Trabalho Final de Mestrado em Engenharia Ambiental Modalidade: Dissertao

AVALIAO DO POTENCIAL DE ESPCIES VEGETAIS NA FITORREMEDIAO DE SOLOS CONTAMINADOS POR PETRLEO

Giselle Smocking Rosa

Orientadora: Marcia Marques Gomes Co-orientador: Srgio Machado Corra

Centro de Tecnologia e Cincias Faculdade de Engenharia Departamento de Engenharia Sanitria e do Meio Ambiente Junho de 2006

AVALIAO DO POTENCIAL DE ESPCIES VEGETAIS NA FITORREMEDIAO DE SOLOS CONTAMINADOS POR PETRLEO

Giselle Smocking Rosa

Trabalho Final submetido ao Programa de Psgraduao em Engenharia Ambiental da Universidade do Estado do Rio de Janeiro UERJ, como parte dos requisitos necessrios obteno do ttulo de Mestre em Engenharia Ambiental.

Aprovada por: __________________________________________________ Profa. Marcia Marques Gomes, PhD PEAMB/FEN/UERJ __________________________________________________ Prof. Srgio Machado Corra, DSc Faculdade de Tecnologia-UERJ __________________________________________________ Prof. Fabiano Balieiro, DSc Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro-UFRRJ __________________________________________________ Profa. Mirian Arajo Carlos Crapez, PhD Universidade Federal Fluminense-UFF

Universidade do Estado do Rio de Janeiro Junho de 2006 i

ROSA SMOCKING, GISELLE Avaliao do Potencial de Espcies Vegetais na Fitorremediao de Solos Contaminados por Petrleo [Rio de Janeiro] 2006. xiii, 144 p. 29,7 cm (FEN/UERJ, Mestrado, Programa de Ps-graduao em Engenharia Ambiental - rea de Concentrao: Saneamento Ambiental - Controle da Poluio Urbana e Industrial, 2002.) Dissertao - Universidade do Estado do Rio de Janeiro - UERJ 1. Fitorremediao de reas contaminadas 2. Hidrocarbonetos de Petrleo 3. Fitotoxicidade I. FEN/UERJ II. Ttulo (srie)

ii

Resumo do Trabalho Final apresentado ao PEAMB/UERJ como parte dos requisitos necessrios para a obteno do grau de Mestre em Engenharia Ambiental

Avaliao do Potencial de Espcies Vegetais na Fitorremediao de Solos Contaminados por Petrleo

Giselle Smocking Rosa
Junho de 2006
Orientadora: Mrcia Marques Gomes Co-orientador: Srgio Machado Corra rea de Concentrao: Saneamento Ambiental - Controle da Poluio Urbana e Industrial A fitorremediao uma tecnologia que utiliza espcies vegetais para extrair, conter, imobilizar ou degradar contaminantes do solo e da gua. Vrios fatores podem afetar o desempenho da fitorremediao, incluindo propriedades do solo, microorganismos da rizosfera, metabolismo da planta e caractersticas fsico-qumicas do contaminante. No entanto, o conhecimento disponvel sobre o potencial do uso espcies vegetais restringe-se quase que exclusivamente a regies de clima temperado, sendo necessrio o estudo desta tecnologia em regies tropicais. O presente trabalho avaliou o desempenho em termos de germinao e de produo de biomassa radicular e area de sete espcies vegetais (Ricinus communis, Helianthus annus, Glicine max, Acacia holosericea, Brachiaria brizantha, Tibouchina granulosa, Leucaeana leucocephala) pertencentes a diferentes grupos (nativas, exticas, oleaginosas com potencial de produo de biodiesel, gramneas e florestais) na presena de dois tipos de leo cru de origens, idades e composies distintas, em cinco concentraes (0,05%; 0,5%; 2%; 4%; 6% p/p) em trs condies experimentais (germinador, sala climatizada e casa de vegetao). Observou-se que dependendo da espcie, condies experimentais e da concentrao do leo, o mesmo pode inibir, adiar ou favorecer a germinao, assim como a produo de biomassa. leo pesado, recm-extrado da bacia de Campos-CP (14,94oAPI) apresentou aparentemente efeitos txicos mais acentuados quando comparado ao leo leve e envelhecido da bacia de Alagoas-AL (56,43
o

API). Em condies experimentais similares para seis espcies (seis concentraes, leo AL, sala

climatizada), A. holosericea no foi significativamente afetada pela presena do leo em nenhuma varivel ou concentrao. As demais espcies apresentaram efeito da toxicidade sobre pelo menos uma das variveis estudadas. Os resultados reforam a hiptese de que no h somente um tipo de interao leo-planta, nem uma espcie ideal para fitorremediao. A seleo da espcie deve ser baseada no comportamento desta nas condies especficas da rea a ser remediada. Devido ao baixo custo e rapidez de execuo (menos de um ms), testes de germinao e produo inicial de biomassa so sugeridos como screening para escolha das espcies com potencial de remediao de uma rea. Palavras-Chave: fitorremediao, solo contaminado, petrleo, toxicidade, crescimento vegetal

iii

Abstract of Final Work presented to PEAMB/UERJ as a partial fulfillment of the requirements for the degree of Master of Environmental Engineering

Assessment of Plant Species Potential for Phytoremediation of OilContaminated Soils

Giselle Smocking Rosa
Junho de 2006
Advisor: Dr. Marcia Marques Gomes Co-advisor: Dr. Srgio Machado Corra Area: Environmental Sanitation - Urban and Industrial Pollution Control Phytoremediation is a technology that uses plants to extract, contain, immobilize or to degrade contaminants found in soil and water. Several factors can affect the performance of the phytoremediation, including the soils properties, physical and chemical characteristics of the contaminant, microorganisms in the rhizosphere, and plant metabolism. However, available information on the potential of plants is almost exclusively restricted to temperate climate regions; therefore, there is a need for investigations in tropical regions. The present work assessed the performance in terms of germination and root/aerial biomass production of seven species (Ricinus communis, Helianthus annus, Glicine max, Acacia holosericea, Brachiaria brizantha, Tibouchina granulosa, Leucaeana leucocephala) that belong to different groups (native and exotic, biodiesel potential producers, grass and forest species) in the presence of two types of oil from different sources, ages and composition, in five concentrations (0.05%; 0.5%; 2%; 4%; 6% w/w) under three experimental conditions (growth chamber, in vitro cell culture room and greenhouse). It was observed that depending on the species, experimental conditions, oil characteristics and concentration, the oil can inhibit, postpone or favor the germination, as well as the root and/or aerial biomass growth. Heavy crude oil, recently extracted from Campos basin (CP) with 14.94oAPI apparently had stronger toxic effect at greenhouse, when compared to lighter and aged oil from Alagoas basin (AL) with 56.43 oAPI in in vitro cell culture room. Under similar experimental conditions (five concentrations of AL oil and in vitro cell culture room), Acacia holosericea was not significantly affected in any of the variables studied. All other species under the same conditions suffered at least some slight toxic effect depending on oil concentration. The results strengthen the hypothesis that there is not only one type of interaction oil-plant, neither the best specie for phytoremediation in field-scale. The selection of the specie must be based on its behavior under the specific conditions found in the area to be remediate. Due to low costs and short time required (less than one month), germination and initial biomass growth tests are suggested as a preliminary screening for choosing the species with potential to remediate a contaminated site. Keywords: phytoremediation, contaminated soil, petroleum, phytotoxicity, plant growth

iv

Para o Ronnes Marcelo com muito carinho

AGRADECIMENTOS A Deus por mais esta conquista. Aos meus pais Jos Csar e Sandra e irmos Daniela e Hugo pelo amor, apoio e incentivo constantes. A minha famlia pelo amor e incentivo. A Profa. Marcia Marques Gomes pela orientao, apoio e amizade. A Christiane Rosas Chafim pelo carinho, amizade e colaborao. A Dra. Maria Luiza Arajo e toda a equipe da Empresa de Pesquisa Agropecuria do Estado do Rio de Janeiro Pesagro-Rio, pelo apoio, incentivo e acesso s instalaes da Estao Experimental de Seropdica. Ao MSc. Marcelo Castilho da Pesagro-Rio pelo apoio na identificao dos fungos. Ao Prof. Srgio Machado Corra pela co-orientao e apoio nas anlises qumicas. Ao Dr. Fabiano de Carvalho Balieiro pelas sugestes nas discusses sobre espcies a serem testadas. A Profa. Beth Ritter e toda a equipe do Laboratrio de Engenharia Sanitria da Faculdade de Engenharia da FEN/ UERJ pelo apoio e acesso s instalaes. A Profa. Ftima Pina Rodrigues pela colaborao e disponibilidade do Laboratrio de Sementes do Instituto de Floresta/ UFRRJ. Aos membros da banca pela valiosa contribuio nos aprimoramentos deste trabalho. Peugeot de Resende, RJ e ao Laboratrio de Qumica do Instituto de Qumica/ UERJ por disponibilizar instalaes e reagentes para as anlises cromatogrficas. Ao Bil. Bruno Cardoso do Laboratrio de Morfologia Vegetal do Museu Nacional pelo apoio nos cortes histolgicos. Aos amigos integrantes atuais ou antigos do Grupo de Pesquisa BioProcess UERJ/ CNPq: Paulo Csar Silva da Motta e Leonardo de Arajo pelo carinho, encorajamento e colaborao, Fbio Kaczala, Eduardo Togoro, Gobby Miranda, Jonatas Silva, Eduardo Sodr, Raphael Favilla, Thais Brito e Anderson pela amizade e pelos desafios compartilhados. As amigas Vilma Xavier e Raphaela Rangel pelo companherismo, carinho e incentivo. A todos que direta ou indiretamente, participaram deste trabalho meu muito obrigada.

vi

SUMRIO
LISTA DE FIGURAS ........................................................................................................... ix LISTA DE TABELAS ......................................................................................................... xii ABREVIAES ................................................................................................................. xiii 1. INTRODUO.................................................................................................................. 1 1.1 Contextualizao e Relevncia do tema ........................................................................... 1 2. OBJETIVOS....................................................................................................................... 4 2.1 Objetivo geral ................................................................................................................... 4 2.2 Objetivos especficos........................................................................................................ 4 3. ABORDAGEM METODOLGICA ................................................................................. 5 4. PETRLEO........................................................................................................................ 6 4.1 Caractersticas fsico-qumicas do petrleo...................................................................... 7 4.2 Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos (HPAs) ......................................................... 12 5. SOLO................................................................................................................................ 14 6. FATORES RELEVANTES DEGRADAO DOS HIDROCARBONETOS DE PETRLEO NO SOLO ....................................................................................................... 16 6.1 Fatores ambientais .......................................................................................................... 16 6.2 Manejo do solo ............................................................................................................... 17 6.3 Transporte e interao dos hidrocarbonetos de petrleo com o solo.............................. 18 6.4 Biodegradao de compostos orgnicos no solo ............................................................ 21 6.5 Microrganismos e biodegradao dos HPAs.................................................................. 22 6.6 Razes e Micorrizas ........................................................................................................ 25 7. FITORREMEDIAO .................................................................................................... 27 8. DESEMPENHO DE ESPCIES VEGETAIS ................................................................. 33 8.1 Germinao..................................................................................................................... 34 8.2 Efeito txico do petrleo sobre as plantas ...................................................................... 36 9. MATERIAIS E MTODOS............................................................................................. 38 9.1 Reviso bibliogrfica e seleo das espcies.................................................................. 38 9.2 Condies experimentais utilizadas ............................................................................... 39 9.3 Caracterizao dos dois tipos de leo cru utilizados ...................................................... 40 9.4 Testes em germinador..................................................................................................... 42 9.5 Testes na casa de vegetao............................................................................................ 42 9.6 Experimento em sala climatizada ................................................................................... 43 9.7 Anlise de germinao precoce, tardia e total ................................................................ 44 9.8 Anlises estatsticas ........................................................................................................ 45 10.1 Caracterizao dos leos crus utilizados ...................................................................... 47 10.2 Padro de germinao................................................................................................... 49 10.3 Experimento realizado em germinador (Ge) ................................................................ 50 10.3.1. Brachiaria brizantha ................................................................................................ 50 10.3.1.1 Taxa de germinao ............................................................................................... 50 10.3.1.2 Produo de biomassa ........................................................................................... 51 10.3.2. Helianthus annus ...................................................................................................... 52 10.3.2.1 Taxa de germinao ............................................................................................... 52 10.3.2.2 Produo de biomassa ........................................................................................... 52 10.4 Experimentos realizados em casa de vegetao (CV) .................................................. 54 10.4.1 Leucaeana leucocephala ........................................................................................... 54 10.4.1.1 Taxa de germinao ............................................................................................... 54 10.4.1.2 Produo de biomassa ........................................................................................... 55 10.4.2 Ricinus comunnis....................................................................................................... 56 10.4.2.1 Taxa de germinao ............................................................................................... 56 10.4.2.2 Produo de biomassa ........................................................................................... 57 vii

10.5 Experimentos realizados em sala climatizada (SC)...................................................... 58 10.5.1 Acacia holosericea .................................................................................................... 58 10.5.1.1 Germinao ............................................................................................................ 58 10.5.1.2 Produo de biomassa ........................................................................................... 59 10.5.2 Brachiaria brizantha ................................................................................................. 60 10.5.2.1 Taxa de germinao ............................................................................................... 60 10.5.2.2 Produo de biomassa ........................................................................................... 60 10.5.3 Helianthus annus ....................................................................................................... 62 10.5.3.1 Taxa de germinao ............................................................................................... 62 10.5.3.2 Produo de biomassa ........................................................................................... 62 10.5.3.3 Observao microscpica de cortes transversais .................................................. 64 10.5.4 Ricinus comunnis....................................................................................................... 65 10.5.4.1 Taxa de germinao ............................................................................................... 65 10.5.4.2 Produo de biomassa ........................................................................................... 65 10.5.5 Glycine max ............................................................................................................... 67 10.5.5.1 Taxa de germinao ............................................................................................... 67 10.5.5.2 Produo de biomassa ........................................................................................... 67 10.5.6 Tibouchina granulosa................................................................................................ 69 10.5.6.1 Taxa de germinao ............................................................................................... 69 10.5.6.2 Produo de biomassa ........................................................................................... 69 10.6 Incidncia de sementes com fungos em sala climatizada............................................. 70 10.7 Comparao de desempenho: Diferentes espcies, mesma condio experimental .... 71 10.7.1 Espcies testadas em germinador (Brachiaria brizantha versus Helianthus annus) 72 10.7.2 Espcies testadas em casa de vegetao (R. comunnis versus L. leucocephala )...... 73 10.7.3 Espcies testadas em sala climatizada (seis espcies) ............................................... 75 10.8 Comparao de desempenho: mesma espcie, condies experimentais distintas ...... 78 10.8.1 Brachiaria brizantha, Helianthus annus, Ricinus comunnis..................................... 78 10.8.2 Efeitos dos dois leos testados .................................................................................. 84 11. DISCUSSO .................................................................................................................. 89 12. CONCLUSES .............................................................................................................. 94 13. PERSPECTIVAS E AES FUTURAS....................................................................... 96 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ................................................................................. 97 ANEXO I CHAVE DE DECISO NA ESCOLHA DA ESPCIE................................ 115 ANEXO II FICHAS AGRONMICAS ......................................................................... 117 ANEXO III - LISTA DE ESPCIES COM POTENCIAL PARA FITORREMEDIAO ............................................................................................................................................ 124 ANEXO IV TESTES KRUSKAL-WALLIS .................................................................. 128 ANEXO V. Valores de p do teste Kruskal-Wallis ou p do teste Mann-Whitney ( = 0,05). ............................................................................................................................................ 144

viii

LISTA DE FIGURAS
Figura 1. Contaminantes encontrados nas reas contaminadas inventariadas pela CETESB em So Paulo e freqncia de ocorrncia (CETESB, 2006). ........................................................... 7 Figura 2. Classificao dos principais hidrocarbonetos do petrleo (Fontes: POTTER & SIMMONS, 1998; GES, 1997)................................................................................................ 9 Figura 3. Estrutura molecular dos hidrocarbonetos policclicos aromticos prioritrios, segundo a U.S. EPA (Fonte: EPA, 2005)................................................................................. 13 Figura 4. Cromatograma do leo da bacia de Alagoas (AL)................................................... 47 Figura 5. Cromatograma do leo da bacia de Campos (CP) ................................................... 48 Figura 6. Padro de disperso do perodo germinativo (incio e fim) por espcie estudada. Ha (Helianthus annus), Rc (Ricinus comunnis), Bb (Brachiaria brizantha); Tg (Tibuchina granulosa), Gm (Glycine max); Ah (Acacia holocericea)....................................................... 49 Figura 7. Taxa de germinao (a) precoce, (b) tardia e (c) total de Brachiaria brizantha em germinador, frente a diferentes concentraes de leo cru. ..................................................... 50 Figura 8. Produo de biomassa radicular e area de Brachiaria brizantha em germinador; plntulas com germinao precoce........................................................................................... 51 Figura 9. Produo de biomassa radicular e area de Brachiaria brizantha em germinador; plntulas com germinao tardia. ............................................................................................. 51 Figura 10. Taxa de germinao precoce, tardia e total de Helianthus annus em germinador, frente a diferentes concentraes de leo cru (linhas verticais: erro padro). ...................... 52 Figura 11. Produo de biomassa radicular e area de Helianthus annus em germinador; plntulas de germinao precoce.............................................................................................. 53 Figura 12. Produo de biomassa radicular e area de Helianthus annus em germinador; plntulas de germinao tardia. ................................................................................................ 53 Figura 13. Taxa de germinao precoce, tardia e total de Leucaeana leucocephala em casa de vegetao, frente a diferentes concentraes de leo cru (linhas verticais: erro padro). .... 54 Figura 14. Produo de biomassa radicular e area, plntulas Leucaeana leucocephala em casa de vegetao; plntulas germinao precoce.................................................................... 55 Figura 15. Produo de biomassa radicular e area de Leucaeana leucocephala em casa de vegetao; plntulas de germinao tardia. .............................................................................. 55 Figura 16. Taxa de germinao (a) precoce, (b) tardia e (c) total de Ricinus comunnis em casa de vegetao, frente a diferentes concentraes de leo cru. ................................................... 56 Figura 17. Produo de biomassa radicular de Ricinus comunnis em casa de vegetao; plntulas de germinao precoce e tardia (linhas verticais: erro padro).............................. 57 Figura 18. Produo de biomassa area de Ricinus comunnis em casa de vegetao; plntulas de germinao precoce e tardia (linhas verticais: erro padro). ............................................ 57 Figura 19. Taxa de germinao (a) precoce, (b) tardia e (c) total da Acacia holosericea em sala climatizada, frente a diferentes concentraes de leo-cru............................................... 58 Figura 20. Produo de biomassa radicular e area de Acacia holosericea em sala climatizada; plntulas de germinao precoce (linhas verticais: erro padro). ......................................... 59 Figura 21. Produo de biomassa radicular e area de Acacia holosericea em sala climatizada; plntulas de germinao tardia (linhas verticais: erro padro). ........................ 59 Figura 22. Taxa de germinao (a) precoce, (b) tardia e (c) total Brachiaria brizantha em sala climatizada, frente a diferentes concentraes de leo cru. ..................................................... 60 Figura 23. Produo de biomassa (a) radicular e (b) area em plntulas de Brachiaria brizantha em sala climatizada; plntulas de germinao precoce............................................ 61 Figura 24. Produo de biomassa (a) radicular e (b) area de Brachiaria brizantha em sala climatizada; plntulas de germinao tardia............................................................................. 61 Figura 25. Taxa de germinao (a) precoce, (b) tardia e (c) total de Helianthus annus em sala climatizada, frente a diferentes concentraes de leo-cru. ..................................................... 62 ix

Figura 26. Produo de biomassa radicular de Helianthus annus em sala climatizada; plntulas de germinao precoce e tardia (linhas verticais: erro padro).............................. 63 Figura 27. Produo de biomassa (a) radicular e (b) area de Helianthus annus em sala climatizada; plntulas de germinao tardia............................................................................. 63 Figura 28. Taxa de germinao (a) precoce, (b) tardia e (c) total de Ricinus comunnis em sala climatizada, frente a diferentes concentraes de leo cru. ..................................................... 65 Figura 29. Produo de biomassa (a) radicular e (b) area das plntulas de Ricinus comunnis em sala climatizada; plntulas de germinao precoce. ........................................................... 66 Figura 30. Produo de biomassa (a) radicular e (b) area de Ricinus comunnis em sala climatizada; plntulas de germinao tardia............................................................................. 66 Figura 31. Taxa de germinao (a) precoce, (b) tardia e (c) total de Glycine max em sala climatizada, frente a diferentes concentraes de leo cru. ..................................................... 67 Figura 32. Produo de biomassa (a) radicular e (b) area de Glycine max em sala climatizada; plntulas de germinao precoce. ........................................................................ 68 Figura 33. Produo de biomassa (a) radicular e (b) area de Glycine max em sala climatizada; plntulas de germinao tardia............................................................................. 68 Figura 34. Taxa de germinao total de Tibouchina granulosa em sala climatizada frente a diferentes concentraes de leo-cru.........................................................................................69 Figura 35. Produo de biomassa das plntulas de Tibouchina granulosa em sala climatizada frente a diferentes concentraes de leo-cru........................................................................... 70 Figura 36. Incidncia de sementes com fungo. Agregao dos dados nas diferentes concentraes de leo cru (AL) em seis espcies estudadas em sala climatizada (mdia erro padro). ..................................................................................................................................... 71 Figura 37. ndice de germinao da Brachiaria brizantha e do Helianthus annus no germinador (GE)....................................................................................................................... 72 Figura 38. ndice de biomassa radicular da Brachiaria brizantha e do Helianthus annus no germinador (GE)....................................................................................................................... 73 Figura 39. ndice de biomassa area da Brachiaria brizantha e do Helianthus annus no germinador (GE)....................................................................................................................... 73 Figura 40. ndice de germinao total de Ricinus comunnis e Leucena leucocephala em casa de vegetao (CV). ................................................................................................................... 74 Figura 41. ndice de biomassa radicular de Ricinus comunnis e Leucena leucocephala em casa de vegetao (CV). ........................................................................................................... 74 Figura 42. ndice de biomassa area da Ricinus comunnis e Leucena leucocephala em casa de vegetao (CV). ................................................................................................................... 74 Figura 43. ndices de germinao total das seis espcies estudadas em sala climatizada....... 76 Figura 44. ndice de produo de biomassa radicular em plntulas de germinao precoce nas seis espcies estudadas em sala climatizada............................................................................. 76 Figura 45. ndice de produo de biomassa radicular em plntulas de germinao tardia nas seis espcies estudadas em sala climatizada............................................................................. 76 Figura 46. ndice de produo de biomassa area em plntulas de germinao precoce das espcies estudadas em sala climatizada.................................................................................... 77 Figura 47. ndice de produo de biomassa area em plntulas de germinao tardia das espcies estudadas em sala climatizada.................................................................................... 77 Figura 48. Taxa de germinao total da Brachiaria brizantha em (a) germinador (Ge) e em (b) sala climatizada (SC). ......................................................................................................... 79 Figura 49. Biomassa radicular (a, b) plntulas de germinao precoce e (c, d) tardia. Brachiaria brizantha (Bb) em (a, c) germinador e em (b, d) sala climatizada. ....................... 79 Figura 50. Biomassa area (a, b) plntulas de germinao precoce e (c, d) tardia. Brachiaria brizantha (Bb) em (a, c) germinador e (b, d) sala climatizada................................................. 80 Figura 51. Taxa de germinao total do Helianthus annus (Ha) em germinador (GE) e sala climatizada (SC). ...................................................................................................................... 81 x

Figura 52. Biomassa radicular (a, b) plntulas de germinao precoce e (c, d) tardia. Helianthus annus (Ha) em (a, c) germinador e (b, d) sala climatizada. ................................... 81 Figura 53. Biomassa area (a, b) plntulas de germinao precoce e (c, d) tardia. Helianthus annus (Ha) em (a, c) germinador e (b, d) sala climatizada....................................................... 82 Figura 54. Taxa de germinao total da Ricinus comunnis (Rc) em sala climatizada (SC) e casa de vegetao (CV). ........................................................................................................... 83 Figura 55. Biomassa radicular (a, b) plntulas de germinao precoce e (c, d) tardia. Ricinus comunnis (Rc) em (a, c) casa de vegetao e (b, d) sala climatizada...................................... 83 Figura 56. Biomassa area (a, b) plntulas de germinao precoce e (c, d) tardia. Ricinus comunnis (Rc) em (a, c) casa de vegetao e (b, d) sala climatizada....................................... 84 Figura 57. Quadro sinptico - Germinao: espcies, condies experimentais, concentraes e tipos de leo (GE = Germinador; CV = Casa de Vegetao; SC = Sala Climatizada).......... 86 Figura 58. Quadro sinptico - Biomassa: espcies, condies experimentais, concentraes e tipos de leo (GE= Germinador; CV= Casa de Vegetao; SC= Sala Climatizada). .............. 87 Figura 59. Acacia holosericea............................................................................................... 117 Figura 60. Brachiaria brizantha............................................................................................ 118 Figura 61. Glycine max ......................................................................................................... 119 Figura 62. Helianthus annus ................................................................................................. 120 Figura 63. Leucaeana leucocephala...................................................................................... 121 Figura 64. Ricinus comunnis. ................................................................................................ 122 Figura 65. Tibouchina granulosa .......................................................................................... 123

xi

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 - Elementos comuns composio do petrleo e respectivas faixas de abundncia, indicando a dominncia dos formadores de hidrocarbonetos..................................................... 8 Tabela 2 - Classificao dos tipos de leo.................................................................................. 9 Tabela 3 - Principais hidrocarbonetos presentes no leo cru. .................................................. 10 Tabela 4 - Exemplo de comparao de custo. .......................................................................... 28 Tabela 5 - Mecanismos de fitorremediao.............................................................................. 29 Tabela 6 - Cinco classes de compostos rizodepositados e seus potenciais de influncia na rizodegradao.......................................................................................................................... 31 Tabela 7 - Espcies e condies experimentais utilizadas nos testes de germinao................40 Tabela 8 Densidade relativa dos leos. ................................................................................. 47 Tabela 9 - Resultados das anlises de BTEXT e HPAs das amostras de petrleo: CG-DIC realizadas no Agilent 6820 da UERJ; CG-DSM realizadas no Agilent 6890 da Peugeot........ 47

xii

ABREVIAES
Ah AL BAP BAT Bb BTEXT BRP BRT CP Cv GE Gm Ha HPAs Ll Rc SC Tg HTPs Accia holosericea leo da bacia de Alagoas Biomassa area precoce Biomassa area tardia Brachiaria brizantha Benzeno, Tolueno, Etilbenzeno, Xileno, Trimetilbenzeno. Biomassa radicular precoce Biomassa radicular tardia leo da bacia de Campos Casa de vegetao Germinador Glycine max Helianthus annus Hidrocarbonetos policclicos aromticos Leucaena leucocephala Ricinus comunnis Sala climatizada Tibouchina granulosa Hidrocarbonetos totais de petrleo

xiii

1. INTRODUO

1.1 Contextualizao e Relevncia do tema

A expanso do setor petroqumico ao longo do sculo XX resultou no aumento da produo de compostos qumicos incluindo os combustveis e vrios outros derivados de petrleo de ampla utilizao na indstria moderna. Ao longo do tempo, o petrleo tornou-se uma fonte de energia essencial. A inveno dos motores a gasolina e a diesel fez com que outros derivados, at ento desprezados, passassem a ter novas aplicaes. Hoje, alm de grande utilizao dos seus derivados, com o advento da petroqumica, centenas de novos produtos foram surgindo; muitos deles diariamente utilizados, como os plsticos, borrachas sintticas, tintas, corantes, adesivos, solventes, detergentes, explosivos, produtos farmacuticos, cosmticos, dentre outros. O petrleo pode ser encontrado naturalmente em determinadas formaes geolgicas resultante da transformao e decomposio da matria orgnica de plantas aquticas e animais pr-histricos. Esses seres decompostos foram acumulando-se ao longo de milhes de anos (15 a 500 milhes), no fundo dos mares e dos lagos e pntanos; sendo pressionados pelos movimentos da crosta terrestre, transformaram-se na substncia oleosa que o petrleo (PEDROZO et al., 2002). A atividade petrolfera uma das atividades industriais que oferecem risco para o meio ambiente, pois pode ocasionar a contaminao dos meios terrestre, aqutico e atmosfrico por vrios compostos orgnicos ao longo de sua cadeia produtiva. A existncia de uma rea contaminada por este poluente pode gerar problemas como danos a sade humana, comprometimento da qualidade dos recursos hdricos, restries ao uso do solo e srios danos biota. Segundo Dinardi et al. (2005) a estimativa mundial para os gastos anuais com a despoluio ambiental gira em torno de 25 a 30 bilhes de dlares e este mercado tende a crescer no Brasil uma vez que os investimentos para tratamento dos rejeitos humanos, agrcolas e industriais tm aumentado devido s exigncias da sociedade e a aplicao de leis mais rgidas. No entanto, em muitos pases a remediao de reas contaminadas fica restrita s condies econmicas. Vrios processos de tratamentos qumicos e fsicos tm sido desenvolvidos e testados para remover os hidrocarbonetos de petrleo do solo (STEGMANN 1

et al., 2001), mas a aplicao destes mtodos geralmente onerosa e no adequada ambientalmente, pois promove a desestruturao do solo e a reduo da biodiversidade, alm de transferir um problema de poluio em meio slido em geral para um meio lquido. As tecnologias de biorremediao e de fitorremediao surgem com nfase a partir de meados dos anos 90, como opo promissora para integrar um conjunto de tecnologias ambiental e financeiramente vivel. A remediao biolgica in situ (biorremediao) apresenta vantagens, mas exige a gerao de biomassa microbiolgica suficiente para que se alcance as taxas desejveis de contato do microorganismo com os hidrocarbonetos do petrleo (ALEXANDER, 1977). A fitorremediao, que consiste em um tratamento biolgico do solo, mediado por plantas, possui investimento e custo de operao significativamente mais baixo, variando de USD 0.02 a USD1.00 por m3 de solo, segundo Cunningham et al. (1996), aplicvel in situ e utiliza o sol como fonte de energia. Esta tecnologia tem sido utilizada para tratar solos contaminados por metais (Pb, Zn, Cu, Ni, Hg, Se), compostos inorgnicos (NO3-, NH4+, PO4-3), elementos qumicos radioativos (U, Cs, Sr), hidrocarbonetos derivados de petrleo (BTEX), pesticidas e herbicidas (atrazine, bentazona, compostos clorados e nitroaromticos), explosivos (TNT, DNT), solventes clorados (TCE, PCE) e resduos orgnicos industriais (PCPs, PAHs), entre outros (CUNNINGHAM et al., 1996). A fitorremediao baseia-se na utilizao de espcies vegetais para extrair, conter, imobilizar ou degradar contaminantes da gua e do solo (MCCUTCHEON & SCHNOOR, 2003). Tambm pode estar associada biodegradao estimulando o crescimento e a atividade dos microrganismos capazes de degradar compostos no mbito da rizosfera das plantas. Na biodegradao os hidrocarbonetos totais de petrleo (HTPs) so convertidos pelos microrganismos do solo em dixido de carbono, gua, biomassa e cidos orgnicos incorporados ao material hmico. Este mtodo tem sido testado para o tratamento de solos contaminados por derivados de petrleo, sendo apropriado para a remediao de solos em grandes reas onde a aplicao dos mtodos convencionais seria economicamente invivel. A fitorremediao possui um alto potencial de desenvolvimento, pois existe uma grande quantidade de fenogentipos a serem testados, uma vez que atualmente existem cerca de 250.000 espcies de plantas superiores descritas (O`BRIEN & O`BRIEN, 1995; NUTSCH, 2000), que se subdividem em um nmero maior de variedades das quais, somente uma frao insignificante foi investigada para este tal uso at o presente momento. Tendo em conta que 170.000 espcies ocorrem nos trpicos e subtrpicos (WILSON, 1992), a aplicao desta 2

tecnologia em pases de clima tropical muito favorecida devido biodiversidade vegetal e de microrganismos nestes locais. Vrios fatores podem afetar o desempenho da fitorremediao, incluindo propriedades do solo, as caractersticas fsico-qumicas do contaminante e a espcie vegetal. No entanto, o conhecimento disponvel restringe-se quase que exclusivamente a regies de clima temperado. Portanto, faz-se necessrio o estudo desta tecnologia em regies tropicais, com foco na adaptao s condies edafoclimticas, bem como a sua influncia no crescimento e metabolismo das plantas e microrganismos.

2. OBJETIVOS

2.1 Objetivo geral

O objetivo geral do presente trabalho foi testar a tolerncia de espcies vegetais a solos contaminados por petrleo (leo cru), avaliando para tanto, a taxa de germinao e produo de biomassa como indicadores do potencial de uso em projetos de fitorremediao.

2.2 Objetivos especficos

Definir o estado da arte da fitorremediao de solos contaminados por petrleo; Testar a tolerncia presena de leo cru no solo, de espcies selecionadas com potencial para a produo de biodiesel ou outros usos, tais como alimentao animal, humana, cosmtico, ornamental, medicinal, etc, a saber: Euphorbiaceae: Ricinus communis (mamona) Compositae: Helianthus annus (girassol). Fabaceae: Glicine max (soja) e Acacia holosericea (accia) Poaceae: Brachiaria brizantha (braquiria). Melastomataceae: Tibouchina granulosa (quaresmeira). Mimosaceae: Leucaeana leucocephala (leucena)

Selecionar as espcies vegetais mais promissoras para futuras investigaes e projetos em escala piloto e de campo, com base na tolerncia das mesmas presena de petrleo no solo;

Propor uma chave de deciso para fitorremediao em escala de campo com as espcies selecionadas.

3. ABORDAGEM METODOLGICA

A abordagem metodolgica utilizada no desenvolvimento do presente trabalho incluiu: Reviso bibliogrfica para determinao do estado da arte da fitorremediao de solos contaminados por hidrocarbonetos de petrleo e processos associados; Testes de fitotoxicidade em trs condies experimentais (germinador, sala climatizada e casa de vegetao) com oito espcies vegetais (Helianthus annus, Ricinus communis, Glicine max, Brachiaria brizantha, Acacia holosericea, Tibouchina granulosa e Leucaeana leucocephala) em cinco concentraes de petrleo (0,05%; 0,50%; 2,00%; 4,00%; 6,00%) para avaliar a tolerncia das espcies presena do leo no solo; Anlises estatsticas para comparar a capacidade de germinao e desenvolvimento psgerminativo (produo de biomassa radicular e area) em diferentes concentraes de leo; Construo de uma chave de deciso com base nos conhecimentos atuais das espcies testadas incluindo exigncias culturais e adequao de uso em diferentes condies ambientais.

4. PETRLEO

Tendo em vista que os efeitos txicos de solos contaminados com leo cru sobre plantas - particularmente sobre a germinao e crescimento das mesmas - esto associados composio qumica do petrleo derramado, no presente captulo a composio do petrleo e seu comportamento no meio contaminado, so brevemente apresentados e discutidos. O petrleo um combustvel fssil de grande significado para a economia mundial, mas que tambm representa um problema ambiental relevante, devido sua freqente introduo no meio ambiente, no apenas sob a forma de combustvel, como tambm pela larga utilizao industrial de seus derivados (PONS et al., 2005). Por este motivo, a contaminao do solo por petrleo e derivados tem merecido pesquisas extensas nos ltimos anos. Segundo Patin (1982), o petrleo e derivados esto entre os principais poluentes ambientais, juntamente com os metais pesados, os organoclorados e os compostos altamente volteis. A razo para isso a intensa utilizao do ambiente marinho pela indstria petrolfera seja pela explorao off-shore ou pelo transporte martimo e terrestre de petrleo e de seus derivados, com nfase nas atividades de processamento. Os vazamentos considerados normais no processo de transporte martimo representam cerca de 98% das perdas totais de petrleo e derivados, enquanto que as perdas acidentais correspondem aos 2% restantes. A liberao acidental de leo por petroleiros responsvel pelo lanamento no ambiente de aproximadamente 400.000 toneladas/ ano, sendo que cerca de 70% dos casos ocorrem durante as operaes de carga e descarga dos navios nos portos e terminais petrolferos (IPIECA, em CETESB, 2006). Em um levantamento recente sobre principais contaminantes encontrados nas reas identificadas como contaminadas em So Paulo (CETESB, 2006), verificou-se que os mais freqentemente encontrados estavam associados indstria do petrleo, tais como combustveis lquidos, solventes aromticos e HPAs entre outros (Figura 1). Uma vez derramado, o leo sofre imediatamente alteraes da sua composio original, devido a uma combinao de processos fsicos, qumicos e biolgicos chamados conjuntamente de intemperismo. Este se inicia imediatamente aps o derrame e ocorre a taxas variveis dependendo do tipo de leo, do meio contaminado e das condies ambientais. A taxa do processo no constante, sendo mais efetiva no perodo imediatamente aps o derrame. O grau de impacto ambiental e persistncia do petrleo no ambiente dependem de fatores como o habitat atingido, tipo e quantidade de leo derramado, espcies de organismos 6

atingidos, poca do ano (que afeta o ciclo de vida das espcies), condies hidrogrficas e meteorolgicas (que afeta a disperso do petrleo), clima, freqncia e durao da exposio ao petrleo e prticas utilizadas na tentativa de conteno e descontaminao (SLOAN, 2005). Os processos fsico-qumicos de espalhamento, volatilizao, disperso, emulsificao e dissoluo ocorrem nos perodos iniciais de um derrame, enquanto que oxidao, sedimentao e biodegradao ocorrem a longo-prazo (CETESB, 2005). Com o passar do tempo, o leo no ambiente mudar suas caractersticas iniciais, ficando menos txico, mais denso e viscoso e mais recalcitrante.

1200 1000 800 600 400 217 200 0 114 68 Outros contaminantes 51 Outros inorgnicos 42 Fenis halogenados 40 Solventes aromticos 33 Biocidas 14 PCBs 14 Ftalenos 4 Microbiolgicos 2 Anilinas 1 Dioxinas e furanos 1 Radionucldeos 570 978 1018

Combustveis lquidos

PAHs

Solventes aromticos

Metais

Solventes halogenados

Figura 1. Contaminantes encontrados nas reas contaminadas inventariadas pela CETESB em So Paulo e freqncia de ocorrncia (CETESB, 2006).

4.1 Caractersticas fsico-qumicas do petrleo

Com nome proveniente do latim petra (pedra) e oleum (leo), o petrleo no estado lquido uma substncia oleosa, inflamvel, menos densa que a gua, com cheiro caracterstico e cor variando entre negro e castanho-claro (THOMAS, 2004). Os leos obtidos em diferentes reservatrios de petrleo possuem caractersticas diferentes. Alguns so pretos, densos e viscosos, liberando pouco ou nenhum gs, enquanto que outros so castanhos ou bastante claros, com baixa viscosidade e densidade, liberando 7

halogenados

quantidade razovel de gs. Outros reservatrios produzem somente gs (THOMAS, 2004). Entretanto, todos eles produzem anlises elementares semelhantes dada na Tabela 1: A alta porcentagem de carbono e hidrognio existente no petrleo mostra que os seus principais constituintes so os hidrocarbonetos e devido sua predominncia no petrleo, so estes os compostos utilizados como indicadores deste tipo de poluio. Os outros constituintes aparecem sob a forma de compostos orgnicos que contm outros elementos, sendo os mais comuns o nitrognio, o enxofre e o oxignio. Metais tambm podem ocorrer como sais de cidos orgnicos (THOMAS, 2004).

Tabela 1 - Elementos comuns composio do petrleo e respectivas faixas de abundncia, indicando a dominncia dos formadores de hidrocarbonetos.
Hidrognio Carbono Enxofre Nitrognio Oxignio Metais 11-14% 83-87% 0,06-8% 0,11-1,7% 0,1-2% at 3%

Fonte: THOMAS (2004)

O petrleo composto basicamente por trs grupos de hidrocarbonetos: os parafnicos, os naftnicos e os aromticos, e estes podem ser saturados ou insaturados (PEDROZO et al., 2002). Os saturados possuem somente ligaes simples entre os tomos de carbono e hidrognio e podem estar na forma de cadeia aberta (parafnicos ou alifticos) ou em anel (naftnicos ou ciclo-parafnicos). Os insaturados no possuem tomos de hidrognio suficiente para saturar todos os carbonos, apresentando ligaes duplas e triplas entre os tomos de carbono, e tambm podem apresentar-se sob a forma de cadeia aberta ou anel (aromticos). A Figura 2 mostra alguns dos principais hidrocarbonetos presentes no petrleo e a Tabela 3 os principais hidrocarbonetos presentes no petrleo. O American Petroleum Institute-API (THOMAS, 2004) analisou amostras de petrleo de diferentes origens e concluiu que todos contm substancialmente os mesmos hidrocarbonetos, em diferentes quantidades. A quantidade relativa de cada grupo de hidrocarbonetos presentes varia muito. Conseqentemente, segundo estas quantidades, os vrios tipos de petrleo diferem quanto a vrias caractersticas fsico qumicas. No entanto a quantidade de compostos dentro de cada grupo de hidrocarbonetos semelhante em diferentes tipos de petrleo. 8

Figura 2. Classificao dos principais hidrocarbonetos do petrleo (Fontes: POTTER & SIMMONS, 1998; GES, 1997).

O petrleo pode ser classificado em doce ou cido de acordo com a composio dos seus hidrocarbonetos e dos compostos sulfricos (PETROBRAS, 1994), e este tipo de classificao importante para a sade e segurana, pois o petrleo doce apresenta baixas concentraes de enxofre (at 6 ppm de gs sulfdrico - H2S), enquanto que no leo cido, o gs sulfdrico pode atingir concentraes atmosfricas bem mais altas, na ordem de 50 a 180.000 ppm. Uma outra classificao possvel baseia-se na densidade relativa sendo: Leve: densidade inferior a 0,82 (g/ml) Mdio: densidade entre 0,82 e 0,97 (g/ml); Pesado: densidade superior a 0,97 (g/ml);

Tabela 2 - Classificao dos tipos de leo.

Grupo I II III IV Densidade < 0,8 0,80 0,85 0,85 0,95 > 0,95 API > 45 35 45 17,5 35 < 17,5 Composio Leve Leve Pesado Pesado Meia Vida ~ 24h ~ 48h ~ 72 h ~ 168 h Persistncia 1-2 dias 3-4 dias 5-7 dias > 7 dias

Fonte: ITOPF - The International Tanker Owners Pollution Federation em CETESB (2006).

Tabela 3 - Principais hidrocarbonetos presentes no leo cru.

Composto Alcanos de cadeia aberta n-Hexano n-Heptano n-Octano n-Nonano n-Decano n-Undecano n-Dodecano Alcanos ramificados 2,2-Dimetilbutano 2,3-Dimetilbutano 2-Metilpentano 3-Metilpentano 3-Etilpentano 2,4-Dimetilpentano 2,3-Dimetilpentano 2,2,4-Trimetilpentano 2,3,3-Trimetilpentano 2-metil-3-etilpentano 2-Metilexano 3-Metilexano 2,2-Dimetilexano 2,3-Dimetilexano 2,4-Dimetilexano 2,5-dimetilexano 3,3-Dimetilexano 2,3-Dimetileptano 2,6-Dimetileptano 2-Metiloctano 3-Metiloctano 4-Metiloctano Cicloalcanos Ciclopentano Metilciclopentano N de carbonos 6 7 8 9 10 11 12 6 6 6 6 7 7 7 8 8 8 7 7 8 8 8 8 8 9 9 9 9 9 5 6 EC % de peso 0,7-1,8 0,8-2,3 0,9-1,9 0,6-1,9 1.8 1.7 1.7 0.04 0,04-0,14 0,3-0,4 0,3-0,4 0.05 0.05 0,1-0,6 0.004 0.006 0.04 0.7 0,19-0,5 0,01-0,1 0,06-0,16 0.06 0.06 0.03 0.05 0,05-0,25 0.4 0,1-0,4 0.1 0.05 0,3-0,9

6 7 8 9 10 11 12 5.37 5.68 5.72 5.85 6.31 6.69 6.89 7.58 7.66 6.68 6.76 7.25 7.65 7.38 7.36 7.45 8.64 8.47 8.78 8.71 5.66 6.27

10

Composto 1,1-Dimetilciclopentano 1-trans-2-Dimetilciclopentano 1-cis-3-Dimetilciclopentano 1-trans-3-Dimetilciclopentano 1,1,2-Trimetilciclopentano 1,1,3-Trimetilciclopentano 1-trans-2-cis-3-Trimetilciclopentano 1-trans-2-cis-4-Trimetilciclopentano 1-trans-2-Dimetilcicloexano Etilcicloexano Cicloexano 1-trans-2-trans-4-Trimetilcicloexano Alquilbenzenos Benzeno Tolueno Etilbenzeno o-Xileno m-Xileno p-Xileno 1-Metil-4-etilbenzeno 1-Metil-2-etilbenzeno 1-Metil-3-etilbenzeno 1,2,3-Trimetilbenzeno 1,2,4-Trimetilbenzeno 1,3,5-Trimetilbenzeno 1,2,3,4-Tetrametilbenzeno Bifenila Benzonaftenos Indano Tetraidronaftaleno 5-Metil-hidronaftaleno 6-Metil-hidronaftaleno Fluoreno Alquilnaftalenos Naftaleno Aromticos polinucleares Fenantreno

N de carbonos 7 7 7 7 8 8 8 8 8 8 6 9 6 7 8 8 8 8 9 9 9 9 9 9 10 12 9 10 11 11 13 10 14

EC 6.72 6.87 6.82 6.85 7.67 7.25 7.51 7.94 8.38 6.59

% de peso 0,06-0,2 0,15-0,5 0.2 0,2-0,9 0.06 0.3 0,3-0,4 0.2 0.3 0.2 0.7 0.2 0,04-0,4 0,09-2,5 0,09-0,31 0,03-0,68 0,08-2,0 0,09-0,68 0,03-0,13 0,01-0,09 0,04-0,4 0.1 0,13-0,69 0,05-0,18 0.2 0,006-0,04 0.07 0.03 0.08 0.09 0,003-0,06 0,02-0,09 0,003-0,05

6.5 7.58 8.5 8.81 8.6 8.61 9.57 9.71 9.55 10.06 9.84 9.62 11.57 14.26 10.27 11.27

16.55 11.69 19.36

EC = nmero equivalente de carbono (Fonte: GUSTAFSON et al., 1997). Em condies normais de temperatura e presso, os hidrocarbonetos podem apresentar-se sob as formas gasosa, lquida ou slida, dependendo do nmero e disposio dos tomos de carbono nas suas molculas (PEDROZZO et al., 2002). Os hidrocarbonetos com 11

at quatro tomos de carbono apresentam-se sob a forma de gs, como o gs natural liquefeito (GLP). Os hidrocarbonetos de 5 a 25 tomos de carbono apresentam-se sob a forma lquida, como o hexano e aqueles com mais de 25 tomos sob a forma slida, por exemplo, os constituintes da graxa e parafina (GES, 1997). A solubilidade dos hidrocarbonetos na gua depende da polaridade de suas molculas, sendo que quanto maior a polaridade maior ser a solubilidade em gua e o seu ponto de ebulio. A natureza hidrofbica dos hidrocarbonetos apolares de peso molecular alto fator relevante aos processos de remediao de solos (MCCUTCHEON & SCHNOOR, 2003). O ponto de ebulio de um hidrocarboneto depende do nmero de tomos de carbono presentes em sua molcula e determina a persistncia dos hidrocarbonetos no meio ambiente. Segundo a WHO (1982) quanto maior a temperatura de ebulio, maior ser a permanncia do hidrocarboneto no meio slido, sendo transferido preferencialmente para a atmosfera por volatilizao. Os HPAs so solveis em solventes orgnicos, mas apresentam baixa solubilidade em gua. De modo geral, quanto maior o peso molecular menor a solubilidade.

4.2 Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos (HPAs)

Um grupo especial dentro dos aromticos so os Hidrocarbonetos Policlicos Aromticos (HPAs) presentes nos combustveis fsseis como constituintes naturais e em alta quantidade nos produtos de refino, podendo tambm ser formados durante a combusto incompleta da matria orgnica (BOS et al., 1984). Os HPAs so constitudos por ligaes duplas e simples que se alternam em dois ou mais anis com seis tomos de carbono, ou seja, anis de benzeno. Ao contrrio dos compostos insaturados, o benzeno estvel e devido ao seu odor, todos os compostos formados por ele so conhecidos como hidrocarbonetos aromticos. Compostos formados por dois ou mais anis de benzeno so mais resistentes a biodegradao, pois ficam fortemente adsorvidos nos sedimentos, persistindo por muitos anos no ambiente. Alguns exemplos mais comuns de HPAs presentes no petrleo e derivados, considerados prioritrios pela U.S. EPA, devido aos efeitos sobre a sade ambiental e humana, so mostrados na Figura 3. Os HPAs so especialmente txicos e potencialmente carcinognicos ao homem e aos organismos marinhos (COLE, 1994). Segundo o GESAMP (1991), h fortes evidncias que os HPAs so capazes de causar cncer em peixes e moluscos. A atividade mutagnica descrita est relacionada com o formato e a estrutura molecular dos HPAs e conseqentemente com sua toxicidade (DONNELLY et al., 1998). 12

Naftaleno

Acenaftileno

Acenafteno

Antraceno Fenantreno

Fluoreno

Benzo(a)antraceno

Criseno

Fluoranteno

Pireno

Benzo(a)pireno Benzo(b)fluoranteno

Benzo(k)fluoranteno Benzo(e)pireno Dibenzo(a,h)antraceno

Benzo(g,h,i)perileno

Indeno(1,2,3-c,d)pireno

Figura 3. Estrutura molecular dos hidrocarbonetos policclicos aromticos prioritrios, segundo a U.S. EPA (Fonte: EPA, 2005). 13

5. SOLO

O solo um corpo natural da superfcie terrestre, independente e dinmico, resultante da ao cumulativa de fatores, tais como rocha me, relevo, tempo, clima e organismos (vegetais e animais) designados conjuntamente por fatores pedogenticos ou fatores de formao do solo (EMBRAPA, 1999). A qualidade do solo definida como a aptido de um solo especfico em atuar dentro de um ecossistema natural ou manejado, para sustentar a produtividade de plantas e animais, manter ou aumentar a qualidade da gua e do ar e suportar a sade humana e habitao (KARLIN et al., 1997 em COUTINHO, 2005). Esta pode ser atribuda inter-relao das suas caractersticas qumicas, fsicas e biolgicas, ou seja, a qumica do solo afeta a disponibilidade de nutrientes que influencia a comunidade microbiana; a estrutura fsica do solo esta relacionada capacidade de reteno de gua, que interfere nas reaes qumicas e biolgicas. O solo constitudo por minerais e poros preenchidos por gua e ar, alm de matria orgnica e organismos. A natureza e a proporo de cada uma destas partes muito varivel. Os organismos formam a chamada matria orgnica viva do solo e tm um papel fundamental nos solos atuando na regulao dos processos biogeoqumicos formadores e mantenedores dos ecossistemas (ALEXANDER, 1977) Dentre estes, incluem-se: A formao e estruturao de solos; Decomposio da matria orgnica; Ciclagem de nutrientes; A formao dos gases componentes da atmosfera terrestre. Segundo Coutinho (1999), quanto maior a biomassa de um solo, maior ser o seu potencial de estoque de nutrientes atravs do acmulo destes nas clulas microbianas. Os nutrientes so liberados conforme as clulas so degradadas, devido morte ou predao por outros organismos. A macrofauna influencia o grau de porosidade e agregao de solos. A atividade de formigas, cupins e minhocas geram canais, poros e agregados que influenciam no transporte de gases e gua no solo. Portanto, as propriedades e funes do solo so resultantes da interao da biodiversidade com seus componentes fsico-qumicos. A porosidade uma propriedade do solo que depende da textura (proporo relativa das partculas que constituem o solo por tamanho, isto , argila, silte e areia), da estrutura (agregao das partculas em unidades maiores) e da frao orgnica. Um agregado um conjunto de partculas primrias (argila, silte, areia) do solo que se aderem umas s outras 14

mais fortemente do que a outra partcula circunvizinha (KEMPER & ROSENAU, 1986) e comporta-se mecanicamente como uma unidade estrutural. A distribuio das classes ou tamanhos de agregados considerada um fator importante para a germinao de sementes e para o desenvolvimento das razes (BRAUNACK & DEXTER, 1989). O estado de agregao das partculas tem influncia sobre a infiltrao de gua, a biodiversidade, a dinmica da biomassa do solo, a disponibilidade de oxignio s razes e a eroso do solo (DENEF et al., 2001; FRANZLUEBBERS, 2002) tambm um dos principais processos responsveis pela acumulao e o seqestro de carbono em solos (LAL et al., 1997). O teor de umidade do solo fundamental para o sucesso da biorremediao, a sobrevivncia das plantas e dos microrganismos depende de gua, portanto uma estrutura do solo que favorece a reteno de gua mantendo uma frao significativa de poros preenchidos por ar beneficia a atividade biolgica. O limite mximo de gua que um solo pode reter indicado pela capacidade de campo que corresponde umidade do solo na qual a drenagem interna praticamente cessa (REICHARDT, 1985) este parmetro determina a disponibilidade de gua no solo. A permeabilidade intrnsica do solo ao ar (ka) uma propriedade fsica que varia de acordo com o tamanho dos gros, uniformidade do solo, porosidade e teor de umidade. Segundo Norris et al (1993), coeficientes de permeabilidade menores que 0-4 cm/s limitam a eficincia da biorremediao, devido dificuldade de infiltrao de fluidos e transporte microbiano no solo. As propriedades do solo influenciam diretamente o processo de fitorremediao determinando a disponibilidade de gua, ar e nutrientes, fatores que podem inibir ou estimular o crescimento e desenvolvimento das plantas e microrganismos responsveis pela degradao do contaminante.

15

6.

FATORES

RELEVANTES

DEGRADAO

DOS

HIDROCARBONETOS DE PETRLEO NO SOLO

Solos contaminados com HPAs podem ser classificados em duas categorias de acordo com sua fitotoxicidade: (i) solos recentemente contaminados e rico em compostos volteis, e (ii) solos contaminados que sofreram atenuao natural aged (HENNER et al., 1999). O leo altera as propriedades do solo, devido sua propriedade hidrofbica, resultando na alterao da disponibilidade de gua e nutrientes. Os principais fatores que interferem no processo de degradao dos hidrocarbonetos de petrleo no solo so apresentados a seguir.

6.1 Fatores ambientais

Segundo Pedrozzo et al. (2002) os fatores ambientais que afetam a biodegradao do petrleo so: Teor de oxignio. O oxignio importante porque as etapas iniciais do catabolismo dos hidrocarbonetos envolvem a oxidao dos substratos por oxigenases. E apesar de alguns compostos tais como o benzoato, hidrocarbonetos clorados, benzeno, tolueno, xileno, naftaleno e acenafteno serem degradados na ausncia de oxignio, esta ocorre de forma lenta (ATSDR, 2006; OUDOT, 1998; ROSATO, 1997). pH. O pH ideal para a biodegradao encontra-se prximo ao neutro (6 a 8). Este parmetro influencia o crescimento e a atividade dos microrganismos e das plantas. Teor de gua. A gua do solo contaminado responsvel pela dissoluo dos componentes residuais e pela ao dispersora sendo esta necessria ao metabolismo dos microrganismos e plantas. A maioria dos estudos indica que os teores timos de umidade encontram-se entre 50 e 70% (FRANKENBERGER, 1992). Temperatura. Todas as transformaes biolgicas so afetadas pela temperatura. Com o aumento da temperatura a atividade biolgica tende a aumentar at a temperatura em que 16

ocorre desnaturao enzimtica. A temperatura tambm influencia as caractersticas fsicoqumicas do petrleo. Em temperaturas baixas a viscosidade do leo tende a aumentar e a volatilizao reduzida. A temperatura tima para biodegradao varia de 18C a 30C (OUDOT, 1998; ROSATO, 1997). Concentrao de nutrientes. Os macronutrientes e os micronutrientes devem estar presentes no solo em quantidades suficientes e nas formas adequadas para suprir as necessidades dos microrganismos e das plantas. Microrganismos. Altas concentraes de leo no solo inibem a atividade dos microrganismos. Os microrganismos encontrados no solo, guas subterrneas e superficiais so capazes de degradar compostos orgnicos utilizando-os como fonte de energia. Em ambiente marinho, por exemplo, foram listados 25 gneros de bactrias, um de algas e 27 de fungos (ROSATO, 1997), sendo os mais comuns: Pseudomonas, Achromobacter, Brevibacterium, Arthrobacter, Micrococcus, Nocardia, Vibrio, Cndida, Acinetobacter, Rhodotorula, Corynebacterium, Flavobacterium,

Saccharomyces, Rhodosporidium e Sporobolomyces. No solo, foram registrados 22 gneros de bactrias e 31 de fungos (ROSATO, 1997); os fungos como Penicillium e Cunninghamella sp apresentam maior capacidade de degradao do que a Flavobacterium, Brevibacterium e Arthrobacter sp. A formao de compostos intermedirios orgnicos txicos tais como o tolueno, pode resultar em intermedirios como o cido benzico e compostos fenlicos, os quais em concentraes elevadas atuam como biocida (FRANKENBERGER, 1992). Os metais pesados tambm podem influenciar a biodegradao de substncias orgnicas por alterar a atividade ou a populao microbiana (FRANKENBERGER, 1992). A reduo da biomassa microbiana afeta diretamente a biodegradao do petrleo.

6.2 Manejo do solo

A adio de fertilizantes no solo contaminado auxilia o crescimento das plantas e maximiza a atividade microbiana capaz de degradar contaminantes. Foi observado que a adio de nitrognio aumentou a biorremediao de HPAs em solos e na gua (LIN & MENDELSSOHN, 1998; CHURCHILL et al., 1995; GLASER, 1991). Rasiah et al. (1992) 17

observaram que o grau de mineralizao dos hidrocarbonetos no solo aumentou em resposta a adio de fertilizantes e que nveis baixos de nitrognio e fsforo no solo limitam o crescimento das plantas e dos microrganismos. Segundo Hutchinson et al., (2003), a adio de minerais para otimizao do processo de fitorremediao deve atender as necessidades das plantas e dos microrganismos. Cookson (1995) e Hutchinson et al. (2001) sugerem uma adio de carbono: nitrognio: fsforo (N:P:K) na proporo de 100:10:1 mg kg-1 de solo para uma contaminao com HPAs a 30 cm de profundidade. A concentrao de aproximadamente 600 mg kg-1 de N, P e K foi considerada suficiente para suprir as necessidades nutricionais da espcie Brachiaria brizantha e o crescimento dos microrganismos em um solo com 5% de petrleo (MERKL et al., 2005). As exigncias nutricionais variam entre as espcies de plantas e microrganismos, ou seja, a quantidade adequada de nutrientes a ser adicionada deve considerar fatores como espcie e condies edafoclimticas que iram influenciar o comportamento dos fertilizantes no solo. A aplicao de nutrientes em excesso, entretanto, no beneficia a biorremediao, pois as comunidades microbianas do solo iro utilizar os nutrientes para acelerar a produo de biomassa a partir do carbono disponvel no solo com pouco uso do carbono do contaminante (MCCUTCHEON & SCHNOOR, 2003). Descrito anteriormente como um dos fatores que influenciam a biodegradao no solo, segundo Merkl et al. (2005), o pH um parmetro que pode ser manejado pela calagem para aumentar consideravelmente a atividade de microrganismos e, portanto a degradao do petrleo em solos tropicais. Em reas com baixa pluviosidade ou regime de chuvas mal distribudo, o uso da irrigao recomendado para implantao e manuteno da fitorremediao, visto que a gua um fator indispensvel ao processo.

6.3 Transporte e interao dos hidrocarbonetos de petrleo com o solo

Os hidrocarbonetos de petrleo se encontram dissolvidos na soluo do solo, na fase gasosa ou adsorvidos na frao slida e so transportados no solo pelo fluxo subterrneo (FREEZE & CHERRY, 1979). 18

A migrao do petrleo no solo ocorre por meio de dois mecanismos (ATSDR, 2006; REID et al., 2000): Como uma massa de leo que se infiltra no solo por ao da fora da gravidade e da capilaridade; Como compostos individuais que se separam da mistura de componentes, pelo fenmeno chamado de percolao, dissolvendo-se na gua ou volatilizando no ar. Quando o leo flui, a velocidade de infiltrao mais rpida que a velocidade de dissoluo resultando em pouca separao dos compostos. Os fatores que afetam a velocidade de infiltrao do leo so o teor de gua no solo, a vegetao e as condies edafoclimticas (ATSDR, 2006; REID et al., 2000). A quantidade de leo retida nas partculas do solo pequena e constitui as fraes residuais de saturao, que determinam o grau de contaminao no solo e sua persistncia no ambiente (ATSDR, 2006). Quando a quantidade de leo liberada para o meio ambiente baixa, todo o produto se torna resduo de saturao. A altas concentraes de petrleo a migrao da massa de leo cessa quando os espaos entre os poros do solo apresentam-se saturados com gua. Se a densidade do produto for inferior da gua, o produto tende a flutuar atravs da interface entre as zonas saturadas e insaturadas de gua e espalha-se horizontalmente formando uma camada fina, geralmente em direo s guas subterrneas (ATSDR, 2006). Se a densidade do produto for superior da gua, o leo continuar a migrar em direo ao aqfero sob influncia da gravidade. A migrao cessa quando o produto convertido em frao residual saturada ou quando encontra uma superfcie impermevel. De acordo com as caractersticas fsico-qumicas dos compostos estes podem ser divididos em dois grupos: os compostos hidrfilos, (lcoois, aldedos, cetonas e cidos carboxlicos) e compostos hidrfobos (hidrocarbonetos alifticos, cclicos e aromticos). medida que o peso molecular dos hidrocarbonetos aumenta, a sua solubilidade e mobilidade diminuem (MATTNEY, 1994). Os compostos apolares, como os hidrocarbonetos, so pouco solveis em gua e rapidamente ficam retidos nos constituintes hidrofbicos do solo, como a matria orgnica (JONER & LEYVAL, 2001). Os compostos orgnicos distribuem-se entre a frao mvel (hidrocarbonetos com baixa viscosidade e elevada volatilidade) e imvel (hidrocarbonetos com elevada viscosidade e baixa volatilidade) (MATTNEY, 1994). Os produtos derivados do petrleo (leos e gasolina) so menos densos do que a gua, pouco solveis e bastante volteis. A concentrao do poluente no solo varia com o tempo de contato, que influencia diretamente sua biodisponibilidade e toxicidade (REID et al., 2000; SALZER et al., 1999). 19

Um dos efeitos do tempo de contato do poluente com o solo que muitos compostos ficam retidos mais fortemente e tornam-se menos biodisponveis com o tempo. Este fenmeno denominado aging afeta a remediao do solo (HATZINGER & ALEXANDER, 1995). A ao do tempo inclui mudana da composio do contaminante por meio da volatilizao, solubilidade, transformaes biticas e abiticas, difuso e reao com a dinmica dos agregados do solo. O transporte dos poluentes orgnicos nos meios subterrneos influenciado por alguns mecanismos (adsoro, hidrlise, oxidao-reduo, precipitao, degradao e volatilizao), que podem retardar a migrao destes a partir da superfcie do solo, para as zonas saturadas subjacentes. A ao destes mecanismos depende das caractersticas fsico-qumicas do poluente, das caractersticas do solo e da interao dos poluentes com os componentes do solo (HAMIDI, 2000). A adsoro representa, provavelmente, o processo mais significativo de interao entre os produtos derivados do petrleo e as fraes orgnica e mineral do solo (SENESI, 1993; HAMIDI, 2000). Entende-se por adsoro, a concentrao de matria na interface entre a fase slida e a soluo da fase aquosa. Este processo depende do tipo de minerais de argila que constituem o solo e do teor e natureza da matria orgnica. A adsoro de ons ou molculas na superfcie das partculas do solo envolve a formao de complexos de superfcie. Um complexo de superfcie acontece no caso de um grupo funcional da superfcie reagir com um on ou molcula (dissolvidas na soluo) para formar uma unidade molecular estvel (SPOSITO, 1989). Os processos de adsoro podem ser reversveis ou irreversveis. O composto orgnico adsorvido pode ser dessorvido com vrios graus de dificuldade ou nunca ser dessorvido (SENESI, 1993). O grau e a dimenso da adsoro dependem da estrutura qumica dos compostos orgnicos e das caractersticas fsicas e qumicas do solo. Os HPAs de alto peso molecular tendem a serem adsorvidos pelo solo (HAMIDI, 2000). Senesi (1993) mostrou que os poluentes orgnicos possuem maior afinidade com a frao orgnica (em geral absoro) do que com a frao mineral do solo (em geral adsoro). Deste modo, a mobilidade dos poluentes maior em solos com baixo teor de matria orgnica. Grande parte dos hidrocarbonetos pode ficar adsorvida na matria orgnica. Existem radicais livres no hmus que podem reagir com os HPAs formando eltrons, ou seja, complexos aceptor-receptor, os quais podem iniciar ligaes covalentes (MAHRO et al., 1994). A matria orgnica do solo muito complexa e constituda por cidos hmicos e flvicos. O efeito da adsoro na migrao dos poluentes no solo depende desta ocorrer em 20

fraes orgnicas insolveis e imveis (cidos hmicos), ou de ocorrer em fraes orgnicas mveis, dissolvidas ou em suspenso (cidos flvicos). A matria orgnica do solo, sob a forma de cidos hmicos ou flvicos, pode assim atenuar ou facilitar o transporte de poluentes (SENESI, 1993). As reaes de oxidao-reduo afetam significativamente o transporte de poluentes orgnicos, e esto muito relacionadas com a atividade microbiolgica e com o tipo de substrato disponvel para os microrganismos (HAMIDI, 2000). Dependem igualmente do potencial de oxi-reduo do solo (HAMIDI, 2000) que expressa a tendncia do meio em doar e receber eltrons. Ou seja, para que a oxidao ocorra o potencial do solo tem que ser maior que o dos compostos orgnicos, que podem hidrolisar, oxidar ou reduzir-se rapidamente, em contato com a gua, resultando em novos compostos (HAMIDI, 2000). A volatilizao consiste na perda por difuso de compostos qumicos da fase lquida ou da fase slida do solo para a atmosfera (FREEZE & CHERRY, 1979; HAMIDI, 2000). Segundo Hamidi (2000), a volatilizao da fase slida para a fase gasosa do solo pouco significativa e pode ser desprezada. Segundo Mattney (1994) a taxa de volatilizao afetada pela volatilidade e viscosidade do poluente e profundidade, teor de umidade, porosidade e temperatura do solo.

6.4 Biodegradao de compostos orgnicos no solo

Nas camadas superficiais do solo as condies so mais favorveis biodegradao, devido a maior quantidade de oxignio e nutrientes disponveis aos microrganismos. Segundo Mattney (1994) o processo da biodegradao do petrleo pode ser representado da seguinte forma:
HxCy +(N,P,S) + O2cidos intermediriosCO2 + H2O + NO3-- + SO4-2- + energia + clulas de bactrias

Onde HxCy so hidrocarbonetos derivados do petrleo e N, P, S so os nutrientes nitrognio, fsforo e enxofre que so necessrios para o metabolismo e crescimento dos microrganismos. Durante a biodegradao o valor do pH diminui devido produo de cidos orgnicos intermedirios e de CO2 (MATTNEY, 1994). Os metablitos formados a partir da biodegradao dos HPAs como os cidos carboxlicos e os compostos fenlicos podem 21

interagir quimicamente com a frao orgnica do solo e serem incorporados no material hmico, formando ligaes residuais. A susceptibilidade dos compostos para a biodegradao aerbia ou anerbia depende da natureza e complexidade do composto e de fatores ambientais. Os compostos orgnicos na forma reduzida tendem a ser mais susceptveis biodegradao aerbica que os compostos que esto na forma oxidada, sendo estes mais susceptveis a biodegradao anaerbia (KNOX et al., 1993). Os HPAs de alto peso molecular so metabolizados em condies aerbias de forma lenta, devido a sua complexidade estrutural, baixa solubilidade forte adsoro matriz slida. A relao entre a persistncia ambiental do HPA e nmero crescente de anis de benzeno relatado em vrios estudos (BANERJEE et al., 1995; HEITKAMP & CERNIGLIA, 1987; BOSSERT & BARTHA, 1986). Shuttleworth et al. (1995) relataram que o tempo de degradao da molcula do fenantreno (trs anis de benzeno) pode variar de 16 a 126 dias enquanto que para a molcula do benzo(a)pireno (cinco anis de benzeno) pode variar de 229 a 1.400 dias. A hidrlise dos compostos orgnicos ocorre mesmo na ausncia da biodegradao e produz compostos susceptveis de biodegradao posterior (KNOX et al., 1993). As reaes de hidrlise alteram as propriedades fsicas e qumicas dos compostos, modificando sua mobilidade e comportamento no solo (SENESI, 1993). A hidrlise influenciada por processos biticos e abiticos. A hidrlise bitica afetada pela biomassa e pela concentrao de enzimas especficas do processo. Fatores abiticos da soluo aquosa como pH, temperatura, matria orgnica dissolvida, ons metlicos, teores de umidade influenciam a taxa de hidrlise (KNOX et al., 1993).

6.5 Microrganismos e biodegradao dos HPAs

A fitorremediao depende da melhor compreenso das funes exercidas pelas plantas nos ambientes terrestres e o conhecimento das suas interaes com outros componentes da biodiversidade, como por exemplo, com os microrganismos. A populao e a atividade de microrganismos esto associadas espcie vegetal (ALEXANDER, 1977). Muitos microrganismos so capazes de degradar os hidrocarbonetos de petrleo. Alguns so capazes de degradar hidrocarbonetos alifticos e cclicos, outros aromticos e alguns conseguem metabolizar ambos (ATLAS & BARTHA, 1992; LEAHY & COLWELL, 22

1990; ATLAS, 1981). Entre os aromticos de baixo peso molecular esto o benzeno, o tolueno e o xileno, que so componentes txicos do petrleo facilmente degradados pelos microrganismos. Molculas com estruturas mais complexas, contendo ramificaes e anis aromticos so degradados por um nmero menor de microrganismos e com uma taxa de degradao menor, se comparadas com molculas de estrutura mais simples. A induo de genes dos microrganismos responsveis pela degradao de HPAs pode ser feita pelo lanamento de molculas provenientes de lises e outros processos realizados pelas razes, como os compostos fenlicos (DONNELLY et al., 1994). Por exemplo, o salicilato um composto que atua como intermedirio na ao da enzima dioxigenase na degradao do naftaleno e induz os genes nah, que so os genes responsveis pela degradao do naftaleno e do benzoantraceno (YEN & SERDAR, 1988). Como as molculas de HPAs de alto peso molecular, em condies aerbicas, so degradadas mais lentamente que molculas de baixo peso molecular, sua degradao pode ser otimizada quando h outra fonte de carbono e energia para servir de substrato para os microrganismos. Desse modo, o poluente pode ser co-metabolisado pelos microrganismos, ou seja, ele deixa de ser a principal fonte de nutriente e passa a ser metabolizado junto com a fonte principal. Portanto, co-metabolismo consiste na ocorrncia da degradao de um composto somente na presena de outro composto orgnico, que serve como indutor dos genes necessrios ou como fonte principal de energia (MCCARTY, 1987). A adio de cometabolitos resulta na biodegradao de HPAs de alto peso molecular em um estudo realizado por McCutcheon & Schonoor, (2003). Portanto, os HPAs de alto peso molecular so degradados de forma mais lenta devido dificuldade dos microrganismos em obter energia suficiente a partir da sua degradao. A respirao basal (RB) reflete a atividade atual da microbiota do solo, responsvel pela degradao de compostos orgnicos. Cury (2002) mostrou que os valores de RB se relacionam diretamente com o nmero mais provvel de bactrias heterotrficas aerbias (NMP) e mostrou que h maior atividade microbiana no ponto mais contaminado. Segundo Cury (2002), as populaes microbianas em solos de mangue possuem potenciais degradadores de hidrocarbonetos, e isto deve estar relacionado adaptao destes microrganismos a grandes quantidades de matria orgnica presente nestes solos. O petrleo, por sua complexidade, no totalmente degradado por uma nica espcie de microrganismos. A degradao realizada por um consrcio de espcies de microrganismos e sua ampla capacidade enzimtica (LEAHY & COLWELL, 1990). McCutcheon & Schonoor (2003) testaram duas espcies de bactrias do gnero Sphingomonas usadas individualmente e em consrcio para degradar HPAs e verificaram que apenas as 23

molculas de baixo peso molecular (naftaleno, fenantreno e fluorantreno) foram degradadas pelo grupo individual, enquanto que o consrcio de espcies degradou todos compostos inclusive os de alto peso molecular. Vrias espcies de Pseudomonas, que utilizam normalmente hidrocarbonetos produzidos por plantas, algas e outros organismos, esto entre os potencialmente degradadores de hidrocarbonetos do petrleo (ATLAS, 1995). Isto refora o estudo de Wunsche et al. (1995) que encontraram uma dominncia do gnero Pseudomonas entre os microrganismos, especialmente P. boxyhydrogena em um estudo com solo exposto durante vrios anos contaminao com hidrocarbonetos. As reaes bioqumicas para a biodegradao dos HPAs foram descritas por Gibson & Subramanian (1984). Compreende-se que a primeira etapa do catabolismo de uma molcula de HPA por bactrias em condies aerbicas ocorre pela oxidao do HPA a um diidrodiol pela ao de um complexo de enzimas. O diidrodiol ento processado e por uma reao de quebra orto ou meta resulta em intermedirios centrais tais como os 3,4-dihidroxibenzeno e o 1,2-dihidroxibenzeno (HO-C6H4-OH) ou catecol, que so convertidos aos intermedirios do ciclo do cido tricarboxlico (VAN DER MEER et al., 1992). Em condies aerbicas, o processo ocorre primeiro em molculas de baixo peso molecular. O catabolismo inicia-se pela reao das enzimas monooxigenase ou dioxigenase, onde uma hidroxila adicionada ao anel aromtico; este ento sofre fisso originando um HPA com um anel a menos. A oxigenase uma enzima que promove a oxidao qumica dos hidrocarbonetos e est presente no processo de mineralizao dos HPAs. A decomposio da matria orgnica resulta na quebra dos compostos orgnicos e liberao de elementos essenciais que esto presentes nas molculas dos tecidos vegetais e animais. Bactrias e fungos so responsveis por cerca de 90% da mineralizao do carbono presente nos compostos orgnicos em decomposio (COUTINHO, 1999). O processo de mineralizao em determinado perodo depende de vrios fatores, tais como: temperatura, umidade, aerao, quantidade e natureza do material orgnico presente (MARY et al., 1996). Desta forma, a variao nesses fatores determina distintas velocidades na transformao do carbono orgnico para as formas minerais. A atividade microbiana aumenta a disponibilidade de gua e nutrientes na rizosfera e produz substncias reguladoras de crescimento e antibiticos que inibem o crescimento de patgenos no solo. Estes fatores favorecem o crescimento e desenvolvimento das plantas promovendo a otimizao do processo de fitorremediao.

24

6.6 Razes e Micorrizas

As razes promovem uma melhora na estrutura do solo e um aumento na rea de superfcie de interao com os microrganismos, tambm esto envolvidas na assimilao de ctions e anions e na excreo de substncias orgnicas e inorgnicas que resultam em um sistema qumico dinmico. Em resposta quantidade de nutrientes disponveis no solo, o sistema radicular pode alterar o pH da soluo do solo, o potencial de oxidao e a reduo de compostos na rizosfera. As plantas excretam entre outros, aminocidos, cidos carboxlicos, carboidratos, derivados de cidos nuclicos e enzimas (ALEXANDER, 1977). Estes compostos promovem o aumento da comunidade microbiana na rizosfera e conseqentemente ocorre um aumento na degradao de substncias orgnicas, alm de promoverem a floculao da argila no solo e a solubilizao de metais formando quelatos. As propriedades do sistema radicular que so importantes para a fitorremediao consistem na elongao, rea de superfcie, massa, profundidade de penetrao, quantidade e composio de matria orgnica e exudatos, proliferao de razes capilares e associaes com fungos e bactrias. Estas propriedades so influenciadas pelo ar, temperatura, temperatura do solo, disponibilidade de gua, concentrao de nutrientes, espcie e variedade da planta e propriedades do solo. Os fungos so importantes na decomposio de compostos orgnicos e no ciclo do carbono no ambiente (MEHARG & CAIRNEY, 2000). Existem no meio terrestre saprfitas de vida livre ou em associaes simbiticas com a vegetao e razes (micorrizas). A micorriza uma simbiose entre fungos e razes. A principal funo da micorriza o transporte de nutrientes. O fungo auxilia a transferncia de gua e nutrientes (nitrognio, fsforo e micronutrientes) do solo que no esto acessveis planta e nutrido por esta com carbono orgnico (em geral, sob a forma de sacarose). As micorrizas podem ser divididas em trs grupos (SMITH & READ, 1997): Ectotrficas que ocorrem tipicamente entre rvores e basidiomicetos; Endotrficas comumente encontradas nas orqudeas e nas Ericceas; Ectendotrficas que so uma forma intermediria entre os outros dois tipos, formadas por plantas herbceas. Os dois ltimos grupos so endomicorrizas, ou seja, elas entram nas clulas das razes durante a colonizao, ao contrrio das ectomicorrizas na qual o fungo simplesmente envolve a epiderme e parcialmente as clulas do crtex da raiz. 25

No contexto da biodegradao, importante ressaltar que os trs grupos de micorrizas apresentam capacidades saprfitas diferentes. As micorrizas endotrfitas so potencialmente degradadoras, enquanto que as ectotrficas apresentam capacidade de degradao moderada e as ectendotrficas so obrigatriamente simbiticas com pouca capacidade de degradao de compostos orgnicos (MICHELSEN et al., 1996). Todos os grupos de micorriza interagem e modificam as comunidades microbianas afetando indiretamente o processo de biodegradao (JONER & LEYVAL, 2003). Os fungos degradam lignina e complexos de hidrocarbonetos aromticos (MEHARG & CAIRNEY, 2000). Nestes processos, muitos fungos utilizam o citocromo P-450 monooxigenase para oxidar bifenilas policloradas (PCBs) e HPAs em xidos, os quais podem ser transformados pela epxido hidrolase em trans-diidrodiols. Estas reaes foram demonstradas para PCBs (ABRAMOWICZ, 1990) e HPAs (SUTHERLAND et al., 1995), incluindo benzo(a)antraceno e benzo(a)pireno. Em estudos realizados por Cerniglia (1997) e Novotny et al. (2000), foi mostrado que a espcie Phanerochaete chysosporium metabolizou PCBs e HPAs usando lignina peroxidase para formar quinona. Segundo Merkl et al. (2005) os fungos so um grupo de organismos importante para a fitorremediao de petrleo em solos tropicais, devido a sua tolerncia seca, ao pH baixo e deficincia de nutrientes. As micorrizas causam efeitos benficos na nutrio e fisiologia das plantas hospedeiras, aumentando sua tolerncia deficincia de nutrientes. Alguns estudos tentaram determinar o impacto das micorrizas no estabelecimento e crescimento de plantas em solos poludos (HEINONSALO et al., 2000; HSU & BARTHA, 1979), mas o aumento da tolerncia toxicidade difcil de se distinguir dos efeitos da melhora na nutrio das plantas. De qualquer forma os resultados indicaram um efeito favorvel das micorrizas.

26

7. FITORREMEDIAO

As plantas sempre estiveram em contato com diferentes substncias de ocorrncia natural no solo, como ligninas, a celulose, a quitina, os materiais hmicos e vrios compostos txicos, como os fenis, os diterpenos e os alcalides (MELO, 2001). Segundo Andrade et al. (2002) possivelmente por essa razo, os processos adaptativos evoluram e resultaram em diversos mecanismos fisiolgicos e formas de interaes com microrganismos que permite a degradao de compostos orgnicos em outros menos txicos, alm de substncias e minerais passveis de serem utilizados na nutrio vegetal. A tecnologia de fitorremediao envolve o uso de seres vivos, cuja sobrevivncia e desenvolvimento dependente das caractersticas ambientais que variam com os diferentes locais de aplicao, o que implica em um maior nmero de variveis a serem consideradas, em comparao com os tratamentos fsico-qumicos convencionais (ANDRADE et al., 2002). uma tecnologia que pode ser utilizada, com as devidas restries, nos casos de contaminao por metais, pesticidas, solventes, explosivos, petrleo e chorume (EPA, 2005) e, portanto, aplica-se a uma grande variedade de poluentes, inclusive alguns recalcitrantes. A fitorremediao apresenta esttica favorvel, pois imprime ao local da remediao o aspecto de uma rea de cultivo agrcola ou de paisagismo e outras vantagens associadas como baixo custo de implantao e manuteno e possibilidade de posterior reutilizao do solo. O material vegetal produzido pode ser convertido em matria prima para atividades como confeco de mveis, gerao de energia, produo de fibras etc. A viabilidade econmica e tecnolgica de aplicao deste processo est relacionada ao tempo para se obter resultados que dependente do ciclo da planta, da concentrao do poluente no solo e da presena e de outras toxinas que devem estar dentro dos limites tolerados pela planta (PLETSCH et al., 2000). Outro fator que deve ser considerado o risco de que as plantas mobilizem ou disponibilizem o contaminante no ambiente por volatilizao ou na cadeia alimentar. Por isso espcies de valor comestvel no so recomendadas para fitorremediao em pases em desenvolvimento. A Tabela 4 compara o custo da fitorremediao com os mtodos convencionais de remediao. O termo fitorremediao engloba todos os processos envolvidos na remediao de solos, sedimentos e sistemas de aqferos contaminados por meio da seleo e utilizao de espcies vegetais (SCHNOR et al., 1995 em MORENO & CORSEUIL, 2001).

27

Tabela 4 - Exemplo de comparao de custo.

Contaminante Custos com fitorremediao Dlares americanos Metais rea contaminada com petrleo 10 acres de rea contaminada Radionucldeos em guas superficiais 1 ha por 15cm de profundidade (diversos contaminantes) $2 a $6 por mil gales tratados $2,500 a 15,000 No listado CUNNINGHAM et al. (1996) No listado $500,000 $12 milhes PLUMMER (1997) RICHMAN (1997) $80 por jarda (91.4cm) cbica $70,000 Custo estimado empregando outras tecnologias $250 por jarda (91.4cm) cbica $850,000 JIPSON (1996) BLACK (1995) Fonte

Fonte: CHAPPELL, (1998) em SILVA (2005)

Como exemplos destes processos podem ser citados (i) a rizodegradao que consiste na degradao do poluente pela associao dos microrganismos com as razes e a fitoextrao seguida de (ii) fitoacumulao que consiste na acumulao de metais que no sofreram modificao nas razes ou nos tecidos da parte area da planta, Uma vez absorvidos pela raiz, os contaminantes podem sofrer (iii) fitodegradao que consiste na degradao ou detoxificao nos tecidos areos da planta ou (iv) fitovolatilizao, quando os compostos so volatilizados a partir das folhas para a atmosfera. Contaminantes que permanecem no solo podem ser transformados cometabolicamente pela ao de enzimas ou por microrganismos (colnias de bactrias ou fungos micorrzicos) associados simbioticamente com as razes (MORENO & CORSEUIL, 2001), sendo a rizodegradao, juntamente com a fitoacumulao de metais os tipos de fitorremediao mais conhecidos. A Tabela 5 resume os mecanismos e processos que atuam na interao plantasubstrato-microorganismos da rizosfera e que resultam na remediao de solos contaminados e respectivos grupos de contaminantes.

28

Tabela 5 - Mecanismos de fitorremediao.

Mecanismo Fitoextrao Rizofiltrao Fitoestabilizao Rizodegradao Fitodegradao Fitovolatilizao Processo Extrao e captura do contaminante Extrao e captura do contaminante Conteno do contaminante Destruio do contaminante Destruio do contaminante Extrao do contaminante do meio e liberao no ar Degradao do contaminante ou conteno Conteno do contaminante, controle erosivo Destruio do contaminante Meio Solo, sedimentos, pntanos Lenol dgua, aquiferos Solo, sedimentos, pntanos Solo, sedimentos, pntanos, lenol dgua Solo, sedimentos, pntanos, lenol dgua, aqferos Lenol dgua, solo, sedimentos, pntanos Lenol dgua, aqferos Solo, pntano, sedimentos Aqferos, lenol dgua Contaminante Metais, radionucldeos Metais, radionucldeos As, Cd, Cr, Cu, Hs, Pb, Zn Compostos orgnicos Compostos orgnicos, solventes clorados, fenis, herbicidas Solventes clorados, Se, Hg, As Compostos orgnicos e inorgnicos hidrossolveis Compostos orgnicos e inorgnicos Compostos orgnicos e inorgnicos hidrossolveis

Controle Hidrulico Cobertura Vegetal Corredores Riparianos

Fonte: FRICK et al. (1999) em SILVA (2005).

Os compostos orgnicos presentes em solos vegetados podem ter vrios destinos. Se o composto apresenta propriedades fsico-qumicas como baixa solubilidade em gua e alto log kwo improvvel que ele ser transportado para dentro da planta e nos tecidos vegetais. No entanto, se o composto orgnico possui caractersticas favorveis ao transporte (log kwo entre 0,5 e 3,0) provvel que ocorra a absoro e o transporte do composto na planta (BURKEN & SCHNOOR, 1996). A absoro dos compostos orgnicos se restringe compostos de baixo peso molecular ou compostos de alto peso molecular que tenham sido transformados fora da planta de modo a favorecer a absoro (por exemplo, o aumento da solubilidade por meio da hidroxilao). Depois de transportado do solo para a planta, o composto oxidado ou biodegradado in vivo, em seguida ocorre conjugao ou a reteno no vacolo ou na parede celular. Os dois processos iniciam-se no interior da planta com a hidroxilao do composto pelas enzimas monooxigenase (citocromo P-450) ou peroxidase (GUNTHER et al., 1998), que facilita o transporte dos compostos no polares nos tecidos vegetais porque os torna mais mveis. 29

Dependendo das caractersticas do composto, estas enzimas podem direcionar a reao de oxidao por vrios caminhos metablicos que resultam em gua e dixido de carbono. A etapa da conjugao utiliza acares (glicosilao), aminocidos e pequenos peptdeos (FIELD & THURMAN 1996). Os mecanismos que promovem o aumento da degradao na rizosfera no so totalmente conhecidos devido a sua complexidade. As explicaes baseiam-se no efeito direto das enzimas derivadas das razes (GRAMSS & RUEDESCHKO, 1998) e indiretos com o aumento da aerao no solo, aumento da comunidade microbiana e modificao da composio microbiana pela quantidade de carbono emitida nos exudatos das razes. A rizodegradao de poluentes orgnicos foi demonstrada para vrios compostos, ou mistura de compostos, como para os hidrocarbonetos alifticos (GNTHER et al., 1996), leo combustvel e outras misturas de hidrocarbonetos de petrleo (CHAINEAU et al., 2000; NICOLOTTI & EGLI, 1998) hidrocarbonetos policclicos aromticos (PRADHAN et al., 1998; SCHWAB & BANKS, 1995), explosivos (SICILIANO & GREER, 2000), pesticidas (HSU & BARTHA, 1979) e organoclorados (ANDERSON et al., 1993). A eficcia da rizodegradao pode ser observada na revegetao de solos contaminados. Segundo Fletcher (2000) o estudo da rizodegradao natural pode descrever tempo, espao e eventos ecolgicos crticos para o restabelecimento da vegetao em reas contaminadas e revelar fatores importantes como tolerncia da vegetao restabelecida, crescimento radicular e interaes na rizosfera, nveis de contaminantes e previso de tempo para restaurao da rea. A rizodeposio consiste no total de carbonos lanados pelas razes na rizosfera, que permite o estabelecimento e o crescimento da comunidade microbiana. A quantidade e a qualidade dos compostos orgnicos lanados no solo dependem da espcie vegetal, ciclo de vida e estgio de crescimento. Os compostos orgnicos rizodepositados dividem-se em cinco classes que so mostradas na Tabela 6. O efeito das plantas e da rizosfera na degradao de HPAs foi estudado por Aprill & Sims (1990), Ferro et al. (1994), Schwab et al. (1995) e Reilley et al. (1996). Em geral a presena de plantas aumentou a remoo do contaminante do solo. Rovira & Davey (1974) mostraram que o nmero de bactrias na rizosfera foi maior que na rea de solo no abrangida pelas razes. Os microrganismos mais encontrados foram pequenos bastonetes gram negativos, especialmente Pseudomonas sp, Flavobacterium sp e Alcaligenes sp (Barber, 1976). Ferro et al. (1994) avaliaram a mineralizao do pentaclorofenol e do fenantraceno usando o C14 em um solo com Agropyron desertorum, uma gramnea. Aps 155 dias em solos 30

com plantas, 22% do pentaclorofenol foi convertido em C14O2 e em solo sem vegetao apenas 5% do pentaclorofenol foi mineralizado. Tabela 6 - Cinco classes de compostos rizodepositados e seus potenciais de influncia na rizodegradao.
Classes de rizodeposio Exudatos da raz Secrees da raz Mucilagens Mucigel Origem metablica Metabolismo primrio da planta Metabolismo primrio e secundrio das plantas Metabolismo primrio da planta Metabolismo primrio da planta e das bactrias Metabolismo primrio e secundrio das plantas Exemplos Carboidrados, aminocidos e cidos orgnicos Enzimas e carboidratos Carboidratos e restos celulares Carboidratos e restos celulares Compostos fenlicos e restos celulares Modo de rizodeposio Emitido pelas clulas da raz Secreo ativa das clulas da raz Secreo ativa e perda passiva da raz ecreo ativa e perda passiva da raiz e das bactrias Perda passiva por meio da autlise das clulas da raz Potencial de influncia Aumento da biomassa microbiana Aumento da biomassa e da biodisponibilidade Aumento da biomassa e da biodisponibilidade Aumento da biomassa e da biodisponibilidade Aumento da biomassa, induo de genes e catabolismo

Restos celulares das razes

Fonte: ROVIRA (1979).

Schwab & Banks (1994) investigaram a degradao de pireno na rizosfera de quatro gramneas (Medicago sativa, Festuca arundinacea, Andropogon gerardii e Sorghum vulgare). Aps quatro semanas houve um decrscimo na concentrao de pireno de 100 mg kg-1 de solo para 12,6 mg kg-1 de solo. Aps vinte e quatro semanas a concentrao de pireno encontrada foi menor que 2,4 mg kg-1 de solo. Lee (1996) investigou a degradao do benzo(a)pireno utilizando C14 marcado em solos com sorgo (Sorghum vulgare). Aps 190 dias constatou que a mineralizao do benzo(a)pireno foi maior nos solos com plantas, sendo que 1,3% mineralizou formando C1402; 0,121% ficou retido nos tecidos das plantas; 0,115% ficou retido nos tecidos das razes; 0,006% ficou retido nos brotos radiculares e 92% permaneceu no solo. No controle (solos sem plantas) 0,7% foi mineralizado e 96% permaneceu no solo. A grande quantidade de contaminante retida no solo foi associada s caractersticas do composto que possui alto peso molecular (cinco anis). Gunther et al. (1996) estudando a degradao de hidrocarbonetos de petrleo na rizosfera do azevm (Lolium multiforme) demonstrou que aps 22 semanas houve uma 31

reduo de 97% dos hidrocarbonetos no solo com plantas e 82% no solo sem plantas. As anlises mostraram que os microrganismos da rizosfera foram responsveis pela degradao.

32

8. DESEMPENHO DE ESPCIES VEGETAIS

A seleo e a interao de espcies vegetais um fator importante no processo da fitorremediao. Para que a fitorremediao seja bem sucedida necessrio que as espcies selecionadas sejam capazes de germinar, se estabelecer e florescer nas condies daquele ambiente. Para tanto, necessrio conhecer o impacto da rea no crescimento das plantas e na degradao do contaminante. A capacidade de sobrevivncia da planta no ambiente pode ser considerada como potencial fitorremediador (MCCUTCHEON & SCHNOOR, 2003). Como parte do processo de fitorremediao, Hutchinson et al. (2003) sugerem que a seleo de espcies seja baseada na reviso de informaes relevantes, incluindo literatura publicada e consultas com especialistas locais, em viveiros e casas de vegetao comerciais, cooperativas agrcolas, universidades, servios de extenso que iro avaliar e sugerir espcies vegetais que apresentam bom crescimento no local. As caractersticas desejveis para as espcies selecionadas para fitorremediao dependem da adequao da espcie ao solo selecionado e s condies climticas do local, alm da finalidade da rea a ser remediada. Em pases com populao pobre, por exemplo, o uso de espcies comestveis no recomendado para a descontaminao ambiental, a no ser que um controle rigoroso do material comestvel seja feito. No caso de fitoextrao, fitoacumulao ou formao de sub-produtos txicos, tal material biolgico deve ser retirado (colheita) e disposto, por exemplo em aterro ou incinerado. De modo geral, devem ser consideradas caractersticas tais como ciclo de vida da planta, sistema radicular, potencial de formao de simbiose com microorganismos e resistncia. A concentrao do poluente e a presena de toxinas devem estar dentro dos limites tolerados pela planta para no comprometer o tratamento. Existe uma correlao entre biomassa radicular e taxa de fitorremediao. Em espcies perenes o crescimento radicular contnuo e os microrganismos da rizosfera permanecem ativos. Tais espcies possuem manejo simplificado comparado s espcies anuais que precisam ser semeadas novamente a cada ciclo e em reas propensas a eroso isto pode ser inconveniente (HUTCHINSON et al., 2003). Alm disso, as rvores promovem uma variedade de servios ambientais incluindo o seqestro de dixido de carbono atmosfrico (podendo obter ainda crditos de carbono), aumento da biodiversidade, promove a esttica e a recreao associada remediao da rea (ROOCKWOOD et al., 2001), o que favorece seu uso na fitorremediao. Entretanto, as espcies de ciclo curto, produzem biomassa mais rapidamente e so portanto desejveis em projetos de fitorremediao onde h urgncia de 33

descontaminao da rea, por exemplo, prximo a centros urbanos onde os riscos sade humana assumem carter prioritrio. Existem espcies que so tolerantes s condies de saturao hdrica, no entanto, a degradao de HPAs nestas reas muita lenta em funo da predominncia de condies anaerbias.

8.1 Germinao

A germinao uma seqncia de eventos fisiolgicos que ocorrem nas sementes e influenciada por fatores externos (ambientais) e internos (dormncia, inibidores e promotores da germinao), onde cada fator pode atuar sozinho ou em interao com os demais (IPEF, 2006). A germinao um fenmeno biolgico considerado pelos botnicos como a retomada do crescimento do embrio, com o subseqente rompimento do tegumento pela radcula. Entretanto, para os tecnlogos de sementes, germinao definida como a emergncia e o desenvolvimento das estruturas essenciais do embrio, manifestando a sua capacidade para dar origem a uma plntula normal, sob condies ambientais favorveis (IPEF, 2006). Em sntese, tendo-se uma semente vivel em repouso, por quiescncia ou dormncia, quando so satisfeitas as condies externas (do ambiente) e internas (intrnsecas do indivduo), ocorre o crescimento do embrio, o qual conduzir germinao. O processo germinativo compreende aqueles eventos celulares e metablicos que se iniciam com a absoro de gua por sementes quiescentes e culminam com o alongamento do eixo embrionrio (BEWLEY & BLACK, 1994), envolvendo vrias etapas (POPINIGIS, 1977), que por sua vez, so influenciadas por fatores tais como: luz, temperatura, disponibilidade de gua e oxignio. Marcos Filho (1986) destaca que, no processo de germinao ocorre uma srie de atividades metablicas, baseadas em reaes qumicas e que cada uma delas apresenta exigncias quanto temperatura, principalmente porque dependem da atividade de sistemas enzimticos complexos, cuja eficincia diretamente relacionada temperatura e disponibilidade de oxignio. As sementes tm capacidade de germinar sob faixa de temperatura caracterstica da espcie (BEWLEY & BLACK, 1994), ou seja, a temperatura para a germinao no apresenta um valor especfico, mas pode ser expressa em termos das temperaturas cardeais, isto , 34

mnima, mxima e tima. A temperatura tima definida como sendo aquela em que ocorre o mximo de germinao em tempo relativamente curto (NOVEMBRE, 1994). A temperatura tima para a germinao pode variar em funo da condio fisiolgica da semente (POPINIGIS, 1977). Da mesma forma, o efeito da temperatura sobre a germinao pode sofrer influncia da espcie e da regio de origem e de ocorrncia. Normalmente, sementes de espcies de clima tropical germinam bem em temperaturas mais altas, ao contrrio daquelas de clima temperado, que requerem temperaturas mais baixas. Para a maioria das espcies tropicais, a temperatura tima de germinao encontra-se entre 15C e 30oC e a mxima varia entre 35C e 40oC. De maneira geral, temperaturas abaixo da tima reduzem a velocidade de germinao, resultando em alterao da uniformidade de emergncia das plntulas (IPEF, 2006). A gua o fator que mais influencia o processo de germinao. A absoro de gua pela semente ocorre por embebio, um processo fsico relacionado s caractersticas de permeabilidade do tegumento e das propriedades dos colides que constituem as sementes, cuja hidratao uma de suas primeiras conseqncias. Com a rehidratao dos tecidos da semente ocorre a intensificao da respirao e de todas as outras atividades metablicas, que resultam em energia e nutrientes, necessrios para a retomada de crescimento do eixo embrionrio (CARVALHO & NAKAGAWA, 2000). O excesso de umidade, no entanto, provoca decrscimo na germinao, porque impede a penetrao do oxignio e reduz todo o processo metablico resultante (IPEF, 2006). A velocidade de absoro de gua varia com a espcie, com o nmero de poros distribudos sobre a superfcie do tegumento, disponibilidade de gua, temperatura, presso hidrosttica, rea de contato da semente com a gua, foras intermoleculares, composio qumica e qualidade fisiolgica da semente. A absoro de gua pela semente muito rpida em condio de excesso de umidade no solo, ocorrendo desorganizao das membranas celulares, rupturas nos tecidos, perda de solutos para o meio e surgimento de plntulas anormais e pouco vigorosas (LUCCA & REIS, 1995). O movimento da gua para o interior da semente devido tanto ao processo de capilaridade quanto de difuso e ocorre do sentido do maior para o menor potencial hdrico (IPEF, 2006). A avaliao da germinao das sementes efetuada pelo teste de germinao, conduzido em laboratrio sob condies controladas e por meio de mtodos padronizados que visam, principalmente, avaliar o valor das sementes para a semeadura e comparar a qualidade de diferentes lotes (NOVEMBRE, 1994; MARCOS FILHO et al., 1987). 35

A germinao constitui a fase do ciclo de vida que determina a distribuio das plantas e o estudo sobre a ecologia desse processo e o conhecimento acerca da biologia das sementes pode ser de grande valor para compreender as etapas do estabelecimento de uma comunidade vegetal, bem como sua sobrevivncia e regenerao natural (VZQUEZ-YANES & OROZCO-SEGOVIA, 1993).

8.2 Efeito txico do petrleo sobre as plantas

A implantao da fitorremediao em reas contaminadas requer que a taxa de germinao e o crescimento da planta no sejam afetados pela presena do contaminante. Portanto, necessrio conhecer o efeito txico do contaminante na espcie utilizada para a fitorremediao, antes de realizar o experimento em escala de campo. A fitotoxicidade definida como qualquer alterao no desenvolvimento normal das plantas cultivadas, provocada por efeitos txicos provenientes do uso de produtos qumicos. (ANVISA, 1997). Os efeitos adversos do petrleo sobre as plantas so resultantes de efeitos fsicos e da toxicidade qumica do leo e variam da reduo na transpirao e fixao de carbono morte da planta. A taxa de reduo destes processos depende da extenso da rea da planta coberta pelo leo, que est relacionada quantidade de leo derramada, a velocidade do vento e ao tipo e disperso do leo (PEDROZO et al., 2002). Segundo Pezeshki et al. (2000), o impacto fsico do leo inclui a cobertura da parte area das plantas e da superfcie do solo. O leo presente nas folhas pode bloquear a transpirao e reduzir a fotossntese porque reduz a entrada de CO2 devido ao bloqueio dos estmatos. E o leo derramado sobre a superfcie do solo, restringe a movimentao de oxignio no solo, favorecendo as condies anaerbicas que causam o estresse nas razes (PEZESHKI et al., 2000). O impacto qumico varia com o tipo de leo, os leos pesados tm menor efeito em relao aos leos leves nas plantas (PEZESHKI et al., 2000). A literatura relata a reduo da germinao na presena de HPAs em solos com contaminao recente e em solues de HPAs (SMITH et al., 2005; SMRECZAK & MALISZEWSKA-KORDYBACH, 2003; HENNER et al., 1999; CHANEAU et al., 1997; REN et al., 1996;), assim como na inibio da produo de biomassa (CHANEAU et al., 1997; GALLEGOS MARTINEZ et al., 2000; MERKL et al., 2004b; BOSSERT & BARTHA, 1985; REIS 1996; BAKER, 1970). 36

Foi demonstrado que a toxicidade dos HPAs sobre microrganismos, animais e plantas aquticas aumentada com a ao da radiao (REN et al., 1994; ANKLEY et al., 1994; HUANG et al., 1993; NEWSTED & GIESY, 1987; ORIS & GIESY, 1985). Na planta aqutica Lemma gibba os HPAs foram fotomodificados pela ao da radiao ultravioleta em uma mistura complexa e no definida de fotoprodutos que foram mais txicos que os compostos iniciais (REN et al., 1994; HUANG et al., 1993). Por outro lado, no processo de landfarming, tcnica em que o resduo oleoso ou solo contaminado disposto no solo como forma de tratamento, sob condies controladas, para promover a degradao e imobilizao dos contaminantes (CETESB, 2006) o impacto da radiao solar promove efeitos benficos e que devem ser considerados pela sua ao significativa na degradao de resduos, como os HPAs (US TECHICAL LETTER No 1110-1-176, 2006). Como a luz um fator fundamental para o crescimento das plantas, durante a realizao dos testes ela pode promover a fotomodificao dos compostos. Altas concentraes do contaminante podem inibir o crescimento da planta e limitar a aplicao da fitorremediao em alguns locais (SILVA, 2005), por isso a determinao da concentrao do contaminante freqentemente a meta inicial na remediao. Uma vez que a fitorremediao uma tecnologia emergente, ainda h pouca informao a respeito das concentraes de contaminantes que podem ser alcanadas pelos vrios tipos de fitorremediao.

37

9. MATERIAIS E MTODOS

9.1 Reviso bibliogrfica e seleo das espcies

Com o objetivo de obter conhecimentos acerca dos processos que participam da fitorremediao, foi conduzida reviso bibliogrfica abrangendo aspectos tais como: caracterizao do contaminante estudado (leo cru), interao contaminante-solo, atividades microbiolgicas e espcies vegetais com propriedades ou potencial de uso na fitorremediao. Para tanto, foi utilizado o sistema de busca do ScienceDirect disponibilizado pela CAPES, artigos publicados em peridicos cientficos e congressos e relatrios tcnicos na Internet. A seleo das espcies utilizadas nos experimentos do presente estudo foi baseada na lista publicada pelo Phytopet Database (PHYTOPET, 2005), na consulta com especialistas e na literatura cientfica. Foram utilizados critrios para seleo distintos, para que o grupo de espcies testadas fosse heterogneo o suficiente para cobrir uma gama diversificada de atributos, tais como (Anexo II): espcies no comestveis (pelo menos in natura) e de diferentes grupos (florestais, oleaginosas e gramnea); velocidade de crescimento e produo de biomassa (remediao rpida); espcies nativas, para uso prximo aos ecossistemas frgeis ou reas de proteo ambiental; adaptao s condies edafo-climticas locais; potencial de produo de biodiesel. Foram ento, selecionadas as espcies B. brizantha (Bb, H. annus (Ha), A. holosenicea (Ah), R. comunnis (Rc), G. max (Gm), T. granulosa (Tg), L. leucocephala (Ll). A consulta bibliogrfica revelou que os estudos de tolerncia de espcies vegetais a concentraes de petrleo (leo cru) no solo apresentavam limites dependendo da espcie em 3% e 5% (MERKL et al., 2004b), 6% (TAVARES et al., 2005). Por isso foi feita uma escala de concentraes de petrleo para avaliao da tolerncia das espcies vegetais utilizadas iniciando em concentraes de 0,05% at um mximo de 6%.

38

9.2 Condies experimentais utilizadas Com o objetivo de verificar a tolerncia de diferentes espcies presena de leo durante o perodo de germinao e o incio de crescimento de biomassa, sementes foram colocadas para germinar em meio de areia contendo concentraes distintas de leo cru de petrleo diretamente proveniente de duas plataformas off-shore de explorao. Com o objetivo de avaliar o desempenho das espcies em diferentes ambientes, testes de germinao foram conduzidos em 3 condies experimentais: (1) Germinador de cmara Os germinadores consistem de uma cmara de paredes duplas, adequadamente isolada por uma camada de ar ou de material isolante a fim de diminuir variaes internas de temperatura, e equipada com um conjunto de bandejas, onde as amostras so colocadas para germinar no escuro ou na luz artificial, com temperatura e umidade controladas (BRASIL, 1992). (2) Sala climatizada ou germinador de sala Este tipo de germinador, cujos princpios de construo e funcionamento so semelhantes ao de cmara, difere apenas em suas dimenses, que so suficientemente grandes para permitir a entrada de pessoas. As amostras so colocadas em prateleiras laterais ao longo da passagem central, com luz artificial, temperatura e umidade controlada (BRASIL, 1992). (3) Casa de vegetao Refere-se a uma estrutura com paredes, um teto e um piso projetado e usado, principalmente, para o crescimento de plantas em ambiente controlado e protegido. As paredes e o teto so geralmente construdos de material transparente ou translcido para permitir a passagem de luz solar. Dificuldades materiais e de infra-estrutura disponvel impediram a reproduo na ntegra de todos os experimentos em cada uma das trs condies ambientais eleitas em ambos os leos. A Tabela 7 resume as espcies estudadas, tipos de leo e concentraes, assim como condies experimentais utilizadas no presente estudo.

39

Tabela 7 - Espcies e condies experimentais utilizados nos testes de germinao.

Origem do leo Concentraes do leo Espcie vegetal B. brizantha (Bb) H. annus (Ha) A. holosenicea (Ah) R. comunnis (Rc)* G. max (Gm) T. granulosa (Tg) L. leucocephala (Ll) Plataforma de Alagoas 0%, 0,05%, 0,5% Germinador X X 0%, 0,05%, 0,5%, 2%, 4%, 6% Sala climatizada X X X X X X Plataforma de Campos 0%, 0,05%, 0,5%, 2%, 4%, 6% Casa de vegetao X X

* foram utilizadas duas cultivares distintas Por exemplo, dois tipos de leos crus foram utilizados, ao invs de um, conforme a inteno original de projeto, devido dificuldade de obteno de leo-cru de uma nica bacia de explorao para todos os experimentos. Tal fato, no entanto, revelou aspectos interessantes de toxicidade diferenciada dos dois leos (vide RESULTADOS). O nmero de espcies testadas em cada ambiente tambm refletiu a disponibilidade de espao e de sementes. As concluses referentes influncia das diferentes condies ambientais so, portanto, limitadas. Entretanto, a comparao do desempenho de cada espcie frente a diferentes concentraes de leo e entre espcies na mesma condio ambiental, foi possvel para seis das sete espcies estudadas em sala climatizada com o mesmo leo.

9.3 Caracterizao dos dois tipos de leo cru utilizados

Dois leos crus de origens, composies originais e idades distintas foram obtidos, sendo um da bacia de Alagoas (AL) e outro da bacia de Campos (CP). O leo AL era um leo envelhecido, extrado e armazenado por tempo desconhecido. O leo CP, por outro lado, foi extrado a poucos dias antes do seu fornecimento para o experimento em questo. O fator envelhecimento provavelmente alterou a composio do leo AL, e pode ter sido um dos

40

fatores que resultou em toxicidades distintas para a mesma espcie quando comparado com o leo jovem CP, como ser observado adiante. Os dois leos foram caracterizados em laboratrio quanto densidade, hidrocarbonetos totais de petrleo (TPHs), benzeno, tolueno, etileno, xileno e 1,2,3trimetilbenzeno e 1,2,5 trimetilbenzeno (BTEXT) e hidrocarbonetos policclicos aromticos

(PAHs). As amostras de petrleo foram diludas em diclorometano (Tedia grau pesticida) em uma proporo de 1g:1000mL. As amostras foram analisadas inicialmente em um cromatgrafo Agilent 6820 com detector de ionizao na chama (CG-DIC), empregando Hlio como fase mvel a 2,0 mL/min, com injeo sem diviso de amostra (splitless). A temperatura do injetor foi de 250C e do detector de 300C. Foi empregada uma coluna HP5MS de 30 m de comprimento, 0.32 mm de espessura e 0.25 m de filme. A temperatura inicial da coluna foi de 40C, mantida por 6 min, sendo ento aquecida a 10C/min at 300C. Para quantificao do benzeno, tolueno, xileno e 1,2,3-trimetilbenzeno foi usada uma mistura padro de BTEXT da Chemservice (USTWI-1JM) e para os HPA foi usada mistura padro da Supelco SS EPA 610. A identificao dos picos de BTEXT e de HPAs foi realizada em um cromatgrafo Agilent 6890 com detector seletivo de massas Agilent MSD 5973, usando as mesmas condies operacionais do CG-DIC, inclusive a coluna cromatogrfica. O espectrmetro de massas foi operado em modo SIM (single on monitoring), com o objetivo de gerar um cromatograma somente com os compostos aromticos. Os ons caractersticos de cada composto foram: Pireno (202); Benzo(a)antraceno (228); Criseno (228); Benzo(a)fluoranteno (252); Benzo(k)fluoranteno (252); Benzo(g,h,i)perileno (276); Dibenzo(a,h)antraceno (278); Antraceno (178); Fenantreno (178); Acenafteno (154); Acenaftileno (152); Fluoranteno (202); Fluoreno (166); Indeno(1,2,3-cd)pireno (276); Naftaleno (128); Benzeno (78); Tolueno(92); Etil benzeno (116); Xilenos (116); Trimetilbenzenos (130). Para a medio da densidade dos leos foi utilizado um aermetro (densmetro).

41

9.4 Testes em germinador O leo AL foi adicionado areia previamente esterilizada a 120oC (1 atm) durante uma hora. A areia esterilizada mida foi contaminada nas concentraes de 0% (controle), 0.05% e 0.5% (peso seco). Caixas do tipo gerbox (11x11x4 cm) foram preenchidas com 150g de areia para as espcies Brachiaria brizantha (braquiria) e Helianthus annus (girassol). Antes de utilizadas, as caixas gerbox foram desinfetadas com lcool etlico 10% . Para cada concentrao, foram feitas quatro repeties com cinqenta sementes em cada, resultando em doze unidades experimentais para Brachiaria brizantha. Devido ao maior tamanho das sementes, para Helianthus annus oito repeties com vinte e cinco sementes em cada e vinte e quatro unidades experimentais foram montadas. Antes do plantio todas as sementes foram desinfetadas com soluo de hipoclorito 5% por quinze minutos e enxaguadas vrias vezes com gua esterilizada. As instrues do Manual Brasileiro para Anlise de Sementes (BRASIL, 1992) foram seguidas de forma que as sementes de Helianthus annus (variedade Embrapa 2000) foram dispostas entre o substrato e colocadas no germinador de 20-300C e Brachiaria brizantha (variedade Marangatu) sobre o substrato no germinador de 300C, luz artificial branca (fotoperodo 12h), umidade relativa 90 a 95%. Por trs semanas consecutivas foram contados o nmero de plntulas completas e sementes mortas. As sementes com fungo foram contadas e retiradas do gerbox. As plntulas contadas foram retiradas do substrato, lavadas e separadas a parte rea da raiz. O material foi seco em estufa a 400C por 24 horas e em seguida pesado para determinao da biomassa seca area e radicular para cada tratamento.

9.5 Testes na casa de vegetao O experimento foi conduzido no campo experimental da PESAGRO-RIO, Estao experimental de Itagua-RJ sob as condies agroclimticas de Seropdica-RJ, de 09/03/2006, data de implantao a 29/03/2006. leo CP foi adicionado areia fina (0,20-0,05 mm) previamente esterilizada a 120oC (1 atm) durante uma hora. A areia esterilizada mida foi misturada nas concentraes de 0% (controle), 0.05%; 0.5%; 2%; 4% e 6% (peso seco). 42

Foi utilizado o sistema de bandejas multicelulares para produo de mudas de Ricinus comunnis (variedade IAC-80) (128 clulas, 31,2g de substrato/ clula) e de Leucaena leucocephala (200 clulas, 20g de substrato/ clula). As bandejas foram preenchidas com um total de 4000g de areia contaminada e controle (0%). Antes do plantio as sementes foram desinfetadas com soluo de hipoclorito 5% por quinze minutos e enxaguadas com gua esterilizada. As bandejas foram colocadas em casa de vegetao coberta com plstico transparente e sombrite 50% nas laterais e a irrigao foi realizada de forma a manter as condies necessrias de umidade para a germinao. Por trs semanas consecutivas foram contados o nmero de plntulas completas e sementes mortas. As sementes com fungos foram contadas e retiradas das bandejas. As plntulas foram retiradas do substrato, lavadas e a parte rea foi separada da raiz. O material foi seco em estufa a 600C por 24 horas e em seguida pesado para determinao da biomassa seca area e radicular para cada tratamento.

9.6 Experimento em sala climatizada

O experimento em sala climatizada (sala de cultivo de tecidos vegetais in vitro) foi o mais completo, tanto em termos de espcies estudadas quando em concentraes de leo. O leo AL (tambm utilizado em casa de vegetao) foi adicionado areia fina (0,20-0,05 mm) previamente esterilizada a 120oC (1 atm) durante uma hora. A areia esterilizada mida foi misturada nas concentraes de 0% (controle), 0.05%; 0.5%; 2%; 4% e 6% (peso seco). Caixas plsticas transparentes (19 x 11 x 5,5 cm) foram preenchidas com 400g de areia e usadas para Brachiaria brizantha (variedade Marangatu), Acacia holosericea, Tibouchina granulosa, Glicine max (variedade M-Soy 5826) e Leucaeana leucocephala. Caixas plsticas transparentes grandes (16 x 25 x 6,5 cm) foram preenchidas com 1000g de areia e usadas para Helianthus annus (variedade Embrapa 2000) e Ricinus communis (variedade Guarani). Antes de usadas s caixas foram desinfectadas em soluo de hipoclorito 10%. Foram feitas quatro repeties com cinqenta sementes em cada, resultando em vinte e quatro unidades experimentais para cada espcie testada, com exceo da Ricinus communis onde devido ao maior tamanho das sementes e o tamanho da caixa utilizada, foram necessrias oito repeties com vinte e cinco sementes em cada e quarenta e oito unidades experimentais. 43

Para aumentar a taxa de germinao, as sementes de Ricinus communis, Brachiaria brizantha, Acacia holosericea foram escarificadas. Foram montados controles (0%) com sementes sem escarificao. A escarificao da Riccinus comunnis foi feita por imerso em gua quente (800C) por um minuto seguido por imerso em gua fria (aproximadamente100C) por um minuto. O procedimento foi repetido trs vezes. Para escarificao da Brachiaria brizantha 5 ml de soluo KNO3 a 0,2% foi adicionado em cada caixa. Para a Acacia holosericea a escarificao foi feita por imerso em gua quente (800C) por dois minutos. Antes do plantio todas as sementes foram desinfetadas com soluo de hipoclorito 5% por quinze minutos e enxaguadas com gua esterilizada. As instrues do Manual Brasileiro para Anlise de Sementes (BRASIL, 1992) foram seguidas de forma que as sementes de Ricinus communis, Glicine max e Helianthus annus foram dispostas entre o substrato e Brachiaria brizantha, Acacia holosericea, Tibouchna granulosa sobre o substrato. As caixas foram colocadas em sala climatizada com temperatura variando de 24 a 250C, umidade de 98% e foto-perodo de 8 a 12h (luz artificial branca e lmpada especial agrolux). Por cinco semanas foram contados o nmero de plntulas completas e sementes mortas. Sementes com fungos foram contadas e retiradas das caixas. As plntulas contadas foram retiradas do substrato, lavadas e separadas a parte rea da raz. O material foi seco em estufa a 600C por 24 horas e em seguida pesado para determinao da biomassa seca area e radicular para cada tratamento. Sementes mortas (que no germinaram) e sementes com fungo foram contadas e retiradas das caixas.

9.7 Anlise de germinao precoce, tardia e total

Devido ausncia de um protocolo experimental para estes testes as anlises foram baseadas no Manual Brasileiro para Anlise de Sementes (BRASIL, 1992). As variveis analisadas (germinao, biomassa area e radicular) foram avaliadas em dois perodos conforme recomendado pelo manual. 44

Neste estudo utilizou-se o termo precoce para as sementes que germinaram no incio do perodo germinativo e tardio para as sementes que germinaram tardiamente, prximo finalizao do perodo germinativo. Foram analisadas as taxas de germinao total e separadamente a germinao precoce e germinao tardia. Tal anlise em separado decorreu da observao de que o leo em algumas espcies e em concentraes especficas antecipa ou adia a germinao quando comparados ao controle. Por esse motivo, as taxas de germinao foram computadas separadamente e de forma agregada, e as anlises estatsticas foram tambm conduzidas para as trs categorias.

9.8 Anlises estatsticas

Para as anlises estatsticas, foram utilizados os softwares Analyse-it (Version 1.71, Analyse-it Software Ltd, 1997-2000) e Minitab (Release 12.23, Minitab Inc., 1999). Teste de normalidade Anderson-Darling foi aplicado s sete variveis estudadas (germinao precoce, germinao tardia, germinao total, produo de biomassa radicular e area em plntulas de germinao precoce, produo de bimassa radicular e areas em plntulas com germinao tardia) para cada uma das sete espcies estudadas (B. brizantha, H. annus, A. holosenicea, R. comunnis, G. max, T. granulosa, L. leucocephala), em seis diferentes tratamentos (0%, 0,05%, 0,5%, 2%, 4% e 6%) e trs condies experimentais (Germinador GE; Casa de Vegetao CV; Sala Climatizada SC). Tendo em vista que um grande nmero de variveis no seguiu distribuio normal e, tendo em vista que as formas mais comuns de transformao dos dados no resultaram em distribuio normal, optou-se num primeiro momento, por procedimentos no-paramtricos para comparao entre tratamentos (diferentes concentraes de leo) e respectivos controles para cada varivel, espcie estudada e condio experimental. Utilizou-se = 0,05 para todas as anlises. Kruskal-Wallis testa a hiptese de igualdade entre medianas (one-way) para duas ou mais populaes. Tal teste oferece uma alternativa no-paramtrica anlise de varincia ANOVA-one-way. O teste Kruskal-Wallis busca diferenas entre as medianas das populaes. Tal teste mais poderoso (intervalos de confiana mais estreitos, em geral) do que o teste de mediana de Mood para analisar dados de diferentes distribuies, inclusive normal, mas menos robusto contra outliers. 45

O menor valor absoluto de z obtido pelo Mruskal-Wallis, indica que o rank mdio para o tratamento respectivo (conc. de leo) difere menos do rank mdio para todas as observaes; z negativo significa que o rank mdio do respectivo tratamento inferior ao rank mdio para todas as observaes. Um z positivo alto indica que o rank mdio para o respectivo tratamento mais alto que o rank mdio para todas as observaes. Assumindo = 0.05, p inferior a esse valor significa que a Hiptese 0 (H0: medianas iguais) rejeitada, em favor da hiptese alternativa (H1: existe pelo menos uma diferena significativa entre os grupos de tratamentos). Uma vez que o teste Kruskal-Wallis no permite verificar qual diferena entre os diferentes tratamentos (concentraes do leo) significativa, foi necessrio recorrer ao teste no paramtrico de comparao de dois grupos Mann-Whitney, para testar significncia para aqueles tratamentos onde a Hiptese 0 (H0) foi rejeitada, com o objetivo de verificar qual tratamento est diferindo significativamente do controle. A representao grfica escolhida foi boxplot. Um boxplot consiste de uma caixa, linhas e outliers. Outliers so valores extremos abaixo ou acima dos limites mnimo e mximo respectivamente e so representados por asterisco (*). A mdia representada por um ponto vermelho. Limite inferior: Q1 1.5 (Q3-Q1) Limite superior: Q3 + 1.5 (Q3-Q1)

outlier Extenso da linha terminando no valor mais alto dentro do limite superior 3 quartil (Q3) mdia mediana 1 quartil (Q1) Extenso da linha terminando no valor mais baixo dentro do limite inferior

46

10. RESULTADOS E DISCUSSO

10.1 Caracterizao dos leos crus utilizados As tabelas 8, 9 e figuras 4 e 5 apresentam a caracterizao dos leos crus utilizados. Tabela 8. Densidade relativa dos leos.
leo AL CP Densidade relativa (g/ ml) 0,824 0,892

API* Composio Leve Pesado

0

40,20 27,1

* 0API = (141,5/gravidade especfica) 131,5 Tabela 9. BTEXT e HPAs das amostras de petrleo: CG-DIC realizadas no Agilent 6820 da UERJ; CG-DSM realizadas no Agilent 6890 da Peugeot.
Hidrocarbonetos Benzeno Tolueno Etil benzeno m+p-xileno o-xileno 1,2,3-trimetilbenzeno 1,3,5-trimetilbenzeno Naftaleno Acenaftileno Acenafteno Fluoreno Antraceno Fenatreno Fluoranteno Pireno Benzo(a)antraceno Criseno Benzo(b)fluoranteno Benzo(k)fluoranteno Benzo(a)pireno Indeno(1,2,3-c,d)pireno Dibenzo(a,h)antraceno Benzo(g,h,i)perileno BTEXT totais HPAs totais Bacia de Campos CP Sinal Teor DSM DIC mg/L 1996972 51,3 4129 1417113 34,66 2790 530356 12,97 964 2034298 52,22 1879 815879 21,42 1615 640887 14,78 966 2495827 65,60 3642 1576790 19,31 754 < LD 304897 280879 1072457 < LD < LD < LD 403320 402330 < LD < LD < LD < LD < LD < LD < LD 3,48 26,58 58,21 < LD < LD < LD 35,94 22,18 < LD < LD < LD < LD < LD < LD < LD 329 125 1065 < LD < LD < LD 96 71 < LD < LD < LD < LD < LD < LD 15.985 2.440 Bacia de Alagoas AL Sinal Teor DSM DIC mg/L 3914507 100,6 7387 3061134 74,86 5497 546357 13,36 987 3986596 102,33 3208 1489533 39,11 2590 1492068 34,40 2047 2894537 76,08 4213 1357503 16,62 622 < LD 646519 412900 850818 < LD < LD < LD < LD < LD < LD < LD < LD < LD < LD < LD < LD 7,37 39,08 46,18 < LD < LD < LD < LD < LD < LD < LD < LD < LD < LD < LD < LD 504 237 852 < LD < LD < LD < LD < LD < LD < LD < LD < LD < LD < LD 25.929 2.215

BTEXT

PAHs

< LD = abaixo do limite de deteco 47

Segundo a CETESB (2006) a persistncia do leo no ambiente depende da sua gravidade especfica que a sua densidade em relao gua pura. As figuras 4 e 5 a seguir mostram os cromatograma dos leos AL e CP. Observou-se que a frao inorgnica no leo CP maior que no leo AL, isto pode ser verificado na elevao que ocorre na linha base da Figura 5 que tpica de compostos inorgnicos. Segundo Thomas (2004) a frao inorgnica do petrleo constituda por: Compostos sulfurados: o enxofre o terceiro elemento mais abundante no petrleo, e sua concentrao mdia de 0,65% em peso, com uma faixa apresentando valores entre 0,02 e 4,00%; Compostos nitrogenados: os petrleos contm em mdia 0,17% em peso de nitrognio, com maior concentrao nas fraes pesadas; Compostos oxigenados: aparecem no petrleo sob diferentes formas,, tais como cidos carboxlicos, fenis, cresis, steres, amidas, cetonas e benzofuranos; Resinas e asfaltenos: molculas grandes com alta relao carbono/hidrognio e presena de enxofre, oxignio e nitrognio (de 6,9 a 7,3%); Compostos metlicos: apresentam-se como sais orgnicos dissolvidos na gua emulsionada no petrleo e na forma de compostos organometlicos.

48

Figura 4. Cromatograma do leo da bacia de Alagoas (AL)

47

Figura 5. Cromatograma do leo da bacia de Campos (CP)

48

10.2 Padro de germinao

Observou-se que as espcies vegetais diferem entre si quanto disperso do perodo de germinao. Em termos gerais, o girassol foi espcie com germinao mais precoce e as espcies arbustivas (mamona, quaresmeira e accia) foram as que apresentaram germinao mais tardia (Figura 6). A mamona foi espcie com maior disperso do perodo germinativo

Figura 6. Padro de disperso do perodo germinativo (incio e fim) por espcie estudada. Ha (Helianthus annus), Rc (Ricinus comunnis), Bb (Brachiaria brizantha); Tg (Tibuchina granulosa), Gm (Glycine max); Ah (Acacia holocericea).

Robson et al. (2004) relataram correlao positiva entre tamanho de sementes (1,0 a 9,9 mg), germinao mais lenta e tolerncia ao contaminante. Os autores associam tal correlao ao fato de que as sementes grandes produzem plntulas maiores, capazes de absorver mais gua e nutrientes e que conseqentemente possuem germinao e crescimento mais lentos. Por armazenarem maior quantidade de nutrientes h disponibilidade dos mesmos por um perodo maior de tempo durante o desenvolvimento da planta (FENNER & KITAJIMA 1999). Entretanto, no presente estudo, as espcies de germinao tardia (mamona, accia e quaresmeira) apresentam sementes de tamanhos bem variados (valores mdios de 200mg; 20mg e 0,3mg respectivamente). O tamanho das sementes tampouco pode ser associado tolerncia da espcie ao meio contaminado, pois a soja (100mg) obteve desempenho superior mamona 49

(200mg) e as espcies mais tolerantes (accia e soja) apresentam padres de germinao distintos. A seguir, so apresentados os resultados das anlises estatsticas para as trs condies experimentais (Ge, CV, SC). O Anexo IV apresenta os resultados do teste Kruskal-Wallis e destaca aquelas variveis para as quais a H0 foi rejeitada. O Anexo V apresenta os valores de p do Kruskal-Wallis para a varivel independentemente do tratamento (conc.), sempre que tal valor foi 0,05 e os valores de p do Mann-Whitney para cada tratamento, sempre que o p do Kruskal-Wallis foi < 0,05.

10.3 Experimento realizado em germinador (Ge) Somente duas concentraes (0,05% e 0,5%) de leo ba bacia de (AL) e duas espcies (Bb e Ha) foram testadas no germinador (Ge).

10.3.1. Brachiaria brizantha

10.3.1.1 Taxa de germinao A taxa de germinao total no controle (33%) foi baixa, provavelmente, devido ao fato que no foi realizada escarificao das sementes nesse primeiro experimento. Tal problema foi solucionado nas condies experimentais seguintes (CV e SC). No houve diferena significativa nas taxas de germinao precoce, tardia ou total na presena de leo AL (Alagoas) nas concentraes testadas (0,05; 0,5%) comparadas ao controle, nem diferena significativa quando a germinao foi separada em precoce e tardia. (a)
Boxplots of GPreBbGe by Conc_Ge
(means are indicated by solid circles)

(b)
Boxplots of G TarBbG by C e onc_G e
(m eans are indicated by solid circles)

(c)
B oxplots of G bG byC totB e onc_G e
(m areindicatedbysolidcircles) eans

0.45 0.2
0.3

GPreBbGe

GTarBbGe

0.2

0.1

GtotBbGe
0.00 0.05 0.50

0.35

0.25

0.1 0.00 0.05 0.50

0.0

0.15 0.00 0.05 0.50

Conc_Ge

C onc_G e

C onc_G e

Figura 7. Taxa de germinao (a) precoce, (b) tardia e (c) total de Brachiaria brizantha em germinador, frente a diferentes concentraes de leo cru. 50

10.3.1.2 Produo de biomassa No houve diferena significativa na biomassa radicular nem area de plntulas de braquiria tanto com germinao precoce quanto tardia. A produo de biomassa no foi, portanto, afetada pela presena do leo AL nessas concentraes de 0,05 e 0,5% em germinador (Figuras 8 e 9).

(a)
Boxplots of RPreBbGe by Conc_Ge
(means are indicated by solid circles)
0.02

(b)
Boxplots of APreBbGe by Conc_Ge
(means are indicated by solid circles)

0.002

RPreBbGe

0.01

APreBbGe
0.00 0.05 0.50

0.001

0.00

0.000 0.00 0.05 0.50

Conc_Ge

Conc_Ge

Figura 8. Produo de biomassa radicular e area de Brachiaria brizantha em germinador; plntulas com germinao precoce.

(a)
Boxplots of RTarBbGe by Conc_Ge
(means are indicated by solid circles)
0.03

(b)
Boxplots of ATarBbGe by Conc_Ge
(means are indicated by solid circles)

0.004

0.003

RTarBbGe

ATarBbGe

0.02

0.002

0.01

0.001

0.00 0.00 0.05 0.50

0.000 0.00 0.05 0.50

Conc_Ge

Conc_Ge

Figura 9. Produo de biomassa radicular e area de Brachiaria brizantha em germinador; plntulas com germinao tardia.

51

10.3.2. Helianthus annus

10.3.2.1 Taxa de germinao A taxa de germinao total do controle foi alta (98%) no germinador (Figura 10). Houve um acrscimo significativo na taxa de germinao precoce na concentrao de 0,05% e um decrscimo significativo na taxa de germinao tardia nas concentraes de 0,05% e 0,5%. Nas concentraes testadas, a germinao ocorre quase que exclusivamente no perodo precoce, fenmeno tambm observado no experimento em sala climatizada descrito posteriormente (figuras 10 e 25). A taxa de germinao total no foi significativamente afetada em nenhuma das concentraes de leo testadas.

(a)
Boxplots of G aG by C PreH e onc_G e
(m eans are indicated bysolid circles)
1.0 0.5

(b)
Boxplots of G aG by Conc_G TarH e e
(m eans are indicated by solid circles)

(c)
Boxplots of GtotHaGe by Conc_Ge
(means are indicated by solid circles)

1.0

0.4

GPreHaGe

GTarHaGe

0.3

0.5

GtotHaGe
0.00 0.05 0.50

0.5

0.2

0.1

0.0 0.00 0.05 0.50

0.0

0.0 0.00 0.05 0.50

Conc_G e

C onc_G e

Conc_G e

Figura 10. Taxa de germinao precoce, tardia e total de Helianthus annus em germinador, frente a diferentes concentraes de leo cru (linhas verticais: erro padro).

10.3.2.2 Produo de biomassa Na concentrao de 0,05%, a biomassa radicular de plntulas de germinao tardia foi significativamente aumentada. Na concentrao de 0,5%, houve um decrscimo significativo na biomassa radicular tanto de plntulas de germinao precoce quanto tardia (Figuras 11a e 12a). Na concentrao de 0,05%, a biomassa area de plntulas de germinao precoce foi tambm significativamente reduzida (Figuras 12).

52

(a)
Boxplots of RPreHaGe by Conc_Ge
(means are indicated by solid circles)
0.010
0.05

(b)
Boxplots of APreHaGe by Conc_Ge
(means are indicated by solid circles)

0.04

RPreHaGe

APreHaGe

0.03

0.005

0.02

0.01

0.000 0.00 0.05 0.50

0.00 0.00 0.05 0.50

0.50

Conc_Ge

Conc_Ge

Figura 11. Produo de biomassa radicular e area de Helianthus annus em germinador; plntulas de germinao precoce.

(a)
Boxplots of RTarHaGe by Conc_Ge
(means are indicated by solid circles)
0.05
0.05

(b)
Boxplots of ATarHaGe by Conc_Ge
(means are indicated by solid circles)

0.04
0.04

RTarHaGe

ATarHaGe
0.00 0.05 0.50

0.03

0.03

0.02

0.02

0.01

0.01

0.00

0.00 0.00 0.05

Conc_Ge

Conc_Ge

Figura 12. Produo de biomassa radicular e area de Helianthus annus em germinador; plntulas de germinao tardia.

53

10.4 Experimentos realizados em casa de vegetao (CV)

A casa de vegetao (CV) foi nica condio experimental onde o leo CP, recm-extrado da bacia de Campos foi testado, nas concentraes de 0,05; 0,5; 2; 4 e 6%. Em tais condies experimentais, as nicas duas espcies testadas apresentaram baixa tolerncia presena do leo, conforme descrito a seguir.

10.4.1 Leucaeana leucocephala

10.4.1.1 Taxa de germinao A taxa de germinao da leucena em casa de vegetao foi baixa (26%) no controle, o que esperado por tratar-se de uma espcie florestal. A germinao na presena de leo CP foi totalmente inibida a partir da concentrao de 0,5% inclusive (Figura 13). Na concentrao mais baixa testada (0,05%) o leo afetou significativamente somente a germinao precoce.

(a)
Boxplots of GpreLlCV by ConcCV
(means are indicated by solid circles)
0.2

(b)
Boxplots of GtarLlCV by ConcCV
(means are indicated by solid circles)
0.2
0.3

(c)
Boxplots of GtotLlCV by ConcCV
(means are indicated by solid circles)

0.2

GpreLlCV

0.1

GtarLlCV

0.1

GtotLlCV

0.1

0.0 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

0.00

0.05

0.50

2.00

4.00

0.00

0.05

0.50

2.00

4.00

Figura 13. Taxa de germinao precoce, tardia e total de Leucaeana leucocephala em casa de vegetao, frente a diferentes concentraes de leo cru (linhas verticais: erro padro).

6.00

ConcCV

54

6.00

ConcCV

0.0

0.0

ConcCV

10.4.1.2 Produo de biomassa Houve diferena significativa na biomassa radicular tardia e area de plntulas, tanto precoces quanto tardias, nas concentraes a partir de 0,5% inclusive, quando comparadas ao controle. O leo no afetou a produo de biomassa radicular em plntulas de germinao precoce (Figuras 14 e 15).

(a)
Boxplots of RpreLlCV by ConcCV
(means are indicated by solid circles)
0.04

(b)
Boxplots of ApreLlCV by ConcCV
(means are indicated by solid circles)

0.04

0.03

0.03

RpreLlCV

0.02

ApreLlCV
0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

0.02

0.01

0.01

0.00

0.00 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 6.00

ConcCV

ConcCV

Figura 14. Produo de biomassa radicular e area, plntulas Leucaeana leucocephala em casa de vegetao; plntulas germinao precoce.

(a)
Boxplots of RtarLlCV by ConcCV
(means are indicated by solid circles)
0.006 0.005

(b)
Boxplots of AtarLlCV by ConcCV
(means are indicated by solid circles)
0.04

0.03
0.004

RtarLlCV

0.003 0.002 0.001 0.000 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

AtarLlCV

0.02

0.01

0.00 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00

ConcCV

ConcCV

Figura 15. Produo de biomassa radicular e area de Leucaeana leucocephala em casa de vegetao; plntulas de germinao tardia.

55

10.4.2 Ricinus comunnis

10.4.2.1 Taxa de germinao A taxa de germinao total da mamona em casa de vegetao no controle foi de aproximadamente 62%. Tal taxa considerada alta, em se tratando de espcie com pouco ou sem melhoramento. O leo promoveu um acrscimo significativo na taxa de germinao precoce e total na concentrao de 0,05% e decrscimo significativo nas concentraes de 0,5% a 6% (Figura 16). (a)
Boxplots of GpreRcCV by Conc_CV
(means are indicated by solid circles)
0.7 0.6 0.5 0.5 0.7 0.4 0.6

(b)
Boxplots of GtarRcCV by Conc_CV
(means are indicated by solid circles)
0.8

(c)
Boxplots of GtotRcCV by Conc_CV
(means are indicated by solid circles)

GpreRcCV

GtarRcCV

GtotRcCV
0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

0.4 0.3 0.2 0.1 0.0 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

0.5 0.4 0.3 0.2

0.3

0.2

0.1 0.1 0.0 0.0 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

Conc_CV

Conc_CV

Conc_CV

Figura 16. Taxa de germinao (a) precoce, (b) tardia e (c) total de Ricinus comunnis em casa de vegetao, frente a diferentes concentraes de leo cru.

Um aumento da germinao de vrias espcies (gramneas e oleaginosas) nos primeiros dias na presena do benzo(a)pireno foi observada por Henner et al. (1999). Efeito similar ao descrito no presente experimento, foi mostrado por Borneff et al. (1968) e por Edwards (1983), que sugerem que tal composto assim como os produtos de sua degradao atua como estimuladores de crescimento nestas espcies. Tais autores no analisaram separadamente germinao precoce e tardia. No entanto, em concentraes a partir de 0,5% inclusive, houve um decrscimo significativo e acentuado nas taxas de germinao precoce, tardia e total, semelhantemente ao observado para a leucena nas mesmas condies experimentais (Figura 13). Os resultados sugerem que a espcie, favorecida em termos de germinao nas concentraes bem baixas do leo, mas sofre efeitos txicos acentuados em concentraes superiores (Figura 16). 56

10.4.2.2 Produo de biomassa Houve reduo significativa na biomassa radicular e area de plntulas tanto precoces quanto tardias nas concentraes a partir de 0,5% inclusive, quando comparadas ao controle, (Figuras 17 e 18), semelhantemente ao resultado obtido em sala climatizada (Figura 29). A biomassa da raiz de plntulas de germinao precoce foi aparentemente (mas no significativamente) superior na concentrao 0.05% (ver discusso posterior sobre o grupo de plantas oleaginosas testadas). A concentrao de 0,05% reduziu a produo de biomassa area em plntulas com germinao tardia (Figura 18). (a)
Boxplots of RpreRcCV by Conc_CV
(means are indicated by solid circles)
0.05

(b)
Boxplots of ApreRcCV by Conc_CV
(means are indicated by solid circles)
0.4

0.04

0.3

RpreRcCV

0.03

ApreRcCV
0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

0.2

0.02

0.1
0.01

0.00

0.0 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

Conc_CV

Conc_CV

Figura 17. Produo de biomassa radicular de Ricinus comunnis em casa de vegetao; plntulas de germinao precoce e tardia (linhas verticais: erro padro).

(a)
Boxplots of RtarRcCV by Conc_CV
(means are indicated by solid circles)
0.035 0.030

(b)
Boxplots of AtarRcCV by Conc_CV
(means are indicated by solid circles)
0.25

0.20
0.025

RtarRcCV

AtarRcCV
0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

0.020 0.015 0.010 0.005 0.000

0.15

0.10

0.05

0.00 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

Conc_CV

Conc_CV

Figura 18. Produo de biomassa area de Ricinus comunnis em casa de vegetao; plntulas de germinao precoce e tardia (linhas verticais: erro padro).

57

10.5 Experimentos realizados em sala climatizada (SC) O leo utilizado em sala climatizada foi AL nas concentraes de 0,05; 0,5%; 2%; 4% e 6% nos testes com seis espcies.

10.5.1 Acacia holosericea

10.5.1.1 Germinao O controle apresentou germinao total relativamente alta (64%), considerando-se que a accia espcie florestal onde uma taxa de germinao baixa e no uniforme esperada devido diversidade gentica existente. No houve diferena significativa nas taxas de germinao total, precoce ou tardia nas diversas concentraes comparadas ao controle. Observou-se, entretanto, uma reduo aparente (sem significncia estatstica) da germinao precoce a 6%, aparentemente compensada na germinao tardia (Figura 19). Udo & Fayemi (1975) verificaram que uma das respostas de plantas cultivadas em solos contaminados o atraso na germinao.

(a)
Boxplots of GpreAh by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)
0.8

(b)
Boxplots of GtarAh by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)
0.9 0.8 0.7 0.6

(c)
Boxplots of GtotAh by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)

0.6
0.7

0.5 0.4

0.6 0.5

GpreAh

GtarAh

GtotAh
0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

0.3 0.2

0.4 0.3 0.2

0.5 0.4 0.3 0.2

0.1 0.0 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

0.1 0.0

0.1 0.0 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

Conc_SC

Conc_SC

Conc_SC

Figura 19. Taxa de germinao (a) precoce, (b) tardia e (c) total da Acacia holosericea em sala climatizada, frente a diferentes concentraes de leo-cru.

58

10.5.1.2 Produo de biomassa Com relao produo de biomassa radicular e area tanto em plntulas de germinao precoce quanto tardia no houve diferenas significativas em nenhuma das concentraes de leo, quando comparadas ao controle (Figuras 20 e 21). (a)
Boxplots of RpreAh by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)
0.005

(b)
Boxplots of ApreAh by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)

0.03

0.004

RpreAh

0.002

ApreAh
0.01 0.00
0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

0.003

0.02

0.001

0.000

0.00

0.05

0.50

2.00

4.00

Figura 20. Produo de biomassa radicular e area de Acacia holosericea em sala climatizada; plntulas de germinao precoce (linhas verticais: erro padro).

(a)
Boxplots of RtarAh by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)
0.02

(b)
Boxplots of AtarAh by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)
0.10

RtarAh

0.01

AtarAh

0.05

0.00

0.00
0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

0.00

0.05

0.50

2.00

4.00

Figura 21. Produo de biomassa radicular e area de Acacia holosericea em sala climatizada; plntulas de germinao tardia (linhas verticais: erro padro).

6.00

Conc_SC

Conc_SC

6.00

Conc_SC

Conc_SC

59

10.5.2 Brachiaria brizantha

10.5.2.1 Taxa de germinao O processo de escarificao utilizado nas sementes de braquiria nos testes em sala climatizada, conforme esperado, resultou em aumento significativo da taxa de germinao: aproximadamente 60% em sementes escarificadas contra 39% obtido em sementes no escarificadas (no apresentados no grfico). Cabe lembrar que no germinador, a braquiria sem escarificao apresentou taxa de germinao total de 33% no controle. Como esta espcie se encontra em processo de melhoramento gentico, tal taxa est dentro dos nveis esperados. Observou se que medida que a concentrao de leo aumenta (de 0% a 6%) h uma queda aparente da germinao precoce (Figura 22a) e um aumento aparente da germinao tardia (Figura 22b). Entretanto, somente na germinao precoce na concentrao de 6% a diferena foi significativa (Figura 22a). Nessa concentrao (6%), a germinao ocorre quase que exclusivamente no perodo tardio.

(a)
Boxplots of GpreBb by ConcSC
(means are indicated by solid circles)
0.7 0.6
0.4 0.5

(b)
Boxplots of GtarBb by ConcSC
(means are indicated by solid circles)
1.0 0.9 0.8 0.7

(c)
Boxplots of GtotBb by ConcSC
(means are indicated by solid circles)

0.5

GpreBb

GtarBb

GtotBb
0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

0.4 0.3 0.2

0.3

0.6 0.5 0.4 0.3

0.2

0.1

0.1 0.0 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

0.0

0.2 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

ConcSC

ConcSC

ConcSC

Figura 22. Taxa de germinao (a) precoce, (b) tardia e (c) total Brachiaria brizantha em sala climatizada, frente a diferentes concentraes de leo cru.

10.5.2.2 Produo de biomassa No houve diferena significativa na produo de biomassa radicular das plntulas de germinao precoce ou tardia em nenhuma das concentraes testadas comparadas ao controle (Figuras 23a e 24a). Entretanto, a biomassa area das plntulas de germinao precoce foi afetada significativamente nas concentraes de leo a partir de 0,5% inclusive at 6% (Figura 60

23b). Tal efeito no ocorreu nas plntulas de germinao tardia. A biomassa area tambm foi mais afetada que a biomassa radicular, nos estudos de Hernandez-Valencia & Mager (2003) com soja e girassol.

(a)
Boxplots of RpreBb by ConcSC
(means are indicated by solid circles)
0.002
0.03

(b)
Boxplots of ApreBb by ConcSC
(means are indicated by solid circles)

RpreBb

0.02

ApreBb
0.01 0.00

0.001

0.000
0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

ConcSC

0.00

0.05

0.50

2.00

4.00

Figura 23. Produo de biomassa (a) radicular e (b) area em plntulas de Brachiaria brizantha em sala climatizada; plntulas de germinao precoce.

(a)
Boxplots of RtarBb by ConcSC
(means are indicated by solid circles)
0.014 0.012 0.010
0.02

(b)
Boxplots of AtarBb by ConcSC
(means are indicated by solid circles)

RtarBb

AtarBb

0.008 0.006 0.004 0.002 0.000 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

0.01

0.00 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

ConcSC

ConcSC

Figura 24. Produo de biomassa (a) radicular e (b) area de Brachiaria brizantha em sala climatizada; plntulas de germinao tardia.

6.00

ConcSC

61

10.5.3 Helianthus annus

10.5.3.1 Taxa de germinao A taxa de germinao total do girassol no controle foi alta (76%) em sala climatizada, provavelmente por ser uma espcie melhorada geneticamente. Esta espcie possui um padro precoce de germinao, uma vez que j no controle a germinao precoce foi significativamente superior germinao tardia. Semelhante braquiria, a concentrao de 6% reduziu significativamente a germinao precoce, no compensada na germinao tardia. Tal hiptese confirmada pelo decrscimo significativo na taxa de germinao total na concentrao de 6% comparada ao controle (Figura 25c). Os dados indicam que o girassol possui tolerncia a concentraes de leo AL abaixo de 6%, no tocante germinao.

(a)
Boxplots of GpreHa by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)
1.0 0.9 0.8
0.6

(b)
Boxplots of GtarHa by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)
0.9 0.8 0.7 0.6

(c)
Boxplots of GtotHa by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)

0.8 0.7

0.7

GpreHa

GtarHa

GtotHa
0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0.0 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0.0

0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0.0 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

Conc_SC

Conc_SC

Conc_SC

Figura 25. Taxa de germinao (a) precoce, (b) tardia e (c) total de Helianthus annus em sala climatizada, frente a diferentes concentraes de leo-cru.

10.5.3.2 Produo de biomassa O girassol em sala climatizada na presena de leo AL apresentou alteraes complexas para biomassa radicular e area, com aumento em algumas concentraes e reduo em outras. A biomassa radicular de plntulas de germinao precoce apresentou aumento significativo nas

62

concentraes de 0,5 a 4% e reduo significativa na concentrao de 6% (Figura 26a), tendo em vista que nessa concentrao a taxa de germinao foi zero. Em plntulas de germinao tardia, houve aumento significativo de biomassa radicular somente na concentrao de 4% (Figura 27a). Houve reduo significativa com relao biomassa area, na germinao precoce na concentrao de 6% (onde no houve germinao) (Figura 25b) e na germinao tardia, na concentrao de 0,05% (Figura 26b).

(a)
Boxplots of RpreHa by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)
0.9 0.8 0.7 0.6 1.0 1.5

(b)
Boxplots of ApreHa by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)

RpreHa

0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0.0 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

ApreHa
0.5 0.0 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00
6.00

Conc_SC

Conc_SC

Figura 26. Produo de biomassa radicular de Helianthus annus em sala climatizada; plntulas de germinao precoce e tardia (linhas verticais: erro padro).

(a)
Boxplots of RtarHa by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)
0.6
0.4

(b)
Boxplots of AtarHa by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)

0.5 0.4
0.3

RtarHa

0.3 0.2

AtarHa

0.2

0.1

0.1 0.0 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

0.0 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00

Conc_SC

Conc_SC

Figura 27. Produo de biomassa (a) radicular e (b) area de Helianthus annus em sala climatizada; plntulas de germinao tardia.

63

10.5.3.3 Observao microscpica de cortes transversais O girassol descrito na literatura como espcie fito-acumuladora de metais (ROMEIRO et al., 2005). Foi observado no presente estudo que as plntulas de girassol aparentemente absorvem leo do substrato contaminado. Na hiptese da secagem por 24hs a 60oC no ter sido suficiente para eliminar todo o leo, o aumento na biomassa poderia ser atribudo ao acmulo de leo no parnquima, que segundo a literatura (MCCUTCHEON & SCHONOOR, 2003) fica armazenado nos vacolos e na parede celular. A hiptese poderia ser confirmada pela anlise de cinzas das plntulas controle e das plntulas crescidas no leo com tratamento de aproximadamente 550oC por 16h (AMIR et al., 2005). Uma outra possvel explicao para o aumento da biomassa, segundo DOMINGUEZ-ROSADO et al. (2004) que tal aumento pode estar associado utilizao de carbono a partir dos hidrocarbonetos do leo como nutriente pela planta, o que estimulou seu crescimento (BAKER, 1970). Em apoio hiptese da asboro do leo pela plntula, durante o experimento foi observado que plntulas de girassol germinadas em substrato contaminado apresentavam manchas de colorao marrom escura e perda de turgncia tanto na parte area quanto na radicular. Para dar incio a uma investigao sobre a origem de tais sintomas e, tendo em vista a hiptese de acmulo no parnquima, foram feitos cortes histolgicos transversais da parte area e radicular nas concentraes de 0,05% e 4% observados em microscopia tica (aumento 1.000 vezes). A imagem microscpica produzida a pedidos por B.C. Lopes, do Laboratrio de Anatomia Vegetal do Museu Nacional da Universidade Federal do Rio de Janeiro (LOPES, 2006) revelou a presena de uma substncia escura no parnquima. Embora no tenha sido utilizado nenhum processo de colorao especfica, tal imagem no foi observada em cortes de plntulas crescidas em meio sem leo. Aparentemente, o leo penetra nas clulas, sugerindo uma capacidade da espcie em absorver e eventualmente acumular leo, a exemplo do que ocorre com os metais. Gill & Nyawuame (2006) observaram a presena do leo cru ao nvel celular em plntulas de Chromolaena odorata e relatam a ausncia do mesmo nos tecidos vasculares, sugerindo que o transporte do leo ocorre via extracelular (determinada pela difuso atravs das paredes e espaos intercelulares da gua e solutos at a endoderme, uma barreira que determina o transporte ativo dos solutos para dentro das clulas).

64

10.5.4 Ricinus comunnis

10.5.4.1 Taxa de germinao A mamona teve uma baixa taxa de germinao total (apenas 6%) no controle em sala climatizada, comparada aos 62% obtidos no controle em casa de vegetao. Tal resultado distinto pode ser atribudo : (i) condies experimentais na SC (iluminao artificial, etc) menos adequadas para a germinao dessa espcie de semi-rido; (ii) diversidade gentica relacionada cultivares distintas utilizadas (Guarani na SC e IAC-80 na CV); (iii) m qualidade do lote de sementes utilizados na SC; (iv) uma combinao desses fatores. Em concentraes de 0,5% (inclusive) em diante, a mamona apresentou quase que exclusivamente germinao precoce (antes de 15 dias aps o plantio). Houve, portanto diferena significativa na germinao tardia nas concentraes de 0,5 a 6% comparadas ao controle. Em casa de vegetao tambm houve uma antecipao da germinao para mamona, conforme discutido anteriormente. Baixas concentraes de leo (0,05%) aparentemente aumentaram (sem significncia) a germinao tardia e final.

(a)
Boxplots of GpreRc by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)
0.15

(b)
Boxplots of GtarRc by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)

(c)
Boxplots of GtotRc by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)

0.10

0.2

0.10

GpreRc

GtarRc

GtotRc

0.05

0.1

0.05

0.00

0.00
0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

0.0 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00

0.00

0.05

0.50

2.00

4.00

Figura 28. Taxa de germinao (a) precoce, (b) tardia e (c) total de Ricinus comunnis em sala climatizada, frente a diferentes concentraes de leo cru.

10.5.4.2 Produo de biomassa Em plntulas de germinao precoce, no houve diferenas significativas na biomassa radicular ou area (Figura 29). 65

6.00

Conc_SC

6.00

Conc_SC

Conc_SC

Como no houve germinao tardia a partir de 0,5%, houve diferena significativa tanto na biomassa radicular quanto area nas concentraes de 0,5% a 6%.

(a)
Boxplots of RpreRc by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)
0.14
0.4

(b)
Boxplots of ApreRc by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)

0.12 0.10
0.3

RpreRc

ApreRc

0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

0.2

0.1

0.0 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

Conc_SC

Conc_SC

Figura 29. Produo de biomassa (a) radicular e (b) area das plntulas de Ricinus comunnis em sala climatizada; plntulas de germinao precoce.

(a)
Boxplots of RtarRc by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)

(b)
Boxplots of AtarRc by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)

0.10 0.3

RtarRc

0.05

AtarRc
0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

0.2

0.1

0.00

0.0 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

Conc_SC

Conc_SC

Figura 30. Produo de biomassa (a) radicular e (b) area de Ricinus comunnis em sala climatizada; plntulas de germinao tardia.

66

10.5.5 Glycine max

10.5.5.1 Taxa de germinao A soja apresentou taxa de germinao alta em SC (79% no controle), o que pode ser atribudo ao melhoramento gentico pelo qual passou a espcie. O leo aparentemente beneficiou a germinao precoce nas concentraes de 0,05% at 4% (Figura 31a) comparadas ao controle. Tal fenmeno tambm foi verificado por DominguezRosado et al. (2004), que descrevem a soja como tendo taxa de germinao mais alta na presena de baixas concentraes (0,1% e 1%) de leo usado de motor. A presena de 5% de leo cru promoveu um aumento na germinao da tambm leguminosa M. orthocarpa que segundo Merkl. et al. (2004b), pode ter sido causada pela alterao na umidade e na infiltrao de gua no substrato devido s propriedades hidrofbicas do leo. No houve diferena significativa na taxa de germinao total em nenhuma das concentraes testadas comparadas ao controle. Entretanto, observou-se uma aparente tendncia (no significativa) de queda na germinao na concentrao de 6%.

(a)
Boxplots of GpreGm by ConcSC
(means are indicated by solid circles)
0.6

(b)
Boxplots of GtarGm by ConcSC
(means are indicated by solid circles)
0.9 0.8 0.7

(c)
Boxplots of GtotGm by ConcSC
(means are indicated by solid circles)

0.8
0.5

0.7
0.4

GtarGm

GpreGm

GtotGm

0.6 0.5 0.4

0.3 0.2 0.1

0.6 0.5 0.4 0.3 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00

0.3 0.2 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

0.0 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

ConcSC

Figura 31. Taxa de germinao (a) precoce, (b) tardia e (c) total de Glycine max em sala climatizada, frente a diferentes concentraes de leo cru.

10.5.5.2 Produo de biomassa O leo em baixas concentraes (0,05% e 0,5%) aumentou de forma significativa a biomassa radicular de plntulas de germinao precoce e no influenciou a biomassa area (Figuras 32). 67

6.00

ConcSC

ConcSC

Nas plntulas de germinao tardia, entretanto, houve um decrscimo significativo da biomassa radicular nas concentraes de 0,05, 0,5 e 6%, enquanto que a produo de biomassa area no foi afetada (Figura 33).

(a)
Boxplots of RpreGm by ConcSC
(means are indicated by solid circles)
0.27

(b)
Boxplots of ApreGm by ConcSC
(means are indicated by solid circles)

0.10

0.22

RpreGm

0.05

ApreGm
0.17 0.12 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00

0.00

0.00

0.05

0.50

2.00

4.00

Figura 32. Produo de biomassa (a) radicular e (b) area de Glycine max em sala climatizada; plntulas de germinao precoce.

6.00

(a)
Boxplots of RtarGm by ConcSC
(means are indicated by solid circles)
0.06 0.05 0.2 0.04

(b)
Boxplots of AtarGm by ConcSC
(means are indicated by solid circles)

RtarGm

0.03 0.02 0.01 0.00

AtarGm

0.1

0.0

0.00

0.05

0.50

2.00

4.00

6.00

0.00

0.05

0.50

2.00

4.00

Figura 33. Produo de biomassa (a) radicular e (b) area de Glycine max em sala climatizada; plntulas de germinao tardia.

6.00

ConcSC

ConcSC

6.00

ConcSC

ConcSC

68

10.5.6 Tibouchina granulosa

10.5.6.1 Taxa de germinao A quaresmeira, apesar de ser uma espcie nativa e sem melhoramento, apresentou uma taxa de germinao total alta (71%) no controle em SC. O perodo de germinao da espcies foi concentrado entre o 30-31 dias. Alm disso, devido ao seu lento crescimento, a anlise de biomassa no pode ser feita separadamente para parte area e parte radicular. A taxa de germinao e a biomassa foram, portanto, analisadas na totalidade. A presena do leo ocasionou reduo significativa da taxa de germinao total, nas concentraes de 4% e 6% (Figura 34).

Boxplots of GtotTb by Conc_SC

(means are indicated by solid circles)
1.0

GtotTb

0.5

0.0 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

Conc_SC

Figura 34. Taxa de germinao total de Tibouchina granulosa em sala climatizada frente a diferentes concentraes de leo cru.

10.5.6.2 Produo de biomassa No houve diferena significativa na produo de biomassa total nas diferentes concentraes de leo comparadas ao controle (Figura 35). Entretanto, observou-se uma tendncia aparente (no significativa) de aumento gradativo da produo de biomassa total com a presena de leo, at a concentrao de 4%, seguida de uma queda observada na concentrao de 6%. 69

O tamanho reduzido das sementes da quaresmeira (0,3 mg), a germinao lenta e a tolerncia de germinao na presena de concentraes de leo em algum ponto entre 2 e 4% (a ser determinado em investigaes futuras) no inviabilizam o uso dessa espcie nativa de Mata Atlntica em projetos de fitorremediao. Como a germinao significativamente afetada, mas a produo de biomassa no , sugere-se que para uso na fitorremediao seja utilizado o plantio de mudas crescidas previamente em meio sem contaminantes. Supe-se aqui que mudas sadias transplantadas poderiam crescer bem no meio a ser remediado.

Boxplots of BiomTb by Conc_SC

(means are indicated by solid circles)

0.0010

BiomTb

0.0005

0.0000 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

Conc_SC

Figura 35. Produo de biomassa das plntulas de Tibouchina granulosa em sala climatizada frente a diferentes concentraes de leo cru.

10.6 Incidncia de sementes com fungos em sala climatizada

Apesar da esterilizao dos recipientes e das sementes, sementes com fungos surgiram nas caixas de germinao tanto no germinador, quanto em sala climatizada. As curvas de crescimento de fungos no apresentaram exatamente o mesmo formato, e a diversidade nos padres de crescimento dos fungos pode ser atribuda ao fato de que oito gneros diferentes de fungos foram identificados no experimento em questo nas diferentes caixas de germinao. Os gneros identificados foram: Aspergillus spp., Epicoccum sp., Fusarium spp., Monilha sp., Penicillium spp., Rhizoctonia spp., Trichoderma spp. e Verticillium sp (CASTILHO, 2006). Tal identificao foi parte integrante do presente estudo, com o apoio da Pesagro-Rio. Quando os nmeros de sementes com fungo nas seis espcies estudadas foram 70

agrupados por concentrao de leo (independentemente da espcie vegetal), uma correlao positiva entre aumento do nmero de sementes com fungos e aumento da concentrao do leo no substrato, foi observada (Figura 36). Entretanto no houve diferena estatstica entre as concentraes testadas e o controle. A distribuio dos gneros em cada unidade experimental ou repetio no foi realizada. Embora correlao positiva no implique obrigatoriamente em relao causal, estudos anteriores referem-se capacidade de degradar petrleo e derivados de alguns gneros e espcies de fungo, tais como Penicillium sp e Cunninghamella sp (ROSATO, 1997) e Aspregillus niger e Penicillium corylophilum (PEREIRA & LEMOS, 2006).

35 % de sementes com fungo 30 25 20 15 10 5 0 0% 0,05%

y = 2,4314x + 14,026 R2 = 0,9277

0,5%

2%

4% 6% Conc. do leo cru

Figura 36. Incidncia de sementes com fungo. Agregao dos dados nas diferentes concentraes de leo cru (AL) em seis espcies estudadas em sala climatizada (mdia erro padro).

10.7 Comparao de desempenho: Diferentes espcies, mesma condio experimental

Para efeito de visualizao comparativa entre diferentes espcies e condies experimentais, foram calculados os ndices de germinao e de produo de biomassa, conforme Equao 1: ndice = Taxa* na concentrao X% Taxa* no controle (0%) * taxa de germinao (em %) ou de produo de biomassa (em %) Equao 1

71

O clculo de ndice objetivou eliminar das anlises, as diferenas em termos de taxa de germinao natural da espcie e a maior ou menor adaptao da espcie s condies experimentais, independente da presena do contaminante. No foram realizadas anlises estatsticas e todas as comparaes so baseadas em diferenas aparentes.

10.7.1 Espcies testadas em germinador (Brachiaria brizantha versus Helianthus annus)

No experimento realizado no germinador, a braquiria apresentou ndice de germinao aparentemente superior ao girassol na concentrao mxima testada de 0,5% (1,0 e 0,87 respectivamente), (Figura 37). O mesmo ocorreu para a biomassa radicular precoce (1,0 e 0,62 respectivamente), com a biomassa radicular tardia (0,55 e 0,19 respectivamente) (Figura 38) e com a biomassa area precoce (1,31 e 0,88 respectivamente). Apenas o ndice de biomassa area tardia do girassol foi aparentemente superior ao da braquiria na concentrao de 0,5% (1,01 e 0,81 respectivamente), (Figura 39). Tal fato pode estar relacionado as hipteses formuladas para as oleaginosas (girassol, soja e mamona) (Vide captulo 10.7 Discusso). Os dados sugerem que nas condies experimentais do germinador a braquiria tem um desempenho aparentemente superior em termos de germinao e desenvolvimento na presena de leo.

ndice de germinao total

1,2 1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 0,0 0% 0,05% 0,5%

Bb_GE

Concentrao de petrleo H_GE

Figura 37. ndice de germinao da Brachiaria brizantha e do Helianthus annus no germinador (GE).

72

ndice de biomassa radicular

2,0 1,5 1,0 0,5 0,0 0,05% 0% 0,5%

H_GE_BRT Bb_GE_BRT H_GE_BAT Bb_GE_BAT

Concentrao de petrleo
H_GE_BRP Bb_GE_BRP

Figura 38. ndice de biomassa radicular da Brachiaria brizantha e do Helianthus annus no germinador (GE).

ndice de biomassa area

2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 0,0 0,05% 0,5% 0%

Concentrao de petrleo
H_GE_BAP Bb_GE_BAP

Figura 39. ndice de biomassa area da Brachiaria brizantha e do Helianthus annus no germinador (GE).

10.7.2 Espcies testadas em casa de vegetao (R. comunnis versus L. leucocephala )

No houve germinao da leucena em concentraes a partir 0,5%. Os ndices de germinao total, biomassa radicular e area de plntulas precoces e tardias da mamona foram aparentemente superiores aos da leucena em todas as concentraes testadas, com exceo da concentrao de 0,5% na qual no houve germinao da mamona e das concentraes 0,5% em diante onde no houve germinao tardia (Figuras 40, 41 e 42). Em casa de vegetao a leucena foi aparentemente mais susceptvel aos efeitos do leo do que a mamona.

73

ndice de germinao

1,5 1,0 0,5 0,0 0,05% 0,5% 0% 2% 4% 6% 6% 6%

Concentrao de petrleo Rc_CV Ll_CV

Figura 40. ndice de germinao total de Ricinus comunnis e Leucena leucocephala em casa de vegetao (CV).

ndice de biomassa radicular

2,0 1,5 1,0 0,5 0,0 0,05% 0,5% 0% 2% 4%

Rc_CV_BRT Ll_CV_BRT Rc_CV_BAT Ll_CV_BAT

Concentrao de petrleo Rc_CV_BRP Ll_CV_BRP

Figura 41. ndice de biomassa radicular de Ricinus comunnis e Leucena leucocephala em casa de vegetao (CV).

ndice de biomassa area

2,0 1,5 1,0 0,5 0,0 0% 0,5% 2% 0,05% 4%

Concentrao de petrleo Rc_CV_BAP Ll_CV_BAP

Figura 42. ndice de biomassa area da Ricinus comunnis e Leucena leucocephala em casa de vegetao (CV).

74

10.7.3 Espcies testadas em sala climatizada (seis espcies) A accia, a mamona, a soja e a braquiria no tiveram a taxa de germinao total afetada pelo menos at a concentrao de 6%, sendo que a soja foi espcie com germinao mais alta na concentrao mxima testada (6%) com 53% de germinao. A 6% de leo, a soja e a accia apresentaram tolerncia superior s outras espcies estudadas (Figura 43). Resultados semelhantes para accia foram obtidos por Tavares et al. (2005) em condies de campo, que considerou a Acacia holosericea promissora para a fitorremediao, pois apresentou tolerncia a altos nveis de petrleo (60.000 ppm de TPH). Dominguez-Rosado et al. (2004a) relataram que a soja germinou em concentraes de leo usado superiores a 10% (p/p). Carr (1919) relatou que soja no foi afetada pela concentrao de 4% (p/p) de petrleo. Hernadez-Valencia & Mager (2003) observaram que a concentrao de 3% de leo cru no afetou a germinao da braquiria e Merkl et al. (2004b) que concentrao de 5% no causou nenhum efeito e consideraram a gramnea Brachiaria brizantha como espcie promissora para a fitorremediao com base na alta taxa de germinao e produo de biomassa menos afetada pelo solo contaminado. A soja foi espcie com ndice de produo de biomassa de plntulas precoces menos afetada na concentrao de 6%. Com relao ao ndice de produo de biomassa de plntulas tardias na concentrao de 6% a espcie menos afetada foi a braquiria (Figuras 43 a 47). Dominguez-Rosado et al. (2004b) estudaram o potencial de fitorremediao do girassol na concentrao de 1,5% (p/p) de leo usado e relataram que esta concentrao no afetou a germinao desta espcie. No presente estudo, o girassol teve a taxa de germinao reduzida significativamente somente concentrao de 6%, ampliando assim, o limite conhecido de tolerncia dessa espcie, em determinadas condies experimentais. Como esperado nenhum dado de literatura foi encontrado para mamona, tampouco para quaresmeira. A quaresmeira foi espcie com a taxa de germinao mais afetada pelo leo (a partir de 4%). Reduo significativa da taxa de germinao, com o aumento das concentraes de leo foi observada somente na quaresmeira. A taxa de germinao do girassol foi afetada significativamente somente na concentrao de 6% e as outras espcies apresentaram quando muito, uma tendncia aparente (no significativa) de queda na germinao em 6%.

75

ndice de germinao total

1,4 1,2 1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 0,0 0% 2% 4% 0,05% 0,5% 6%
Ah H Tb Bb Rc Gm

Concentrao de Petrleo

Figura 43. ndices de germinao total das seis espcies estudadas em sala climatizada.

ndice deproduo de biomassa radicular precoce

7 6 5 4 3 2 1 0 0% 0,05% 0,5% 2% 4% 6%
Ah H Bb Rc Gm

Concentrao de Petrleo

Figura 44. ndice de produo de biomassa radicular em plntulas de germinao precoce nas seis espcies estudadas em sala climatizada.

ndice de produo de biomassa radicular tardia

6 5 4 3 2 1 0 0% 0,05% 0,5% 2% 4% 6%
Ah H Bb Rc Gm

Concentraes de petrleo

Figura 45. ndice de produo de biomassa radicular em plntulas de germinao tardia nas seis espcies estudadas em sala climatizada. 76

ndice de produo de biomassa area precoce

1,6 1,4 1,2 1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 0,0 0,5% 0% 2% 4% 0,05% 6%
Ah H Bb Rc Gm

Concentrao de Petrleo

Figura 46. ndice de produo de biomassa area em plntulas de germinao precoce das espcies estudadas em sala climatizada.

ndice de produo de biomassa area tardia

4,50 4,00 3,50 3,00 2,50 2,00 1,50 1,00 0,50 0,00 0% 0,05% 0,5% 2% 4% 6%

Ah H Bb Rc Gm

Concentrao de Petrleo

Figura 47. ndice de produo de biomassa area em plntulas de germinao tardia das espcies estudadas em sala climatizada.

Em sala climatizada, o ranking das espcies estudadas em termos de desempenho superior de germinao na presena de leo pode ser estabelecido conforme se segue: Accia; Mamona; Braquiria; Soja > Girassol > Quaresmeira E em termos de desempenho quanto produo de biomassa na presena de leo pode ser estabelecido conforme se segue: Accia; Mamona; Quaresmeira> Girassol; Braquiria> Soja 77

10.8 Comparao de desempenho: mesma espcie, condies experimentais distintas

10.8.1 Brachiaria brizantha, Helianthus annus, Ricinus comunnis Apenas trs das seis espcies foram estudadas em mais de uma condio experimental: (i) braquiria (GE e SC a 0,05 e 0,5% de leo AL), (ii) girassol (GE e SC a 0,05 e 0,5% de leo AL) e (iii) mamona (SC e CV em todas as concentraes, leo AL em SC e leo CP em CV). As figuras 48 a 56 ilustram graficamente o seguinte: Brachiaria brizantha: Houve superioridade aparente de desempenho da braquiria em sala climatizada comparada com germinador, inclusive quanto aos controles (taxa de germinao total de 33% em GE contra 60% em SC), provavelmente porque o processo de escarificao no foi realizado em GE. Helianthus annum: O girassol tambm apresentou desempenho aparentemente superior em sala climatizada. Ricinus communis: Com relao mamona, devido ao fato de que foram utilizados dois tipos de leo de origens distintas um em cada condio experimental SC e CV (Tabela 7 e 8), as concluses so limitadas. A mamona apresentou ndices de germinao superiores em sala climatizada (leo leve envelhecido AL) em todas as concentraes testadas comparadas casa de vegetao (leo pesado jovem CP). A partir da concentrao 0,5% (inclusive), no houve germinao tardia em CV (leo CP) e em SC (leo AL). A leucena no foi testada em SC, mas em casa de vegetao com leo CP, tambm apresentou ausncia de germinao a partir de 0,5% (inclusive), o que indica que tal resposta est associada provavelmente ao leo utilizado e no especificamente espcie mamona.

78

(a)
Boxplots of GtotBbGe by Conc_Ge
(means are indicated by solid circles)
0.8

(b)
Boxplots of GtotBb by ConcSC
(means are indicated by solid circles)

0.45

0.7

GtotBbGe

0.35

GtotBb
0.25 0.15 0.00 0.05 0.50

0.6

0.5

0.4 0.00 0.05 0.50

0.50

Conc_Ge

ConcSC

Figura 48. Taxa de germinao total da Brachiaria brizantha em (a) germinador (Ge) e em (b) sala climatizada (SC).

(a)
Boxplots of RPreBbGe by Conc_Ge
(means are indicated by solid circles)
0.02
0.0135 0.0125 0.0115

(b)
Boxplots of RpreBb by ConcSC
(means are indicated by solid circles)

RPreBbGe

RpreBb

0.01

0.0105 0.0095 0.0085 0.0075 0.00 0.05

0.00 0.00 0.05 0.50

Conc_Ge

(c)
Boxplots of RTarBbGe by Conc_Ge
(means are indicated by solid circles)
0.03
0.014 0.012 0.010

(d)
Boxplots of RtarBb by ConcSC
(means are indicated by solid circles)

RTarBbGe

0.02

RtarBb

0.008 0.006 0.004 0.002 0.000

0.01

0.00
0.00 0.05 0.50

0.00

Conc_Ge

Figura 49. Biomassa radicular (a, b) plntulas de germinao precoce e (c, d) tardia. Brachiaria brizantha (Bb) em (a, c) germinador e em (b, d) sala climatizada.

0.05

ConcSC

0.50

ConcSC

79

(a)
Boxplots of APreBbGe by Conc_Ge
(means are indicated by solid circles)
0.0018

(b)
Boxplots of ApreBb by ConcSC
(means are indicated by solid circles)

0.002
0.0016

APreBbGe

ApreBb

0.0014

0.001

0.0012

0.0010

0.000
0.00 0.05

0.00

0.05

(c)
Boxplots of ATarBbGe by Conc_Ge
(means are indicated by solid circles)

0.50

Conc_Ge

(d)
Boxplots of AtarBb by ConcSC
(means are indicated by solid circles)

0.004
0.02

0.003

ATarBbGe

0.002

AtarBb

0.01

0.001

0.000

0.00 0.00 0.05

0.00

0.05

Figura 50. Biomassa area (a, b) plntulas de germinao precoce e (c, d) tardia. Brachiaria brizantha (Bb) em (a, c) germinador e (b, d) sala climatizada.

0.50

Conc_Ge

0.50

ConcSC

0.50

ConcSC

80

(a)
Boxplots of GtotHaGe by Conc_Ge
(means are indicated by solid circles)
0.85

(b)
Boxplots of GtotHa by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)

1.0
0.80

0.75

GtotHaGe

0.5

GtotHa

0.70

0.65

0.60

0.0 0.00 0.05 0.50

0.00

0.05

Conc_Ge

Figura 51. Taxa de germinao total do Helianthus annus (Ha) em germinador (GE) e sala climatizada (SC).

(a)
Boxplots of RPreHaGe by Conc_Ge
(means are indicated by solid circles)
0.010 0.45 0.40 0.35

(b)
Boxplots of RpreHa by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)

RPreHaGe

0.30

RpreHa

0.005

0.25 0.20 0.15 0.10 0.05

0.000 0.00 0.05 0.50

0.00 0.00 0.05 0.50

0.50

Conc_Ge

Conc_SC

(c)
Boxplots of RTarHaGe by Conc_Ge
(means are indicated by solid circles)

(d)
Boxplots of RtarHa by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)

0.05

0.06 0.05

0.04

RTarHaGe

0.04

0.03

RtarHa

0.03 0.02

0.02

0.01
0.01

0.00 0.00 0.05 0.50

0.00 0.00 0.05

Conc_Ge

Conc_SC

Figura 52. Biomassa radicular (a, b) plntulas de germinao precoce e (c, d) tardia. Helianthus annus (Ha) em (a, c) germinador e (b, d) sala climatizada.

0.50

Conc_SC

81

(a)
Boxplots of APreHaGe by Conc_Ge
(means are indicated by solid circles)
1.6
0.05

(b)
Boxplots of ApreHa by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)

1.5 1.4 1.3

0.04

APreHaGe

ApreHa
0.00 0.05 0.50

0.03

1.2 1.1 1.0 0.9

0.02

0.01

0.8 0.7 0.6 0.00 0.05 0.50

0.50

0.00

Conc_Ge

Conc_SC

(c)
Boxplots of ATarHaGe by Conc_Ge
(means are indicated by solid circles)
0.05
0.25

(d)
Boxplots of AtarHa by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)

0.04

0.20

ATarHaGe

0.02

AtarHa

0.03

0.15

0.10

0.01

0.05

0.00 0.00 0.05 0.50

0.00 0.00 0.05

Conc_Ge

Conc_SC

Figura 53. Biomassa area (a, b) plntulas de germinao precoce e (c, d) tardia. Helianthus annus (Ha) em (a, c) germinador e (b, d) sala climatizada.

82

(a)
Boxplots of GtotRcCV by Conc_CV
(means are indicated by solid circles)
0.8
0.2

(b)
Boxplots of GtotRc by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)

0.7 0.6

GtotRcCV

0.4 0.3 0.2 0.1 0.0 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

GtotRc

0.5

0.1

0.0 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

4.00 4.00 6.00 6.00

Conc_CV

Conc_SC

Figura 54. Taxa de germinao total da Ricinus comunnis (Rc) em sala climatizada (SC) e casa de vegetao (CV).

(a)
Boxplots of RpreRcCV by Conc_CV
(means are indicated by solid circles)
0.05 0.14 0.12 0.04 0.10

(b)
Boxplots of RpreRc by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)

RpreRcCV

RpreRc
0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

0.03

0.08 0.06 0.04

0.02

0.01 0.02 0.00 0.00

0.00

0.05

0.50

(c)
Boxplots of RtarRcCV by Conc_CV
(means are indicated by solid circles)
0.035 0.10 0.030 0.025

(d)
Boxplots of RtarRc by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)

RtarRcCV

RtarRc

0.020 0.015 0.010 0.005 0.000

0.05

0.00

0.00

0.05

0.50

2.00

4.00

6.00

0.00

0.05

0.50

Figura 55. Biomassa radicular (a, b) plntulas de germinao precoce e (c, d) tardia. Ricinus comunnis (Rc) em (a, c) casa de vegetao e (b, d) sala climatizada. 83

2.00

Conc_CV

Conc_SC

2.00

Conc_CV

Conc_SC

(a)
Boxplots of ApreRcCV by Conc_CV
(means are indicated by solid circles)
0.4
0.4

(b)
Boxplots of ApreRc by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)

0.3

0.3

ApreRcCV

0.2

ApreRc

0.2

0.1

0.1

0.0 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

0.0

0.00

0.05

0.50

2.00

4.00

Conc_CV

(c)
Boxplots of AtarRcCV by Conc_CV
(means are indicated by solid circles)
0.25
0.3

(d)
Boxplots of AtarRc by Conc_SC
(means are indicated by solid circles)

0.20

AtarRcCV

0.10

AtarRc

0.15

0.2

0.1

0.05

0.00
0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00

0.0

0.00

0.05

0.50

2.00

4.00

Conc_CV

Figura 56. Biomassa area (a, b) plntulas de germinao precoce e (c, d) tardia. Ricinus comunnis (Rc) em (a, c) casa de vegetao e (b, d) sala climatizada.

10.8.2 Efeitos dos dois leos testados A ausncia de germinao tardia em concentraes a partir de 0,5% em casa de vegetao tanto para a mamona quanto para a leucena, poderia a princpio ser atribuda s caractersticas fsico-qumicas do leo cru jovem e pesado utilizado (CP) tendo em vista que a mamona tambm testada na presena de leo leve e envelhecido (AL) em sala climatizada apresentou tolerncia at a concentrao mxima testada (6%) tanto no tocante germinao, quanto produo de biomassa. Segundo Pezeshki et al. (2000) os leos pesados tm menor efeito txico sobre as planta, comparados aos leos leves que aparentemente penetram com maior facilidade na planta e impedem a regenerao das folhas e dos brotos. Entretanto, no presente estudo observou-se o contrrio: o leo pesado (CP) causou maior efeito txico sobre as sementes e plntulas que o 84

6.00

Conc_SC

6.00

Conc_SC

leo leve (AL). A toxicidade superior do leo CP no pde ser atribuda s quantidades de BETEXT e HPAs medidas em cromatografia, j que o leo AL apresentou teores superiores de BTEXT e HPAs.Tais efeitos podem estar mais relacionados s alteraes causadas pelo leo mais pesado no substrato, impedindo a infiltrao de gua do que efeitos sobre as sementes e plntulas e/ou aos teores nitidamente superiores de inorgnicos no leo CP, segundo indicao do cromatograma (no identificados individualmente). Outro fator a considerar que a luminosidade maior na casa de vegetao devido radiao solar, promove a foto-oxidao e transforma hidrocarbonetos do petrleo em formas mais txicas. Foi demonstrado que a toxicidade dos HPAs sobre microrganismos, animais e plantas aquticas aumentada com a ao da radiao (ORIS & GIESY, 1985). O uso de cultivares distintas (no caso da mamona) poderia explicar parte das diferenas observadas nas duas condies experimentais testadas, ainda que a relevncia dessa varivel deva ser inferior aos aspectos acima mencionados. A alta toxicidade observada tambm em leucena em CV com o leo pesado CP sugere baixa importncia desse aspecto, o mesmo valendo para eventuais diferenas na qualidade dos lotes de sementes. Outro fator que merece destaque para explicar a ausncia de germinao tardia em concentraes a partir de 0,5% (sala climatizada e casa de vegetao) o tempo de exposio da semente no germinada, permitindo a penetrao do leo cru atravs do tegumento da semente. Segundo Baker (1970), tal penetrao provoca a morte ou asfixia do embrio, uma vez que impede a absoro de gua pela semente. Apesar de suas caracterstica hidrofbica, a penetrao do leo atravs do tegumento pode estar relacionada velocidade de absoro de gua. Tal penetrao segundo IPEF (2006) varia com a espcie, com o nmero de poros, disponibilidade de gua, temperatura, presso hidrosttica, rea de contato da semente com a gua, foras intermoleculares, composio qumica e qualidade fisiolgica da semente.

85

10.9 Resultados agregados Os resultados das comparaes atravs das anlises estatsticas so agregados na Figura 57 e Figura 58.
Germinao total Espcie A. holosericea B. brizantha G. max H. annus T. granulosa R. comunnis L. leucocephala Cond. Exp. SC SC GE SC SC GE SC SC CV CV 0.05% 0.5% 2% 4% 6%

* * * * *

Germinao precoce Espcie A. holosericea B. brizantha G. max H. annus R. comunnis L. leucocephala Cond. Exp. SC SC GE SC SC GE SC CV CV 0.05% 0.5% 2% 4% 6%

* * * * * *

Germinao tardia Espcie A. holosericea B. brizantha G. max H. annus R. comunnis L. leucocephala Cond. Exp. SC SC GE SC SC GE SC CV CV 0.05% 0.5% 2% 4% 6%

* * *

* * *

* * *

* * *

Figura 57. Efeito do leo sobre a germinao: espcies, condies experimentais, concentrao e tipos de leo (GE = Germinador; CV = Casa de Vegetao; SC = Sala Climatizada).
leo da bacia de Alagoas leo da bacia de Maca Acrscimo significativo Decrscimo significativo

* Ausncia de germinao.

86

Biomassa radicular de plntulas de germinao precoce Espcies Cond. Exp. 0.05% 0.5% 2% 4% SC A. holosericea SC B. brizantha GE SC G. max SC H. annus GE SC T. granulosa** SC R. comunnis CV * CV * * * L. leucocephala Biomassa radicular de plntulas de germinao tardia Espcie Cond. Exp. 0.05% 0.5% 2% 4% SC A. holosericea SC B. brizantha GE SC G. max SC H. annus GE SC * * * R. comunnis * * * CV CV * * * L. leucocephala Biomassa area de plntulas de germinao precoce Espcie A. holosericea B. brizantha G. max H. annus R. comunnis L. leucocephala Con. Exp. SC SC GE SC SC GE SC CV CV 0.05% 0.5% 2% 4%

6%

6%

* * *

6% *

* *

Biomassa area de plntulas de germinao tardia Espcies Cond. Exp. 0.05% 0.5% 2% 4% SC A. holosericea SC B. brizantha GE SC G. max SC H. annus GE SC * * * R. comunnis CV * * * CV * * * L. leucocephala

6%

* * *

Figura 58. Efeito do leo sobre a biomassa: espcies, condies experimentais, concentraes e tipos de leo (GE= Germinador; CV= Casa de Vegetao; SC= Sala Climatizada). * ausncia de biomassa devido ausncia de germinao; * * Biomassa total (radicular e area). 87

Baseando-se nos dados obtidos neste estudo e na literatura foi proposta uma rvore de deciso (Anexo I), com recomendaes das espcies testadas para auxiliar no processo de seleo, acompanhado das fichas agronmicas das espcies estudadas (Anexo II). Devido extenso das tabelas, somente uma parte das anlises estatsticas (Intervalos de Confiana) apresentada no Anexo IV. Um levantamento bibliogrfico sobre espcies vegetais com potencial para fitorremediao apresentado no Anexo III.

88

11. DISCUSSO
Germinao: Com relao germinao em sala climatizada, o girassol e a quaresmeira, foram s nicas espcies que apresentaram reduo significativa na taxa de germinao total nas concentraes de leo de 6% (girassol) e 4%-6% (quaresmeira). Duas outras espcies (braquiaria e mamona) apresentaram alterao significativa no padro de germinao (precoce/ tardia) que, no entanto, no afetou a taxa total de germinao. A braquiria teve taxa reduzida de germinao precoce na concentrao de 6%. A mamona apresentou ausncia total de germinao tardia a partir de 0,5% de leo. Entretanto, ambas as espcies aparentemente compensaram tais redues com aumento da germinao tardia (no caso da braquiria) e precoce (no caso da mamona). No estudo realizado por Smith et al. (2005) com oleaginosas e gramneas, o fato da germinao no ser afetada, mas haver reduo do crescimento (biomassa) mostra que somente o teste de germinao no suficiente para assegurar o desenvolvimento das plantas em reas contaminadas. A produo de biomassa, portanto, complementa as anlises. Reduo de biomassa: Com relao produo de biomassa, a accia e a mamona foram s espcies sem nenhuma alterao significativa em nenhuma das concentraes e tecido analisado, assim como a quaresmeira (biomassa total). Braquiria, soja e girassol em sala climatizada apresentaram em pelo menos uma das concentraes testadas, queda significativa de uma das biomassas analisadas (radicular ou area, precoce ou tardia). Em sala climatizada (SC), a soja foi nica espcie com reduo significativa na produo de biomassa radicular (apenas em plntulas de germinao tardia). O girassol que apresentou reduo de biomassa radicular (precoce e tardia) na concentrao mxima testada em germinador (0.5%), no sofreu reduo significativa em sala climatizada (SC) em nenhuma das concentraes. sabido que estresse no sistema radicular pode reduzir o crescimento da parte area (SMITH et al., 1989). Em termos de biomassa area, em plntulas de germinao precoce a braquiria (conc. 0,5% a 6% de leo) e nas plntulas de germinao tardia o girassol (conc. 0,05%) foram s espcies que apresentaram reduo significativa. O comportamento do sistema radicular na presena do leo constitui-se uma varivel importante a ser considerada na seleo de espcies com potencial para fitorremediao. Quando as razes so afetadas, todo o metabolismo da planta comprometido, bem como a produo de biomassa e seu desenvolvimento. Hernandez-Valencia & Mager (2003) observaram que a contaminao reduziu a biomassa longitudinal da raiz da Brachiaria brizantha, em conseqncia o volume de solo sob influncia da rizosfera foi reduzido assim 89

como a profundidade onde ocorre efetivamente a fitorremediao desta espcie (MERKL et al., 2004a). As plntulas que cresceram no substrato contaminado e tiveram suas razes afetadas, esto de acordo com os resultados anteriormente obtidos (GILL & NYAWUAME, 2006; HERNANDEZ-VALENCIA & MAGER, 2003; PEZESHKI et al., 2000; XU & JOHNSON, 1995). Alguns destes autores observaram alteraes morfolgicas e anatmicas na raiz de plantas cultivadas em solos contaminados, onde houve o rompimento de clulas radiculares e de outros rgos vegetais, ocasionando a perda do contedo celular, o bloqueio dos espaos intercelulares e reduo dos transportes de metablitos assim como das taxas de respirao e de fotossntese. Eles tambm observaram a presena de uma pelcula de leo na regio cortical e da epiderme da raiz, caule e folhas, igualmente observada no presente estudo na raiz e parte area do girassol cultivado em solo recentemente contaminado. Segundo Hernandez-Valencia & Mager (2003) a pelcula de leo pode cobrir as razes afetando a absoro de gua e nutrientes (HERNANDEZ-VALENCIA & MAGER, 2003) e a reduo da biomassa pode ser atribuda quantidade reduzida de assimilados transportados pelas razes para seu crescimento. Aumento de biomassa: Em sala climatizada, somente as espcies oleaginosas (soja, girassol) dentre as estudadas apresentaram melhoria significativa na produo de biomassa (radicular) na presena de leo em determinadas concentraes, a saber: Germinao precoce: soja (0,05 e 0,5%) e girassol (0,5, 2 e 4%) em sala climatizada; Germinao tardia: girassol (0,05%) em germinador e (4%) na sala climatizada; Alm disso, a mamona apresentou aumento aparente (no significativo) na produo de biomassa radicular e area nas concentraes intermedirias de leo (0,05% a 2%). Tendo em vista tais similaridades na soja, girassol e mamona formula-se as hipteses de que (i) a absoro e acumulao de leo (no totalmente retirados pelo processo de secagem em estufa para clculo de massa seca) ou (ii) o estmulo do leo sobre a produo de biomassa pode ser propriedade das espcies oleaginosas. Para testar tais hipteses, a comparao na produo de cinzas indicada. Quando a germinao ou a produo de biomassa em plntulas cultivadas em substrato contaminado a baixas concentraes de leo so superiores ao controle - hiptese (ii) anterior - tal fato tambm pode estar relacionado s alteraes que o leo promove no solo (GILL & NYAWUAME, 2006). Entretanto, isso no explicaria porque o grupo de oleaginosas foi particularmente favorecido. Composio e disperso do leo: As diferenas originais intrnsecas aos dois leos testados, acrescidas da grande diferena em termos de idade que certamente influenciou na composio qumica dos mesmos resultaram no fato de que os testes em casa de vegetao (CV) com o leo da bacia de Campos, indicaram efeito txico maior do que os testes em germinador 90

(GE) e sala climatizada (SC). Para separar o efeito txico distinto dos dois leos, das condies ambientais distintas (CV versus SC), recomenda-se no futuro testar as espcies, com leo oriundo da bacia de Campos tanto em SC quanto em CV. Entretanto, a diferena na composio qumica dos leos e a idade dos mesmos deveriam permitir inferir sobre a diferena de toxicidade sobre plantas de um derrame recente (leo jovem) e um derrame antigo (leo envelhecido), caso a composio do leo AL apresentasse menos BTEXT e HPAs volteis do que o leo CP, o que no ocorreu. De acordo com Henner et al. (1999), a fitotoxicidade das reas contaminadas por petrleo causada pelos compostos mais volteis e, portanto ela maior quanto mais recente a contaminao. A ausncia da inibio da germinao durante os testes com HPAs de alto peso molecular (HENNER et al., 1999) refora tal hiptese. Li et al. (1997) relataram que a reduo do crescimento das plantas pode ser atribuda fitotoxicidade dos hidrocarbonetos volteis associados a diferentes condies experimentais utilizadas, tais como solos com contaminao recente ou solos envelhecidos em recipientes abertos ou fechados (SMITH et al., 2005). Os compostos volteis, de baixo peso molecular e de mais fcil degradao ou volatilizao desaparecem em reas contaminadas h muito tempo, e somente os fortemente adsorvidos matria orgnica do solo e, portanto, com baixa biodisponibilidade devem estar presentes, permitindo prever toxicidade mais baixa, particularmente nas fases iniciais de desenvolvimento da planta. No presente estudo, entretanto, os inorgnicos em quantidades superiores no leo de CP comparado ao leo AL podem estar respondendo pela toxicidade superior do primeiro. Nos experimentos realizados foram observados dois processos de disperso do leo na areia: (i) quando o solo estava com baixa saturao hdrica o leo penetrava pelos poros para camadas mais profundas, (ii), entretanto, em condies prximas saturao hdrica, o leo tendia a permanecer nas camadas superiores, formando uma pelcula oleosa impermeabilizante prxima superfcie do solo, que impedia a infiltrao adequada da gua. Ou seja, a gua ficava armazenada nas camadas mais profundas do substrato, e a camada prxima superfcie e a pelcula, onde ficam as sementes permanecia seca. Gill & Nyawuame (2006) observaram que o leo-cru provocou um efeito coagulatrio do solo, formando blocos de partculas agregadas que afetaram a drenagem de gua e a difuso de oxignio e, portanto, o desenvolvimento das plantas. Em um experimento de germinao, Merkl et al. (2004b) observaram dois mecanismos: (i) infiltrao rpida da gua pelos macroporos tornando a camada superior seca e (ii) reteno da gua na camada superficial que infiltrava lentamente para as camadas mais superiores do solo. Este segundo efeito tambm pode ser explicado pela maior porosidade e heterogeneidade 91

da estrutura do solo depois da mistura da areia com o leo, que resulta no aumento da agregao de partculas e na capacidade de armazenar gua (PRADO et al., 1994). Diversidade de comportamento das espcies: Diversidade de comportamento das espcies e dos diferentes grupos taxonmicos na presena do leo tem sido relatada. Smith et al. (2005) concluram que o crescimento de espcies de leguminosas foi mais afetado que espcies de gramneas pela presena de hidrocarbonetos policclicos aromticos (HPAs). No presente estudo, entretanto, a leguminosa accia e a mamona (oleaginosa) foram s nicas espcies que no sofreram nenhuma reduo significativa (germinao ou biomassa) na presena do leo em SC onde seis espcies foram comparadas. Apesar da gramnea testada (braquiria) e outra leguminosa (soja) no terem a germinao total afetada em nenhuma das concentraes de leo, ambas tiveram efeito sobre produo de biomassa area precoce (braquiria) ou biomassa radicular tardia (soja). No houve, portanto, um comportamento tpico diferenciado de gramneas e de leguminosas. Em termos de produo de biomassa, a quaresmeira (nica espcie nativa) juntamente com a mamona e a accia foram s nicas que no sofreram reduo significativa de biomassa. A sobrevivncia das espcies vegetais em solo contaminado pode ser avaliada em casa de vegetao ou em germinador. Um processo simples de seleo foi previamente descrito (KULAKOW et al., 2000), onde foi verificado que a condio experimental a ser adotada para o teste, depende da espcie vegetal que ser testada, bem como suas exigncias quanto a temperatura, foto-perodo e umidade. Segundo Kulakow et al. (2000), as espcies que apresentarem melhor taxa de germinao e crescimento (produo de biomassa) em solo contaminado em experimentos preliminares para determinao de fitotoxicidade podem ser consideradas potencialmente teis para uso na fitorremediao de reas contaminadas. No entanto, tal teste no avalia a capacidade de fitorremediao, apenas a tolerncia ao contaminante. Segundo Kyle (1998) o vigor das plantas na presena do contaminante no est necessariamente relacionado capacidade de degradao de contaminantes, embora tal vigor seja condio necessria para o estabelecimento da planta no meio a ser tratado. O presente estudo avaliou a tolerncia das espcies testadas ao leo durante a germinao e o estabelecimento das plntulas, considerada na literatura como a fase mais crtica do desenvolvimento (HERNANDEZ-VALENCIA & MAGER 2003). Espera-se, portanto, que plantas j estabelecidas apresentem conseqentemente, maior tolerncia. Alm disto, o experimento foi conduzido utilizando areia como substrato. Sabe-se que os hidrocarbonetos de alto peso molecular ficam adsorvidos preferencialmente na matria orgnica do solo (JONER & LEYVAL, 2001) e na argila (HAMIDI, 2000). Como estes compostos no 92

esto presentes na areia, pode-se afirmar que os hidrocarbonetos que no volatilizaram estavam provavelmente bio-disponveis. Adicionalmente, a areia foi contaminada, um dia antes da semeadura, ou seja, as plantas germinaram e cresceram na presena dos volteis que so os compostos considerados os mais txicos as plantas (HENNER et al. 1999), particularmente no experimento em casa de vegetao onde leo jovem foi utilizado. Na germinao precoce, a reduo significativa da germinao em algumas concentraes para determinadas espcies (ex: braquiaria) e a reduo da biomassa area (ex: braquiria), poderiam estar associadas ao efeito txico de volteis no meio recm-contaminado. Na germinao tardia, a reduo significativa ou ausncia germinao em algumas concentraes para determinadas espcies pode estar associada antecipao da germinao pela presena do leo (ex: mamona). A reduo da biomassa radicular tardia (ex: soja), por outro lado, pode estar associada principalmente ao efeito txico mais prolongado do leo sobre as razes, comprometendo suas funes (absoro e transporte de assimilados).

93

12. CONCLUSES

O presente estudo avaliou a tolerncia de seis espcies vegetais em cinco concentraes de leo, utilizando-se trs diferentes condies experimentais e dois tipos de leo. Observou-se que a presena de leo, dependendo: (1) da concentrao no meio, (2) do tipo de leo e da idade do mesmo, (3) da espcie vegetal e, (4) das condies experimentais/ ambientais, pode ocasionar uma gama complexa de respostas, tais como: no ter qualquer efeito, inibir totalmente, adiar, antecipar ou at aumentar a taxa de germinao e/ou a produo de biomassa radicular e/ou area. A complexidade das respostas observadas refora a hiptese de que no h somente um tipo de interao leo-solo-planta, tampouco uma condio ideal para experimentao ou uma espcie ideal para fitorremediao cujo desempenho superior s demais justifica a sua indicao. A seleo da espcie deve ser baseada, portanto, no comportamento da mesma nas condies e caractersticas especficas da rea a ser remediada, tais como tempo de contaminao (aging) e composio e concentrao do contaminante, entre outros. Adicionalmente, fatores tais como disponibilidade hdrica, formato do recipiente utilizado, luminosidade e radiao solar, temperatura, qualidade do lote de sementes influenciam os resultados dos testes de toxicidade. Tais fatores, entre outros, devem ser cuidadosamente considerados na fase de planejamento de um experimento ou remediao em escala de campo. Recomenda-se, portanto, que um screening em condies experimentais, utilizando o solo a ser remediado, com condies experimentais mais prximas o possvel da rea contaminada e as espcies mais promissoras, para a seleo final da espcie recomendada. Naturalmente, a grande gama de respostas dependendo da combinao de variveis no elimina o fato de que algumas espcies apresentam um potencial superior a outras, quando se trata de crescer e processar contaminantes. Da, a grande importncia de se construir rvores de deciso que reduzam o nmero de espcies a ser testado frente a uma situao real. A reduo da taxa de germinao e da produo de biomassa em algumas espcies investigadas no presente estudo pode ser atribuda toxicidade do leo, mas tambm deficincia hdrica provocada pela formao de uma pelcula de leo, como foi observado, por exemplo, no presente estudo. Adicionalmente, diferentes espcies apresentam demandas distintas quanto s condies de clima, solo e relevo e sero recomendadas ou no, tambm em funo do uso do solo (urbano, agrcola, industrial), da localizao da rea a ser remediada (prxima a centros urbanos ou a reas de proteo ambiental), o que pode determinar maior ou menor urgncia. Por 94

exemplo, em um stio contaminado prximo a uma rea de proteo ambiental, o uso de espcies exticas agressivas no recomendado, devido ao risco de comprometer a biodiversidade nativa. Nesse caso, uma espcie como a quaresmeira de crescimento lento (nativa de Mata Atlntica), apesar da toxicidade do leo na fase germinativa, poderia crescer em solo limpo e ser transplantada, j que sua biomassa no afetada, segundo resultados do presente estudo. Igualmente, uma rea que necessite sofrer um processo de remediao rpida devido ao fato de estar prximo a centros urbanos, com riscos para a sade humana - necessita de espcies com germinao precoce e crescimento de biomassa rpido. Tal estratgia objetiva acelerar o processo de remediao e nesses casos, plantas cultivadas melhoradas geneticamente (exticas ou no) so as mais adequadas, tais como soja e girassol. Observou-se no presente estudo que a incidncia de fungos em sementes correlaciona-se positivamente com o aumento das concentraes de petrleo, o que est de acordo com dados da literatura que descrevem a capacidade de degradao de hidrocarbonetos apresentada por vrios gneros e espcies de fungo. Uma vez que a tolerncia ao contaminante na fase de germinao e produo inicial de biomassa no est obrigatoriamente relacionada capacidade de degradao do mesmo, estudos adicionais devem ser realizados para avaliao do potencial de rizodegradao, fitoextrao, fitoacumulao, fitodegradao e fitovolatilizao das respectivas espcies durante todo o ciclo de desenvolvimento da planta. So necessrios mais estudos para avaliar os efeitos especficos dos leos nos processos vegetais, bem como as diferenas de resposta da vegetao exposta ao leo, saudveis ou estressadas por outros fatores, como inundaes, salinidade e deficincias nutricionais para melhor entendimento dos efeitos sinergsticos. A partir dos testes realizados em sala climatizada (onde seis espcies foram submetidas s mesmas condies experimentais), o desempenho das espcies pode ser analisado com base nos seguintes critrios: 1) ausncia total de efeito do leo sobre qualquer varivel; 2) ausncia de reduo da germinao total; 3) ausncia de reduo da biomassa radicular; 4) ausncia de reduo da biomassa area. Os melhores desempenhos obtidos foram na seguinte ordem: 1) accia, 2) soja e braquiria; 3) mamona; 4) girassol; 5) quaresmeira.

95

13. PERSPECTIVAS E AES FUTURAS

A maioria dos estudos sobre a fitorremediao e experimentos de campo foram conduzidos at o presente momento em condies de clima temperado, com espcies que se adaptam a tais condies. Pouco se sabe sobre a capacidade fitorremediadora de espcies que se adaptam s condies tropicais e subtropicais, respostas de tolerncia de espcies nativas na presena de contaminantes passveis de remoo ou degradao atravs da fitorremediao, bem como os efeitos dos diferentes tipos de leo. Igualmente, pouco se conhece a respeito da interao dos microorganismos da rizosfera, planta e solos tropicais contaminados por hidrocarbonetos de petrleo, ou outros contaminantes orgnicos. Em seqncia ao estudo de tolerncia aqui apresentado que parte integrante do projeto de pesquisa da UERJ financiado pelo CNPq/CTPetro (Biorremediao e fitorremediao de solos contaminados com Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos), novos experimentos instalados em casa de vegetao, investigam a capacidade fitorremediadora de duas espcies selecionadas, dentre as testadas (Brachiaria brizantha e Glycine max) durante o ciclo de vida da planta. Nessa nova fase, esto sendo analisados os TPHs e os HPAs em solo contaminado, e variveis biomtricas (rea foliar, biomassa radicular, area, entre outros) que evidenciam eventuais alteraes no metabolismo vegetal na presena do leo.

96

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

ABRAMOWICZ, D.A. Aerobic and anaerobic biodegradation of PCBs: a review. Crit. Rev. Biotechnol. v.10, n.3, p. 241-251, 1990. ALCNTARA, P.B. & BUFARAH, G. Plantas Forrageiras: gramneas e leguminosas. 4 ed.rev. e ampliada. So Paulo, Nobel, 1988, 162p. ALEXANDER, M. Introduction to Soil Microbiology. Ed. Jonh Wiley, New York, 2a ed., pp. 423-437, 1977. AMIR, S., HAFIDI, M., MERLINA, G., HAMDI, H., REVEL, J.C. Fate of polycyclic aromatic hydrocarbons during composting of lagooning sewage sludge. Chemosphere, v. 58, p.449-458, 2005. ANDERSON, T.A., GUTHRIE E.A., WALTON B.T. Bioremediation in the rhizosphere: plant roots and associated microbes clean contaminated soil, Environ. Sci. Technol. n. 27, p. 2630 2636, 1993. ANDRADE, J.C.M.E.; MAHLER, C.F. Soil Phytoremediation. In: INTERNATIONAL CONFERENCE ON ENVIRONMENTAL GEOTECHNICS, Rio de Janeiro. v. 2, p. 875-881, 2002. ANKLEY, G. T., COLLYARD, S. A., MONSON, P. D., AND KOSIAN, P. A. Influence of ultraviolet light on the toxicity of sediment contaminated with polycyclic aromatic hydrocarbons. Environ. Toxicol. Chem., v. 13, p. 1791-1796, 1994. ANVISA AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA. Portaria n 322, de 28 de julho de 1997 Disponvel em < http://e-legis.anvisa.gov.br/leisref/public/showAct.php? id=293> Acesso em 16 de junho de 2006. API AMERICAN PETROLEUM INSTITUTE. Disponvel em: <www.api.org> Acesso em 24 de maio de 2006.

97

APRILL, W.; SIMS, R.C. Evaluation of the use of prairie grasses for stimulating polycyclic aromatic hydrocarbon treatment soils. Chermosphere, n. 20, p. 253-265, 1990. ATLAS, R.M. Petroleum biodegradation and oil spill bioremediation. Marine Pollution Bulletim, v.31, p.178-182, 1995. ATLAS, R.M.; BARTHA, R. Hydrocarbon biodegradation and oil spill bioremediation. Advances in Microbial Ecology, v.12, p.287-338, 1992. ATLAS, R.M. Microbial degradation of petroleum hydrocarbons: an environmental perspectiva. Microbiology Reviews, v.45, p.180-209, 1981. ATSDR - AGENCY FOR TOXIC SUBSTANCES AND DISEASE REGISTRY. Total petroleum hydrocarbons. Disponvel em: <httpp//www.atsdr.cdc.gov/ toxprofiles> Acesso em: 25 fev 2006. BAKER, J. M. The effect of oils on plants. Environ. Pollut. v. 1, p. 27-44, 1970. BANERJEE, D. K.; FEDORAK, P.M.; HASHIMOTO, A.; MASLIYAH, J.H.; PICKARD, M.A.; GRAY, M.R. Monitoring the biological treatment of anthracene-contaminated soil in a rotating-drum bioreactor. Appl. Microbiol. Biotechnol., v. 43, p. 521-528, 1995. BARBER, D.A.; MARTIN, J.K. The release of organic substances by cereal roots into the soil. New Phytol., v. 76, p. 68, 1976. BEWLEY, J. D.; BLACK, M. Seeds: physiology of development and germination. 2. ed. New York: Plenum Press, 1994. 445 p. BOS, R. P., THEUWS, J.L.G., LEIJDEKKERS, C.M., HENDERSON, P.T. The presence of the mutagenic polycyclic aromatic hydrocarbons benzo[a]pyrene and benz[a]anthracene in creosote. P1. Mutat. Res., v.130, p. 153-158, 1984. BOSSERT, I. D & BARTHA, R. Structure biodegradability relationships of polycyclic aromatic hydrocarbons in soil. Bull. Environ. Contam. Toxicol., v.37, p. 490-495, 1986. 98

BOSSERT, I., AND R. BARTHA. Plant growth on soils with a history of oily sludge disposal. Soil Sci., v.140, n.1, 75-77, 1985. BRASIL. Ministrio da Agricultura e Reforma Agrria. Regras para anlise de sementes. Braslia, 1992. 365 p. BRAUNACK, M. V.; DEXTER, A. R. Soil aggregation in the seedbed: a review. II. Effect of aggregate sizes on plant growth. Soil & Tillage Research, Amsterdam, v. 14, p. 281-298. 1989. BURKEN, J.G., SCHONOOR, J.L. Phytoremediation: plant upetake of atrazine and role of plant exudates. J. Environ. Eng., v. 122, n. 11, p. 958-963, 1996. CASTILHO, A.M.C. Isolamento e seleo de micoparasitas de substrato contendo petrleo. Relatrio de atividades para a UERJ, n. 1, 2006, 10 pp. CARR, R.H. Vegetative growth in soils containing crude petroleum. Soil Sci., v.8, p.67, 1919. CARVALHO, N.M.; NAKAGAWA, J. Sementes: cincia, tecnologia e produo. 4.ed. Jaboticabal: Funep, 2000. 588p. CETESB - Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental. Solo. Disponvel em:< http://www.cetesb.sp.gov.br/Solo/areas_contaminadas/relacao_areas.asp> Acesso em 16 de maio de 2006. CHAINEAU C.H., MOREL J.L., OUDOT J. Biodegradation of fuel oil hydrocarbons in the rhizosphere of maize. Journal of Environmental Quality, v.29, p.569578, 2000. CHAINEAU, C.H., MOREL, J.L., OUDOT, J. Phytotoxicity and plant uptake of fuel oil hydrocarbons. Journal of Environmental Quality, v.26, p.1478-1483, 1997. CHURCHILL, S.A.; GRIFFIN, L.P.; JONES, L.P.; CHURCHILL, P.F. Biodegradation rate enhancement of hydrocarbons by an oleophilic fertilizer and rhamnolipid biosurfactant. Journal of Environmental Quality, v.24, p.19-28, 1995.

99

COOKSON, J.T. Bioremediation Engineering: Design and Application. McGraw Hill, New York, 1995. COUTINHO, H. L.C. Avaliao da Biodiversidade do Solo atravs de Exame de DNA. Disponvel em: < http://www.cnps.embrapa.br/search/pesqs/tema2/tema2.html> Data de publicao no site: 18/03/1999, acesso em 9 de set. de 2005. CUNNINGHAM, S.D., ANDERSON, T.A., SCHWAB, P.A., HSU, F.C. Phytoremediation of soils contaminated with organic pollutants. Adv. Agron. v.56, p.55114, 1996. CURY, J.C. Atividade microbiana e diversidades metablica e gentica em solos de mangue contaminado com petrleo. Piracicaba, Dissertao de Mestrado ESALQ/USP, 2002, 84 p. DENEF, K.; SIX, J.; BOSSUYT, H.; FREY, S.D.; ELLIOTT, E.T.; MERCKX, R.; PAUSTIAN, K. Influence of dry-wet cycles on the interrelationship between aggregate, particulate organic matter, and microbial community dynamics. Soil Biology Biochemistry, v. 33, p.1599-1611, 2001. DIAS, L. E. et al. The use of nitrogen-fixing trees to revegetate bauxite and gold mined areas in the tropics: "Can trees substitute topsoil return?" In: BEIJING INTERNATIONAL SYMPOSIUM ON LAND RECLAMATION (ISLR), 1999, Beijing. Proceedings Beijing: China Coal Industry Publishing House, 1999. p. 317-325. DINARDI, A.L.; FORMAGI, V.M.; CONEGLIAN, C.M.R.; BRITO, N.N.; SOBRINHO, G.D.; TONSO, S.; PELEGRINI, R. Fitorremediao. Em <http://www.ceset.unicamp.br/ lte/Artigos/3fec2407.pdf> Acesso em 20 de set. de 2005. DOMINGUEZ-ROSADO, E.; PICHTEL, J.; COUGHLIN, M. Phytoremediation of soil contaminated with used motor oil: I. enhanced microbial activities from laboratory and growth chamber studies. Environmental engineering science, v. 21, no2, 2004a. DOMINGUEZ-ROSADO, E.; PICHTEL, J. Phytoremediation of Soil Contaminated with Used Motor Oil: II. Greenhouse Studies. Environmental Engineering Science, v.21, n.2, 2004b

100

DONNELLY, J.R. & BETOWSKI, L.D. Polycyclic Aromatic Hydrocarbons Determination. Encyclopedia of Environmental Analysis and Remediation. MEYERS, R. (Ed.) NY - Willey & Sons, v. 6, p. 3831-3837, 1998. DONNELLY, P.K.; HEDGE, R.S.; FLETCHER, J.S. Growth of PCB-degradin bacteria on compounds from photosynthetic plantas. Chemosphere, v.28, n.5, p. 981-988, 1994. EMBRAPA Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria. Centro Nacional de Pesquisa de Solos. Sistema brasileiro de classificao de solos. Braslia: Embrapa Produo de Informao; Rio de Janeiro: Embrapa Solos, 1999. 412 p. EPA - ENVIRONMENTAL PROTECTION AGENCY. Introduction to phytoremediation. Disponvel em <http://www.clu-in.org/download/remed/introphyto.pdf> Data de publicao no site: fev. de 2000, acesso em 13 de fev. de 2005. FENNER, A.H.; KITAJIMA, K. Seed and seedling ecology. In: Handbook of Functional Plant ecology, PUGNAIRE, F.I.; VALLADARES, F. Eds. Marcel Dekker Inc. New York, p.589-621, 1999. FERRO, A.M.; SIMS, R.C.; BUGBEE, B. Hycrest crested wheatgrass accelerates the degradation of pentachchlorophenol in soil. J.Environ.Qual., v.23, p. 272-281, 1994. FIELD, J.A., THURMAN, E.M. Glutathione conjugation and contaminant transformation. Envir. Sci. Technol., v.30, n. 5, p. 1413-1418, 1996. FLATHMAN P.E., LANZA G.R. Phytoremediation: Current views on an emerging green technology. J. Soil Contam., v.7, p. 415432, 1998. FLETCHER, J.S. Rhizosfere remediation of recalcitrant soil contaminants: an important component of long-term sustained biosystem treatment. In: State of the Science Conference. US Environmental Protection Agency report EPA/625/R-01/ 011b, held May 1-2, 2000, Boston, Massachusetts, pp. 139-147 FLETCHER, J.S.; HEGDE, R.S. Release of phenols by perennial plant roots and their potencial importance in bioremediation. Chemosphere, v. 31, n.4, p.3009-3016, 1995 101

FRANCO, A. A.; DIAS, L. E.; FARIA, S. M. Uso de leguminosas florestais noduladas e micorrizadas como agentes de recuperao e manuteno da vida do solo: um modelo tecnolgico. In: SIMPSIO SOBRE ESTRUTURA, FUNCIONAMENTO E MANEJO DE ECOSSISTEMAS, 1992, Rio de Janeiro. Resumos... Rio de Janeiro: UFRJ - Inst. de Biologia, 1992. p. 93. FRANKENBERGER, W. T. The need for laboratory feasibility study in bioremediation of petroleum hydrocarbons. In: CALABRESE, E.; KOSTECKI, P. (Eds.). Hydrocarbon contaminated soils and groundwater. Chelsea, MI: LewisPublishers, v. 2, p. 237 293, 1992. FRANZLUEBBERS, A. J. Soil organic matter stratification ratio as an indicator of soil quality. Soil & Tillage Research, v. 66, p. 95-106, 2002. FREEZE, R.A. E CHERRY, J.A. Groundwater. Prentice Hall, 1979, 604 pp. GALLEGOS MARTFIJEZ, M., GOMEZ SANTOS, A.; GONZALEZ CRUZ, L.; MONTES DE OCA GARDA, M. A.; YANEZ TRUJILLO, L.; ZERMENO EGUIA LIZ, J. A.; GUTIERREZROJAS, M. Diagnostic and resulting approaches to restore petroleum-contaminated soil in a Mexican tropical swamp. Wat. Sci. Tech., v. 42, p. 377-384, 2000. GESAMP - Joint Group of Experts on the Scientific Aspects of Marine Pollution. Review of Potentially Harmfull substances: Carcinogens. Rep. Stud. GESAMP, n. 46, 1991, 56p. GIBSON, D. T.; SUBRAMANIAN, V. Microbial degradation of aromatic hydrocarbons. Em GIBSON, D. T. (ed.). Microbial degradation of organic compounds. Marcel Dekker, New York, p. 181-252, 1984. GILL, L.S.; NYAWUAME, H.G.K. Effect of crude oil on the growth and anatomical features of Chromolaena odorata (L.) K. & R. Em <http://www.ehs.cdu.edu.au/chromolaena/ pubs/oil.html> Acesso em 03 de maio de 2006. GIORDANI, C.; CECCHI, S.; ZANCHI, C. Phytoremediation of soil polluted by nickel using agricultutal crops. Environ Manage n.36, v.5, p. 675-81, 2005. 102

GLASER, J.A. Nutrient enhanced bioremediation of oil contaminated dhoreline: the Valdez experience. In: On site Remediation Processes of Xenobic and Hydrocarbon Treatment. HINCHEE, R.E.; OFFENBUTTEL, R.F. Ed. Butterworth-Heinemann, Stoneham, Massachusetts, pp. 366-384, 1991. GES, R. C. S. Toxicologia industrial: um guia prtico para preveno e primeiros socorros. Rio de Janeiro, Revinter, 1997. GRAMSS G.; RUDESCHKO O. Activities of oxidoreductase enzymes in tissue extracts and sterile root exudates of three crop plants, and some properties of the peroxidase component. New Phytol., n. 138, p. 401409, 1998. GNTHER T.; DORNBERGER U.; FRITSCHE W. Effects of ryegrass on biodegradation of hydrocarbons in soil. Chemosphere, n. 33, p. 203215, 1996. GUSTAFSON, J. B.; TELL, J. G.; OREM, D. Selection of representative TPH fractions based on fate and transport considerations. Amherst, Massachusetts, Amherst Scientific, v.3, 1997. HAMIDI, A. Groundwater and Surface Water Pollution e Subsurface Site Investigation in Groundwater and Surface Water Pollution. Eds. DAVID H.F. LIU & BLA G. LIPTK. Lewis Publishers, U.S.A., 2000, 150 pp. HANS-HOLGER, L.; ALEXANDER, M. Rapid screening of plants promoting phenathrene degradation. Journal of Environmental Quality, v.28, n.4, p.1376-1377, 1999. HATZINGER P.B., ALEXANDER M. Effect of aging of chemicals in soil on their biodegradability and extractability. Environ. Sci. Technol., n.29, p.537545, 1995. HEINONSALO J.; JORGENSEN K.S.; HAAHTELA K.; SEN R. Effects of Pinus sylvestris root growth and mycorrhizosphere development on bacterial carbon source utilization and hydrocarbon oxidation in forest and petroleum-contaminated soils. J. Microbiol., n. 46, p. 451 464, 2000.

103

HEITKAMP, M. A. & CERNIGLIA, C.E. The effects of chemical structure and exposure on the microbial degradation of polycyclic aromatic hydrocarbons in freshwater and estuarine ecosystems. Environ. Toxicol. Chem., n.6, p. 535-546, 1987. HERNANDEZ-VAENCIA, I.; MAGER, D. Uso de Panicum maximum Y Brachiaria brizantha para fitorremediar suelos contaminados con un crudo de petrleo liviano. Biagro, n.15, v. 3, p. 149-155, 2003. HENNER, P.; SCHIAVON, M.; DRUELLE, V.; LICHTFOUSE, E. Phytotoxicity of ancient gaswork soils. Effect of polycyclic aromatic hydrocarbons (HPAs) on plant germination. Organic Geochemistry, n. 30, p. 963-969, 1999. HSU T.S.; BARTHA R. Accelerated mineralization of two organophosphate insecticides in the rhizosphere. Appl. Environ. Microbiol., n. 37, p. 3641, 1979. HUANG, X.-D., DIXON, D. G., AND GREENBERG, B. M. Impacts of UV radiation and photomodification on the toxicity of HPAs to the plant Lemna gibba (duckweed). Environ. Toxicol. Chem., n. 12, p. 10671077, 1993. HUTCHINSON, S.L., SCHWAB, A.P., BANKSA, M.K. Biodegradation of petroleum hydrocarbons in the rhizosfere. In: MCCUTCHEON, S.C. e SCHONOOR, J.L. Phytoremediation. Jonh Wiley & Sons, New Jersey, 2003, p. 355. HUTCHINSON, S.L.; BANKS, M.K.; SCHWAB, A.P. Phytoremediation of aged petroleum sludge: impact of inorganic fertilizer. J. Environ. Qual., n.30, p. 395-403, 2001. IPEF Instituto de Pesquisa e estudos florestais. Fatores Externos (ambientais) que Influenciam na Germinao de Sementes. Disponvel em: < http://www.ipef.br/tecsementes/germinacao. asp> Acesso em 11 de mai de 2006. IPIECA. International Petroleum Industry Environmental Conservation Association. Guia de Planificacion para Contingencias de Derrames de Hidrocarburos en el Agua. Disponvel em: < www.ipieca.org> Acesso em 11 de mai de 2006.

104

JONER E.J.; LEYVAL C. Influence of arbuscular mycorrhiza on clover and ryegrass grown together in a soil spiked with polycyclic aromatic hydrocarbons. Mycorrhiza, n.10, p. 155-159, 2001. KEMPER, W. D.; ROSENAU, R. C. Aggregate stability and size distribution. In: KLUTE, A. (Ed.) Methods of soil analysis. Madison, WI: Soil Science Society of America, p. 425-442, 1986. KNOX, R.C., SABATINI, D.A E CANTER, L.W. Subsurface Transport and Fate Processes. Lewis Publishers. Florida, USA, 1993, 430 pp. KULAKOW, P.A.; SCHUAB, A.P.; BANKS, M.K. Sreening plant species for growth on weathred sediments contaminated with petroleum hydrocarbons. Int. J. Phytoremed., n.2, v.4, p. 297-317, 2000. KYLE, W.A. Heritability of the alfafa cultivar Riley for the enhanced bioremediation of crude oil contaminated soil. Manhattan, Dissertao de mestrado, Dept. of Agron., Kansas State University, 1998. LEAHY, J.G.; COLWELL, R.R. Microbial degradation of hydrocarbons in the environment. Microbiology Reviews, n.3, v. 54, p. 305-315, 1990. LEE, E. The fate of polycyclic aromatic hydrocarbons in the rizosphere of Festuca arundinacea. Manhattan, Dissertao de Ps-Doutorado, Dept. of Civil Engineering, Kansas State University, 1996. LI, X.; FENG, Y.; SAWATSKY, N. Importance of soil water relations in assessing the endpoint of bioremediated soils. Plant and Soil, n. 192, p. 219-226, 1997. LIN, Q.X.; MENDELSSOHN, I.A. The combined effects of phytoremediation and biostimulation in enhancing habitat restoration and oil degradation of petroleum contaminated wetlands. Ecol. Eng., n. 10, p. 263-274, 1998. LOPES, B. C. Laboratrio de anatomia vegetal do Museu Nacional da Universidade Federal do Rio de Janeiro. Rio de Janeiro, RJ. Comunicao verbal, 2006. 105

LUCCA, A.; REIS, M.S. Consideraes sobre a influncia do potencial hdrico e do condicionamento osmtico na qualidade fisiolgica de sementes de soja. Informativo Abrates, v.5, p.42-50, 1995. MAHRO, B.G.; SCHAEFER, G.; KASTNER, M. Pathways of microbial degradation of polycyclic aromatic hydrocarbon in soil. In: Bioremediation of Chlorinated and Aromatic Hydrocarbon Compound. HINCHEE, R.E.; LEESON, A.; SEMPRINI, L.; ONG, S.K. Ed. Lewis Publishers, Boca Raton, Florida, pp. 203-217, 1994. MARY, B.; RECOUS, S.; DARWIS, D.; ROBIN, D. Interaction between decomposition of plant residues and nitrogen and nitrogen cycling in soil. Plant Soil, n. 181, p.71-82, 1996. MARCOS FILHO, J. Germinao de sementes. In: SEMANA DE ATUALIZAO EM PRODUO DE SEMENTES, 1. Piracicaba. Trabalhos apresentados... Campinas, Fundao Cargill, p.11-39, 1986. MARCOS FILHO, J.; CCERO, S. M.; SILVA, W. R. Avaliao da qualidade das sementes. Piracicaba, FEALQ, 1987. 230 p. MATTNEY COLE, G. Assessment and Remediation of Petroleum Contaminated Sites. Lewis Publishers, 1994, 360 pp. MCCARTY, P.L. Bioengineering issues related to in situ remediation od contaminated soils groundwater. In: Environmental Biotechnology. OMENN, G.S. Ed. Plenum Press, New York, pp.143-162, 1987. MCCUTCHEON, S.C. e SCHONOOR, J.L. Phytoremediation. Published by Jonh Wiley & Sons, New Jersey, p. 355, 2003. MEHARG, A.; CAIRNEY, A. Ectomycorrhizas-extending the capabilities of rizosphere remediation. Soil Biol. Biochem., v. 32, p. 1475-1484, 2000. MELO, I.S. Biodegradao. Jaguarina, EMBRAPA Meio Ambiente, 2001. 106

MERKL, N.; SCHULTZE-KRAFT, R.; ARIAS, M. Influence of fertiliser levels on phytoremediation of crude oil with the tropical pasture grass Brachiaria brizantha (Hochst. ex A. Rich.) Stapf. Int. J. Phytoremediat.Impresso, 2005. MERKL, N., SCHULTZE-KRAFT, R., INFANTE, C. Assessment of tropical grasses and legumes for phytoremediation of petroleum-contaminated soils. Water Air Soil Pollut., v. 165, Impresso, 2004a MERKL, N.; SCHULTZE-KRAFT, R.; INFANTE, C. Phytoremediation in the tropics The effect of Crude Oil on the Growth of Tropical Plants. Bioremediation Journal, v.8, p.177-184, 2004b MICHELSEN A., SCHMIDT I.K., JONASSON S., QUARMBY C., SLEEP D. Leaf 15N abundance of subarctic plants provides field evidence that ericoid, ectomycorrhizal and nonand arbuscular mycorrhizal species access different sources of soil nitrogen. Oecologia, n. 105, p. 5363, 1996. MMA. Ministrio do Meio Ambiente, dos Recursos Hdricos e da Amaznia Legal. Microrganismos e Biodiversidade de solos. Disponvel em < http://www.mma.gov.br/port/sbf/ chm/doc/gtt10.pdf> Acesso em 06 de setembro de 2005. MORENO, F.N.; CORSEUIL, H.X. Fitorremediao de aqferos contaminados por gasolina. Engenharia Sanitria e Ambiental, v.6, n.1, 2001. NEWSTED, J. L.; AND GIESY, J. P. Predictive models for photoinduced acute toxicity of polycyclic aromatic hydrocarbons to Daphnia magna, Strauss (cladocera, Crustacea). Environ. Toxicol. Chem., n. 6, p. 445461, 1987. NICOLOTTI G.; EGLI S. Soil contamination by crude oil: impact of the mycorrhizosphere and the revegetation potential of forest trees. Environ. Pollut., n. 99, p. 3743, 1998. NORRIS, R. D. Handbook of bioremediation. Boca Raton: Lewis Publishers, 1993. 257 p.

107

NOVEMBRE, A. D. L. C. Estudo da metodologia para a conduo do teste de germinao em sementes de algodo (Gossypium hirsutum L.) deslintadas mecanicamente. Piracicaba, Tese de Doutorado em Agronomia, ESALQ/USP, 1994, 133 p. NOVOTNY, C., ERBANOVA, P., CAJTHAML, T., ROTHSCHILD, N., DOSORETZ, C., SASEK, V. Irpex lacteus, a white-rot fungus applicable to water and soil bioremediation. Appl. Microbiol. Biotechnol., n. 54, p. 850-853, 2000. NULTSCH, W. Botnica geral. trad. Paulo Luiz de Oliveira. 10 ed. Porto Alegre, Artes Mdicas Sul, 2000, 489pp. O BRIEN M.J.P.; O BRIEN C.M. Ecologia e modelamento de florestas tropicais. Belm, FCPA, 1995. ORIS, J. T.; GIESY, J. P. The photoinduced toxicity of anthracene tion to juvenile sunfish (Lepomis spp). Aquatic Toxicol., n.6, p. 133146, 1985. OUDOT, J.; MERLIN, F.X.; PINVIDIC, P. Weathering rates of oil components in a bioremediation experiment in estuarine sediments. Marine Environ. Res., v. 45, n. 2, p. 113125, 1998. PATIN, S.A. Pollution and Biological Resources of the Oceans. Butterworth Scientific, London, 1982, 287 pp. PEDROZZO, M.F.M.; BARBOSA, E.M.; CORSEUIL, H.X.; SCHNEIDER, M.R.;

LINHARES, M.M. Ecotoxicologia e avaliao de risco do petrleo. Salvador: Centro de Recursos Ambientais. Srie Cadernos de Referncia Ambiental, v.12, 2002, 246 p. PEREIRA, L.T.C.P; LEMOS, J.L.S. Degradao de hidrocarbonetos de petrleo por Aspergillus niger e Penicillium corylophilum. Em: http://www.cetem.gov.br/publicacao/ serie_anais_XII_jic_2004/22Artigo%20JIC%202004%20Lucas%20Tupi%20e%20Judith%20Li liana.pdf Acesso em 4 de maio de 2006. PETROBRAS - PETRLEO BRASILEIRO. Assessoria de Sade Ocupacional do Servio de Recursos Humanos. Exposies ocupacionais a agentes potencialmente perigosos na 108

indstria do petrleo. Rio de Janeiro: PETROBRAS/ SEREC/ASSAO, 1994. (Tema de sade ocupacional, n. 25/94). PEZESHKI, S. R.; HESTER, W.; LIN, Q.; NYMAN, J. A. The effects of oil spill and clean-up on dominant US Gulf coast marsh macrophytes: a review. Environ. Poll., v. 108, p. 129-139, 2000. PHYTOPET Database. Disponvel em < www.phytopet.usask.ca> Acesso em 7 de jun de 2005. PLETSCH, M., CHARLWOOD, B.V., ARAUJO, B.S. Fitorremediao de guas e solos poludos. Revista de Biotecnologia, v.11, 2000. POPINIGIS, F. Fisiologia da semente. Braslia, AGIPLAN, 1977. 289 p. PONS, A.M.A.; OLIVEIRA, I.V.; ROSA, L.S.; COSTA, M.A.G.; CRUZ, A.S. Derramamentos de petrleo e conseqncias para o meio ambiente. Disponvel em: < http://www.arvore.com.br/artigos/htm_2003/ar1407_1.htm>. Acesso em 04 de outubro de 2005. POTTER T. L.; SIMMONS K. E. Composition of petroleum mixtures. Amherst, Massachusetts: Amherst Scientific, (Total Petroleum Hydrocardon Criteria Working Group Series, v. 2), 1998. PRADHAN S.P.; CONRAD J.R.; PATEREK J.R.; SRIVASTAVA V.J. Potential of phytoremediation for treatment of HPAs in soil at MGP sites. J. Soil Contam., v. 7, p. 467 480, 1998. PRADO, A.M.; LOPEZ, M. S.; BOISSIERE, J. Recuperacion de suelos contamirados por hidrocarburos mediante el uso de leguminosas inoculadas. Vision Tecnolgica, v. 1, n.2, p. 2229, 1994. RASIAH, V.; VORONEY, R.P.; KACHANOSKI, R.G. Biodegradation of oily waste as influenced by nitrogen forms and sources. Water, Air Soil Pollut., v.65, p. 143-151, 1992. REICHARDT, K. Processos de transferncia no sistema solo-planta-atmosfera. Piracicaba, Fundao Cargill, 4 ed., 1985. 422 p. 109

REID, B. J.; JONES, K. C.; SEMPLE, K. T. Bioavailability of persistent organic pollutants in soils and sediments: a perspective on mechanisms, consequences and assessment. Environ. Pollut., v. 108, p. 103-112, 2000. REILLEY, K.; BANKS, M.K.; SCHWAB, A.P. Dissipation of polynuclear aromatic hydrocarbons in the rizophere. J Environ.Qual., v. 25, p. 212-219, 1996. REIS, J. C. Environmental Controfin Petroleum Engineering. Gulf Publ., Houston, TX, 1996. REN, L.; ZEILER, L.F.; DIXON, G.; GREENBERG, B.M. Photoinduced effects of polycyclic aromatic hydrocarbons on Brassica napus (Canola) during germination and early seedling development. Ecotoxicology and Environmental Safety, v. 33, p. 73-80, 1996. REN, L.; HUANG, X.-D.; MCCONKEY, B. J.; DIXON, D. G.; GREENBERG, B. M. Photoinduced toxicity of three polycyclic aromatic hydrocarbons (fluoranthene, pyrene, and naphthalene) to the duckweed Lemna gibba L. G-3. Ecotoxicology and Environmental Safety, n. 28, p. 160171, 1994. ROBSON, D.B.; GERMIDA, J.J.; FARREL, R.E.; KNIGHT, J.D. Hydrocarbon tolerance correlates with seed mass and relative growth rate. Bioremediation Journal, v. 8, p. 185-199, 2004. ROMEIRO, S.; LAGA, A.M.M.A.; FURLANI, P.R.; ABREU, C.A.; ABREU, M.F.; PEREIRA, F.F. Fitorremediao: Avaliao do potencial de Riccinus comunnis L.(mamona) e de Helianthus annus L. (girassol) na fitoextrao de chumbo. Campinas, Tese de Mestrado, IAC, 2005. ROOCKWOOD, D.L.; CARTER, D.R.; MA,L.;TU,C; ALKER, G.R. Phytoremediation of contaminated sites using wood biomass. Florida Center for solid and hazardous waste management. Gainesville, Fl, p. 67-78, 2001. ROSATO, Y. B. Biodegradao do petrleo. In: Microbiologia ambiental. MELO, I. S.; AZEVEDO, J. L. Jaguarina, EMBRAPA/CNPMA, p. 308-334, 1997. 110

ROVIRA, A.D.; FOSTER, R.C.; MARTIN, J.K. Origin, nature and nomenclature of the organic materials in the rizosphere. In: The root-soil interface. HARLEY, J.L.; RUSSEL, R.S. (Eds). Academic Press, London, p. 1-4, 1979. SALERNO, A.R.; VETTERLE, C.P.; DESCHAMPS, F.C.; FREITAS, E.A.G. Gramneas forrageiras estivais perenes no Baixo Vale do Itaja. Florianpolis, Empresa de Pesquisa Agropecuria de Santa Catarina, Boletim Tcnico n. 49, 1990. SALT, D.E.; SMITH, R.D.; RASKIN, I. Phytoremediation. Plant Molec. Biol., v. 49, p. 643668, 1998. SALZER P., CORBIERE H., BOLLER T. Hydrogen peroxide accumulation in Medicago truncatula roots colonized by the arbuscular mycorrhiza- forming fungus Glomus intraradices. Planta, v. 208, p. 319325, 1999. SCHNOOR, J.L.; LICHT, L.A.; MCCUTCHEON, S.C.; WOLFE, L.N.; CARREIRA, L.H. Phytoremediation of organic and nutrient contaminants. Environ. Sci. And Technol., v.29, n.7, p. 318-23A, 1995. SCHWAB, A.P.; BANKS, M.K.; ARUNUCHALAM, M. Biodegradation of polycyclic aromatic hydrocarbons in rizosphere soil. In: Bioremediation of Recalcitrant Organics. HINCHEE, R.E.; HOEPPEL, R.H.; ANDERSON, D.B. Ed. Battelle Press, Columbus, Ohio, p. 23-29, 1995. SCHWAB A.P., BANKS M.K. Biologically mediated dissipation of polyaromatic hydrocarbons in the root zone. In: Bioremediation through rhizosphere technology. ANDERSON T.A.; COATS J.R. (Eds.). Washington, American Chemical Society, p. 132141, 1994. SENESI, N. Organic Pollutant Migration in soils as affected by soil Organic Matter. Molecular and Mechanistic Aspects. In: Migration and Fate of Pollutants in Soils and Subsoils. DOMENICO, P.; FRIEDRICH, G.; HELFFERICH, N. (Eds). Berlin, Ecological Sciences, v. 32, p. 47-74, 1993.

111

SHUTTLEWORTH, K. L.; CERNIGLIA, C.E. Environmental aspects of HPA biodegradation. Appl. Biochem. Biotechnol., v. 54, p.291-302, 1995. SICILIANO S.D.; GREER C.W. Plant-bacterial combinations to phytoremediate soil contaminated with high concentrations of 2,4,6- trinitrotoluene. J. Environ. Qual., v. 29, p. 311316, 2000. SILVA, J.J.L.S. Fitorremediao: Processos e Aplicaes. Rio de Janeiro, Monografia de Especializao em Engenharia Sanitria e Ambiental, DESMA/ UERJ, 2005. 68p. SLOAN, N.A. Oil impacts on cold-water marine resources: a rewiew relevant to Parks Canads evolving 2005. SMITH, M.J.; FLOWERS, T.H.; DUNCAB, H.J.; ALDER, J. Effects of polycyclic aromatic hydrocarbons on germination and subsequent growth of grasses and legumes in freshly contaminated soil with aged PAHs residues. Environmental Pollution, n. 28, p. 1-7, 2005. SMITH S.E.; READ D.J. Mycorrhizal symbiosis. San Diego, Academic Press, 1997, 605 p. SMITH, B.; STACHOWISK, M.; VOLKENBURGH, E. Cellular processes limiting leaf growth in plants under hypoxic root stress. J. Exptl. Bot., v. 40, p. 89-94, 1989. SMRECZAK, B.; MALISZEWSKA-KORDYBACH, B. Seeds germination and root growth of selected plants in PAH contaminated soil. Fresenius Environmental Bulletin, n. 12, p. 946949, 2003. SPOSITO, G. The chemistry of soils. New York: Oxford University Press, 1989, 234 p. STEGMANN, R.; BRUNNER, G.; CALMANO, W.; MATZ, W. Treatment of contaminated soil: fundamentals, analysis, applications. Springer, Berlin Heidelberg New York, 2001. SUTHERLAND, J.B., RAFII, F., KHAN, A.A., CERNIGLIA, C.E. Mechanisms of polycyclic aromatic hydrocarbon degradation. In: Microbial Transformation and degaradation of toxic 112 marine mandate. Em: <http://parkscanada.pch.gc.ca/library/ Download Documents/DocumentsArchive/occasional_paper11_e.PDF> Acesso em: 6 de setembro de

organic chemicals. YOUNG, L.Y. e CERNIGLIA, C.E. (Eds). Wiley-Liss, New York, p. 269306, 1995. TAVARES, S.R.L.; MAHLER, C.F; BARBOSA, M.C. Uso de leguminosas arbreas de rpido crescimento para fitorremediao de hidrocarbonetos de petrleo. In: XXX CONGRESSO BRASILEIRO DE CINCIA DO SOLO. Recife, Sociedade Brasileira de Cincia do Solo, v. 1, p. 4-4, 2005. THOMAS, J. E. (organizador). Fundamentos de engenharia de petrleo. Rio de janeiro, Intercincia, PETROBRAS, 2o ed., 2004. UDO, E.J.; FAYEMI, A.A.A. The effect of oil pollution of soil on germination, growth and nutrient uptake of corn. J. Environ. Quality., v. 4, p. 537-540, 1975. US TECHNICAL LETTER No1110-1-176. Bioremediation using landfarming system. Disponvel em <http://www.wbdg.org/ccb/ARMYCOE/COETEK/tl1_176.pdf> Acesso em 23 de Maro de 2006. VAN DER MEER, J. R.; VOS, W.M.; HARAYAMA, S.; ZEHNDER, A.J.B. Molecular mechanisms of genetic adaptation to xenobiotic compounds. Microbiol. Rev., v.56, p. 677-694, 1992. VZQUEZ-YANES, C. & OROZCO-SEGOVIA, A. Patterns of seed longevity and germination in the rainforest. Annual Review of Ecology and Systematics, v. 24, p. 69-87, 1993. XU, J.G.; JONNSON, R.L. Root growth, microbial activity and phosphatase activity in oilcontaminated, remediated and uncontaminated soils planted to barley and field pea. Plant Soil, v. 173, p. 3-1, 1995. WHO - WORLD HEALTH ORGANIZATION. International Programme on Chemical Safety IPCS. Selected petroleum products. Geneva, 1982 (Environmental Health Criteria, v. 20). WILSON, E.O. The diversity of life. Boston, Harvard University Press, 1992. 113

YEN, K.M.; SERDAR, C.M. Genectis of naphthalene catabolism in pseudomonads. Crit. Rev. Microbiol., v. 15, p. 247-268, 1988.

114

ANEXO I CHAVE DE DECISO NA ESCOLHA DA ESPCIE

1.1 Chave de deciso Lista das espcies Pl. I Acacia holosericea (accia) Fabaceae Pl.II Brachiaria brizantha (braquiria) Poaceae Pl.III Glycine max (soja) Fabaceae Pl.IV Helianthus annus (girassol) Compositae Pl.V Leucaeana leucocephala (leucena) Mimosaceae Pl.VI Riccinus communis (mamona) Euphorbiaceae Pl.VII Tibouchina granulosa (quaresmeira) Melastomataceae

1.2 Chave de identificao 1. Espcies tolerantes a solos contaminados com concentraes menores que 6% de petrleo 2. reas com restries ao uso do solo, tais como reas de Proteo Ambiental (APAs), ou prximas, onde o uso de espcies exticas no recomendado. Tibouchina granulosa Pl.VII 2. reas sem restries de uso do solo, agricultveis. 3. Regies com clima de temperaturas amenas. Helianthus annus Pl.IV 3. Regies com clima de altas temperaturas Leucaena leucocephala Pl.V 1. Espcies tolerantes a solos contaminados com concentraes at 6% de petrleo 4. reas com solos degradados, improdutivos, com finalidade apenas de remediao. Acacia holosericea Pl. I 115

4. reas com solos produtivos, com finalidade agrcola. 5. Espcie resistente a perodos de seca prolongada. Riccinus communis Pl.VI Brachiaria brizantha Pl.II 5. Espcie exigente em disponibilidade hdrica. Glycine max Pl.III

116

ANEXO II FICHAS AGRONMICAS

Planta I Nome comum: Accia Nome cientfico: Acacia holosericea Famlia: Leguminosae Origem: Austrlia Ciclo/ desenvolvimento: espcie leguminosa arbrea perene. Exigncias: Requere altas temperaturas, sensvel a salinidade e alcalinidade do solo. Valor econmico: apresenta qualidades importantes para programas de recuperao ambiental. Elevadas concentraes de matria orgnica em substratos cultivados com Acacia holosericea refletem sua grande capacidade de produo de biomassa e, principalmente, produo de razes, caractersticas desejveis para espcies a serem utilizadas na revegetao de reas degradadas (DIAS et al., 1999; FRANCO et al., 1992). Potencial para fitorremediao: Tolerante a solos contaminados com at 6% de petrleo sem comprometimento da taxa de germinao e da produo de biomassa.

Figura 59. Acacia holosericea

117

Planta II Nome comum: Braquiria Nome cientfico: Brachiaria brizantha Famlia: Poaceae Origem: frica Ciclo/ desenvolvimento: gramnea forrageira perene Exigncias: considerada a mais resistente seca e ao frio, desenvolvendo-se tanto em solos midos quanto secos e apresentando pouca exigncia em fertilidade do solo (SALERNO et al. 1990, ALCNTARA & BUFARAH, 1988). Valor econmico: Utilizada como forrageira, pastoreio e fenao. Potencial para fitorremediao: Tolerante a solos contaminados com concentraes at 6% de petrleo.

Figura 60. Brachiaria brizantha

118

Planta III Nome comum: Soja Nome cientfico: Glycine max Famlia: Fabaceae Origem: China Ciclo/ desenvolvimento: uma leguminosa de ciclo anual Exigncias: cultura com alta demanda pelo nutriente nitrognio (N) Valor econmico: A soja um gro muito verstil que d origem a produtos e subprodutos muito usados pela agroindstria, indstria qumica e de alimentos. Potencial para fitorremediao: Tolerante a solos contaminados com concentraes de at 6% de petrleo.

Figura 61. Glycine max

119

Planta IV Nome comum: Girassol Nome cientfico: Helianthus annuus Famlia: Compositae Origem: Amrica do Norte Ciclo/ desenvolvimento: dicotilednea anual Exigncias: pouco sensvel a baixas temperaturas e a perodos de estiagem Valor econmico: constituem-se em uma das quatro maiores fontes de leo vegetal comestvel do mundo. Potencial para fitorremediao: Tolerante a solos contaminados com concentraes inferiores a 6% de petrleo. O girassol metabolizou o fenantreno transformando-o em fenols (LISTE & ALEXANDER, 1999). O consrcio de girassol com mostarda removeu 67% do leo de motor usado contido no substrato (DOMINGUEZ-ROSADO & PICHTEL, 2004).

Figura 62. Helianthus annus

120

Planta V Nome comum: Leucena Nome cientfico: Leucaeana leucocephala Famlia: Mimosaceae Origem: Amrica Central Ciclo/ desenvolvimento: dicotilednea perene Exigncias: Resistentes a diferenas de luminosidade, salinidade do solo e variaes na disponibilidade hdrica. No entanto, apresenta baixa resistncia a solos cidos, com alto teor de alumnio, a nodulao e seu crescimento so afetados, adversamente, abaixo do pH 5,5. Valor econmico: Utilizada como forrageira, pastoreio e para adubao verde. Potencial para fitorremediao: Tolerncia a solos contaminados com concentraes baixas de petrleo at 0,5%.

Figura 63. Leucaeana leucocephala

121

Planta VI Nome comum: Mamona Nome cientfico: Ricinus communis Famlia: Euphorbiaceae Origem: ndia Ciclo/ desenvolvimento: uma planta de hbito arbustivo e perene. Exigncias: exigente em nutrientes devendo ser cultivada em solos frteis e profundos. sensvel acidez sendo recomendvel um pH prximo do neutro e exigente em calor e alta luminosidade, necessita de um mnimo de 850 mm anuais de chuva, bem distribudas durante seu ciclo. Valor econmico: principal produto o leo de mamona, tambm chamado leo de rcino que contm 90% de cido ricinolico, o que representa uma fonte praticamente pura deste cido graxo, fato raro na natureza. Este componente confere ao leo de mamona ampla gama de aplicao industril, inclusive como fonte alternativa de combustvel. Potencial para fitorremediao: No apresentou resultados conclusivos. Pode-se afirmar com certeza que a espcie tolerante a solos contaminados com baixas concentraes de petrleo, at 0,5%. A mamona foi considerada como boa armazenadora de nquel (GIORDANI et al. 2005). Segundo Romeiro et al. (2005) a mamona acumula chumbo.

Figura 64. Ricinus comunnis. 122

Planta VII Nome comum: Quaresmeira Nome cientfico: Tibouchina granulosa Famlia: Melastomataceae Origem: Mata Atlntica no Brasil Ciclo/ desenvolvimento: espcie vegetal arbrea perene. Exigncias: alto requerimento nutricional. Valor econmico: Apresenta flores com tonalidades que vo do rosa ao roxo, por isso potencial para ser utilizada como planta ornamental. Potencial para fitorremediao: Tolerante a solos contaminados com concentraes de at 6% de petrleo, desde que o plantio seja feito com mudas.

Figura 65. Tibouchina granulosa

123

ANEXO III - LISTA DE ESPCIES COM POTENCIAL PARA FITORREMEDIAO

Nome comum (Ingls) Alfafa Alpine bluegrass Alsike clover Arctic willow Barley Bell rhodesgrass Bering hairgrass Bermuda grass Big bluestem Big sagebrush Birdsfoot trefoil Black alder Black locust Black medick Blue grama Bog bilberry Bog birch Bog cranberry Boneset Bush bean Canada wild-rye Canela Carrot

Nome comum (Portugus) Alfafa

Nome cientfico Medicago sativa L Poa alpina L Trifolium hybridum L. Salix arctica Dallas Hordeum vulgare L Chloris gayana Deschampsia beringensis Cynodon dactylon L Andropogon gerardi Artemisia tridentata Lotus corniculatus Alnus glutinosa Robinia pseudoacacia Medicago lupulina Bouteloua gracilis Vaccinium uliginosum Betula glandulosa Vaccinium vitis-idaea Eupatorium serotinum Phaseolus vulgaris Elymus canadensis Pluchea purpurascens Brassica rapa Daucus carota

Potencial de fitorremediao fitorremediador demonstrado tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto fitorremediador demonstrado tolerante a hidrocarboneto fitorremediador demonstrado fitorremediador demonstrado tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto fitorremediador demonstrado tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto fitorremediador demonstrado fitorremediador suspeito tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto fitorremediador demonstrado

Famlia Fabaceae (Leguminosae) Poaceae (Gramineae) Fabaceae (Leguminosae) Salicaceae Poaceae (Gramineae) Poaceae (Gramineae) Poaceae (Gramineae) Poaceae (Gramineae) Poaceae (Gramineae) Asteraceae (Compositae) Fabaceae (Leguminosae) Betulaceae Fabaceae/Leguminosae Fabaceae (Leguminosae) Poaceae (Gramineae) Ericaceae Betulaceae Ericaceae Asteraceae (Compositae) Fabaceae (Leguminosae) Poaceae (Gramineae) Asteraceae (Compositae) Brassicaceae (Cruciferae) Apiaceae (Umbelliferae) 124

Cevada Capim-Rhodes Coast cross

Cornicho Amieiro Accia-falsa Grama-blue

Amora alpina Feijo Canela Nabo Cenoura

Cattail Chili pepper Cordgrass Crested wheatgrass Crown vetch Deer tongue Duckweed Dwarf scouring-rush Eastern baccharis Fababean Field pea Giant ragweed Goldenrod Green alder Hybrid willow Indiangrass Jack pine Kleingrass Labrador tea Leek Little bluestem Maize Marsh horsetail Mint Mulberry Oat Orchardgrass Pea Poplar

Taboa Pimenta-malagueta Capim pratur

Alecrim Fava forrageira Ervilha forrageira Gigante

Choro Pinheiro

Alho-por Milho Erva-de-rato Poejo Amoreira Aveia Capim dos pomares Ervilha lamo

Typha latifolia Capsicum frutescens Spartina alterniflora Agropyron desertorum Coronilla varia Panicum clandestinum Lemna gibba Equisetum scirpoides Baccharis halimifolia Vicia faba Pisum arvense Ambrosia trifida Solidago L Alnus crispa Salix L Sorghastrum nutans Pinus banksiana Panicum coloratum Ledum groenlandicum Allium porrum Schizachyrium scoparium Zea mays Equisetum palustre Mentha pulegium Morus L Avena sativa Dactylis glomerata Pisum sativum Populus species

tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto fitorremediador demonstrado tolerante a hidrocarboneto fitorremediador demonstrado fitorremediador demonstrado tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto fitorremediador demonstrado fitorremediador demonstrado tolerante a hidrocarboneto fitorremediador demonstrado tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto fitorremediador demonstrado tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto fitorremediador suspeito tolerante a hidrocarboneto tolerante hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto fitorremediador suspeito fitorremediador demonstrado

Typhaceae Solonaceae Poaceae (Gramineae) Poaceae (Gramineae) Fabaceae (Leguminosae) Poaceae (Graminae) Lemnaceae Equisetaceae Asteraceae (Compositae) Fabaceae (Leguminosae) Fabaceae (Leguminosae) Asteraceae (Compositae) Asteraceae (Compositae) Betulaceae Salicaceae Poaceae (Gramineae) Pinaceae Poaceae (Graminae) Ericaceae Liliaceae Poaceae (Gramineae) Poaceae (Graminae) Equisetaceae Lamiaceae (Labiatae) Moraceae Poaceae (Gramineae) Poaceae (Graminae) Fabaceae (Leguminosae) Salicaceae 125

Prairie Buffalograss Quackgrass Ragwort Red clover Red fescue Reed canary grass Reed grass Rock sedge Rubber rabbitbrush Ryegrass Ryegrass hybrid Salt meadow grass Saskatoon Scurf pea Seashore vervain Side oats grama Slender oat grass Slender wheatgrass Snow willow Sorghum Southern crabgrass Soybean Sudangrass Sugerberry Sunflower Sweet clover Switchgrass Tall cotton-grass Tall fescue

Buchloe dactyloides Agropyron repens Senecio glaucus Trevo vermelho Trifolium pratense Capim do campo Festuca rubra Canria Phalaris arundinacea Phragmites australis Carex rupestris Chrysothamnus nauseosus Azevm perene Lolium perenne Azevm anual Lolium multiflorum Spartina patens Amelanchier alnifolia Psoralea bituminosa Erva-do-pai-caetano Verbena litoralis Bouteloua curtipendula Aveia-silvestre Avena barbata Agropyron trachycaulum Salix reticulata Sorgo Sorghum bicolor Digitaria adscendens Soja Glycine max Sorgo de guin Sorghum vulgare Celtis laevigata Girassol Helianthus annuus Melilotus altissima Panicum virgatum Eriophorum angustifolium Festuca Festuca arundinacea

Capim bfalo

fitorremediador demonstrado tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto fitorremediador demonstrado tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto fitorremediador demonstrado fitorremediador demonstrado tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto fitorremediador demonstrado fitorremediador demonstrado tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto fitorremediador demonstrado tolerante a hidrocarboneto fitorremediador demonstrado fitorremediador demonstrado tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto fitorremediador demonstrado fitorremediador demonstrado fitorremediador demonstrado

Poaceae (Gramineae) Poaceae (Gramineae) Asteraceae (Compositae) Fabaceae (Leguminosae) Poaceae (Gramineae) Poaceae (Gramineae) Poaceae (Gramineae) Cyperaceae Asteraceae (Compositae) Poaceae (Gramineae) Poaceae (Graminae) Poaceae (Gramineae) Rosaceae Fabaceae (Leguminosae) Verbenaceae Poaceae (Gramineae) Poaceae (Graminae) Poaceae (Graminae) Salicaceae Poaceae (Gramineae) Poaceae (Graminae) Fabaceae (Leguminosae) Poaceae (Gramineae) Ulmaceae Asteraceae (Compositae) Fabaceae (Leguminosae) Poaceae (Gramineae) Cyperaceae Poaceae (Gramineae) 126

Three-square bulrush Tilesy sage Umbrella sedge Umbrellaplant Vasey grass Capim-da-roa Vicia tetrasperma Wagner flat pea Water sedge Western wheatgrass Wheat Trigo White clover Trevo branco White lupine Tremoo-branco Woodland horsetail Cavalinha Yellow sweet-clover Trevo-de-cheiro Zoysiagrass Grama-esmeralda FONTE: Phytopet Database (2005)

Scirpus pungens Artemisia tilesii Cyperus L Eriogonum corymbosum Paspalum urvillei Vicia tetrasperma Lathyrus sylvestris Carex aquatilis Agropyron smithii Triticum aestivum Trifolium repens Lupinus albus Equisetum sylvaticum Melilotus officinalis Zoysia japonica

tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto fitorremediador demonstrado tolerante a hidrocarboneto fitorremediador demonstrado tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto fitorremediador suspeito tolerante a hidrocarboneto tolerante a hidrocarboneto fitorremediador demonstrado

Cyperaceae Asteraceae (Compositae) Cyperaceae Polygonaceae Poaceae (Graminae) Fabaceae (Leguminosae) Fabaceae (Leguminosae) Cyperaceae Poaceae (Gramineae) Poaceae (Gramineae) Fabaceae (Leguminosae) Fabaceae (Leguminosae) Equisetaceae Fabaceae (Leguminosae) Poaceae

127

ANEXO IV TESTES KRUSKAL-WALLIS

Brachiaria brizantha (Bb) Germidador (Ge)

Kruskal-Wallis Test on GPreBbGe Conc_Ge 0.00 0.05 0.50 Overall H = 1.50 H = 1.53 N 4 4 4 12 DF = 2 DF = 2 Median 0.2000 0.2800 0.2200 Ave Rank 5.3 8.3 6.0 6.5 Z -0.85 1.19 -0.34

P = 0.472 P = 0.465 (adjusted for ties)

Kruskal-Wallis Test on GTarBbGe Conc_Ge 0.00 0.05 0.50 Overall H = 0.04 H = 0.04 N 4 4 4 12 DF = 2 DF = 2 Median 0.1000 0.1100 0.1100 Ave Rank 6.8 6.2 6.5 6.5 Z 0.17 -0.17 0.00

P = 0.981 P = 0.981 (adjusted for ties)

Kruskal-Wallis Test on GtotBbGe Conc_Ge 0.00 0.05 0.50 Overall H = 0.50 H = 0.52 N 4 4 4 12 DF = 2 DF = 2 Median 0.3500 0.3900 0.3300 Ave Rank 6.2 7.5 5.7 6.5 Z -0.17 0.68 -0.51

P = 0.779 P = 0.773 (adjusted for ties)

Kruskal-Wallis Test on RPreBbGe Conc_Ge 0.00 0.05 0.50 Overall H = 0.99 H = 0.99 N 4 4 4 12 Median 0.011400 0.011400 0.009800 Ave Rank 6.8 7.6 5.1 6.5 Z 0.17 0.76 -0.93

DF = 2 DF = 2

P = 0.609 P = 0.608 (adjusted for ties)

Kruskal-Wallis Test on APreBbGe Conc_Ge 0.00 0.05 0.50 Overall N 4 4 4 12 Median 8.00E-04 1.35E-03 1.00E-03 Ave Rank 5.5 9.4 4.6 6.5 Z -0.68 1.95 -1.27

128

H = 3.93 H = 3.97

DF = 2 DF = 2

P = 0.140 P = 0.137 (adjusted for ties)

Kruskal-Wallis Test on RTarBbGe Conc_Ge 0.00 0.05 0.50 Overall H = 4.31 N 4 4 4 12 Median 0.01830 0.01955 0.01280 Ave Rank 7.5 8.5 3.5 6.5 Z 0.68 1.36 -2.04

DF = 2

P = 0.116

Kruskal-Wallis Test on ATarBbGe Conc_Ge 0.00 0.05 0.50 Overall H = 0.47 H = 0.48 N 4 4 4 12 Median 0.002100 0.002400 0.002400 Ave Rank 5.6 7.4 6.5 6.5 Z -0.59 0.59 0.00

DF = 2 DF = 2

P = 0.790 P = 0.787 (adjusted for ties)

Helianthus annus (Ha) Germinador (Ge)

Kruskal-Wallis Test on GPreHaGe Conc_Ge 0.00 0.05 0.50 Overall H = 8.47 H = 8.85 N 8 8 8 24 DF = 2 DF = 2 Median 0.7600 1.0000 0.9400 Ave Rank 7.1 17.4 13.0 12.5 Z -2.63 2.39 0.24

P = 0.015 P = 0.012 (adjusted for ties)

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on GTarHaGe Conc_Ge 0.00 0.05 0.50 Overall H = 10.79 H = 12.35 N 8 8 8 24 Median 1.80E-01 0.00E+00 0.00E+00 Ave Rank 19.2 9.6 8.8 12.5 Z 3.28 -1.44 -1.84

DF = 2 DF = 2

P = 0.005 P = 0.002 (adjusted for ties)

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on GtotHaGe Conc_Ge 0.00 0.05 0.50 N 8 8 8 Median 0.9700 1.0000 0.9600 Ave Rank 10.7 15.6 11.3 Z -0.89 1.50 -0.61

129

Overall H = 2.28 H = 2.63

24 DF = 2 DF = 2

12.5 P = 0.320 P = 0.269 (adjusted for ties)

Kruskal-Wallis Test on RPreHaGe Conc_Ge 0.00 0.05 0.50 Overall H = 12.29 N 8 8 8 24 Median 0.005935 0.005925 0.003790 Ave Rank 15.5 16.6 5.4 12.5 Z 1.47 2.02 -3.49

DF = 2

P = 0.002

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on APreHaGe Conc_Ge 0.00 0.05 0.50 Overall H = 0.49 N 8 8 8 24 Median 0.04247 0.04440 0.04214 Ave Rank 12.1 13.9 11.5 12.5 Z -0.18 0.67 -0.49

DF = 2

P = 0.785

Kruskal-Wallis Test on RTarHaGe Conc_Ge 0.00 0.05 0.50 Overall H = 18.24 N 8 8 8 24 Median 0.021390 0.049750 0.005830 Ave Rank 13.5 19.5 4.5 12.5 Z 0.49 3.43 -3.92

DF = 2

P = 0.000

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on ATarHaGe Conc_Ge 0.00 0.05 0.50 Overall H = 8.71 N 8 8 8 24 Median 0.03376 0.03073 0.03709 Ave Rank 13.1 7.0 17.4 12.5 Z 0.31 -2.69 2.39

DF = 2

P = 0.013

Reject H0

Leucaeana leucocephala (Ll) Casa de Vegetao (CV)

Kruskal-Wallis Test on GpreLlCV ConcCV 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall N 4 4 4 4 4 4 24 Median 1.73E-01 3.00E-02 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 Ave Rank 22.2 18.7 8.5 8.5 8.5 8.5 12.5 Z 3.02 1.94 -1.24 -1.24 -1.24 -1.24

130

H = 15.85 H = 22.52

DF = 5 DF = 5

P = 0.007 P = 0.000 (adjusted for ties)

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on GtarLlCV ConcCV 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 15.37 H = 21.82 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 1.23E-01 1.55E-01 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 Ave Rank 20.3 20.8 8.5 8.5 8.5 8.5 12.5 Z 2.40 2.56 -1.24 -1.24 -1.24 -1.24

DF = 5 DF = 5

P = 0.009 P = 0.001 (adjusted for ties)

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on GtotLlCV ConcCV 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 15.66 H = 22.25 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 2.60E-01 1.80E-01 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 Ave Rank 21.9 19.1 8.5 8.5 8.5 8.5 12.5 Z 2.90 2.05 -1.24 -1.24 -1.24 -1.24

DF = 5 DF = 5

P = 0.008 P = 0.000 (adjusted for ties)

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on RpreLlCV ConcCV 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 15.45 H = 21.95 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 2.95E-03 3.35E-03 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 Ave Rank 19.7 21.2 8.5 8.5 8.5 8.5 12.5 Z 2.25 2.71 -1.24 -1.24 -1.24 -1.24

DF = 5 DF = 5

P = 0.009 P = 0.001 (adjusted for ties)

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on ApreLlCV ConcCV 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 15.45 H = 21.94 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 2.95E-02 3.21E-02 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 Ave Rank 19.7 21.2 8.5 8.5 8.5 8.5 12.5 Z 2.25 2.71 -1.24 -1.24 -1.24 -1.24

DF = 5 DF = 5

P = 0.009 P = 0.001 (adjusted for ties)

Reject H0

131

Kruskal-Wallis Test on RtarLlCV ConcCV 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 15.61 H = 22.16 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 4.95E-03 3.65E-03 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 Ave Rank 21.8 19.3 8.5 8.5 8.5 8.5 12.5 Z 2.87 2.09 -1.24 -1.24 -1.24 -1.24

DF = 5 DF = 5

P = 0.008 P = 0.000 (adjusted for ties)

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on AtarLlCV ConcCV 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 15.52 H = 22.03 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 3.14E-02 2.99E-02 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 Ave Rank 21.5 19.5 8.5 8.5 8.5 8.5 12.5 Z 2.79 2.17 -1.24 -1.24 -1.24 -1.24

DF = 5 DF = 5

P = 0.008 P = 0.001 (adjusted for ties)

Reject H0

Ricinus communis (Rc) Casa de Vegetao (CV)

Kruskal-Wallis Test on GpreRcCV Conc_CV 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 16.25 H = 19.33 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 3.63E-01 5.65E-01 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 Ave Rank 18.5 22.5 7.0 8.9 8.9 9.3 12.5 Z 1.86 3.10 -1.70 -1.12 -1.12 -1.01

DF = 5 DF = 5

P = 0.006 P = 0.002 (adjusted for ties)

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on GtarRcCV Conc_CV 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 15.36 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 3.70E-01 3.59E-01 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 Ave Rank 20.5 20.5 8.5 8.5 8.5 8.5 12.5 Z 2.48 2.48 -1.24 -1.24 -1.24 -1.24

DF = 5

P = 0.009

132

H = 21.81

DF = 5

P = 0.001 (adjusted for ties)

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on GtotRcCV Conc_CV 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 16.10 H = 19.14 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 6.25E-01 7.33E-01 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 Ave Rank 18.7 22.2 7.0 8.9 8.9 9.3 12.5 Z 1.94 3.02 -1.70 -1.12 -1.12 -1.01

DF = 5 DF = 5

P = 0.007 P = 0.002 (adjusted for ties)

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on RpreRcCV Conc_CV 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 12.98 H = 15.42 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 2.53E-02 4.40E-02 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 Ave Rank 17.7 21.2 7.0 9.0 11.3 8.8 12.5 Z 1.63 2.71 -1.70 -1.08 -0.39 -1.16

DF = 5 DF = 5

P = 0.024 P = 0.009 (adjusted for ties)

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on ApreRcCV Conc_CV 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 13.79 H = 16.38 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 3.52E-01 2.36E-01 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 Ave Rank 22.2 17.0 7.0 9.3 9.0 10.5 12.5 Z 3.02 1.39 -1.70 -1.01 -1.08 -0.62

DF = 5 DF = 5

P = 0.017 P = 0.006 (adjusted for ties)

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on RtarRcCV Conc_CV 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 15.61 H = 22.16 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 2.42E-02 2.84E-02 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 Ave Rank 19.3 21.8 8.5 8.5 8.5 8.5 12.5 Z 2.09 2.87 -1.24 -1.24 -1.24 -1.24

DF = 5 DF = 5

P = 0.008 P = 0.000 (adjusted for ties)

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on AtarRcCV

133

Conc_CV 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 16.00 H = 22.72

N 4 4 4 4 4 4 24

Median 2.21E-01 1.54E-01 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00

Ave Rank 22.5 18.5 8.5 8.5 8.5 8.5 12.5

Z 3.10 1.86 -1.24 -1.24 -1.24 -1.24

DF = 5 DF = 5

P = 0.007 P = 0.000 (adjusted for ties)

Reject H0

Acacia holosericea (Ah) Sala Climatizada (SC)

Kruskal-Wallis Test on GpreAh Conc_SC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 6.63 H = 6.69 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 2.91E-01 1.72E-01 1.58E-01 3.61E-01 3.85E-01 0.00E+00 Ave Rank 13.0 13.0 11.3 16.0 16.5 5.3 12.5 Z 0.15 0.15 -0.39 1.08 1.24 -2.25

DF = 5 DF = 5

P = 0.250 P = 0.245 (adjusted for ties)

Kruskal-Wallis Test on GtarAh Conc_SC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 2.13 H = 2.13 N 4 4 4 4 4 4 24 DF = 5 DF = 5 Median 0.4435 0.4109 0.3213 0.5853 0.4322 0.5080 Ave Rank 13.0 11.3 8.5 15.0 13.6 13.6 12.5 Z 0.15 -0.39 -1.24 0.77 0.35 0.35

P = 0.831 P = 0.831 (adjusted for ties)

Kruskal-Wallis Test on GtotAh Conc_SC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 3.43 H = 3.43 N 4 4 4 4 4 4 24 DF = 5 DF = 5 Median 0.6894 0.5000 0.3773 0.7361 0.6569 0.5080 Ave Rank 13.8 11.6 9.0 16.8 14.1 9.8 12.5 Z 0.39 -0.27 -1.08 1.32 0.50 -0.85

P = 0.634 P = 0.634 (adjusted for ties)

Kruskal-Wallis Test on RpreAh

134

Conc_SC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 6.01 H = 6.24

N 4 4 4 4 4 4 24

Median 1.00E-04 8.50E-04 1.50E-04 3.00E-04 4.00E-04 0.00E+00

Ave Rank 11.8 17.7 10.9 15.0 13.3 6.4 12.5

Z -0.23 1.63 -0.50 0.77 0.23 -1.90

DF = 5 DF = 5

P = 0.305 P = 0.284 (adjusted for ties)

Kruskal-Wallis Test on ApreAh Conc_SC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 6.12 H = 6.17 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 1.75E-03 1.46E-02 6.30E-03 6.45E-03 3.80E-03 0.00E+00 Ave Rank 10.8 17.2 13.5 15.3 12.3 6.0 12.5 Z -0.54 1.47 0.31 0.85 -0.08 -2.01

DF = 5 DF = 5

P = 0.295 P = 0.290 (adjusted for ties)

Kruskal-Wallis Test on RtarAh Conc_SC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 4.46 H = 4.50 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 8.50E-04 3.00E-04 2.50E-04 6.00E-04 7.00E-04 2.00E-04 Ave Rank 16.5 10.3 9.5 14.4 15.5 8.9 12.5 Z 1.24 -0.70 -0.93 0.58 0.93 -1.12

DF = 5 DF = 5

P = 0.486 P = 0.479 (adjusted for ties)

Kruskal-Wallis Test on AtarAh Conc_SC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 3.16 H = 3.17 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 0.006550 0.003950 0.003100 0.005900 0.007750 0.006550 Ave Rank 15.5 10.4 8.3 12.1 15.0 13.8 12.5 Z 0.93 -0.66 -1.32 -0.12 0.77 0.39

DF = 5 DF = 5

P = 0.675 P = 0.674 (adjusted for ties)

135

Brachiaria brizantha (Bb) em Sala Climatizada (SC)

Kruskal-Wallis Test on GpreBb ConcSC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 14.30 H = 14.32 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 0.52635 0.52665 0.42525 0.45035 0.26975 0.03030 Ave Rank 18.1 19.1 12.8 11.3 11.3 2.5 12.5 Z 1.74 2.05 0.08 -0.39 -0.39 -3.10

DF = 5 DF = 5

P = 0.014 P = 0.014 (adjusted for ties)

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on GtarBb ConcSC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 10.01 H = 10.06 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 0.10440 0.02275 0.07555 0.23610 0.17615 0.30235 Ave Rank 10.6 5.3 9.9 16.9 13.4 19.0 12.5 Z -0.58 -2.25 -0.81 1.36 0.27 2.01

DF = 5 DF = 5

P = 0.075 P = 0.074 (adjusted for ties)

Kruskal-Wallis Test on GtotBb ConcSC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 7.65 H = 7.66 N 4 4 4 4 4 4 24 DF = 5 DF = 5 Median 0.5765 0.5537 0.4579 0.5871 0.4162 0.3024 Ave Rank 16.5 16.1 11.8 15.4 9.9 5.4 12.5 Z 1.24 1.12 -0.23 0.89 -0.81 -2.21

P = 0.177 P = 0.176 (adjusted for ties)

Kruskal-Wallis Test on RpreBb ConcSC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 9.69 H = 9.70 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 0.009100 0.010250 0.010800 0.012300 0.007950 0.003450 Ave Rank 11.3 14.0 16.0 18.9 10.0 4.9 12.5 Z -0.39 0.46 1.08 1.98 -0.77 -2.36

DF = 5 DF = 5

P = 0.085 P = 0.084 (adjusted for ties)

136

Kruskal-Wallis Test on ApreBb ConcSC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 19.39 H = 19.53 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 1.60E-03 1.55E-03 1.05E-03 9.00E-04 5.50E-04 1.50E-04 Ave Rank 20.9 20.1 12.1 11.0 7.9 3.0 12.5 Z 2.59 2.36 -0.12 -0.46 -1.43 -2.94

DF = 5 DF = 5

P = 0.002 P = 0.002 (adjusted for ties)

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on RtarBb ConcSC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 2.32 H = 2.33 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 0.008200 0.005000 0.005050 0.006550 0.006850 0.008150 Ave Rank 15.8 12.5 11.4 10.5 9.9 15.0 12.5 Z 1.01 0.00 -0.35 -0.62 -0.81 0.77

DF = 5 DF = 5

P = 0.804 P = 0.802 (adjusted for ties)

Kruskal-Wallis Test on AtarBb ConcSC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 3.89 H = 3.97 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 1.60E-03 1.70E-03 7.50E-04 1.35E-03 1.10E-03 1.80E-03 Ave Rank 13.6 14.0 10.4 12.5 7.8 16.8 12.5 Z 0.35 0.46 -0.66 0.00 -1.47 1.32

DF = 5 DF = 5

P = 0.565 P = 0.553 (adjusted for ties)

Helianthus annus (Ha) Sala Climatizada (SC)

Kruskal-Wallis Test on GpreHa Conc_SC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 14.58 H = 14.67 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 6.43E-01 6.80E-01 6.96E-01 7.12E-01 5.16E-01 0.00E+00 Ave Rank 13.9 14.6 17.7 18.0 8.3 2.5 12.5 Z 0.43 0.66 1.63 1.70 -1.32 -3.10

DF = 5 DF = 5

P = 0.012 P = 0.012 (adjusted for ties)

Reject H0

137

Kruskal-Wallis Test on GtarHa Conc_SC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 5.16 H = 5.18 N 4 4 4 4 4 4 24 DF = 5 DF = 5 Median 0.2889 0.1548 0.2185 0.2843 0.2328 0.2050 Ave Rank 16.1 6.9 10.3 16.1 13.6 12.0 12.5 Z 1.12 -1.74 -0.70 1.12 0.35 -0.15

P = 0.397 P = 0.395 (adjusted for ties)

Kruskal-Wallis Test on GtotHa Conc_SC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 14.98 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 0.7619 0.7523 0.7792 0.7919 0.6453 0.1397 Ave Rank 15.8 13.8 17.7 17.5 7.8 2.5 12.5 Z 1.01 0.39 1.63 1.55 -1.47 -3.10

DF = 5

P = 0.010

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on RpreHa Conc_SC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 17.53 H = 17.61 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 8.25E-02 3.13E-01 3.73E-01 4.19E-01 6.51E-01 0.00E+00 Ave Rank 7.0 12.3 16.0 17.7 19.5 2.5 12.5 Z -1.70 -0.08 1.08 1.63 2.17 -3.10

DF = 5 DF = 5

P = 0.004 P = 0.003 (adjusted for ties)

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on ApreHa Conc_SC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 14.95 H = 15.02 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 1.16E+00 1.07E+00 1.12E+00 1.15E+00 9.51E-01 0.00E+00 Ave Rank 17.5 13.5 16.8 17.0 7.8 2.5 12.5 Z 1.55 0.31 1.32 1.39 -1.47 -3.10

DF = 5 DF = 5

P = 0.011 P = 0.010 (adjusted for ties)

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on RtarHa Conc_SC N Median Ave Rank Z

138

0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 13.00

4 4 4 4 4 4 24

0.04045 0.01415 0.02725 0.03540 0.21530 0.03770

14.3 5.7 8.5 11.0 22.2 13.3 12.5

0.54 -2.09 -1.24 -0.46 3.02 0.23

DF = 5

P = 0.023

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on AtarHa Conc_SC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 14.65 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 0.17140 0.03950 0.06195 0.05070 0.08580 0.23225 Ave Rank 17.2 4.5 9.0 9.0 14.5 20.8 12.5 Z 1.47 -2.48 -1.08 -1.08 0.62 2.56

DF = 5

P = 0.012

Reject H0

Ricinus communis (Rc) Sala Climatizada (SC)

Kruskal-Wallis Test on GpreRc Conc_SC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 7.25 H = 8.39 N 7 8 8 8 8 8 47 Median 4.35E-02 4.67E-02 2.00E-02 4.55E-02 0.00E+00 0.00E+00 Ave Rank 26.4 29.6 23.4 29.9 20.1 14.9 24.0 Z 0.51 1.26 -0.13 1.34 -0.89 -2.07

DF = 5 DF = 5

P = 0.203 P = 0.136 (adjusted for ties)

Kruskal-Wallis Test on GtarRc Conc_SC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 3.49 H = 12.17 N 7 8 8 8 8 8 47 Median 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 Ave Rank 27.9 30.6 21.5 21.5 21.5 21.5 24.0 Z 0.81 1.50 -0.57 -0.57 -0.57 -0.57

DF = 5 DF = 5

P = 0.626 P = 0.033 (adjusted for ties)

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on GtotRc Conc_SC 0.00 N 7 Median 4.35E-02 Ave Rank 27.5 Z 0.73

139

0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 7.59 H = 8.77

8 8 8 8 8 47

6.53E-02 2.00E-02 4.55E-02 0.00E+00 0.00E+00

30.2 23.0 29.1 19.8 14.8 24.0

1.42 -0.23 1.15 -0.95 -2.08

DF = 5 DF = 5

P = 0.180 P = 0.119 (adjusted for ties)

Kruskal-Wallis Test on RpreRc Conc_SC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 6.52 H = 7.52 N 7 8 8 8 8 8 47 Median 4.18E-02 3.43E-02 6.40E-03 5.88E-02 0.00E+00 0.00E+00 Ave Rank 26.5 28.2 22.9 29.6 22.9 14.2 24.0 Z 0.52 0.96 -0.25 1.26 -0.24 -2.22

DF = 5 DF = 5

P = 0.259 P = 0.185 (adjusted for ties)

Kruskal-Wallis Test on ApreRc Conc_SC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 5.33 H = 6.15 N 7 8 8 8 8 8 47 Median 7.41E-02 1.30E-01 1.90E-02 1.14E-01 0.00E+00 0.00E+00 Ave Rank 25.9 30.1 21.6 28.0 22.3 16.2 24.0 Z 0.40 1.39 -0.54 0.91 -0.38 -1.76

DF = 5 DF = 5

P = 0.377 P = 0.292 (adjusted for ties)

Kruskal-Wallis Test on RtarRc Conc_SC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 3.37 H = 11.75 N 7 8 8 8 8 8 47 Median 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 Ave Rank 28.6 29.9 21.5 21.5 21.5 21.5 24.0 Z 0.97 1.34 -0.57 -0.57 -0.57 -0.57

DF = 5 DF = 5

P = 0.644 P = 0.038 (adjusted for ties)

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on AtarRc Conc_SC 0.00 0.05 0.50 N 7 8 8 Median 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 Ave Rank 28.2 30.3 21.5 Z 0.88 1.43 -0.57

140

2.00 4.00 6.00 Overall H = 3.42 H = 11.94

8 8 8 47

0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00

21.5 21.5 21.5 24.0

-0.57 -0.57 -0.57

DF = 5 DF = 5

P = 0.635 P = 0.036 (adjusted for ties) Reject H0

Gycine max (Gm) Sala Climatizada (SC)

Kruskal-Wallis Test on GpreGm ConcSC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 9.94 H = 9.95 N 4 4 4 4 4 4 24 DF = 5 DF = 5 Median 0.5929 0.7800 0.7436 0.5911 0.6703 0.3555 Ave Rank 11.3 17.6 17.4 10.8 13.8 4.2 12.5 Z -0.39 1.59 1.51 -0.54 0.39 -2.56

P = 0.077 P = 0.077 (adjusted for ties)

Kruskal-Wallis Test on GtarGm ConcSC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 9.07 H = 10.36 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 4.05E-01 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 1.15E-01 1.39E-01 Ave Rank 21.2 8.4 8.6 10.6 12.5 13.6 12.5 Z 2.71 -1.28 -1.20 -0.58 0.00 0.35

DF = 5 DF = 5

P = 0.106 P = 0.066 (adjusted for ties)

Kruskal-Wallis Test on GtotGm ConcSC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 7.37 N 4 4 4 4 4 4 24 DF = 5 Median 0.7971 0.8042 0.7760 0.6552 0.7913 0.5577 Ave Rank 16.5 15.5 14.5 9.5 13.8 5.3 12.5 Z 1.24 0.93 0.62 -0.93 0.39 -2.25

P = 0.195

Kruskal-Wallis Test on RpreGm ConcSC 0.00 0.05 N 4 4 Median 0.01770 0.06420 Ave Rank 5.7 19.3 Z -2.09 2.09

141

0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 14.28

4 4 4 4 24

0.06925 0.02455 0.02375 0.02345

20.3 12.0 9.5 8.3 12.5

2.40 -0.15 -0.93 -1.32

DF = 5

P = 0.014

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on ApreGm ConcSC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 8.23 N 4 4 4 4 4 4 24 DF = 5 Median 0.1961 0.1813 0.1524 0.1945 0.2322 0.2103 Ave Rank 14.3 9.0 5.3 13.5 17.5 15.5 12.5 Z 0.54 -1.08 -2.25 0.31 1.55 0.93

P = 0.144

Kruskal-Wallis Test on RtarGm ConcSC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 9.97 H = 11.38 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 4.81E-02 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 9.25E-03 1.53E-02 Ave Rank 22.0 8.6 9.1 9.9 12.0 13.4 12.5 Z 2.94 -1.20 -1.05 -0.81 -0.15 0.27

DF = 5 DF = 5

P = 0.076 P = 0.044 (adjusted for ties)

Reject H0

Kruskal-Wallis Test on AtarGm ConcSC 0.00 0.05 0.50 2.00 4.00 6.00 Overall H = 8.94 H = 10.20 N 4 4 4 4 4 4 24 Median 2.21E-01 0.00E+00 0.00E+00 0.00E+00 8.15E-02 1.74E-01 Ave Rank 20.3 8.4 8.6 9.4 12.8 15.6 12.5 Z 2.40 -1.28 -1.20 -0.97 0.08 0.97

DF = 5 DF = 5

P = 0.112 P = 0.070 (adjusted for ties)

Tibouchina granulosa (Tg) Sala Climatizada (SC)

Kruskal-Wallis Test on GtotTb Conc_SC 0.00 0.05 0.50 N 4 4 4 Median 0.7200 0.4500 0.6700 Ave Rank 19.5 14.3 19.3 Z 2.17 0.54 2.09

142

2.00 4.00 6.00 Overall H = 17.20 H = 17.31

4 4 4 24

0.3600 0.2300 0.1200

12.1 6.1 3.7 12.5

-0.12 -1.98 -2.71

DF = 5 DF = 5

P = 0.004 P = 0.004 (adjusted for ties)

Reject H0

Kruskal-Wallis Conc_SC N 0.00 4 0.05 4 0.50 4 2.00 4 4.00 4 6.00 4 Overall 24 H = 7.51 DF = H = 7.56 DF =

Test on BiomTb Median Ave 2.00E-04 1.05E-04 1.75E-04 2.45E-04 3.45E-04 1.50E-05 5 5

Rank 13.4 12.4 13.5 15.9 15.8 4.1 12.5

Z 0.27 -0.04 0.31 1.05 1.01 -2.59

P = 0.185 P = 0.182 (adjusted for ties)

143

ANEXO V. Valores de p do teste Kruskal-Wallis ou p do teste Mann-Whitney.

Varivel Gpre % 0.05 0.5 2.0 4.0 6.0 0.05 0.5 2.0 4.0 6.0 0.05 0.5 2.0 4.0 6.0 0.05 0.5 2.0 4.0 6.0 0.05 0.5 2.0 4.0 6.0 0.05 0.5 2.0 4.0 6.0 0.05 0.5 2.0 4.0 6.0 Bb * 0.465 Ge Ha 0.0081 0.0643 CV Ll Rc 0.0591 0.0284 ---0.0256 -0.0256 -0.0256 0.8852 1.0000 --------0.1465 0.0591 ---0.0265 -0.0265 -0.0265 0.4678 0.0606 ---0.0265 -0.3005 -0.0265 0.1939 0.1939 --------0.4705 0.0304 ---0.0265 -0.0265 -0.0545 0.3123 0.0304 --------SC Ah * 0.245 Bb 0.7715 0.1939 0.0606 0.3094 0.0294 * 0.074 Ha 1.0000 0.5614 0.3123 0.3094 -* 0.395 0.6650 0.6650 0.0606 0.0606 0.0304 0.1124 0.0304 0.0304 0.0304 -0.1124 0.1939 0.4705 0.0304 0.8852 0.4705 0.8852 0.8852 0.0606 -0.0304 0.1939 0.0606 0.4705 0.3123 Rc * 0.136 0.5347 ----* 0.119 Gm * 0.077 Tg

Gtar

* 0.981

0.0050 0.0036

* 0.831

* 0.066 0.2454 0.8852 0.0833 0.0304 0.0294

Gtot

* 0.773

* 0.269

* 0.634

* 0.176

* 0.195 0.0304 0.0304 0.1939 0.1939 0.8852 0.0265 0.0265 0.0545 0.0591 0.0304 * 0.144

Rpre

* 0.608

0.9162 0.0100

* 0.284

* 0.084

* 0.185 1.000 ----* 0.292 0.7829 -----

Rtar

* 0.116

0.0136 0.0009

* 0.479

* 0.802 0.7702 0.0294 0.0265 0.0304 0.0294 * 0.553

* 0.182

Apre

* 0.137

* 0.290

Atar

* 0.787

0.0404 0.1275

* 0.674

* 0.070

* As clulas com asteriscos apresentam o valor p de Kruskal-Wallis, sempre que p foi igual ou superior ao (0.05) (Ver Anexo IV). Nesses casos, no houve diferena significativa entre os diversos tratamentos, para a varivel em questo e a hiptese H0 aceita. As demais clulas (sem asteriscos) apresentam o p obtido pelo Mann-Whitney para cada tratamento comparado ao controle. Isso porque o teste Kruskal-Wallis apresentou p inferior a 0,05 (Ver Anexo IV), significando que pelo menos um dos tratamentos (ou concentraes) difere significativamente dos demais. Para saber qual tratamento difere do controle, o teste Mann-Whitney foi realizado (tratamento x controle), e o p obtido apresentado na clula respectiva. Valor p em vermelho: decrscimo significativo. Valor p em azul: acrscimo significativo. -- = ausncia total de germinao/ ausncia de biomassa.

144