Academic Press, 1979, v. 2 SALOMO, L.C. & LUNETA, J.E. The effects of salinity changes on the osmotic and ionic concentrations in the hemolymph of Perna perna (Mollusca: Bivalvia). Bol. Fisiol. Anim., 13: 2938, 1989 SCHMIDIT-NIELSEN, K. How animals work (1st edition). Cambridge University Press. 1988 STUCCHI-ZUCCHI, A. & SALOMO, L. C. Effect of osmo-ionic concentration on the compound action potential of the cerebro-visceral connective of Perna perna (Mollusca: Bivalvia). Comp. Biochem. Physiol., 101(A): 109-112.

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