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Universidade Federal da Paraba - UFPB Centro de Biotecnologia CBiotec Curso: Bacharelado em Biotecnologia

UFPB

AULA

Controle da expresso gnica


Expresso gnica em Procariotos/Eucariotos
Disciplina: Princpios Celulares e Moleculares
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Itcio Padilha

Alguns conceitos...
A Clula procaritica:
Cromossomo nico, circular, dupla fita, no nucleide; - DNA extra-cromossomal plasmdeos - Uso de quase todo genoma na codificao e regulao (ausncia de seqncias reduntantes);

Organizao genmica DNA superenovelado


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Alguns conceitos...
Mecanismo de transcrio em procariotos:
Fator sigma; RNA polimerase

Expresso gnica em Procariotos


Os genes so expressos em todo momento? Independente do ambiente ?
Os organismos so sensveis pequenas variaes do meio ambiente, tais como a disponibilidade de nutrientes, sinais hormonais, etc. De que maneira algumas protenas podem variar sua quantidade na clula em resposta ao meio no qual o organismo se encontra?

Expresso gnica em Procariotos


Porque regular?
Qual o custo (em termos de energia e recursos) para fazer uma protena?

Gliclise e Ciclo do cido ctrico de 1 molcula de glicose = 30 ATP!

Para uma protena de tamanho mdio (300 aminocidos):


)

1350 molculas de ATP; 1650 tomos de carbono; 540 tomos de nitrognio;

Escherichia coli tem cerca de 4000 genes que codificam aproximadamente 2000 protenas. Qual o custo se todas estas protenas fossem produzidas todo o tempo!
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Expresso gnica em Procariotos


Os genes so expressos de forma diferente:

Genes para os produtos que so requeridos durante todo o tempo so expressos em nveis constantes.

So os chamados genes da economia domstica (housekeeping).


)

A expresso invarivel destes genes denominada de expresso gnica constitutiva.

Genes que so expressos em resposta a sinais moleculares enquadram-se na expresso gnica regulada.

Estes genes podem ser induzidos ou reprimidos de acordo com as necessidades celulares

Expresso regulada: Induzvel Reprimida Ex: Genes nicos

Expresso gnica em Procariotos


Etapas de Transcrio em procariotos: Incio, Alongamento e Trmino. Iniciao:

Expresso gnica em Procariotos


Alongamento (1 de 3):

Expresso gnica em Procariotos


Alongamento (2 de 3):

Expresso gnica em Procariotos


Alongamento (3 de 3):

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Trmino dependente de protena Rho (helicase):
Protena Rho reconhece stio rut no RNA e promove o desligamento da RNA Pol.

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Expresso gnica em Procariotos


Trmino independente de protena Rho:

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OPERON uma organizao de vrios genes relacionados.
OPERON = GENES ESTRUTURAIS + OPERADOR Protena Repressora: Bloqueia a transcrio coordenada dos genes em um operon. Protena Ativadora: X Ativa a transcrio coordenada dos genes de operon. Ativa

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Operon Lac: Metabolismo da lactose em E. coli

No metabolismo da lactose por E. coli so necessrias duas enzimas que fazem parte de um operon chamado lac. A primeira enzima capaz de clivar a lactose em glicose e galactose que assim serviro como fonte de carbono para a clula.

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Expresso gnica em Procariotos


Operon Lac

I: repressor lac, gene constitutivo (prximo ao operon lac) P1: promotor do gene I Z, Y, A: b-galactosidase, galactosdeo permease, tiogalactosdeo transacetilase (elimina da clula tiogalactosdeos txicos que tambm entram pela permease) P: promotor dos genes lac; O: Operador.
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Regulao do Operon Lac
Uma protena ativadora e outra repressora controlam os genes lac Protena CAP (liga-se ao DNA como um dmero) nveis de Glicose Protena Repressora (liga-se ao DNA como um tetrmero) nveis de Lactose

No operon lac, CAP se liga prximo a regio que se liga a RNA polimerase e interage com a RNA polimerase. 16

Expresso gnica em Procariotos


Mas como se d essa modulao da transcrio via cAMP?
Quando glicose est ausente (cAMP), CAPcAMP ligase ao promotor e estimula a transcrio do RNA em cerca de 50 vezes. Sendo, portanto, um regulador positivo responsivo aos nveis de glicose, enquanto o repressor Lac um regulador negativo responsivo lactose.

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Revisando a regulao do Operon Lac

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Expresso gnica em Procariotos


Revisando a regulao do Operon Lac

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Expresso gnica em Eucariotos


Estrutura da Cromatina e regulao da expresso
Os cromossomos eucariticos so maiores e tm um grau mais complexo de organizao estrutural do que os procariticos. O acesso aos promotores eucariticos restrito pela estrutura da cromatina, e a ativao da transcrio associada com alteraes mltiplas na estrutura da cromatina na regio transcrita.
X

As clulas eucariticas possuem protenas reguladoras multimricas maiores e mais complexas do que as bactrias. A transcrio no ncleo eucaritico est separada tanto no espao quanto no tempo da traduo no citoplasma.

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Estrutura da Cromatina e regulao da expresso
Como as histonas se combinam com o DNA para formar a fibra de CROMATINA?

- O DNA deve se desenrolar das protenas histonas para que ocorra a transcrio atravs: -Acetilao das histonas: A adio de grupos acetil (CH3CO) s protenas histonas catalisada pela enzima Acetiltransferase (HAT). Os grupos acetil desestabilizam a estrutura do nucleossomo, por neutralizar as cargas positivas das histonas, permitindo que o DNA se separe destas;

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Estrutura geral do gene eucaritico

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Fatores necessrios para a Transcrio:
Requer 3 enzimas: RNA polimerase I rRNA RNA polimerase II mRNA RNA polimerase III tRNA e outros pequenos RNAs Fatores de transcrio: Protenas necessrias para o incio da transcrio. Os fatores gerais de transcrio so responsveis: Pelo posicionamento correto da RNA polimerase no promotor. Ajudam na separao das fitas de DNA para permitir o incio da transcrio. Liberam a RNA polimerase do promotor quando a transcrio se inicia.

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Expresso gnica em Eucariotos


O modelo para ao a distncia inclui algum tipo de dobra do DNA. Neste modelo, uma ala de DNA coloca protenas ativadoras ligadas a elementos acentuadores distantes em proximidade a complexos proticos associados a seqncias proximas a promotores.

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Expresso gnica em Eucariotos


Aps Transcrio:
O transcrito primrio de mRNA dos eucariotos amplamente processado. O RNA nascente sofre uma srie de alteraes: Aquisio de revestimento (cap) na sua extremidade 5; Poliadenilao da extremidade 3 Remoo exata de ntrons (splicing); Alguns mRNAs maduros chegam a ser at dez vezes menores em tamanho que seus precursores.

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Expresso gnica em Eucariotos


Capeamento do 5 Poliadenilao do 3

Protegem as extremidades 5 e 3 / estabilidade; Ajudam no transporte do mRNA para o citoplasma; Importante na eficincia durante a traduo.

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Expresso gnica em Eucariotos


xons e ntrons

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Expresso gnica em Eucariotos


Mecanismo de Splicing

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Expresso gnica em Eucariotos


Splicing Alternativo

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