Kronenberg: Williams Textbook of Endocrinology, 11th ed.

Copyright 2008 Saunders, An Imprint of Elsevier CHAPTER 3 GENETIC CONTROL OF PEPTIDE HORMONE FORMATION Joel F. Habener Evolution of Peptide Hormones and Their Functions, 19 Steps in Expression of a Protein-Encoding Gene, 19 Subcellular Structure of Cells that Secrete Protein Hormones, 21 Intracellular Segregation and Transport of Polypeptide Hormones, 21 Processes of Hormone Secretion, 24 Structure of a Gene Encoding a Polypeptide Hormone, 25 Regulation of Gene Expression, 26 Generation of Biologic Diversification, 30

Los avances en los campos de la biologa molecular y celular han proporcionado una nueva perspectiva sobre el funcionamiento mecnico de las clulas. recombinante cido desoxirribonucleico (ADN) la tecnologa y la secuencia (decodificacin) de la humanidad entera y el ratn genomas, hoy es posible analizar la estructura precisa y funcin del ADN, la sustancia gentica que es la base para la vida. El descubrimiento de la bioqumica y de sus propiedades estructurales del ADN proporcionan el marco conceptual con el que iniciar una investigacin sistemtica de los orgenes, desarrollo y organizacin de las formas de vida [1]. La finalizacin de las secuencias completas del genoma humano y del ratn se llev a cabo en los aos 2003 y 2004, y la anotacin de la informacin codificada est casi terminado. La disponibilidad de un modelo completo de la estructura y organizacin de todos los genes que se expresan ahora proporciona una visin profunda de la base de las enfermedades genticamente determinadas. En la prxima dcada, genotipificacin de los individuos poco despus de nacer es probable que sea posible. Los enfoques teraputicos para la correccin de defectos genticos mediante tcnicas de reemplazo de gen es probable que sea una realidad, con lo que aportan perspectivas a los riesgos relativos para el desarrollo de enfermedades. Las hormonas polipeptdicas constituyen un conjunto sumamente importante y diverso de molculas reguladoras codificadas por el genoma cuyas funciones consisten en transmitir informacin especfica entre las clulas y rganos. Este tipo de comunicacin molecular se levant temprano en el desarrollo de la vida y se convirti en un complejo sistema para el control de crecimiento, el desarrollo y la reproduccin y para el mantenimiento de la homeostasis metablica. Estas hormonas, entre ellas muchas de las quimiocinas y citocinas que participan principalmente en la regulacin del sistema inmunolgico, compuesto de aproximadamente 400 o ms protenas pequeas que van desde tan slo tres aminocidos (hormona liberadora de tirotropina o TRH) a 192 aminocidos (crecimiento hormonal). En un sentido ms amplio, estos polipptidos funcionan como hormonas, cuyas acciones en rganos distantes estn mediadas a travs de su transporte a travs del torrente sanguneo, y como comunicadores locales de clula a clula (fig. 3-1). La ltima funcin de las hormonas polipeptdicas se ejemplifica en su elaboracin y la secrecin dentro de las neuronas de los sistemas centrales, autonmicas y nervioso perifrico, donde actan como neurotransmisores y en los leucocitos en los que modulan las respuestas inmunes. Estos mltiples modos de expresin de los genes de la hormona polipeptdica han despertado gran inters en las funciones especficas de estos pptidos y los mecanismos de su sntesis y liberacin. Este captulo examina las diversas estructuras de los genes que codifican las hormonas peptdicas y los mltiples mecanismos que regulan su expresin. La sntesis de las hormonas no peptdico (por ejemplo, las catecolaminas, hormonas tiroideas y las hormonas esteroides) implica la accin de enzimas mltiples y de ah la expresin de mltiples genes, los cuales se discuten en los distintos captulos dedicados a dichas hormonas.

Figura 3-1 Diferentes modos de utilizacin de hormonas polipeptdicas en la expresin de sus acciones biolgicas. Las hormonas peptdicas se expresan en por lo menos cuatro formas en el cumplimiento de sus funciones como molculas mensajeras celulares: (1) el modo de secrecin interna, por efectos de la comunicacin entre los rganos (por ejemplo, el eje hipfiso-tiroideo), (2) el modo paracrino, para la comunicacin entre los adyacentes las clulas, a menudo situadas en los rganos endocrinos, (3) el modo neuroendocrino, para la sntesis y liberacin de pptidos de las neuronas especializadas

peptidrgicas para la accin sobre los rganos distantes a travs del torrente sanguneo (por ejemplo, los pptidos neuroendocrinos del hipotlamo), y (4) el modo de neurotransmisor, para la accin de pptidos en concierto con los clsicos transmisores amino aminrgico derivados de cido en la red de comunicacin neuronal. polipptidos idnticas se utilizan con frecuencia en el sistema nervioso, tanto como las hormonas neuroendocrinas y como neurotransmisores. En algunos casos, el producto se utiliza el mismo gen en los cuatro modos de expresin. Evolucin de las hormonas peptdicas y sus funciones Las hormonas peptdicas levant temprano en la evolucin de la vida. De hecho, los polipptidos que son estructuralmente similares a los pptidos de mamferos estn presentes en los vertebrados inferiores, insectos, hongos y bacterias. [2] Un ejemplo de la evolucin temprana de pptidos reguladores es la -factor (feromona apareamiento) de levadura, que es similar en su estructura a la hormona liberadora de gonadotropina (GnRH). [3] El ms antiguo miembro de la familia colecistoquinina-de los pptidos de gastrina apareci hace por lo menos 500 millones de aos en la protochordate intestinalis Ciona [4]. As, los genes que codifican las hormonas de polipptidos, pptidos y en especial de reglamentacin, se desarroll temprano en el desarrollo de la vida y cumpli inicialmente con la funcin de la comunicacin de clula a clula para hacer frente a problemas relacionados con la alimentacin, crecimiento, desarrollo y reproduccin. Como rganos especializados conectados por un sistema circulatorio desarrollados durante la evolucin, de forma similar, si no idnticos, los productos gnicos se convirti en hormonas con fines de comunicacin del rgano a rgano.

Pasos en la expresin de un gen de la protena-codificacin Los pasos involucrados en la transferencia de informacin codificada en el lenguaje polinucletido de ADN al lenguaje cido poli-amino de las protenas biolgicamente activas implican la transcripcin gnica, el procesamiento postranscripcional de los cidos ribonucleico (ARN), la traduccin y el procesamiento posterior a la traduccin de las protenas. La expresin de los genes y la sntesis de protenas puede ser considerada en trminos de varios procesos importantes, uno o varios de los cuales pueden servir de puntos especficos de control en la regulacin de la expresin gnica (fig. 3-2). Figura 3-2 Pasos en la sntesis celular de las hormonas polipeptdicas. Los pasos que tienen lugar dentro del ncleo incluyen la transcripcin de la informacin gentica en un cido ribonucleico mensajero (ARNm) precursor (pre-mRNA), seguido por el procesamiento postranscripcional, que incluye la divisin del ARN, la escisin de los intrones, y reunin de exones, resultando en la formacin de ARNm . Finaliza del mRNA son modificados mediante la adicin de tapas metilguanosina en el extremo 5 'y la adicin de poli (A) tramos en los extremos 3'. El ARNm citoplsmico se ensambla con los ribosomas. Los aminocidos, llevado por ARN de transferencia aminoacylated (ARNt), luego se polimeriza en una cadena polipeptdica. El paso final en la sntesis de protenas es la de procesamiento postraduccional. Estos procesos tienen lugar tanto durante el crecimiento de la cadena polipeptdica naciente (cotraduccional) y despus de la liberacin de la cadena completa (posterior a la traduccin), e incluyen las divisiones de la cadena polipeptdica proteoltica (reconversin de las pre-prohormonas o prohormonas a las hormonas), derivatizations de aminocidos (por ejemplo, glicosilacin, fosforilacin), y cross-linking y montaje de la cadena polipeptdica conformada en su estructura. El diagrama representa la sntesis y el procesamiento posterior a la traduccin de un polipptido segregado tpico, que requiere el transporte vectorial o unidireccional de la cadena polipeptdica a travs de la bicapa membrana del retculo endoplsmico, lo que da lugar en el secuestro del polipptido en la cisterna del retculo endoplsmico, un primer paso en la exportacin de protenas destinadas a la secrecin de la celda (ver fig. 3-6). La mayora de transformacin de traslacin se produce dentro de la clula como se muestra (presecretor) y en algunos casos fuera de la celda, cuando ms divisiones proteolticas o modificaciones de la protena puede tener lugar (post-secretorio). CHO, hidratos de carbono. Los reordenamientos y transposiciones de los segmentos de ADN. Estos procesos ocurren durante muchos aos (eones) en la evolucin, con la excepcin de los mecanismos de reordenamiento gentico poco comn de somticos como el reordenamiento de los genes de inmunoglobulina durante la vida de un individuo. Transcripcin. Sntesis de los resultados de ARN en la formacin de copias de ARN de los dos alelos de genes y es catalizada por la RNA polimerasa factores basales de transcripcin II-asociada. Procesamiento postranscripcional. modificaciones especficas del ARN incluyen la formacin de ARN mensajero (ARNm) a partir del precursor del ARN a travs de la escisin y reunin de segmentos de ARN (intrones y exones) y las modificaciones del extremo 3 'del ARN por poliadenilacin y del extremo 5' mediante la adicin de 7-metilguanina "topes". Traduccin. Los aminocidos son ensamblados por el apareamiento de bases de nucletidos de los trillizos (anticodones) especficos de la "compaa" aminoacylated ARN de transferencia correspondientes a los codones del ARNm obligado a polirribosomas y se polimerizan en las cadenas de polipptidos.

Procesamiento postraduccional y modificacin. ltimos pasos en la sntesis proteica puede implicar una o ms divisiones de los enlaces peptdicos, que se traducen en la conversin de los precursores biosintticos (prohormonas), a las formas intermedias o finales de la protena; derivatizacin de los aminocidos (por ejemplo, glicosilacin, fosforilacin, acetilacin, myristoylation ), y el plegamiento de la cadena polipeptdica transformada en su conformacin nativa. Cada uno de los pasos especficos de la expresin gnica requiere la integracin de las reacciones bioqumicas enzimticas precisa y otros. Estos procesos se han desarrollado para proporcionar alta fidelidad en la reproduccin de la informacin codificada y para proporcionar puntos de control para la expresin del fenotipo de las clulas. El tratamiento posterior a la traduccin de protenas crea la diversidad en la expresin gnica a travs de modificaciones de la protena. Aunque la informacin contenida funcional de una protena codificada en ltima instancia, es la secuencia de aminocidos primaria, las actividades biolgicas especficas son una consecuencia de la orden superior secundaria, terciaria y cuaternaria de las estructuras del polipptido. Dada la amplia gama de posibles modificaciones especficas de los aminocidos, como la glicosilacin, fosforilacin, acetilacin, amidacin, lipidacin, y la sulfatacin, [5] uno de los cuales pueden afectar a la conformacin o la funcin de la protena, un solo gen puede en ltima instancia codificar una amplia variedad de protenas especficas como resultado de los procesos postraduccionales. Las hormonas polipeptdicas se sintetizan en forma de grandes precursores que parecen cumplir varias funciones en los sistemas biolgicos (fig. 3-3), incluyendo (1) el trfico intracelular, el que la clula distingue entre clases especficas de las protenas y los dirige a sus sitios de accin, y (2) la generacin de mltiples actividades biolgicas de una protena comn genticamente codificados por las variaciones regulado o especfico de las clulas en las modificaciones postraduccionales (fig. 3-4).

Figura 3-3 Diagrama representacin de dos configuraciones de los precursores de las hormonas polipeptdicas. Diagramas de redes troncales representan polipptido de secuencias de la protena codificada en el mRNA. Una forma de precursor consiste en la seal de NH2-terminal, o presequence, seguida por la parte apoprotena del polipptido que las necesidades de procesamiento no ms lejos de la actividad proteoltica. Una segunda forma de precursor es un pre-prohormona que consiste en la secuencia de seales NH2-terminal seguida de una poliprotena, o prohormona, secuencia consistente de los dominios de dos o ms pptidos unidos entre s que son posteriormente liberados por las divisiones durante el procesamiento postraduccional de la prohormona. La razn para la sntesis de hormonas polipeptdicas en forma de precursores es slo a medias. Es evidente que las secuencias de NH2-terminal funcional de la seal en las primeras etapas de transporte del polipptido en la va secretora. Prohormones o poliprotenas, a menudo sirven para proporcionar una fuente de mltiples pptidos bioactivos (ver fig. 3-4). Sin embargo, prohormonas que muchos pueden contener secuencias de los pptidos que se eliminan por la escisin y no tienen actividad biolgica conocida, y que se conocen como pptidos crptica, tal vez esperando el descubrimiento de actividades biolgicas nicas. Otros pptidos puede servir como separador entre dos secuencias de pptidos bioactivos (por ejemplo, el pptido C de la proinsulina). En los casos en que se encuentra un pptido bioactivo en el extremo COOH de la prohormona, la secuencia de prohormona NH2-terminal slo puede facilitar la translocacin cotraduccional del polipptido en el retculo endoplsmico (ver fig. 3-6).

Figura 3-4 Diagrama ilustracin de las estructuras primarias de prohormonas varias. Las reas muy oscura de prohormonas denotan las regiones de la secuencia que constituyen conocida pptidos biolgicamente activos que se han desdoblamiento posterior a la traduccin de prohormonas. Secuencias indicado por la eclosin de las regiones precursoras denotan que alteran la especificidad biolgica de esa regin del precursor. Por ejemplo, el precursor contiene la secuencia de la hormona de -estimulante de melanocitos (-MSH), pero cuando ste est unido covalentemente al pptido CLIP, que constituye la hormona corticotropina (corticotropina, ACTH). La somatostatina-28 (SS-28) es una forma NH2-terminal ampliada de la somatostatina-14 (SS-14) que tiene mayor potencia que la SS-14 sobre ciertos receptores. La secuencia neurofisina vinculados a la terminal COOH de la vasopresina (ADH) funciona como una protena transportadora de la hormona ADH durante su transporte por el axn de las neuronas en el que se sintetiza. El precursor proencefalina representa una poliprotena que contiene varios pptidos similares en su secuencia, ya sea met-encefalina (M) o leu-encefalina (L). Procalcitonina y la procalcitonina producto relacionado con el gen (CGRP) comparten secuencias idnticas terminal NH2-, pero difieren en sus regiones terminal COOH-como resultado del splicing alternativo durante el procesamiento postranscripcional del ARN precursor. -LPH, -lipotropina; GLP, el pptido similar al glucagn, IP, que interviene pptido. Todas las hormonas peptdicas y pptidos reguladores estudiados hasta el momento contienen secuencias de la seal o el lder en el amino terminal, estas secuencias helicoidales hidrfobas reconocer sitios especficos en las membranas del retculo endoplasmtico rugoso, lo que resulta en el transporte de polipptidos nacientes en la ruta de secrecin de la celular (v. figs. 3-2 y 3-3 [2] [3]). [6] La consecuencia de las secuencias de seales especializados de las protenas precursoras es que las protenas destinadas a la secrecin son elegidos de una gran cantidad de protenas celulares de otros el secuestro y posterior envasado en grnulos de secrecin y de exportacin de la clula. Adems, la mayora, si no todas, de las hormonas ms pequeas y pptidos reguladores se producen como consecuencia de divisiones postraduccionales de los precursores en el complejo de Golgi de las clulas secretoras.

Subcelulares Estructura de clulas que secretan la protena Hormonas Las clulas cuyas funciones principales son la sntesis y exportacin de protenas contienen altamente desarrollado, especializado organelas subcelulares para la traslocacin de protenas secretadas y sus envases en los grnulos de secrecin. Las vas subcelulares utilizados en la secrecin de protenas se han aclarado en gran medida gracias a los esfuerzos iniciales de Palade [7] (revisado por Jamieson [8]). clulas secretoras contienen una abundancia de retculo endoplsmico, complejo de Golgi y grnulos de secrecin (fig. 3-5). Las protenas que han de ser secretada por las clulas se transfieren durante su sntesis en estas organelas subcelulares, que transportan las protenas de la membrana plasmtica.

Figura 3-5 Representacin esquemtica de las organelas subcelulares involucrados en el transporte y secrecin de hormonas polipeptdicas u otras protenas secretadas dentro de una clula de protenas secretoras. (1) Sntesis de protenas en polirribosomas adjunta al retculo endoplsmico (RER) y la descarga vectorial de protenas a travs de la membrana en la cisterna. (2) Formacin de ida y vuelta vesculas (elementos de transicin) de retculo endoplsmico seguido por su transporte y su incorporacin por el complejo de Golgi. (3) Formacin de grnulos de secrecin en el complejo de Golgi. (4) El transporte de grnulos de secrecin de la membrana plasmtica, la fusin con la membrana plasmtica, y exocitosis que resulta en la liberacin de grnulos contenidos en el espacio extracelular. Tenga en cuenta que la secrecin puede darse por el transporte de vesculas secretoras y grnulos inmaduros, as como los grnulos maduros. Algunos grnulos se recogen y se hidroliza por los lisosomas (crinophagy). Golgi, complejo de Golgi, retculo RER, endoplasmtico rugoso; SER, el retculo endoplsmico liso. (De Habener JF. Biosntesis y la secrecin de la hormona. En Felig P, Baxter JD, Broadus AE, et al, eds. Endocrinologa y Metabolismo. New York: McGraw-Hill, 1981: 29-59). La secrecin de las protenas comienza con la traduccin del ARNm que codifica el precursor de la protena en el retculo endoplasmtico rugoso, que consiste en la elaboracin de polirribosomas adjunta sculos membranosos que contienen cavidades (cisternas). El recin sintetizadas, las protenas nacientes se descargan en las cisternas de transporte a travs de la bicapa lipdica de la membrana. Dentro de las cisternas del retculo endoplsmico, las protenas son transportadas al aparato de Golgi por mecanismos que no se comprenden. El aumento de las protenas de acceso al complejo de Golgi, ya sea por transferencia directa de las cisternas, que se encuentran en continuidad con los canales membranosos del complejo de Golgi, o por va de ida y vuelta vesculas conocidas como elementos de transicin (ver fig. 3-5). Dentro del complejo de Golgi, las protenas son empaquetados en vesculas secretoras o grnulos de secrecin por su incipiente de las pilas de Golgi en forma de grnulos inmaduros. grnulos inmaduros someterse a la maduracin a travs de la condensacin del material protenico y la aplicacin de una capa especfica alrededor de la primera membrana de Golgi. Al recibir los estmulos adecuados extracelular (va de secrecin regulada), los grnulos de migrar a la superficie celular y se fusionan para convertirse en continuo con la membrana plasmtica, lo que resulta en la liberacin de protenas al espacio extracelular, un proceso conocido como exocitosis. La segunda va de transporte intracelular y la secrecin implica el transporte de protenas contenidas en vesculas secretoras e inmaduros grnulos secretores (ver fig. 3-5). Aunque el uso de esta va de transporte alternativo vescula-mediado queda por demostrar de forma concluyente (por lo general se considera un constitutiva, o no regulada, la va), diferentes estmulos extracelulares pueden modular la secrecin de la hormona de forma diferente, dependiendo de la va de secrecin. Por ejemplo, en la glndula paratiroidea y en la lnea celular de las clulas derivadas de la pituitaria corticotropo (ATT-20), recin sintetizadas hormona se libera ms rpidamente que la hormona sintetizada antes. Estos resultados sugieren que la hormona recin sintetizada puede ser transportado a travs de una va de vescula-mediado, sin incorporacin al almacenamiento de grnulos maduros. La segregacin y transporte intracelular de las hormonas polipeptdicas aminocido especfico secuencias codificadas en las protenas sirven como indicadores de direccin en la manipulacin de protenas dentro de las organelas subcelulares. [6] [9] [10] Una clula eucariota tpica sintetiza un estimado de 5.000 protenas diferentes durante su vida til. Estas protenas se sintetizan diferentes por un conjunto comn de polirribosomas. Sin embargo, cada una de las diferentes protenas se dirige a una ubicacin especfica dentro de la clula, donde se expresa su funcin biolgica. Por ejemplo, a grupos especficos de las protenas son transportadas a las mitocondrias, en las membranas, en el ncleo, o en otros orgnulos subcelulares, donde sirven como protenas reguladoras, enzimas o protenas estructurales. Un subconjunto de protenas est diseado especficamente para la exportacin de la celda (por ejemplo, las inmunoglobulinas, la albmina srica, factores de coagulacin de la sangre y las protenas y las hormonas polipeptdicas). Este proceso de transporte de direccin de las protenas involucra sofisticadas seales informativas. Dado que la informacin de estos procesos de translocacin debe residir en su totalidad o en parte dentro de la estructura primaria o en las propiedades conformacionales de la protena, secuencial modificaciones postraduccionales puede ser crucial para determinar la especificidad de la funcin de la protena. Contina las investigaciones de la clasificacin y el trfico de protenas en las clulas han revelado un aumento complejidad ms all del paradigma ilustra en la figura simple. 3-5. [11] La clasificacin secuencial de las protenas a sus destinos finales, ya sean de exportacin de las clulas (secrecin) o dirigida a un compartimiento subcelular o orgnulo, se lleva a cabo no slo en el aparato de Golgi, sino tambin pre-Golgi en el retculo

endoplasmtico y post-Golgi en endosomas y tubulosaccules. [12] Es interesante contemplar que todos y cada uno de los 5000 ms o menos protenas que se expresan en una clula contiene una seal especfica dirigidas a la encargada de dirigir la protena a su destino final. Estas seales dirigidas a consistir en estiramientos de corta de aminocidos en las protenas que sirven como "cdigos de rea" para asegurar su entrega precisa. Moderno protemica y bioinformtica utilizando enfoques son capaces de predecir la localizacin de las clulas basadas en las caractersticas de estas seales de orientacin. [13]

Secuencias en el Procesamiento de la Seal prohormona y la secrecin del pptido Los procesos iniciales de la secrecin de protenas que dan lugar al transporte especfica de las protenas exportadas en la va secretora se estn convirtiendo en una mejor comprensin. [6] [10] [11] [12] [13] [14] [15] indicios iniciales de este proceso vino de las determinaciones de las secuencias de aminocidos de las protenas programada por la traduccin libre de clulas de ARNm codifica polipptidos secretados. [16] Las protenas secretadas se sintetizan como precursores que se extienden en sus terminales NH2 por secuencias de 15 a 30 aminocidos, llamados secuencias de la seal o lder. extensiones de seal de secuencia, o sus equivalentes funcionales, son necesarios para la orientacin de la protena ribosomal o incipientes a las membranas especficas y para el transporte vectorial de la protena a travs de la membrana del retculo endoplsmico. El surgimiento de la secuencia de seales de la subunidad ribosomal grande, el complejo ribosomal especficamente hace contacto con la membrana, lo que resulta en la translocacin del polipptido naciente a travs de la membrana del retculo endoplsmico en la cisterna como el primer paso en el transporte del polipptido dentro de la va secretora. Estas observaciones inicialmente dej sin respuesta la pregunta de cmo polirribosomas especficas que se traducen ARNm que codifican protenas secretoras reconocen y se adhieren al retculo endoplsmico (fig. 3-6).

Figura 3-6 Diagrama que representa los eventos celulares en las etapas iniciales de la sntesis de una hormona polipeptdica de acuerdo a la hiptesis de la seal. En este esquema, una partcula de reconocimiento de la seal, que consiste en un complejo de seis protenas y un RNA (RNA 7S), interacta con el pptido seal de NH2-terminal de la cadena polipeptdica naciente despus de aproximadamente 70 aminocidos se polimerizan, lo que resulta en el arresto de un mayor crecimiento de la cadena polipeptdica. El complejo de la partcula de reconocimiento de seal y de la cadena naciente polirribosoma permanece en un estado de detencin de traslacin hasta que se reconoce y se une a una protena de acoplamiento, que es una protena receptora localizada en la cara citoplasmtica de la membrana reticular endoplsmico. Esta interaccin del complejo de la seal de la partcula de reconocimiento de acoplamiento con la protena libera el bloque de traslacin, y se reanuda la sntesis de protenas. La cadena polipeptdica naciente se descarga a travs de la membrana bicapa en la cisterna del retculo endoplsmico y es liberada por el pptido seal mediante fragmentacin con una peptidasa seal situada en la cara cisternal de la membrana. En este modelo, el pptido seal se escinde de la cadena polipeptdica por la peptidasa seal antes de la cadena se completa (hendidura cotraduccional). La configuracin del polipptido durante el transporte a travs de la membrana y las fuerzas y mecanismos responsables de su desplazamiento no se conocen. El lazo, o la horquilla, la configuracin de la cadena que se muestra es un modelo arbitrario, otros modelos son igualmente posibles. Debido a que las membranas microsomales reproducir in vitro la actividad de transformacin de las clulas intactas, fue posible identificar macromolculas responsable de la tramitacin del precursor y para las actividades de translocacin. [17] El retculo endoplsmico y el citoplasma contener un conjunto de molculas, llamado una partcula de reconocimiento de seal complejo, que consta de al menos 16 protenas diferentes, entre ellos tres Triphosphatases guanosina para generar energa [18] y un 7S ARN. [6] [10] [19] (la ltima revisin en referencia 20). Este complejo, o de partculas, se une a los polirribosomas que participan en la traduccin de ARNm codifica polipptidos secretora, cuando la secuencia de seales NH2-terminal de primera surge de la subunidad grande del ribosoma. La interaccin especfica de la partcula de reconocimiento de seales con la secuencia de seales incipientes y las detenciones polirribosoma otra traduccin del ARNm. La protena naciente permanece en un estado de la traduccin detenidos hasta que encuentra una protena de alta afinidad de unin en el retculo endoplasmtico, el reconocimiento de la seal del receptor de partculas, o de acoplamiento de la protena. [6] En la interaccin con la protena de acoplamiento especfico, el bloque de traslacin es liberado y se reanuda la sntesis de protenas. La protena se transfiere a travs de la membrana del retculo endoplsmico a travs de un tnel protenico llamado translocn [20]. En algn momento, cerca de la terminacin de la sntesis de la cadena polipeptdica, la secuencia de seales NH2-terminal se escinde del polipptido por una peptidasa seal especfica se encuentra en la superficie de la membrana cisternal retculo

endoplsmico. La supresin de la secuencia de seales hidrofbicas libera la protena (prohormona o de la hormona) para que pueda asumir su estructura secundaria caracterstica durante el transporte a travs del retculo endoplsmico y el aparato de Golgi. Curiosamente, despus de su escisin de la protena por la peptidasa seal, el pptido seal puede ser a veces ms hendidas en la membrana del retculo endoplsmico para producir un pptido biolgicamente activo. La secuencia de seales de preprolactin de 30 aminocidos, por ejemplo, est escindida por una peptidasa pptido seal para dar un pptido cargos de los 20 aminocidos que se libera en el citosol, donde se une a la calmodulina e inhibe la fosfodiesterasa Ca2-calmodulinadependiente. [21] Esta secuencia en el transporte de direccin de polipptidos especficos garantiza un procesamiento ptimo de protenas secretoras cotraduccional, incluso cuando comienza la sntesis en los ribosomas libres. La presencia de una forma citoplasmtica del complejo de la seal de partcula de reconocimiento de las garantas que los bloques de traduccin que la sntesis de las protenas presecretor no se completa en el citoplasma, la transferencia eficaz de las protenas se produce slo despus de que se ha hecho contacto con el receptor especfico o de acoplamiento protena en la membrana. Aunque la identificacin de la partcula de reconocimiento de la seal y la protena de acoplamiento explica la especificidad de la unin de los ribosomas que contienen ARNm que codifican las protenas de secrecin, no explica el modo de desplazamiento de la cadena polipeptdica naciente a travs de la bicapa de la membrana. Adems la diseccin y el anlisis de la membrana se han identificado otras macromolculas que son responsables del proceso de transporte [6]. Celular tratamiento de Prohormones Las secuencias de la seal de prehormones y pre-prohormonas estn involucrados en el transporte de estas molculas, pero la funcin de los precursores de la hormona intermedios (prohormonas) no se entiende completamente. La conversin de prohormonas a sus productos finales se inicia en el aparato de Golgi. Por ejemplo, el tiempo que transcurre entre la sntesis de la hormona del pre-proparathyroid y la primera aparicin de la hormona paratiroidea se correlaciona estrechamente con el tiempo necesario para que los granos radioautographic para alcanzar el aparato de Golgi. [22] Del mismo modo, la conversin de proinsulina a insulina se lleva a cabo alrededor de una hora despus de la sntesis de proinsulina es completa, y el procesamiento de proinsulina a insulina y pptido C se lleva a cabo durante el transporte dentro de los grnulos de secrecin. [23] La conversin de prohormonas a las hormonas tambin puede ser bloqueado por los inhibidores de la produccin de energa celular, como antimicina [A y dinitrofenol 24] y por las drogas que interfieren con las funciones de los microtbulos (vinblastina, colchicina). [25] Por lo tanto, la translocacin de la prohormona del retculo endoplasmtico rugoso al complejo de Golgi depende de la energa metablica e implica probablemente microtbulos. No hay evidencia de que las secuencias que son especficos de la prohormona contribuyen o son qumicamente implicados en el transporte de la protena recin sintetizada por el retculo endoplasmtico rugoso al aparato de Golgi o que estn involucrados en el embalaje de la hormona en las vesculas o grnulos . Los anlisis de las estructuras de los productos primarios de la traduccin de mRNAs que codifican protenas secretoras indican que muchos de estos no son sintetizados en forma de prohormona intermedios (ver fig. 3-3). Sigue siendo extrao que algunas protenas secretoras (por ejemplo, la hormona paratiroidea, insulina, albmina srica) se forman a travs de los precursores intermedios, mientras que otros (por ejemplo, la hormona del crecimiento, prolactina, albmina) no lo son. restricciones de tamao pueden ser colocados en la longitud de un polipptido de secrecin. Cuando la bioactividad de los pptidos reside en los extremos COOH de los precursores (por ejemplo, la somatostatina, calcitonina, gastrina), extensiones NH2-terminal puede ser obligado a proporcionar una calidad suficiente "spacer" secuencia para permitir que la secuencia de seales de la cadena polipeptdica naciente creciente emergen de la subunidad grande del ribosoma para la interaccin con la partcula de reconocimiento de seales y de proporcionar la longitud adecuada para abarcar polipptido de la subunidad ribosomal grande y la membrana del retculo endoplsmico durante el transporte vectorial del polipptido naciente travs de la membrana (ver fig. 3-6) . Cuando el producto hormonal final es 100 aminocidos de longitud o ms (por ejemplo, la hormona del crecimiento, prolactina, o y subunidades de las hormonas glicoprotena), puede haber ningn requisito para una prohormona intermedios. Aunque las funciones exactas de prohormonas siguen siendo desconocidos, ciertos detalles de sus divisiones han sido establecidas. A diferencia de la situacin con prehormones, en la que los aminocidos en el punto de corte entre la secuencia de la seal y el resto de la molcula (hormonas o prohormonas) varan de una hormona a la siguiente, los sitios de corte de la prohormona intermedios consisten en la base amino cido lisina o arginina, o ambos, generalmente de dos a tres en tndem. Esta secuencia se rompe preferentemente por endopeptidasas con actividades como la tripsina. Especficas prohormona de la enzima convertidora (PC) consisten en una familia de al menos ocho de tales enzimas. [26] [27] [28] La ms estudiada de la isoenzimas son PC2 y PC1 / 3, que son responsables de las divisiones de la proinsulina entre la cadena A / pptido C y la cadena B / pptido C, respectivamente. Un paciente rara falta PC1 presentado con la obesidad infantil, hipogonadismo hipogonadotrpico, y hipercortisolismo y se encontr que tienen niveles elevados de proinsulina y es de suponer alteraciones generalizadas en la modificacin neuropptido [29]. Interrupcin selectiva del gen en ratones PC2 result en el procesamiento de la proinsulina incompleta, dejando Una cadena y el pptido C intacto. [30] En particular, proglucagon en el pncreas sigue siendo totalmente sin procesar, lo que indica que PC2 se requiere para la formacin de glucagn. Como consecuencia de la actividad defectuosa PC2 y bajos niveles de glucagn, los ratones tienen hipoglucemia crnica grave. Despus de clivaje endopeptidasa, los residuos restantes bsicos son selectivamente eliminados por exopeptidases con actividad semejante a la de la carboxipeptidasa B. En los casos en los que se amidada el residuo terminal COOH de la hormona peptdica, un proceso que parece mejorar la estabilidad de un pptido, confindole resistencia a la carboxipeptidasa, enzimas

especficas amidacin (pptido amidating monooxigenasas) en los trabajos del complejo de Golgi en concierto con las enzimas de corte para la modificacin de la terminal COOH de los pptidos bioactivos. [31] [32] Todos proproteins prohormonas y se rompen por PC procesos enzimticos en el complejo de Golgi de las clulas de diversos orgenes. La importancia de las divisiones especficas de prohormonas concreto sigue siendo no se entienden completamente, al igual que la razn de la existencia de prohormona intermedios en algunas pero no todas las protenas de secrecin. Como se indic anteriormente, los pptidos precursores eliminado de la prohormonas pueden tener actividades biolgicas que son intrnsecos an no reconocido. Los procesos de secrecin hormonal Especficas estmulos extracelulares controlan la secrecin de hormonas polipeptdicas. Los estmulos consisten en cambios en el equilibrio homeosttico; los productos hormonales a conocer en respuesta a los estmulos actan sobre los rganos diana respectivos para restablecer la homeostasis (fig. 3-7). Los sistemas endocrino generalmente consisten en mecanismos de retroalimentacin de bucle cerrado de tal manera que, si las hormonas del rgano estimular un rgano B, B de rganos, a su vez segrega hormonas que inhiben la secrecin de hormonas de rganos A. Las acciones concertadas de tanto positivas como negativas influencias hormonales mantener as homeostasis. Un ejemplo de dicha regulacin de retroalimentacin negativa es el control de la secrecin de la hormona corticotropina (ACTH) por la glndula pituitaria anterior. El aumento de ACTH estimula la corteza suprarrenal para producir y secretar cortisol, que a su vez retroalimenta para reprimir an ms la secrecin hipofisaria de ACTH. Estos procesos de reglamentacin tambin pueden incluir circuitos de retroalimentacin en el que las sustancias no hormonales controlados por los rganos diana regulan la secrecin de la hormona. Por ejemplo, un aumento en la concentracin de electrolitos plasmticos, como consecuencia de la deshidratacin estimula la liberacin de arginina vasopresina (tambin llamada hormona antidiurtica [ADH]) en el lbulo neural de la glndula pituitaria, y la vasopresina a su vez acta sobre el rin para aumentar la reabsorcin de agua desde el tbulo renal, con lo que reajustar las concentraciones sricas de electrolitos hacia niveles normales.

Figura 3-7 ciclos de retroalimentacin de regulacin del eje hipotlamo-hipfisis de rganos diana. Al ser una combinacin de ambos factores inhibidores y estimulantes, hormonas actan a menudo en concierto para mantener el equilibrio homeosttico en la presencia de perturbaciones fisiolgicas o fisiopatolgicas. Las acciones concertadas de las hormonas suelen establecer circuitos cerrados de retroalimentacin por los efectos estimulantes e inhibidoras acoplado a mantener la homeostasis.

En muchos casos, la regulacin endocrina es complejo e involucra a las respuestas de varias glndulas endocrinas y los rganos destinatarios respectivos. Despus de una comida, la liberacin de una docena o ms de las hormonas se desencadena como consecuencia de la distensin gstrica, las variaciones en el pH del contenido del estmago y el duodeno, y el aumento de las concentraciones de glucosa, cidos grasos y aminocidos en la sangre. El aumento en la glucosa plasmtica y los niveles de aminocidos estimula la liberacin de insulina y el pptido hormonas incretinas 1 similar al glucagn y el pptido insulinotrpico dependiente de glucosa y suprime la liberacin de glucagn por el pncreas. Ambos efectos de promover la captacin neta de glucosa por el hgado, el transporte celular y la insulina aumenta la captacin de la glucosa y los niveles sanguneos ms bajos de glucagn disminuir el flujo de glucosa, debido a las tasas de disminucin de la glucogenlisis y la gluconeognesis.

Kronenberg: Williams Textbook of Endocrinology, 11th ed. Copyright 2008 Saunders, An Imprint of Elsevier CHAPTER 4 MECHANISM OF ACTION OF HORMONES THAT ACT ON NUCLEAR RECEPTORS Mitchell A. Lazar Ligands that Act Via Nuclear Receptors, 38 Subclasses of Nuclear Receptor Ligands, 38 Orphan Receptors, 39 Variant Receptors, 39 Regulation of Ligand Levels, 39 Nuclear Receptor Signaling Mechanisms, 40 Domain Structure of Nuclear Receptors, 40 Nuclear Localization, 41 Hormone Binding, 41 Target Gene Recognition by Receptors, 42 Receptor Dimerization, 42 Receptor Regulation of Gene Transcription, 43 Las hormonas pueden ser divididos en dos grupos en funcin del lugar en que funcionan en la clula diana. El primer grupo incluye las hormonas que no entran en las clulas, sino que la seal a travs de segundos mensajeros generados por la interaccin con los receptores en la superficie celular. Todas las hormonas polipeptdicas, as como monoaminas y las prostaglandinas, utilizan receptores de superficie celular (vase el captulo 5, "Mecanismo de accin de las hormonas que actan en la superficie celular"). El segundo grupo, el enfoque de este captulo, incluye hormonas que pueden entrar en las clulas. Estas hormonas se unen a receptores intracelulares que funcionan en el ncleo de la clula diana para regular la expresin gnica. Clsica hormonas que utilizan receptores intracelulares incluyen la tiroides y las hormonas esteroides.

Las hormonas sirven como una forma importante de comunicacin entre los diferentes rganos y tejidos, permitiendo que las clulas especializadas en los organismos complejos para responder de manera coordinada a los cambios en los entornos internos y externos. Clsica hormonas endocrinas, como las hormonas tiroideas y esteroides, son secretadas por las glndulas de secrecin interna y se distribuyen por todo el cuerpo a travs del torrente sanguneo. Estas hormonas se descubrieron mediante la purificacin de las sustancias biolgicamente activas de las glndulas claramente definible. Se reconoce que muchas otras molculas de sealizacin compartir con hormonas tiroideas y esteroides de la capacidad de funcionar en el ncleo para transmitir seales intercelulares y del medio ambiente. No todas estas molculas se producen en los tejidos glandulares. Adems, mientras que algunas de estas molculas de sealizacin llegar a los tejidos diana a travs del torrente sanguneo como el clsico hormonas endocrinas, otros tienen funciones paracrina (es decir, actan sobre las clulas adyacentes) o funciones autocrina (es decir, actan sobre la clula de origen). Adems de los clsicos de esteroides y las hormonas tiroideas, lipoflicas molculas de sealizacin que utilizan receptores nucleares son las siguientes: los derivados de metabolitos vitaminas A y D; endgenos como oxysterols y los cidos biliares, y los productos qumicos no naturales se encuentran en el medio ambiente (xenobiticos). Estas molculas se denominan genricamente como ligandos para los receptores nucleares. Los receptores nucleares para todas estas molculas de sealizacin son estructuralmente relacionados y referidos colectivamente como la superfamilia de receptores nucleares. [1] [2] [3] El estudio de estos receptores es un rpido movimiento y campo en evolucin, y los lectores interesados en actualizaciones e informacin ms detallada pueden visitar la sealizacin del receptor nuclear Atlas (http://www.nursa.org/index.cfm).

Los ligandos Caractersticas

que generales

actan de

a los

travs ligandos

de del

receptores receptor

nucleares nuclear

A diferencia de las hormonas polipeptdicas que funcionan a travs de receptores de superficie celular, no ligandos para los receptores nucleares estn directamente codificadas en el genoma. Por el contrario, los ligandos de receptores nucleares son pequeas (peso molecular 1000 [daltons d]) y lipoflicos, lo que les permite entrar en las clulas. La captacin celular de los ligandos del receptor nuclear puede ser un proceso pasivo, pero en algunos casos se trata de una protena de transporte de membrana. Por ejemplo, el transportador de aniones orgnicos oatp3 media entrada hormona tiroidea en las clulas. [4] La lipofilia de ligandos de receptores nucleares tambin les permite ser absorbido por el tracto gastrointestinal, lo que facilita su uso en el reemplazo de los tratamientos farmacolgicos de los estados de enfermedad. Otra caracterstica comn de ligandos naturales de los receptores nucleares es que todos se derivan de la dieta, el medio ambiente, y los precursores metablicos. En este sentido, la funcin de estos ligandos y sus receptores es traducir el humor de los entornos externo e interno en cambios en la expresin gnica. Su papel fundamental en el mantenimiento de la homeostasis en los organismos multicelulares se destaca por el hecho de que los receptores nucleares se encuentran en todos los vertebrados, as como los insectos, pero no en organismos unicelulares como las levaduras [5]. Debido a que los ligandos de los receptores nucleares son lipoflicas, la mayora son fcilmente absorbido por el tracto gastrointestinal. Esto hace que los objetivos de receptores nucleares excelente para las intervenciones farmacuticas. Por lo tanto, adems de ligandos naturales, muchas drogas en uso clnico objetivo receptores nucleares. Estos van desde los que se utilizan para tratar las deficiencias especficas de la hormona a los utilizados para tratar enfermedades comunes multignicas como la inflamacin, cncer y diabetes tipo 2.

Las subclases de ligandos del receptor nuclear Una clasificacin de los ligandos de receptores nucleares se indica en la Tabla 4-1 y se describe a continuacin. TABLE 4-1 -- NUCLEAR RECEPTOR LIGANDS AND THEIR RECEPTORS Classical Hormones Thyroid Hormone: Thyroid hormone receptor (TR), subtypes , Estrogen: Estrogen receptor (ER), subtypes , Testosterone: Androgen receptor (AR) Progesterone: Progesterone receptor (PR) Aldosterone: Mineralocorticoid receptor (MR) Cortisol: Glucocorticoid receptor (GR) Vitamins 1, 25-(OH)2-Vitamin D3: Vitamin D receptor (VDR) All-trans-retinoic acid: Retinoic acid receptor, subtypes , , ) 9-cis-retinoic acid: Retinoid X receptor (RXR), subtypes , , ) Metabolic Intermediates and Products Fatty acids: Peroxisome proliferator activated receptor (PPAR), subtypes , , ) Oxysterols: Liver X receptor (LXR), subtypes , ) Bile acids: Bile acid receptor (BAR)

Xenobiotics Pregnane X receptor (PXR), Constitutive androstane receptor (CAR)

Las hormonas clsica Las hormonas clsica que utilizan para la sealizacin de receptores nucleares son hormonas tiroideas y las hormonas esteroides. Las hormonas esteroides incluyen cortisol, la aldosterona, estradiol, progesterona y testosterona. En algunos casos (por ejemplo, la hormona tiroidea de los receptores [TR] y genes, receptores de estrgeno [ER] y ), hay mltiples genes del receptor de codificacin mltiples receptores. receptores mltiples para la misma hormona tambin puede derivar de un solo gen, ya sea por el uso de promotores alternativos o splicing alternativo (por ejemplo, 1 y 2 TR). Por ltimo, algunos receptores pueden mediar en la seal de mltiples hormonas. Por ejemplo, el de mineralocorticoides (aldosterona) receptor (RM) tiene igual afinidad por cortisol [6] y, probablemente, funciona como un receptor de glucocorticoides en algunos tejidos, como el cerebro, y el receptor de andrgenos (AR) se une y responde a la testosterona y dihidrotestosterona (DHT) [7]. Vitaminas Las vitaminas se descubrieron los componentes esenciales de una dieta saludable. Dos vitaminas liposolubles, A y D, son precursores de importantes molculas de sealizacin que actan como ligandos de receptores nucleares. Los precursores de la vitamina D se sintetiza y almacena en la piel y se activa por la luz ultravioleta; vitamina D tambin puede derivarse de fuentes de alimentacin. La vitamina D se convierte en el hgado a 25 (OH) vitamina D y en el rin a 1,25 - (OH) 2-vitamina D3, el ligando natural ms potente del receptor de la vitamina D (VDR). El 1hidroxilacin de la 25 (OH) vitamina D est fuertemente regulado, y 1,25 - (OH) 2-D3 acta como una hormona de vitamina circulante. La vitamina A se almacena en el hgado y se activa a travs del metabolismo del cido todo-trans-retinoico, que es un ligando de alta afinidad para los receptores del cido retinoico (RAR). El cido retinoico es probable que funcione como una molcula de sealizacin en paracrinos, as como las vas endocrinas. El cido retinoico tambin se convierte en su 9-cis-ismero, que es un ligando para otro receptor nuclear llamado el receptor retinoide X (RXR). [8] Se trata de los retinoides y sus receptores son esenciales para la vida normal y el desarrollo de mltiples rganos y tejidos [9]. Tambin tienen utilidad farmacutica de condiciones que van desde enfermedades de la piel a la leucemia. Intermediarios metablicos y Productos Algunos receptores nucleares se han descubierto para responder a las naturales, productos metablicos endgenos. Los receptores activados por proliferadores de peroxisomas (PPAR) constituyen la mejor definicin de la subfamilia metabolito de deteccin de receptores nucleares. [10] Hay tres subtipos, y todos son activados por los cidos grasos poliinsaturados. No solo de cidos grasos tiene afinidad particularmente elevado para cualquier PPAR, y es posible que estos receptores pueden funcionar como integradores de la concentracin de un nmero de cidos grasos. PPAR se expresa principalmente en el hgado; hasta la fecha, el ligando natural con mayor afinidad por el PPAR es un eicosanoides, 8 (S)-cido hidroxieicosatetraenoico, [11] [12] aunque la evidencia reciente sugiere que el ligando natural puede ser un derivado del cido graso de la liplisis de lipoprotenas ricas en triglicridos circulantes. [13] La clase de medicamentos fibratos para reducir los lpidos son ligandos potente para PPAR, y el nombre de PPAR se deriva de la capacidad de estos compuestos para inducir la proliferacin de peroxisomas en el hgado. [ 14] De hecho, la estimulacin de la oxidacin de cidos grasos es una de las funciones fisiolgicas principales de PPAR. Los PPARs otros ( y ) son estructuralmente relacionadas pero no son activados por proliferadores de peroxisomas. PPAR- (tambin conocido como PPAR-) es omnipresente, y sus ligandos-otros no-que los cidos grasos se caracterizan tambin. La activacin de PPAR parece aumentar el metabolismo oxidativo en el msculo esqueltico y la grasa. PPARg se expresa principalmente en las clulas grasas (adipocitos) y es necesaria para la diferenciacin a lo largo del linaje de los adipocitos. [15] PPARg se expresa tambin en otros tipos celulares, incluyendo colonocitos, macrfagos y clulas endoteliales vasculares, donde se puede jugar fisiolgicos, as como funciones patolgicas. El ligando natural para PPARg no se conoce, aunque la prostaglandina derivados J tienen la mayor afinidad (en el rango micromolar). [16] [17] [18] Es emocionante saber que PPARg parece ser el blanco de las tiazolidindionas antidiabticos que mejoran la sensibilidad a la insulina. [15] [19] Se trata de obligar a los agentes farmacuticos de PPARg con afinidades nanomolar, y ligandos PPARg no tiazolidinediona tambin sensibilizadores de insulina, implicando ms PPARg en este papel fisiolgico. Otro de los receptores nucleares que responde metabolito, el hgado llamada receptor X (LXR), se activa por oxysterol intermedios en la biosntesis del colesterol. Los ratones que carecen LXR- han drsticamente menor capacidad para metabolizar el colesterol. [20] Otro de los receptores "hurfanos", receptor de cido biliar (BAR),

tambin conocido como FXR, o "farnesil receptor X", es probable que desempee un papel en la regulacin de sntesis de la bilis y la circulacin en condiciones normales, as como estados de la enfermedad [8].

Xenobiticos Otros receptores nucleares parecen funcionar como integradores de seales exgenas del medio ambiente, incluyendo endobiotics naturales (por ejemplo, productos medicinales y de las toxinas encontradas en las plantas) y xenobiticos (compuestos que no son de origen natural). [14] En estos casos, el papel de la activa nucleares receptor es inducir las enzimas del citocromo P450 que facilitan la desintoxicacin de compuestos potencialmente peligrosos en el hgado. Los receptores de esta categora incluyen SXR, o esteroles y el receptor de xenobiticos (tambin conocido como pregnano receptor X, o PXR), el receptor [15] y CAR, o constitutiva androstan. [16] Curiosamente, PPAR tambin se activa por determinadas sustancias qumicas ambientales. A diferencia de otros receptores nucleares que tienen gran afinidad por los ligandos muy especficos, los receptores de xenobiticos tienen baja afinidad por un gran nmero de ligandos, lo que refleja su funcin en defensa de un ambiente variado y difcil. Aunque estos compuestos xenobiticos claramente no son "hormonas" en el sentido clsico, la funcin de estos receptores nucleares es coherente con el tema general de ayudar al organismo a hacer frente a los retos medioambientales. Receptores hurfanos La superfamilia de receptores nucleares es una de las ms grandes familias de factores de transcripcin. Las hormonas y vitaminas que acabamos de describir en cuenta para las funciones de slo una fraccin del nmero total de receptores nucleares. El resto han sido designados como receptores hurfanos porque sus ligandos putativas no se conocen [21]. De los anlisis de los ratones y los seres humanos con mutaciones en diferentes receptores hurfanos, es evidente que muchos de estos receptores son necesarios para la vida o el desarrollo de rganos especficos que van desde los ncleos del cerebro a las glndulas endocrinas. Algunos receptores hurfanos parecen estar activas en la ausencia de ligando ("constitutivamente activo") y no pueden responder a un ligando natural. Sin embargo, todos los receptores conocidos para responder a los metabolitos y los compuestos del medio ambiente se han descubierto como los hurfanos. Por lo tanto, es probable que las futuras investigaciones adicionales que se encuentran receptores hurfanos funcionan como receptores para fisiolgicas, farmacolgicas, o ligandos del medio ambiente.

Variante Receptores Segn lo discutido, el carboxilo (C-) terminal de los receptores nucleares es responsable de la unin de la hormona. En el caso de los receptores nucleares pocos, incluyendo TR y el receptor de glucocorticoides, splicing alternativo lleva a la produccin de los receptores de la variante con un nico extremo C-terminal que no se unen al ligando. [22] [23] Estos receptores se expresan normalmente variante, pero su relevancia biolgica es incierta. Se ha especulado que modulan la accin del receptor de la clsica a la que se relacionan mediante la inhibicin de su funcin. Otros tipos de variantes que normalmente ocurre receptores nucleares carecen de un clsico de cido desoxirribonucleico (ADN) dominio de unin (ver "Target Gene reconocimiento por los receptores"). Estos incluyen el DAX-1, que se encuentra mutado en la enfermedad humana, [24] y SHP-1. [25] Sus ligandos, en su caso, no se conocen, y es probable que el DAX-1 y SHP-1 se unen a reprimir y las acciones de los otros receptores. Raras, natural mutaciones de los receptores hormonales pueden causar resistencia a la hormona en los pacientes afectados. [26] La herencia del fenotipo de resistencia hormonal puede ser dominante si el receptor mutante inhibe la accin del receptor normal, como con la resistencia a la hormona tiroidea o ligandos PPARg. [26] La herencia es recesiva si los resultados de una mutacin en la prdida completa de la funcin del receptor, como ocurre con el sndrome de raquitismo hereditario resistente D 1,25-dihidroxivitamina. [27] La herencia tambin puede ser ligada al cromosoma X, al igual que el andrgeno mutado receptores en los sndromes de insensibilidad a los andrgenos, incluyendo la feminizacin testicular [28].

Regulacin de los niveles de ligandos Ligando los niveles se puede regular en una serie de formas (Tabla 4-2). Un precursor dietticos no pueden estar disponibles en cantidades necesarias, como ocurre en el hipotiroidismo debido a la carencia de yodo. Hormonas hipofisarias (por ejemplo, hormona estimulante del tiroides) regulan la sntesis y secrecin de hormonas tiroideas clsica y un esteroide. Cuando las glndulas que sintetizan estas hormonas no, la deficiencia de la hormona puede ocurrir. TABLE 4-2 -- MECHANISMS REGULATING LIGAND LEVELS Precursor availability

Synthesis Secretion Activation (prohormone active hormone) Deactivation (active hormone inactive hormone) Elimination (hepatic, renal clearance) Muchos de los ligandos del receptor nuclear se convierte enzimticamente de prohormonas inactivas a la hormona biolgicamente activa (por ejemplo, 5 'desyodacin de tiroxina] [T4 en triyodotironina T3] [consulte el Captulo 10). En otros casos, una hormona es precursor de otro (por ejemplo, la aromatizacin de la testosterona en estradiol). Biotransformacin puede ocurrir en un tejido especfico que no es el objetivo principal de la hormona (por ejemplo, 1-hidroxilacin renal de vitamina D, ver captulo 27) o puede ocurrir principalmente en los tejidos de destino (por ejemplo, 5-reduccin de la testosterona a DHT; vase el captulo 18). Deficiencia o inhibicin farmacolgica de esta enzima puede tambin reducir los niveles de la hormona [29]. Las hormonas pueden ser inactivados por los mecanismos normales de la depuracin heptica o renal o por procesos enzimticos ms especficos. En este ltimo caso, la reduccin en la actividad enzimtica, debido a mutaciones genticas o farmacolgicas agentes pueden dar lugar a sndromes de exceso de hormona, por ejemplo, la desactivacin renal de cortisol por deshidrogenasa 11--hidroxiesteroide (11-OHSD). Porque, como se seal anteriormente, el cortisol puede activar el receptor mineralocorticoide, la insuficiente actividad 11-OHSD debido a la ingestin de regaliz, la mutacin de genes, o los niveles de cortisol muy altas causas de los sndromes de exceso de mineralocorticoides aparente [30]. Mecanismos de sealizacin del receptor nuclear Los receptores nucleares son protenas multifuncionales que transduce las seales de sus ligandos afines. Caractersticas generales de los receptores nucleares de sealizacin se ilustran en la figura. 4-1.

Figura 4-1 Transduccin de seales por las hormonas y otros ligandos que actan a travs de receptores nucleares. Educacin en derechos humanos, elemento hormonal respuesta; ARNm, cido ribonucleico mensajero.

En primer lugar, el ligando y el receptor nuclear debe llegar al ncleo. El receptor nuclear tambin deben unirse a su ligando con alta afinidad. Debido a que una funcin principal del receptor es regular selectivamente la transcripcin de genes diana, debe reconocer y unirse a elementos promotores de los genes objetivo correspondiente. Uno de los mecanismos discriminatorios es dimerizacin de un receptor con una segunda copia de s mismo o con otro receptor nuclear. El receptor de ADN obligados tambin deben trabajar en el contexto de la cromatina a la seal de la maquinaria de transcripcin basal para aumentar o disminuir la transcripcin del gen diana. A lo largo de la siguiente discusin sobre los mecanismos y la regulacin de la sealizacin por receptores nucleares, se debe tener en cuenta que algunos mecanismos bsicos son generalmente utilizados por muchos o todos los miembros de la superfamilia de receptores nucleares, mientras que otros mecanismos de difundir la especificidad que es crucial para el efectos biolgicos muy diferentes de las muchas hormonas y ligandos que utilizan estos receptores relacionados.

Estructura del dominio de los receptores nucleares Los receptores nucleares son protenas cuyos pesos moleculares son generalmente entre 50.000 y 100.000 d. Todos ellos comparten una serie comn de dominios, conocidos como la A a la F (fig. 4-2). Esta descripcin lineal de los receptores es til para describir y comparar los receptores, pero no captura el papel de plegamiento de las protenas y la estructura terciaria en la mediacin de las funciones de los receptores diferentes. Al escribir estas lneas, el receptor no de cuerpo entero hormonales nucleares se ha cristalizado, pero las estructuras de los dominios individuales han sido muy reveladores, como queda claro en los debates de las funciones de los receptores especficos que siguen. Figura 4-2 Estructura dominio de los receptores nucleares.

Localizacin nuclear Los receptores nucleares, como todas las protenas celulares, se sintetizan en los ribosomas que residen fuera del ncleo. La importacin de los receptores nucleares en el ncleo requiere la seal de localizacin nuclear (NLS), que se encuentra cerca de la frontera de la C y D dominios (ver fig. 4-2). Como resultado de sus seales de localizacin nuclear, la mayora de los

receptores nucleares residen en el ncleo en ausencia, as como en la presencia, del ligando. Una excepcin importante es el receptor de glucocorticoides (GR), que, a falta de la hormona, est amarrado en el citoplasma de un complejo de molculas chaperonas, incluyendo las protenas de choque trmico (HSP). Unin de la hormona a los recursos genticos induce un cambio conformacional que resulta en la disociacin del complejo de acompaante, lo que permite el GR-hormona activa para al ncleo a travs de su seal de localizacin nuclear. Unin de la hormona De alta afinidad de unin de un ligando lipoflico es una caracterstica comn de muchos receptores nucleares. Esta funcin la definicin del receptor est mediada por los dominios C-terminal de unin ligando-(LBDS), los dominios D y E en la figura. 4-2. Esta regin del receptor tambin tiene muchas otras funciones, incluyendo la induccin de la dimerizacin y la regulacin transcripcional (ver "La dimerizacin del receptor" y "receptor de Regulacin de la transcripcin del gen" ms abajo). La estructura del LBD se ha resuelto por un nmero de receptores. Todos ellos comparten una estructura general similar, formado por 12 segmentos de -helicoidal en una estructura muy plegado terciario (Fig. 4-3A). El ligando se une en un bolsillo hidrofbico compuesto de aminocidos en la hlice 3 (H3), H4 y H5. El principal cambio estructural inducido por la unin del ligando es un plegamiento interno de la hlice C-terminal de la mayora (H12), que forma un tapn en el bolsillo de unin al ligando (ver fig. 4-3B). Aunque el mecanismo general de la unin del ligando es similar para todos los receptores, los detalles son cruciales en la determinacin de especificidad del ligando. [31] [32] Aunque los detalles moleculares de la unin del ligando estn fuera del alcance de este captulo, este es el determinante ms importante de la especificidad del receptor.

Figura 4-3 bases estructurales de la unin del ligando del receptor nuclear y la contratacin cofactor. A y B, Apo-receptor (sin ligando unido), B y D, ligando del receptor de ruedas. C y D, Estructuras mostrando la unin de posicin de correpresor (C) o coactivador (D).

Objetivo para el reconocimiento de genes por los receptores Otro factor crucial para la especificidad de los receptores nucleares es su capacidad para reconocer y unirse al subconjunto de genes que se rigen por sus ligandos afines. Objetivo genes contienen secuencias especficas de ADN que se denominan elementos de respuesta hormonal (HREs). La unin a la educacin en derechos humanos est mediada por el dominio C central de los receptores nucleares (ver fig. 4-2). Esta regin se componen tpicamente de 66 a 68 aminocidos, entre ellos dos subdominios llamados dedos de zinc debido a la estructura de cada subdominio es mantenido por cuatro residuos de cistena que se coordinan con un tomo de zinc. El primero de estos mdulos orden zinc contiene aminocidos bsicos que el ADN de contacto, como con el LBD, la estructura global del dominio de unin al ADN (DBD) es muy similar para todos los miembros de la superfamilia de receptores nucleares. La especificidad de unin a DNA est determinada por mltiples factores (Tabla 4-3). Todos los receptores de hormonas esteroides, a excepcin del receptor de estrgeno (ER), se unen a la doble cadena de ADN de secuencia AGAACA (fig. 4-4). TABLE 4-3 -- DETERMINANTS OF TARGET GENE SPECIFICITY OF NUCLEAR RECEPTORS Specificity Factor Binding to DNA Region of Receptor DNA-binding domain (DBD, C domain)

Binding to specific hexamer (AGGTCA vs. AGAACA) P-Box in C-domain Binding to sequences 5 to hexamer Binding to hexamer repeats Recognition of hexamer spacing C-terminal extension of DBD Dimerization domain (C domain for steroid receptors, D-E-F for others) Heterodimerization with RXR (nonsteroid receptors, C domain)

Figura 4-4 base estructural de los receptores nucleares (NR) especificidad de unin al ADN. diagramas de la cinta de opciones de los dominios de unin al receptor de ADN-(DBDs) se muestran. Un receptor de la hormona esteroide vinculante como homodmero de repeticin invertida (flechas) de media AGAACA in situ. B, heterodmero RXR-NR vinculante para repetir directa de AGGTCA. La posicin de la P-caja, la regin de la DBD que hace contacto directo con el ADN, se muestra. N, Nmero de pares de bases entre los dos medios centros, RXR, receptor retinoide X. Por convencin, la secuencia de doble cadena es descrito por la secuencia de una de las cadenas complementarias, con las

bases ordenado de los 5 'al extremo 3'. Otros receptores nucleares reconocen la secuencia de AGGTCA. El determinante principal de esta especificidad es un grupo de residuos de aminocidos en la llamada P-caja de la DBD (ver fig. 4-4). Estas secuencias de ADN hexmero se conocen como medio-sitios. Las dos nicas diferencias entre estos hexamrica medio-sitios son los dos pares de bases centrales (subrayado). Para algunos receptores nucleares, la extensin C-terminal de la DBD contribuye especificidad para ampliacin de la mitad de sitios que contienen adicionales, el ADN altamente especficas secuencias 5 'a la hexmero (ver fig. 4-2). Otra fuente de la especificidad de los genes diana es el espacio y la orientacin de estos sitios de media, que en la mayora de los casos estn vinculados por dmeros de los receptores.

Dimerizacin del receptor Como se seal anteriormente, el receptor nuclear DBD tiene afinidad por el medio hexamrica in situ, o ampliacin de la mitad sitios; HREs muchos, sin embargo, estn compuestas de repeticiones de la secuencia de media pgina, y la mayora de obligar a los receptores nucleares HREs como dmeros. receptores de esteroides, incluyendo ER, funcionan principalmente como homodmeros, que preferentemente se unen a dos medio-sitios orientados hacia la otra (repeticiones invertidas) con tres pares de bases en el medio (IR3) (ver fig. 4-4A). El dominio de dimerizacin principales receptores de esteroides se encuentra dentro del dominio C-, aunque el LBD contribuye. Ligando vinculante facilita dimerizacin y unin al ADN de los receptores de hormonas esteroides. La mayora de otros receptores, incluyendo TR, RAR, VDR, PPAR, LXR, y VDR, se unen al ADN como heterodmeros con RXR (ver fig. 4-4B). Heterodimerizacin con RXR est mediada por dos interacciones distintas, una de ellas y la LBDS DBDs dems casos. El receptor de LBD media la interaccin fuerte, que se produce incluso en ausencia de ADN. Estos heterodmeros de receptores se unen a dos medio-sitios dispuestos como repeticiones directas (DR) con un nmero variable de pares de bases en el medio. La distancia de la media sitios es un factor determinante de la especificidad de destino gen. Esto se debe a la interaccin receptor-receptor de segundo, lo que implica la DBDs y es muy sensible a la distancia de la media sitios. Por ejemplo, VDR / RXR heterodmeros se unen preferentemente a repeticiones directas separadas por tres bases (sitios DR3), TR / RXR se une DR4, y RAR / RXR se une DR5 con mayor afinidad [33]. La base estructural de esta restriccin a la unin al ADN se relaciona con el hecho de que el RXR se une a la media aguas arriba de sitio (ms alejado del inicio de la transcripcin). Como resultado de la periodicidad de la hlice de ADN, cada par de bases que separa el medio-sitios conduce a una rotacin de unos 36 grados de media-un sitio con respecto al otro. diferencias sutiles en la estructura del receptor de LBDS hacer las interacciones DBD ms o menos favorables, en los diferentes grados de rotacin. [34]

Reglamento del receptor de la transcripcin Los receptores nucleares mediar en una variedad de efectos sobre la transcripcin de genes.

del

gen

Las modalidades ms comunes de la regulacin son la activacin de genes dependientes de ligando, la represin ligandoindependiente de la transcripcin y la regulacin negativa ligando-dependiente de la transcripcin (Tabla 4-4). En el resto de este captulo se describen estos mecanismos. TABLE 4-4 -- REGULATION OF GENE TRANSCRIPTION BY NUCLEAR RECEPTORS 1. 2. 3. Ligand-dependent gene activation: DNA binding and recruitment of coactivators Ligand-independent gene repression: DNA binding and recruitment of corepressors Ligand-dependent negative regulation of gene expression: DNA binding and recruitment of corepressors or recruitment of coactivators off DNA

La activacin ligando-dependiente La activacin ligando-dependiente es la funcin ms bien entendida de los receptores nucleares y sus ligandos. En este caso, aumenta la transcripcin del receptor del ligando enlazado a un gen diana a la que est obligado. El DBD sirve para acercar los dominios de los receptores que median la activacin de la transcripcin de un gen especfico. la activacin transcripcional en s est mediada principalmente por el LBD, que puede funcionar de la misma manera, incluso cuando se transfiere a una protena de unin al ADN que no se relaciona con receptores nucleares. La funcin de activacin (AF) de la LBD se le conoce como AF-2 (ver fig. 4-2). la transcripcin de genes es mediada por un gran complejo de factores que en ltima instancia, regulan la actividad del cido ribonucleico (ARN) de la polimerasa, la enzima que utiliza el ADN cromosmico plantilla para dirigir la sntesis de ARN mensajero. La mayora de los genes de mamferos son transcritos por la RNA polimerasa II, utilizando una gran cantidad de protenas cofactor, incluidos los factores de transcripcin basal, y los factores asociados colectivamente se hace referencia aqu como factores de transcripcin generales (GTFs). Los detalles sobre GTFs son de fundamental importancia y estn

disponibles en otros lugares [35]. El receptor nuclear ligando enlazado comunica seales estimulantes a GTFs en el gen al que se destina. Ligandos especficamente contratar a un conjunto de protenas con el receptor nuclear LBD [36]. Positivamente en calidad cofactores, llamado coactivadores, reconocen especficamente la conformacin ligando enlazado de la LBD y se unen al receptor nuclear de ADN slo cuando una activacin ("agonista") hormona o ligando se une. [37] Una serie de protenas que se unen a coactivador liganded receptores nucleares se han descrito (tabla 4-5) [37]. TABLE 4-5 -- NUCLEAR RECEPTOR COACTIVATORS AND COREPRESSORS COACTIVATORS 1. Chromatin Remodeling Swi/Snf complex 2. Histone Acetyl Transferase p160 family (SRC-1, GRIP-1, pCIP) p300/CBP pCAF (p300/CBP-associated factor) 3. Activation TRAP/DRIP (thyroid receptor associated proteins/D-receptor interacting proteins) COREPRESSORS N-CoR (Nuclear receptor corepressor) SMRT (Silencing mediator for retinoid and thyroid hormone receptors)

El determinante ms importante del coactivador vinculante es la posicin de H12, que cambia drsticamente al activar receptores se unen a ligandos (ver fig. 4-3D). Junto con H3, H4 y H5, H12 forma una hendidura hidrofbica que est obligado por regiones polipeptdicas de las molculas cortas coactivador. [38] [39] [40] Estos polipptidos, llamado NR cajas, tienen secuencias caractersticas de LxxLL, donde L es la leucina y xx puede ser cualquiera de los dos aminocidos [41]. Coactivadores aumentar la tasa de transcripcin de los genes. Esto se logra mediante las funciones enzimticas, incluyendo DNA desenrollado actividad, as como acetiltransferasa de histonas (HAT) actividad [42]. HAT actividad es de importancia crtica para la activacin porque el ADN cromosmico se enrollan firmemente alrededor de unidades nucleosomal compuesta de protenas histonas. La acetilacin de las colas de lisina de las histonas "abre" esta estructura de la cromatina. La clase comprende mejor coactivador de protenas es el denominado p160 de la familia, cuyo nombre se basa en su tamao (~ 160 kd). Hay por lo menos tres molculas, cada una con los nombres de numerosos (ver Tabla 4-5). [43] Estos factores poseen actividad HAT y recluta coactivadores otros (CBP y p300), que tambin son los sombreros. Un HAT tercera, llamada factor de p300/CBP-associated (PCAF), tambin es contratado por los receptores liganded. Juntos estos sombreros, junto con un complejo de molculas llamadas SWI / SNF, que dirige trifosfato de adenosina (ATP)-dependiente de ADN relajarse, crear una estructura de la cromatina que favorece la transcripcin (fig. 4-5) [44].

Figura 4-5 coactivadores y correpresores en la regulacin transcripcional por los receptores nucleares. CBP, protena calciovinculante; PRD, D-protena del receptor que interactan; HRE, elemento de respuesta hormonal; HAT, histona acetiltransferasa; HDAC, histona deacetilasa; N-CDR, correpresor receptor nuclear; NR, receptor nuclear; PCAF, CBP/p300factor asociado; SMRT, mediador silenciamiento de los receptores retinoides y tiroides; TRAP, la protena del receptor de la hormona tiroidea asociada.

Es posible que la contratacin de HAT mltiples refleja diferentes especificidades de histonas y otras posibles, las protenas no

histonas. Algunos sombreros tambin interactuar directamente con GTFs y aumentar an ms sus actividades. Un importante complejo que tambin enlaza a los receptores nucleares GTFs es la trampa (protena asociada al TR) o goteo (protenas asociadas al receptor D) complejos. [45] [46] los sombreros y los factores TRAP son reclutados para el receptor liganded, meta-gen ligado en una forma ordenada que tambin involucra en bicicleta dentro y fuera de los objetivos del gen receptor por un mecanismo que todava no se entiende [47]. La represin de la expresin gnica de los receptores Unliganded Aunque la unin al DNA es dependiente de ligando para los receptores de hormonas esteroides, otros receptores nucleares tienen la obligacin de ADN, incluso en ausencia de su ligando afines. El receptor unliganded ADN-dependiente no espera pasivamente la hormona, sino que activamente reprime la transcripcin del gen diana. Esta represin tanto "apaga" el gen de inters y amplifica la magnitud de la posterior activacin de la hormona o ligando. Por ejemplo, si el nivel de la transcripcin de genes en el estado reprimido es del 10% del nivel basal en la ausencia del receptor, una hormona de activacin a 10 veces por encima de ese nivel basal representa una diferencia de 100 veces la tasa de transcripcin entre la hormona de deficiente (reprimido) los genes y los genes de la hormona activa. Figura 4-6 La represin y las funciones de activacin de aumentar el rango dinmico de regulacin transcripcional por los receptores nucleares. Educacin en derechos humanos, elemento hormonal respuesta. La magnitud de la activacin y la represin se establecen de manera arbitraria a 10 veces para este ejemplo terico. En las clulas de estas magnitudes varan en funcin del coactivador y la concentracin corpressor, as como de una manera meta-gen-especficas.

En muchos sentidos, el mecanismo molecular de la represin es el reflejo de la activacin ligando-dependiente. El receptor nuclear unliganded reclutas actuando negativamente factores (correpresores) para el gen de inters (ver fig. 4-3C). Los dos principales correpresores son grandes (~ 270 kd) protenas, llamadas receptores nucleares correpresor (N-CDR) y el silenciamiento de los receptores retinoides mediador y de la tiroides (SMRT) [49]. N-CDR y SMRT reconocen especficamente la conformacin de los receptores nucleares unliganded y el uso de una secuencia de anfipticas helicoidal similar a la caja de NR coactivadores de obligar a un bolsillo hidrofbico en el receptor. Para correpresores, el pptido responsable de la unin al receptor se llama el cuadro de CoRNR y contiene la secuencia (I o L) xx (I o V) I (donde I es la isoleucina, leucina L, V es la valina, y representa xx cualquiera de los dos aminocidos cidos). [50] El receptor utiliza hlices 3 a 5 para formar el bolsillo hidrofbico, como en coactivador vinculante, pero H12 no promueve e incluso obstaculiza correpresor vinculante. Este comportamiento negativo de H12 se destaca el papel del cambio ligandodependiente de la posicin de H12 como tambin el interruptor que determina la represin y la activacin de los receptores nucleares (ver fig. 4-5) [51].

Las funciones de la transcripcin de la N-CDR y SMRT son lo contrario de las de los coactivadores. El correpresores mismos no poseen actividad enzimtica pero deacetilasas contratar histonas (HDACs) para el gen de inters, invirtiendo as los efectos de la acetilacin de las histonas descritas anteriormente y que conducen a un acuerdo, estado reprimido de la cromatina. Aunque el genoma de los mamferos contiene HDACs mltiples, varios de los cuales pueden jugar un papel en la funcin de receptores nucleares, el principal implicado en la represin es HDAC3, cuya actividad enzimtica en realidad depende de la interaccin con la N-CDR o SMRT. [52] El correpresores tambin interactan directamente con GTFs para inhibir su actividad transcripcional, y existen en grandes complejos multiproteicos cuya gama de funciones todava no est totalmente entendido. Regulacin negativa ligando-dependiente de la expresin gnica (transrepresin) El interruptor ligando-dependiente entre las conformaciones de los receptores activados reprimidos y explica cmo las hormonas activan la expresin gnica. Sin embargo, muchos objetivos gene importante de las hormonas estn apagados en presencia del ligando. Esto se conoce como regulacin negativa ligando-dependiente de la transcripcin, o transrepresin, para distinguirlo de la represin de la transcripcin basal de los receptores unliganded. El mecanismo de regulacin negativa es menos conocido que la activacin ligando-dependiente, y, de hecho, puede haber ms de un mecanismo. [53] Uno de los mecanismos implica receptor nuclear de unin a los de unin al ADN que cambiar radicalmente el paradigma de la activacin ligando-dependiente ( elementos negativos de respuesta). Ligando enlazado a receptores correpresores contratar y la actividad HDAC a tal unin sitios. Por ejemplo, cuando se une el TR unliganded al elemento de respuesta negativa del gen de la subunidad de la hormona estimulante del tiroides (TSH), la transcripcin se activa. Ligando correpresores reclutas vinculante y HDAC a la TR y conduce a la supresin de la transcripcin. En otros casos, se ha postulado que la regulacin negativa puede resultar de la unin del ligando a los receptores nucleares que se unen a otros factores de transcripcin, sin unin al ADN. Esta interaccin da lugar a la eliminacin de coactivadores como p300 y CBP de los otros factores de transcripcin que regulan positivamente el gen. En este modelo, la inhibicin de la actividad de los resultados de manera positiva en calidad factores en la regulacin negativa observada. Papel de otros dominios del receptor nuclear El N-terminal A / B de dominio de los receptores nucleares es la regin ms variable entre todos los miembros de la

superfamilia en trminos de duracin y la secuencia de aminocidos. Incluso los subtipos del receptor misma frecuencia tienen completamente diferente A / B dominios. La funcin de este mbito es por lo menos bien definidos. No es necesario para la represin o activacin unliganded ligando-dependiente. En muchos receptores, el A / B de dominio contiene una actividad transcripcional positiva, a menudo denominada AF-1 (ver fig. 4-2), que es independiente del ligando, pero probablemente interacciona con coactivadores y pueden influir en la magnitud de la activacin por los agonistas o agonistas parciales. Esta funcin es la activacin especfica de los tejidos y tiende a ser ms importante para los receptores de hormonas esteroides, cuyo A / B dominios son notablemente ms largos que los de otros miembros de la superfamilia [54]. El dominio de F, de los receptores nucleares es hipervariable de longitud y secuencia, y su funcin no se conoce.

Las interferencias con otras vas de sealizacin Las hormonas y citoquinas que seal a travs de receptores de superficie celular tambin regulan la transcripcin de genes, a menudo mediante la activacin de las protenas quinasas que fosforilan factores de transcripcin como AMPc-protena respuesta elemento vinculante (CREB). Esas seales tambin pueden conducir a la fosforilacin de los receptores nucleares. quinasas dependientes mltiples seales fosforilacin de receptores nucleares, que producen cambios conformacionales que regulan la funcin [55]. fosforilacin puede conducir a cambios en la unin a ADN, la unin del ligando, o coactivador vinculante; estas consecuencias variable depender de la cinasa especfica del receptor, y el dominio del receptor que se encuentra fosforilada. Las propiedades de coactiva-res y las molculas correpresor tambin estn reguladas por la fosforilacin.

Antagonistas de los receptores Algunos ligandos funcionar como antagonistas de los receptores, compitiendo con agonistas para el sitio de unin al ligando. En el caso de receptores de hormonas esteroides, la posicin de H12 en el antagonista de los receptores con destino no es idntica a la del receptor de unliganded o el receptor agonista determinado. H12, que a su vez tiene una secuencia similar a la caja de NR, se une a la bolsa coactivador de unin del receptor y por tanto, evite coactivador vinculante. [56] Esta conformacin antagonista del receptor de la envolvente tambin favorece la unin a correpresor receptores de hormonas esteroides.

Los ligandos del tejido-selectiva Algunos ligandos funcionan como antagonistas en algunos tejidos pero como agonistas totales o parciales en otros. Estos moduladores selectivos del receptor incluyen compuestos como el tamoxifeno, un modulador selectivo del receptor de estrgeno (SERM). Los SERMs son antagonistas de receptores de estrgeno con respecto a las funciones de AF-2, incluyendo coactivador vinculante, y requieren la funcin AF-1 por su actividad agonista. [57] Tal agonismo, como AF-1 actividad, tiende a ser especfico de tejido y por lo tanto tiene gran utilidad teraputica [58]. Adems de las drogas, ciertos ligandos endgenos (por ejemplo, la testosterona, la DHT) tambin mediadores de los efectos especficos de tejido. La base molecular de la actividad especfica de los tejidos no se entiende bien, pero se debe probablemente a la expresin o la actividad transcripcional de cofactores que diferencian entre los receptores unidos a diferentes ligandos. La tabla 4-6 resume los factores que contribuyen al tejido especificidad de la actividad del receptor. TABLE 4-6 -- FACTORS MODULATING RECEPTOR ACTIVITY IN DIFFERENT TISSUES Receptor concentration Ligand concentration Ligand function (agonist, partial agonist, antagonist) Concentrations and types of coactivators and corepressors Phosphorylation state of nuclear receptor

CHAPTER 5 MECHANISM OF ACTION OF HORMONES THAT ACT AT THE CELL SURFACE Allen Spiegel Christin Carter-Su Simeon I. Taylor

 Receptors, 47 Hormone Binding, 48 Regulation of Hormone Sensitivity, 48 Receptor Tyrosine Kinases, 48 Downstream Signaling Pathways, 51 Off Signals: Termination of Hormone Action, 53 Mechanisms of Disease, 53 Receptor Serine Kinases, 54 Receptors that Signal through Associated Tyrosine Kinases, 55 G ProteinCoupled Receptors, 58 G ProteinCoupled Receptor Interactions with Other Proteins, 61

Las hormonas son secretadas a la sangre y actan sobre las clulas diana a una distancia de la glndula de secrecin. A fin de responder a una hormona, una celda de destino debe contener los elementos esenciales de una va de sealizacin. En primer lugar, debe haber un receptor de obligar a la hormona. En segundo lugar, debe haber un efector-o ejemplo, una actividad enzimtica que se regula cuando la hormona se une a su receptor. Por ltimo, deben ser adecuadas vas de sealizacin de salida para mediar en las respuestas fisiolgicas a la hormona. De hecho, el tipo de mecanismo que implica receptores, efectores, y aguas abajo las vas de sealizacin que es bastante general y tambin funciona en los sistemas endocrinos, tales como las reguladas por los neurotransmisores, citoquinas y factores paracrinos y autocrinos. Este captulo examina varios ejemplos de las enfermedades endocrinas vas de sealizacin que se inician con la activacin de los receptores situados en la superficie de las clulas diana, con especial atencin a los mecanismos moleculares que funcionan en la fisiologa normal y la patologa molecular que causa la enfermedad. Receptores Definicin y Clasificacin Hay dos funciones esenciales que definen a los receptores hormonales: (1) la capacidad de obligar a la hormona y (2) la capacidad de unin de la hormona Pareja a la accin hormonal. Ambos componentes de la definicin son esenciales, por ejemplo, muchas hormonas se unen a las protenas de unin que se distinguen de los receptores de las protenas de unin, porque el no activan las vas de sealizacin que median la accin hormonal. Muchas clases de receptores son de inters en endocrinologa. Algunos receptores estn localizados dentro de la clula y funcionan como factores de transcripcin (por ejemplo, los receptores de las hormonas tiroideas y esteroides). Otros receptores se encuentran en la superficie de la clula y la funcin principalmente para el transporte de sus ligandos en la clula por un proceso denominado endocitosis mediada por receptor (por ejemplo, densidad de la lipoprotena receptores de baja). En este captulo, nos concentramos en la superficie de los receptores de las clulas que desencadenan vas de sealizacin intracelular. Estos receptores de superficie de las clulas se pueden clasificar de acuerdo a los mecanismos moleculares por los cuales realizan sus funciones de sealizacin: Ligando los canales inicos (por ejemplo, los receptores de acetilcolina nicotnicos) 1. Receptor tirosina quinasas (por ejemplo, los receptores para la insulina y del factor de crecimiento como la 2. insulina-I [IGF-I]) serina del receptor / treonina cinasas (por ejemplo, los receptores de activinas y Inhibinas)

3. Receptor de la guanilato ciclasa (por ejemplo, natriurtico auricular del receptor del factor) 4. G receptores acoplados a protenas (por ejemplo, los receptores de los agentes adrenrgicos, muscarnicos 5. colinrgicos, hormonas glicoprotena, el glucagn y la hormona paratiroidea) Receptores de citoquinas (por ejemplo, los receptores para la hormona del crecimiento, prolactina y leptina) 6.

Los receptores que pertenecen a las clases 1 a 4 son molculas bifuncionales que pueden obligar a la hormona, as como servir como efectores de funcionamiento, ya sea como canales de iones o enzimas. En contraste, los receptores que pertenecen a las clases 5 y 6 tienen la capacidad de obligar a la hormona, sino que deben contratar a una molcula por separado para catalizar la funcin efectora. Por ejemplo, como su nombre lo indica, G receptores acoplados a protenas G utilizan las protenas para regular las molculas efectoras ro abajo. Del mismo modo, receptores de citoquinas reclutan tirosina quinasas citoslicas (por ejemplo, Jano tirosina quinasas de la familia, o JAK) como efectores para desencadenar aguas abajo vas de sealizacin. Unin de la hormona Segn lo predicho por el hecho de que las hormonas circulan en concentraciones relativamente bajas en el plasma, la interaccin vinculante entre una hormona y su receptor se caracteriza por una alta afinidad. Por otra parte, unin de la hormona tiene un alto grado de especificidad. En general, el receptor se une su hormona afines con ms fuerza de lo que se une a otras hormonas. Sin embargo, algunos receptores de hormonas pueden unirse relacionados estructuralmente con menor afinidad. Por ejemplo, el receptor de la insulina se une el crecimiento de factores como la insulina (IGF), con veces menor afinidad aproximadamente 100 que se une a la insulina. Del mismo modo, el receptor de TSH se une con la gonadotropina corinica humana menor afinidad de lo que se une tirotropina. Este fenmeno ha sido denominado desbordamiento especificidad y proporciona una explicacin de varias condiciones patolgicas, como la hipoglucemia causada por tumores secretores de IGF-II y el hipertiroidismo asociado a coriocarcinoma. [ 1 ] La unin de una hormona (H) a su receptor (R) puede ser descrita matemticamente como una reaccin de equilibrio:

En el equilibrio, K a = (HR) / (H) (R), donde K es una constante de la asociacin para la formacin del complejo receptor de la hormona (FC). Tal como se haba demostrado por Scatchard, es posible reordenar esta ecuacin en trminos de la concentracin total de sitios de unin del receptor, R 0 = (R) + (RH), de la siguiente manera:

Una lnea recta se obtiene cuando (HR) / (H) (es decir, la proporcin de la envolvente a la hormona libre) se representa como una funcin de (CR) (la concentracin de la hormona de la envolvente). La pendiente de la lnea es un-K , y la lnea intercepta el eje horizontal en el punto donde (HR) = R = 0 el nmero total de sitios de unin. Este tipo de grfico se conoce como un complot de Scatchard y se ha utilizado como un mtodo grfico para estimar la afinidad con la que un receptor se une su hormona. Aunque las propiedades de unin de algunos receptores se describen ms o menos exactamente por estas ecuaciones simples, otros receptores presentan propiedades ms complejas. Esta derivacin simple algebraica de la ecuacin de Scatchard supone implcitamente que slo hay una clase de receptores y que los sitios de unin en los receptores no interactan entre s. Si estas suposiciones no son aplicables a la interaccin de una hormona en particular con su receptor, la trama de Scatchard puede no ser lineal. Varios mecanismos moleculares pueden contribuir a la no linealidad de la trama de Scatchard. Por ejemplo, puede haber ms de un tipo de receptor que se une a la hormona (por ejemplo, una alta afinidad y baja capacidad de sitio y una afinidad baja, capacidad de estacin alta). Por otra parte, algunos receptores tienen ms de un sitio de unin, y puede haber interacciones cooperativas entre los sitios de unin (por ejemplo, el receptor de la insulina). Adems, la interaccin entre una protena G y un receptor acoplado a protena-G puede afectar a la afinidad con la que el receptor se une su ligando, por otra parte, el efecto sobre la afinidad de unin depende de si difosfato de guanosina (PIB) o trifosfato de guanosina (GTP) es unido a la protena G. Sin embargo, una discusin detallada de estas complejidades est fuera del alcance de este captulo. Reglamento de la hormona de la sensibilidad A principios de la historia de la endocrinologa, la atencin se centr en la regulacin de la secrecin de la hormona como el mecanismo ms importante para la regulacin de la fisiologa. Sin embargo, se ha hecho evidente que la celda objetivo no es

pasiva. Ms bien, hay muchas influencias que pueden alterar la sensibilidad de la meta de la clula de la respuesta que una determinada concentracin de la hormona. Por ejemplo, el nmero de receptores puede ser regulada. En igualdad de condiciones, la sensibilidad de hormonas est directamente relacionada con el nmero de receptores de la hormona expresada en la superficie celular. Adems, las modificaciones postraduccionales del receptor puede modificar ya sea la afinidad de unin de la hormona o la eficiencia de acoplamiento abajo para vas de sealizacin. Por otra parte, todos los componentes intermedios en la va de la accin hormonal estn sujetos a tipos similares de las influencias de reglamentacin, que puede tener un impacto significativo en la capacidad de la clula diana para responder a la hormona. As como la sensibilidad hormonal est sujeta a regulacin fisiolgica normal, influencias patolgicas puede causar una enfermedad centrndose en los componentes de la va de la accin hormonal. Son mltiples los factores etiolgicos pueden poner en peligro la va de la accin hormonal, como las influencias genticas, procesos autoinmunes, y las toxinas exgenas. Por ejemplo, mecanismos de la enfermedad puede alterar las funciones de la superficie de los receptores de clulas efectoras, como las protenas G, y otros componentes de las vas de sealizacin aguas abajo. Este captulo describe varios ejemplos que ilustran estos principios. Receptor tirosina quinasas tirosina quinasas del receptor tienen varias caractersticas estructurales en comn: un dominio extracelular que contiene el sitio de unin del ligando, un dominio transmembrana nico, y una porcin intracelular que incluye el dominio cataltico tirosina quinasa ( fig. 5-1 ). El anlisis de la secuencia del genoma humano sugiere que hay aproximadamente 100 de los receptores tirosina quinasas. La tirosina quinasa de dominio es la secuencia ms altamente conservada entre todos los receptores de esta familia. Por el contrario, existe una variacin considerable entre las secuencias de los dominios extracelulares. De hecho, la familia de receptores tirosina quinasas pueden ser clasificadas en 16 subfamilias, principalmente sobre la base de las diferencias en la estructura del dominio extracelular. [ 2 ] Por otra parte, la tirosina quinasa del receptor median las acciones biolgicas de una gran variedad de ligandos, incluyendo la insulina, factor de crecimiento epidrmico (EGF), factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), y vascular del factor de crecimiento derivado de clulas del endotelio. La variacin en las secuencias de los dominios extracelulares permite a los receptores de obligar a esta diversa coleccin estructural de los ligandos.

Figura 5-1 receptor de tirosina quinasas. Este diagrama ilustra 3 de las 16 familias de las quinasas de tirosina del receptor. [ 2 ] [ 3 ] Todos los receptores tirosina quinasas poseen un dominio extracelular que contiene el sitio de unin del ligando, un dominio transmembrana nico y un dominio intracelular que contiene el dominio tirosina quinasa. Varios motivos estructurales (es decir, rica en cistena de dominio, como dominio de inmunoglobulina, la tirosina quinasa de dominio) en estos tirosina quinasas del receptor se indican en la parte derecha de la figura. Cys, cistena, EGF, factor de crecimiento epidrmico; Ig, la inmunoglobulina; PDGF , derivado del factor de crecimiento plaquetario.

El receptor de EGF fue el receptor de la superficie celular el primero en demostrar que poseen actividad tirosina quinasa [ 4 ] y fue el receptor de la tirosina quinasa primero en ser clonado. [ 5 ] Como la mayora de la tirosina quinasa del receptor, el receptor de EGF existe principalmente como monmero en la ausencia de ligando. Sin embargo, la unin del ligando induce la dimerizacin del receptor. Como veremos ms adelante en este captulo, ligando dimerizacin inducida es fundamental para el mecanismo por el cual el receptor media la actividad biolgica del FCE. Adems de la capacidad de formar homodmeros, el receptor de EGF puede formar heterodmeros con otros miembros de la misma subfamilia de receptores de tirosina quinasas. Debido a que un pequeo nmero de receptores pueden combinarse en un gran nmero de parejas, la formacin heterodmero tiene el potencial para poner a punto la especificidad de los receptores con respecto al carcter obligatorio y aguas abajo de sealizacin ligando. El receptor de la insulina es de especial inters para los endocrinlogos, porque la diabetes es una de las enfermedades comunes mayor parte del sistema endocrino. Adems, el receptor de la insulina muy similar a la del receptor tipo 1 de IGF. [ 6 ] Este es el receptor que media las acciones biolgicas del IGF-I y por tanto, tambin juega un papel importante en la fisiologa de la hormona del crecimiento (GH) en vivo. Aunque los dominios quinasa de receptores para la insulina y el IGF-I se parecen mucho a otras tirosina quinasas del receptor, por lo menos dos caractersticas distintivas de los distinguen. En primer lugar, los receptores se sintetizan como proreceptors que sufren ruptura proteoltica en dos subunidades ( y ). La subunidad contiene el sitio de unin del ligando, la subunidad incluye la transmembrana y la tirosina quinasa dominios. En segundo lugar, ambos receptores 2 existen como 2 heterotetrmeros que se estabilizan por puentes disulfuro intersubunit. A diferencia de otras tirosina quinasas del receptor, que se cree que dimerizarse en respuesta a la unin del ligando, el receptor de la insulina existe como un dmero de monmeros, incluso en ausencia de ligando. El resto de esta seccin se revisan los mecanismos moleculares por receptores tirosina quinasas mediar la accin biolgica, con especial nfasis en el receptor de la insulina como un ejemplo ilustrativo. La activacin del receptor: Papel de los receptores Dimerizacin

Dimerizacin desempea un papel central en el mecanismo por el cual la mayora de los receptores tirosina quinasas se activan por sus ligandos afines. [ 2 ] [ 7 ] A pesar de la dimerizacin del receptor es un tema comn, los mecanismos moleculares detallados difieren de receptor a receptor. Los siguientes son tres ejemplos de los mecanismos de la dimerizacin del receptor ( Fig.. 5-2 ). [ 8 ] [ 9 ] [ 10 ] [ 11 ] [ 12 ]

Figura 5-2 ligando inducida por dimerizacin de los receptores. Dos mecanismos moleculares de la induccin del receptor-ligando dimerizacin se ilustran. En el caso del factor de crecimiento derivado de plaquetas, el ligando es dimrica y por lo tanto contiene dos sitios de unin del receptor. [ 8 ] [ 9 ] En el caso de la hormona del crecimiento, una molcula ligando solo contiene dos sitios de unin para que pueda unirse simultneamente a dos molculas receptoras. [ 10 ] [ 11 ] [ 12 ]

Dimricos ligando PDGF y vasculares celulares derivadas del factor de crecimiento endotelial-son ejemplos de ligandos dimrica (ver fig. 5-2 ). [ Debido a que cada subunidad de ligando puede obligar a una molcula receptora, simultnea unin de dos molculas del receptor de las unidades dimerizacin del receptor. La ayuda directa para este tipo de mecanismo es proporcionada por la estructura cristalina de la clula vascular derivado del factor de crecimiento endotelial, unido a su receptor (FLT-1). [ 13 ]
8 ] [ 9 ] [ 13 ]

Dos sitios de unin del receptor a un ligando monomricas Aunque este mecanismo es importante para muchos tirosina quinasas del receptor, fue mostrado por primera vez con rigor para el receptor de GH, que no es miembro de la quinasa del receptor de la tirosina de la familia (ver fig. 5.2 ). [ 10 ] [ 11 ] [ 12 ] Como se ilustra en la estructura cristalina de GH unido a su receptor, una molcula de ligando puede unir dos molculas de receptor. De hecho, hay dos sitios de unin al receptor, pero distintos en cada molcula de GH, lo que permite el ligando para promover la dimerizacin del receptor. Esta observacin tiene una implicacin importante para la farmacologa. Con la derogacin de uno de los dos sitios de unin del receptor, es posible disear ligandos mutantes que carecen de la capacidad para promover la dimerizacin del receptor y por lo tanto carecen de la capacidad para desencadenar la accin hormonal. Sin embargo, al unirse a los receptores, el ligando mutante adquiere la capacidad de inhibir la accin de la hormona endgena. Tales molculas GH mutantes han sido desarrollados como agentes teraputicos, por ejemplo, en condiciones tales como acromegalia. Preexistentes Dmeros del receptor El receptor de insulina representa una paradoja. El receptor de la insulina existe como un dmero, incluso en ausencia de ligando. (En realidad, es una 2 2 heterotetrmero, que es un dmero de monmeros .) Si el receptor ya est dimerizada, por qu no se activa? Aunque los detalles moleculares an no se han dilucidado, parece probable que las dos mitades del receptor de insulina no se orientan de forma ptima para permitir la activacin del receptor en ausencia de ligando. Tal vez, la insulina desencadena un cambio obligatorio de conformacin que de alguna manera imita los efectos de la dimerizacin tirosina quinasas en otros receptores. En cualquier caso, varios estudios han demostrado que la dimerizacin de los receptores es necesaria para la capacidad de la insulina para activar su receptor. Por ejemplo, los monmeros conservan la capacidad de obligar a la insulina, pero no se activan en respuesta a la insulina vinculante. [ 14 ] [ 15 ] Por otra parte, la evidencia sugiere que una sola molcula de insulina se une simultneamente a ambas subunidades del receptor de la insulina [ 16 ] [ 17 ], la capacidad de unirse simultneamente a las dos mitades del receptor dimrico parece ser fundamental para la capacidad de la insulina para activar su receptor. La activacin del receptor: Los cambios conformacionales en el dominio kinasa Cuando se une el ligando al dominio extracelular, estimula la actividad tirosina quinasa del dominio intracelular. Aunque el mecanismo detallado de la sealizacin transmembrana no se conocen, los progresos se han realizado considerables en la elucidacin de los mecanismos moleculares de la activacin del receptor. Investigaciones de la estructura de tres dimensiones del receptor de insulina tirosina quinasa de dominio ayudan a explicar por qu el receptor se mantiene en un estado de baja actividad en ausencia de insulina ( la fig. 3.5 ). [ 18 ] [ 19 ] [ 20 ] En la forma inactiva de la quinasa del receptor de la insulina, Tyr1162 se encuentra en una posicin para que la protena bloques de sustratos de unin al sitio activo. Adems, en el estado inactivo de la tirosina quinasa de dominio, el sitio activo asume una conformacin que no se acomoda a la adenosina trifosfato de magnesio (ATP). As, la tirosina quinasa est inactivo debido a que el sitio activo no puede obligar a cualquiera de sus sustratos. Cmo activar el receptor de la insulina? La insulina vinculante provoca la autofosforilacin de los tres residuos de tirosina (Tyr1158, Tyr1162 y Tyr1163) en el bucle de activacin "." Cuando los tres residuos de tirosina en el bucle de activacin se fosforilan, un cambio conformacional importante ocurre. Como resultado del movimiento del bucle de activacin, el sitio activo adquiere la capacidad de atar la ATP y sustratos de la protena. As, el cambio conformacional inducido por autofosforilacin activa el receptor de fosforilar otros substratos. [ 21 ] [ 22 ]

Figura 5-3 La fosforilacin de residuos de tirosina en el bucle de activacin conduce a la activacin de la tirosina quinasa del receptor de insulina. Un mecanismo hipottico ligando estimulada por la activacin de la tirosina quinasa del receptor de insulina se ilustra. El modelo se basa en la estructura de tres dimensiones de la quinasa del receptor de insulina aislados tirosina segn lo determinado por cristalografa de rayos-x. [ 19 ] [ 20 ] [ 23 ] En la poblacin inactiva del receptor de insulina quinasa (izquierda), bloques Tyr1162 el sitio activo para que los sustratos no pueden unirse. En contraste, cuando los residuos de tirosina en el bucle de activacin (incluyendo Tyr1162) se fosforilan (derecha), se mueve Tyr1162 fuera del camino, y hay un cambio conformacional que permite la unin del trifosfato de adenosina (ATP) y la protena sustrato para que la quinasa reaccin puede proceder.

No est claro cmo este proceso se inicia. Debido a que el estado inactivo de la tirosina quinasa no puede unirse al ATP, parece poco probable que la fosforilacin de los ingresos Tyr1162 por un mecanismo de auto fosforilacin verdad. Por el contrario, es probable que Tyr1162 en un subunidad es transphosphorylated por la subunidad segundo en la 2 2 molcula heterotetrmero. [ 2 ] [ 23 ] Sin embargo, este mecanismo propuesto plantea un crculo vicioso "problema. Se requiere que al menos una de las subunidades se activa antes de los residuos de Tyr en el bucle de activacin se fosforilan. Tal vez el bucle de activacin es algo mvil para que algunas molculas de la tirosina cinasa fosforilada puede asumir una conformacin activa e iniciar una reaccin en cadena de transfosforilacin y la activacin del receptor. La tirosina quinasas del receptor fosforilar otras protenas intracelulares activado, la tirosina quinasas vez son capaces de fosforilar otras protenas sustratos. Varios factores determinan qu protenas son fosforiladas bajo condiciones fisiolgicas dentro de la clula. Contexto de secuencia de aminocidos de los residuos Tyr La tirosina quinasas que no presentan esta especificidad estricta con respecto a la secuencia de aminocidos del sitio de fosforilacin. Sin embargo, la fosforilacin de la tirosina sitios ms se encuentran en la vecindad de los residuos de aminocidos cidos (es decir, Glu o Asp). [ 2 ] La unin a la tirosina cinasa Algunas protenas sustratos se unen directamente al dominio intracelular del receptor. La interaccin vinculante trae el sustrato en las proximidades de la cinasa, promoviendo as la fosforilacin del sustrato. Por ejemplo, el sustrato del receptor de insulina (IRS) las protenas se caracterizan por una alta conservacin fosfotirosina vinculantes (PTB) de dominio que se une a un motivo conservado (Asn-Pro-Xaa-pTyr) en el dominio yuxtamembrana del receptor de insulina. [ 24 ] [ 25 ] [ 26 ] La unin del dominio PTB al receptor de insulina requiere la fosforilacin del residuo Tyr-en el Pro-Xaa-pTyr motivo Asn. Esto proporciona otro mecanismo (adems de la activacin de los receptores con actividad tirosina quinasa intrnseca) por los que autofosforilacin del receptor aumenta la fosforilacin de las protenas IRS. Del mismo modo, para algunos sustratos contienen tirosina quinasas Src homologa 2 (SH2) dominios altamente conservados dominios que se unen fosfotirosina residuos (vase el significado funcional de la fosforilacin en tirosinas). Por ejemplo, el receptor del PDGF activa contiene un residuo de fosfotirosina cerca de su extremo C-terminal que se une el dominio SH2 de C fosfolipasa. Esto permite al receptor del PDGF de fosforilar y activar la fosfolipasa C. [ 2 ] [ 27 ] La localizacin subcelular Debido a la tirosina quinasas del receptor se encuentran en la membrana plasmtica, que estn muy cerca de otras protenas de la membrana plasmtica. Esta colocalizacin tiene el potencial de promover la fosforilacin-profesional. Por ejemplo, el receptor de la insulina se ha informado de fosforilar pp120/hepatocyte antgeno-4 (HA4). [ 28 ] [ 29 ] Al igual que el receptor de la insulina, es una glicoprotena pp120/HA4 integrales de membrana asociada a la membrana plasmtica de los hepatocitos. Del mismo modo, el receptor de FGF sustrato-2 (FRS2), un sustrato del receptor del factor de crecimiento derivado de fibroblastos, se dirige a la membrana plasmtica de una terminal de myristoylation sitio-N. [ 30 ] Importancia funcional de fosforilacin de la tirosina Hay al menos dos mecanismos distintos segn el cual regula la funcin fosforilacin de la tirosina de la protena. En primer lugar, la fosforilacin de la tirosina puede inducir un cambio conformacional en la protena, alterando as su funcin. Por ejemplo, como se seal anteriormente, la fosforilacin de los tres residuos de tirosina en el bucle de activacin del receptor de la insulina cambios la conformacin del sitio activo, lo que facilita unin de sustratos y la activacin de la tirosina quinasa

del receptor. [ 18 ] [ 19 ] [ 20 ] Sin embargo, la mayora de los efectos de la fosforilacin de la tirosina en funcin de la protena estn mediadas indirectamente mediante el control de las interacciones protena-protena. Con el fin de comprender cmo la protena tirosina fosforilacin regula las interacciones de protenas, es til revisar la bioqumica de la c-src, el prototipo de un nonreceptor tirosina quinasa. Cuando la secuencia de aminocidos de c-src se analiza, se desprende que existen tres dominios altamente conservados en la molcula: el catalizador de dominio quinasa y dos dominios no cataltico que se conocen como dominios de homologa src 2 y 3 (SH2 y SH3, respectivamente). Dominios SH2 dominios SH2 consisten en secuencias conservadas (aproximadamente 100 residuos de aminocidos) que estn presentes en muchas protenas que funcionan en las vas de sealizacin. Desde el punto de vista funcional, los dominios SH2 comparten la capacidad de obligar a los residuos pTyr. Sin embargo, el individuo dominios SH2 varan con respecto a su especificidad de unin. La afinidad de unin de un SH2 est determinada por los tres residuos de aminocidos aguas abajo de los residuos pTyr. Por ejemplo, los dominios SH2 de fosfatidilinositol (PI) 3-quinasa presentan una preferencia por pTyr-(MET / Xaa)-XaaMet, mientras que el dominio SH2 de receptor del factor de crecimiento de la protena vinculante 2 (Grb-2) prefiere unirse pTyr -Xaa-Asn-Xaa. Por lo tanto, un dominio SH2 dado se une a una protena tirosina fosforilada si y slo si el residuo pTyr se encuentra en un contexto que corresponde a la especificidad de unin del dominio SH2. Dominios SH3 dominios SH3 consisten en secuencias conservadas (aproximadamente 50 residuos de aminocidos) que se unen a secuencias ricas en prolina. Al igual que los dominios SH2, SH3 dominios se encuentran en muchas protenas que funcionan en las vas de sealizacin. Aguas abajo vas de sealizacin tirosina quinasas del receptor median la accin de una gran variedad de ligandos en una amplia variedad de tipos celulares. La desconcertante complejidad de las vas de sealizacin aguas abajo corresponde a la enorme cantidad de procesos fisiolgicos que estn regulados por receptores tirosina quinasas. A pesar de que est ms all del alcance de este captulo para intentar una revisin enciclopdica de todas las vas de sealizacin aguas abajo, se han seleccionado ejemplos para ilustrar los principios generales. Como se seal anteriormente, el receptor de la insulina activada fosforila mltiples sustratos, incluyendo el IRS-1, IRS-2, IRS3, y el IRS-4. [ 31 ] Cada uno de estos sustratos contiene mltiples sitios de fosforilacin de la tirosina, muchos de los cuales corresponden a las secuencias consenso para dominios SH2 en importantes molculas de sealizacin. As, las protenas IRS servir de acoplamiento protenas que se unen SH2 de dominio que contienen protenas. Entre ellos, dos de los ms importantes son PI 3-quinasa y GRB-2. La unin de los dominios SH2 desencadena mltiples vas de sealizacin aguas abajo. Fosfatidilinositol 3-cinasa La subunidad cataltica de la PI 3-quinasa (p110; masa molecular de aproximadamente 110.000) se une a una subunidad reguladora. Las isoformas clsicas de la subunidad reguladora (p85; masa molecular de aproximadamente 85.000) contiene dos dominios SH2, los cuales se unen a pTyr en el contexto de pTyr-(MET /)-Xaa-Logramos motivos Xaa. La unin de pTyr residuos para ambos dominios SH2 de p85 conduce a la activacin mxima de PI-kinasa cataltica actividad 3. (Activacin submximo se puede lograr con la ocupacin de un dominio SH2 nico en p85.) Debido a las cuatro molculas de IRS (IRS-1, IRS-2, IRS-3, y el IRS-4) contienen mltiples sitios de fosforilacin de tirosina que se ajustan a la Tyr - (Met /-Xaa-Logramos un consenso secuencia) Xaa, estimulada por la insulina promueve la fosforilacin de unin de las protenas IRS a los dominios SH2 de la subunidad reguladora PI 3-quinasa, lo que aumenta la actividad enzimtica de la subunidad cataltica. [ 32 ] [ 33 ] [ 34 ] [ 35 ] La activacin de PI 3-quinasa desencadena la activacin de una cascada de quinasas corriente abajo, empezando por las quinasas dependientes de fosfoinostidos-1 y 2. Estas quinasas dependientes de fosfoinostidos-fosforilan y activan protenas quinasas corriente abajo mltiples incluyendo la protena quinasa B y isoformas atpicas de la protena cinasa C. [ 36 ] [ 37 ] [ 38 ] [
39 ] [ 40 ] [ 41 ] [ 42 ]

Un gran cuerpo de evidencia que demuestra que las vas de aguas abajo de PI 3-quinasa mediar en las actividades metablicas de la insulina (por ejemplo, la activacin del transporte de glucosa en el msculo esqueltico, la activacin de la sntesis de glucgeno y la inhibicin de la transcripcin del gen de la fosfoenolpiruvato carboxiquinasa). Entre otras lneas de evidencia, PI-kinasa inhibidores de la 3 (por ejemplo, LY294002 y wortmanina) bloquean las acciones metablicas de la insulina. [ 43 ] Del mismo modo, la sobreexpresin de mutantes dominantes negativos de la regulacin subunidad p85 de la PI 3-kinasa tambin inhibe las acciones metablicas de la insulina. [ 36 ] Aunque en general se convino en que la activacin de PI 3-quinasa es necesaria, es motivo de controversia si es suficiente para desencadenar las acciones metablicas de la insulina. Por ejemplo, una va paralela de segunda tambin puede ser necesaria. La ltima va implica la fosforilacin de la tirosina de Cbl, otra protena que puede ser fosforilada por el receptor de la insulina en algunos tipos de clulas. [ 44 ] [ 45 ] [ 46 ] Grb-2 y la activacin de Ras

Grb-2 es una molcula adaptadora que contiene un breve [dominio SH2 47 ] capaz de unirse a pTyr residuos en varias molculas de sealizacin, por ejemplo, el IRS-1 y Shc, otro PTB de dominio que contienen protena que es fosforilada por el receptor de la tirosina quinasas varias incluido el receptor de la insulina. [ 48 ] [ 49 ] El dominio SH2 de GRB-2 est flanqueada por dos dominios SH3, [ 47 ] que se unen a la prolina que contienen secuencias de MSO (el homlogo de Drosophila de mamferos hijo de sevenless). [ 50 ] MSO es capaz de activar Ras, una pequea protena G que juega un papel importante en las vas de sealizacin intracelular. MSO activa Ras al catalizar el intercambio de GTP para el PIB en el nucletido guanina sitio de unin de Ras. Esto, a su vez, desencadena la activacin de una cascada de serina / treonina protena-quinasas especficas como Raf, activada por mitgenos protena extracelular / seal regulada quinasa (MEK), y la protena mitgeno-activada (MAP) de la cinasa. Estas aguas abajo de las vas Ras contribuir a la capacidad de las quinasas de tirosina para promover el crecimiento celular y regulan la expresin de varios genes. Nos hemos centrado en las vas de sealizacin aguas abajo del receptor de la insulina debido a la importancia de la insulina y el IGF-I en endocrinologa ( fig. 5.4 ). En muchos aspectos, los mecanismos moleculares parecidas a las que aguas abajo de la tirosina quinasa del receptor de otros. Sin embargo, la sealizacin de la insulina va es atpica por lo menos en un aspecto. El receptor de la insulina de acoplamiento fosforila protenas (por ejemplo, el IRS-1), que se unen el dominio SH2 que contienen protenas (por ejemplo, PI 3-quinasa y GRB-2). Por el contrario, los dominios intracelulares de tirosina quinasas del receptor de la mayora contienen sitios de unin para los dominios SH2. Por ejemplo, el dominio SH2 de GRB-2 se une a pTyr716 en el perfil activado receptor del PDGF. [ 2 ] Del mismo modo, el receptor del PDGF contiene dos Tyr-(Met / Xaa)-Xaa-Logramos motivos en el dominio kinasa insercin que se unen al dos dominios SH2 de la subunidad p85 de la PI 3-quinasa. [ 2 ] [ 51 ] No est claro por qu algunas quinasas de tirosina (por ejemplo, el receptor PDGF) activar PI 3-quinasa, mediante una interaccin directa vinculantes, mientras que otros (por ejemplo, el receptor de insulina) utilizar un mecanismo indirecto, que supone protenas de acoplamiento. Sin embargo, a diferencia de los receptores PDGF, que se asocian con la membrana plasmtica, las protenas IRS parecen estar asociadas con el citoesqueleto. [ 52 ] Tal vez la localizacin subcelular diferencial que contribuye a la sealizacin especificidad. En otras palabras, si la insulina y los receptores PDGF activar la translocacin de PI 3-quinasa a diferentes ubicaciones dentro de la clula, esta compartimentacin puede permitir que dos receptores diferentes para provocar respuestas biolgicas diferentes, aunque ambas respuestas son mediadas por la molcula de sealizacin mismo (es decir, PI 3-quinasa).

Figura 5.4 Modelo simplificado de las vas de sealizacin aguas abajo del receptor de la insulina. La insulina se une al receptor de insulina, activando el receptor de la tirosina quinasa que fosforila residuos de tirosina en el receptor de la insulina sustratos (IRSG) incluyendo el IRS-1 e IRS-2. [ 31 ] En consecuencia, los residuos de fosfotirosina en IRS se unen a molculas Src homologa 2 (SH2) dominios en molculas como el factor de la protena de unin al receptor de crecimiento 2 (GRB-2) y la subunidad p85 de reglamentacin del fosfatidilinositol (PI) 3-quinasa. Estos dominios contienen protenas-SH2 en marcha dos ramas distintas de la va de sealizacin. La activacin de PI 3-quinasa conduce a la activacin de las quinasas dependientes de fosfoinostidos-(PDKs) 1 y 2, que activa la protena quinasa mltiples incluyendo Akt / protena quinasa B, atpico protena quinasa C (PKC) isoformas, y el suero / protena quinasa activada-glucocorticoides (SGK). [ 53 ] Grb-2 interacta con m-SOS, un factor de intercambio de nucletidos de guanina que activa Ras. [ 54 ] La activacin de Ras desencadena una cascada de protenas quinasas que conduce a la activacin de la protena activada por mitgenos (MAP) cinasa .

Off Seales: La terminacin de la accin hormonal As como hay vas bioqumicas complejas que median la accin hormonal, tambin hay mecanismos para poner fin a la respuesta biolgica. La necesidad de estos mecanismos se ilustra con el siguiente ejemplo. Despus de comer una comida, aumenta la concentracin de glucosa en plasma. Esto provoca un aumento en la secrecin de insulina, que a su vez conduce a una disminucin en los niveles de glucosa en plasma. Si estos procesos se encendi sin control, el nivel de glucosa en el plasma finalmente caera tan bajo que dara lugar a la hipoglucemia sintomtica. Cmo se termina accin de la insulina? Las respuestas a esta pregunta no estn an del todo clara, pero varios mecanismos contribuyen a apagar la sealizacin de la insulina va. Endocitosis mediada por receptor La insulina unin a su receptor desencadena la endocitosis del receptor. Aunque la mayora de los receptores internalizados son reciclados hacia la membrana plasmtica, algunos receptores son transportadas a los lisosomas, donde son degradados. [ 55 ] [ 56 ] Como resultado, la unin de insulina acelera la velocidad de degradacin del receptor, con lo que establecen la regulacin del nmero- de los receptores en la superficie celular. Por otra parte, endosomas contienen las bombas de protones, que acidifican la luz, el pH cido en el endosoma promueve la disociacin de la insulina en su receptor. En ltima instancia, la insulina es transportada a los lisosomas para su degradacin. De hecho, la endocitosis mediada por receptor es el

principal mecanismo mediante el cual la insulina se elimina del plasma. [ 57 ] La unin de ligandos a receptores tirosina quinasas otros tambin desencadena la endocitosis mediada por receptor por mecanismos similares. Protena tirosina fosfatasas La fosforilacin de protenas es un proceso dinmico. La tirosina cinasas catalizan la fosforilacin de residuos tirosina, pero tambin hay tirosina fosfatasas (PTPases) para eliminar los fosfatos. [ 2 ] Por lo tanto, PTPases antagonizan la accin de las quinasas de tirosina. Los estudios con ratones knock-out han demostrado que la ausencia de PTPasa-1B se asocia con sensibilidad a la insulina y tambin protege contra el aumento de peso. [ 58 ] [ 59 ] Sin embargo, el genoma humano codifica un gran nmero de PTPases, y es un objetivo importante de la investigacin para dilucidar sus funciones fisiolgicas. Si se pudiera desarrollar inhibidores selectivos de la PTPases que se oponen a los efectos de la insulina tirosina quinasa del receptor, es posible que estos inhibidores proporcionara nuevas terapias para la diabetes. Serina / treonina La mayora de tirosina quinasas del receptor, incluido el receptor de la insulina, son sustratos para la fosforilacin de Ser / protena especfica-Thr quinasas. Curiosamente, el Ser / fosforilacin de Thr parece inhibir la accin de la tirosina quinasa. Del mismo modo, otros fosfotirosina protenas que contienen estn sujetos a las influencias inhibidoras de la Ser / resistencia fosforilacin de Thr. Por ejemplo, se ha informado de que Ser / Thr de la fosforilacin del IRS-1 puede inhibir la accin de la insulina, lo que causa resistencia a la insulina. [ 60 ] [ 61 ] [ 62 ] [ 63 ] [ 64 ] Mecanismos de la enfermedad Las formas ms sencillas de la enfermedad endocrina son causados por una deficiencia o un exceso de una hormona. Sin embargo, la resistencia a la hormona sndromes consecuencia de defectos en las vas de sealizacin pueden pasar por estados de deficiencia hormonal. Del mismo modo, las enfermedades asociadas a los receptores activados constitutivamente pueden simular estados de exceso hormonal. En algunos casos, la anomala en la accin hormonal es de origen gentico, resultado de una mutacin en un gen que codifica una de las protenas en la va de sealizacin. sndromes similares tambin pueden ser causados por otros mecanismos, por ejemplo, existen sndromes autoinmune causada por autoanticuerpos dirigidos contra la superficie de los receptores de las clulas. Estos sndromes clnicos ilustrar el principio que la comprensin de las vas bioqumicas de la accin hormonal puede proporcionar importantes conocimientos sobre la fisiopatologa de las enfermedades humanas. Defectos genticos en la funcin del receptor Al menos dos grandes tipos distintos de defectos genticos pueden causar resistencia a la hormona. [ 65 ] En primer lugar, las mutaciones pueden llevar a una disminucin en el nmero de receptores. Por ejemplo, en el caso del receptor de la insulina, se han identificado mutaciones que disminuyen el nmero de receptores por al menos tres mecanismos: (1) del receptor de la biosntesis de perjudicar, (2) la inhibicin del transporte de receptores a su ubicacin normal en la membrana plasmtica, y (3) la aceleracin de la tasa de degradacin del receptor. En segundo lugar, las mutaciones pueden afectar las actividades intrnseca del receptor. En el caso del receptor de insulina, las mutaciones se han reportado que disminuyen la afinidad de la insulina vinculante o inhibir la actividad tirosina quinasa del receptor. dimerizacin del receptor se sabe que juega un papel central en los mecanismos por los ligandos activan los receptores de la superficie celular varios. Este papel se ha demostrado de manera concluyente en el caso del receptor de GH (un miembro de la familia de receptores de citoquinas), pero tambin se ha postulado para tirosina quinasas del receptor. Los sndromes de neoplasia endocrina mltiple tipo 2A y 2B y carcinoma medular de tiroides familiar son causados por mutaciones en el gen que codifica la tirosina quinasa RET (una subunidad del receptor de factor de crecimiento derivado de clulas gliales). [ 66 ] Por lo general, la cistena residuos en el dominio extracelular de Ret participar en la formacin de enlaces disulfuro intramoleculares. La mutacin de uno de los residuos de cistena deja un residuo de cistena desapareados que promueve la dimerizacin de las molculas de Ret, activando la tirosina quinasa del receptor Ret ( fig. 5.5 ). La activacin de la tirosina quinasa RET travs de esta mutacin germinal convierte en un oncogen Ret.

Figura 5-5 Las mutaciones que conducen a la activacin constitutiva de Ret. "Tipo salvaje" Ret ha disulfuro de enlaces intramoleculares formada por dos residuos de cistena en la molcula mismo receptor (izquierda). Cuando uno de los dos residuos de cistena est mutado, el residuo de cistena desapareado est disponible para formar un puente disulfuro intermoleculares con un residuo de cistena en otra molcula receptora. Esto conduce a la dimerizacin del receptor (a la derecha), que a su vez conduce a la activacin constitutiva del receptor de la tirosina quinasa. [ 66 ] [ 67 ] [ 68 ] Este tipo de mutacin se ha identificado en pacientes con neoplasia endocrina mltiple tipo 2.

Autoanticuerpos dirigidos contra los receptores de la superficie celular autoanticuerpos antirreceptor inhibitoria se identific por primera vez en la miastenia gravis. [ 69 ] En esta enfermedad neurolgica, anticuerpos contra el receptor nicotnico de acetilcolina poner en peligro la transmisin neuromuscular, al parecer por la aceleracin de la degradacin del receptor. Posteriormente, los anticuerpos al receptor de insulina se demostr que bloquear la accin de insulina en el sndrome de resistencia a la insulina tipo extremo B. [ 70 ] La resistencia de insulina es causada por al menos dos mecanismos: (1) los anticuerpos antirreceptor inhiben la insulina unin al receptor [ 71 ] y (2) los anticuerpos acelerar la degradacin del receptor. [ 72 ] "La enfermedad de Graves siempre que el primer ejemplo de autoanticuerpos antirreceptor estimulantes. [ 73 ] En "La enfermedad de Graves, existen autoanticuerpos dirigidos contra la hormona estimulante del tiroides (TSH). Estos anticuerpos antirreceptor activar el receptor de TSH, estimulando as el crecimiento de la glndula tiroides, as como la hipersecrecin de hormona tiroidea. Este experimento "de la naturaleza" demuestra que el receptor puede ser activado por otros ligandos que el ligando fisiolgico y que el espectro normal de las acciones biolgicas pueden ser provocados por este ligando fisiolgico (es decir, el anticuerpo antirreceptor). Del mismo modo, los anticuerpos del receptor de la insulina se ha demostrado para activar el receptor de la insulina imitando accin de la insulina. Aunque es ms comn que un paciente con autoanticuerpos del receptor de insulina-anti presentar con resistencia a la insulina, los pacientes con autoanticuerpos del receptor de insulina-anti Tambin se ha informado a experimentar hipoglucemia en ayunas. [ 74 ] [ 75 ] Serina quinasas del receptor serina quinasas del receptor [ 76 ] tienen varias caractersticas en comn con el receptor de tirosina quinasas. Por ejemplo, los dos tipos de receptores poseen (1) terminal extracelular dominios-N, que se unen ligando, (2) un dominio transmembrana individual, y (3) terminal intracelular dominios-C, que poseen la protena quinasa. Sin embargo, las dos clases de receptores difieren con respecto a la especificidad enzimtica. Considerando que la tirosina quinasas del receptor fosforilan residuos de tirosina, serina quinasas del receptor fosforilan residuos de serina y treonina en sus sustratos proteicos. Hay dos tipos de quinasas serina del receptor: tipo I y tipo II. El genoma humano contiene 12 genes que codifican los receptores quinasas de serina y siete tipo I y cinco receptores tipo II, cada uno de los cuales es de aproximadamente 500 aminocidos de longitud. La activacin del receptor: Papel de los receptores Dimerizacin serina quinasas del receptor median las acciones biolgicas ( fig. 5-6 ), de una, grande sola familia de ligandos: el factor de crecimiento transformante (TGF)- familia de ligandos, que se caracterizan por la presencia de seis residuos de cistena conservados. [ 76 ] El genoma humano contiene 42 genes que codifican las citocinas en el TGF- de la familia, que se dividen en dos clases: (1) la activina / -TGF familia y (2) la sustancia inhibidora de Mller (MIS) / protena sea morfogentica (BMP ) de la familia. Activina y la inhibina conexos, as como MIS, son de inters particular en el campo de la endocrinologa reproductiva (ver captulos 8 y 16 ).

Figura 5-6 Mecanismo de accin de quinasas serina del receptor. La unin del ligando a la subunidad dimrica RII desencadenantes de montaje del receptor en el [heterotetramrica (RI) 2 (RII) 2 Estado]. RII transphosphorylates RI, con lo que la activacin de la fosforilacin de la R-Smad (ligado a SARA en endosomas). El R-Smad asociados phosphorylated con un Co-Smad. Finalmente, el R-Smad se transloca al ncleo, donde se une al ADN, lo que le permite regular la transcripcin de genes. El I-Smad tambin puede unirse al receptor se activa, promoviendo as la ubiquitinacin y degradacin del receptor.

Cuando los ligandos se unen a los receptores, esto promueve una interaccin fsica entre el receptor de tipo I (RI) y el tipo de receptor II (RII) (ver fig. 5.6 ). Como consecuencia de esta interaccin fsica, el receptor RII activa el receptor RI mediante la fosforilacin de uno o varios residuos de serina en el dominio GS (secuencia TTSGSGSG) del receptor de IR. [ 76 ] Cmo funciona la activacin del receptor de activacin ligando? En el caso del SIG / BMP familia de las citoquinas, se une el ligando del receptor a la aislada RI con alta afinidad y el receptor de baja afinidad con RII relativamente. Debido a que el ligando se puede enlazar de forma simultnea a ambos RI y RII, esto proporciona una explicacin para la capacidad de promover una interaccin fsica entre el RI con un IIR. El mecanismo es diferente en el caso de la activina / -TGF de la familia de las citocinas. Por ejemplo,- se une TGF con gran afinidad a RII, pero no interacta directamente con RI. Sin embargo, -TGF vinculante parece inducir un cambio conformacional en RII, promoviendo as una interaccin en la unin directa entre los dominios intracelulares de RII y RI. Adems, las citocinas como el TGF- existen como dmeros, que les permite unirse simultneamente a dos RII molculas de manera que el complejo receptor activado probablemente existe como una heterotetrmero: (RI) 2 (RII) 2.

Existe un nivel adicional de complejidad que contribuye a la regulacin de las quinasas serina del receptor. [ 76 ] La biologa relacionados con la activina proporciona varios ejemplos. Follistatin es un ligando "trampa", una protena soluble que se une activina, bloqueando el acceso a la RI y RII. La inhibina es un pptido que inhibe la sealizacin activina al unirse al receptor sin necesidad de activar la fosforilacin de la RI. Betaglycan es una protena de membrana anclada-, que funciona como un correceptor para la inhibina mediante la promocin de la inhibina unin al receptor de activina. Curiosamente, no se une betaglycan activina. Serina quinasas del receptor de fosforilar otras protenas intracelulares Una vez activado, serina quinasas del receptor son capaces de fosforilar otras protenas sustratos. regula las protenas Smadreceptor (R-Smad) funcionan como efectores de bajada inmediata de la serina quinasas del receptor (ver fig. 6.5 ). [ 76 ] protenas Smad son los homlogos mamferos de las protenas codificadas por el drosophila Mad (Madres contra decapentaplegic ) de genes y la C. elegans Sma genes. Hay cinco R-Smad protenas humanas. Smad2 y Smad3 median las acciones de la activina / -TGF de la familia de las citocinas; Smad1, Smad5 y Smad8 median las acciones de la MIS / BMP familia de las citocinas. El mecanismo de accin del TGF- se ha estudiado en detalle [ 71 ] y proporciona un prototipo para el mecanismo de accin de las quinasas serina del receptor. [ 76 ] Cuando se convierte en RI fosforiladas en su dominio GS en respuesta al TGF-, esta aumenta la afinidad de unin para las protenas Smad-R como Smad2 (ver fig. 5.6 ). Esto, a su vez, conduce a la fosforilacin de la serina dos residuos terminales-C en la secuencia SSXS en el extremo C-terminal de Smad2. Mediada por la fosforilacin del receptor de la R-Smad, Smad2, tiene lugar cuando Smad 2 se une a la Smad ancla para la activacin del receptor (SARA), que se encuentra en los endosomas tempranos. Cuando los dos terminales de los residuos de serina-C en Smad2 se fosforilan, Esto promueve la disociacin de Smad2 de SARA y tambin promueve la unin de Smad2 a la co-mediador (Co-Smad), Smad4. Por lo tanto, la fosforilacin de la R-Smad promueve la asamblea de los complejos Smad-heteromricos de molculas R con la Co-Smad. Smads tambin contienen sitios de fosforilacin por otras quinasas, que proporciona una oportunidad para la regulacin de la diafona de otros sistemas de sealizacin celular. Smad7 es un inhibidor Smad (I-Smad), que se une a los receptores activados en la competencia con R-Smads. La unin del receptor de Smad7 promueve la ubiquitinacin y la degradacin mediada por ubiquitina ligasas E3 y ubiquitinacin de reglamentacin factores Smad (los Pitufos). Estos procesos representan un sistema de retroalimentacin negativa, lo que contribuye a la terminacin del TGF- de sealizacin (ver fig. 6.5 ). Las protenas Smad regulan la expresin gnica R-Algunos Smads contienen ricos seales de localizacin nuclear-lisina (KKLKK), que se unen a la importina, con lo que la mediacin translocacin hacia el ncleo. [ 76 ] Es posible que la unin directa a los componentes del complejo del poro nuclear tambin contribuirn a este mecanismo mediante el cual Smads se translocan al ncleo. R-La mayora de Smads (con la excepcin de Smad2) se unen al ADN en una secuencia especfica de la moda. El elemento vinculante mnimo del Smad es una base de par 4 (pb) secuencia: 5'-AGAC-3 '. Esta secuencia es bastante corto, y no se espera que proporcione un alto grado de especificidad. Por lo tanto, parece probable que otros factores tambin contribuyen a la especificidad de la regulacin gnica. Los receptores de seal de que a travs de Associated tirosina quinasas Informacin general Los miembros de la familia de las citocinas de los receptores de tirosina quinasas del receptor se asemejan en su mecanismo de accin, con una diferencia importante. En lugar de la tirosina quinasa intrnseca que al receptor, la actividad enzimtica reside en una protena que se asocia con el receptor de citocina. Al igual que con tirosina quinasas del receptor, la unin del ligando al receptor de citocinas activa la cinasa asociada. Los ms de 25 ligandos conocidos que se unen a los miembros de la familia de receptores de citoquinas tienen diversas funciones. Tres de los ligandos son hormonas: (1) GH, que es vital para la altura normal del cuerpo, (2) prolactina (PRL), que se requiere para la reproduccin y la lactancia, y (3) la leptina, que suprime el apetito y estimula el gasto energtico. Otros ligandos de receptores de citoquinas, por ejemplo, la eritropoyetina, la mayora de las interleucinas y los interferones , , y , regulan la hematopoyesis o la respuesta inmune. Un nmero de enfermedades genticas se pueden remontar a defectos en los receptores de citoquinas. Por ejemplo, el enanismo de Laron es causada por mutaciones autosmicas recesivas del receptor de GH [ 77 ] y autosmica recesiva mutaciones del receptor de la leptina puede causar la obesidad mrbida. [ 78 ] Receptores de citoquinas se componen de mltiples subunidades Los miembros de la familia de receptores de citoquinas comparten homologa tanto en el citoplasma y dominios extracelulares. Algunos receptores de citoquinas, incluyendo los receptores de GH, PRL, y la leptina, se cree que se compondr de los dmeros de una subunidad del receptor nico ( fig. 7.5 ). Un ligando se cree que se unen a ambas subunidades del receptor como se seal anteriormente para el receptor de GH. Sin embargo, la mayora de los receptores de citoquinas se

componen de dos o ms subunidades diferentes, con nada menos que seis subunidades que constituyen un solo receptor. [ 79 ] [ 80 ] Algunos de estos receptores se cree que los dmeros se unen ligando. Uno o ms de estas subunidades de los receptores es compartido por los receptores de otras citoquinas. Este fenmeno de "matching" de los receptores subunidades y la mezcla es una forma eficiente de la celda para afinar sus respuestas celulares y aumentar el nmero de ligandos un grupo de subunidades del receptor puede unirse. Por ejemplo, un receptor integrado de gp130 y la leucemia del receptor del factor inhibidor subunidad se une el factor inhibidor de la leucemia, una citoquina pleiotrpicos con funciones mltiples que parece servir como interfaz entre la moleculares y los sistemas endocrinos neuroinmunes. [ 81 ] Las subunidades del receptor mismo, cuando combinado con un factor ciliar neurotrfico subunidad del receptor, muestran una preferencia por el factor neurotrfico ciliar, un factor trfico para las neuronas motoras en el ganglio ciliar y la mdula espinal y un supresor de apetito potente. [ 82 ] Combina dos subunidades gp130 con interleucina-6 (IL -6) subunidad del receptor y el receptor de nuevo muestra una preferencia por la IL-6, un inductor de la respuesta de fase aguda, con ms propiedades antiinflamatorias. [ 83 ]

Figura 5-7 receptores de citoquinas se componen de mltiples subunidades y se unen a uno o ms miembros de la quinasa Janus (JAK) de la familia de las cinasas de la tirosina. Una, la hormona del crecimiento (GH), como la prolactina y la leptina, se une al receptor de homodmeros y activa JAK2 . B, el Interfern- (IFN-) homodmeros se unen a su unin R1 subunidades-ligando. Las subunidades R2 son entonces contratados, lo que lleva a la activacin de JAK1, que se une a la subunidad R1 y JAK2, que se une a la subunidad R2. Ambas subunidades y ambos son necesarios para JAK respuestas al IFN-. C, interleucina-2 (IL-2) se une a los receptores compuesto por tres subunidades: una subunidad c para compartir con los receptores de IL 4, 7, 9 y 15; un IL 2R subunidadcompartido con el receptor de IL-15, y una subunidad del receptor de noncytokine, IL-2R subunidad. IL-2 activa tanto JAK3, unidos a la subunidad c y JAK1, obligado a IL2-R. extracelular regiones de homologa se indican mediante las lneas de negro y patrones. intracelular regiones de homologa se indican mediante las lneas en blanco. subunidades idnticas se identifican con colores idnticos.

Receptores de citoquinas Activar los miembros de la familia Jano de la tirosina quinasas Los miembros de la familia de las citocinas de los receptores no se presentan actividad enzimtica. Ms bien, se unen a los miembros de la familia de Jano de tirosina quinasas (JAK) a travs de una regin rica en prolina (ver fig. 7.5 ). Hay cuatro JAK conocido, designado JAK1, JAK2, JAK3 y Tyk2. Al igual que los propios receptores de citoquinas, la mezcla de JAK y partido en que algunos receptores muestran una fuerte preferencia por una sola JAK, algunos requieren dos JAK diferentes, y otros parecen activar varios miembros de la familia JAK. Por ejemplo, GH, PRL, y la leptina preferentemente activar JAK2. El interfern- activa JAK1 y JAK2, e IL-2 activa y JAK1 JAK3. [ 79 ] [ 84 ] La unin del ligando a un receptor de citocinas activa el JAK miembro de la familia o los miembros apropiados. En algunos casos (por ejemplo, PRL), el JAK parecen ser constitutivamente asociada con el receptor de citoquinas y ligando incrementa la unin de su actividad. [ 85 ] En otros casos (por ejemplo, el receptor de GH), ligando los aumentos obligatorios tanto la afinidad de JAK para el receptor de citoquinas y la actividad de la JAK asociadas. [ 86 ] La activacin de JAK requiere oligomerizacin del receptor, probablemente para llevar a dos o ms JAK en proximidad suficiente como para transphosphorylate entre s en la activacin de la tirosina quinasa en el dominio, como se describi anteriormente en el captulo para la tirosina quinasas del receptor. Tanto la dimerizacin del receptor y ligando inducidos por cambios en la conformacin de los receptores parecen ser necesarios para la activacin del receptor. [ 87 ] transfosforilacin se cree que causa un cambio conformacional que expone el ATP o el sitio de unin del sustrato, o ambas cosas. Una vez que el JAK son activadas, se fosforilan ellos y sus asociados subunidades de los receptores de tirosinas mltiples. JAK parecen ser vitales para la funcin humana normal. Las mutaciones en el gen JAK3 se han relacionado con una forma autosmica recesiva de la enfermedad de inmunodeficiencia combinada severa. [ 88 ] la interrupcin selectiva del gen JAK2 en los ratones es embrionaria letal. [ 89 ] Vas de sealizacin del receptor Iniciado por JAK Complejos de citoquinas tirosinas fosforilados dentro de las subunidades de receptores de citoquinas y de sus asociados JAK sitios de unin para formar diferentes protenas de sealizacin que contienen dominios de unin a fosfotirosina, tales como dominios SH2 y PTB. Cada receptor-JAK complejo de citoquinas se espera que tenga algunos con motivos-tirosina comparta con muchos complejos de receptores de citoquinas JAK-otros (por ejemplo, dentro de tirosinas JAK) y algunas especficas de la tirosina-ligando con motivos (por ejemplo, tirosinas en una combinacin especfica de subunidades del receptor). As, la unin del ligando a los receptores de citoquinas se espera que iniciar algunas vas de sealizacin que son compartidos por muchas citocinas y otros que son ms especializados a un receptor de citoquinas en particular. Las protenas de sealizacin que se sabe reclut a subconjuntos de citocina JAK complejos de los receptores son generalmente los mismos que los reclutados para tirosina quinasas del receptor. Los ejemplos incluyen las protenas IRS, las protenas adaptadoras y Shc Grb 2-que conducen a la activacin de la MAP quinasa-Ras, C fosfolipasa, y PI 3-quinasa. Sin embargo, existe una familia de protenas de sealizacin que parece ser particularmente importante para la funcin de los transductores de seales de las citoquinas y activadores de

la transcripcin (STAT) ( fig. 5-8 ). protenas STAT son la transcripcin citoplasmticos factores latentes. obligar a STAT, a travs de sus dominios SH2, a uno o ms fosforilada en tirosinas activado complejos JAK-receptor. Una vez unidos, ellos mismos son tirosilo fosforilada, presumiblemente por los asociados JAK-receptor. STAT luego disociarse de la va JAK complejos-receptor, o homodimerize heterodimerizan con protenas STAT otros, se mueven hacia el ncleo, y se unen a elementos como el activado por la secuencia de rayos gamma en los promotores de genes de respuesta a las citocinas. [ 90 ] La respuesta depende de la transcripcin cuntos sitios de unin de STAT existen en el complejo receptor-JAK, con cul de los siete conocidos STAT STAT heterodimerizes un particular, sobre lo que uno se une a otras protenas STAT particular, el grado de fosforilacin de la serina o treonina del STAT, y qu otros factores de transcripcin tambin se activan. Por ejemplo, la leucemia factor inhibitorio, cuyo receptor contiene siete motivos vinculante STAT3 (YXXQ, donde Y = tirosina, X = cualquier aminocido, la glutamina y = Q) es un potente activador de STATSTAT3 particular. [ 91 ] La actividad transcripcional de STAT5 es reforzada por su formacin de un complejo con el de glucocorticoides, mineralocorticoides y los receptores de progesterona, pero se ve disminuida por la formacin de un complejo con el receptor de estrgeno. [ 92 ] La importancia de la sealizacin STAT5b de GH es ilustrada por la afirmacin de que la falta de crecimiento grave se asocia a mutaciones puntuales en el gen STAT5b que dan lugar a un dominio SH2 defectuoso o una, truncado forma inestable de STAT5b. [ 93 ] [ 94 ]

Figura 5-8 Las citocinas activan transductores de seales y activadores de la transcripcin (STAT). protenas STAT son la transcripcin citoplasmticos factores latentes. obligar a STAT, a travs de homologa Src 2 (SH2) dominios, a una o varias tirosinas fosforiladas en los complejos activados JAK-receptor. Una vez unidos, ellos mismos son tirosilo fosforilada, presumiblemente por los asociados JAK-receptor. STAT luego disociarse de la va JAK complejosreceptor, o homodimerize heterodimerizan con protenas STAT otros, se mueven hacia el ncleo, y se unen a elementos como el activado por la secuencia de rayos gamma (GLE) en los promotores de genes de respuesta a las citocinas. (Adaptado de la figura de J. Herrington, con permiso.)

La regulacin precisa de los receptores de citoquinas es necesario para el funcionamiento normal La unin del ligando de receptores de citoquinas normalmente se activa rpidamente y de forma transitoria JAK. Por el contrario, activada constitutivamente JAK y STAT estn asociados con la transformacin celular. Por ejemplo, la activacin de un nico punto de mutacin adquirida en JAK 2 est presente en la mayora de los pacientes con un trastorno mieloproliferativo. [ 95 ] activa constitutivamente JAK y STAT tambin son una caracterstica comn de las leucemias, [ 96 ] y JAK2 y ambos han sido STAT5b identificados como integrantes de la fusin de translocaciones en leucemias. JAK2 La protena de fusin-Tel es constitutivamente activa, dando lugar a protenas STAT constitutivamente activo. Por lo tanto, una comprensin de lo que se apaga la sealizacin de receptores de citoquinas es de suma importancia en la comprensin de la sealizacin normal a travs de receptores de citoquinas. Al igual que con la tirosina quinasa del receptor, varias medidas se ha considerado que sirven como puntos de seal de terminacin de la sealizacin de citoquinas. Estos incluyen la degradacin del receptor (por ejemplo, a travs de un ubiquination / va proteosoma) y defosforilacin de tirosinas en JAK o receptor (por ejemplo, una tirosina fosfatasa que se une a los complejos de JAK-receptor). Los supresores de citoquinas y de sealizacin (SOCSs) se cree que son importantes actores en particular en la rescisin o la supresin de las vas de sealizacin de citoquinas. Protenas SOCS son un excelente ejemplo de una curva de retroalimentacin negativa eficaz. Generalmente son sintetizadas en respuesta a las citocinas. Las nuevas protenas sintetizadas SOCS a su vez se unen, a travs de sus dominios SH2, a tirosinas fosforiladas en el complejo receptorJAK citoquinas e inhibir an ms citoquinas sealizacin. En algunos casos (es decir, SOCS1), protenas SOCS se cree que se unen a phosphotyrosines en el dominio quinasa de JAK e inhiben la actividad de la cinasa. [ 97 ] En otros casos (es decir, SOCS3), SOCS protenas se unen a las tirosinas fosforiladas en el receptor y inhiben la actividad de JAK. [ 98 ] Por ltimo, en algunos casos (por ejemplo, citoquinas-inducible de la protena SH2 [CIS]), se unen las protenas SOCS a tirosinas fosforiladas en el receptor y STAT bloque de unin y activacin. [ 99 ] protenas SOCS tambin puede ser sintetizado en respuesta a noncytokine receptores, lo que sugiere un mecanismo por el cual la exposicin previa a un ligando suprime las respuestas posteriores a otro. Por ejemplo, las protenas SOCS han sido implicados en la conocida capacidad y de endotoxina para causar resistencia a la GH. [ 100 ] Resumen Las hormonas, factores de crecimiento y citocinas que se unen a los miembros de la familia de las citocinas de los receptores de tirosina quinasas JAK activar familia. Las quinasas activadas a su vez fosforilan tirosinas en s mismos y receptores asociados. Tirosinas fosforiladas El formulario de sitios de unin para otras protenas de sealizacin, incluyendo las protenas STAT y una variedad de otras protenas de unin-fosfotirosina. protenas STAT promover la regulacin de los genes sensibles a citocinas, incluyendo las protenas SOCS que sirven a una funcin de retroalimentacin negativa de poner fin a la activacin de JAK ligando o las estadsticas, o ambas cosas.

Aunque esto le da al cuadro general, hay que reconocer que el panorama se est volviendo mucho ms complejo cada da. Por ejemplo, hay informes de que miembros de la familia Src de tirosina quinasas tambin se puede activar por algunos receptores de citoquinas (por ejemplo, el receptor de PRL), [ 101 ] que algunas protenas de unin-JAK (por ejemplo, SH2-B) son activadores potentes de la JAK2, [ 102 ] y otras protenas que contribuyen a la baja regulacin de las vas de sealizacin por citocinas, incluyendo inhibidores de la protena del STAT activado (PIAS) que se unen a protenas especficas y STAT regulan negativamente su actividad. [ 103 ] receptores de citoquinas, JAK, STAT, y / o protenas SOCS Tambin se ha demostrado que interactuar con o ser componentes de la sealizacin aguas abajo de la tirosina quinasa del receptor de algunos (por ejemplo, los receptores para la insulina, IGF-I, factor de crecimiento epidrmico), as como varias G receptores acoplados a protenas ( por ejemplo, los receptores de la angiotensina II, la serotonina, -trombina, la hormona luteinizante). En contraste con su papel esencial en la sealizacin por receptores de citoquinas, JAK no parecen ser el principal mediador de sealizacin ya sea con la tirosina quinasa del receptor o del G-receptores acoplados a protenas. G receptores acoplados a protenas Informacin general G receptores acoplados a protenas (GPCR) son una superfamilia de genes conservados evolutivamente con miembros en todos los eucariotas en levaduras y mamferos. Ellos transducir una amplia variedad de seales extracelulares como los fotones de la luz, olores qumicos; cationes bivalentes, de las monoaminas, aminocidos y nuclesidos neurotransmisores; lpidos y protenas y hormonas peptdicas. [ 104 ] Todos los miembros de la superfamilia de GPCR un rasgo estructural comn , siete hlices que atraviesan la membrana, pero subfamilias distintas, difieren en secuencia de aminocidos primaria y en los dominios que sirven de unin del ligando, el acoplamiento a protenas G, y la interaccin con otras protenas efectoras ( fig. 9.5 ).

Figura 5-9 El acoplados a protenas G del receptor (GPCR): la diversidad en la unin del ligando y la estructura. Cada grupo representa a varios miembros de la superfamilia de GPCR en forma de dibujos animados. Los siete que atraviesan la membrana hlices se muestran como los cilindros con el amino terminal extracelular y tres asas extracelulares arriba y el extremo carboxilo intracelular y tres bucles intracelulares a continuacin. La superfamilia se puede dividir en tres subfamilias sobre la base de cido amino conservacin de la secuencia dentro de las hlices transmembrana. Familia 1 incluye (A) el opsinas, en el que la luz (flecha dentada) hace que la isomerizacin de la retina covalente en el bolsillo creado por las hlices transmembrana (bar); (B) receptores de las monoaminas, en el que los agonistas (flecha) se unen no covalente en el bolsillo creado por las hlices transmembrana (bar); (C) los receptores de pptidos, como la vasopresina, en el cual vinculante agonista (flecha) puede implicar partes del amino terminal extracelular y bucles, as como las hlices transmembrana (bar), y (D ) hormona glicoprotena receptores, en la que los agonistas (oval) se unen a la gran extremo amino terminal extracelular, activando el receptor a travs de interacciones como indefinido pero con los bucles extracelulares o hlices transmembrana (flecha). Familia 2 incluye los receptores de hormonas peptdicas como la hormona paratiroidea (PTH) y la secretina. Agonistas (flecha) se puede enlazar a los residuos en el amino terminal extracelular y bucles, as como las hlices transmembrana (bar). Familia 3 se incluye la de Ca 2 + extracelular receptor sensible y metabotrpicos receptores de glutamato. Los agonistas (esfera) se unen en una hendidura de la atrapamoscas-como Venus en el dominio amino terminal extracelular grandes, activando el receptor a travs de interacciones como indefinido pero con los bucles extracelulares o hlices transmembrana (flecha).

Todo acto de intercambio de guanina GPCRs factores de nucletidos. En su activa (agonista enlazado a) la conformacin, que catalizan el intercambio de PIB fuertemente unido a la subunidad de las protenas G heterotrimricas por GTP ( fig. 5-10 ). Esto a su vez conduce a la activacin de la subunidad y su disociacin de la protena G dmero. Ambas subunidades de protenas G son capaces de regular la actividad efectora. [ 105 ] identificado protenas reguladas efectores-G son: las enzimas del metabolismo del segundo mensajero, como la adenilato ciclasa y la fosfolipasa C- y una variedad de canales inicos. Agonista vinculante para GPCRs tanto altera segundo mensajero intracelular y las concentraciones de iones, con los consiguientes efectos rpidos en la secrecin de hormonas, la contraccin muscular, y una variedad de otras funciones fisiolgicas. Los cambios a largo plazo en la expresin gnica son tambin vistos como un resultado de mensajeros-estimul la fosforilacin de factores de transcripcin segundos.

Figura 5-10 La protena G guanosina trifosfatasa (GTPasa) y acoplados a protenas G del receptor (GPCR)resensibilizacin ciclo de desensibilizacin. En cada panel, la regin punteada denota la membrana plasmtica con extracelulares e intracelulares arriba abajo. En el estado basal, la protena G es un heterodmero con difosfato de

guanosina (PIB) fuertemente unido a la subunidad . La GPCR activados por agonista cataliza la liberacin del PIB, lo que permite la guanosina trifosfato (GTP) de obligar. Las subunidades de protenas G son codificadas por tres genes distintos. La subunidad se une nucletidos de guanina con gran afinidad y especificidad y ha guanosina trifosfatasa intrnseca (GTPasa) actividad. El y polipptidos estn estrechamente asociados, pero no covalente en una subunidad dmero funcional. Las dimensiones de las estructuras de tres subunidades y asociados individuales han sido determinadas. [ 105 ] [ 106 ] Existe una considerable diversidad en subunidades de la protena G, con mltiples genes codifican las tres subunidades y empalme de genes se traduce en productos alternativos polipptido adicional. Hay por lo menos 16 distintas subunidad genes en los mamferos. Estos varan en el rango de expresin. Algunos, como el G-, que muchas parejas GPCRs a la estimulacin de la adenilato ciclasa, son muy abundantes, mientras que otros, como el GTL-, que a las parejas la rodopsina GPCR de guanosina cclica monofosfato-phos phodiesterase en la retina fotorreceptores bastones, estn muy localizados . Debido a mltiples distintos GPCRs, protenas G y efectores se expresan en cualquier clula dada, el grado y la base de la especificidad en el acoplamiento de la protena G para GPCRs y efectores son los principales temas de investigacin con implicaciones para la accin de los frmacos y los mecanismos de la enfermedad. [ 106 ] Puesto el trabajo pionero de Rodbell [ 107 ] en el descubrimiento de las protenas G y que muestran que la transduccin de seales mediadas por G-protena consta de tres componentes separables (receptores, protenas G y efectores), ha surgido una complejidad adicional. Una nueva gran familia de genes llamada RGS (para los reguladores de la protena G de sealizacin) ha sido identificado. RGS protenas se unen a un estado de transicin de la protena G -subunidad activa GTP y acelerar su actividad GTPasa, contribuyendo as a la subunidad desactivar. RGS dominios tambin se han encontrado en las protenas modulares con funciones adicionales, en ciertos casos la vinculacin protena G heterotrimrica de sealizacin con la funcin de bajo peso molecular-protenas de unin al GTP en la superfamilia Ras. [ 106 ] Lefkowitz [ 108 ] ha demostrado que una familia de quinasas de protenas GPCR y arrestina est implicada en la desensibilizacin GPCR tras la unin agonista. Adems, ahora est claro que GPCRs interactuar directamente con un nmero de otras protenas, adems de las protenas G. No slo son importantes los objetivos GPCR para el tratamiento de muchas enfermedades, sino tambin mutaciones en genes que codifican GPCRs se han identificado como la causa de una nmero de las enfermedades endocrinas, as como trastornos endocrinos. Acoplados a protenas G. Estructura y funcin del receptor Estructura Hidropathia anlisis de la secuencia principal de todos los GPCRs predice siete que atraviesan la membrana hlices conectadas por tres bucles intracelulares y tres asas extracelulares con un amino terminal extracelular y un terminal carboxilo intracelular (ver fig. 5-9 ). Esta estructura bsica ha sido verificado por cristalografa de rayos X de la rodopsina. [ 109 ] Aunque ya exista evidencia de que la transduccin visual en la retina y la activacin de la hormona de la adenilato ciclasa para compartir caractersticas comunes, el descubrimiento de que los receptores adrenrgico tiene el mismo estructura topogrfica como la rodopsina fue una sorpresa. [ 108 ] La clonacin de la desoxirribonucleico cidos complementario (ADNc) para un gran nmero de GPCRs seguido dilucidacin de la secuencia primaria del receptor -adrenrgico, y en todos los casos la estructura del ncleo mismo se predijo mediante el anlisis hidroterapia. Adems de la estructura del ncleo se predijo, ciertos rasgos comunes de otro tipo (salvo en ciertos subgrupos de la superfamilia de GPCR) se observaron [ 104 ]: (1) un puente disulfuro que conecta el segundo y el primer bucle extracelular, (2) uno o ms N -sitios de glicosilacin ligados, generalmente en el extremo amino terminal, pero de vez en cuando en los bucles extracelulares; (3) palmitoilacin de uno o ms cistenas en el extremo carboxilo, creando un bucle intracelular cuarto, (4) sitios potenciales de fosforilacin en el extremo carboxilo y en ocasiones la bucle intracelular tercero. Glicosilacin parece ser importante para el correcto plegamiento y el trfico a la membrana plasmtica y no por la unin del ligando. El puente disulfuro puede ayudar en el arreglo adecuado de las hlices transmembrana. Superpuesto a la estructura bsica de GPCRs son una serie de variaciones relevantes a las diferencias en el ligando, G acoplamiento unin a protenas y la interaccin con otras protenas. [ 104 ] En primer lugar, existen grandes diferencias en la secuencia de aminocidos entre los miembros de la superfamilia de GPCR. Secuencia la alineacin, sobre todo de las hlices transmembrana, permite dividir la superfamilia en subfamilias (ver fig. 5-9 ). De ellos, la familia 1 es el ms grande y se puede subdividir. El subgrupo ms grande incluye opsinas; receptores odorferos y de las monoaminas, purinrgicos, y los receptores de opiceos. Estos se caracterizan por un extremo amino terminal corto. El subconjunto incluye prxima quimioquinas, activado, y ciertas hormonas peptdicas receptores de la proteasa se caracteriza por un amino terminal ya un poco. El subconjunto ltima cuenta con receptores para las hormonas glicoprotena grande, TSH, la hormona luteinizante y hormona estimulante del folculo. Estos tienen un residuo de aproximadamente 400-amino terminal extracelular. Familia 2 muestra esencialmente ninguna homologa de secuencia con la familia 1, incluso dentro de las hlices transmembrana y se caracteriza por una aproximadamente de 100 residuos. Amino terminal de los miembros

incluyen los receptores de una serie de hormonas peptdicas como la hormona paratiroidea (PTH), calcitonina, el pptido intestinal vasoactivo, y hormona liberadora de corticotropina. Familia 3, adems de una secuencia primaria nica, tiene otras caractersticas nicas tales como un residuo carboxilo-terminal de 200 aproximadamente y una de aproximadamente 600 residuos amino terminal. Esta ltima consiste en una supuesta "Venus atrapamoscas-como" dominio y un dominio rico en cistena. Los miembros incluyen a los receptores metabotrpicos de glutamato, una extracelular Ca 2 +-receptor sensible, y el gusto putativo y receptores de feromonas. [ 110 ] La determinacin de la estructura cristalina tridimensional y tres de una parte del amino terminal extracelular de uno de los receptores metabotrpicos de glutamato verifica la estructura atrapamoscas Venus. [ 110 ] La unin del ligando Dada la diversidad de ligandos (> 1000) que se unen a GPCRs, no es sorprendente que una considerable diversidad es evidente tanto en la secuencia y estructura del ligando GPCR vinculante dominios-presuntivo. El opsinas son nicos entre los GPCRs en que el ligando, la retina, forma enlaces covalentes con una lisina en la hlice transmembrana sptimo. [ 109 ] La unin del ligando a otros miembros de la familia de uno con una breve extremo amino terminal extracelular, por ejemplo, y otros monoamino adrenrgicos receptores, probablemente implica un bolsillo dentro de la transmembrana de hlices como demuestran, por la rodopsina (ver fig. 9.5 ). Para la familia de otros GPCRs 1, el extremo amino terminal extracelular, tal vez junto con asas extracelulares y las porciones de las hlices transmembrana, participa en la unin del ligando. En el caso de los receptores de la hormona glicoprotena, el gran extremo amino terminal extracelular desempea el papel principal en la unin de la hormona . En un modelo de unin a la familia de pptidos 2 receptores, el extremo amino terminal extracelular es responsable de la consolidacin inicial al pptido carboxi-terminal del pptido seguido vinculante-terminal amino al dominio transmembrana siete. [ 111 ] Para la familia de GPCRs 3, los tres estructura tridimensional del receptor tipo 1 metabotrpicos de glutamato muestra que la unin se produce dentro de un agonista de la hendidura entre los lbulos de la atrapamoscas Venus. [ 110 ] Acoplamiento protena G Debido a que el nmero potencial de las protenas G a la que par GPCRs es mucho ms limitado que el nmero de ligandos que se unen GPCR, la conservacin de varios de los dominios implicados en el acoplamiento a protenas G que cabra esperar. Aunque GPCRs pueden dividirse en los que par a Gs, los que par a la subfamilia GQ, y los que a la par-Go subfamilia Gi, la situacin es probablemente ms complicado. [ 106 ] La especificidad de acoplamiento a la mayora de los recientemente identificados protenas G, GL2 y G13, es todava incierto. Adems, algunos GPCRs, evidentemente, puede acoplar tanto a Gs y Gq. Un gran nmero de estudios han sido realizados para definir los sitios de unin del ligando y la protena G de acoplamiento de GPCR. [ 106 ] [ 112 ] la evidencia apunta a la considerable tercer bucle intracelular (en particular, suporciones proximal de membrana) y la membrana proximal- La parte de la terminal carboxilo como determinantes clave de la protena G especificidad de acoplamiento. Por ejemplo, el intercambio slo el tercer bucle intracelular entre GPCRs diferentes confiere la protena G de acoplamiento especificidad del bucle en el intercambio de GPCR destinatario. [ 113 ] En contraste, el bucle intracelular segundo, aunque importante para el acoplamiento de la protena G, parece jugar un papel en el mecanismo de activacin en lugar de en la determinacin de la especificidad de acoplamiento. [ 113 ] Un motivo tripptido (D / E, R, S / W) al inicio del segundo bucle intracelular que es altamente conservado en la familia de un GPCR es fundamental para la protena G activacin. [ 112 ] Mecanismo de activacin El mecanismo preciso de la activacin despus de la unin agonista queda por definir para la mayora de GPCRs, pero los estudios de la rodopsina ofrecer la imagen ms clara disponible. En el estado fundamental, la retina covalentemente a la hlice transmembrana sptimo de la rodopsina tiene las hlices transmembrana en una conformacin inactiva. Isomerizacin de la retina de la absorcin de la luz de la longitud de onda adecuada se convierte en un antagonista del ligando un agonista. La estructura cristalina rodopsina identifica los residuos en las hlices transmembrana que interactan con la retina y sugiere un mecanismo para el movimiento de las hlices en fotoactivacin de la retina. [ 109 ] El movimiento de las hlices transmembrana a su vez conduce a cambios en la conformacin de los bucles citoplasmticos que promueven G activacin de la protena. Para la familia de receptores relacionados con una rodopsina, la determinacin de su estructura de tres dimensiones valida la idea de que un cambio en la conformacin de hlices transmembrana es el resultado directo de agonista versus antagonista de la unin a los residuos dentro de las hlices. Otras mejoras en la comprensin del mecanismo de activacin de GPCRs relacionados-opsina debera ser una dimensin adicional se determinan tres estructuras. Hasta entonces, modelado molecular por ordenador sobre la base de la estructura de la rodopsina y, a continuacin ofrecemos una prueba experimental de un enfoque til. [ 114 ] Para otros GPCRs cuyo presunto sitio de unin agonista no implica contacto directo con las hlices transmembrana (familias 2 y 3 y el receptores de hormonas en la familia de la glicoprotena 1), queda mucho por aprender sobre cmo vinculante agonista al dominio

extracelular de estos GPCRs conduce a cambios en la presunta conformacin de hlices transmembrana y la activacin del receptor. Determinacin de la estructura del dominio extracelular del receptor de FSH de la envolvente a la FSH proporciona pistas importantes sobre el mecanismo general de la hormona de la glicoprotena vinculantes para sus GPCRs afines, y las interacciones resultante con el dominio transmembrana siete conduce a la activacin. [ 115 ] una hiptesis general de la activacin de GPCR postula que GPCR estn en equilibrio entre un estado activado y un estado inactivo. Estos estados, presumiblemente difieren en la disposicin de las hlices transmembrana y, a su vez, los dominios citoplasmticos que determinan la protena G de acoplamiento. Agonistas, de acuerdo con este modelo complejo ternario, son vistos como la estabilizacin del estado activado. Antagonistas puede ser neutral, es decir, simplemente competir con agonistas de la unin al receptor, pero su unin no influye en este equilibrio. Alternativamente, pueden ser "inversa" agonistas, es decir, su unin estabiliza el estado inactivo del receptor. [ 116 ] Las mejoras del modelo de complejo ternario sobre la base de estudios cinticos y biofsicos sugieren mayor complejidad. [ 117 ] Dimerizacin Los miembros de la familia del receptor de la tirosina quinasa desde hace tiempo se sabe que requieren dimerizacin como parte de su mecanismo de activacin. Ahora es evidente que muchas GPCRs tambin forma homodmeros y heterodmeros. [ 104 ] Residuos dentro de hlice transmembrana 06 de mayo fomentar la dimerizacin de la familia de una pequea GPCRs, [ 118 ] y puentes disulfuro intermoleculares en el amino-terminal del dominio extracelular estn involucrados en homodimerization de la mayora familiar de 3 GPCRs. [ 110 ] [ 119 ] [ 120 ] Una bobina de la interaccin en espiral en el extremo carboxilo del cido aminobutrico B-subtipos de receptores es responsable de heterodimerizacin, y esto es crtico para la funcin del receptor apropiado. [ 121 ] Modificaciones del ligando vinculante, de sealizacin, y el secuestro de los receptores se han demostrado en heterodimerizacin de la angiotensina con los receptores de la bradiquinina, de con receptores opioides, y de opioides con receptores adrenrgicos . [ 122 ] Se necesitan ms estudios para dilucidar la relevancia fisiolgica de homodimerization GPCR y heterodimerizacin. Acoplados a protenas G. desensibilizacin de los receptores Los farmaclogos Hace mucho tiempo que la exposicin continua a agonista conduce a una disminucin de la respuesta, llamado desensibilizacin as. Este fenmeno ha sido estudiado ampliamente en GPCR. Dos formas se definen: heterloga, en la cual unin del agonista a un GPCR conduce a una disminucin de la respuesta de un GPCR diferente a su agonista, y homlogos, en la que la desensibilizacin se produce slo por la Revolucin Cultural a la que est obligado agonista. Ambas formas de desensibilizacin involucran la fosforilacin por kinasas GPCR, pero diferentes y en diferentes sitios. La estimulacin de la formacin de monofosfato de adenosina cclico por la unin a un agonista de acoplamiento de GPCR Gs lleva a la activacin de la protena quinasa A, que a su vez puede fosforilar y desensibilizar el GPCR. Dicha fosforilacin tambin puede alterar G-acoplamiento especificidad de la protena. [ 104 ] Del mismo modo, la activacin de la protena quinasa C derivado de acoplamiento GPCR a miembros de la familia Gq puede causar la protena C quinasa cataliza la fosforilacin de GPCR con la desensibilizacin. En los fotorreceptores de la retina, una quinasa especfica rodopsina y una protena llamada arrestina estaban implicados en la atenuacin de la respuesta de la luz. As como se identificaron paralelos entre la rodopsina y la estructura de GPCR, por lo que fueron identificados en paralelo a este mecanismo de desensibilizacin. Rodopsina cinasa no es ms que un miembro de una familia de quinasas y GPCR arrestina slo uno de una familia de protenas relacionadas que funcionan en la prdida de sensibilidad de muchos miembros de la superfamilia de GPCR. [ 108 ] GPCR quinasas fosforilan preferentemente la forma de la envolvente-agonista de un GPCR, garantizando as la desensibilizacin homloga. Tras la fosforilacin GPCR por GPCR quinasa, arrestinas enlazar con el tercer bucle intracelular y la cola carboxilo-terminal de la Revolucin Cultural, bloqueando la protena G vinculantes (ver fig. 510 ). quinasas GPCR y arrestinas no slo actan para desensibilizar GPCRs pero tambin mediar otras funciones, incluyendo la internalizacin del receptor y la interaccin con otros efectores (ver apartado siguiente). Acoplados a protenas G. Las interacciones con otras protenas del receptor El paradigma inicial de la funcin GPCR postulado que la activacin de la protena G es el nico resultado de la unin a GPCRs agonista. Con la identificacin de las interacciones de GPCR con quinasas GPCR y arrestinas, este concepto fue modificado para incluir estas protenas implicadas en la desensibilizacin GPCR. Ms tarde las pruebas, sin embargo, sugiere que la interaccin de GPCR con arrestinas tambin permiten el reclutamiento de otras protenas a los GPCR. Por ejemplo, la tirosina cinasa Src puede interactuar con los receptores -adrenrgicos, con -arrestina que acta como un adaptador. [ 123 ] Arrestinas puede tambin contratar a las protenas implicadas en la endocitosis. quinasas GPCR tambin puede servir para contratar a ms protenas de sealizacin de la Revolucin Cultural. [ 123 ] Otras clases de protenas pueden interactuar con GPCRs especfico sin contratacin por kinasas GPCR y arrestinas. Estos incluyen SH2 de dominio que contienen protenas, las pequeas protenas de unin al GTP, y PDZ (para p ostsynaptic densidad de las protenas-95 / d grandes ISCS / z ona occluden-1) de dominio que contienen protenas. Ejemplos de estos ltimos son vinculantes del intercambiador Na + / H factor regulador + a la terminal carboxilo de la -adrenrgicos. [ 123 ] El carboxilo terminal larga de la familia 3 GPCRs como los receptores metabotrpicos de

glutamato contiene motivos poliprolina involucrados en vinculan a los miembros de la familia de Homero. Este ltimo puede facilitar las interacciones funcionales con otras protenas sin embargo, como el receptor inositol trifosfato. [ 124 ] la actividad de modificacin de las protenas de los receptores (rampas), una nueva familia de protenas transmembrana de dominio nico-, parecen heterodimerizan con ciertas GPCRs, ayudndoles en el plegamiento adecuado y trfico de membranas. [ 125 ] Es interesante, cuando la Revolucin Cultural-asociados como el receptor de calcitonina con RAMP1, forma un receptor del pptido relacionado con gen de la calcitonina, mientras que cuando se asocia con RAMP2, se convierte en un receptor de adrenomedulina. Claramente, esta rpida evolucin aspecto de la funcin GPCR tiene muchos e interesantes los nuevos acontecimientos en la tienda. G receptores acoplados a protenas en la patognesis y tratamiento de enfermedades Debido a sus crticas y diversos roles en la fisiologa normal, su accesibilidad en la superficie celular, y la capacidad de sintetizar los agonistas y antagonistas selectivos, GPCR desde hace mucho tiempo un objetivo importante para el desarrollo de drogas. Una estimacin es que alrededor del 65% de los medicamentos recetados son dirigida contra GPCRs. orientacin GPCRs Las drogas actan no slo como agonistas o antagonistas, sino tambin como moduladores alostricos. llamada calciomimticos drogas-tanto inhiben la liberacin de hormona paratiroidea, por ejemplo, al unirse al dominio transmembrana siete y actuar como moduladores alostricos positivos del Ca 2 +-receptor sensible. [ 120 ] Con la clonacin de cDNAs GPCR, una mayor diversidad tanto de subclases de los receptores se hizo evidente que se haba previsto sobre la base de los estudios farmacolgicos. Por ejemplo, cinco subtipos de receptores muscarnicos y un mayor nmero par de GPCRs serotoninrgicos fueron identificados. [ 112 ] Esto ha permitido el desarrollo de muy especficos, selectivos drogas subtipo que tienen menos efectos secundarios que los producidos por los agentes disponibles anteriormente. Otro resultado de la clonacin de cDNAs GPCR por la investigacin de homologa y la reaccin en cadena de la polimerasa basada en enfoques es la identificacin de los "hurfanos" GPCRs, es decir, los receptores con la cannica, prevista de siete dominios transmembrana estructura de GPCRs pero sin conocimiento de sus fisiolgica agonista. Se han hecho esfuerzos considerables para identificar los ligandos pertinentes para tales receptores hurfanos. ciclo de Krebs intermedios, succinato y -cetoglutarato, por ejemplo, se demostr que los activadores fisiolgicamente relevantes de GPCR hurfano GPR91 y GPR99, respectivamente, y por lo tanto para regular la liberacin de renina y la presin arterial. [ 126 ] GPR40, otro receptor hurfano de forma selectiva expresado en las clulas , es activado por los cidos grasos libres y pueden desempear un papel en la vinculacin de la obesidad a diabetes tipo 2. [ 127 ] Adems de revelar fisiolgicos y mecanismos fisiopatolgicos, GPCR "deorphanization" proporciona nuevos objetivos para el desarrollo de frmacos. Ms all del desarrollo de drogas, los defectos en GPCRs son una causa importante de una amplia variedad de enfermedades humanas. [ 128 ] GPCR mutaciones pueden causar prdida de la funcin y afectar a cualquiera de varios pasos en la Revolucin Cultural-GTPasa ciclo normal (ver fig. 5-10 ) . Estos incluyen la falta de sntesis de protenas GPCR en conjunto, el fracaso de GPCR sintetizado para llegar a la membrana plasmtica, el fracaso de GPCR para atar o ser activados por agonista, y el fracaso de GPCR de pareja o activar la protena G. Dado que en la mayora de los casos significativos de deterioro clnicamente transduccin de seales requiere la prdida de ambos alelos del gen GPCR, la mayora de estas enfermedades se heredan de forma autosmica recesiva ( tabla 5-1 ).

TABLA 5-1 - Enfermedades causadas por la protena G acoplada al receptor de funcin mutaciones de prdida Receptor Enfermedad Herencia Ligada al cromosoma X Autosmica recesiva Autosmica recesiva Autosmica recesiva Autosmica recesiva Autosmica recesiva Autosmica recesiva Autosmica recesiva Autosmica dominante

vasopresina V2 La diabetes inspida nefrognica ACTH GHRH GnRH GPR54 FSH LH TSH Ca 2 + de Familiar ACTH resistencia Familiar deficiencia de GH Hipogonadismo hipogonadotrpico Hipogonadismo hipogonadotrpico Hypergonadotropic disgenesia ovrica pseudohermafroditismo masculino hipotiroidismo familiar Hipocalcirica familiar hipercalcemia, hiperparatiroidismo

deteccin

primario neonatal severa

autosmica recesiva Autosmica recesiva Autosmica recesiva

Melanocortina 4 Obesidad PTH / PTHrP Blomstrand condrodisplasia

ACTH, hormona adrenocorticotropa, FSH, hormona estimulante del folculo, GH, hormona de crecimiento; GHRH, la hormona del crecimiento hormona liberadora; GnRH, hormona liberadora de gonadotropina, la LH, hormona luteinizante, hormona paratiroidea, hormona paratiroidea; PTHrP, relacionado con la hormona paratiroidea protenas; TSH, hormona estimulante de la tiroides.

La mayora de estas enfermedades se manifiestan como resistencia a la accin del agonista normal y por lo tanto imitan la deficiencia del agonista. Por ejemplo, TSH receptor de funcin mutaciones de prdida causar una forma de hipotiroidismo imitar la deficiencia de TSH, pero TSH srica es realmente elevada en estos casos, lo que refleja la resistencia a la hormona de accin de los derivados de la funcin del receptor defectuoso. Curiosamente, el hipogonadismo hipogonadotrpico pueden ser causados por prdida de la funcin de cualquiera de las mutaciones del receptor de GnRH o de los GPCR hurfano GPR54. En el primer caso, existe una resistencia a la accin de GnRH. Esto ltimo puede deberse a la falta de liberacin de GnRH, pero el mecanismo exacto no se ha definido. [ 129 ] la diabetes inspida nefrognica (resistencia a la vasopresina renal) es causado por mutaciones de prdida de funcin en el gen receptor de vasopresina V2 se encuentra en la X cromosoma. Por lo tanto, los hombres con una sola copia del gen de la experiencia de la enfermedad cuando se heredan un gen mutante, mientras que la mayora de las hembras no muestran enfermedad manifiesta debido al azar inactivacin X los deja con un promedio de 50% de la funcin del gen normal. La mayora de las mutaciones del receptor de vasopresina V2 asociados con diabetes inspida nefrognica causar la prdida de la funcin al afectar la sntesis normal o plegamiento del receptor, o ambos. Un nuevo mecanismo para la prdida de la funcin del receptor esclarecido en el receptor de la vasopresina V2 una mutacin sin sentido asociado con la diabetes inspida nefrognica involucra arrestina desensibilizacin mediada constitutiva. [ 130 ] El extracelular 2 +-receptor sensible al calcio parece ser una interesante excepcin a la asociacin entre los GPCR de funcin mutaciones de prdida y resistencia a la hormona. De funcin mutaciones de prdida de la Ca 2 +-receptor sensible al simular un estado de hipersecrecin hormonal, hiperparatiroidismo primario. De hecho, Ca 2 +-receptor sensible de funcin mutaciones de prdida de hormonas hacen resistencia a la causa, pero en este caso extracelular Ca 2 + es el agonista hormonal que acta a travs de este receptor para inhibir la secrecin de PTH. Una de funcin mutacin prdida de una copia del gen del receptor suele causar resistencia leve a Ca 2 + extracelular se manifiesta como la hipercalcemia hipocalcirica familiar. Si dos copias defectuosas se heredan, Ca 2 + extrema resistencia a la causa primaria de los resultados neonatales hiperparatiroidismo grave (ver Cuadro 5.1 ). En algunos casos, un receptor de heterocigotos de funcin mutacin prdida puede estar asociada con hiperparatiroidismo primario neonatal severa, quizs reflejando un efecto negativo dominante causado por dimerizacin del tipo y del mutante receptores silvestres. [ 131 ] GPCR de funcin mutaciones de ganancia ( Tabla 2.5 ) son tambin una causa importante de enfermedad. [ 128 ] Dado el carcter dominante de la activacin de las mutaciones, la mayora de estas enfermedades se heredan de forma autosmica dominante. Activacin de las mutaciones del receptor de TSH se pueden heredar de forma autosmica dominante y difuso agrandamiento de la tiroides causa hipertiroidismo en nonautoimmune familiar, o pueden ocurrir como mutaciones somticas causando focal, los ndulos tiroideos espordicos hiperfuncionales. [ 132 ] Del mismo modo, activar la lnea germinal mutaciones del receptor de LH causa familiar varn pubertad precoz independiente debido a las clulas de Leydig, hiperfuncin de LH, mientras que mutaciones somticas de los receptores de LH puede causar tumores focales de clulas de Leydig. [ 132 ]

TABLA 5-2 - Enfermedades causadas por la protena G acoplada al receptor de funcin mutaciones con ganancia Receptor LH TSH Enfermedad Familiar pubertad precoz masculina Herencia Autosmica dominante

Ndulos tiroideos espordicos hiperfuncionales No heredado (somticas)

TSH

Familiar nonautoimmune hipertiroidismo

Autosmica dominante Autosmica dominante Autosmica dominante Autosmica dominante

Ca 2 + de deteccin Hipocalcmica familiar hipercalciuria PTH / PTHrP vasopresina V2 condrodisplasia metafisaria de Jansen Nefrognica inadecuado antidiuresis

LH, hormona luteinizante, hormona paratiroidea, hormona paratiroidea; PTHrP, relacionado con la hormona paratiroidea protenas;, hormona estimulante del tiroides TSH.

A diferencia de funcin mutaciones de prdida, que puede ser de cambio de sentido, as como del marco de lectura o mutaciones sin sentido que truncar la protena del receptor normal, la ganancia de funcin GPCR mutaciones son casi siempre las mutaciones sin sentido. La ubicacin y la naturaleza de forma natural, mutaciones causantes de enfermedad ofrecen pistas importantes sobre la estructura y la funcin GPCR. La base para la funcin del receptor defectuoso est claro que la sntesis con mutaciones del receptor truncado prematuramente. Ms sutiles mutaciones de sentido errneo puede daar la funcin si suponen los residuos altamente conservados en las hlices transmembrana crtica para el plegamiento normal de protenas. Activacin de las mutaciones de cambio de sentido a menudo implican los residuos dentro o bordeando las hlices transmembrana y se piensa que interrumpir el normal restricciones inhibitorias que mantener el receptor en su conformacin inactiva. [ 133 mutaciones] perturbar estas limitaciones imitar los efectos de agonistas vinculante y desplazan el equilibrio hacia el estado activado de el receptor. Un ejemplo notable es la activacin, las mutaciones de cambio de sentido en el receptor de la vasopresina V2 de la arginina 137, parte de la "seca" motivo en la frontera intracelular de hlice transmembrana 3 conserva en la mayora de la familia un GPCR, que lleva al sndrome de nefrognica antidiuresis inapropiado. [ 134 ] Clnicamente, las enfermedades causadas por mutaciones activadoras GPCR tanto imitan estados de exceso de agonista, pero la medicin directa muestra que las concentraciones de agonistas son realmente bajos, reflejando los mecanismos normales de retroalimentacin negativa. De nuevo, el 2 +-receptor sensible al calcio es una excepcin aparente, con la activacin de las mutaciones que causan el hipoparatiroidismo funcional. Para la mayora de GPCR, la funcin de las mutaciones asociadas--ganancia de la enfermedad de causa constitutiva, agonista-independiente, la activacin, pero con raras excepciones, el Ca 2 +-receptor sensible de funcin mutaciones con ganancia causar un aumento en la sensibilidad al Ca 2 + extracelular en lugar de Ca 2-independiente de la activacin +. [ 131 ] De origen natural modelos animales de enfermedades humanas han revelado otros ejemplos de mutaciones GPCR etiolgico. Por ejemplo, una de funcin en la mutacin de prdida de hipocretina (orexina) del gen receptor de tipo 2 se identific en la narcolepsia canina. [ 135 ] Decenas de ratn knockout de genes GPCR modelos han sido creados, muchos de ellos y algunos casos inesperados fenotipos interesantes revelador. Caracterizacin del fenotipo resultante de la interrupcin de un gen del ratn GPCR puede predecir con exactitud el cuadro clnico resultante de la mutacin en los seres humanos correspondientes, como a la interrupcin del gen del receptor de 4-melanocortina resultantes de la obesidad en ratones [ 136 ] y [humanos 137 ] y la alteracin de la PTH / protena del receptor relacionado con el gen de PTH perjudica el crecimiento normal del hueso y el desarrollo en ratn [ 138 ] y en la enfermedad de condrodisplasia Blomstrand humanos. [ 139 ] modelos knockout ms y ms estudios detallados de estos modelos se puede esperar que aumente sustancialmente nuestra comprensin de la funcin GPCR y abordar cuestiones como el papel nico de mltiples subtipos de GPCR subclases diferentes, por ejemplo, el subtipo de receptores adrenrgicos3. [ 140 ] La disponibilidad de modelos de ratn knockout de las enfermedades humanas deben facilitar tambin el ensayo de nuevas terapias incluida la transferencia de genes. Por ejemplo, los aminoglucsidos, que se conocen para suprimir la terminacin prematura de codones, se demostr que los rescate de expresin y la funcin en ratones con diabetes inspida nefrognica causada por una mutacin sin sentido en el receptor de la vasopresina V2. [ 141 ] que causan enfermedades prdida de muchas de las mutaciones en la funcin GPCRs llevar a plegamiento de las protenas defectuosas y / o protena de enrutamiento. Nuevos enfoques teraputicos tales como el uso de la biologa molecular "acompaantes" y la modulacin de la "calidad del control celular" mecanismos han demostrado ser prometedores en los estudios in vitro. [ 142 ] Deteccin de genes de GPCR para las mutaciones como causa potencial de otras enfermedades humanas pueden continuar hasta su vez nuevos ejemplos, pero tambin es cada vez ms evidente que las variaciones en la secuencia del gen GPCR puede tener profundas consecuencias ms all de simplemente provocan resistencia a, o la activacin independiente de la agonista de la hormona afines. El sndrome de hiperestimulacin ovrica familiar espontneos que ocurren al comienzo del embarazo, por ejemplo, ha demostrado ser causadas por mutaciones sin sentido en el dominio hlice transmembrana del receptor de FSH. [ 143 ] [ 144 Este aumento de las mutaciones del receptor de] la actividad basal, y permitir una baja afinidad de unin hCG para el ectodominio para activar el receptor de FSH. Se necesitan estudios para determinar si la susceptibilidad variable a la hiperestimulacin ovrica iatrognicos que

ocurren en el contexto de la fertilizacin in vitro puede ser debido a estas variaciones en la secuencia del receptor de FSH. [ 144 ] A medida que ms se descubren los polimorfismos en el genoma humano, muchos ejemplos de las variaciones en la secuencia del gen GPCR se encuentra ante el desafo ser el de aclarar su significado funcional posible. Los estudios in vitro pueden revelar diferencias funcionales, como las diferencias en el acoplamiento de la protena G visto con un amino-cido polimorfismo de las cuatro de la intracelular tercer bucle de la 2C-adrenrgicos , [ 145 ], pero se necesitan ms estudios para determinar si estas diferencias son importantes en la variacin individual en la respuesta a diferentes frmacos (farmacogenmica), u otras diferencias fisiolgicas sutiles que pueden conferir susceptibilidad a la enfermedad (enfermedad de los genes complejos). Dada la gran proporcin del genoma humano dedicado a los genes de GPCR, est claro que los estudios de esta superfamilia de genes que juegan un papel prominente en la secuencia del genoma humano era post.