TEMA 3: ESTRUCTURA Y FUNCIN CELULAR PROCARIOTA. PARET BACTERIANA.

FLAGELO

APENDICES

FIMBRIAS (cortas)

PILI (largas) EXTERIOR CPSULA (polisacrida) LIMO (polisacrido) CAPA "S" (naturaleza proteica)

GLICOCLICE

PARED CELULAR CELULA PROCARIOTA ENVUELTAS CELULARES MEMBRANA CITOPLASMTICA CITOPLASMA, RIBOSOMAS

INCLUSIONES

INTERIOR

NUCLEOIDE / CROMOSOMA CITOESQUELETO DE ACTINA

ENDOSPORA

FUNCIONES DE ESTRUCTURAS SUPERFICIALES Las bacterias tienen complejas envueltas y estructuras superficiales cuyas funciones son: Esenciales para la viabilidad de la bacteria Compuestas de componentes nicos Dianas de antibiticos Proteccin frente a stresses ambientales: disminucin del pH, sales biliares, bajada de la presin osmtica) Ligandos para adherencia al husped: adhesin a la pared intestinal para no ser eliminados Resistencia a la fagocitosis: defensa Dispara la respuesta inmune innata: sepsis Variacin antignica entre bacterias

MODELOS DE PARED CELULAR Hay 4 modelos de pared celular: 1. Gram positivo 2. Gran negativo con peptidoglicano 3. cido-alcohol resistentes 4. Sin pptidoflicano genero Chlamydia La membrana plasmtica que hay debajo de la pared es muy similar en todas las bacterias. 1. Gram positivos Retienen el cristal violeta. Est formada por una nica capa de peptidoglicanos que rodea la membrana citoplasmtica. 2. Gram negativos En este tipo de pared el cristal violeta es susceptible de ser extrado por el alcohol. Contiene, adems del peptidoglicano, una capa externa (bicapa lipdica) y un periplasma entre la membrana citoplasmtica y el peptidoglicano. 3. cido-alcohol resistentes Desde el punto de vista evolutivo son Gram (+), pero se tien mal xq estn rodeadas de una gruesa capa crea (cido micnico). Se pueden teir con Ziehl-Neelsen. 4. Gnero Chlamydia (parsito intracelular obligado) Tienen una estructura similar a las Gram (-), pero no presenta glicopptidos; es una excepcin en el mundo de las bacterias. nicamente tienen glicopptido cuando se estn dividiendo, concretamente en el periodo de anafase de la divisin celular, y por eso tiene genes sensibles a PG

GLICOPEPTIDO / PEPTIDOGLICANO / MUREINA Las molculas de la capa de glicopptidos forman una especie de saco alrededor de la bacteria. Estas molculas reciben el nombre de mureina. La mureina est formada por: Una parta glucdica (glicano) Una parte peptdica (pptido)

1. Parte glucdica (glicano) Est compuesta por dos azcares (disacrido) que se unen mediante un enlace glicosdico (1,4). Estos monosacridos son: N-acetilglucosamina (NAG) cido N-acetilmurnico (NAM): molcula exclusiva de bacterias; es el ter lctico de la N-acetilglucosamina (forma un enlace entre el OH del 3er carbono y el OH del cido lctico). De esta forma se van sintetizando cadenas del tipo: -NAG NAM NAG NAM NAG NAM NAG - NAM- Algunas bacterias presentan variaciones: cido N-glicolilmurnico (cido-alcohol resistente) en vez de N-acetilmurnico En el gnero Bacilus, el cido N-acetilmurnico presenta el grupo amino libre, sin acetilar El C6 puede presentar otra sustitucin que no sea OH, as se hace resistente a la lisozima, que hidroliza el enlace glucosdico. 2. Parte peptdica (pptido) La cadena peptdica suele ser un pentapptido que se une mediante un enlace glucopeptdico/pptidico (enlace amino) al cido N-acetilmurnico. Los aminocidos que forman este pentapptido (PP) son, por orden de unin a la molcula de NAM: a) L-Ala L-Lis b) D-Glu Diaminopimlico c) Diaminocido Ornitina (+) d) D-Ala Homoserina (+) e) D-Ala Adems, los pentapptidos pueden unirse mediante enlaces interpeptdicos con PP de otras cadenas. Segn como sea la unin interpeptdica, distinguiremos entre 2 tipos de glicopptidos: Glicopptido A: unin del aa en posicin 4 (D-Ala) con uno en posicin 2 (D-Glu). Glicopptido B: unin de un aa en posicin 4 (D-Ala) con uno en posicin 3 (L-Lis). Estas uniones entre pentapptidos de diferentes cadenas se dan mediante puentes de aminocidos (por ejemplo: PP de glicina). - NAG NAM NAG NAM NAG NAM - PP PP PP

... - NAG NAM NAG NAM NAG NAM - ... PP PP PP

... - NAG NAM NAG NAM NAG NAM - ... PP PP PP

Molculas que forman la unidad: NAG NAM PP

BIOSNTESI DE LA CAPA DE PEPTIDOGLICANO (proceso intracelular) Fases: 1) Citoplasmtica 2) Intramembrana (membrana citoplasmtica) 3) Externa

FASE1. Citoplasmtica En el citoplasma es donde se da la verdadera sntesis del NAG, NAM y de los aminocidos que forman el PP; se forma la unidad NAG NAM PP La molcula es el UDPNacetilDglucosamina (UDP-GlcNAc). Esta molcula es uno de los componentes del glicopptido y la molcula a partir de la cual se forma el NAM.

L-Ala

D-Glu
UDP-GlcNAc UDP-N-acetilpiruvato-enolter UDP-Nacetilmurnico

L-Lis

D-Ala-D-Ala

2D-Ala

2L-Ala

Los tres primeros aa del PP se unen secuencialmente. Los dos ltimos se unen como dipptido que se tiene que formar antes de unirse al NAM. ANTIBITICOS La primera diana de accin de antibiticos es la primera reaccin del proceso. La fosfomicina (y derivados) es un anlogo del PEP que inhibe la formacin de NAM, que es esencial para formar la pared bacteriana. La cicloserina acta simultneamente sobre ligasa y racemasa bloqueando la sntesis del dipeptido.

FASE2. Transmembrana (membrana citoplasmtica) La membrana supone una barrera al paso de molculas hidrofilicas. Por esto, el bactoprenol (C55) recoge las molculas de NAG y NAM (unidades formadas) y les hace un paso a travs de la membrana para que puedan llegar al citoplasma exterior. Al mismo tiempo, se van aadiendo unidades disacardicas (polimerizacin) con el paso de estas molculas a travs de la membrana. UDP-NAM-PP BACTOPRENOL-P

UMP

BACTOPRENOL-P-P-NAM-PP
UDP-NAG

BACTOPRENOL-P-P-NAM-NAG El enzima MurG es una protena perifrica de membrana clave en la biosntesis del peptidoglicano; es una glicosiltransferasa. La membrana celular est rodeada por el peptidoglicano, un heteropolmero que est formado por filamentos de glicano entrecruzados por pptidos. El sustrato de MurG es el lpido I, que consiste en un indecaprenil-pirofosfato anclado dentro de la membrana y unido al muranil pentapptido. MurG cataliza la transferencia de NAG de UDP-NAG al lpido I para formar el lpido II. El proceso tiene lugar en la superficie citoplasmtica de la membrana celular antes de la translocacin del lpido II a la cara extracelular de la membrana. A continuacin, el disacrido es polimerizado y entrecruzado a filamentos de peptidoglicano ya existentes. ANTIBITICOS Nisina Z usa el lpido II como receptor. Flipasa es una enzima que permite pasar de una cara a otra el bactoprenol pirofosfato, ya que siempre est en la zona interna de la membrana.

FASE3. Externa Una vez fuera, el glicopptido sigue polimerizndose. Se dan dos tipos de reacciones: transglicosilacin y transpeptidizacin. A. TRANSGLICOSILACIN Proceso por el cual la estructura NAG NAM se une a cadenas de peptidoglicano ya generadas ya sea por un extremo o bien por en medio (rompiendo las cadenas)

Glicopptido (viejo)

NAM NAG PP

PP (Nuevo)
Glicopptido NAM NAG PP

PP

n exterior membrana

ANTIBITICOS Bacitracina: impide la salida de azcares al exterior; impide la formacin del lpido I al inhibir la unin del bactoprenol con UDPNacetilglucosamina. Se usa por va tpica por su toxicidad. Bactoprenol PP Bactoprenol P P Vancomicina y derivados: bloquea las 2 D-Ala terminales del PP, no se dar la liberacin y ruptura del nuevo para unirse al glicopptido y, por lo tanto, aumentar la concentracin del lpido II.

B. TRANSPEPTIDIZACIN Proceso que incluye la formacin de los enlaces interpeptdicos entre los glicopptidos ya establecidos. Primero acta la carboxipeptidasa y se libera una D-Ala: EnzSerOH PepGliNAGNAM [...] (4) DAla (5) DAla PBT: llevan a cabo la transglicosilacin y la transpeptidacin (algunas slo actividad transpeptidasa). PBP 3 y PBP 4,5,6 elongacin. DAla PepGliNAGNAM [...] (4) DAlaDSerEnz OHSerEnz

Los antibiticos lactmicos inhiben la PBP: penicilina, cefalosporinas, monobactinas Transglicosilasas bacterianas (TGs) Catalizan la polimerizacin de las cadenas hidrocarbonadas del pptidoglicano (inhibicin por antibiticos). Mltiples TGs contenidas en un organismo y que llevan a cabo diversas sntesis de metabolitos funcionales. 2 formas: Clase A de PBPs: dominios N terminales de protenas bifuncionales que contienen dominios __ Monofuncionales glicosiltransferasas (MGTs): protenas diferentes.

Des de el peptidoglicano hacia dentro todas las bacterias son muy similares. Sin embargo, hacia fuera, el mundo bacteriano se divide en 2 clases principales (ms un par de tipos singulares). stos son: Grampositivos gracilicutes Thalobacterias (G+C>50% DNA) Gramnegativos firmibacterias Firmicutes (G+C<50% DNA) PARED CELULAR DE GRAM POSITIVAS Capa gruesa de mureina (40 capas de glicopptido) Ausencia de membrana externa Gran presencia de uniones interpeptdicas. Membrana ms rgida y menos flexible pero que tiene poros que permiten el paso de sustancias. cidos teoicos, cidos teicurnicos (polmeros cido urnico) y cidos lipoteoicos. (Bacilus) Capa superficial con: Polisacrido C Streptococcus Carbohidratos (polisacridos especficos) Polisacrido R Staphylococcus Protenas: A, M, T, R cidos teicoicos (2 mayor componente de pared de clulas gram (+)) Polmeros de dos tipos de monosacridos acdicos (robitol teicoicos y glicerol teicoicos) encontradas en paredes de Gram (+). Son compuestos de carbohidratps y un alcohol (robitol y glicerol, pero nunca coexistirn). Se unen por enlaces fosfodiester. ROBITOL: se une covalentemente a la mureina GLICEROL: localizado en la membrana (cido lipoteicoico, anclado a la membrana citoplasmtica). Participan en la patognesis promoviendo la adherencia a tejidos del husped.

PARED CELULAR DE GRAM NEGATIVAS Membrana externa 1 3 capas de glicopptido Membrana citplasmtica No tienen cidos teicoicos, lipoteicoicos ni ______ Red de pentapptidos menos densa

En el glicopptido, las uniones interpeptdicas son mucho menores en las bacterias gram (-), por lo que la clula es ms flexible, no es tan rgida como las gram (+). Membrana externa: Consiste en una bicapa lipdica asimtrica que contiene lipopolisacridos (LPS) en el lado externo y fosfolpidos en el interior. El LPS tiene tres partes y sus molculas estn unidas por _____ Antgeno 0 (Ag0): polisacridos que da especificidad de cepa. Es la parte ms externa del LPS, tiene importancia en procesos de adhesin celular y reaccin de la bacteria. Tambin se llama antgeno somtico y da los dos tipos de serotipos. Regin central (core) o ncleo del LPS: de naturaleza polisacardica; es una zona de hexosas, heptosas y 2-3 molculas de cido cetodeoxioctanoato (KDO). El KDO se une al lpido A. Lpido A: glucosaminil(1,6)glucosamina (68 cidos grasos: mirstico, palmtico, deico). Es la parte ms interna y la molcula responsable de la toxicidad de la bacteria. EFECTO TXICO DEL LPIDO A: el lpido A es termoestable. Se une a protenas de la sangre (a los macrfagos) e induce una respuesta inflamatoria (interfern Y, TNF, IL-1, IL-12, IL-6) en el sistema respiratorio o circulatorio.

Al margen del LPS, la membrana externa tiene protenas de distinta natruraleza (COMP: over membrane proteins): Porinas: protenas trimricas que forman un canal y dejan paso a molculas proteicas (tanto especficas como no especficas). LAMB: protena especfica para el transporte de lactosa. Protenas estructurales: ancla la membrana externa con el glicopptido.

Periplasma o gel periplasmtico (parte externa ms viscosa): Es una solucin densa que se comprime cuando aumenta la presin osmtica. En esta hay una serie de protenas solubles de diferentes tipos y con diferentes funciones: Transporte. Unin: impiden la salida de nutrientes una vez ya han entrado. Hidrolticas: degradan molculas grandes. Son las fosfatasas, las lipasas y las lactamasas. Shock osmtico, quimioreceptores (quimiotaxis).

El periplasma tambin contiene oligosacridos en la _____________. Podemos definir el periplasma como un espacio entre la laminilla externa de la membrana plasmtica y la laminilla interna de la membrana externa en bacterias Gram (-); contiene las capas de peptidoglicano. Su consistencia de gel se debe a las protenas solubles y los oligosacridos que lo componen.

PARED CELULAR DE CIDO-ALCOHOL RESISTENTES Resisten a la decoloracin con cido-alcohol en una tincin de Zhiel-Neelsen, por los cidos miclicos presentes en la pared. Engloban a mycobacterium. La pared de las micobacterias tiene 4 capas; des de la membrana plasmtica a la ms externa son: 1) 2) 3) 4) Glicopptido / mureina (N-glicolilmurnico y N-acetilglucosamina): hidroflica. Arabinogalactano (polisacrido): hidroflica. cidos micolcos (-hidroxicidos de 19-20C): hidrofbica. Lpidos y compuestos relacionados: Glicsidos fenlicos Glicolpidos Peptidoglicolpidos, micsidos cidos micocersidos (ceras)

Los lipoarabinomananos le sirven para unirse a la membrana plasmtica. Araminosa + manosa

PARED CELULAR DEL GNERO CHLAMYDIA Chamydia produce pneumonias, tracomas su pared es, en principio, como la de los gram (-) y est formada por diferentes partes: Membrana externa No tiene glicopptidos, en su lugar presentan una capa de protenas ricas en Cys, que se une a la membrana externa (CRP). Membrana interna (citoplasmtica). No tienen periplasma. Protenas que unen CRP a la membrana externa. Es sensible a -lactmicos.

FUNCIONES / EFECTOS DE LAS PAREDES CELULARES Mantenimiento de la morfologa Proteccin contra la lisis osmtica Aumente de la respiracin inmune a diferentes metabolitos celulares por miramipptido Induccin a artritis inflamatoria por polisacridos ligados al peptidoglicano Induccin de enfermedad granulomatosa delo hgado por polisacridos ligados al peptidoglicano

FORMACIN DE PROTOPLASTOS (CELULAS SIN PARED) La pared bacteriana no es estrictamente necesaria para la clula xq sus funciones principales no son vitales. Se han hecho estudios poniendo una lisosoma (enzima que rompe enlaces (1,4)-glicosdicos del peptidoglicano) en un medio de cultivo isotnico con las clulas, de forma que despus de la digestin de la pared por accin de la lisozima no se rompa la pared.

Hay dos tipos de protoblastos para estudiar funciones fisiolgicas de las bacterias: Protoblastos: provienen de la separacin de la pared gram (+); hay una completa separacin de la pared. Esferoblastos: provienen de la separacin de la pared en gram (-); hay una separacin parcial de la pared.

TEMA 4. ESTRUCTURAS EXTERNAS A LA PARED (EPS)

CAPAS S BACTERIANAS Redes cristainas gruesas, planas i monomoleculares (1a capa) de subunidades proteicas o glicoproteicas que cubren por completo la superficie celular. Se producen por el autoensamblado de subunidades proteicas sobre la superficie de procariortas. Si ponemos un tampn y la protena se ensambla y se vuelve a formar la capa alrededor malla. Es prescindible, en la naturaleza la presentan pero en cultivos (laboratorio) la pierden. Pueden presentar simetra de diferentes tipos: oblicua (p1, p2), hexagonal, cuadrada

FUNCIONES Adhesin celular y reconocimiento de superficies. Tamiz molecular: forma una malla de tamao de poro muy pequeo y homogneo. Atrapar molculas e iones. Mantenimiento de forma. Factor de virulencia.

CPSULA BACTERIANA tiene el antgeno K (polisacrido), AgK. Estructura dispensable, como la capa S, ya que en cultivos en el laboratorio no estn encapsulados. Es la capa ms externa. Matriz fibrosa, superficie celular, variable en grosor y composicin, dispensable. Puede ser vertida al medio (limo).

GLICOCLIZ (EPS): Algunos procariotas secretan un polmero gelatinoso generalmente compuesto de polisacridos, protena o ambos. Hay dos tipos de glicocliz: 1) Cpsula glicocliz rgido, bien organizado. 2) Limo glicocliz no organizado, dbilmente unido (ejemplo: placa dental). Sirve para adherir-se a las superficies, fijarse bien, proteccin de microbios y deshidratacin. CARACTERISTICAS que pueden tener las cpsulas Rgida: suficientemente organizada como para excluir partculas. Forma un entramado muy tupido que evita el paso de macromolculas. Flexible: organizacin celular deformable, no excluye partculas. Integrada: unida a la pared celular. Perifrica: unida dbilmente a la pared celular, puede ser vertida al medio xq es dependiente de factores variables. COMPOSICIN Agua (95%) Poliglutmico: poli poliglutamil pptido (espcies del gnero Bacilus) Polisacridos: estructura simple o ramificada. Tiene carcter antignico (AgK). De azucares neutros: D-glucosa, D-galactosa; L-manosa, L-ramnosa, L-fucosa. Desoxiaminocidos: D-glucosamina, D-galactosamina. cidos urnicos: glucurnico, manurnico, gulurnico. Sustituyentes acilos (radicales): piruvilo, acetilo, succinilo, sulfato, fosfato dan propiedades fisicoqumicas especiales a la cpsula.

Homopolisacridos. De glucosa: Celulosa (Acetobacter) Dextrano (Leuconostoc y Pediococcus): se utiliza como excipiente y facilita la absorcin de hierro. De fructosa: levanos (Pseudomonas aeruginosa) Heteropolisacridos (ms frecuentes): alginato

OBSERVACIN Microscopia: ptica, electrnica (ms utilizada). Mtodo tinta china: se trata en hacer una extensin y cubrirla con tinta china, secarla y poner un colorante vital (safranina). La tinta china no puede atravesar la cpsula y as el colorante tie la celula pero no el polisacrido; se observa la cpsula de color blanco. Tincin Burri es una tincin diferencial: el fondo queda oscuro y la cpsula blanca; con el colorante vital queda teida la cpsula. TIPOS: Macrocpsula: se ven con facilidad. Microcpsula: muy adheridas a la superficie de la clula y solo se ven con el microscopio. SINTESIS: Homopolisacridos: se sintetizan en el exterior de la clula. Celulosa: es el nico homopolisacrido que se sintetiza en el interior y es exportado al exterior. Heteropolisacridos: se sintetizan en el interior y son exportados al exterior mediante el lactoprenol (C55).

TEMA 5. MEMBRANA CITOPLASMTICA Y CITOPLASMA CELULAR MEMBRANA CITOPLASMTICA

COMPOSICIN Anfipticos: polares y no polares. La mayora son fosfolpidos. Carecen de esteroides (excepcin: Mollicules/Mycoplasma sin pared) Tienen hepanoides, que es una molcula pentacclica Integrales Proteinas Perifricas Oligosacridos Hidratos de carbono Glicolpidos Lpidos

ESTRUCTURA Bicapa fosfolipdica estabilizada por cationes incluyendo Ca y Mg . Barrera selectiva a la permeabilidad, pueden atravesarla macromolculas No hay exzocitosis ni endocitosis Grupos de cabeza: fosfatidil etanolamina / serina / glicerol / cardiolina. cidos grasos no saturados, aunque a veces presentan monoinsaturaciones 9-10/11-12 Los lpidos en Bacteria y Archaea tienen diferentes enlaces qumicos: 1) Una de las principales diferencias es que las mitades lipdicas de la membrana no son glicerol-steres, sin glicerol-teros. 2) Adems, en Archaea, en vez de ser cidos grasos son isopropenoides con repeticiones de 5 tomos de carbono. 3) Se pueden presentar como bicapa con 2 laminillas o como monocapas de diglicerol tetrateres. La comunicacin entre el interior y el exterior se realiza mediante las protenas de la membrana.
2+ 2+

FUNCIONES 1. Retiene al citoplasma (interior exterior) 2. Barrera selectiva a la permeabilidad: slo la atraviesan pequeas molculas hidrofbicas no cargadas que pasan por difusin 3. Transporte de molculas: Absorcin de nutrientes Excrecin de residuos Secrecin de protenas 4. Procesos metablicos: Sntesis de lpidos y pared celular Transporte de nutrientes Generacin de energa (respiracin y fotosntesis) Transduccin de seales (quimiotxis, esporulacin) Protenas receptoras Respuesta a seales del medio exterior 5. Anclaje de protenas (flagelos) 6. Participacin en la segregacin cromosmica

MOVIMIENTO DEL MATERIAL A TRAVS DE LA MEMBRANA Difusin pasiva: no hay gasto de energa Osmosis: transporte de agua hacia concentraciones elevadas de soluto Difusin facilitada: con protenas de transporte Transporte activo: utiliza energa, crea energa por una fuerza protn motriz

CITOPLASMA CELULAR
COMPOSICIN. Se distinguen: Elementos formes: Ribosomas Ncleo procariota Organelas y cuerpos de inclusin Citoesqueleto Elementos solubles (70-80%) RNA de transporte Vitaminas Cofactores ATP Pigmentos Chaperonas Iones inorgnicos Solucin de protenas

CUERPOS DE INCLUSION Son especficos de cada grupo. Algunos almacenan materiales de reserva: Polisidos o hidratos de carbono Grnulos de polifosfato o volutina (metacromticos) Polihidroxibutiratos (PHB) / polihidroxialcanoatos: son lpidos y tambin se utilizan como material biodegradable. Granos de cianoficina: principalmente en ciaonobacterias. Grnulos de azufre Otros elementos de los cuerpos de inclusin son: Cuerpos polidricos o carboxisomas. Contienen enzima bifosfatocarboxidasa, necesaria para bacterias que utilizan CO2 como fuente de carbono. Vesculas de gas: sacos de aceite que tienen las bacterias acuticas para flotar y, as, buscan nutrientes a diferentes alturas/profundidades. Vesculas de Chlorobium: pigmentos fotosintticos (ficobilisomas) Tilacoides: en bacterias fotosintticas Enterosomas Magnetosomas: inclusiones que actan como imanes y que lo utilizan para fijar-se a determinados sustratos

RIBOSOMAS Todo el citoplasma de la bacteria se encuentra tapizado de ribosomas, compuestos de ribonucleoprotenas. Los ribosomas estn formados por dos unidades que solo se unen durante la sntesis del pptido: Grande: 50S Pequea: 30S Los ribosomas son el lugar de sntesis de las protenas, concretamente del polipptido, ya que la protena se forma despus de la maduracin este gracias a la accin de las Chaperonas fuera del ribosoma. Se encuentran en todas las clulas. Los procariotas difieren de los eucariotas en tamao y nmero de protenas. El coeficiente de sedimentacin de los eucariotas es de 80S mientras que el de los eucariotas es 70S. la puromicina inhibe la unin del RNA con 30S tanto en procariotas como en eucariotas. COMPOSICIN Ribonucleoprotenas Protenas: S (subunidad pequea) y L (subunidad grande) RNA: 16S, 5S, 23S 60%
40%

FUNCIN Sntesis de protenas 2+ Se necesitan iones Mg para que se junten las dos subunidades, despus el acil-tRNA se pega a la subunidad pequea. La subunidad 30S se coloca en la zona de inicio del mRNA; la secuencia de unin es la secuencia SHINE Dalgernd. Inhibidores de la sntesis de protenas

Bacterioestticos: inhiben el crecimiento, pero no matan ya que la bacteria puede reactivarse cuando desaparece el inhibidor. Algunos bacteriostticos, segn la concentracin en que se encuentren o la fase vital de la bacteria, pueden actuar como bactericidas. Tetracinas: se unen reversiblemente a la subunidad 30S del ribosoma y inhiben el hueco A. Inhiben la unin del aminoacil-tRNA al hueco aceptor en el ribosoma 70S. Son antibiticos muy txicos que pueden daar la medula osea o el esmalte de los dientes. Ejemplos: Minociclina Doxiciclina (ms utilizado) Tetraciclina Espectomicina: se une reversiblemente a la subunidad 30S e interfiere en la interaccin del mRNA con la subunidad 30S. es estructuralmente similar a los aminoglicosdicos pero no causa lectura errnea del mRNA ya que no se lee. No es un antibitico muy txico, por eso actualmente sustituye a las tetracinas. Cloranfenicol, lincornicina y clindamicina: no tienen nada en comn excepto su modo de accin. Se unen a las subunidad 50S, inhibiendo la actividad de la peptidil-

transferasa, que permite pasar por el hueco A al hueco P del ribosoma, de forma que el hueco A no se vacia y se impide la elongacin. Macrlidos: actua a nivel de la subunidad 50S inhibiendo la translocacin de P a A y de A a P. Ejemplos: Eritromicina (la ms importante) Cloritromicina Azitromicina Spiramicina

Bactericidas: matan las bacterias. 1. Aminoglicsidos: se unen irreversiblemente al RNA ribosmico, concretamente a la subunidad 30S, impidiendo la formacin del complejo de iniciacin y as inhiben el inicio de la traduccin (no se podr empezar). Adems, ralentizan la sntesis de protenas que ya se ha iniciado e induce a lecturas errneas del mRNA. Tambin deforma i altera la membrana citoplasmtica, permitiendo de esta manera la entrada de un mayor nmero de antibiticos. Ejemplos: Estreptomicina Konamicina Gentamicina Tobramicina Elongacin de la sntesis proteica Se van aadiendo aminocidos al hueco A vacio de manera que se forma un enlace peptdico con el siguiente aa, pasa al hueco P. va progresando hasta formar un polipptido. Llega un momento en el que se encuentra con la secuencia STOP (triplete UGA) y se para la sntesis de protenas. Se libera el pptido formado en el ribosoma y se preparan las 2 subunidades, que se encuentran separadamente en el citoplasma. En el momento de la sntesis se forma el complejo de iniciacin y se unen de nuevo. Es necesario que la sntesis de protenas sea rpida xq el mRNA bacteriano tiene una vida muy corta. Antimicrobianos que actan sobre los factores de elongacin

cido fusdico: es un antibitico bacteriosttico que acta inhibiendo la liberacin del EF-G del complejo EFG-GDP; tambin impide la translocacin del peptidil-tRNA del sitio A al sitio P. Se usa ms para hongos que para bacterias. Mupiricina: inhibe la isoleucil-tRNA sintetasa y para la sntesis proteica. Es bacteriosttico.

CROMOSOMA Molcula de DNA doble filamentosa circular que contiene toda la informacin gentica requerida por una clula. El DNA est fuertemente enrollado alrededor de una protena agregada en un rea densa llamada nucleoide. El DNA mide 1mm y se encuentra en la bacteria superenrollado.

Cada cromosoma est formado por un nmero aproximado de entre 50 y 100 bucles/dominios con un nmero de nucletidos variable; al final de cada dominio hay una protena de unin que est estabilizando el DNA. Un cromosoma est compuesto por diferentes protenas: RNA, polimerasas, HU (inespecfica), IHF (especfica), NS Ciertas bacterias no cumplen las caractersticas tpicas del cromosoma: Streptomyces coelicolor: su cromosoma es lineal Vibrio cholerae: tiene 2 cromosomas circularen y de diferente tamao. Es diploide y tiene megaplsmidos. Plsmidos Estructura de DNA circular ms pequea que el cromosoma normal No codifican funciones vitales Se replican independientemente del cromosoma bacteriano Se diferencia entre plsmido y cromosoma xq se considera que el plsmido no presenta genes que codifiquen para RNA ribismico Replicacin Hay un origen de replicacin nico: OriC La forca es bidireccional El punto TerC finaliza la replicacin; es cuando se produce la separacin entre cromosomas hermanos El tiempo aproximado de la replicacin es de 20-10 minutos Dado que las bacterias se dividen ms rpido que el proceso de replicacin del DNA, han aumentado la frecuencia de replicacin de forma que pueden haber simultneamente varios ciclos de replicacin en funcionamiento

CITOESQUELETO Las bacterias no tienen un citoesqueleto propiamente dicho, sino estructuras/elementos homologas 1. Homlogos a la tubulina Fts Z se encuentra en todas las bacterias (anillo Z) Fts A Zip A Zap A Btub A y Btub B solamente en algunas bacterias 2. Homlogos a la actina Par M segregacin de los plsmidos de 1 o 2 copias Par C segregacin de los plsmidos de muchas copias Mre B protena que se distribuye formando una estructura helicoidal u que contribuye a mantener el dimetro de la bacteria Fts A ensamblaje del anillo Z

CHAPERONAS El correcto plegamiento de las protenas como su adecuado ensamblaje en complejos requiere el concurso de unas protenas especiales, conocidas como protenas celadoras o chaperonas, debido a que su papel es vigilar y eventualmente corregir el plegamiento. Estas protenas estn presentes en todos los seres vivos. En Escherichia coli se han estudiado especialmente la DnaK, DnaJ, GrpE, GroEL y GroES. Parece que actan de un modo secuencial: 1) Cuando el ribosoma an est sintetizando la protena y ya ha asomado la primera porcin del polipptido, se une la DnaJ a esa parte del polipptido an sin plegar. 2) Enseguida se une la DnaK, que ha formado antes un complejo con el ATP, y se produce hidrlisis de este ATP (pero quedando el ADP unido a DnaK), lo que aumenta la afinidad de DnaK por el polipptido sin plegar. 3) Cuando se ha sintetizado toda la protena, la GrpE se une al complejo polipptido-DnaJDnaK-ADP, liberando el ADP. 4) Nuevas molculas de ATP se unen ahora a DnaK, con lo que se facilita la disociacin de las protenas DnaK y DnaJ respecto del polipptido. En este momento, muchos polipptidos pueden haber adquirido su configuracin final, pero otros necesitan an un paso final de refinamiento: 5) El polipptido pasa al canal interior formado por GroEL y GroES, que catalizan (con gasto de ATP) la correcta isomerizacin, de modo que la protena adquiere su plegamiento nativo biolgicamente activo.

TEMA 6. APNDICES CELULARES FLAGELOS

Los flagelos son los rganos de locomocin de muchas bacterias. Se caracterizan por ser unas estructuras largas y finas de unos 20 nm, son apndices libres por un extremo y unidos a la clula por el otro. Tienen forma helicoidal y la longitud de onda es constante para cada especie. El flagelo sirve para que la bacteria pueda moverse en medios no muy viscosos. En el caso de los endoflagelos (flagelos del interior del citoplasma tpicos de espiroquetas) sucede al revs ya que estos se desplazan muy fcilmente en medios viscosos.

CLASIFICACIN: segn insercin 1. Polares: presentan un solo flagelo 2. Lofotrica: presentan dos o ms flagelos formando un penacho (grupo de flagelos), normalmente en un polo 3. Anftrica: presentan dos penachos de flagelos, uno en cada polo 4. Pertrica: tienen flagelos repartidos por toda la superficie Ciertas bacterias presentan flagelos de insercin lateral, bien en penachos densos (Selenomonas) o diseminados (Pectinatus).

ESTRUCTURA Capuchn: parte final del flagelo que est formada por protena CAP Filamento: constituido por subunidades de protena repetidas llamada filamina (flagelina), dispuestas en forma helicoidal. Presenta el Ag H de naturaleza proteica. Gancho: protenas que actan como junta en la membrana. Conecta el filamento al motor. Cilindro: cuerpo basal. Motor: protenas de la base. MOT: conduce al motor causando un giro y una rotacin del filamento. FLI: conmutador del motor, reinvierte la direccin Anillos: L y P: funcin de sujecin S y M: funcin de rotacin

Estructura de un flagelo de una bacteria Gram negativa.

Las bacterias Gram (+) solamente poseen los anillos M y S. las bacterias Gram (-) necesitan estructuras auxiliares que estabilizan al flagelo, estas estructuras son unos anillos que se insertan uno en el LPS de la membrana externa (L) y otro en el peptidoglicano (P). Tambin tienen en la membrana interna los anillos M y S, que hacen de motor.

FASES DEL MOVIMIENTO FLAGELAR 1. Natacin: movimiento suave en sentido contrario a las agujas del reloj 2. Tumbo: movimiento brusco donde no hay desplazamiento pero si se produce un giro de la bacteria descontrolado. Va en el sentido de las agujas del reloj. Todos los flagelos se mueven u giran de manera simultnea y coordinada. Para producir movimiento, el motor del flagelo gira en contra de las agujas del reloj (natacin), pero cuando el conmutador acta, cambia el sentido haciendo girar el flagelo en sentido contrario a las agujas del reloj, momento en que se produce el tumbo. Para volver a hacer natacin, el flagelo tendr que girar otra vez en sentido contrario a la agujas. La rotacin est controlada por una protena conmutadora en el motor molecular del cuerpo basal: Fli. Rotacin CW: el penacho de flagelos se dispersa, resulta un movimiento de tumbo y cambia la direccin del movimiento bacteriano. Dura 1 decima de segundo. Rotacin CCW: largo desplazamiento (recto o curvado) sin un cambio en la direccin. Tiene una duracin aproximada de 1 segundo.

Las bacterias que tienen un flagelo polar no realizan tumbo al pasar de CCW a CW, sino que cambian de direccin.

MTODOS DE OBSERVACIN I TINCIN DE FLAGELOS Sistema de la gota pendiente Consiste en sembrar una gota del cultivo en una cavidad que presentan unos portaobjetos especiales y cubrirlo. Este mtodo sirve para observar la movilidad de los flagelos. Ondas moir Ondas que producen algunas colonias a su alrededor. Se observa gracias a la tincin de Leifson. Microscopio ptico Mtodo de tincin con sales de plata: sirve para observar flagelos pero no hay que realizar una extensin xq el asa de Kolle rompera las estructuras. Se realiza mucho mejor a partir de un medio de cultivo lquido o a partir de una suspensin que de forma en un tubo de agar inclinado (en caso de medio solido). Mtodo de tincin Leifson

Microscopio electrnico Sombreado OSO4

QUIMIOTAXIS Movimiento de un organismo hacia o en direccin contraria a un gradiente qumico. Los procariotas sienten cambios en la concentracin de un compuesto qumico con el tiempo, comparan el estado qumico de su ambiente con el que han sentido momentos atrs. Investigacin con E. coli (bacteria flagelada peritricamente) Atrayentes azucares, aminocidos, O2 [quimiotaxis positiva] Repelentes alcoholes, Ni, Co [quimiotaxis negativa] MECANISMO

Se usa un sistema de dos componentes para sentir los cambios temporales en la concentracin qumica y regular el movimiento flagelar. Etapa 1: respuesta a la seal Etapa 2: control de la rotacin flagelar Etapa 3: adaptacin (muy importante)
SENSOR TRANSMISOR REGULADOR RESPUESTA MOTOR

TRANSCRIPCIN

Las protenas de ____________________ son las MCPs (1 sensor), tienen un dominio transmembrana y son las encargadas de aceptar un metilo. La metilacin la llevan a cabo las protenas Che: CheR: metilasa (metila la MCP). Su funcin es permanente y continua. CheA: es una proteoquina que se autofosforila en una Histamina concreta cuando el MPC se une a un quimiefector. Es el regulador central del sistema quimitctico, ya que en su forma fosforilada (CheA-P) fosforila a CheY y a CheR. CheW: es necesaria para el acoplamiento entre CheA y el dominio citoplasmtico del MPC. CheY: protena reguladora de la respuesta, se fosforila y se une al motor (Fli), da un tumbo (CW). La fosforilacin se da con la transmisin del fosfato de Che A-P a Y. CheZ: contrarresta la seal de viraje al facilitar la desfosforilacin de la protena Che Y-P en CheY. CheB: sistema de desbloqueo. Cuando esta protena es fosforilada por la CheA-P, se convierte en una metilasa (CheB-P) que retira los metilos previamente unidos a los glutmicos del MPC. Componentes qumicos atrayentes: disminuyen la velocidad de autofosforliacin de Che A Componentes qumicos repelentes: aumentan la velocidad de autofosforilacin de Che A

La adaptacin es un bucle feedback que resetea el sistema. Qu hacen los repelentes? Incrementan la actividad de CheA quinasa: Ms CheY-P Ms tumbos CheB-P separa los grupos metilo MCP desmetiladas responden menos bien a los repelentes Solo continuar a tumbo si la concentracin es alta

FIMBRIAS O PILI (PELOS)

Las fimbrias son apndices compuestos de protenas (fimbrina), que tienen la estructura de un tubo hueco. En la gnesis de las fimbrias, las protenas ms nuevas son las de la base y las ms viejas son las del extremo. Son filamentos ms delgados y cortos que los flagelos, solo observables en el microscopio electrnico (hay que ir con cuidado xq se desprenden muy fcilmente). A veces, se anclan en la membrana plasmtica (gram positivas), pero en la mayora de gram negativas se anclan a la membrana externa. Sus funciones principales son: Adhesin: gracias a las adhesinas que tienen en el extremo. Las adhesinas (PAP) sirven de anclaje a sustratos inertes y a clulas (eucariotas). Segn el tipo de adhesina se anclarn a un sustrato u otro. Movilidad: principalmente las de tipo IV Hemaglutinacin: las fimbrinas de tipo VII pueden unirse a hemates, provocando agregacin. Transmisin de material gentico: las de tipo IV. ste es el que se llama propiamente pili.