Pharm. Md. Trad. Afr. 2004, Vol.13, pp.

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. Recherche de l'Activit Antibactrienne de Quatre Plantes Mdicinales Camerounaises.

~:

Biyiti L.F., Meko'o DJ.L, Tamzc

v., Amvam Zollo P.H..

Centre de Recherche en Plantes Mdicinales et Mdecine Traditionnelle (CRPMT), Yaound, Cameroun Dpartement de Biochimie, Facult des Sciences. Universit de Yaound 1

Rsum: L'activit antibactrienne des extraits hydrothanoliques de Cissus petiolata, Harrissonia

abyssinica; Maesopsis eminii et Pyrenacantha staudtii, quatre plantes mdicinales utilises

traditionnelJement pour traiter les maladies infectieuses, a t tudie in vitro. Escherichla coli,

Pseudomonas aeruginosa et Staphylococcus aureus ont t utiliss pour cette tude. Par la mthode
de diffusion en milieu solide, toutes les quatre plantes se sont rvles actives sur une ou plusieurs bactries. L'extrait de P. staudtii a t le plus actif en induisant des diamtres d'inhibition de croissance de 11, 14,6 et lS mm sur E. coli, S. aureus et P. aeruginosa respectivement. Par la mthode de dilution en milieu liquide, P. staudtii et H. abyssinica ont montr des effets bactricides aussi hien sur P. aeruginosa; 4,68 et 9,37 mg/ml, que sur S. aureus 9,37 et 18,75 mg/ml respectivement. Po staudtii a prsent la plus grande activit. Cette importante activit a t manifeste sur P. aeruglnosa avec une CMI de 2,34 mg/ml. L'analyse phytochimique des quatre plantes a montr que 2/4 contenaient des alcalodes, 3/4 des tanins, 1/4 des glucosides d'anthocyanes, 2/4 des Ilavonodes, 3/4 des substances rductrices, 4/4 des strols et/ou des tri terpnes. Les anthraquinones n'ont t dtects dans aucun de ces chantillons. Ces rsultats confirment certaines utilisations ethnopharmacologiques des quatre plantes mdicinales. Mots-cl: Plantes mdicinales, Cissus petiolata, Harrissonia abyssinica, Maesopsis eminii, Pyrenacantha staudtii, activit antibactrienne, tanins, alcalodes, flavonodes, huiles essentielles.

Il

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INTRODUCTION
Au Cameroun comme dans les autres pays en voie de dveloppement, les maladies infectieuses et parasitaires constituent un problme de sant publique cause de leur frquence et leur gravit (Bourgeois,1999). La situation est davantage plus proccupante cause de l'apparition des souches de microorganismes antibiorsistants et l'mergence des infections non communes (Vanden et

Vlietinck,1991) qui compromettent les traitements l'aide des mdicaments existants. Face ces nombreux obstacles que prsente l'utilisation des antibactriens disponibles, il est indispensable de rechercher de nouvelles substances antibactriennes efficaces et large spectre d'action. Une des stratgies pour cette recherche consiste explorer les plantes utilises en mdecine traditionnelle. En effet, l'OMS (2002) estime que, pour se soigner, 80 % de la population africaine recourt toujours la mdecine traditionnelle pour laquelle la majeure partie des thrapies implique l'exploitation des principes actifs des plantes mdicinales. Ces espces vgtales d'aussi grande importance pour la sant des populations mritent d'tre tudies scientifiquement pour leur meilleure utilisation. Ce d'autant plus que la flore du Cameroun est riche et varie, mais elle demeure trs peu exploite scientifiquement. Le prsent travail porte sur quatre plantes souvent utilises efficacement dans le traitement traditionnel de diverses maladies infectieuses au Cameroun et ailleurs (tableau 1). 11 s'agit d'tudier les effets des extraits hydrothanoliques de ces plantes sur la croissance in vitro de certains des germes impliqus dans les pathologies pour lesquelles nos plantes sont indiques, Notre objectif est d'identifier toujours davantage des substances possdant des proprits antibactriennes ainsi que de rationaliser l'utilisation des plantes mdicinales.

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Tableau 1 : Plantes mdicinales tudies Familleet Nom botanique

Vitaces
Cissus petiolata
Organes
utiliss

Usages traditionnels
Au lieu de rcoIte(kombo)

Dans la littrature Gonococcie. troubles intestinaux. fracture des os (Bouquet et Debray, 1974) Diarrhes, troubles intestinaux. maladies vnriennes, Hmorrodes, fbrifuge, antidote diabte, plaies profondes (Watt et Breyer, 1962 ; AnaniJ et al.,2000 ; Abamoyi, 1996)

feuilles

Gonococcie, fracture des os

Simaroubaces
Harrissonia abyssinica

Feuilles

Diarrhes

Envotement(en Rhamnaces Ecorces detige

Gonococcie,

purgatif,

diurtique

Maesopsis eminii
1cacinaces
Pyrenacantha staudtii

association au jus de canne),gonococc.

(Raponda et Silans, 1961) Alimentation (Dessoutier, 1999) Menace d'avortement, diarrhes,

Feuilles

Diarrhes

coliques intestinales (Aguwa et Okunji, 1986;Agbakwuru, 2002)

MATERIEL ET METHODES 1.1 - Matriel vgtal Les plantes (tableau 1) ont t rcoltes dans la localit de Kombo, village situ dans la province du Centre, Dpartement du Nyong et Mfoumou, au mois de juillet 2002. L'identification botanique a t ralise l'Herbier National de Yaound. Les chantillons achemins au Laboratoire de Microbiologie de l'Universit de Yaound I ont t schs temprature ambiante 1'abri du soleil, puis finement broys et extraits dans un mlange eau - thanol VN.

1.2 - Les microorganismes Les germes tests sont souvent impliqus dans les pathologies pour lesquelles les quatre plantes sont indiques. Il s'agit d'une souche de Staphy/ococcus aureus obtenue au Laboratoire d'Analyses Mdicales T. Bella (Yaound-Cameroun), une souche de Escherichia coli et une souche de

Pseudomonas aeruginosa obtenues au Centre Pasteur du Cameroun (Yaound). Ces germes ont t
conservs par repiquage sur milieux gloss.

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1.3 - Obtention des extraits vgtaux Les extraits hydrothanoliques ont t obtenus par macration (48 heures) de 100 g de matriel vgtal pulvris dans 800 ml de mlange thanol-eau VN. Les filtrats obtenus sur papier filtre sont alors vapors l'aide d'un rotavapor. Les solutions rsultantes sont sches l'tuve (50C). Les rsidus obtenus sont conservs 4C avant la ralisation des tests antibactriens. 1.4 - Essais antibactriens Test de sensibilit: L'inhibition de la croissance bactrienne in vitro a t tudie par la mthode de diffusion en milieu solide (Ananil et al.,2000). Avec un emporte - pice des puits sont creuss dans la glose de Mueller-Hinton coule dans des botes de Ptri et ensemence par un germe - test. Les diamtres d'inhibition sont ensuite mesurs autour des puits aprs une pr-incubation de 45 mn temprature ambiante et une incubation l'tuve
37 C pendant 18 heures.

Mesure de l'activit:

La macromthode de dilution en milieu liquide (Delarras,1998)

est

utilise pour dterminer les paramtres de l'inhibition de la croissance bactrienne (CMT, CMB), des extraits actifs. Concentration minimale inhibitrice (CMI) : Une srie de 10 dilutions de chaque extrait a t

ralise dans de l'eau peptone contenant du rouge de phnol 0.01 % et du glucose 1%. Chaque tube de la srie est ensemenc par un inoculurn standardis de 8.10 5 cellules. Aprs une incubation de J8 heures 37C, la CMl de l'extrait test est dtermine. Elle reprsente la concentration du 1er tube de la srie dans lequel le rouge de phnol n'a pas vir au jaune (cas des bactries fermentant le glucose). Pour les bactries ne fermentant pas le glucose, la CMl correspond la concentration du 1er tube dans lequel

il y a absence du trouble d la croissance, comparativement au tmoin.

Concentration minimale bactricide(CMB) : La glose nutritive coule dans des botes de ptri est ensemence en stries par J00 III des contenus des tubes ayant une concentration 2: CMJ dans la srie de dilution prcdente. La CMB est dtermine aprs une incubation de 24 heures 37C. C'est la plus petite concentration qui inhibe totalement la croissance.

1.5 - Screening phytochimique Le matriel vgtal pulvris est puis successivement par macration dans des solvants de polarit croissante (chloroforme, mthanol, eau). Les tests phytochimiques pour les tanins, les alcalodes, les anthraquinones, les flavonodes, les saponosides les huiles essentielles ont t raliss d'aprs la mthode dcrite par Abayomi, (1996). Les rsultats sont nots - (ngatif) ou + (positif).

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II - RESULTATS ET DISCUSSION Tableau 2 : Diamtre d'inhibition de la croissance des gennes tests Microorganisme
E. coli

Diamtre d'inhibition(en mm)

C. petiolata li
12 <7 H. abyssinica 9,6 13 11,6

M eminii
<7 <7 15

P. staudtii
Il
15 14,6

Gentamicine
23,6 25,6 27

P. aeruginosa
S. aureus

Les rsultats des tests prliminaires des activits antibactriennes sont prsents dans le tableau 2 . Il Y apparat que chacune des quatre plantes a une activit assez bien dfinie sur la croissance d'au moins une des bactries testes. Les diamtres d'inhibition varient de 9,6 15 mm. Pour cette mthode de diffusion, un extrait est considr comme actif lorsqu'il induit une zone d'inhibition suprieure ou gale 10 mm. Ainsi, l'extrait de Pyrenacantha staudtii s'est rvl le plus actif en induisant les

diamtres de Il; 14,6 et 15 mm sur Escherichia coli, Staphylococcus aureus et Pseudomonas

aeruginosa respectivement. Harrissonia abyssinica inhibe la croissance de S. aureus et de P. aeruginosa

avec des diamtres de 11,6 et 13 mm. Cette action de H. abyssinica confirme les rsultats de Ananil et al (2000) sur les mmes souches. E. coli et P. aeruginosa sont rsistants vis vis de l'extrait de
Maesopsis eminii qui par contre a prsent une bonne action sur S. aureus (15 mm).

Dans l'ensemble, P. aeruginosa et S. aureus se sont rvls plus sensibles aux extraits tudis. Cependant, les diamtres d'inhibition induits par tous ces extraits restent infrieurs ceux de l'antibiotique de rfrence ,la gentamicine, pour l'ensemble des souches. Traditionnellement, les quatre plantes sont utilises pour soigner la diarrhe, les infections

urognitales, les syndromes dysentriques et pour dsinfecter les plaies (tableau 1). Par consquent, l'inhibition de la croissance de E. coli, P. aeruginosa et S. aureus , bactries responsables de ces pathologies (Fauchre et Avril,2002) ethnopharmacologiques de ces plantes. ,pennet de justifier au moins partiellement les usages

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Tableau 3 : Composition chimique des chantiUons

Alcalodes

'"

Tanins
a']
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<LI

Echantillons

<: <LI

a']
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Cissuspetiolata
Harrissonia abyssinica

QJ

Bases

Sels

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++

++

++

++

++

Maesopsiseminii

++

++

+-+

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.
++

++

Pyrenacantha
staudtii

++

++

++

Les activits observes sont par ailleurs expliques par les rsultats de l'analyse chimique des plantes (tableau 3) qui rvle la prsence des composs tels que les alcalodes, les tanins, les huiles essentielles, les flavonodes dont les proprits antimicrobiennes ont dj t dmontres (Cowan

,1999; Kolodziej et al., 1999 ; Amvam et al. 1998). La plupart de ces composs ont t mis en vidence dans l'extrait de P, staudtii, ce qui permet d'expliquer son importante activit aussi bien sur les bactries Gram( -) que sur les Gram (+), La dtermination des paramtres d'inhibition (CM! et CMB) nous a permis non seulement de confirmer, quantifier et comparer les activits, mais aussi de caractriser la nature de l'effet rvl par
W1 extrait

sur un microorganisme donn.

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Tableau 4: Diamtre d'inhibition de la croissance (Dl), concentration minimale inhibitrice (CMI),

concentrationminimale bactricide (CMB), rapport CMB/CMI des extraits actifs.
Extraits DIC (mm) CMI (mg/ml) CMB(mglml)
CMB/ microorgaoismes

CMI
9,37 9,37 2 (ug/ml) 9,37 4,68 4,68 0,25 ug/rnl 18,75 4,68 2,34 0,5 ug/rnl 75 18,75
2 (ug/ml)

Cissus petiolata Pyrenacantha staudtii Gentamicine

Harrissonia abyssinica Maesopsis eminii

Il
Il

8 2

E. coli

23,6 11,6 15 14,6 27 12 13 15 25,6

1
2 8 2 2 4 2 2 2
S. aureus

18,75 37,5 9,37 0,5 ug/m! 75 9,37 4,68

Pyrenacantha staudtii Gentamicine

Cissuspetiolata Harrissonia abyssinica

P. aeruginosa

Pyrenacantha staudtii Gentamicine

1 ug/ml

Le tableau 4 compare les rsultats obtenus par la mthode de diffusion en milieu solide d'une part et la mthode de dilution en milieu liquide d'autre part. Il relve que: Les valeurs de CMl concordent d'une manire gnrale avec celles des diamtres d'inhibition; les extraits ayant induit une importante zone d'inhibition prsentent les plus petites CMI sur les souches correspondantes. C'est le cas de P. staudtii sur P. aeruginosa et S. aureus , ou M. eminii sur S. aureus. P. staudtii prsente la plus petite CMl (2,34 mg/ml) sur P. aeruginosa . Dans le cas de Cpetiolata, et Hiabyssinica par contre, leurs activits sur Piaeruginosa par la mthode de diffusion sont identiques (12 et 13mm respectivement), alors que leurs CM! respectives (18,75 et 4,68 mg/ml) sont compltement diffrentes. Il apparat donc que l'extrait de H abyssinica diffuse mal dans la glose. Il est par consquent indispensable de complter les tests en milieu solide par ceux effectus en milieu liquide. Nous avons compar les CMI et CMB d'un extrait sur un microorganisme donn. Selon la mthode de Fauchere et Avril (2002), pour laquelle une substance est bactricide lorsque le rapport CMB/CMI est
~

2, et bactriostatique lorsque ce rapport est> 2.

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II en ressort que:
P. standtii exerce un effet bactricide sur Eicoli, Piaeruginosa ct S.aureus 9,37, 4,68 et

9,37 mg/ml respectivement. Agbakwuru (2002) a observ une faible action bactriostatique de l'extrait mthanolique de cette dernire plante sur E.co/i et s.aureu.l'. Cette divergence entre les rsultats des deux tudes est srement due la nature des solvants d'extraction.
H abyssinica est bactricide 9,37 mg/ml sur P aeruginosa et 18,75 mg/ml sur S. aureus.

Cissus petiolata et Maesopsis eminii par contre rvlent des effets bactriostatiques
(CMB/CMl>2) sur les mmes souches.

CONCLUSION

Ce travail prliminaire a permis de mettre en vidence les proprits antibactriennes des extraits des organes, des quatre plantes tudies. Les rsultats obtenus rvlent la prsence des principes actifs antibactriens dans chacune des plantes. Certains extraits prsentent des effets bactricides. Les prsents rsultats justifient certains

usages ethnopharmacologiques (diarrhes, maladies vnriennes, dsinfection des plaies). Ils dmontrent que ces plantes peuvent tre utilises pour soigner les maladies infectieuses. Il serait par consquent intressant d'entreprendre des tudes de toxicit des extraits purifis de ces plantes et d'envisager la mise au point des mdicaments traditionnels amliors (MTA) court

terme.
A cet effet, les MTA prpars base de Pistaudii et Hiabyssinica, plantes qui prsentent les CMT les plus faibles ainsi qu'une activit de nature bactricide pourraient tre les plus efficaces.

REMERCIEMENTS

Nous exprimons notre profonde gratitude l'Herbier National (Yaound) pour l'identification des plantes; au Laboratoire d'Analyses Mdicales T.BELLA (Yaound), au Centre Pasteur du Cameroun (Yaound) pour la fourniture des souches.

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