UNIVERSIDADE TCNICA DE LISBOA

Faculdade de Medicina Veterinria

Coccidiose em Pequenos Ruminantes

Patrcia Isabel Garo Paredes

CONSTITUIO DO JRI
Professor Doutor Miguel Lus Mendes Saraiva Lima Professor Doutor Jos Augusto Farraia e Silva Meireles Professor Doutor Geoge Thomas Stilwell Dr. Nuno Vicent e M. Santos Prates

ORIENTADOR
Dr. Nuno Vicente M. Santos Prates

CO-ORIENTADOR
Professor Doutor Geoge Thomas Stilwell

2010

LISBOA

UNIVERSIDADE TCNICA DE LISBOA

Faculdade de Medicina Veterinria

Coccidiose em Pequenos Ruminantes

Patrcia Isabel Garo Paredes

CONSTITUIO DO JRI
Professor Doutor Miguel Lus Mendes Saraiva Lima Professor Doutor Jos Augusto Farraia e Silva Meireles Professor Doutor Geoge Thomas Stilwell Dr. Nuno Vicent e M. Santos Prates

ORIENTADOR
Dr. Nuno Vicente M. Santos Prates

CO-ORIENTADOR
Professor Doutor Geoge Thomas Stilwell

2010

LISBOA

Sem o esforo e dedicao deles seria impossvel chegar at aqui Dedico esta dissertao aos meus pais. i

Agradecimentos

Quando comecei a escrever esta dissertao pensei deixar os agradecimentos para o final por pensar ser a parte mais fcil, no entanto, agora que os escrevo deparo-me com uma grande dificuldade. As palavras correctas para poder agradecer o quanto fizeram por mim faltam-me e sinto medo de esquecer algum importante Em primeiro lugar quero agradecer aos meus pais tudo o que fizeram por mim, o esforo e as dificuldades que ultrapassaram para eu poder estudar em Lisboa e para hoje poder concluir o curso que sempre quis. minha irm, pela amizade e compreenso. Aos meus avs, sem eles seria impossvel chegar at aqui. Agradeo ao Professor George Stilwell por todo o conhecimento que partilhou e por toda a ajuda prestada ao longo desta dissertao. Ao Dr. Nuno Prates, por me ter recebido no Hospital Veterinrio Muralha de vora e por todos os conhecimentos prticos transmitidos. Ao Dr. Jos Miguel Leal da Costa e Dr. Pedro Dunes por me terem recebido no HVME e por todos os conhecimentos partilhados. A toda a restante equipa do HVME, em especial Dr. Snia Germano, Snia Viegas e Ana Maria Carvoeiras por toda a amizade e apoio. Agradeo ao Professor Hlder Cortes pela oportunidade de participar no estudo, pelos sbios conhecimentos e pela disponibilidade para me ajudar sempre que foi necessrio. D. Maria Joo do Laboratrio de Parasitologia Victor Caeiro, da Universidade de vora, pela ajuda no processamento das anlises coprolgicas e pelos conhecimentos que partilhou comigo. Ao Dr. Joo Raposo pela oportunidade de participar no estudo em conjunto com a Bayer Health Care Sade Animal, pela amizade e pelos conhecimentos partilhados. Ao Dr. Telmo Nunes pela ajuda no tratamento estatstico dos dados. Agradeo a todos os meus amigos, em especial Ins Moutinho, Catarina Aguiar e Lus Lagoa pela sua amizade e compreenso. Ao Joo Pedro Bento, pelo seu incondicional apoio. ii

 Ana Maria Azevedo, Rita Furtado, Maria Madalena Centeno e todos os restantes amigos e colegas de turma. Ana Gomes, por toda a amizade demonstrada. A toda a minha famlia que no referi mas que muito me ajudaram.

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Coccidiose em pequenos ruminantes

Resumo
Coccidiose uma parasitose causadas por parasitas da subclasse Coccidia. No entanto, o termo utilizado, maioritariamente, para referir parasitoses causadas por parasitas do gnero Eimeria, tal como ocorreu ao longo desta dissertao. Existe um grande nmero de espcies de Eimeria, estas apresentam grande especificidade em relao ao hospedeiro. A patogenicidade depende da espcie e poucas so consideradas suficientemente patognicas, para que, por si s, desencadeiem manifestaes clnicas da doena. Geralmente as infeces envolvem vrias espcies. uma doena intestinal que normalmente assume uma forma insidiosa e s se torna evidente nos animais infectados aps o aparecimento de sinais clnicos como diarreia, debilidade, inaptncia ou perda de peso, provocando grandes perdas econmicas em todo o mundo. Tem o seu maior impacto em borregos com menos de trs meses de idade e comum em cabritos nos primeiros seis meses. mais comum em sistemas de produo intensiva, sendo influenciada por vrios factores, entre os quais, e o mais importante, o maneio praticado na explorao. E. crandallis e E. ovinoidalis so consideradas as espcies mais patognicas em ovinos e em caprinos a E. ninakohlyakimovae. Durante o perodo de estgio foram realizados dois estudos. O primeiro estudo pretendeu avaliar a prevalncia de Eimeria spp. em exploraes portuguesas de ovinos em regime extensivo, semi-intensivo e intensivo, seleccionadas por mtodos no probabilsticos. Neste estudo verificou-se que os sistemas intensivos apresentavam maior percentagem de animais infectados, infeces do tipo misto eram mais prevalentes em exploraes extensivas e infeces simples em exploraes intensivas. E. bakuensis foi a espcie mais prevalente nos trs sistemas de produo. E. ovinoidalis, uma das espcies mais patognicas, foi mais frequente em exploraes intensivas. O segundo estudo realizado pretendeu analisar o nvel de excreo de oocistos de Eimeria spp. em cabritos entre as trs e as treze semanas de vida em dois sistemas de produo distintos (uma explorao localizava-se em Portel e outra na Igrejinha), sendo que, em Portel os cabritos eram amamentados pelas fmeas aleitantes e na Igrejinha eram amamentados artificialmente. Os resultados revelaram que E. caprina e E. christenseni apresentaram valores mdios de excreo de oocistos superiores na explorao de Portel. O total mdio de excreo de oocistos de Eimeria spp. atingiu o valor mais elevado s treze semanas, idade em que as espcies E. arloingi, E. caprina, E.caprovina, E. christenseni e E. hirci apresentaram os valores mdios de excreo de oocistos mais elevados. Entre as quais, E. arloingi apresentou o valor mais elevado. Palavras Chave: Coccidiose, Eimeria spp., prevalncia, maneio, sistema produo.

iv

Coccidiosis in small ruminants Abstract

Coccidiosis is a parasitism caused by parasites of the subclass Coccidia. Nevertheless, the term is used, generally, to refer to parasitism caused by parasites of the genre EimeriaThere is a great number of species of Eimeria which present a great host specificity. The pathogenecity depends on the species and few are considered pathogenic enough to, just for themselves, cause clinical manifestations of the disease. However the infections usually involve several species and regularly assumes a subtle form that only becomes evident in the infected animals after the occurrence of clinical signs, such as diarrhea, debility and weight loss, leading to important economical losses. Coccidiosis has its bigger impact in lambs with less than three months of age and it is common in goat kids in the first six months. It is more common in intense production systems, being influenced by many aspects, amongst which, and most important, the handling practiced in the explorations. E. crandallis and E. ovinoidalis are considered the more pathogenic species in sheep and in goats it is E. ninakohlyakimovae. Two studies were carried out during the training period. The first one had the purpose of evaluating the prevalence of Eimeria spp. in Portuguese sheep farms in extensive, semi-intensive and intensive systems, selected by non probabilistic methods. In this study it was concluded that the intensive systems presented a higher percentage of infected animals, being the single infections more frequent in intensive explorations and mixed infections more frequent in the extensive ones. E. bakuensis was the prevalent species in the three systems of production. E. ovinoidalis, one of the more pathogenic species, was more frequent in intensive explorations. The second study pretended to analyze the level of excretion of oocistos of Eimeria spp in kids between three and thirteen weeks of life in two distinct systems of production (in Portel and in Igrejinha), In the Portel farm the kids were fed by their dams and in the Igrejinha farm they were fed artificially. The results showed that E. caprina and E. christenseni presented excretion values of oocistos, superior in the Portel exploration. The total Eimeria spp. oocysts excretion excretion reached the maximum value at thirteen weeks, age in which E. arloingi, E. caprina, E.caprovina, E. christenseni and E. hirci reached the maximum medium values of excretion of oocyst. Amongst these, E. arloingi, presented the higher values.

Key words: coccidiosis, Eimeria spp., prevalence, management, production system.

ndice Geral
PARTE I INTRODUO .....................................................................................................1
Pequenos Ruminante s no Alentejo e em Portugal ...................................................................... 3 Caracterizao dos si stemas de produo de pequenos ruminantes em Portugal ..................... 5

PARTE II REVISO BIBLIOGRFICA ............................................................................6

1) Parasiti smo .......................................................................................................................... 6 1.1) Definio de Parasitismo................................................................................................. 6 1.2) Modos de parasitismo ..................................................................................................... 7

2) Coccidiose em Pequenos Ruminantes .................................................................................... 8 2.1) Taxonomia ......................................................................................................................... 8 2.2) Etiologia ........................................................................................................................... 10 2.2.1) Ovinos ........................................................................................................................... 10 2.2.2) Caprinos ........................................................................................................................ 12 2.3) Ciclo evolutivo .................................................................................................................. 14 2.4) Epidemiologia ................................................................................................................... 18 2.4.1) Factores que interferem nas caractersticas da coccidiose ................................................ 19 2.5) Patogenia ......................................................................................................................... 24 2.6) Sinais clnic os ................................................................................................................... 27 2.7) Leses ............................................................................................................................. 28 2.7.1) Leses Macroscpicas ................................................................................................... 28 2.7.2) Leses Microscpicas .................................................................................................... 31 2.8) Diagnstico....................................................................................................................... 33 2.9) Controlo sanitrio e prticas de maneio .............................................................................. 35 2.10) Controlo Imunolgico....................................................................................................... 37 2.11) Controlo Quimioprofilctico .............................................................................................. 38 2.12) Tratamento ..................................................................................................................... 40

PARTE III ESTUDOS DE CASO .................................................................................... 43

1) Prevalncia de Eimeria spp. em exploraes portugue sa s de ovinos em regime extensivo, semi-intensivo e intensivo ......................................................................................................... 43 1.1) Introduo .................................................................................................................... 43 1.2) Materiais e Mt odos ...................................................................................................... 45 1.3) Resultados ....................................................................................................................... 48 1.4) Discusso de result ados / Concluso ................................................................................. 51 2) Nvel de excreo de oocistos de Eimeria spp. em cabritos entre as tr s e as treze semanas de vida em dois si stemas de produo di stintos. ..................................................................... 54 2.1) Introduo ........................................................................................................................ 54 2.2) Materiais e Mtodos .......................................................................................................... 56 2.3) Resultados ....................................................................................................................... 60 2.4) Discusso de result ados / Concluso ................................................................................. 65

PARTE IV CONCLUSES GERAIS .............................................................................. 68

vi

BIBLIOGRAFIA .................................................................................................................... 70 ANEXOS ................................................................................................................................ 74

Anexo I ...................................................................................................................................... 75 Anexo II ..................................................................................................................................... 77 Anexo III .................................................................................................................................... 81

ndice de Figuras
Figura 1 Oito espcies de Eimeria, que parasitam ovinos, identificadas em fezes de borregos lactantes (Silva et al., 2007) (adaptado de www.scielo.br). ..................................... 12 Figura 2 Oocistos Eimeria spp.: A - E. alijevi; B - E. ninakohlyakimovae: C - E. arloingi D E. caprovina. (Original) ............................................................................................................. 13 Figura 3 - Ciclo de vida de uma coccidia tpica. (Disponvel em www.engormix.com)........... 17 Figura 4 Leses de coccidiose no ceco de um borrego. (Adaptado de Tafti e Mansourian (2008))....................................................................................................................................... 30 Figura 5 Leses crnicas de cocccidiose num borrego. Superfcie da serosa cerebriforme. rgo fixado em formol. (Adaptado de Tafti e Mansourian (2008)). ....................................... 31 Figura 6 Coccidiose num borrego. Macroesquizontes na lmina prpria e glndulas de Lieberkuhn do leo. Corado com Hematoxilina e eosina, ampliao 60X. (Adaptado de Tafti e Mansourian (2008)). ................................................................................................................. 32 Figura 7 - Recolha de fezes num borrego, directamente da ampola rectal e borregos de uma explorao de regime extensivo (Original). ............................................................................. 47 Figura 8 Parque cabritos na Igrejinha, zona de aleitamento com deficientes condies de higiene. (Original) ..................................................................................................................... 56 Figura 9 Caprinos adultos em Portel antes da amamentao e ordenha. (Original)........... 57 Figura 10 Zona de amamentao dos cabritos em Portel. (Original) .................................. 57 Figura 11 Amostra de fezes de um cabrito de Portel. (Original) .......................................... 59 Figura 12 - Algumas espcies de Eimeria observadas. A E. ninakohlyakimovae B E. alijevi C E. arloingi D E. caprina E E. christenseni F E. aspheronica (Original) ......... 60

vii

ndice de Tabelas
Tabela 1 Local da infeco e periodo pr-patente da Eimeria spp., em ovinos. (adaptado de Taylor, Coop & Wall, (2007)). ................................................................................................... 16 Tabela 2 Local da infeco e periodo pr-patente da Eimeria spp., em caprinos. (adaptado de Taylor, Coop & Wall, (2007)). .............................................................................................. 17 Tabela 3 Prevalncia de coccidiose ovina em diversos pases. (Adaptado de Deniz, 2008. Coccidiose ovina: Reviso bibliogrfica, disponvel em: www.bayervet.bayer.pt).................. 45 Tabela 4 - Relao entre o tipo de infeco e o sistema de produo (valores percentuais). .................................................................................................................................................. 49 Tabela 5 - Mdias de excreo de oocistos de Eimeria spp. por grama de fezes na explororao da Igrejinha e na explorao de Portel. * - p<0,05 ............................................ 61 Tabela 6 - Mdia de excreo de Eimeria spp. em cabritos das trs s treze semanas de idade. * - Valores estatisticamente significativos ..................................................................... 64 Tabela 7- Dados do estudo prevalncia de Eimeria spp. em exploraes portuguesas de ovinos em regime extensivo, semi-intensivo e intensivo. M- mista; S- simples; NI- no infectado; s- sim; n- no; E- extensivo; SI- semi-intensivo; I- intensivo .................................. 77 Tabela 8 - Dados do estudo do nvel de excreo de oocistos de Eimeria spp. em cabritos entre as trs e as treze semanas de vida em dois sistemas de produo distintos............... 82

ndice de Grficos
Grfico 1 - Nmero de animais saneados durante o perodo de estgio.................................. 2 Grfico 2- Actividades clnicas desenvolvidas durante o perodo de estgio. .......................... 2 Grfico 3 - Actividade clnica desenvolvida no aparelho reprodutor. ........................................ 2 Grfico 4 Efectivo ovino nacional em 2008 (dados do INE, 2008)......................................... 4 Grfico 5 - Efectivo caprino nacional em 2008 (dados do INE, 2008). ..................................... 4 Grfico 6- Percentagem de exploraes em regime extensivo com e sem suspeita de coccidiose clnica. ..................................................................................................................... 48 Grfico 7 - Percentagem de exploraes em regime intensivo com e sem suspeita de coccidiose clnica. ..................................................................................................................... 48 Grfico 8 - Percentagem de exploraes em regime semi-intensivo com e sem suspeita de coccidiose clnica. ..................................................................................................................... 49 Grfico 9 - Prevalncia de Eimeria spp. em animais de exploraes de regime extensivo. .. 50 Grfico 10 - Prevalncia de Eimeria spp. em animais de exploraes de regime intensivo. . 51 viii

Grfico 11 - Prevalncia de Eimeria spp. em animais de exploraes de regime semiintensivo. ................................................................................................................................... 51 Grfico 12 - Mdias de excreo de oocistos de Eimeria spp. por grama de fezes na explorao da Igrejinha e na explorao de Portel. * - p<0,05 ............................................... 62 Grfico 13 - Relao entre o total de excreo de oocistos de Eimeria spp. e a idade dos cabritos em semanas. .............................................................................................................. 63

ix

Lista de abreviaturas

BRSV Vrus Respiratrio Sincicial Bovino BVD Diarreia Viral Bovina cm centmetro DL50 Dose Letal 50 E. Eimeria ELISA Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay g grama HVME Hospital Veterinrio Muralha de vora IBR Rinotraquete Infecciosa Bovina INE Instituto Nacional de Estatstica mg/kg miligrama por kilograma mg/L miligrama por litro ml mililitro NA sem valor NaCl Cloreto de Sdio mm milmetro OPG oocistos por grama OPP Organizao de Produtores Pecurios PI3 Parainfluenza 3 ppm partes por milho sd desvio padro

Parte I Introduo
No mbito do estgio curricular do Mestrado Integrado em Medicina Veterinria, realizado entre 1 de Outubro de 2009 e 31 de Maro de 2010, decorrido no Hospital Veterinrio Muralha de vora, foram desenvolvidas vrias actividades como sanidade de bovinos, ovinos e caprinos e actividades na rea da clnica (consultas, cirurgias e partos) nessas mesmas espcies. Para a realizao das actividades de sanidade animal foi possvel acompanhar vrias brigadas sanitrias da Organizao de Produtores Pecurios (OPP) coordenadas por mdicos veterinrios do hospital. Os mdicos veterinrios em questo coordenam brigadas sanitrias nas OPP de vora, Monforte, Beja e Coruche. Desta forma, as prticas sanitrias realizaram-se em vrias regies do Alentejo. Na rea de sanidade animal realizaram-se rastreios de brucelose, em pequenos ruminantes, e de brucelose, tuberculose, leucose enzotica e peripneumonia contagiosa em bovinos. Efectuaram-se ainda vacinaes contra o vrus da Lngua Azul, vacinao contra clostridioses e desparasitaes contra parasitas internos e externos. Das vrias aces realizadas na rea da clnica de espcies pecurias foi possvel observar e participar em: vrias cirurgias, nomeadamente cesarianas e tores intestinas em bovinos, diagnstico e tratamento de mastites, metrites, retenes placentrias, diarreias (com vrias etiologias) em bezerros e borregos, prolapsos uterinos, partos distcicos, indigestes, hipocalcmias, problemas podais, casos de Leptospirose, Piroplasmose e outras parasitoses (como coccidiose), entre outros. Contudo, a grande maioria das consultas presenciadas deveu-se a patologias do aparelho reprodutor e glndula mamria. Realizaram-se ainda vacinaes de vrios efectivos contra Leptospirose, Rinotraqute Infecciosa Bovina (IBR), Diarreia Viral Bovina (BVD), Vrus Respiratrio Sincial Bovino (BRSV) e Parainfluenza (PI3). Em exploraes com elevada prevalncia de diarreia em vitelos, alm destas vacinaes referidas acima, realizou-se a vacinao das fmeas gestantes contra Rotavirus, Coronavirus Bovino e Escherichia coli. Devido s condies climticas adversas verificadas durante o tempo de estgio, e consequente escassez de alimentos, foram realizadas vrias praticas clnicas em animais com deficiente condio corporal (caquexia).

Grfico 1 - Nmero de animais saneados durante o perodo de estgio.

10000 8000 6000

4000 2000 0
N. Animais

Bovinos 5626

Ovinos 9802

Caprinos 500

Grfico 2- Actividades clnicas desenvolvidas durante o perodo de estgio.

Problemas aparelho reprodutor e glndula mamria Diarreias

2% 2% 3%

3%

Pneumonias

6%

13%

39%

Indigestes
Piroplasmose

7%

Cirurgia

9% 4%

12%

Claudicaes Necrpsia

Intoxicaes
Outras parasitoses Outros

Grfico 3 - Actividade clnica desenvolvida no aparelho reprodut or.

Distcias

Metrites Prolapso uterino

46%

17% 11%
7% 7% 4%

8%

Prolapso vaginal Reteno placentria Mastites Diagnstico de gestao por palpao rectal

Durante o perodo de estgio curricular tive ainda oportunidade de participar, em conjunto com a Bayer Health Care Sade Animal (com a coordenao do Dr. Joo Raposo) e com o Professor Hlder Cortes da Universidade de vora, em dois estudos de coccidiose em borregos e cabritos. Com a Bayer Health Care Sade Animal foi possvel realizar um estudo de prevalncia de coccidiose ovina, em vrias exploraes em Portugal. Em colaborao com o Professor Hlder Cortes realizou-se um estudo sobre os nveis de excreo de Eimeria spp. em duas exploraes de caprinos, uma com regime intensivo e outra com regime extensivo. A coccidiose uma das causas de grandes perdas econmicas em exploraes de pequenos ruminantes, quer pela doena clnica, quer pelas perdas indirectas, resultantes da doena subclnica que leva a diminuies no ganho de peso. A deciso da escolha deste tema, para a dissertao de mestrado, teve como fundamento o interesse pela rea de parasitologia e a oportunidade de participar nos estudos com a Bayer Health Care Sade Animal e a Universidade de vora. .

Pequenos Ruminantes no Alentejo e em Portugal

Em 2005 o Alentejo apresentava o maior nmero de ovinos em Portugal, detendo 54,2% do efectivo. O efectivo total, em Portugal, era de 3.583.000 animais. As fmeas reprodutoras constituam 65,4% do efectivo total. Relativamente ao ano de 2004 o efectivo ovino nacional aumentou 1,2%. A Beira Interior possua 14,2% do efectivo, Trs-os-Montes 9,4% e o Ribatejo e Oeste 9,3%. Relativamente ao ano de 2004, o efectivo apenas sofreu reduo na zona do Alentejo (menos 20.000 cabeas). Pelo contrrio, em Trs-os-Montes (mais 22.000 cabeas), no Ribatejo e Oeste (mais 17.000 cabeas) e na Beira Litoral (mais 12.000 cabeas), ocorreu um incremento significativo. Na Beira Interior 76,9% das fmeas reprodutoras eram de carcter leiteiro e, inversamente, no Alentejo o valor homlogo era de apenas 7,6% (Anurio Pecurio, 2006/2007). De acordo com o Instituto Nacional de Estatstica (INE), os dados de 2008 apontam para 3.145.000 ovinos em Portugal. Os dados referentes ao efectivo das vrias regies podem ser consultados no grfico 4.

Grfico 4 E fectivo ovino nacional em 2008 (dados do INE, 2008).

Em relao aos caprinos o efectivo total era de 551.000 animais em 2005. As fmeas reprodutoras representavam 70,2% do efectivo total. Em relao ao ano anterior registou-se um aumento de 0,7%. O Alentejo apresentava a segunda maior percentagem de efectivos caprinos portugueses com 19,9 %, sendo a regio da Beira Interior aquela que apresentava o maior nmero de caprinos com 22,1% do efectivo total. A Beira Litoral apresentava 15,2% do efectivo, seguida das regies de Entre-o-Douro-e-Minho e de Trs-os-Montes, ambas com 13,2%. O efectivo caprino apresentou um acrscimo de 13.000 cabeas na Beira Interior e um decrscimo de 9000 cabeas no Alentejo (Anurio Pecurio, 2006/2007). Dados de 2008, do Instituto Nacional de Estatstica (INE), apontam para 496.000 caprinos em Portugal. Os dados referentes ao efectivo caprino das vrias regies portuguesas podem ser consultado no grfico 5.
Grfico 5 - E fectivo caprino nacional em 2008 (dados do INE, 2008).

Caracterizao dos sistemas de produo de pequenos ruminantes em Portugal

A- Ovinos A produo de carne realizada com base nas raas autctones. Existem trs tipos de sistemas de produo: Extensivo, Semi-intensivo e Intensivo. Os sistemas extensivos apresentam maior expresso na regio do Alentejo, Trs-osMontes, Algarve, Entre Douro e Minho e Extremadura. A alimentao restringe-se s pastagens naturais de sequeiro das zonas marginais dos baldios e montados, aos subprodutos agrcolas e pode ser realizada, eventualmente, a suplementao com alim entos concentrados. Estes animais encontram-se muito bem adaptados a estas condies, no entanto, apresentam geralmente ndices produtivos baixos. O desmame dos borregos no Alentejo efectuado tardiamente. O crescimento dos borregos efectuado na erva, apresentando carcaas com m conformao mas anunciadas como de boa qualidade. Os custos de produo so muito baixos (Caldeira, 2010). Sistemas semi-extensivos de produo de carne so mais comuns no Alentejo. As fmeas adultas encontram-se em pastagens melhoradas ou semeadas e suplementadas na poca de maior escassez de alimentos (menor produo forrageira) e de maiores necessidades dos animais. Os borregos so alimentados na pastagem e suplementados com alimento concentrado ou, menos frequentemente, com concentrados e feno. Este tipo de sistema apresenta maiores custos de produo mas com razoveis rendimentos da explorao. Em relao explorao semi-intensiva de leite, as principais zonas so a Serra da Estrela, Alentejo, Castelo Branco e Azeito. A alimentao feita com base em pastagens naturais, algumas melhoradas ou semeadas, e suplementadas na poca de maiores necessidades por parte do animal ou escassez de alimentos com fenos e alimentos concentrados. O desmame dos borregos precoce (com cerca de um ms de idade), com excepo da zona do Alentejo onde ocorre mais tardiamente, cerca dos trs a quatro meses de idade. Utilizamse maioritariamente raas autctones, com custos de produo superiores aos sistemas de produo de carne. O leite, muitas vezes utilizado na prpria explorao para a confeco de queijos, muito valorizado. Os sistemas de produo intensivos para produo de leite encontram -se essencialmente na zona do Alentejo, Castelo Branco e Azeito. Os animais so essencialmente de raas exticas de leite (Lacaune, Awassi e Assaf). A alimentao feita essencialmente com recurso a alimentos concentrados.

Com excepo dos envolvidos nos sistemas intensivos, a maioria dos criadores apresenta baixa formao profissional (Caldeira, 2010). B- Caprinos Os caprinos apresentam um maneio mais difcil do que os ovinos, por serem animais mais irrequietos e curiosos. Apresentam sistemas de produo muito semelhantes aos dos ovinos. Contudo, as raas autctones encontram-se, por norma, em sistemas mais extensivos, com alimentao base de pastagens naturais e estrato arbustivo e arbreo da floresta. As raas exticas encontram-se em sistemas semi-intensivos e intensivos para produo de leite. Os cabritos vendidos para abate aos trinta a quarenta e cinco dias so bastante desvalorizados (Caldeira, 2009).

Parte II Reviso Bibliogrfica

1)

Parasitismo

1.1) Definio de Parasitismo

Parasitismo um tipo de associao entre seres vivos que tem existido ao longo de toda a histria da evoluo. uma associao entre vegetais ou animais, com carcter obrigatrio ou no, de natureza trfica ou ecolgica, com benefcio unilateral para o parasita e prejuzo unilateral para o hospedeiro (Madeira de Carvalho, 2009). Para alm do parasitismo existem outras associaes biolgicas entre seres, como o caso do comensalismo, mutualismo e simbiose. Nestes tipos de associaes no h prejuzo para o hospedeiro. Segundo Madeira de Carvalho (2009), comensalismo a associao de carcter obrigatrio entre dois ou mais indivduos de espcies diferentes, em que uma beneficiada e a outra no prejudicada. Est no limiar do parasitismo. o exemplo dos protozorios ciliados nos compartimentos gstricos dos ruminantes e amebas intestinais dos vertebrados domsticos. O mutualismo a cooperao ntima entre dois seres. Cada espcie associada, sem perder as caractersticas intrnsecas, no pode viver, crescer e reproduzir-se satisfatoriamente sem

a presena ou associao com outra espcie. Por exemplo a trofobiose entre pulges e formigas (Madeira de Carvalho, 2009). Por fim, a simbiose o exemplo extremo de mutualismo, associao mutuamente benfica e que ocorre de forma contnua, dado que as necessidades nutritivas ou de outro tipo de cada associado, so proporcionadas pelo contrrio, temos como exemplo as bactrias celulolticas do rmen (Madeira de Carvalho, 2009).

1.2) Modos de parasitismo

Existem vrios modos de parasitismo, o caso do parasitismo acidental ou ocasional, facultativo, obrigatrio, errtico, hiperparasitismo e pseudoparasitismo (Madeira de Carvalho, 2009). O parasitismo acidental ou ocasional de natureza fortuita e de curta durao, como por exemplo os caros das farinhas, larvas de muscdeos nos alimentos (Madeira de Carvalho, 2009). Parasitismo facultativo um tipo de associao no obrigatria, so exemplo as larvas de insectos nas feridas provocando mases secundrias e as larvas de moscas varejeiras em feridas cutneas nos ovinos (Madeira de Carvalho, 2009). No caso do parasitismo obrigatrio necessria a associao parasita-hospedeiro para a sobrevivncia do primeiro. indispensvel por um perodo de tempo mais ou menos longo para a maioria dos parasitas. Este tipo de parasitismo pode ser de carcter temporrio ou intermitente, estacional ou sazonal, peridico, contnuo ou permanente (Madeira de Carvalho, 2009). No parasitismo errtico o parasita encontra-se numa localizao anormal no hospedeiro, o exemplo de Fasciola hepatica no pulmo (Madeira de Carvalho, 2009). O hiperparasitismo encontra-se quando parasitas parasitam outros parasitas, vulgar em insectos e importante no controlo de pragas na agricultura (Madeira de Carvalho, 2009). Pseudoparasitismo ocorre quando elementos so tomados como parasitas sem o serem, o caso de Eimeria sardinae nas fezes de gato ou gros de plen nas fezes de Aves e Mam feros (Madeira de Carvalho, 2009).

2) Coccidiose em Pequenos Ruminantes

O termo coccidiose pode ser utilizado para referir vrias parasitoses causadas por parasitas da subclasse Coccidia, como por exemplo os gneros Eimeria, Isospora e Cryptosporidium. No entanto, este termo utilizado, maioritariamente, para referir parasitoses causadas por parasitas do gnero Eimeria. Este gnero parasita aves, bovinos, ovinos, caprinos, sunos, equinos e coelhos. Ao longo desta dissertao, o termo coccidiose utilizado para mencionar parasitoses causadas por Eimeria spp. de pequenos ruminantes.

2.1) Taxonomia
Eimeria um protozorio pertencente ao Filo Apicomplexa, Classe Sporozoa, Subclasse Coccidia, Ordem Eucoccidiida, Subordem Eimeriina e Fam lia Eimeriidae (Madeira de Carvalho, 2009). Filo Apicomplexa Os membros pertencentes a este grupo apresentam um complexo apical com anel polar, micronemas, roptrias e conide. Os clios e flagelos esto ausentes, excepto no estado de microgmetas em alguns grupos. Todas as espcies so parasitas (Cordero del Campillo & Arguello, 1996). Possuem reproduo sexuada ou assexuada (Vignau, Venturini, Romero, Eiras & Basso, 2005).

Classe Sporozoa Complexo apical bem desenvolvido, reproduo assexuada, por fiso binria ou mltipla (esquizogonia), ou reproduo sexuada (gametogonia). Oocistos presentes. A locomoo efectuada por flexo do corpo, deslizamento ou ondulao. So parasitas monoxenos ou heteroxenos (Cordero del Campillo & Arguello, 1996). Segundo Vignau, et al., (2005) possuem um ciclo de vida complexo que compreende as fases de esquizogonia, gametogonia e esporogonia.

Subclasse Coccidia So parasitas tipicamente celulares de vertebredos e alguns invertebredos. Endodiogenia presente ou ausente (Cordero del Campillo & Arguello, 1996).

Ordem Eucocciddida A fase de esquizogonia est presente e a endodiogenia pode ou no estar ausente (Cordero del Campillo & Arguello, 1996). Possuem um complexo apical com conide, propagando-se por oocistos (Vignau, et al., 2005).

Subordem Eimeriina De acordo com Cordero del Campillo e Arguello (1996) os macros e microgmetas desenvolvem-se independentemente e o zigoto no mvel. Os esporozotos encontram-se no interior dos esporocistos. A endodiogenia est ausente. Estes parasitas possuem ciclos monoxenos ou heteroxenos.

Famlia Eimeriidae Parasitas de ciclo monoxeno, desenvolvendo-se no interior das clulas epiteliais do intestino (fases de esquizogonia e gametogonia). Microgmetas flagelados e oocistos com nenhum, um, dois, quatro ou muitos esporocistos, cada um com um ou mais esporozoitos. Fase de esporogonia efectua-se fora do hospedeiro (Cordero del Campillo & Arguello, 1996). Segundo Vignau, et al., (2005) alguns parasitas pertencentes a este grupo possuem ciclo heteroxeno facultativo.

Gnero Eimeria Parasitas pertencentes a este gnero possuem quatro esporocistos com dois esporozoitos cada (Cordero del Campillo & Arguello, 1996).

Os hospedeiros destes parasitas so vertebrados, aves ou mamferos, excepto carnvoros. So estenoxenos em relao espcie e localizao no hospedeiro e especificidade imunolgica. Os oocistos no esporulados contm uma s clula, o esporonte.

2.2) Etiologia
A coccidiose causada por coccidias do gnero Eimeria que infectam preferencialmente clulas intestinais dos ruminantes. Existe um grande nmero de espcies de Eimeria, no entanto, estas apresentam grande especificidade em relao ao hospedeiro. A patogenicidade depende da espcie e poucas so consideradas suficientemente patognicas, para que, por si s, desencadeiem manifestaes clnicas da doena. As infeces envolvem geralmente vrias espcies, ou seja, em casos clnicos de coccidiose comum a presenas de mais de uma espcie que interagem para produzir as alteraes patolgicas observadas (Lima, 2004). Antigamente pensava-se que os gneros de Eimeria que parasitavam caprinos eram os mesmos que parasitavam ovinos, no entanto, estes dois hospedeiros so parasitados por gneros de Eimeria distintos (Bowman, 2004). Como possivelmente partilhadas por ovinos e caprinos, consideram-se as seguintes espcies: E. marsica e E. gulruthi. No entanto, estas espcies desenvolvem-se melhor na ovelha do que na cabra (Cordero del Campillo e Rojo Vzquez, 2002). Contudo, Lopez (1996a) e Lima (2004) consideram que as espcies que parasitam caprinos e ovinos so altamente especficas com excepo de Eimeria caprovina que normalmente parasita caprinos mas pode parasitar ovinos. Eimeria crandallis e Eimeria ovinoidalis tm sido associadas ao aparecimento da doena em borregos e so consideradas como as espcies mais patognicas (Deniz, 2008). Segundo Lima (2004), E. ninakohlyakimovae considerada a mais patognica dentro das espcies que parasitam caprinos. De acordo com Lopez (1996a) E. ninakohlyakimovae e E. caprina so as espcies com maior poder patognico.

2.2.1) Ovinos
Esto descritas quinze espcies de Eimeria spp. como agentes patognicos causadores de doena em ovinos (Deniz, 2008). 10

Principais espcies de Eimeria spp. que parasitam ovinos (Lopez & Ayensa, 1996): E. ahsata E. bakuensis E. crandallis E. faurei E. granulosa E. intricata E. marsica E. ovinoidalis E. pallida E. parva E. weybridgensis

Como foi referido anteriormente E. crandallis e E. ovinoidalis so consideradas as espcies mais patognicas em ovinos e esto associadas ao aparecimento de doena em borregos (Deniz, 2008). E. bakuensis, E. ahsata, E. faurei, E. punctata, E. weybridgensis e E. parva tambm apresentam poder patognico (J. Raposo, comunicao pessoal, Maro 10, 2010). Cordero del Campillo e Rojo Vzquez (2002) consideram que a espcie E. ovinoidalis muito patognica, podendo causar a morte em borregos. E. crandallis moderadamente patognica, no entanto, exacerba os efeitos patognicos da E. ovinoidalis. Em condies de campo pouco provvel que produza coccidiose clnica, excepto se os animais forem expostos repentinamente a doses muito elevadas. Experimentalmente muito patognica e imunognica. E. parva uma espcie pouco patognica. A espcie E. ahsata altamente patognica em condies experimentais, mais que E. bakuensis. Segundo informao fornecida nas folhas de diagnstico coprolgico da COPRAPEC (Laboratrio Veterinrio de Montemor-o-Novo) E. crandallis, E. punctata e E. weybridgensis no so distinguveis morfologicamente.

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Figura 1 Oito espcies de Eimeria, que parasitam ovinos, identificadas em fezes de borregos lactantes (Silva et al., 2007) (adapt ado de www.scielo.br).

2.2.2) Caprinos

Dez espcies de Eimeria spp. parasitam caprinos na Europa (Cordero del Campillo e Rojo Vzquez, 2002). No entanto, segundo Bandara, Rajakaruna e Rajapakse (2007) existem, em todo o mundo, dezassete espcies de Eimeria que parasitam caprinos.

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Espcies de Eimeria spp. que parasitam caprinos (Lopez & Ayensa, 1996): E. alijevi E. apsheronica E. arloingi E. caprina E. caprovina E. christenseni E. hirci E. jolchijevi E. korcharli E. ninakohlyakimovae

Figura 2 Oocistos Eimeria spp.: A - E. alijevi; B - E. ninakohlyakimovae: C - E. arloingi D - E. caprovina. (Original)

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E. arloingi, espcie mais prevalente, apresenta caractersticas morfolgicas muito semelhantes s de E. bakuensis que parasita os ovinos, e por isso as duas foram confundidas durante muito tempo. Os oocistos de E. hirci, um parasita apatognico do intestino delgado com prevalncia relativamente alta em caprinos adultos, so muito semelhantes com os de E. crandallis dos ovinos. E. christenseni, morfologicamente semelhante a E. ahsata, apresenta alta prevalncia na Europa e pode predominar em infeces multiespecficas. uma das espcies mais patognicas mas apresenta baixa prolificidade. E. ninakohlyakimovae, semelhante a E. ovinoidalis, uma espcie muito patognica, de prevalncia mdia. Os oocistos de E. caprina e E. caprovina so difceis de diferenciar (Cordero del Campillo & Rojo Vzquez, 2002). Como referido anteriormente, de acordo com Lima (2004), Eimeria ninakohlyakimovae considerada a mais patognica dentro das espcies que parasitam caprinos.

2.3) Ciclo evolutivo

Todas as espcies de Eimeria tm ciclos monoxenos. A infeco dos animais ocorre a seguir ingesto de gua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados. O ciclo evolutivo tem duas fases, a fase endgena, que ocorre internamente, onde o parasita sofre vrias divises dentro das clulas intestinais do hospedeiro, e a fase exgena, a qual ocorre no meio ambiente, onde ocorre a esporulao dos oocistos (Deniz, 2008). A) Fase exgena Os oocistos no esporulados so eliminados por animais infectados atravs das fezes para o meio ambiente. Em condies adequadas de oxignio, temperatura (24 a 32C) e humidade, os oocistos eliminados esporulam, na maioria das espcies, em dois a cinco dias. Os oocistos morrem a temperaturas abaixo dos 30C negativos e acima dos 40C, no entanto, entre estes extremos os oocistos esporulados e no esporulados podem persistir no meio ambiente por mais de um ano. Contudo, os oocistos no esporulados so menos resistentes a alteraes climticas extremas (Deniz, 2008). Durante a fase de esporulao, em condies ambientais adequadas, os oocistos no esporulados sofrem vrias alteraes. O ncleo do oocisto no esporulado divide-se duas vezes e a massa protoplasmtica forma quatro corpos cnicos. Cada um desses cones nucleados torna-se arredondado e forma um esporoblasto, sendo que, em algumas espcies, o protoplasma restante forma o corpo oocstico residual. Cada esporobalsto secreta uma parede retrctil e origina o esporocisto, entretanto, o protoplasma no seu 14

interior divide-se em dois esporozotos. Em algumas espcies o protoplasma restante no interior do esporocisto forma um corpo residual esporocstico. O oocisto, constitudo por uma parede externa que envolve quatro esporocistos, cada um contendo dois esporozotos, designado oocisto esporulado e o estado infectante (Urquhart, Armour, Duncan, Dunn & Jennings, 1996).

B) Fase endgena Os oocictos esporulados so ingeridos atravs de gua ou alimentos contaminados. Aps a chegada dos oocistos ao aparelho digestivo, as enzimas exercem aco sobre a sua parede, facilitando a libertao dos esporozotos para o lmen intestinal, invadindo as clulas da mucosa. De seguida, aps a entrada nas clulas intestinais, os esporozotos do origem a trofozotos. Iniciam ento a diviso celular ou esquizogonia, formando a primeira gerao de esquizontes (Deniz, 2008). Na maioria das espcies o desenvolvimento na clula epitelial tm origem acima do ncleo, em poucas espcies ocorre abaixo do ncleo e em raras situaes se encontram estados intranucleares (E. ahsata e E. intricata) (Arguello & Cordero del Campillo, 1996). Os esquizontes so constitudos por uma grande quantidade de microorganismos de ncleos alongados, os merozotos (Urquhart, et al., 1996). Quando os esquizontes atingem a maturao libertam a primeira gerao de merozotos que invadem outras clulas da mucosa, continuando a fase assexuada do ciclo de vida. Dentro da nova clula hospedeira os merozotos transformam-se em trofozotos, continuando o seu desenvolvimento por diviso assexuada como na fase anterior, at segunda gerao de esquizontes e, por sua vez, segunda gerao de merozotos. Esta segunda gerao de merozotos pode desenvolver novas geraes de merozotos. Contudo, o nmero de geraes varia entre dois ou mais, dependendo da espcie envolvida (Deniz, 2008). De acordo com Arguello e Cordero del Campillo (1996), os esquizontes de primeira gerao (macroesquizontes) apresentam grandes dimenses em todas as espcies (100-300 m) e contm milhares de merozotos no seu interior. Os esquizontes de segunda gerao so de menor dimenso e contm menor nmero de merozotos. Aps um nmero fixo de geraes de merozotos (esquizogonia), a ltima gerao inicia a fase de reproduo sexuada (gametogonia) (Deniz, 2008). Entre a segunda gerao de merozotos e a gametogonia, em algumas espcies, existe uma fase intermdia denominada fase de pr-gamonte, onde o parasita se divide por fiso 15

binria, estimulando a diviso da clula hospedeira e dividindo-se sincronizadamente com ela, originando um nmero indeterminado de geraes. O estado de pr-gamonte observouse em E. bakuensis, originando a formao de ndulos ooqusticos planos ou em relevo e plipos. E. crandallis produz grande quantidade de oocistos. Na espcie E. ovinoidalis observou-se em culturas celulares alguns merozotos que se dividiam por fiso binria (Arguello & Cordero del Campillo, 1996). Na fase de gametogonia, a ltima gerao de merozotos em vez de dar origem a trofozotos e repetir a esquizogonia, originam-se macro e microgametcitos. Estes desenvolvem-se e cada macrogametcito d origem a um macrogmeta e cada microgametcito origina um grande nmero de microgmetas biflagelados (Deniz, 2008). Os microgmetas so libertados por ruptura da clula hospedeira, um deles penetra num macrogmeta e ocorre a fuso dos ncleos do macro e microgmeta, originado o zigoto. O zigoto forma uma parede em seu redor e forma o oocisto. Este sai da clula hospedeira atingindo o lmen intestinal e eliminado nas fezes (Urquhart, et al., 1996). O perodo pr-patente (tempo que decorre entre a ingesto de oocistos esporulados e a escreo de oocistos) varia com a espcie (Deniz, 2008). Como se demonstra nas Tabelas 1 e 2.

Tabela 1 Local da infeco e periodo pr-pat ente da Eimeria spp., em ovinos. (adaptado de Taylor, Coop & Wall, (2007)).
Eimeria spp. Local da infeco Perodo pr-patente (dias) 12-15 15-20 18-29 18-30

E. ovinoidalis E. crandallis E. b akuensis E. ahsata

leo e ceco, clon leo e ceco, clon Intestino delgado Intestino delgado Intestino delgado e grosso Intestino delgado Intestino delgado

E. faurei

13-15

E. intricata E. parva E. weyb ridgensis

23-27 12-14

Intestino delgado

23-33

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Tabela 2 Local da infeco e periodo pr-patente da Eimeria spp., em caprinos. (adaptado de Taylor, Coop & Wall, (2007)).
Eimeria spp. E. alijevi E. aspheronica E. arloingi E. caprina E. caprovina E. christenseni E. hirci E. jolchijevi E. ninakohlyakimovae Local da infeco Intestino delgado e grosso Desconhecido Intestino delgado Intestino delgado e grosso Desconhecido Intestino delgado Desconhecido Desconhecido Intestino delgado e grosso Perodo pr-patente (dias) 7-12 14-17 14-17 17-20 14-20 14-23 13-16 14-17 10-13

Figura 3 - Ciclo de vida de uma coccidia tpica. (Disponvel em www.engormix.com)

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2.4) Epidemiologia
A coccidiose uma doena parasitria, frequentemente diagnosticada, mas muitas vezes mal compreendida. Os surtos de doena ocorrem quer em zonas tropicais quer em zonas temperadas, no entanto, pouco se sabe do seu significado em zonas rcticas. Como foi referido anteriormente, os oocistos esporulados so o estado infectante da doena, logo a sua esporulao e libertao para o meio ambiente so cruciais. A esporulao dos oocistos varia de espcie para espcie de Eimeria e geralmente mais rpida a temperaturas entre os 28 e 31C. Baixas temperaturas, 0 a 5C, retardam a esporulao, contudo esta ocorre logo que a temperatura suba (Deniz, 2008). Segundo Urquhart, et al. (1996), a coccidiose afecta, em geral, borregos entre as quatro e sete semanas de idade. Camas sujas e hmidas, que favorecem a esporulao, comedouros e bebedouros em locais que facultem a contaminao fecal, facilitam o contgio fecal-oral. Influenciam tambm na epidemiologia os sistemas de explorao (intensivo versus extensivo), idades dos animais do rebanho, alojamentos, alimentao, infeces ou parasitoses concomitantes e factores de stresse (Cordero del Campillo & Rojo Vzquez, 2002). Segundo Cordero del Campillo e Rojo Vzquez (2002), o contgio inicial pode ocorrer nas primeiras semanas de vida, quando o animal ingere oocistos que se encontram aderentes aos tetos das mes. A partir da segunda a quarta semana os borregos podem iniciar a excreo de oocistos, altura em que os animais so mais susceptveis. De acordo com Lopez (1996a) a fonte de infeco mais importante so os oocistos eliminados pelos animais jovens com elevada contaminao das camas, que pode constituir factor de mortalidade para os mesmos animais e para os que nascero posteriormente. Nos caprinos o risco de infeco normalmente ocorre quando estes recebem o colostro ou durante a amamentao e quando os animais mais jovens so introduzidos junto dos mais velhos para receber alimentao slida (Ayensa, 1996). Nos casos em que ocorre aleitamento artificial a contaminao pode advir do perodo em que receberam o colostro ou da contaminao fecal dos alimentos ou utenslios, no entanto, menos frequente se forem tomadas correctas medidas de higiene. Posteriormente, possvel a infeco a partir de oocistos sobreviventes do ano anterior na pastagem, principalmente em locais de alta densidade de pastoreio (Cordero del Campillo & Rojo Vzquez, 2002). A elevada densidade populacional responsvel pelas contaminaes massivas. Uma vez introduzidas as coccdeas na explorao tm importncia crucial as prticas de higiene para 18

o desenvolvimento da coccidiose. Existem diferenas sazonais na quantidade de oocistos eliminados, sendo mxima no Inverno e Primavera e relacionando-se mais com as pocas de parto e prticas zootcnicas do que com os factores climticos, ainda que estes possam influenciar indirectamente ao obrigar estabulao ou a modificar as normas de aproveitamento das pastagens (Cordero del Campillo & Rojo Vzquez, 2002). Em zonas ridas ou semi-ridas, em pastoreio extensivo, o factor humidade limita a sobrevivncia do parasita. Nestas condies h uma disperso enorme dos oocistos e a probabilidade de contaminaes intensas muito baixa (Cordero del Campillo & Rojo Vzquez, 2002). A epidemiologia em caprinos similar dos ovinos, no entanto, com algumas particularidades. A prevalncia das diferentes espcies varia claramente, mas, pode ser constante dentro de um grupo etrio. A E. christenseni predomina em animais jovens, enquanto E. hirci mais frequente em animais adultos. (Cordero del Campillo & Rojo Vzquez, 2002).

2.4.1) Factores que interferem nas caractersticas da coccidiose

Factores dependentes do parasita: Entre os factores relacionados com o parasita que influenciam a evoluo e caractersticas clnicas da coccidiose destacam-se a espcie de Eimeria, o nmero de clulas destrudas por oocistos ingeridos, que depende do nmero de geraes de merogonia e nmeros de merozotos produzidos por cada meronte, a dose infectante, a localizao do parasita dentro dos tecidos do hospedeiro e dentro da clula parasitada, o grau de reinfeco e a viabilidade e virulncia dos oocistos ingeridos (Lima, 2004).

1- Resistncia dos oocistos Epidemiologicamente importante conhecer como os oocistos passam ao estado infectante no meio ambiente (Arguello & Cordero del Campillo, 1996). Como referido anteriormente, entre as condies que favorecem a esporulao encontram se a humidade, temperatura e oxigenao. Valores extremos destes factores destroem os oocistos. Em relao temperatura, Arguello e Cordero del Campillo (1996), referem que temperaturas entre 35-45C produzem degenerao e morte dos oocistos e a temperatura ptima para a sobrevivncia e desenvolvimento do oocisto tem lugar entre 20-25C. A 19

humidade ideal normalmente assegurada pelo ambiente fecal, contudo, a baixa humidade letal para os oocistos em poucas horas. A fermentao e a putrefaco, as solues saturadas de dixido de carbono e ies carbonato impedem ou detm a segmentao e acabam por destruir o oocisto, uma vez que requerem oxignio para esporular. Os oocistos so bastante resistentes aos produtos qumicos, os mais eficazes so muito txicos e custicos e geralmente no so utilizados, uma vez que no so adequados aplicao em exploraes. Compostos de baixo peso molecular como o amonaco so em condies especiais oocistocidas eficazes, salvo quando no h contacto directo com os oocistos. A maioria das substncias qumicas utilizadas como desinfectantes favorece a evoluo e conservao dos oocistos, por destruio das bactrias que se encontram no meio. Contudo, estes desinfectantes usados nas concentraes usuais podem destruir os oocistos ou inibir a esporulao (hipoclorito de sdio, formaldedo, fenol, entre outros). A exposio de oocistos esporulados e no esporulados a radiaes gama, raios X, luz ultra violeta, ondas ultrasnicas e corrente de electres de baixa acelarao apenas reduzem a viabilidade ou destroem um pequeno nmero de oocistos (Arguello & Cordero del Campillo, 1996). Desta forma, para a actuao eficaz dos desinfectantes capazes de destruir os oocistos, necessrio remover a matria orgnica antes da sua aplicao.

2 Espcies e estirpes de Eimeria Os factores determinantes da patogenia de Eimeria spp. dependem do tipo de coccidia, da rea intestinal afectada, da dose infectante, condicionada, por sua vez, pela prolificidade do agente e pelo sistema de explorao, idade, entre outros factores (Arguello & Cordero del Campillo, 1996). Estudos experimentais demonstraram que algumas espcies de Eimeria so muito mais patognicas do que outras. A infeco experimental em ovinos com E. ovinoidalis pode ser mortal com um nmero moderado de oocistos (10.000 ou menos). E. ahsata considerada tambm uma das espcies mais patognicas. Todavia, temos que ter em considerao que a ingesto de um grande nmero de oocistos em dose nica pode desencadear sinais clnicos de coccidiose, enquanto a mesma dose administrada fraccionadamente pode no provocar qualquer sintomatologia no animal (Arguello & Cordero del Campillo, 1996). A rea intestinal afectada outro factor que determina a patogenia de uma espcie. As coccidias que infectam a primeira parte do intestino delgado so menos patognicas, isto pode ser devido s restantes pores de intestino saudvel que conseguem compensar, em certa medida, as disfunes das zonas anteriores. Se duas, trs ou mais espcies provocam infeces simultaneamente, o que frequente na prtica, podem actuar em c onjunto e 20

causar leses mais graves do que uma infeco simples. As infeces mistas so mais prolongadas. Foi demonstrado que certas espcies podem libertar uma toxina, encontrada no tracto intestinal de borregos mortos por coccidiose induzida experimentalmente, no entanto, nenhum dos sintomas caractersticos da doena foram reproduzidos com a toxina (Arguello & Cordero del Campillo, 1996).

3 Disperso fsica e biolgica dos oocistos Os oocistos podem permanecer em fezes e contaminar materiais, como por exemplo botas, roupa e at mesmo mos de veterinrios e funcionrios. De igual forma, encontrar-se sobre o corpo do animal e levar a infeces quando estes se lambem ou lambem outros animais. Os animais invertebrados, como escaravelhos e outros artrpodes, podem tambm transportar oocistos (Arguello & Cordero del Campillo, 1996).

Factores dependentes do hospedeiro: 1 Idade A coccidiose ovina, tal como a coccidiose em outras espcies animais, uma doena de todas as idades mas que adquire maior importncia em animais jovens (Arguello & Cordero del Campillo, 1996). Segundo Lima (2004), a coccidiose comum em borregos em sistema intensivo. Em sistemas extensivos o desenvolvimento da doena surge, normalmente, poucas semanas aps o primeiro pastoreio. Em caprinos comum nos primeiros seis meses de idade, podendo apresentar oocistos nas fezes a partir das duas semanas de idade, atingindo nveis elevados de infeco aos quarenta e cinco dias. E. christenseni mais prevalente e patognica em animais com menos de seis meses de idade e causa infeces menos graves ou assintomticas em caprinos com oito a nove meses de idade. Em determinadas circunstncias, como stresse, altas densidades populacionais, doenas concomitantes e ausncia ou quebra de imunidade, a coccidiose pode atingir animais mais velhos. Epidemiologicamente as mes representam grande importncia na infeco dos animais jovens, apesar de por vezes apresentarem baixas excrees de oocistos. A infeco inicial dos jovens ocorre aos poucos dias de idade, quando se encontram em contacto com as mes e mais tarde a infeco vai ocorrendo entre animais que convivem directamente (Arguello & Cordero del Campillo, 1996).

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2 Imunidade Alm da importncia da idade na receptividade dos animais aos oocistos no podemos esquecer a importncia da imunidade, uma vez que est comprovada a correlao entre a idade e uma crescente resistncia infeco (Arguello & Cordero del Campillo, 1996). A imunidade espcie-especfica, mas no absoluta, pois os animais recuperados frequentemente reinfectam-se, apesar de poderem ser infeces subclnicas, tornando-se portadores e transmissores para os jovens (Lima, 2004). Em condies naturais os borregos podem estar infectados por vrias espcies de coccidias e apresentar ou no sinais clnicos da infeco. Quando os animais atingem a idade adulta tm uma marcada resistncia frente aos efeitos patognicos do parasita, no entanto, como foi referido a imunidade no absoluta. Os adultos recuperados podem desencadear uma coccidiose aguda quando expostos a vrios factores de stresse. As possibilidades de multiplicao dos oocistos seriam limitadas se no existissem as reinfeces. Estas constituem um factor importante ao intervir indirectamente sobre o grau de imunidade, as quais so prejudiciais do ponto de vista epidemiolgico, pois ajudam a manter a vida dos oocistos e a contaminao do meio. (Arguello & Cordero del Campillo, 1996). Segundo Arguello e Cordero del Campillo (1996), esta imunidade s distintas espcies de Eimeria tm como resultado uma menor eliminao de oocistos depois da ingesto de um grande nmero de oocistos infectantes. Uma possvel explicao para este mecanismo o rpido desenvolvimento de uma resposta imune. A segunda gerao de esquizontes , provavelmente, a fase do ciclo em que existe maior induo da imunidade, enquanto os estados sexuados so os mais susceptveis inibio pela imunidade. Outra possvel explicao que quando o nmero de esquizontes de primeira e segunda gerao aumentam, a rea de tecido saudvel que resta para o desenvolvimento de posteriores estdios diminui. Assim, o tecido lesado pela infeco de uma espcie pode diminuir a produo de oocistos de outra espcie. A imunidade especfica para cada espcie, como foi referido anteriormente, e a imunidade a uma espcie no confere imunidade a outra espcie presente no mesmo hospedeiro. Por outro lado, no se sabe se a resistncia natural aumenta com a idade do hospedeiro e reduz a produo de oocistos ou se quando os animais so mais velhos so imunes como resultado de infeces naturais com coccidias (Arguello & Cordero del Campillo, 1996).

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De acordo com Lima (2004), algumas espcies de caprinos como E. alijevi, E. arloingi e E. ninakohlyakimovae induzem imunidade duradoura e completa enquanto outras como a E. christenseni parecem no induzir rapidamente uma resistncia no hospedeiro.

3 Sistemas de explorao Um dos factores mais importantes no aparecimento de coccidiose a manuteno de animais jovens em regime de engorda intensiva. Em condies de explorao intensiva, onde existe alta densidade populacional, a transmisso da doena ocorre com maior facilidade e h disponibilidade de grande quantidade de oocistos (Lima, 2004). Em regimes extensivos os animais dispem de amplos espaos para atender s suas necessidades alimentares. Como consequncia a eliminao fecal dispersa-se consideravelmente e as probabilidades de voltar ao mesmo local podem ser escassas. No entanto, possvel uma forte infeco nestes animais quando partilham zonas de abeberamento e dormitrios, nas quais podem existir fortes contaminaes. Em pastoreio permanente os grandes factores de risco derivam da carga parasitria das mes, da grande quantidade de animais por unidade de superfcie e da alimentao insuficiente dos cordeiros, que ao no receberem a quantidade de leite adequada ingerem temporariamente forragens contaminadas (Arguello & Cordero del Campillo, 1996). Quer em exploraes extensivas como em exploraes intensivas, as camas dos estbulos, principalmente de palha, em conjunto com uma sobrelotao de animais e ms condies higinicas constituem uma das fontes principais de infeco para os animais jovens (Arguello & Cordero del Campillo, 1996).

4 Clima Nas zonas temperadas o clima e a estao do ano, aparentemente, tm menos influncia sobre a prevalncia de coccidiose do que as prticas de maneio. Em caprinos a prevalncia de infeco no apresenta diferenas significativas entre o perodo seco e chuvoso (Lima, 2004).

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5 Alimentao e outros factores Alm de uma dieta equilibrada, importante no ocorrer alteraes bruscas da alimentao que provoquem stresse e favoream, desta forma, a infeco. Se as carncias alimentares so prejudiciais, os excessos tambm podem favorecer a infeco, uma vez que as coccidias se adaptam bem a uma grande quantidade de protenas na rao. O tipo de alimento tambm importante no aparecimento de doena. Todos os alimentos cortados (como por exemplo a silagem) fornecidos aos animais em comedouros abertos e que no so limpos periodicamente so uma fonte de infeco perigosa, uma vez que estes alimentos retm a humidade e proporcionam condies ptimas para a esporulao, acumulao e viabilidade dos oocistos, que se adquirem com material fecal fresco (Arguello & Cordero del Campillo, 1996). Aparte dos erros alimentares e de maneio contribuem para o curso da coccidiose as carncias minerais e vitam nicas, principalmente as vitaminas A e K. Vitaminas como a tiamina, riboflavina e biotina so necessrias para os parasitas e so utilizados como coccidiostticos antagonistas qumicos destes nutrientes. Os perigos da coccidiose aumentam quando existem outras parasitoses concomitantes, principalmente produzidas por helmintes, e infeces bacterianas e vricas (Arguello & Cordero del Campillo, 1996). Por ltimo, os factores de stresse podem originar surtos de coccidiose, uma vez que a eliminao continua ou intermitente de pequeno nmero de oocistos no rebanho relativamente frequente. Estes factores incluem o transporte de animais, exposio ao calor, frio ou outras condies climticas extremas e alteraes na dieta. A determinao da influncia destes factores sobre a coccidiose extremamente difcil (Arguello & Cordero del Campillo, 1996).

2.5) Patogenia
Na patogenia da coccidiose participam dois factores, por um lado o parasita e por outro a reaco do hospedeiro. A patogenia depende das alteraes induzidas na mucosa intestinal pela Eimeria spp., a severidade destas alteraes est relacionada com a carga parasitria e, principalmente com a espcie de Eimeria. A diferente patogenicidade das vrias espcies de Eimeria tem sido demonstrada perante infeces experimentais puras, com igual nmero de formas 24

parasitrias. Estas diferenas parecem correlacionar-se com determinadas caractersticas do desenvolvimento endgeno ou caractersticas biolgicas de cada espcie em questo, constituindo o factor mais importante o tipo de clulas lesadas pelos ltimos estdios do parasita. Por outro lado, tambm de grande importncia a zona do intestino onde h desenvolvimento do parasita e se a infeco tem ou no como consequncia a destruio das clulas do hospedeiro (Lopez, 1996b). Lima (2004) refere que as alteraes funcionais causadas pela coccidiose dependem da localizao das espcies envolvidas e do grau de destruio dos tecidos. A intensidade e abrangncia das leses dependem do grau de dano tecidual de cada espcie e, principalmente, da quantidade de oocistos esporulados ingeridos. A sada dos merozotos e gmetas das clulas da mucosa intestinal provoca a sua ruptura, com subsequente esfoliao do epitlio intestinal. Em funo do local onde esta destruio celular ocorrer (clulas das vilosidades, clulas das criptas, intestino delgado, intestino grosso) devido espcie ou espcies envolvidas levar a uma m-absoro (por destruio das criptas com consequente incapacidade de renovao do epitlio ou por uma rpida renovao celular com imaturidade das clulas epiteliais). Esta m-absoro leva a uma forte diarreia e desidratao. As espcies mais patognicas levam ainda ruptura de vasos sanguneos com perda de sangue, podendo mesmo levar morte do animal (Lopez, 1996). Segundo Gregory (1987) citado por Lopez (1996b) a fase mais destrutiva e patognica a fase de gametogonia. De acordo com Lopez (1996b) nem todos os oocistos ingeridos pelo hospedeiro completam o seu desenvolvimento, uma vez que os mecanismos de defesa do hospedeiro so activados rapidamente, destruindo grande parte dos esquizontes antes de estes atingirem a maturidade. As espcies de Eimeria que afectam a poro anterior do intestino so as menos patognicas, sendo as mais patognicas as que tem desenvolvimento no intestino grosso, clulas das criptas ou que causem leso de vasos sanguneos. Segundo Taylor (1998), as coccidias que invadem o intestino grosso provocam maiores alteraes patolgicas, principalmente se forem ingeridos grandes quantidades de oocistos num curto perodo de tempo. Esta maior patogenicidade devida a uma renovao celular mais lenta nesta poro do intestino e por no existir um efeito compensatrio por parte de outras regies. Por outro lado, as coccidias que parasitam as clulas das criptas provocam maiores leses do que as que parasitam as clulas epiteliais das vilosidades. No caso de destruio de clulas das vilosidades, que so colunares com numerosas microvilosidades na superfcie apical, ocorre substituio por outras que migram de reas adjacentes das microvilosidades e das criptas, sendo estas clulas cubides e de superfcie 25

lisa. A lmina prpria contrai-se e reduz o tamanho das microvilosidades e, como consequncia, a superfcie de absoro do epitlio. Esta contnua proliferao celular leva a uma hiperplasia do epitlio das criptas. As capacidades digestivas e de absoro da mucosa esto reduzidas devido atrofia das vilosidades e reduo do nmero de clulas absorventes. Adicionalmente, as clulas sobreviventes possuem menor capacidade digestiva por no se encontrarem completamente diferenciadas. O contedo digestivo e as secrees no so absorvidos e sofrem degradao e fermentao bacteriana no lmen intestinal. Esta degradao determina um aumento da osmolaridade do contedo intestinal e a passagem de lquidos para o lmen (Lima, 2004). A atrofia das vilosidades leva a uma diminuio da absoro de lpidos, protenas, glcidos, vitaminas e outros nutrientes. Alteraes nas microvilosidades e no glicoclix provocam uma reduo na actividade das enzimas digestivas, como o caso das dissacaridiases resultando numa m absoro, principalmente da lactose. Esta ao permanecer no lmen intestinal sofre fermentao bacteriana originando a produo de gases e um aumento da presso osmtica intraluminal causando diarreia. As clulas diferenciadas das vilosidades so responsveis pela absoro enquanto as clulas indiferenciadas das criptas so responsveis pela secreo. Um aumento da secreo causado pela hiperplasia das criptas leva a uma alterao na proporo absoro/secreo e pode contribuir para a diarreia. O aumento na secreo pode causar um acrscimo da concentrao plasmtica de hormonas inibidoras do apetite como o caso da colecistoquinina e somatostatina. As clulas epiteliais possuem estruturas responsveis pela unio entre clulas adjacentes. A gua e os electrlitos atravessam essa barreira por difuso e esta impede a passagem de macromolculas. Nas infeces por coccidias pode existir uma alterao desta barreira promovendo uma passagem de protenas para o lmen intestinal (Lima, 2004). Em resumo, a coccidiose causa diarreia e, em consequncia, alteraes na concentrao plasmtica de protenas e electrlitos. Geralmente existe um aumento nas concentraes de potssio e uma diminuio do cloro, sdio e protenas. A diminuio do sdio e cloro coincide com o aparecimento de diarreia mucide e aumento de potssio plasmtico.

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2.6) Sinais clnicos

A maioria dos casos de coccidiose ocorre como resultado de uma infeco mista, sendo extremamente raro o aparecimento de infeces causadas por uma nica espcie (Deniz, 2008). Os animais de todas as idades so susceptveis a estas infeces, no entanto, h que diferenciar entre receptividade (infeco) e sensibilidade (desenvolvimento da doena). Desta forma, os animais mais sensveis tm entre duas a quatro semanas de vida e o aparecimento do quadro clnico surge quando tm entre quatro a sete semanas de idade (Lopez, 1996b). A apresentao e gravidade do quadro clnico da coccidiose depende de muitos factores, como a espcie de Eimeria, dose de oocistos esporulados ingeridos, interaco entre espcies de Eimeria, idade e estado imunitrio dos animais, stresse, maneio, entre outros. Os sinais clnicos podem variar muito, existem animais em que estes podem passar despercebidos, outros podem apresentar diarreias agudas sanguinol entas, diarreias crnicas e emaciao ou pode mesmo ocorrer a morte rpida do animal. A forma clnica aguda corresponde aos perodos esquizognicos tardios e gametognicos. Os animais apresentam fezes pastosas que passam a ser diarreicas, amarelo-esverdeadas, escuras, com mucosidade e, por vezes, com sangue (Cordero del Campillo & Rojo Vzquez, 2002). Em casos mais graves, em ovinos, com implicao de E. ovinoidallis as fezes podem ser sanguinolentas. Alteraes variveis na consistncia fecal so acompanhadas de distintos graus de inaptncia, anorexia, dor abdominal, anemia (varivel em funo da perda de sangue), desidratao e diminuio do peso (Lopez, 1996b). O tenesmo e prolapso rectal podem observar-se em alguns casos. Esta forma pode ser observada em exploraes intensivas, com forte intensidade de pastoreio ou elevada concentrao de animais em instalaes de engorda, sem as devidas condies de higiene. A forma subaguda a mais frequente. Os animais apresentam ligeira diarreia, perda de vivacidade e escasso aumento de peso. Geralmente os animais recuperam espontaneamente ao fim de algumas semanas, sobretudo se melhorarem as condies de higiene na explorao (Cordero del Campillo & Rojo Vzquez, 2002). A coccidiose subaguda determina redues na taxa e na eficincia de ganho de peso e crescimento dos animais afectados, alm de os tornar mais susceptveis a outras doenas (Silva et al., 2007). Em caprinos infectados experimentalmente com E. ninakohlyakimovae observou-se um ntido decrscimo no ganho de peso em comparao com animais do grupo de controlo (Vieira, Lima, Silva, Tolentino & Botelho, 1996). As alteraes nervosas observadas em bovinos infectados com E. zuernii, provavelmente causadas pela libertao de neurotoxinas (Lima, 2004), no tm sido observadas em pequenos ruminantes (Lopez, 1996b). 27

quadro

complica-se se

ocorrerem

infeces

bacterianas

concomitantes,

por

Fusobacterium necrophorum ou Clostridium perfringens, helmintoses por Trichostrongylus spp. ou Nematodirus spp., ou aparecimento de miases sobre as zonas conspurcadas do tero posterior (Cordero del Campillo & Rojo Vzquez, 2002). Em criaes intensivas de caprinos os sinais clnicos aparecem em cabritos com um a trs meses de idade. As complicaes pulmonares so extremamente c omuns. frequente o animal recuperar da coccidiose e morrer de pneumonia ou apresentar sinais das duas doenas. A forma mais severa da doena, com alta mortalidade, em cabritos caracterizada por diarreia profusa, escura e ftida, contendo fragmentos da mucosa intestinal, esta forma causada pela E. christenseni. Formas menos graves da doena so causadas por outras espcies de Eimeria ou pela ingesto de pequeno nmero de oocistos esporulados. Nestes casos os sinais clnicos passam muitas vezes despercebidos pelos produtores (Lima, 2004). O principal sinal clnico em pequenos ruminantes pode ser a baixa taxa de crescimento, com gradual debilidade, emaciao e em alguns casos morte em uma a trs semanas. As taxas de mortalidade e morbilidade so bastante variveis, contudo, o principal prejuzo para o produtor a perda de peso ou diminuio da taxa de crescimento dos animais (Lopez, 1996b). Considerveis perdas econmicas resultam da doena clnica e, principalmente, da doena subclnica, causadora de prejuzos que muitas vezes so ignorados pelo produtor, mas que so constantes e de grande importncia.

2.7) Leses 2.7.1) Leses Macroscpicas

As primeiras leses macroscpicas que podem ser observadas em pequenos ruminantes com coccidiose so a caquexia, palidez das mucosas (devido anemia), hipertrofia dos gnglios linfticos regionais e alteraes no intestino delgado e/ou grosso em funo da espcie de Eimeria acometida. Em condies naturais a maioria das infeces so mistas, estando evolvidas vrias espcies de Eimeria. Desta forma, o quadro lesional tem, por norma, caractersticas constantes, cujo diagnstico pode ser confirmado por observao microscpica das fases de desenvolvimento endgeno do parasita (Lopez, 1996b). Como foi referido anteriormente, nem todas a as espcies tm igual poder patognico.

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No caso dos ovinos, a E. ovinoidalis, em consequncia da fase de gametogonia, considerada a espcie mais patognica. O ceco encontra-se congestionado e com volume reduzido, a parede encontra-se espessada e a mucosa hemorrgica. Estas leses podem estender-se ao leo e clon. Produz-se uma destruio das clulas das criptas com eroso da mucosa cecal e como consequncia enterite hemorrgica. Qualquer espcie de Eimeria que parasita os ovinos pode observar-se pequenos ndulos brancos, do tamanho de uma cabea de alfinete, na mucosa do intestino delgado. Estes ndulos resultam dos esquizontes de primeira gerao, cujo tamanho pode oscilar entre 100-300 m, e so conhecidos como macroesquizontes ou esquizontes gigantes. No caso da E. crandallis a gametogonia ocorre nas criptas do intestino delgado, ocasionalmente no intestino grosso, e produz uma hiperplasia difusa. No provoca eroso da mucosa, uma vez que existe uma diviso sincronizada do parasita (progamontes) e as clulas hospedeiras (Lopez, 1996b). Esta diviso contnua e sincronizada do parasita com as clulas hospedeiras prolongam a multiplicao endgena por um nmero infinito de geraes. O presente processo pode explicar o desenvolvimento de plipos intestinais observados na coccidiose (Deniz, 2008). Estes plipos so leses proliferativas, de vrios milmetros de dimetro que emergem do lmen do intestino delgado e contm grandes quantidades de gamontes e oocistos. Em contraste com estas leses difusas, podem surgir placas de oocistos (oocyst patches). Estas podem ser observadas na mucosa do intestino delgado associadas presena de E. bakuensis. Alm da E. bakuensis, a nica espcie capaz de produzir estas leses em ovinos a E. ahsata. E. bakuensis tambm responsvel pela formao de plipos (Lopez, 1996b). No caso dos caprinos as espcies mais patognicas so as que apresentam o desenvolvimento das ltimas fases endgenas no ceco e clon. Estas espcies, E. ninakohlyakimovae e E. caprina causam amplas zonas de eroso no ceco e clon, com destruio das criptas e vasos sanguneos, de forma similar s leses causadas pela E. ovinoidalis nos ovinos. A E. arloingi, E. christenseni formam macroesquizontes, como tal surgem pequenos pontos esbranquiados na mucosa intestinal que correspondem a esquizontes de primeira gerao. No intestino delgado podem ser observadas numerosas placas branco-amareladas e metaplasia pseudoadenomatosa associadas s fases sexuadas de E. arloingi e E. christenseni. Tambm podem ocorrer leses extra intestinais. o caso de fases de esquizogonia da E. arloingi, E. apsheronica e fases sexuadas e assexuadas de E. christenseni, E. arloingi e E. crandallis nos linfonodos mesentricos. No epitlio das vilosidades e glndulas submucosas da vescula biliar tambm foram encontradas leses onde se observou esquizontes, gamontes e oocistos (Lopez, 1996b).

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Segundo um estudo realizado por Tafti e Mansourian (2008), no foram encontradas diferenas entre casos de ovinos e caprinos, no que diz respeito a sinais clnicos e a leses histopatolgicas. As leses macroscpicas foram observadas sobretudo no jejuno e no leo e, por vezes, no ceco. As leses macroscpicas mais proeminentes eram pequenos pontos brancos a amarelos e ndulos de maiores dimenses na mucosa afectada.
Figura 4 Leses de coccidiose no ceco de um borrego. (Adaptado de Tafti e Mansourian (2008)).

Em trs dos casos observados verificaram-se leses mnimas incluindo alguns ndulos esbranquiados dispersos pedunculados e no pedunculados na mucosa do jejuno e do leo. Estas leses tinham um dimetro com cerca de 1-2 mm a 1 cm e encontravam-se dispersas ao longo da mucosa. Estas placas e plipos so provavelmente resultado da estimulao mitognica dos progamontes. Os estados imaturos que se encontram no epitlio das criptas parecem dividir-se por fiso binria em sincronia com as clulas do hospedeiro. Por vezes, na necropsia, esses ndulos eram visveis atravs da serosa, especialmente nos casos com ndulos maiores. Dezoito casos manifestavam leses mais graves, incluindo numerosos ndulos esbranquiados, no pedunculados, na mucosa do jejuno, leo, ceco e clon proximal. Os casos mais avanados apresentavam a mucosa do tipo adenomatoso e a superfcie da serosa cerebriforme. As leses mais comuns observavam-se no jejuno, leo e ceco como ndulos esbranquiados, no pedunculados.

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Figura 5 Leses crnicas de cocccidiose num borrego. Superfcie da serosa cerebriforme. rgo fixado em formol. (Adaptado de Tafti e Mansourian (2008)).

2.7.2) Leses Microscpicas

Nos cortes histolgicos efectuados atravs de pores do intestino possvel observar as fases endgenas do ciclo biolgico da Eimeria spp. As principais alteraes histolgicas que podem ser observadas, dependendo, em maior ou menor medida, da espcie envol vida, so alteraes vasculares, infiltrao celular, hiperplasia do epitlio intestinal, atrofia das vilosidades e depleo dos linfcitos das placas de Payer (Lopez, 1996b). As alteraes vasculares so resultado de uma hipermia, edema e hemorragia, estas constituem parte da resposta inflamatria do hospedeiro. A desgranulao dos mastcitos da mucosa provoca um aumento na permeabilidade do endotlio vascular e do epitlio intestinal originando edema e resultante perda de fludos. Em ovinos, a presena de gamontes de E. ovinoidalis est associada a hemorragia e descamao da mucosa do intestino grosso. Como consequncia da resposta inflamatria existe infiltrao celular de neutrfilos, eosinfilos, macrfagos e linfcitos, podendo surgir um aumento do nmero de leuccitos e mastcitos. Os neutrfilos encontram-se muito aumentados quando existe destruio epitelial e invaso bacteriana. Os macrfagos, neutrfilos e eosinfilos participam na destruio de esquizontes de primeira gerao. Na base dos plipos mais pequenos podem ser encontrados macrfagos, estes contribuem para a destruio das clulas das criptas.

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A hiperplasia uma resposta que ocorre antes de existir dano pelas coccidias no epitelio intestinal. As clulas epiteliais das vilosidades formam-se a partir das clulas das criptas de Lieberkuhn, um aumento na sua produo leva a um alargamento das criptas com diminuio da relao vilosidade/cripta. Devido a esta hiperplasia das criptas formam-se um grande nmero de clulas imaturas, incapazes de desempenhar as suas funes de absoro eficazmente, o que d origem a uma das causas de diarreia. Na maioria dos casos apenas proliferam clulas saudveis, no entanto, algumas clulas infectadas continuam a dividir-se. Esta situao pode ser verificada nas espcies E. crandallis e E.bakuensis (espcie formadora de plipos, onde o estado de progamonte se divide em conjunto com a clula hospedeira). No caso de E. bakuensis e de E. ahsata a hiperplasia local, com formao de placas de oocistos e plipos, na espcie E. crandallis a hiperplasia difusa. Na coccidiose a descamao do epitlio intestinal ocorre prematuramente, em condies normais os entercitos completam o seu ciclo de vida em poucos dias. Esta descamao prematura pode ocorrer devido a vrios factores como anxia celular, reaco de hipersensibilidade e apoptose. Ocorre atrofia do epitlio do intestino delgado devido perda do epitlio. Se as criptas no estiverem alteradas a leso transitria e restaurada a arquitectura das vilosidades, embora haja uma reduo da superfcie de absoro. Se a perda celular se estender s criptas pode ocorrer uma atrofia e o epitlio no consegue regenerar-se, dando origem a uma descamao da mucosa. Alm da perda do epitlio de absoro pode ocorrer infeces secundrias por agentes oportunistas. A diminuio do nmero de linfocitos nas placas de Payer est, aparentemente, relacionada com a gravidade da doena (Lopez, 1996b).

Figura 6 Coccidiose num borrego. Macroesquizontes na lmina prpria e glndulas de Lieberkuhn do leo. Corado com Hemat oxilina e eosina, ampliao 60X. (Adaptado de Tafti e Mansourian (2008)).

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2.8) Diagnstico
Os sinais clnicos de coccidiose no so patognomnicos, desta forma, o diagnstico deve ser baseado na histria clnica, sinais clnicos e patolgicos e na contagem de oocistos excretados nas fezes, assim como, nas espcies de Eimeria envolvidas (Taylor, 1998). tambm importante ter em considerao a situao geral do rebanho (Cordero del Campillo & Rojo Vzquez, 2002). Para completar uma boa anamnese, por vezes, necessrio colocar vrias questes, entre elas a idade dos animais, se esto em pastoreio ou estabulados, se houve alteraes bruscas na alimentao, se foram desmamados, qual a higiene das camas, comedouros e bebedouros, entre outras. Estas questes simples podem levar-nos a uma primeira suspeita de coccidiose (Lopez & Ayensa, 1996). A simples identificao de oocistos em fezes de hospedeiros no valida o diagnstico de coccidiose, a menos que esta identificao v ao encontro da histria pregressa e sintomatologia clnica. Em fezes de hospedeiros saudveis podem ser encontrados grande nmero de oocistos. Por outro lado, podem surgir coccidioses graves e, por vezes, fatais durante as primeiras fases assexuadas da infeco, antes de os oocistos serem desenvolvidos e excretados e, desta forma, no h libertao de oocistos nas fezes (Bowman, 2004). Como tal, os resultados coprolgicos no so suficientes para o diagnstico de coccidiose, este representam, na maioria das vezes, uma avaliao da infeco do rebanho. A coprologia quantitativa deve ser considerada com precauo, pois o potencial de produo de oocistos varia com a espcie e, por isso, necessrio fazer o diagnstico qualitativo, considerando as variaes de patogenicidade das diferentes espcies de Eimeria (Lima, 2004). A diarreia crnica o principal sinal clnico de coccidiose, que produz a destruio do epitelio intestinal. No entanto, esta pode ter muitas causas e a infeco por Eimeria spp. uma delas, desta forma, o diagnstico de coccidiose tendo como base apenas a diarreia incerto. Por outro lado, a diarreia pode ocorrer vrios dias antes da eliminao de oocistos, nestes casos, em que suspeita de coccidiose em perodos pr-patentes, pode realizar-se um esfregao fecal e procurar merozotos (Bowman, 2004). Em suma, a presena de diarreia e libertao de oocistos nas fezes nem sempre so diagnsticos de coccidiose. A infeco por coccidias autolimitante, o que implica que o nmero de Eimeria spp. cresce at atingir um mximo que depois desaparece de forma mais ou menos brusca ou desce at nveis em que o hospedeiro desenvolve imunidade. possvel que continuem a eliminar pequenas quantidades de oocistos nas fezes durante semanas ou meses, no entanto, a infeco permanece despercebida. Se o hospedeiro com 33

alguma imunidade entrar em contacto com espcies de coccidias, o mesmo padro ser repetido. A imunidade desenvolvida frente a espcies de Eimeria tende a ser extremamente especfica e razoavelmente protectora, no entanto, incompleta. Alguns animais continuam a eliminar oocistos nas fezes durante meses ou anos e permanecem aparentemente saudveis, trata-se de animais cuja imunidade suficiente para limitar a infeco, mas no para exclu-la quando h um contacto contnuo com o parasita (Bowman, 2004). Para uma anlise coprolgica quantitativa pode ser utilizado o mtodo de McMaster, no entanto, o resultado desta anlise, por si s, difcil de interpretar. Como reflexo dos diferentes poderes patognicos da Eimeria spp., por vezes, necessrio proceder sua identificao atravs de anlises coprolgicas qualitativas, como por exemplo o mtodo de Willis (Lopez & Ayensa, 1996). A esporulao dos oocistos pode ser conseguida atravs da juno de uma soluo de dicromato de potssio a 2,5% a uma suspeno de oocistos. Esta emulso deve ser colocada numa placa de Petri com oxigenao para que possa ocorrer a esporogonia. A esporulao produz-se temperatura ambiente, variando os dias em funo da espcie de Eimeria. Os oocistos podem ser recuperados por centrifugao e posteriormente observados. As espcies do gnero Eimeria podem ser diferenciadas atravs das caractersticas morfolgicas e morfomtricas, contudo, o estudo morfomtrico no deve ser o nico parmetro considerado no diagnstico diferencial das espcies, uma vez que o tamanho dos oocistos de uma espcie pode ser varivel. O diagnstico torna-se mais preciso quanto mais estruturas forem observadas num oocisto, da a importncia de associar caractersticas morfomtricas e morfolgicas. Um estudo realizado, que teve como objectivo avaliar o uso da anlise de regresso linear para detectar diferenas morfomtricas interespecficas e desenvolver algoritmos para diferenciao de oocistos do gnero Eimeria. Os algoritmos empricos foram desenvolvidos com base em dados quantitativos e qualitativos da morfologia dos oocistos e foi testada a regresso linear do dimetro maior e menor dos oocistos. Neste estudo concluiu-se que o teste de significncia dos coeficientes angular e linear da anlise de regresso linear, baseada nos dimetros maior e menor dos oocistos vlida para diferenciar algumas espcies de Eimeria que parasitam os ovinos. No houve diferenas significativas entre as medidas dos oocistos de E. bakuensis, E. faurei e E. ovinoidalis. Os alogaritmos desenvolvidos com base em caracteres morfolgicos so teis no agrupamento de oocistos de uma mesma espcie, identificando-a (Hassum, Valladares & Menezes, 2007). O diagnstico post-morten baseia-se nas leses macro e microscpicas, que podem variar em funo da espcie envolvida, e identificao de fases assexuadas e sexuadas do 34

parasita. Os esquizontes, gamontes e oocistos e fases intermdias encontram -se rodeados pelo vacolo parasitrio no citoplasma e, em alguns casos, no ncleo dos entercitos, clulas da lmina prpria ou clulas endoteliais dos espaos linfoides centrais das vilosidades. Estes podem ser visualizados atravs de cortes histolgicos corados com hematoxilina e eosina, no entanto, esfregaos directos podem ser realizados sem colorao, mais rapidamente e com menor custo econmico. Com frequncia podem ser encontrados merozotos e oocistos em esfregaos ou concentrados de contedo intestinal. O microscpio de contraste ou coloraes de Wright ou Giemsa so teis para identificar esporozotos (Bowman, 2004). A gravidade dos danos causados na mucosa intestinal est estritamente associada ao nmero de espcies patognicas e o nmero de oocistos ingeridos (Deniz , 2008). Outra forma de diagnstico possvel a deteco de anticorpos anticoccdios atravs de vrios mtodos sorolgicos, especialmente o ELISA. Os nveis de anticorpos aumentam significativamente aps a infeco com vrias espcies de Eimeria. No entanto, provas sorolgicas no tm sido utilizadas para o diagnstico de coccidiose em Ruminantes (Lima, 2004). Todos, ou quase todos, os ruminantes se infectam com coccidias ao longo da sua vida, desta forma, todos possuem anticorpos contra as coccidias com que se infectaram. Por outro lado, os anticorpos podem estar presentes e o animal no estar doente, uma vez que, nem todos os animais infectados desenvolvem doena. Por fim, os animais jovens podem estar infectados e ainda no ter desenvolvido imunidade. Por todas estas razes, os testes sorolgicos no so utilizados para diagnstico de coccidiose em ruminantes (H. Cortes, comunicao pessoal, Maio 20, 2010). Infeces por Escherichia coli, Cryptosporidium sp, diarreias de origem alimentar diferencial (Cordero del Campillo & Rojo Vzquez, 2002), viroses, outras parasitoses (Lima, 2004), salmonelose e enterotoxmias (Lopez & Ayensa, 1996) devem ser tomadas em conta como diagnstico diferencial.

2.9) Controlo sanitrio e prticas de maneio

A coccidiose est muitas vezes associada a prticas de maneio, estando muitas vezes implicadas situaes de sobrelotao e contaminao de gua de bebida e alimentos. A melhoria das condies de higinicas e sanitrias reduz o nvel de infeco e a incidncia de surtos clnicos (Deniz, 2008). As prticas higinicas e sanitrias visam impedir ou diminuir a ingesto de oocistos esporulados. Os animais devem encontrar-se em instalaes limpas e secas, separados em 35

funo da idade e evitar grandes concentraes por longos perodos de tempo. Os comedouros e bebedouros devem ser colocados de forma que se previna a sua contaminao com fezes. A remoo de fezes e limpeza das camas deve ser efectuada periodicamente para reduzir a disponibilidade de oocistos no ambiente. Embora os oocistos sejam resistentes maioria dos desinfectantes, altas concentraes de hipoclorito de sdio e amnia tm alguma aco sobre estas formas parasitrias e podem auxiliar no controlo da doena. Embora os oocistos sejam destrudos pela aco da luz solar, dessecao e calor, dificilmente o so, uma vez que se encontram protegidos por matria orgnica (Lima, 2004). De acordo com Deniz (2008), combinaes de compostos fenlicos e alcolicos ou amnia a 50% so capazes de penetrar na parede dos oocistos, reduzindo o nmero de oocistos disponveis. O fornecimento de silagem, feno e milho cortado aumentam o risco de infeco. Evitar situaes de stresse ajudam na preveno da coccidiose, pois conduz a diminuio da resistncia orgnica e exacerba as infeces por coccidias. Raes e instalaes adequadas diminuem o nvel de stresse (Deniz, 2008). Vigiar as prticas alimentares imprescindvel, deve ser fornecido o colostro aos neonatos e evitar alteraes bruscas de alimentao. A composio da dieta um factor a ter em conta, um deficit nutritivo pode provocar uma menor resistncia dos animais a este tipo de infeces. Em certas fases do ciclo produtivo, como no caso do ps-parto, pode ser necessrio suplementar a dieta com vitaminas e minerais (Ayensa, 1996). Os animais afectados devem ser isolados do restante grupo, prevenindo-se que estes contaminem alimentos e gua de bebida e como tal infectem animais sos. No caso da preveno da coccidiose em animais que se encontrem na pastagem, deve evitar-se coloclos nestas na primeira estao de pastoreio. Os animais jovens devem ser mantidos afastados das pastagens altamente contaminadas durante o perodo em que so mais susceptveis. Devido ampla prevalncia da coccidiose, grande capacidade reprodutiva do parasita e capacidade de sobrevivncia dos oocistos por longos perodos de tempo no meio ambiente, a sua erradicao no parece ser possvel. Desta forma, necessrio estabelecer um plano de controlo da doena na explorao. Para tal, o controlo baseia-se na preveno dos sinais clnicos da doena, atravs de regras sanitrias adequadas, e administrao de um anticoccidia antes dos surtos visveis (Deniz, 2008). Dadas as peculiaridades dos ovinos e caprinos, no que diz respeito a factores de explorao e maneio, existem determinadas pocas em que necessria uma maior vigilncia. o caso das pocas de partos e alturas de estabulao, pois so perodos crticos em que os animais podem desenvolver mais facilmente coccidiose. Como tal, nesta altura importante 36

o fornecimento de frmacos adequados. Quando existe estabulao peridica dos animais, sobretudo depois da poca de pastoreio, h um aumento da densidade de animais e consequentemente da carga parasitria. Em resultado h um aumento do risco de infeco, principalmente para os animais mais jovens, menos resistentes a estas infeces.A utilizao de coccidiostticos aconselhvel: cinco dias depois da estabulao, antes e depois do parto (durante a lactao, at ao desmame) e em animais desmamados quando existe perigo de infeco (Ayensa, 1996). A pesquisa quantitativa de oocistos, pelo menos nas pocas de maior risco, em exploraes intensivas, pode permitir o estabelecimento de metafilaxia atempadamente. H criadores, em sistemas intensivos, que aplicam coccidiostticos a partir da terceira ou quarta semana de idade (Cordero del Campillo & Rojo Vzquez, 2002). Programas que combinem planos de maneio, higiene e estratgias quimioteraputicas so importantes na reduo da presso de infeco do parasita e na limitao dos efeitos da doena nos animais (Deniz, 2008).

2.10) Controlo Imunolgico

Os borregos e cabritos adquirem os primeiros anticorpos anti-coccidias atravs do colostro, desta forma, a ingesto de colostro muito importante. Existe uma correlao entre os nveis de anticorpos e a resistncia dos animais jovens e os anticorpos circulantes esto envolvidos na eliminao do parasita. Os animais adultos, de uma forma geral, so resistentes coccidiose. No entanto, esta resistncia, que resulta de infeces activas, pode reduzir-se devido a condies stressantes. Desta forma, um maneio adequado em conjunto com a vigilncia activa em perodos de risco e a utilizao de um tratamento preventivo que no interfira com o desenvolvimento da resposta imunitria so fundamentais para o combate do parasita (Ayensa, 1996). A utilizao de vacinas contra a coccidiose no est estudada em pequenos ruminantes. O uso de vacinas em avicultura praticado h vrios anos. A terapia quimioprofilctica usada para o controlo da coccidiose em aves originou grandes problemas de resistncias. Estas resistncias proporcionaram o desenvolvimento de vacinas vivas atenuadas, uma vez que, uma imunidade protectora, mas altamente espcie especfica, pode ser induzida com qualquer uma das espcies de Eimeria. No Institute of Animal Health in Houghton, Reino Unido, na dcada de 1980, demonstrou-se que qualquer uma das sete espcies de Eimeria 37

podia ser atenuadas pela passagem seriada em frangos, usando oocistos das primeiras fases de desenvolvimento endgeno. Trabalhos posteriores levaram introduo comercial da primeira vacina viva atenuada. Para a introduo de vacinas vivas recombinantes muito trabalho necessita ainda ser realizado e, provavelmente, nos prximos anos a dependncia de vacinas vivas atenuadas ir aumentar (McDonald & Shirley, 2009).

2.11) Controlo Quimioprofilctico

Comummente os coccidiostticos actuam apenas nas fases iniciais de multiplicao do parasita, no atingindo as fases sexuadas que, geralmente so as mais patognicas. O tratamento preventivo de todo o rebanho, especialmente dos animais jovens, os mais susceptveis, logo aps exposio da infeco mais eficaz que o tratamento curativo (Vieira, Barros, Cavalcante, Ximenes & Carvalho, 2004). A quimioprofilaxia til, mas no deve esquecer-se que os coccidiostticos, ainda que previnam a doena, tambm podem impedir o desenvolvimento de imunidade. Se os coccidiostticos forem suprimidos bruscamente, podem levar ao aparecimento de surtos graves de cocciodiose (Cordero del Campillo & Rojo Vzquez, 2002). ainda de extrema importncia considerar o possvel aparecimento de resistncias aos coccidiostticos utilizados (Ayensa, 1996). Existe um grande nmero de frmacos anticoccidias que podem ser administrados aos ovinos e caprinos. No entanto, existem frmacos que posem ser utilizados com carcter profilctico e os que podem ser utilizados com vertente profilctica-teraputica (Ayensa, 1996).

1- Decoquinato um coccidiosttico (Plumb, 2005), que pertence ao grupo das quinolonas (4-hidroxiquinolona) e actua inibindo o metabolismo das mitocndrias. Tm actividade dirigida contra as fases do ciclo endgeno das coccidias, especialmente contra esporozotos e trofozotos (Ayensa, 1996). No efectivo no tratamento de coccidiose clnica (Plumb, 2005). usado na dose de 100 ppm no alimento. Apresenta baixa toxicidade, no entanto, a sua utilizao limitada, uma vez que h um aparecimento rpido de resistncias. Em cabritos tem sido usado na preveno da coccidiose por E. christenseni e E. ninakohlyakimovae. muito eficaz em cabras na dose de 0,3-4 mg/Kg de peso vivo (Ayensa, 1996). Em caprinos, de acordo com Plumb (2005), pode ser utilizado, como profilaxia, na dose de 0,5 mg/Kg por dia 38

na alimentao durante os perodos de exposio s coccidias ou na dose de 0,5-1 mg/kg de peso vivo, por via oral.

2- Clopidol Composto piridnico que apresenta actividade marcadamente preventiva. Actua

fundamentalmente contra esporozotos e trofozotos. eficaz na dose de 15 mg/Kg de peso vivo e recomendada a dose de 250-500 ppm em conjunto com o alimento durante vinte a quarenta dias (Ayensa, 1996).

3- Robenidina uma bis-guanidina e apresenta aco contra esquizontes de primeira gerao e, em menor extenso, contra a fase de gametogonia. A dose profilctica de 12-15 mg/Kg de peso vivo. A sua administrao pode ser efectuada em conjunto com o sulfatiazol (Ayensa, 1996).

4- Monensina um antibitico ionforo. Pode ser administrado em conjunto com o alimento em concentraes de 5-20 ppm, a dose recomendada de 10 ppm. Foram observadas intoxicaes com doses de 60 ppm e DL50 para borregos com 12 mg/Kg de peso vivo e DL50 em cabras com 27 mg/Kg de peso vivo (Ayensa, 1996). A monensina recomendada como profilctico para borregos desde a quarta semana de idade (Cordero del Campillo & Rojo Vzquez, 2002).

5- Lasalocid um antibitico ionforo que pode se administrado na dose de 20 mg/Kg, durante o perodo de exposio infeco. recomendvel a administrao de um suplemento mineral na dose de 18 grama por animal (Ayensa, 1996). Na preveno da coccidiose caprina pode ser utilizado na dose de 30 g/tonelada de alimento (Lopez, 1996).

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6- Salinomicina um antibitico ionforo que na dose de 18,5 mg/Kg, em conjunto com o alimento, promove um controlo na eliminao de oocistos (Ayensa, 1996). O tratamento preventivo da coccidiose com salinomicina eficaz em caprinos leiteiros se for administrada a dose de 1 mg/Kg, em cabritos, a partir da segunda semana de vida. O tratamento preventivo, quando iniciado na fase de cria, reduz a infeco e promove um melhor ganho de peso na fase de recria (Vieira, et al., 2004).

2.12) Tratamento
A administrao de produtos anticoccidias pode reduzir ou eliminar a coccidiose clnica. Todos os borregos e cabritos do rebanho devem ser tratados, mesmo os que no apresentem sintomatologia clnica. Quando os animais comeam a exibir diarreia a teraputica ir ter um efeito limitado na preveno das consequncias futuras da doena, embora na altura possa impedir a progresso da doena, nesse momento impossvel compensar os danos j causados. O futuro produtivo do animal est comprometido (Deniz, 2008). Os animais doentes devem receber tratamento sintomtico para controlo da diarreia, desidratao, infeces secundrias e pneumonias, que geralmente so frequentes (Lima, 2004). Vrios frmacos podem ser utilizados como profilcticos e teraputicos da coccidiose.

1- Sulfamidas As sulfamidas so anlogos estruturais da P-aminobenzoato. Apresentam actividade contra a primeira e segunda gerao de esquizontes e, possivelmente, contra fases sexuadas (Ayensa, 1996). A administrao de sulfaguanidina na concentrao de 0,2% no alimento pode ser usada de forma constante na preveno da coccidiose ovina e caprina. Doses de duas grama por dia, durante oito dias tambm podem ser utilizadas. Em animais com sintomatologia clnica podem ser administradas doses de 100-250 mg/Kg de peso vivo, durante uma semana. A sulfametazina pode ser utilizada na gua de bebida, alimento ou atravs de injeco intravenosa. Podem ser fornecidos at 0,5% no alimento, oralmente pode ser administrada 40

uma dose de 130 mg/Kg no primeiro dia, continuando-se a medicao por mais quatro dias, a cada doze horas, na dose de 65 mg/Kg de peso vivo. As sulfamidas podem ser utilizadas isoladamente ou em associao com outros frmacos. Um exemplo o caso do trimetoprim. Podem ser usadas associaes de sulfadimetoxina (200 mg.) com trimetoprim (40 mg.) na dose de 1 ml/10 Kg de peso vivo. A sulfadimidina (200 mg.) tambm pode ser associada ao trimetoprim (15 mg.) na dose de 3 ml/10 Kg. Estes tratamentos geralmente so realizados durante trs a cinco dias, por via oral. Podem ainda ser realizadas associaes com outros antibiticos. o caso da sulfamerazina com a clortetraciclina e da sulfadimetoxina com a oxitetraciclina. A primeira associao reduz a capacidade de esporulao e o poder infectante dos oocistos libertados nas fezes (Ayensa, 1996).

2- Amprolium um frmaco antagonista da tiamina. um dos coccidiostticos mais seguros e bem tolerados. So necessrias doses muito superiores s recomendadas para que se produza toxicidade (Ayensa, 1996). Em caprinos, doses de 50 mg/Kg de peso vivo actuam como coccidiosttico e dose de 100 mg/Kg actua como curativo (Ayensa, 1996). Os animais tratados com amprolium mostram melhores ganhos de peso (Lopez, 1996a). Pode ser utilizado em associao com outros frmacos. o caso da associao amprolium com etopabato na dose de 55 mg/Kg, duas vezes ao dia, durante dezanove dias. O etopabato interfere na sntese de cido flico e deve ser usado sempre em associao com outro anticoccidia. Algumas alteraes no tratamento levam ao aparecimento de resistncias (Ayensa, 1996).

3- Triazinonas Uma das substncias pertencentes a este grupo o Toltrazuril. O Toltrazuril demonstrou ser um composto especfico e efectivo no controle e preveno da coccidiose em aves e mamferos. Existem vrios estudos que demonstram que o Toltrazuril eficaz na coccidiose ovina, na dose de 20mg/Kg de peso vivo (Mundt, Dittmar, Daugschies, Grzonka & Bangoura, 2009). 41

Os oocistos que se encontram nas fezes indicam o trmino do ciclo da Eimeria spp. e as possveis leses causadas na mucosa intestinal. O tratamento metafilctico aconselhvel para interromper o ciclo das coccidias, antes que ocorram danos graves na mucosa intestinal e, desta forma, reduzir os sintomas clnicos da doena (Dittmar, Mundt, Grzonka, Daugschies, & Bangoura, 2009) Ou seja, obtm-se o benefcio mximo se o Toltrazuril for administrado antes do surgimento dos sinais clnicos, ou seja, durante o perodo pr-patente (Deniz, 2008). Estudos clnicos e de microscopia electrnica demonstraram que o Toltrazuril eficaz contra vrios estados de desenvolvimento intracelular das coccidias, incluindo esquizontes, macrogamontes e microgamontes. Este composto interfere na diviso do ncleo do protozorio, na actividade das mitocndrias e alteraes na formao da parede dos microgmetas. O Toltrazuril provoca ainda a vacularizao grave do retculo endoplasmtico em protozorios, nas fases de desenvolvimento intracelular. O tempo certo para aplicao do tratamento preventivo depende da histria da explorao, dos casos clnicos de coccidiose que tenham ocorrido anteriormente e do sistema de produo praticado (intensivo, semi-intensivo ou extensivo). A colocao dos animais em parques contaminados tambm um factor que determina o tempo para a aplicao do Toltrazuril. A coccidiose tem um curso dinmico e insidioso, no nos podendo esquecer que os animais podem encontrar-se em diferentes estados de desenvolvimento da doena. O perodo pr-patente varia de espcie para espcie, sendo de quinze a vinte dias para E. crandallis e de doze a quinze dias para E. ovinoidalis. Este perodo deve ser tido em conta quando o tratamento iniciado. Desta forma, o tratamento preventivo deve ser iniciado antes do surgimento de oocistos nas fezes e antes do inicio dos sinais clnicos (Deniz, 2008). Alm de se reduzir a contaminao ambiental por oocistos, melhora-se o desempenho zootcnico dos animais (Le Sueur, Mage & Mundt, 2008). O tratamento iniciado aps a observao de oocistos nas fezes apenas previne futuros danos c ausados pela doena (Deniz, 2008). O Toltrazuril, alm de controlar a infeco por coccdias, permite que os animais adquiram imunidade, promovendo a resistncia a reinfeces (Deniz, 2008). Outro frmaco frequentemente utilizado o diclazuril. Este administrado em dose nica de 1 mg/Kg de peso vivo. No entanto, apesar da sua eficcia, em relao ao toltrazuril apresenta desvantagens. O toltrazuril mais eficaz na reduo da excreo de oocistos e no alvio dos sintomas clnicos da doena (Mundt, et al., 2009).

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Parte III Estudos de Caso

1) Prevalncia de Eimeria spp. em exploraes portuguesas de ovinos em regime extensivo, semi-intensivo e intensivo 1.1) Introduo
A coccidiose uma doena parasitria caudas por protozorios do gnero Eimeria. frequente em ruminantes e geralmente manifesta-se por alteraes gastrointestinais (Lima, 2004). Normalmente assume uma forma insidiosa e s se torna evidente nos animais infectados aps o aparecimento dos sinais clnicos. Aps a ingesto de oocistos esporulados o parasita penetra nas clulas epiteliais da mucosa intestinal, onde se multiplica. O meio ambiente contaminado aps a libertao de oocistos nas fezes. O tempo decorrido entre a ingesto de oocistos esporulados e a libertao de novos oocistos nas fezes (perodo pr-patente) de doze a vinte dias, dependendo da espcie envolvida e da sua patogenicidade (Deniz, 2008). A coccidiose ovina tem o seu maior impacto em borregos com menos de trs meses de idade (Deniz, 2008) e est associada a sintomas como diarreia, desidratao, diminuio nos ganhos de peso e, em alguns casos, morte (Helle, 1970; Reeg et al., 2005). De acordo com Hassum et al. (2002), os oocistos do gnero Eimeria so frequentemente encontrados em fezes de ovinos, independentemente da idade, apesar dos animais com menos de seis meses de idade serem os mais afectados e os que eliminam mais oocistos nas fezes. Assume-se que a maioria, seno todos os ruminantes, se infecta com coccidias ao longo da vida (Taylor & Catchpole, 1994). O sistema de explorao um dos factores mais importantes no aparecimento da coccidiose. Em exploraes intensivas, onde h elevada densidade populacional, a transmisso da doena ocorre com maior facilidade devido disponibilidade de grandes quantidades de oocistos (Lima, 2004). Em sistemas extensivos a eliminao de fezes dispersa, no entanto, podem existir fortes contaminaes junto das zonas de abeberamento e dormitrios. Quer em exploraes extensivas quer em exploraes intensivas, as camas dos estbulos, principalmente de palha, em conjunto com uma sobrelotao de animais e ms condies higinicas constituem uma das fontes principais de infeco para os animais jovens (Arguello & Cordero del Campillo, 1996). O impacto econmico da coccidiose, em pequenos ruminantes, foi calculado por Fritzgerald em 1980 em cerca de 140 milhes de dlares em todo o mundo. Na Europa esto descritas 43

quinze espcies de Eimeria spp., no entanto, nem todas so agentes patognicos. Duas das quinze espcies que infectam os ovinos esto associadas ao aparecimento de doena e so consideradas as mais patognicas, a E. crandallis e E. ovinoidalis (Deniz, 2008). E. bakuensis, E. ahsata, E. faurei, E. punctata, E. weybridgensis e E. parva tambm apresentam poder patognico (J. Raposo, comunicao pessoal, Maro 10, 2010). A maioria dos casos de coccidiose ocorre como resultado de uma infeco mista, sendo extremamente raro o aparecimento de infeces causadas por uma nica espcie (Deniz, 2008; Hassum & Menezes, 2005). O isolamento de E. bakuensis em fezes de ovinos tem sido comum. Contudo, so necessrias doses com vrios milhes de oocistos para existirem manifestaes clnicas (Hassum et al., 2002). Segungo Maingi e Munyua (1994) a prevalncia dos oocistos de Eimeria spp. mais alta nos ovinos jovens do que em ovinos adultos, sendo a E. bakuensis a mais prevalente das espcies encontradas. O maneio do rebanho, o estado fisiolgico dos animais e as condies ambientais tm grande influncia sobre a capacidade infectante dos oocistos (Hassum & Menezes, 2005). Vrios estudos de prevalncia tm sido efectuados em vrios pases. Num estudo efectuado por Hassum e Menezes (2005), com o objectivo de identificar as espcies de Eimeria spp. em pequenos ruminantes, verificaram que 94,65% dos ovinos jovens estavam parasitados e a espcie E. ovinoidalis foi a mais frequente. Neste mesmo estudo verificou-se ainda que, embora a eliminao de oocistos tenha sido baixa, a ocorrncia de infeco foi constante. Ahid et al. (2009), na decorrncia de um estudo com o objectivo de identificar espcies de Eimeria spp., verificaram que em ovinos criados em extensivo na regio de Rio Grande do Norte, Brazil, E. ovinoidalis e E. parva so as espcies mais prevalentes.

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Tabela 3 Prevalncia de coccidiose ovina em divers os pas es. (Adaptado de Deniz, 2008. Coccidiose ovina: Reviso bibliogrfica, disponvel em: www. bayervet.bayer.pt )

O objectivo deste estudo foi avaliar a prevalncia das vrias espcies de Eimeria em borregos, em diferentes sistemas de produo (extensivo, semi-intensivo e intensivo) e avaliar a relao entre o tipo de infeco (infeco simples, mista ou animais no infectados) e o sistema de produo.

1.2) Materiais e Mtodos

O presente estudo foi realizado em conjunto com a Bayer Health Care Sade Animal, sob coordenao do Dr. Joo Raposo. Foram recolhidas amostras de fezes de 161 (n=161) borregos em 18 exploraes de ovinos em Portugal Continental, seleccionadas por mtodos no probabilsticos, entre Janeiro e Novembro de 2009. As exploraes em questo funcionam em diferentes sistemas, sendo que, onze so de sistema extensivo, quatro de sistema semi-intensivo e trs em sistema intensivo. As exploraes de sistema extensivo encontram-se em Ourique, Castro Verde, vora, Arraiolos, Mora, Vila Pouca de Aguiar e Macedo de Cavaleiros. As quatro exploraes em sistema semi-intensivo encontram-se em vora, Idanha-a-Nova e Proena-a-Nova. Por fim, as trs exploraes intensivas situam-se na Sert, Ponte de Sr e Barcelos. 45

As exploraes em regime extensivo possuam entre 27 e 1.200 animais, as de sistema intensivo entre 200 e 4.800 animais e as que se encontravam em sistema semi-intensivo entre 90 e 950 animais. Para a classificao do tipo de infeco, os animais que apenas apresentavam uma espcie de Eimeria eram classificados como infeco simples. No caso de apresentarem duas ou mais Eimeria spp. tratava-se de infeco mista. Se na altura da recolha de amostras no fossem observadas espcies de Eimeria, os animais eram classificados como no infectados. Das dezoito exploraes em estudo nove apresentavam animais com suspeita de coccidiose. Todas as exploraes em regime intensivo apresentavam suspeita de coccidiose, duas de regime semi-intensivo apresentavam suspeita (50%). Em regime extensivo apenas quatro das onze exploraes tinham suspeita desta parasitose. As suspeitas de coccidiose deviam-se presena de animais com diarreia e baixos ganhos de peso. Os mdicos veterinrios responsveis pelas exploraes no relataram a realizao de qualquer colheita de fezes, para pesquisa de Eimeria spp., anteriormente. Os animais em estudo tinham entre duas e sete semanas de idade. As amostras eram recolhidas directamente da ampola rectal. Essas colheitas foram realizadas por mim, por mdicos veterinrios responsveis pelas exploraes e pelo Dr. Joo Raposo. Os borregos eram escolhidos aleatoriamente, sendo a idade o nico critrio de seleco. Apesar de ser pretendida a recolha mnima de dez amostras (n=10) por explorao, existiram exploraes em que este nmero de amostras no foi conseguido. Em trs exploraes em regime extensivo apenas se obtiveram oito (n=8), duas (n=2) e uma (n=1) amostra por explorao.

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Figura 7 - Recolha de fezes num borrego, directamente da ampola rectal e borregos de uma explorao de regime extensivo (Ori ginal).

A cada explorao foi atribuda uma letra para sua identificao. Em cada explorao era realizado um inqurito em que se questionava a vocao produtiva da explorao, o regime da explorao, a suspeita de coccidiose e a presena de animais com diarreia (Anexo I). Dependente da explorao se situar a norte ou sul do pas as amostras eram devidamente identificadas e envidas, por correio, para a Segalab ou para o Laboratrio Veterinrio de Montemor-o-Novo, respectivamente. Nestes laboratrios foram realizadas coprologias qualitativas (Mtodo de Willis) para identificaco de oocistos no esporulados de Eimeria spp., e respectiva identificao morfolgica dos mesmos (mtodo de flutuao e observao microscpica). Para a anlise estatstica dos dados recorreu-se ao programa estatstico R (the R project for statistical computing), disponvel em http://www.r-project.org/, e ao Microsoft Excel para elaborao de grficos. Para analisar a relao entre o tipo de infeco e o sistema de explorao, bem como a relao entre o sistema de explorao e a prevalncia de Eimeria spp. recorreu-se ao programa estatstico R, analisando os dados atravs de uma two-way table. Este tipo de teste estatstico permite avaliar para cada tipo de sistema de explorao a percentagem de cada tipo de infeco presente e a prevalncia de cada espcie de Eimeria em cada sistema de explorao.

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1.3) Resultados
Recolheram-se um total de 161 amostras fecais a borregos entre as duas e as sete semanas de vida, em dezoito exploraes, sendo 91 amostras de exploraes em regime extensivo, 40 em exploraes semi-intensivas e 30 em exploraes intensivas. Em primeiro lugar de referir que em todas as exploraes existiam animais infectados, ou seja, foram detectados oocistos na anlise coprolgica. Um dos objectivos do questionrio realizado era perceber a percentagem de exploraes com suspeita ou no de coccidiose nas exploraes em estudo. De acordo com os resultados obtidos, aps a anlise estatstica, verificou-se que 100% das exploraes em regime intensivo apresentavam suspeita de coccidiose, 50% das exploraes semiintensivas apresentava suspeita de possuir animais com coccidiose e apenas 36% das exploraes em regime extensivo apresentavam animais com suspeita desta parasitose (Grficos 6-8).

Grfico 6- Percentagem de exploraes em regime extensivo com e sem suspeita de coccidiose clnica.

Extensivo

36,36% 63,64%
Suspeita
No suspeita

Grfico 7 - Percentagem de exploraes em regime intensivo com e sem suspeita de coccidiose clnica.

Intensivo
0%

Suspeita 100%
No suspeita

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Grfico 8 - Percentagem de exploraes em regime semi-intensivo com e sem suspeita de coccidiose clnica.

Semi-intensivo

50%

50%

Suspeita No suspeita

Verificou-se, no presente estudo, a relao entre o tipo de infeco (mista, simples e animais no infectados) e o sistema de explorao (extensivo, semi-intensivo e intensivo) (Tabela 4).

Tabela 4 - Relao entre o tipo de infeco e o sistema de produo (valores percentuais).

Tipo de Infeco \ Sistema de Produo Mista Simples No infectados

E 57,1 26,4 16,5

SI 37,5 25 37,5

I 40 56,7 3,3 n=30

Amostragem n=91 n=40 E extensivo; SI semi-extensivo; I - intensivo

Nos animais presentes em exploraes em sistema extensivo, as infeces do tipo misto, ou seja, em que estava presente mais do que uma espcie de Eimeria, eram as mais prevalentes (57,1 %). Neste tipo de exploraes 16,5 % dos animais no estavam infectados (na altura da recolha de amostras no apresentaram excreo de nenhuma Eimeria spp.) Em exploraes de regime intensivo apenas 3,3% dos animais no apresentavam excreo de oocistos na altura da recolha das amostras e 56,7% dos animais apresentavam apenas uma espcie de Eimeria. 37,5% dos animais em sistema semi-intensivo apresentavam infeces do tipo misto e 37,5% no apresentavam oocistos nas amostras de fezes . Em animais presentes em exploraes de regime extensivo E. bakuensis foi a espcie mais prevalente, estando presente em 35,2% dos animais. Seguindo-se, por ordem decrescente de prevalncia, E. parva (29,7%), E. ahsata e grupo (E. crandalis, E. punctata e E. weybridgensis) (26,4%), E. intricata (16,5%), E. marsica e E. pallida (15,4%), E. ovinoidallis 49

(14,3%) e E. faurei (13,2%). A E. granulosa no foi identificada em nenhum animal neste sistema de explorao (Grfico 9). Em sistema intensivo a espcie mais prevalente foi, tambm, E. bakuensis, tendo sido identificada em 40% dos animais. Por ordem decrescente de prevalncia seguiu-se E. parva (33,3%), E. faurei e grupo (E. crandalis, E. punctata e E. weybridgensis) (20%), E. ovinoidallis e E. pallida (16,7%). E. ahsata, E. marsica e E. granulosa no foram observadas em nenhuma amostra de animais presentes neste sistema de explorao (Grfico 10). Tambm em sistema semi-intensivo a E. bakuensis foi a espcie mais prevalente, estando presente em 30% dos animais em estudo. Sucedendo-se, por ordem decrescente de prevalncia, E. faurei e E. parva (22,5%), E. ovinoidallis (15%), E. ahsata e grupo (E. crandalis, E. punctata e E. weybridgensis) (12,5%) e E. pallida (2,5%). E. intricata, E. marsica e E. granulosa no foram presenciadas em nenhuma amostra de animais deste tipo de explorao (Grfico 11).

Grfico 9 - Prevalncia de Eimeria spp. em animais de exploraes de regime extensivo.

40
26,4 20

35,2

Extensivo
29,7 13,2 16,5 15,4 14,3 15,4 26,4

0
0

50

Grfico 10 - Prevalncia de Eimeria spp. em animais de exploraes de regime intensivo.

Intensivo
40 40 35 30 25 20 15 10 5 0
33,3 20 0 3,3 0 16,7 0 16,7 20

Grfico 11 - Prevalncia de Eimeria spp. em animais de exploraes de regime semi-intensivo.

Semi-intensivo
30
30 25 20 15 10 5 0 22,5 12,5 0 0 15 2,5 22,5 12,5 0

1.4) Discusso de resultados / Concluso

Os animais mais sensveis a esta parasitose tm entre duas a quatro semanas de vida e o aparecimento do quadro clnico surge quando tm entre quatro a sete s emanas de idade (Lopez, 1996b). A apresentao e severidade do quadro clnico da coccidiose depende de muitos factores, como a espcie de Eimeria, dose de oocistos esporulados ingeridos, interaco entre espcies de Eimeria, idade e estado imunitrio dos animais, stresse, maneio, entre outros. 51

De acordo com os resultados obtidos no presente estudo, as exploraes em regime intensivo foram as que na altura da recolha das amostras possua menor percentagem de animais no infectados (3,3%), ou seja, que no apresentavam nas fezes nenhuma espcie de Eimeria spp. Em todas as exploraes intensivas existiam animais com suspeita de coccidiose clnica e, de acordo com os resultados alcanados, 96,7% dos animais presentes neste tipo de sistema apresentavam excreo de oocistos de Eimeria spp. Segundo Lima (2004), um dos factores mais importantes para o aparecimento de coccidiose a manuteno dos animais em regime intensivo, onde existe alta densidade populacional, a transmisso da parasitose ocorre com maior facilidade uma vez que h grande disponibilidade de oocistos. Os nossos resultados parecem corroborar esta concluso. Animais mantidos em regime extensivo a probabilidade de ocorrer infeco menor se tiverem disponveis grandes reas de terreno e se os animais no partilharem zonas de abeberamento e dormitrios (Arguello & Cordero del Campillo, 1996). Contudo, e tendo em conta o grau de intensificao das exploraes, em que aumenta a presso de infeco, no presente estudo, verificou-se que nas exploraes em regime semi-intensivo existiam maior percentagem de animais no infectados (37,5%) do que em exploraes extensivas (16,5%). A maioria dos casos de coccidiose ocorre como resultado de infeces mistas, em que est presente mais do que uma espcie de Eimeria, sendo extremamente raras infeces causadas por uma nica espcie (Deniz, 2008). Contrariamente, no presente trabalho, verificou-se que no sistema intensivo 56,7% dos animais apresentavam infeces do tipo simples e apenas 40% mostravam infeces mistas. O que pode ser devido ao pequeno nmero de amostras obtidas neste sistema de explorao. Em regime extensivo somente 26,4% dos animais possuem infeces simples e 57,1% infeces mistas. De acordo com Maingi e Munyua (1994) a E. bakuensis a espcie mais prevalente em ovinos e o mesmo se pode concluir no presente estudo. Esta espcie de Eimeria est presente em 35,2% dos animais em sistemas de explorao extensiva, em 40% dos animais em regime intensivo e em 30% dos animais em semi-intensivo. Contudo, Hassum et al. (2002) referem que so necessrios milhes de oocistos desta espcie de Eimeria para que ocorra manifestao clnica da doena. Deniz (2008) menciona que E. crandallis e E. ovinoidalis so consideradas as espcies, que infectam os ovinos, mais patognicas e J. Raposo (comunicao pessoal, Maro 10, 2010) refere que E. bakuensis, E. ahsata, E. faurei, E. punctata, E. weybridgensis e E. parva tambm apresentam poder patognico. Cordero del Campillo e Rojo Vzquez (2002) consideram que a E. ovinoidalis muito patognica, podendo causar a morte em borregos. Todas estas espcies com poder patognico estavam presentes em animais dos diferentes sistemas de produo, com 52

excepo de E. ahsata que estava ausente nas exploraes intensivas . Considerando apenas a E. ovinoidalis, uma vez que a E. crandallis era indistinguvel de E. punctata e E. weybridgensis, na anlise coprolgica efectuada pelos laboratrios, esta era mais prevalente em animais criados em sistema intensivo (16,7%), seguindo-se animais de exploraes semi-intensivas (15%) e, por fim, estava presente em 14,3% dos borregos de sistemas extensivos. Arguello e Cordero del Campillo (1996) referem que a infeco experimental em ovinos com E. ovinoidalis pode ser mortal com um nmero moderado de oocistos (10000 ou menos). Neste estudo no foi encontrada, em nenhuma amostra de fezes, oocistos de E. granulosa. E. intricata e E. marsica estavam ausentes nos animais de exploraes semi-intensivas. Estas Eimeria spp. no possuem poder patognico. Logo, em exploraes em sistema semiintensivo, a nica espcie de Eimeria no patognica encontrada foi E. pallida, que tambm foi a espcie menos prevalente entre as espcies presentes nas amostras fecais dos animais deste sistema de produo. A espcie E. ahsata altamente patognica em condies experimentais (Cordero del Campillo e Rojo Vzquez, 2002) e segundo Arguello & Cordero del Campillo (1996) considerada uma das espcies mais patognicas, esta est ausente em animais de exploraes intensivas, como foi referido, e foi mais prevalente em borregos de exploraes extensivas (26,4%) do que de exploraes semi-intensivas (12,5%). Em todos os sistemas de produo E. parva foi a segunda espcie mais prevalente, estando presente em 29,7% dos animais de sistema extensivo, em 33,3% dos animais de sistema intensivo e em 22,5% dos animais em semi-extensivo (igual valor apresentou E. faurei, neste sistema de produo). Em concluso, os sistemas de produo intensiva so os que possuem menor nmero de animais que no apresentavam excreo de oocistos na altura da recolha das amostras. Contudo, a simples identificao de oocistos nas fezes no pode validar o diagnstico de coccidiose. Em fezes de hospedeiros saudveis podem ser encontrados grande nmero de oocistos, por outro lado, podem surgir coccidioses graves durante as primeiras fases assexuadas da infeco, antes de os oocistos serem excretados nas fezes (Bowman, 2004). ainda de referir que os animais identificados como no infectados poderiam estar efectivamente infectados, ou seja, podiam encontrar-se no perodo pr-patente da infeco. Desta forma, os resultados coprolgicos no so suficientes para diagnstico de coccidiose, este apenas representam, na maioria das vezes, uma avaliao da infeco do rebanho.

53

2) Nvel de excreo de oocistos de Eimeria spp. em cabritos entre as trs e as treze semanas de vida em dois sistemas de produo distintos. 2.1) Introduo
A coccidiose uma infeco parasitria causada por parasitas do gnero Eimeria spp.. As grandes perdas econmicas causadas pela infeco clnica e sub-clnica incluem altas taxas de morbilidade e mortalidade, baixas taxas de crescimento, diminuio da produtividade e custos de tratamento (Abo-Shehada & Abo-Farieha, 2003). Esta parasitose leva ainda e baixos ganhos mdios dirios e baixas performances dos efectivos (Kimbita, Silayo, Mwega, Mtau & Mroso, 2009). Eimeria spp. um parasita intracelular que afecta as clulas epiteliais do intestino e, excepcionalmente, pode ser observado no ducto biliar e glndulas de Brnner. A coccidiose clnica ou sub-clnica uma das mais importantes infeces parasitrias que contribui para alteraes entricas, especialmente em animais jovens ou adultos sujeitos a stress ou ms condies de maneio (Abo-Shehada & Abo-Farieha, 2003). A coccidiose em caprinos resulta de uma complexa interaco entre parasita e hospedeiro (Koudela & Bokov, 1998). A contaminao por protozorios deste gnero , por norma, multiespecfica e a patogenicidade depende da espcie envolvida e do nmero de oocistos ingeridos pelo animal (Freitas et al., 2005). De acordo com Lima (2004) a E. ninakohlyakimovae considerada a espcie mais patognica e, segundo Koudela e Bokov (1998), a coccidiose clnica mais frequentemente causada por E. ninakohlyakimovae, E. arloingi e E. caprina. De acordo com Lopez (1996a) a fonte de infeco mais importante so os oocistos eliminados pelos animais jovens com elevada contaminao das camas, que pode constituir factor de mortalidade para os mesmos animais e para os que nascero posteriormente. Nos caprinos o risco de infeco normalmente ocorre quando estes recebem o colostro ou durante a amamentao e quando os animais mais jovens so introduzidos junto dos mais velhos para receber alimentao slida (Ayensa, 1996). Nos casos em que ocorre aleitamento artificial a contaminao pode advir do perodo em que receberam o colostro ou da contaminao fecal dos alimentos ou utenslios, no entanto, menos frequente se forem tomadas correctas medidas de higiene. Posteriormente, possvel a infeco a partir de oocistos sobreviventes do ano anterior na pastagem,

54

principalmente em locais de alta densidade de pastoreio (Cordero del Campillo & Rojo Vzquez, 2002). Em caprinos a infeco por Eimeria spp. comum nos primeiros seis meses de idade, podendo apresentar oocistos nas fezes a partir das duas semanas de idade, atingindo nveis elevados de infeco aos quarenta e cinco dias. A espcie E. christenseni mais prevalente e patognica em animais com menos de seis meses de idade e causa infeces menos graves ou assintomticas em caprinos com oito a nove meses de idade. Por vezes, em situaes como stresse, altas densidades populacionais, doenas concomitantes e ausncia ou quebra de imunidade, a coccidiose pode atingir animais mais velhos. Epidemiologicamente as mes representam grande importncia na infeco dos animais jovens (Arguello & Cordero del Campillo, 1996). As raas de caprinos com aptido leiteira so bastante susceptveis, sendo os animais jovens os mais afectados e os adultos so considerados como portadores e disseminadores da doena (Freitas et al., 2005). A prevalncia das diferentes espcies varia claramente, mas, pode ser constante dentro de um grupo etrio. A espcie E. christenseni predomina em animais jovens, enquanto E. hirci mais frequente em animais adultos. (Cordero del Campillo & Rojo Vzquez, 2002). No entanto, num estudo realizado por Koudela e Bokov (1998) a espcie mais prevalente em jovens foi E. arloingi e em adultos foi E. ninakohlyakimovae. O nmero de oocistos excretados foi geralmente menor em caprinos adultos (2567,3 +/- 12678 OPG) do que em caprinos jovens (18565 +/- 24888 OPG). Freitas et al. (2005), num estudo realizado em So Paulo, Brasil, em caprinos jovens e adultos, concluram que a infeco estava presente em 100% dos animais examinados, sendo E. ninakohlyakimovae a espcie mais prevalente e a menos prevalente E. caprina. O presente estudo teve como objectivo avaliar os nveis de excreo das vrias espcies de Eimeria ao longo da idade (em semanas), durante o tempo em que decorreu o estudo. Pretende ainda verificar se existe correlao entre o tipo de explorao e o nvel de excreo das vrias espcies de Eimeria.

55

2.2) Materiais e Mtodos

Para a realizao deste estudo foram escolhidas duas exploraes de caprinos na zona do Alentejo, nomeadamente na Igrejinha (vora) e Portel (Beja). As duas exploraes recebem assistncia veterinria por parte do Hospital Veterinrio Muralha de vora. Sob coordenao do Professor Hlder Cortes, apoio do HVME e cooperao dos detentores das exploraes foi possvel a realizao deste estudo. A explorao da Igrejinha encontra-se em regime intensivo, com 290 caprinos, de aptido leiteira, de raa Mursiana. Os caprinos encontram-se em estabulao permanente durante todo o ano, saindo apenas para pequenos parques exteriores quando as condies climticas o permitem. Os caprinos adultos apresentavam boa condio corporal, sem sinais clnicos de doena. No entanto, as condies de higiene e maneio da explorao no eram as mais adequadas. Os cabritos apenas tinham contacto com os animais adultos quando recebiam o colostro, posteriormente eram colocados num parque onde recebiam aleitamento artificial. As condies de higiene no parque dos cabritos eram muito precrias, existindo grande acumulao de fezes e urina, uma vez que as camas eram renovadas pouco frequentemente.

Figura 8 Parque cabrit os na Igrejinha, zona de aleitamento com deficientes condies de higiene. (Original)

Na explorao de Portel existiam 460 caprinos de raa Serpentina, em regime extensivo. Apesar de se tratar de uma raa de aptido de carne, estes animais eram ordenhados duas vezes por dia. Os caprinos adultos encontravam-se no campo durante todo o dia, sendo apenas recolhidos ao estbulo para a ordenha e amamentao dos cabritos, que se encontravam em estabulao permanente.

56

Figura 9 Caprinos adultos em Portel antes da amamentao e ordenha. (Original)

Os animais no apresentavam sinais clnicos de doena. Os cabritos, como foi referido, estavam estabulados em pequenos parques com quarenta animais cada. Estes eram amamentados, duas vezes por dia, pelas fmeas aleitantes, independentemente de se tratar ou no da progenitora. As fmeas eram contidas pela cabea, recebendo ao mesmo tempo alimento concentrado.

Figura 10 Zona de amamentao dos cabritos em Portel. (Original)

As condies de higiene do parque dos cabritos eram boas inicialmente, contudo, ao longo do tempo foram tornando-se precrias, com grande acumulao de fezes e urina nas camas e junto aos comedouros. 57

As amostras de fezes dos cabritos eram recolhidas, por mim, directamente da ampola rectal. Em Portel as recolhas tiveram incio a 30 de Outubro de 2009 e na Igrejinha a 3 de Dezembro de 2009. Nas duas exploraes foram seleccionados doze cabritos, os quais foram separados em dois grupos, com seis animais, em funo da idade. Cada grupo possua cabritos da mesma idade e entre grupos havia diferena de uma semana de idade. Em Portel foram recolhidas amostras a cabritos entre as quatro e as treze semanas de idade e na Igrejinha entre as trs e as nove semanas de idade. Por vezes, devido pequena dimenso da ampola rectal, foi impossvel efectuar a recolha de amostras em alguns animais. Na explorao da Igrejinha a recolha de amostras no pode ser efectuada at s treze semanas de idade, uma vez que os cabritos foram vendidos para abate. Aps a recolha das amostras estas eram devidamente identificadas e entregues no Laboratrio de Parasitologia Victor Caeiro, da Universidade de vora. No laboratrio as amostras eram analisadas utilizando-se o mtodo quantitativo de McMaster, para contagem do nmero de oocistos. Em caso de dvida na identificao das espcies ao efectuar as contagens, realizou-se o mtodo qualitativo de Willis.

1- Mtodo McMaster (modificado) utilizado no Laboratrio de Parasitologia Victor Caeiro: Pesar 2 g de fezes (se pastosas ou diarreicas usar-se- 3g ou 5g, respectivamente). Homegeneizar com uma soluo saturada de NaCl ou uma soluo de acar a 35% at perfazer o volume de 30ml. Filtrar com uma rede metlica para um copo de vidro e agitando sempre colher o lquido e encher as 2 clulas da cmara de McMaster. Aguardar 1 a 2 minutos. Observar ao microscpio.

Nota: Clculo do coeficiente de oocistos por grama de fezes. Cada uma das clulas da cmara de McMaster tem uma rea de 100 mm 2. Como a altura entre as lminas de 1,5 mm o volume da clula igual a 15 mm 3. Logo as duas clulas 58

dar-nos-o um volume total de 0,30 ml. Duas grama de fezes esto contidas em 30ml e, portanto, uma grama de fezes estar contida em 15ml. Para se obter o nmero de oocistos existentes nas 2 clulas, ou seja, em 0,30ml, tem de se multiplicar por 50 (0,15/0,30) o nmero se oocistos observados.

Figura 11 Amostra de fezes de um cabrit o de Portel. (Original)

Para a anlise estatstica dos dados recorreu-se ao programa estatstico R (the R project for statistical computing), disponvel em http://www.r-project.org/, e ao Microsoft Excel para elaborao de grficos. Para analisar a excreo de cada espcie de Eimeria em cada explorao (Portel e Igrejinha) utilizou-se a anlise estatstica do teste T, recorrendo-se funo Independent sample t-test do programa estatstico R. Este tipo de teste permite-nos saber a mdia do nmero de oocistos excretados nas fezes para cada Eimeria spp. nas duas exploraes em estudo. Neste estudo considerou-se como estatisticamente significativos os resultados que apresentassem valores de p inferiores a 0,05. Para facilitar o tratamento estatstico dos dados os cabritos com a mesma idade das duas exploraes foram agrupados, comparando-se apenas os nveis de excreo (oocistos por grama de fezes) de cada Eimeria spp. em animais com a mesma idade. Desta forma, devido a dificuldades nas recolhas ou ausncia de animais na explorao, nem sempre o nmero de amostras recolhidas foi vinte e quatro (n=24). Estes dados foram analisados no programa estatsco R, atravs de um teste de ANOVA, recorrendo-se funo One-way ANOVA. Este teste permite-nos conhecer as mdias de excreo de oocistos, para cada espcie de Eimeria, em cada idade, assim como os valores do desvio padro e o p-value. Tal como no

59

estudo

anterior

os

resultados

considerados

como

estatisticamente

significativos

apresentavam valores de p <0,05.

2.3) Resultados
Recolheu-se um total de 152 amostras fecais em cabritos com idades entre as trs e as treze semanas, sendo que, 8 amostras foram em animais com 3 semanas; 16 amostras em animais com 4 semanas; 23 amostras em animais com 5 semanas; 19 amostras em animais com 6 semanas; 18 amostras em animais com 7 semanas; 20 amostras em animais com 8 semanas; 15 amostras em animais com 9 semanas; 10 amostras em animais com 10 semanas; 10 amostras em animais com 11 semanas; 8 amostras em animais com 12 semanas e 5 amostras em animais com treze semanas.

Figura 12 - Algumas espcies de Eimeria observadas. A E. ninakohlyakimovae B E. alijevi C E. arloingi D E. caprina E E. christenseni F E. aspheronica (Original)

Verificou-se as mdias de excreo de oocistos para cada espcie de Eimeria, na explorao da Igrejinha e na explorao de Portel. Apenas os valores obtidos para E. caprina e para a E. christenseni foram estatisticamente significativos na diferena entre exploraes, com valores de p de 0,0008847 e 0,02569, respectivamente (Tabela 5). As restantes espcies apresentavam mdias que no eram estatisticamente significativas. 60

Analisou-se ainda as mdias do nmero total de excreo de oocistos (ou seja, a mdia das somas dos oocistos das vrias espcies). E. alijevi foi a nica espcie que apresentou valores mdios de oocistos superiores na explorao da Igrejinha, 403,66 oocistos/grama fezes, em detrimento dos 54,76 oocistos/grama fezes na explorao de Portel, contudo estes resultados no foram estatisticamente significativos. As restantes espcie apresentaram valores superiores na explorao de Portel. Como tal, a explorao de Portel apresentou mdias do total de excreo de oocistos (2.335,82 oocistros/grama fezes) superiores explorao da Igrejinha (1.694,58 oocistos/grama fezes) sendo estas diferenas no significativas (Tabela 5). E. jolchijevi no foi encontrada em nenhum animal das duas exploraes em estudo. Em ambas as exploraes a Eimeria que apresentou mdias de excreo de oocistos superiores foi a E.arloingi, com valores de 734,5 oocistos/grama fezes na explorao da Igrejinha e valores de 1.022,71 na explorao de Portel, porm as diferenas no so estatisticamente significativas. E. aspheronica apresentou valores muito reduzidos na explorao de Portel (mdia de 0,34 oocistos/grama fezes) e estava ausente na explorao da Igrejinha (diferenas estatsticas no significativas) (Tabela 5).

Tabela 5 - Mdias de excreo de oocistos de Eimeria spp. por grama de fezes na explororao da Igrejinha e na explorao de Portel. * - p<0,05

Eimeria spp. E. alijevi E. arloingi E. aspheronica E. caprina * E. caprovina E. christenseni * E. hirci E. jolchijevi E. ninakohlyakimovae Total excreo Eimeria spp.

Igrejinha 403,66 734,5 0 8,64 62,96 148,75 8,64 0 275,28 1694,58

Portel p-value 54,76 0,2568 1022,71 0,6704 0,34 0,3198 56,12 0,0008847 92,17 0,4008 728,16 0,02569 47,42 0,8843 0 NA 295,55 0,9273 2335,82 0,6321

61

Grfico 12 - Mdias de excreo de oocistos de Eimeria spp. por grama de fezes na explorao da Igrejinha e na explorao de Portel. * - p<0,05

1200
Oocistos/grama fezes

1000 800

600
400
Igrejinha
Portel

200
0

Relacionou-se a idade dos cabritos (em semanas) com as mdias de excreo de oocistos das vrias espcies de Eimeria. Com esta relao tentou-se verificar qual a idade com valores mdios de excreo de oocistos mais altos para cada Eimeria spp. Apenas E. arloingi, E. caprina, E. caprovina, E. christenseni, E. hirci e o total de excreo de oocistos apresentaram valores estatisticamente significativos. As relaes entre as restantes espcies de Eimeria (E. alijevi, E. aspheronica, E. ninakohlyakimovae) e a idade dos animais no foram estatisticamente significativos (Tabela 6). Oocistos de E. aspheronica apenas foram encontrados em animais com seis semanas de idade e com baixos valores mdios de excreo (1,75 oocistos/grama fezes) (valor no significativo). E. alijevi foi a nica espcie que atingiu valores mdios de excreo de oocistos (925,83 oocistos/grama fezes) mais elevados s sete semanas de idade (no estatisticamente significativo), enquanto as restantes espcies atingiram o seu mximo s treze semanas de idade (com excepo de E. aspheronica que, como foi referido, estava presente apenas s seis semanas de idade), sendo apenas os valores de E. caprina, E. caprovina, E. christenseni, E. hirci e E. arloingi estatisticamente significativos. Contudo, o segundo valor mais elevado da mdia de excreo de oocistos de E. alijevi (valor no significativo) foi verificado s treze semanas de idade. E. arloingi foi a espcie que, em cabritos com treze semanas (idade em que a excreo mdia de oocistos foi mxima),atingiu o valor mdio de excreo de oocistos mais elevado (6.706,00 oocistos/grama fezes). Depois de E. jolchijevi e de E. aspheronica, E. caprina foi a espcie apresentou o valor mdio mais baixo (306,64 oocistos/grama fezes) (Tabela 6). 62

Como se pode observar no grfico 13 a idade em que se atingiu o valor da mediana de oocistos excretados mais elevados foi s treze semanas. Contudo, 75% dos resultados obtidos (primeiro Quartil) apresentavam valores de excreo de oocistos de Eimeria spp. inferiores mediana, existindo grande disperso, ou seja, uma grande amplitude e distncia inter-quartil. s 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 e 10 semanas de idade os valores a mediana so muito semelhantes e no h grande disperso de valores. Animais com 11 e 12 semanas de idade apresentam valores da mediana muito prximos, porm, s 12 semanas existem uma grande disperso de valores. O outliers (valores que se afastam do padro geral) mais elevado foi observado s 7 semanas de idade, representando cerca de 60.000 oocistos/grama de fezes.

Grfico 13 - Relao entre o total de excreo de oocistos de Eimeria spp. e a idade dos cabritos em semanas.

63

Tabela 6 - Mdia de excreo de Eimeria spp. em cabritos das trs s treze semanas de idade. * - Valores estatisticamente significativos
E. arloingi * p=0.01236 50.00 (sd=47.14) n=8 64.58 (sd=100.70) n=16 63.76 (sd=151.05) n=23 66.66 (sd=109.10) n=19 E. caprina * p=6.16e-10 0.00 (sd=0.00) n=8 4.17 (sd=16.67) n=16 2.90 (sd=9.60) n=23 1.75 (sd=7.65) n=19 9.26 (sd=31.94) n=18 6.67 (sd=23.19) n=20 E. caprovina * p=4.712e05 16.67 (sd=30.86) n=8 8.33 (sd=22.77) n=16 10.14 (sd=30.87) n=23 3.51 (sd=15.29) n=19 96.29 (sd=263.66) n=18 96.66 (sd=223.17) n=20 E. christenseni E. hirci * * p=0.0002985 E. jolchijevi p=5.362e-10 0.00 0.00 0.00 (sd=0.00) (sd=0.00) (sd=0.00) n=8 n=8 n=8 12.50 (sd=23.96) n=16 15.94 (sd=31.57) n=23 99.99 (sd=162.15) n=19 162.95 (sd=362.94) n=18 158.32 (sd=463.21) n=20 237.76 (sd=272.49) n=15 326.63 (sd=862.27) n=10 0.00 (sd=0.00) n=16 8.69 (sd=25.06) n=23 3.51 (sd=15.29) n=19 14.81 (sd=48.80) n=18 6.67 (sd=17.44) n=20 35.55 (sd=81.12) n=15 43.33 (sd=68.58) n=10 0.00 (sd=0.00) n=16 0.00 (sd=0.00) n=23 0.00 (sd=0.00) n=19 0.00 (sd=0.00) n=18 0.00 (sd=0.00) n=20 0.00 (sd=0.00) n=15 0.00 (sd=0.00) n=10 0.00 (sd=0.00) n=10 0.00 (sd=0.00) n=8 0.00 (sd=0.00) n=5 Total * p=0.0007558 99.99 (sd=118.18) n=8 89.57 (sd=129.78) n=16 124.63 (sd=272.12) n=23 405.22 (sd=1113.73) n=19 3725.55 (sd=14267.26) n=18 749.09 (sd=1547.51) n=20 3395.22 (sd=7827.78) n=15 1086.56 (sd=221767) n=10 2166.45 (sd=3257.07) n=10 7615.91 (sd=9721.67) n=8 16238.38 (sd=20595.11) n=5

Idade

E. alijevi 0.00 (sd=0.00) n=8 0.00 (sd=0.00) n=16 0.00 (sd=0.00) n=23 205.24 (sd=870.58) n=19

E. aspheronica

E. ninakohlyakimovae

0.00 (sd=0.00) n=8

33.33 (sd=71.26) n=8

0.00 (sd=0.00) n=16

0.00 (sd=0.00) n=16

0.00 (sd=0.00) n=23

10.14 (sd=23.43) n=23

1.75 (sd=7.65) n=19

26.31 (sd=68.11) n=19 574.02 (sd=2336.19) n=18 121.65 (sd=400.88) n=20 877.69 (sd=2638.57) n=15 123.32 (sd=277.99) n=10 353.30 (sd=694.92) n=10 662.43 (sd=919.96) n=8 1366.53 (sd=1802.75) n=5

925.83 2054.70 (sd=3778.68) (sd=7787.36) 0.00 (sd=0.00) n=18 n=18 n=18 59.99 (sd=157.67) n=20 44.43 (sd=66.25) n=15 40.00 (sd=103.98) n=10 90.00 (sd=140.58) n=10 199.98 (sd=334.26) n=8 366.63 (sd=449.65) n=5 299.97 (sd=428.28) n=20 0.00 (sd=0.00) n=20

1835.37 59.99 168.87 (sd=4756.16) 0.00 (sd=0.00) n=15 (sd=101.72) (sd=283.79) n=15 n=15 n=15 439.96 (sd=771.45) n=10 603.27 (sd=959.77) n=10 2574.74 (sd=3499.34) n=8 6706.00 (sd=7814.53) n=5 69.99 43.33 0.00 (sd=0.00) n=10 (sd=113.79) (sd=104.28) n=10 n=10

10

11

136.65 73.33 839.92 59.99 0.00 (sd=0.00) n=10 (sd=208.12) (sd=112.08) (sd=1272.45) (sd=120.48) n=10 n=10 n=10 n=10 0.00 (sd=0.00) n=8 124.99 233.31 3412.16 85.71 (sd=130.61) (sd=243.63) (sd=4790.45) (sd=147.63) n=8 n=8 n=8 n=8 306.64 526.61 5659.43 446.62 (sd=304.02) (sd=655.85) (sd=7191.88) (sd=907.16) n=5 n=5 n=5 n=5

12

13

0.00 (sd=0.00) n=5

64

2.4) Discusso de resultados / Concluso

Na primeira parte deste estudo tentou verificar-se a relao entre as mdias de excreo de oocistos para cada espcie de Eimeria em duas exploraes com sistemas de produo distintos. Como foi referido, os cabritos da explorao de Portel eram amamentados nas fmeas adultas, enquanto os cabritos da Igrejinha recebiam aleitamento artificial. De acordo com Ayensa (1996), o risco de infeco normalmente ocorre durante a amamentao e quando os animais jovens so colocados junto de animais mais velhos. Nos casos em que ocorre aleitamento artificial a contaminao pode advir do perodo em que receberam o colostro ou da contaminao fecal dos alimentos ou utenslios, no entanto, menos frequente se forem tomadas correctas medidas de higiene (Cordero del Campillo & Rojo Vzquez, 2002). Segundo Lopez (1996a) a fonte de infeco mais importante so os oocistos eliminados pelos animais jovens com elevada contaminao das camas, que pode constituir factor de mortalidade para os mesmos animais e para os que nascero posteriormente. Desta forma, a explorao com maior risco de infeco seria a explorao de Portel, uma vez que os cabritos eram amamentados nas fmeas adultas. Por outro lado, como foi referido, a explorao da Igrejinha possu deficientes condies de higiene das camas, o que constitua um factor de risco. Pelos resultados obtidos no presente estudo verificou-se que a explorao de Portel, como esperado, pois epidemiologicamente as mes representam grande importncia na infeco dos animais jovens, (Arguello & Cordero del Campillo, 1996) apresentava valores mdios de excreo total de oocistos (2335,82 oocistros/grama fezes) superiores aos da explorao da Igrejinha (1694,58 oocistos/grama fezes). Contudo, estes resultados no so conclusivos, uma vez que as diferenas entre exploraes no so estatisticamente significativas. E. jolchijevi no foi encontrada em nenhum animal das duas exploraes em estudo e E. aspheronica apresentou valores muito reduzidos na explorao de Portel (mdia de 0,34 oocistos/grama fezes) e estava ausente na explorao da Igrejinha, porm este resultado no conclusivo pois a diferena no significativa. excepo da E. alijevi, que apresentou valores mdios de excreo de oocicistos superiores na explorao da Igrejinha, todas as outras espcies de Eimeria apresentaram valores mdios de excreo de oocistos superiores na explorao de Portel. Todavia apenas podemos concluir que E.caprina e E. christenseni apresentavam valores mdios de excreo de oocistos superiores na explorao de Portel, pois apenas estas diferenas so estatisticamente significativas. E. ninakohlyakimovae considerada a espcie mais patognica por Lima (2004). No presente estudo esta foi a espcie que apresentou, curiosamente, valores mdios de 65

excreo de oocistos mais prximos entre as duas exploraes, apresentado valores mdios de 275,28 oocistos/grama fezes na explorao da Igrejinha e 295,55 oocistos/grama fezes na explorao de Portel. Contudo estas diferenas no so estatisticamente significativas. Considerando como mais prevalentes as espcies que apresentam a excreo mdia de oocistos mais elevada, a espcie mais prevalente nas duas exploraes foi a E. arloingi. De acordo com Cordero del Campillo e Rojo Vzquez (2002), E. arloingi a espcie mais prevalente em caprinos e E. christenseni predomina em animais jovens, enquanto E.hirci mais frequente em animais adultos. Neste trabalho verificou-se que E. christenseni foi a segunda espcie mais prevalente na explorao de Portel, sendo a E. alijevi a segunda mais prevalente na explorao da Igrejinha, porm estes resultados no so conclusivos. Num estudo realizado por Koudela e Bokov (1998) a espcie mais prevalente em jovens foi E. arloingi e em adultos foi E. ninakohlyakimovae. Na segunda parte do estudo relacionou-se a idade dos cabritos (em semanas) com as mdias de excreo de oocistos das vrias espcies de Eimeria. s duas semanas de idade os cabritos podem iniciar a excreo de oocistos nas fezes e atingir nveis elevados de infeco s seis semanas (Lima, 2004). Apenas oocistos de E. aspheronica foram encontrados em animais com seis semanas de idade, apesar de os resultados apresentados para esta espcie de Eimeria no serem estatisticamente significativos. Apenas E. alijevi apresentou valores mximos de excreo de oocistos s sete semanas, sendo que as restantes espcies, com excepo da de E. jolchijevi e E. aspheronica, apresentaram valores mximos s treze semanas de idade. Todavia, apenas podemos concluir que, no perodo de vida dos cabritos em que decorreu o estudo, E. arloingi, E. caprina, E. caprovina, E. christenseni, E. hirci apresentaram valores mximos de excreo de oocistos s treze semanas de idade. O mesmo sucedeu para o valor mdio total de excreo de oocistos de Eimeria spp. Como a recolha de amostras de fezes directamente da ampola rectal s duas semanas de idade foi impossvel, apenas temos resultados para animais de trs semanas de idade, cujas fezes apresentavam trs espcies de Eimeria (E. arloingi, E. caprovina e E. ninakohlyakimovae). A infeco por coccidias autolimitante, o que implica que o nmero de Eimeria spp. cresce at atingir um mximo que depois desaparece de forma mais ou menos brusca ou desce at nveis em que o hospedeiro desenvolve imunidade. possvel que continuem a eliminar pequenas quantidades de oocistos nas fezes durante semanas ou meses, no entanto, a infeco permanece despercebida (Bowman, 2004). E. alijevi e E. aspheronica foram as nicas espcies em que foi possvel acompanhar a excreo de oocistos aps se ter atingido uma valor mximo de excreo. No caso da E. alijevi verificou-se que aps ser 66

atingido o valor mximo a excreo mdia de oocistos desceu bruscamente de 925,83 para 59,99 oocistos/grama fezes, porm a partir das dez semanas de idade verificou-se um aumento na excreo de oocistos. Contudo, durante o restante tempo em que decorreu o estudo, as excrees de oocistos de E. alijevi, no se aproximaram do valor atingido s sete semanas. Porm, estas diferenas no so significativas. O aumento no nmero de oocistos, verificado aps terem sido atingidos valores baixos posteriores ao pico mximo de excreo, poderia ser devido a novas reinfeces. As reinfeces constituem um factor importante ao intervir indirectamente sobre o grau de imunidade, as quais so prejudiciais do ponto de vista epidemiolgico, pois ajudam a manter a vida dos oocistos e a contaminao do meio. (Arguello & Cordero del Campillo, 1996). E. aspheronica aps ter atingido o valor mximo, e nico, de excreo de oocistos s seis semanas de idade, os oocistos desaparecerem de forma brusca, no tendo sido encontrados em mais nenhuma idade at ao final do estudo. Contudo no pde concluir-se que realmente ocorreu o desaparecimento de E. aspheronica, uma vez que p foi superior a 0,05. Ao ser atingido o pico de excreo de oocistos E. caprina foi a espcie, entre E. arloingi, E. caprovina, E. christenseni e E. hirci, que apresentou o valor mais baixo (306,64 oocistos/grama fezes). Por outro lado, E. arloingi foi a que apresentou o valor mais elevado no pico de excreo de oocistos, durante o perodo em que decorreu o estudo. Como foi referido, segundo Cordero del Campillo e Rojo Vzquez (2002), E. arloingi a espcie mais prevalente em caprinos e E. christenseni predomina em animais jovens. Nesta segunda parte do estudo, tendo em conta que os valores obtidos para E. arloingi e E. christenseni so estatisticamente significativos, e considerando como mais prevalente a espcie com valores mdios de excreo de oocistos mais elevado, E. arloingi foi a espcie mais prevalente e E. christenseni a segunda mais prevalente aquando se atingiu o pico mximo de excreo de oocistos s treze semanas de idade. Neste estudo surgiram grande nmero de resultados no conclusivos provavelmente devido ao reduzido nmero de amostras, ao nmero de amostras ao longo das idades no ser igual, ao nmero total de recolhas efectuadas nas duas exploraes no ser o mesmo e ao facto da idade de inicio e fim das recolhas tambm no ser a mesma.

67

Parte IV Concluses gerais

Nesta dissertao, com os dois estudos realizados, pode concluir-se que: 1 estudo Exploraes de ovinos em sistema intensivo apresentam maior percentagem de animais infectados com Eimeria spp. do que exploraes em sistema semi-intensivo e extensivo. Por sua vez, as exploraes em sistema extensivo apresentaram maior percentagem de animais infectados do que as exploraes semi-intensivas. O que pode ser justificado pelo uso corrente de profilcticos em exploraes semiintensivas. Infeces do tipo misto (duas ou mais espcies de Eimeria presentes nas amostras de fezes) predominaram nas exploraes extensivas, enquanto as infeces de tipo simples predominaram nas exploraes intensivas. E. bakuensis foi a espcie mais prevalente, em exploraes de ovinos intensivas, extensivas e semi-intensivas. E. parva foi a segunda mais prevalente em todos os sistemas de produo, contudo no sistema semi-intensivo E. faurei apresentou a mesma prevalncia. E. ahsata foi a nica espcie com poder patognico ausente em exploraes em regime intensivo. Em exploraes de ovinos com regime extensivo e semi-intensivo estavam presentes todas as espcies com poder patognico (E. crandallis, E. ovinoidalis, E. bakuensis, E. ahsata, E. faurei, E. punctata, E. weybridgensis e E. parva). E. ovinoidalis, uma das espcies mais patognicas, foi mais prevalente em exploraes de ovinos intensivas. Em sistema semi-intensivo a nica espcie no patognica encontrada nas amostras fecais recolhidas foi E. pallida. Esta espcie foi tambm a espcie menos prevalente entre as espcies presentes. E. granulosa no foi encontrada em nenhuma explorao de ovinos em estudo.

68

 2 estudo

E.caprina e E. christenseni apresentavam valores mdios de excreo de oocistos superiores em cabritos amamentados nas fmeas aleitantes do que os cabritos alimentados artificialmente e sem contacto com animais adultos (excepto quando receberam o colostro). O valor total mdio de excreo de oocistos de Eimeria spp. atingiu o valor mais elevado em cabritos com treze semanas de idade. E. arloingi, E. caprina, E.caprovina, E. christenseni e E. hirci apresentaram os valores mdios de excreo de oocistos mais elevados em cabritos com treze semanas de idade. Em cabritos com trs semanas de idade estavam presentes nas fezes oocistos de E. caprovina e E. arloingi. Ao ser atingido o pico mximo de excreo de oocistos, E. caprina apresentou o valor mdio de excreo de oocistos mais baixo, enquanto E. arloingi atingiu o valor mais elevado. Considerando o valor obtido quando se atingiu o pico mximo de excreo de oocistos e considerando a espcie que apresenta maior valor de excreo a espcie mais prevalente, E. arloingi foi a espcie mais prevalente e E. christenseni a segunda mais prevalente s treze semanas de idade.

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Bibliografia

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Anexos

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Anexo I Prevalncia de Coccidiose Ovina e Caprina em Portugal

Data:___/____/____

Laboratrio: Laboratrio Veterinrio de Montemor-o-Novo

Nome da explorao:_________________________________________________________ Concelho:___________________________________ Cdigo Postal:______________________ Nome do Mdico Veterinrio :_________________________________________________ Nmero de amostras recolhidas:________________ Idade dos animais de onde for am recolhidas amostras:__________ 1 Esp cie animal: Ovinos Caprinos

2 Nmero de Ovinos / Caprinos existentes na explorao: Ovinos ________ Caprinos _______ 3 Qual a vocao produtiva da explor ao? Leite 4 Regime de explor ao: Explorao intensiva Semi-intensiva Extensiva Carne

5 H suspeit a de coccidiose na explorao? Sim 6 H anim ais com diarreia? Sim No No

Nota: - Devero ser recolhidas 10 amostras individuais por explorao. - As amostras devero ser recolhidas de animais entre as 2 (duas) e as 7 (sete) semanas. - Este questionrio dever acompanhar as amostras para o laboratrio. 75

Prevalncia de Coccidiose Ovina e Caprina em Portugal

Data:___/____/____

Laboratrio: Segalab

Nome da explorao:_________________________________________________________ Concelho:___________________________________ Cdigo Postal:______________________ Nome do Mdico Veterinrio :_________________________________________________ Nmero de amostras recolhidas:________________ Idade dos animais de onde for am recolhidas amostras:__________ 1 Esp cie animal: Ovinos Caprinos

2 Nmero de Ovinos / Caprinos existentes na explorao: Ovinos ________ Caprinos _______ 3 Qual a vocao produtiva da explor ao? Leite 4 Regime de explor ao: Explorao intensiva Semi-intensiva Extensiva Carne

5 H suspeit a de coccidiose na explorao? Sim 6 H anim ais com diarreia? Sim No No

Nota: - Devero ser recolhidas 10 amostras individuais por explorao. - As amostras devero ser recolhidas de animais entre as 2 (duas) e as 7 (sete) semanas. - Este questionrio dever acompanhar as amostras para o laboratrio.

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Anexo II
Tabela 7- Dados do estudo prevalncia de Eimeria spp. em exploraes portuguesas de ovinos em regime extensivo, semi-intensivo e intensivo. M- mista; S- simples; NI- no infectado; s - sim; n- no; E- extensivo; SIsemi-intensivo; I- intensivo

Anim al 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37

Exp l. A A A A A A A A A A B B B B B B B B B B C C C C C C C C C C D D D D D D D

S. produ o E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E

E. faur ei 1 0 1 1 1 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

E. granulo sa 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

E. intrica ta 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 1 1 0 1 1 0 1 0 1 0 0 1 0 1 0 1 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0

Grupo (E. E. E. E. E. E. E. crandalis; Tipo Suspei parv pallid marsic bakuens ahsat ovinoidal punctata; infec ta a a a is a lis weybridgens o is) 1 1 1 1 1 0 1 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 0 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 1 1 1 1 1 0 1 0 0 1 1 1 0 0 0 1 1 0 0 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 0 0 0 0 0 1 0 0 1 1 1 0 1 1 0 0 0 1 1 0 1 0 1 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 1 1 0 1 1 0 0 1 1 1 0 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 M M M M M M M M S M M M M M S M M M S S M M M M M M M M M M NI NI NI NI NI M NI s s s s s s s s s s n n n n n n n n n n s s s s s s s s s s n n n n n n n

77

38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83

D E E E E E E E E E E F F F F F F F F F F G G H H H H H H H H H H I I I I I I I I I I J J J

E SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E SI SI SI

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 1 1 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 1 0 1 1 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0

0 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 0 1 1 1 0 0 1 0 0 0 1 1 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 1 1 1 0 0 0 1 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 1 1 0 0 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

NI S M M M NI S M M M M NI M M S S S S NI S S M M S M M M S S S M M M NI M M S S S NI M S NI NI NI S

n n n n n n n n n n n n n n n n n n n n n s s s s s s s s s s s s n n n n n n n n n n s s s

78

84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129

J J J J J J J K K K K K K K K K K L L L L L L L L L L M M M M M M M M M M N N N N N N N N N

SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI I I I I I I I I I I SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI E E E E E E E E E

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 1 0 0 1 1 0 0 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 1 1 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 1 0 1 1 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1

NI NI NI NI M S M NI NI S NI NI NI S NI NI S M S S S S NI M S S S S M M M NI M M M S S M M S NI M NI S S M

s s s s s s s n n n n n n n n n n s s s s s s s s s s s s s s s s s s s s n n n n n n n n n

79

130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161

N O O O O O O O O O O P P P P P P P P P P Q R R R R R R R R R R

E E E E E E E E E E E I I I I I I I I I I E I I I I I I I I I I

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 0 0 1 0 0

1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0

1 0 0 1 0 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 1 1 1 0 0 1 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 0 1 0 0 0 1 1 0 1 0 1 1 0 1 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 1 1 0 0 0 1 0 0

0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1

M M M M NI S M S M M S M M M S M S S M S M M S M S M S S S M M S

n n n n n n n n n n n s s s s s s s s s s n s s s s s s s s s s

80

Anexo III

81

Tabela 8 - Dados do estudo do nvel de excreo de oocistos de Eimeria spp. em cabritos entre as trs e as treze semanas de vida em dois sistemas de produo distintos.

Idade 3 Semanas 4 Semanas 5 Semanas 6 Semanas 7 Semanas 8 Semanas 9 Semanas 3 Semanas 4 Semanas 5 Semanas 6 Semanas 7 Semanas 8 Semanas 9

Expl. Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha

E. Animal E. alijevi ninakohlyakimovae E. hirci 1 NA 1 1 1 NA 1 NA 1 NA 1 NA 2 2 2 2 NA 2 NA 2 NA 2 NA 0 0 0 NA NA NA NA 0 0 NA NA NA NA 0 0 0 NA NA NA NA NA 0 66,66 NA 0 99,99 NA NA NA NA 0 0 0

E. arloingi NA 66,66 699,93 NA NA NA NA 66,66 199,98 33,33 NA NA NA NA 82

E. christenseni NA 0 0 NA NA NA NA 0 66,66 66,66 NA NA NA NA

E. jolchijevi NA 0 0 NA NA NA NA 0 0 0 NA NA NA NA

E. E. aspheronica caprina NA 0 0 NA NA NA NA 0 0 0 NA NA NA NA NA NA NA NA NA NA NA NA 0 0 0 NA 0 0

E. caprovina NA 0 133,32 NA NA NA NA 0 0 0 NA NA NA NA

Total NA 66,66 1299,87 NA NA NA NA 66,66 266,64 99,99 NA NA NA NA

Semanas 3 Semanas 4 Semanas 5 Semanas 6 Semanas 7 Semanas 8 Semanas 9 Semanas 3 Semanas 4 Semanas 5 Semanas 6 Semanas 7 Semanas 8 Semanas 9 Semanas 3 Semanas 4 Semanas

Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha

3 3 3 3 3 3 3 4 4 4 4 4 NA 4 4 5 NA 5

0 0 0 0 66,66 0 66,66 0 0 0 0 NA

66,66 0 0 0 0 0 0 0 0 33,33 0 NA 233,31 833,25 NA NA 0

0 0 0 0 66,66 0 0 0 0 66,66 0 NA 0 0 NA 0

66,66 266,64 33,33 33,33 233,31 0 33,33 0 0 33,33 0 NA

0 0 0 0 0 166,65 199,98 0 0 33,33 66,66 NA 233,31 633,27 NA NA 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 NA 0 0 NA 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 NA 0 0 NA 0

0 66,66 0 0 0 0 0 0 0 0 0 NA 0 0 NA 0

66,66 66,66 0 0 33,33 33,33 33,33 0 0 0 0

199,98 399,96 33,33 33,33 399,96 199,98 399,96 0 0 166,65 66,66 NA

266,64 133,2

1133,22 66,66

133,32 333,3

1999,8 4099,59 NA

0 83

5 Semanas 6 Semanas 7 Semanas 8 Semanas 9 Semanas 3 Semanas 4 Semanas 5 Semanas 6 Semanas 7 Semanas 8 Semanas 9 Semanas 2 Semanas 3 Semanas 4 Semanas 5 Semanas 6

Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha

5 5 5 NA 5 5

0 66,66 NA 99,99 199,98 NA NA 0 0 99,99 33,33 33,33 NA 0 0 0 33,33

0 33,33

0 66,66 NA

0 199,98 NA 233,31 299,97 NA NA NA NA 99,99 133,32 199,98 33,33 99,99 NA NA 66,66 66,66 33,33 199,98 84 NA

33,33 66,66 NA 66,66 66,66 NA NA 33,33 499,95 333,3 199,98 466,62 NA 0 66,66 133,32 299,97

0 0 NA 0 0 NA NA 0 0 0 0 0 NA 0 0 0 0

0 0 NA 0 0 NA NA 0 0 0 0 0 NA 0 0 0 0

0 0 NA 33,33 66,66 NA NA 33,33 0 133,32 0 0 NA 0 0 33,33 0

0 0

33,33 433,29 NA

166,65 399,96

33,33 99,99 NA NA

166,65 66,66

799,92 1199,88 NA NA

6 NA 6 NA 6 6 6 6 6 7 NA 7 7 7 7

66,66 33,33 33,33 0 99,99 NA 199,98 0 0 233,31

0 0 0 0 0

0 0 66,66 0 0

199,98 666,6 866,58 266,64 699,93 NA

0 0 0 0

66,66 0 0 66,66

333,3 133,32 199,98 833,25

Semanas 7 Semanas 8 Semanas 2 Semanas 3 Semanas 4 Semanas 5 Semanas 6 Semanas 7 Semanas 8 Semanas 2 Semanas 3 Semanas 4 Semanas 5 Semanas 6 Semanas 7 Semanas 8 Semanas

Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha

7 7 8 NA 8 8 8 8 NA 8 NA 8 NA 9 NA 9 NA 9 9 NA 9 NA 9 NA 9 NA

0 0 NA 0 0 0 NA NA NA NA NA 0 NA NA NA NA

0 0 NA 0 0 0 NA NA NA NA NA 0 NA NA NA NA

0 0 NA 0 0 0 NA NA NA NA NA 0 NA NA NA NA 85

0 0 NA 0 66,66 66,66 NA NA NA NA NA 0 NA NA NA NA

0 0 NA 0 33,33 33,33 NA NA NA NA NA 0 NA NA NA NA

0 0 NA 0 0 0 NA NA NA NA NA 0 NA NA NA NA

0 0 NA 0 0 0 NA NA NA NA NA 0 NA NA NA NA

0 0 NA 0 0 0 NA NA NA NA NA 0 NA NA NA NA

0 0 NA 0 66,66 66,66

0 0

0 166,65 166,65 NA NA NA NA NA

0 NA NA NA NA

2 Semanas 3 Semanas 4 Semanas 5 Semanas 6 Semanas 7 Semanas 8 Semanas 2 Semanas 3 Semanas 4 Semanas 5 Semanas 6 Semanas 7 Semanas 8 Semanas 2 Semanas 3 Semanas 4

Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha

10 NA 10 10 10 10 10 10 11 NA 11 11 11 11 NA 11 11 12 NA 12 12 NA 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 166,65 0

NA 0 0 0 0 233,31 99,99 NA 0 0 66,66 NA 33,33 0 NA 0 NA

NA 0 0 0 0 0 0 NA 0 0 33,33 NA 0 0 NA 0 NA

NA 66,66 299,97 0 0 266,64 333,33 NA 133,32 0 99,99 NA 33,33 33,33 NA 0 NA 86

NA 0 0 33,33 0 99,99 33,33 NA 0 0 0 NA 0 0 NA 0 NA

NA 0 0 0 0 0 0 NA 0 0 0 NA 0 0 NA 0 NA

NA 0 0 0 0 0 0 NA 0 0 0 NA 0 0 NA 0 NA

NA 0 0 0 0 0 0 NA 0 0 0 NA 0 0 NA 0 NA

NA 0 0 0 0 66,66 66,66 NA 0 0 33,33 NA 0 0 NA 0 NA

NA 66,66 299,97 33,33 0 833,25 533,28 NA 133,32 0 266,64 NA 66,66 33,33 NA 0 NA

Semanas 5 Semanas 6 Semanas 7 Semanas 8 Semanas 3 Semanas 4 Semanas 5 Semanas 6 Semanas 7 Semanas 8 Semanas 9 Semanas 10 Semanas 11 Semanas 12 Semanas 3 Semanas 4 Semanas

Igrejinha Igrejinha Igrejinha Igrejinha Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel

12 12 12 12 1 NA 1 1 1 1 1 1 1 1 1 NA 2 NA 2

0 3799,62 16065,0 6 666,6 NA 0 0 0 0 0 0 0 0 NA NA 0

0 199,98 9932,34 1799,82 NA 0 0 0 0 0 0 99,99 66,66

0 0

0 399,96

0 499,95 1466,52 2099,79 NA NA 33,33 0 0 66,66 0 766,59 299,97 433,29 NA NA NA NA 0

0 0 0 0 NA 0 0 0 0 0 0 0 0 NA NA 0

0 0 0 0 NA 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 99,99 NA 0 0 0 0 0 166,65 333,3 366,63 NA NA NA NA 0

0 0 1133,22 699,93

0 4899,51 60860,5 8 6682,67 NA

0 32263,44 0 966,57 NA 0 0 0 0 0 33,33 0 166,65 NA NA NA NA 0 87 0 66,66 66,66 133,32 133,32 0 733,26 366,63 333,3

0 0 0 0 0 199,98 0 0

99,99 66,66 133,32 66,66 0 1899,81 1099,89 1366,53 NA NA

5 Semanas 6 Semanas 7 Semanas 8 Semanas 9 Semanas 10 Semanas 11 Semanas 12 Semanas 3 Semanas 4 Semanas 5 Semanas 6 Semanas 7 Semanas 8 Semanas 9 Semanas 10 Semanas 11

Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel

2 2 2 2 2 2 2 2 3 NA 3 3 3 3 3 3 3 3 NA

0 0 66,66 0 0 0 399,96 0 NA 0 0 0 33,33 0

0 0 66,66 0 0 0 0 133,32 NA 0 0 0 0 0

0 0 199,98 0 0 0 0 0 NA 0 0 0 0 0

0 0 499,95 66,66 133,32 33,33 133,32 33,33 NA 0 0 33,33 33,33 133,32

0 166,65 633,27 0 66,66 0 399,96 133,32 NA 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 NA 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 NA 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 NA 0 0 0 0 0

0 0 166,65 0 0 0 0 99,99

0 166,65 1733,16 66,66 199,98 33,33 766,59 366,63 NA

0 0 0 66,66 0

0 0 33,33 133,32 133,32

0 NA

99,99

99,99 199,98 NA NA NA 88

33,33 NA

0 NA

0 NA

66,66 NA

499,95 NA

Semanas 12 Semanas 3 Semanas 4 Semanas 5 Semanas 6 Semanas 7 Semanas 8 Semanas 9 Semanas 10 Semanas 11 Semanas 12 Semanas 3 Semanas 4 Semanas 5 Semanas 6 Semanas 7 Semanas

Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel

3 NA 4 NA 4 4 4 4 4 4 4 NA 4 4 NA 5 NA 5 5 5 5 0 0 0 166,65 0 0 0 0 0 0 0

NA NA 0 0 0 33,33 0 0 NA 66,66 NA NA 0 0 0 0

NA NA 0 0 0 0 66,66 0 NA 66,66 NA NA 0 0 0 0

NA NA 0 266,64 0 299,97 66,66 0 NA 133,32 NA NA 0 0 0 766,59 89

NA NA 0 0 166,65 166,65 133,32 0 NA 0 NA NA 0 0 0 33,33

NA NA 0 0 0 0 0 0 NA 0 NA NA 0 0 0 0

NA NA 0 0 0 0 0 0 NA 0 NA NA 0 0 33,33 0

NA NA 0 0 33,33 33,33 0 0 NA 0 NA NA 0 0 0 0

NA NA 0 0 0 66,66 0 0 NA 99,99 NA NA 0 0 0 133,32

NA NA 0 266,64 199,98 599,94 266,64 0 NA 366,63 NA NA 0 0 33,33 1099,89

8 Semanas 9 Semanas 10 Semanas 11 Semanas 12 Semanas 3 Semanas 4 Semanas 5 Semanas 6 Semanas 7 Semanas 8 Semanas 9 Semanas 10 Semanas 11 Semanas 12 Semanas 4 Semanas 5

Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel

5 5 5 5 5 6 NA 6 6 6 6 6 6 6 6 6 7 NA 7

0 0 33,33 0 0 NA 0 0 0 0 0 133,32 333,3 133,32 0 NA 0

133,32 0 0 0 0 NA 0 0 0 0 0 733,26 899,91 2133,12 133,32 NA 0

0 0 99,99 0 0

899,91 266,64 133,32 0 0 NA NA 0 0 0 0 0 1899,81 2599,74 3066,36 633,27 NA NA 0 90

0 133,32 99,99 0 33,33 NA 0 0 0 0 0 666,66 2766,39 4099,59 366,63 NA 0

0 0 0 0 0 NA 0 0 0 0 0 0 0 0 0 NA 0

0 0 0 0 0 NA 0 0 0 0 0 0 0 0 0 NA 0

0 0 0 0 33,33 NA 0 0 0 0 0 266,64 199,98 499,95 0 NA 0

66,66 0 0 0 0

1099,89 399,96 366,63 0 66,66 NA

0 0 0 0 0 0 199,98 366,63 0

0 0 0 0 0 466,62 333,3 366,63 133,32

0 0 0 66,66 0 4166,25 7332,6 10665,6 1266,54 NA

Semanas 6 Semanas 7 Semanas 8 Semanas 9 Semanas 10 Semanas 11 Semanas 12 Semanas 13 Semanas 4 Semanas 5 Semanas 6 Semanas 7 Semanas 8 Semanas 9 Semanas 10 Semanas 11 Semanas

Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel

7 7 7 7 7 7 7 7 8 NA 8 8 8 8 8 8 8

0 0 0 0 0 0 0 0 NA 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 10365,63 0 0 0 0 NA 0 0 0 0 133,32 0 133,32

0 0 0

0 0 66,66

66,66 0 0 399,96 0 0 33,33 66,66 NA NA 0 0 0 0 33,33 0 666,6

0 0 0 0 0 0 0 0 NA 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 NA 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 299,97 0 0 0 0 NA 0 0 0 0 0 0 66,66

0 0 0 1066,56 0 0 0 0 NA 0 0 0 0 66,66 0 99,99

66,66 0 0 31196,8 8 133,32 0 33,33 66,66

299,97 18731,46 0 0 0 0 NA 0 0 0 0 99,99 0 0 0 0 0 233,31 1966,47 0 166,65 91 133,32 0 0 0

0 0 0 233,31 2299,77 0 1133,22

12 Semanas 13 Semanas 4 Semanas 5 Semanas 6 Semanas 7 Semanas 8 Semanas 9 Semanas 10 Semanas 11 Semanas 12 Semanas 13 Semanas 4 Semanas 5 Semanas 6 Semanas 7 Semanas 8

Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel

8 NA 8 NA 9 NA 9 9 9 9 9 9 NA 9 9 9 266,64 266,64 1099,89 0 0 0 0 99,99

NA NA NA 0 0 0 0 366,63 NA 999,9 666,6 4299,57 NA 0 0 0 0 0 0

NA NA NA 0 0 0 0 0 NA 0

NA NA NA 33,33

NA NA NA 0 0 33,33 33,33

NA NA NA 0 0 0 0 0 NA 1633,17 12498,75 17731,56 0 0 0 NA 0 0 0 133,32 0 0 0 0

NA NA NA 0 0 0 0 0 NA 0 0 0 NA 0 0 0 0

NA NA NA 0 0 0 0 66,66 NA 0 299,97 666,6 NA 0 0 0 0

NA NA NA 0 0 0 0 166,65 NA 0 666,6 1633,17 NA 0 0 0 766,59

NA NA NA 33,33 0 33,33 33,33 3432,99 NA 4399,56 22497,7 5 51694,8 3 NA 0 0 33,33 2366,43

2833,05 NA 1433,19 NA

66,66

333,3 7665,9 2066,4 6 19898,01 NA 0 0 0 33,33 NA 0 0 33,33 1299,87 92 NA

10 NA 10 10 10 10

0 133,32

Semanas 9 Semanas 10 Semanas 11 Semanas 12 Semanas 13 Semanas 4 Semanas 5 Semanas 6 Semanas 7 Semanas 8 Semanas 9 Semanas 10 Semanas 11 Semanas 12 Semanas 13 Semanas 4 Semanas

Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel

10 10 10 NA 10 10 11 NA 11 11 11 11 11 11 11 11 11

0 0 NA

33,33 0 NA 1866,48 1833,15 NA NA 0 0 0 0 66,66 0 0 2333,1 699,93 NA

0 0

99,99 366,63 NA 8332,5 NA

0 0 NA 6599,34 2566,41 NA NA 0 66,66 99,99 66,66 66,66 66,66 1166,55 7332,6 6666 NA NA

0 0 NA 0 0 NA 0 0 0 0 0 0 0 0 0 NA

0 0 NA 0 0

0 99,99 NA

99,99 0

233,31 466,62

399,96 333,3

233,31 533,28 NA NA 0 0 0 0 33,33 0 433,29 266,64 0 NA NA

5566,11 NA

NA 17931,5 499,95 4 11298,8 466,62 7 NA 0 0 0 0 33,33 66,66 66,66 333,3 66,66 0 133,32 199,98 266,64 533,28 333,3 2199,78 17131,6 2 14098,5 9 NA

0 0 0 0 0 0 0 933,24 399,96

0 0 0 0 0 33,33 0 266,64 33,33 NA

0 66,66 99,99 199,98 333,3 166,65 333,3 3066,36 6232,71 NA 93

0 0 0 0 0 0 0 0 0

12 NA

5 Semanas 6 Semanas 7 Semanas 8 Semanas 9 Semanas 10 Semanas 11 Semanas 12 Semanas 13 Semanas

Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel Portel

12 12 12 12 12 12 12 12 12

0 0 0 0 0 33,33 99,99 0 0

0 0 0 0 133,32 133,32 133,32 166,65 0

0 0 0 0 0 0 0 0 133,32

0 0 66,66 0 33,33 399,96 433,29 866,58 1833,15

0 0 0 0 0 0 0 299,97 1266,54

0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 166,65 333,3

0 0 0 0 0 33,33 99,99 133,32 466,62

0 0 66,66 0 166,65 599,94 766,59 1633,17 4032,93

94