ATLAS DE PATOLOGA PARASITARIA EN RUMIANTES

UNA HERRAMIENTA DE DIAGNSTICO BASADA EN LA IDENTIFICACIN DE PARSITOS Y LAS LESIONES QUE PRODUCEN
Magdalena Garijo Toledo Joaqun Ortega Porcel Jess Cardells Peris M Teresa Gmez Muoz

. TOMA, CONSERVACIN Y ENVO DE MUESTRAS. DIAGNSTICO LABORATORIAL

NECROPSIA
El objetivo de una necropsia es identicar los principales procesos patolgicos que presenta un animal y, si es posible, conocer la causa de la muerte. Para ello se realiza un examen minucioso, ordenado y completo del cadver y se toman las muestras necesarias para llevar a cabo distintas pruebas laboratoriales.

1. Preparacin de la necropsia
La necropsia debe realizarse lo ms rpido posible para evitar los procesos de autolisis y putrefaccin. Si no se puede hacer de forma inmediata, se debe refrigerar el cadver, pero no congelarlo, ya que la formacin de cristales de hielo alterara la estructura de los tejidos. Hay varias cosas que deben realizarse antes de comenzar la necropsia: - Recopilar informacin relacionada con el animal que se va a estudiar. Es importante conocer cuntos animales estn afectados (o han muerto), qu edad tienen, qu signos clnicos presentan (diarrea, problemas respiratorios, etc.), cundo comenzaron estos signos... - Preparar el material necesario para realizar la necropsia. Se usarn cuchillos, tijeras, pinzas, un costotomo para abrir la cavidad torcica (se pueden usar unas tijeras de podar) y un hacha o sierra para el crneo (gura 1). Tambin es conveniente tener cerca una fuente de agua para poder lavar las vsceras y examinarlas con detalle. - Si el animal an est vivo, se realiza un examen ante mrtem. Este examen es muy til para diagnosticar signos neurolgicos (por ejemplo, en una oveja con cenurosis se puede identicar el torneo caracterstico de esta enfermedad). Tambin se puede obtener sangre de la vena yugular si se considera necesario. - Sacricio (en animales enfermos que se han remitido vivos). Para realizar el sacricio se utilizar una inyeccin intravenosa de solucin eutansica en la vena yugular (gura 2). Es importante sujetar bien al animal, para evitar que se mueva, ya que esta solucin causa necrosis tisular si se extravasa. - Examen post mrtem externo. Se valora el estado de conservacin del cadver y el estado nutricional. Se palpan los ganglios linfticos superciales, las articulaciones y los huesos. Se examina la piel, la glndula mamaria, el ombligo, las pezuas y la posible presencia de ectoparsitos. Tambin se examinan las aberturas naturales (fosas nasales, cavidad oral, conjuntiva ocular, odo externo, vulva, prepucio y ano) en busca de contenidos anormales o cambios en la coloracin de las mucosas (color blanquecino es indicativo de anemia o amarillo de ictericia; guras 3 a 5).

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Figura 1. Kit bsico de necropsias: cuchillo, sierra y costotomo.

Figura 2. Inyeccin de solucin eutansica en vena yugular.

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Figura 3. Examen de la conjuntiva ocular.

Figura 4. Examen de la cavidad oral.

Figura 5. Examen del ano.

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2. Realizacin de la necropsia*
a) Colocacin y estabilizacin del cadver
La necropsia se puede realizar de dos formas: en decbito supino (gura 6) o en decbito lateral (gura 7). En este ltimo caso, siempre se har con el lado izquierdo apoyado en el suelo para que la localizacin del rumen no diculte el examen de la cavidad abdominal. En pequeos rumiantes se pueden usar ambas formas, aunque en vacuno, debido a su tamao, es ms cmodo hacerla en posicin lateral. En cualquier caso, lo importante es realizar siempre la necropsia del mismo modo, para familiarizarse con la localizacin anatmica de las vsceras y as poder identicar posibles anomalas. Si se realiza la necropsia en decbito supino, el cadver se estabiliza separando las cuatro extremidades. Para separar las extremidades posteriores es necesario cortar el ligamento de la cabeza del fmur y desarticular la cadera (gura 8). Si se opta por la necropsia en decbito lateral, solo se separar la extremidad anterior y posterior derecha (gura 9).

Figura 6. Necropsia en decbito supino.

*Nota del autor: Teniendo en cuenta el objetivo de este libro, se han resumido algunos aspectos de la tcnica de necropsia y se ha profundizado en aquellos que se consideran ms importantes para el diagnstico de enfermedades parasitarias.

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Figura 7. Necropsia en decbito lateral.

Figura 8. Desarticulacin de la cadera.

Figura 9. Separacin de la extremidad anterior derecha.

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b) Desollado
Para retirar la piel se hace una incisin longitudinal por la lnea media que va desde el mentn hasta la snsis pbica (gura 10). Despus, se va retirando la piel hacia ambos lados y se examina el tejido subcutneo (gura 11). Tambin se palpan y cortan lo distintos ndulos linfticos que se van observando (axilar, inguinal supercial, retrofarngeo, etc.) (gura 12), as como las glndulas salivares (mandibular, parotdea, etc.). Si se trata de un macho, el pene se deja a un lado y si es una hembra, la ubre se retira junto con la piel y, posteriormente, se realizan cortes seriados para examinar la glndula mamaria.

Figura 10. Desollado.

Figura 11. Desollado.

Figura 12. Corte del ndulo linftico inguinal super cial.

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c) Apertura de la cavidad abdominal y torcica

La apertura de la cavidad abdominal se realiza practicando un corte por la lnea alba, desde la apsis xifoides del esternn hasta el borde anterior del pubis (gura 13). Despus, se corta la musculatura abdominal desde el esternn hasta la columna vertebral, hacia ambos lados, siguiendo la curvatura de las ltimas costillas.

Figura 13. Apertura de la cavidad abdominal.

A continuacin, se separan la grasa abdominal y los omentos, se observa la posicin de las vsceras abdominales y si existe algn contenido en dicha cavidad (sangre, orina, brina, heces, etc.). En este momento, se pueden encontrar vesculas de cisticercos adheridas al mesenterio o a las serosas de los rganos abdominales (gura 14). Para abrir la cavidad torcica, se har un corte aproximadamente a media altura de cada pared costal (para una necropsia en decbito supino) o un corte junto a la unin de las costillas con las vrtebras y otro junto a la unin costoesternal (para necropsias en decbito lateral). Se comprobar si existe algn contenido en cavidad torcica y, nalmente, se cortar el diafragma para dejar expuestas las vsceras torcicas (gura 15).

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Figura 14. Examen de las vsceras abdominales.

Figura 15. Examen de la cavidad torcica.

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d) Examen de los rganos abdominales

Para extraer el tracto digestivo se tiene que separar el esfago a la entrada de la cavidad abdominal y cortarlo cranealmente al cardias (gura 16). Despus se localizar el recto, se desplazarn las heces y se cortar (gura 17). En ese momento, se pueden tomar muestras de contenido fecal si se considera necesario (gura 18).

Figura 16. Separacin del esfago (ntese la presencia de quistes de Sarcocystis spp.).

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Figura 17. Separacin del recto.

Figura 18. Toma de muestra de contenido fecal.

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Primero se extrae el bazo, que est adherido al rumen, y se realizan varios cortes seriados para examinar su parnquima. Para examinar el tracto digestivo se har un corte a nivel del ploro y se separar el intestino del abomaso y de los preestmagos. Este es un buen momento para examinar el pncreas, que se encuentra junto al duodeno. Para examinar el rumen, se incide en el esfago y, desde ah, se abren los sacos dorsal y ventral siguiendo los pilares ruminales. A continuacin, se abren el retculo, el omaso y el abomaso (por la curvatura mayor), se retira el contenido y se examina la mucosa (gura 19). Si se sospecha de hemoncosis u ostertagiosis, hay que guardar el contenido abomasal y enviarlo al laboratorio para su estudio parasitolgico.

Figura 19. Mucosa abomasal con lesiones caractersticas de Ostertagia spp.

Aunque es bastante laborioso, en el caso de las enfermedades parasitarias, es fundamental abrir y examinar la totalidad del intestino delgado y grueso. Para ello, se separar el intestino del mesenterio, se dispondr en horquillas paralelas y se abrirn las porciones rectas por el borde antimesentrico. Se buscar la presencia de nematodos o cestodos en la luz intestinal, as como las lesiones que estos producen tanto en la mucosa como en la serosa (guras 20 y 21). Las zonas curvas quedarn sin abrir y se jarn en formol para su estudio histopatolgico. En caso de que se necesite realizar aislamiento microbiolgico o parasitario, antes de abrir el intestino se ligan algunos tramos que se consideren representativos (10-20 cm) y se envan refrigerados al laboratorio lo antes posible.

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Figura 20. Lesiones en mucosa intestinal causadas por Stilesia globipunctata.

Figura 21. Lesiones en serosa intestinal causadas por Oesophagostomum spp.

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A continuacin, se separar el hgado, que est adherido al diafragma (gura 22) y se examinar la cpsula heptica, que debe ser na, lisa y trasparente (algunos parsitos como Fasciola hepatica o Cysticercus tenuicollis producen lesiones capsulares durante su migracin). Se valorar su tamao, forma, consistencia y coloracin y se realizarn mltiples cortes seriados. Al examinar la supercie de corte es importante observar si la pared de los conductos biliares est engrosada, lo cual sera indicativo de trematodosis heptica (fasciolosis o dicroceliosis). La apertura de la vescula biliar, as como el examen de su pared y contenido, tambin es muy importante para el diagnstico de estas enfermedades (gura 23). Para extraer el aparato genitourinario se separarn los riones de la grasa perirrenal, se localizarn las glndulas adrenales (craneomediales al rin) y se les realizar un corte transversal para observar la corteza y la mdula adrenal. Despus se desprenden caudalmente ambos riones, junto con los urteres, hasta la vejiga de la orina. Para abrir la cavidad pelviana se realizarn cortes (con costotomo) craneal y caudalmente a los agujeros obturados y se retirar el suelo de la pelvis. A continuacin se extraern ambos riones, urteres, vejiga de la orina y el aparato reproductor. En el caso de las hembras se separarn las adherencias y los ligamentos que unen el aparato genital a la cavidad pelviana para extraer de forma conjunta con el aparato urinario. En los machos se cortar el escroto y se separar el testculo, el epiddimo y el cordn espermtico. Despus, se separarn las glndulas accesorias y se eviscerar todo junto. Los riones se cortarn sagitalmente, comenzando por la curvatura mayor. Una vez abiertos, se desprender la cpsula renal con unas pinzas y se examinarn la corteza, la mdula y la pelvis renal (gura 24).

Figura 22. Separacin del hgado.

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Figura 23. Apertura de una vescula biliar que contiene Dicrocoelium dendriticum.

Figura 24. Examen de la corteza, mdula y pelvis renal.

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e) Cavidad oral, cuello y cavidad torcica

La evisceracin de la cavidad torcica se desarrolla de forma conjunta con los rganos del cuello y la cavidad oral. Por lo tanto, se va a separar de forma conjunta lengua, laringe, tiroides, trquea, esfago, timo, pulmones y corazn. La lengua se retirar a travs de la arcada mandibular, mediante dos cortes paralelos e internos a la rama de la mandbula (gura 25). Se tirar de la lengua caudalmente y, tras cortar la unin con el paladar blando, se llegar al aparato hioideo. Este se podr desarticular cortando con el cuchillo la unin cartilaginosa que hay entre el estilohioides y el queratohioides, o cortando los huesos con el costotomo (gura 26). Para la extraccin de los rganos del cuello, se retirar la musculatura supercial de la zona hasta dejar al descubierto la trquea y el esfago. Aqu se podr examinar el tiroides a ambos lados de la laringe. A continuacin, se seguir cortando y tirando hacia atrs, con lo que se llevarn la lengua, trquea y esfago hasta la entrada del trax y se eviscerarn junto con los rganos torcicos (guras 27 y 28).

Figura 25. Extraccin de la lengua a travs de la mandbula.

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Figura 26. Desarticulacin del hioides.

Figura 27. Separacin de trquea y esfago.

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Figura 28. Extraccin de los pulmones y el corazn.

Posteriormente, con las tijeras, se abrir el esfago en toda su longitud. Es importante observar tanto la mucosa (donde podemos ver las lesiones caractersticas de Gongylonema spp.), como la tnica serosa y muscular (donde es frecuente encontrar quistes de Sarcocystis spp.). De igual modo, se cortar la laringe, se abrir la trquea y se continuar hasta los bronquios principales. Es importante examinar con detalle la luz de estos rganos para poder detectar la presencia de nematodos broncopulmonares (gura 29). La pleura que recubre al pulmn ha de ser lisa, brillante y transparente (aunque en el vacuno es ligeramente ms gruesa y opaca que en otras especies, sobre todo en la zona caudal). En el pulmn se evaluar su forma, tamao, peso, consistencia y cambios de coloracin. Cabe sealar que es fundamental prestar atencin a las zonas dorsales de los lbulos caudales, ya que ah es donde se localizan la mayora de las lesiones granulomatosas producidas por los nematodos broncopulmonares (gura 30). Despus, se realizarn cortes seriados de todos los lbulos para examinar el parnquima pulmonar.

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Figura 29. Apertura de los bronquios principales mostrando la presencia de nematodos.

Figura 30. Granulomas parasitarios en los lbulos caudales del pulmn y linfadenomegalia.

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La apertura del corazn se har siguiendo la circulacin sangunea: para ello, se entra por la vena cava a la aurcula derecha, se pasa al ventrculo derecho, se contina paralelo al septo interventricular, se deja el vrtice del corazn a la derecha de la tijera y se sale por la arteria pulmonar. El lado izquierdo del corazn se abre realizando un corte por la zona media del ventrculo y la aurcula izquierda. Posteriormente, se corta por debajo de la vlvula mitral y se sale por la aorta (gura 31). Hay que evaluar la supercie endocrdica y las vlvulas tricspide, mitral y semilunares. Para el examen del miocardio, se dar un corte en el septo interventricular, a nivel del msculo papilar, y se observar tanto el color como la consistencia del msculo cardaco. En vacuno, se debe prestar atencin por si existiesen quistes o ndulos calcicados de Cysticercus bovis y en ovino de C. ovis.

Figura 31. Corte de la vlvula mitral para mostrar la aorta.

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f) Locomotor
Tras la extraccin de todos los rganos, se procede al examen de las articulaciones y de la musculatura del animal. Si no se observan alteraciones articulares evidentes, se realizar un muestreo representativo de varias articulaciones. El estudio de estas se har tanto externa como internamente, tras su apertura mediante una seccin transversal (gura 32). Del mismo modo, se realizarn cortes en distintos grupos musculares y se observar la consistencia y la coloracin.

Figura 32. Apertura de la articulacin de la rodilla.

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g) Cabeza y columna vertebral

En primer lugar hay que separar la cabeza del cuello a nivel de la articulacin atlanto-occipital. Justo antes de cortar la duramadre que recubre la mdula espinal es un buen momento para sacar lquido cefalorraqudeo (gura 33). Posteriormente, se retira la piel de la cabeza y la musculatura de la zona de los temporales y parietales para facilitar la adherencia de la sierra al hueso. Para abrir el crneo se realizarn tres cortes. Un corte a cada lado del agujero magno, que ir desde la cara interna de los cndilos del occipital hacia el ngulo lateral del ojo y el ltimo corte, que une los dos anteriores, se realizar a unos 2 cm por detrs de las rbitas (gura 34). Si el animal presenta cuernos, este corte ser caudal a la insercin de los mismos. Una vez separada la bveda craneana, se proceder a la separacin de la duramadre. Por ltimo, se extraer el encfalo una vez cortados los nervios craneales y se introducir completo en formol (gura 35).

Figura 33. Extraccin de lquido cefalorraqudeo.

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Figura 34. Apertura del crneo (encfalo cubierto por la duramadre).

Figura 35. Examen del encfalo.

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Para explorar la cavidad nasal se har un corte sagital y se examinarn los cornetes nasales (gura 36). A continuacin, con el hacha, se abrirn los senos frontales y maxilares (una de las localizaciones ms frecuentes de Oestrus ovis). El examen del canal raqudeo y mdula espinal es ms fcil si se separa la columna vertebral del resto del animal. Se proceder a quitar la musculatura de la parte superior de las apsis espinosas y transversas, luego se incidir con la sierra en ngulo de 45o a ambos lados para dejar al descubierto el canal medular. Por ltimo, se eviscerar la mdula con ayuda de pinzas.

Figura 36. Corte sagital de la cabeza para examinar los cornetes nasales.

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3. Toma de muestras para histopatologa

Se deben tomar muestras de todos los rganos, ya que determinadas enfermedades no maniestan lesiones macroscpicas evidentes o bien pasan desapercibidas. En aquellos rganos en los que observemos lesiones, se tomar siempre una muestra del margen de la lesin, incluyendo tanto tejido afectado como sano. En rganos parenquimatosos, las muestras se tomarn de forma perpendicular a la cpsula, mientras que en los rganos membranosos (huecos) cuyo dimetro sea pequeo (como el intestino delgado), hay que tomar la circunferencia completa de una zona que est sin abrir. El grosor de las piezas debe ser menor a 1 cm para garantizar una jacin correcta. Las muestras deben colocarse en frascos rgidos con formol tamponado al 10% y la proporcin entre la muestra y el formol debe ser de 1/10. El tejido tarda aproximadamente 24/48 h en jarse.

Figura 37. Toma de muestras para histopatologa.

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