UNIVERSIDADE DO ESTADO DO AMAZONAS UEA ESCOLA SUPERIOR DE CINCIA DA SADE MESTRADO EM BIOTECNOLOGIA E RECURSOS NATURAIS - MBT

COMPARAO ENTRE MTODOS DE EXTRAO DO LEO DE Mauritia flexuosa L.f. (ARECACEAE - buriti) PARA O USO SUSTENTVEL NA RESERVA DE DESENVOLVIMENTO TUP: RENDIMENTO E ATIVIDADE ANTIMICROBIANA

CECLIA OLIVEIRA DE CARVALHO

MANAUS-AM 2011

CECLIA OLIVEIRA DE CARVALHO

COMPARAO ENTRE MTODOS DE EXTRAO DO LEO DE Mauritia flexuosa L.f. (ARECACEAE - buriti) PARA O USO SUSTENTVEL NA RESERVA DE DESENVOLVIMENTO TUP: RENDIMENTO E ATIVIDADE ANTIMICROBIANA

Dissertao apresentada ao Programa de Ps Graduao da Universidade do Estado do

Amazonas, para obteno do grau de Mestre em Biotecnologia e Recursos Naturais.

Orientadora: Prof Dra. Veridiana Vizoni Scudeller Co-orientador: Prof Dr. zio Sargentini Jnior

MANAUS 2011

CECLIA OLIVEIRA DE CARVALHO

COMPARAO ENTRE MTODOS DE EXTRAO DO LEO DE Mauritia flexuosa L.f. (ARECACEAE - buriti) PARA O USO SUSTENTVEL NA RESERVA DE DESENVOLVIMENTO TUP: RENDIMENTO E ATIVIDADE ANTIMICROBIANA

Dissertao apresentada ao Programa de Ps Graduao da Universidade do Estado do

Amazonas, para obteno do grau de Mestre em Biotecnologia e Recursos Naturais.

Aprovado em 08 de fevereiro de 2011 Banca Examinadora _____________________________________________ Prof Dra. Veridiana Vizoni Scudeller Universidade Federal do Amazonas UFAM _____________________________________________ Prof Dra. Helena Camaro Telles Ribeiro Universidade do Estado do Amazonas UEA ______________________________________________ Prof. Dr. Jos Renato Pereira Cavallazzi Universidade Federal do Amazonas UFAM

DEDICATRIA

A minha me Izabel e a minha av Maria Izaura :

De voc recebi o dom mais precioso do universo: a vida. Ensinaram-me a importncia de ser justo e de se fazer justia, de sempre percorrer o caminho certo e ser honesta. Da minha me aprendi o poder d F. O olhar doce que nunca cobrava, criticava, repreendia, mas, que sempre compreendia e amava. Um amor infinito sem medidas e cobranas, o amor de me, intenso e abrasador. Uma mulher que sempre esteve ao meu lado nos bons e maus momentos, que soube perdoar meus erros e falhas quanto filha e pessoa, que em vez de repreenses s me amou e foi minha companheira. A voc minha me dedico mais est conquista e vitria, pois sem voc ao meu lado tenho ser que tudo seria bem mais difcil. A minha av que partiu desta vida, mas me ensinou o dom do amor ao prximo, o saber dividir o pouco que se tem. Mesmo com as marcas de uma vida dura e cheia de dificuldades, soube mostra r o quanto ela bela e como Deus misericordioso. Hoje quando escrevo estas palavras e constato que no est aqui para celebrar, lembro-me de uma das frases que disse quando estavas no hospital nunca pensei que fosse to amada e acredite minha av sempre te amamos e te amaremos pelo resto de nossas vidas. A senhora dedico todas as minhas vitrias.

AGRADECIMENTOS

A Deus:

Eu pedi Fora. E Deus me deu Dificuldades para me fazer forte... Eu pedi Sabedoria. E Deus me deu Problemas para resolver... Eu pedi Prosperidade. E Deus me deu Crebro e Msculos para trabalhar... Eu pedi Coragem. E Deus me deu Perigo para eu superar... Eu pedi Amor. E Deus me deu pessoas com Problemas para eu ajudar... Eu pedi favores. E Deus me deu Oportunidades... Eu no recebi nada do que pedi. Mas eu recebi tudo que precisava... Obrigada meu Deus.

Rita Pando

A minha me Izabel e meu pai Ccero:

Apesar da F que tens, sei que o quanto difcil e o quanto ficas aflita ao me ver mais uma vez sendo colocada aprova. A mais um passo de realizar um sonho. Sei que neste momento em vez de estais sentadas aqui me ouvindo defender minha dissertao, estais em casa, por se sentir mais segura e mais fortalecida, fazendo o que sempre fazes quando alguma de tuas filhas est precisando, reza. Rezas por mim e pede a Nossa Senhora que me proteja sobre seu manto e que Jesus esteja a minha frente, ao meu lado e atrs de mim. No estais presentes aqui neste momento mais posso sentir em meu corao que est comigo em pensamento, em alma. Minha me amada, te entendo, te compreendo e te respeito. Muito Obrigada.

Sei que no estars ao meu lado neste dia to importante, pois este teu jeito, mas, sei que estais feliz por minha vitria e no fundo se orgulha da filha que apesar de no ter sido amada e incentivada, soube transformar a dor em sucesso. O que para muitas pessoas seria um motivo para desistir, para mim foi uma razo para demonstrar o quanto ainda sentirias orgulho de mim. Sei que a vida, sobre o seu ponto de vista, no foi to generosa com o senhor, entretanto do meu ponto de vista ela foi grandiosa, pois te deu uma famlia maravilhosa. Meu pai te respeito e do meu jeito tambm aprendi a am-lo. Apesar de tantos desencontros entre pai e filha o senhor me passou valores de honra, honestidade e garra, pois o teu descrdito na minha pessoa foi o que me fez querer crescer e me tornar o que sou hoje. Obrigada.

Aos ausentes:

A minha av Maria Izaura Braga de Oliveira.

Hoje, neste momento especial, sinto falta do teu calor e da tua voz suave sempre firme me incentivando. Do cheirinho gostoso de v, cheiro que nos remete a infncia e que nos faz sentir amada. H minha av como sinto sua falta neste momento de felicidade, mas, sei que est comigo de alguma forma, sei que estais comigo. No me permitirei neste momento ficar triste por sentir tua falta, pois sei que desejaria que fizesse exatamente ao contrrio. Ento celebrarei, comemorarei e serei feliz como fostes. Pois este o encanto da vida, SER FELIZ! Sempre te AMAREI e estars comigo.

Aos meus familiares

Em especial:

As minhas irms Izaura, Cilene, Clia, Cludia e Paula. Aos meus padrinhos Antnio e Tereza de Oliveira. As minhas tias-avs Antnia e Judith. Aos meus cunhados Joo Everton, Joo Batista, Joaquim, Jos Luis e Gerson. Aos meus sobrinhos Camila, Joo Felipe, Carolina, Juliana, Fernando e Arthur Lus.

Seis irms, nossa que confuso! Que irms no brigam e se amam com a mesma intensidade. Como sou feliz por t-las perto sempre torcendo por mim e como sou feliz por v-las felizes. Apesar dos desencontros da vida como diria Carlos Drumond Andrade O presente to grande no nos afastemos. No nos afastemos muito, estejamos sempre de mos dadas. Amo vocs.

Ano de 2000, que etapa difcil e vocs meus padrinhos, no momento que mais precisei me estenderam a mo. Obrigada pelo amor, incentivo, carinho e torcida. Todo agradecimento do mundo ainda seria pouco. Amo vocs.

O segundo amor da minha vida, meus sobrinhos. Como fico feliz em t-los em minha vida. Em v-los sorrindo, brincando, crescendo saudveis e com um futuro brilhante pela frente. Amo, amo vocs.

A minha orientadora Dra. Veridiana Vizoni Scudeller e ao meu co-orientador Dr. zio Sargentini Jnior.

A arte de ensinar sublime

um conjunto de palavras, sentimentos e atitudes. Capaz de engrandecer o que parece a princpio frgil e simples, em algo grandioso e belo, que o ato de ensinar, sobretudo de ser MESTRE. Aquele que houve que aconselha, incentiva e mesmo sem conheclo muito bem acredita em voc e aceita o desafio de te orientar. Poucas foram s escolhas erradas em minha vida, e com muito orgulho vejo que mais uma vez acertei ao lhe convidar para ser minha orientadora. Obrigada por ter aceitado e por ter sido to companheira e paciente comigo. Certa vez lhe disse que admirava a sua pacincia. Hoje com a vivncia de orientadora e orientada que dividimos ao longo desses dois anos, admiro tambm a sua capacidade, inteligncia e fora. Obrigada por tudo MESTRA.

... em quanto descansa carrega pedras. Como ouvi esta frase de voc e pensava ... ao descansar tenho que carregar pedras. Quanta responsabilidade. Como fazer para no decepcion-lo? Trabalhar! Esse seria o segredo e a forma de retribuir a confiana e a oportunidade. O senhor me mostrou a ser perseverante e confiante. Obrigada pela confiana, respeito e amizade. Pelos inmeros conselhos. Pelo tempo disposto at mesmo em suas horas de folga. Pela porta aberta de sua casa e pelos belos momentos compartilhados. Serei sempre grata por tudo MESTRE. Obrigada!

Aos Mestres:

Sandra Zanotto, Wilson Castro, Luis Antnio, Cludio Rui, Patrcia, Srgio, Aldo Procpio, Helena Camaro, Prof. Alberto Marques, Prof. Luiz Lozano.

Em especial:

Prof. Dra. Ormezinda

Que na sua simplicidade mostrou o seu profissionalismo. Mesmo no tendo o tempo ao nosso favor aceitou este desfio e o desempenhou com muita competncia. Hoje sei o porqu as pessoas se dirigem a voc de uma forma carinhosa, onde tudo que ouvi ao seu respeito a mais pura verdade. Voc realmente uma pessoa maravilhosa. Obrigada meme pela grande colaborao nesta pesquisa e por tudo que fizeste por mim. Foi um enorme prazer trabalhar com voc.

Aos colaboradores:

Sr. Adonisio e Sr.Francisco.

Ao programa de bolsas do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico- CNPQ.

Aos moradores do Tup, especialmente ao Sr. Adonisio e o Sr. Francisco, que muito nos ajudaram na coleta do material botnico. Obrigada!

Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico- CNPQ, por proporcionar os meios para a realizao desta pesquisa. Obrigada!

"Compartilhe seu conhecimento. uma das maneiras de atingir a imortalidade." (Dalai-Lama)

SUMRIO

1 INTRODUO 2 OBJETIVOS 2.1GERAL 2.2ESPECFICOS 3 REVISO DA LITERATURA 3.1 BURITI 3.1.1 Classificao Botnica 3.1.2 Morfologia 3.1.3 Distribuio geogrfica 3.1.4 Composio centesimal da polpa do Buriti 3.1.5 Caractersticas Gerais de Mauritia flexuosa L. 3.1.6 leo de Buriti 3.2 EXTRAO DE LEOS 3.2.1 Extrao artesanal 3.2.2 Extrao Mecnica 3.2.2.1 Prensas Hidrulicas 3.2.2.2 Prensas Contnuas 3.3.3 Extrao por Solvente 3.3 LEOS VEGETAIS 3.3.1 Componentes majoritrios dos leos vegetais 3.3.1.1 cidos graxos 3.3.1.2 Acilgliceris

24 26 26 26 27 27 27 27 28 29 29 30 31 32 32 33 34 35 37 39 38 41

3.3.2 Componentes minoritrios dos leos vegetais 3.3.2.1 Tocoferis 3.3.2.2 Carotenides 3.4 PROPRIEDADES FSICO-QUMICAS 3.4.1 ndice de Acidez 3.4.2 ndice Saponificao 3.4.3 ndice Perxido 3.4.4 ndice de Refrao 3.5 MICRORGANISMOS E ANTIMICROBIANOS 3.5.1 Microrganismos 3.5.1.1 Bactrias 3.5.1.2 Fungos 3.5.2 Antimicrobiano 3.5.2.1 Mecanismo de Ao 3.5.2.1.1 Antibiticos 3.5.2.1.2 Antifngicos 3.6 MTODOS DE ATIVIDADE ANTIMICROBIANA 3.6.1 Mtodo de Difuso em gar 3.6.2 Mtodo de Diluio em Caldo 3.7 FATORES QUE INTERFEREM NOS MTODOS 4 METODOLOGIA 4.1 REA DE ESTUDO

41 41 42 44 45 45 45 46 46 47 47 51 53 53 53 57 57 58 59 60

61 61

4.2 COLETA DO MATERIAL BOTNICO 4.3 PROCESSO DE HIGIENIZAO 4.4 PROCESSAMENTO DA POLPA DE BURITI 4.5 MTODOS DE EXTRAO DO LEO DE Mauritia flexuosa L.f. 4.5.1 Extrao Artesanal 4.5.2 Extrao por Prensagem Hidrulica 4.5.3 Extrao por Solvente 4.6 AVALIAO DOS CONSTITUINTES DA POLPA 4.7 CARACTERIZAO FSICO-QUMICA DOS LEOS DE BURITI 4.7.1 ndice de acidez 4.7.2 ndice de refrao 4.7.3 ndice de perxido 4.7.4 ndice de saponificao 4.8 ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DOS LEOS DE BURITI 4.8.1 Difuso em placas 4.8.2 Diluio em Caldo (Microdiluio) 5. RESULTADOS E DISCUSSES 5.1 COLETA E SEPARAO DOS FRUTOS DE BURITI 5.2 AVALIAO DOS CONSTITUINTES DA POLPA 5.3 EXTRAO E RENDIMENTO DOS LEOS DE BURITI 5.4 CARACTERIZAO FSICO-QUMICA DOS LEOS DE BURITI 5.5 ATIVIDADE ANTIMICROBIANA 6. CONCLUSO

61 62 64 65 66 67 68 71 71 72 72 73 73 74 75 77 80 80 81 82 84 88 93

7. REFERENCIAL BIBLOGRFICO

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LISTA DE FIGURAS
Pg Figura 01- Figura do buriti Figura 02- Estrutura qumica dos principais Triacilgliceris Figura 03- Estrutura do -caroteno. Figura 04- Estrutura do retinol. Figura 05- Mecanismo de ao dos antibiticos Figura 06- Mecanismo de ao dos antifngicos de 1a gerao Figura 07- Limites e localizao das comunidades existentes na RDS Tup e no seu entorno Figura 08- Etapas da coleta do buriti na Comunidade do Julio, localizada na Reserva do Tup Figura 09- Exsicata de Mauritia flexuosa L.f. Figura 10- Processo de extrao do leo da polpa mida do fruto de buriti pelo mtodo artesanal (A) Figura 11- Etapas do processo de extrao do leo da polpa seca do fruto de buriti por prensagem hidrulica Figura 12- Processo de extrao do leo de buriti por solvente hexano utilizando o aparelho extrator Soxhlet Figura 13- Fluxograma da higienizao, despolpamento e extrao do leo da polpa dos frutos do buriti Figura 14- Desenho esquemtico da placa de Petry 70 76 69 68 67 63 61 62 28 37 43 42 54 57

Figura 15- Esquema da tcnica de difuso em placa das amostras A, B e C, do leo de buriti Figura 16- Etapas da atividade antimicrobiana da metodologia de microdiluio Figura 17- Determinao do percentual, em massa, dos constituintes da polpa dos frutos de buriti. Figura 18- Teste de difuso em caldo por microdiluio 92 91 77 79

LISTA DE TABELAS
Pg Tabela 01- Concentrao de carotenides encontrados no leo do fruto de buriti. Tabela 02 - leos vegetais por classificao em termos dos principais cidos graxos Tabela 03- Composio em cidos graxos de alguns leos vegetais Tabela 04- Teor de carotenides do fruto de Buriti. Tabela 05- Valores das mdias e desvio padro, em massa, dos frutos de buriti e suas partes constituintes Tabela 06- Mdias, desvio padro e percentual, em massa, das polpas secas, tortas e leos obtidos durante as duas coletas. Tabela 09- Atividade antimicrobiana (halos de inibio= mm) dos leos puros e diludos da polpa do fruto de buriti 89 83 80 30 38 40 44

LISTA DE QUADROS

Pg Quadro 01- Composio centesimal obtida da polpa do fruto do buriti Quadro 02- Perfil de cidos graxos de alguns frutos oleaginosos Quadro 03- Anlises fsico-qumicas do leo da polpa de buriti Quadro 04- Comparao das propriedades fsico-qumicas dos leos da polpa dos frutos de buriti com os leos de canola, amendoim e oliva 87 29 31 85

RESUMO

A valorizao econmica de alguns leos vegetais extrados de frutos passa pelo melhoramento tecnolgico de uma cadeia produtiva que envolve: o cultivo, a extrao dos leos e a caracterizao de suas propriedades que favoream aos interesses das indstrias que trabalham com estes produtos. O buriti (Mauritia flexuosa L.f.) uma palmeira cujo fruto uma fonte de alimento rico em vitamina A, B e C, ainda fornece clcio, ferro e protenas. O leo extrado da fruta rico em caroteno e tem valor medicinal. Em razo de suas propriedades e dos seus constituintes qumicos props-se nesse estudo extrair por trs mtodos, artesanal, prensagem e solvente, o leo de buriti, caracterizando-os atravs das propriedades fsico-qumicas e realizando testes antimicrobianos. A atividade antimicrobiana dos leos foi avaliada atravs dos testes de difuso em placa e em caldo, frente s cepas de referncia da coleo da Fiocruz Staphylococcus aureus CBAM 324, Pseudomonas aeruginosa CBAM 232, Escherichia coli CBAM 02, Klebsiella pneumoniae CBAM 382 e Cndida albicans CFAM 1285. Quanto eficincia da extrao do leo, a prensagem hidrulica, por no utilizar energia e solventes, ter um tempo de extrao menor, e por ser mais econmica, foi bastante satisfatria apresentando um rendimento muito prximo ao apresentado pelo mtodo por solvente e bem superior ao processo artesanal. Independente da metodologia adotada observou-se que no houve alteraes nos parmetros fsico-qumicos dos leos, legitimando a boa qualidade dos mesmos. A atividade antimicrobiana mostrou um resultado positivo pelo mtodo de microdiluio para Staphylococcus aureus e por difuso em placa com leos diludos para Pseudomonas aeruginosa. Desta forma o uso por prensagem hidrulica torna-se uma fonte de renda a mais, para os moradores das comunidades rurais que fazem a extrao de leos, considerando-se a possibilidade da utilizao deste leo pela indstria farmacutica e cosmtica em formulaes anti-spticas.

Palavras-chaves: buriti, extrao, leo, atividade antimicrobial, Tup.

ABSTRACTS

The economical valorization of some extracted vegetable oils of fruits raisin for the technological improvement of a productive chain that it involves: the cultivation, the extraction of the oils and the characterization of their properties that favor to the interests of the industries that work with these products. The buriti (Mauritia flexuosa L.f.) it is a palm tree whose fruit is a source of rich food in vitamin THE, B and C, it still supplies calcium, iron and proteins. The extracted oil of the fruit is rich in carotene and he/she has medicinal value. In reason of their properties and of their chemical representatives he/she intended in that study to extract for three methods, craft, prensagem and solvent, the buriti oil, characterizing them through the physiochemical properties and accomplishing tests antimicrobianos. The activity antimicrobiana of the oils was evaluated through the diffusion tests in plate and in broth, front to the stumps of reference of the collection of Fiocruz Staphylococcus aureus CBAM 324, Pseudomonas aeruginosa CBAM 232, Escherichia coli CBAM 02, Klebsiella pneumoniae CBAM 382 and Cndida albicans CFAM 1285. As for the efficiency of the extraction of the oil, the hydraulic prensagem, for not using energy and solvents, to have a time of smaller extraction, and for being more economical, it was quite satisfactory presenting a very close income to the presented by the method by solvent and very superior to the craft process. Independent of the adopted methodology it was observed that there were not alterations in the physiochemical parameters of the oils, legitimating the good quality of the same ones. The activity antimicrobiana showed a positive result for the microdiluio method for Staphylococcus aureus and for diffusion in plate with oils diluted for Pseudomonas aeruginosa. This way the use for hydraulic prensagem becomes a source of income the plus, for the rural communities' residents that you/they make the extraction of oils, being considered the possibility of the use of this oil for the pharmaceutical and cosmetic industry in antiseptic formulations.

Word-key: buriti, extraction, oil, activity antimicrobial, Tup.

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1 INTRODUO

A valorizao econmica de alguns leos vegetais extrados de frutos passa pelo melhoramento tecnolgico de uma cadeia produtiva que envolve: o cultivo, a extrao dos leos e a caracterizao de suas propriedades que favoream aos interesses das indstrias que trabalham com estes produtos (REMDIOS et al., 2006). Os pases com maior produo do leo de palma so: a Malsia e a Indonsia, sendo o primeiro responsvel por quase 54% da produo mundial. Na Amrica Latina o maior produtor a Colmbia, seguida por Equador e pelo Brasil. A produo brasileira representa apenas 5% da produo de leo, apesar de haver no Brasil uma grande rea geogrfica com condies climticas favorveis ao cultivo (SUFRAMA, 2006; NUNES, 2005). Uma alternativa promissora para o aumento na produo brasileira de leo vegetal encontra-se no buritizeiro, que uma palmeira oleaginosa nativa, oriunda de Trinidad e Tobago, Venezuela e Brasil, especialmente distribudo em maior proporo na regio Amaznica (DURES et al., 2006). O fruto do buriti rico em vitamina A, B, C, E, protenas e minerais como clcio e ferro. Consumido tradicionalmente ao natural, o fruto tambm pode ser transformado em doces, sucos, picols, licores, sobremesas de paladares peculiares e na alimentao de animais (ALMEIDA et al., 1998; BARBOSA et al., 2010). Alm disto, o leo extrado do fruto tem propriedades medicinais como vermfugo, cicatrizante e energtico natural. Tambm utilizado para amaciar e envernizar couro, dar cor, aroma e qualidade a diversos produtos de beleza, como cremes, xampus, filtro solar e sabonetes (SILVA, 2002).

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No entanto, a obteno do leo vegetal bruto ainda feita por meio de mtodos fsicos e qumicos usando-se um solvente como extrator ou prensagem hidrulica (GONALVES et al., 2002). A secagem da polpa uma prtica usual que facilita o processo no que diz respeito ao contato entre o solvente e o soluto (leo) a ser extrado, resultando em maiores rendimentos (TANGO et al., 2004). Neste processo, a temperatura um dos fatores mais importantes, podendo afetar as propriedades fsico-qumicas do leo, levar rancificao de gorduras e alterar pigmentos, tais como os carotenides, quando submetidos a altas temperaturas (BIAGI et al., 1992; NOGUEIRA, 1992). A avaliao destes leos vegetais nativos das diversas regies brasileiras, que normalmente no so utilizados na alimentao humana, mostra-se to relevante quanto aos estudos que vem sendo realizados para obteno de biodiesel (LUZ Jr. et al., 2010). Desta forma o presente estudo se props a avaliar atravs de trs mtodos de extrao, artesanal, prensagem hidrulica e solvente, o rendimento destas metodologias, caractersticas fsico-qumicas e atividade antibacteriana do leo da polpa dos frutos de buriti a ser aplicado na Reserva de Desenvolvimento Sustentvel (RDS) do Tup. Possibilitando o uso sustentvel da utilizao de produtos florestais no-madeireiros e o aproveitamento alternativo desse recurso natural mantendo a floresta viva, alm de promover a agregao de valor, a conservao e reproduo de espcies florestais at ento no utilizadas ou aproveitadas de forma predatria.

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2 OBJETIVOS

2.1 OBJETIVO GERAL

Comparar trs mtodos de extrao do leo de buriti (Mauritia flexuosa L.f. Arecaceae) quanto ao rendimento e avaliar as propriedades fsico-qumicas e ao antimicrobiana, para o uso sustentvel na Reserva de Desenvolvimento Sustentvel Tup.

2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

duas temperaturas diferentes a 2-8C e -20C;

Armazenar a polpa em

Extrair o leo da polpa do fruto de buriti utilizando trs mtodos de extrao: artesanal, prensagem hidrulica e solvente;

extrao do leo de buriti a partir dos trs mtodos; Verificar as propriedades fsico-qumicas dos leos;

Avaliar o rendimento da

Avaliar a atividade antimicrobiana do leo de Mauritia flexuosa L.f.

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3 REVISO DE LITERATURA

3.1 BURITI

3.1.1 Classificao Botnica

Classe: Equisetopsida C. Agardh Subclasse: Magnoliidae Novk ex Takht Ordem: Arecales Bromhead Famlia: Arecaceae Bercht Gnero: Mauritia L. f.
Mauritia flexuosa L. f. in Supplementum Plantarum 454. 1781[1782]. Reino: Plantae

Nomes comuns: buriti, buritti-do-brejo, buritizeiro, muriti, palmeira-dos-brejos, carand-guau. Sinnimos: M. vinifera Mart., M. minor Bur., M. sphaerocarpa Bur., M. setigera Griseb.

3.1.2 Morfologia

Palmeira monocaule, pantas masculinas e femininas separadas (diica), com at 30 m de altura, estipe (caule) liso medindo no mximo 50 cm de dimetro, coroa foliar com presena de folhas verdes e senescentes, tipo costapalmadas, bainha aberta, tamanho da folha at 6,0 m de comprimento e 250 segmentos (fololos). Inflorescncia diica interfoliar com rquilas pendentes, frutos elipside-oblongos, epicarpo (casca) coberto por escamas crneas,

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mesocarpo (polpa) carnoso, endocarpo (tegumento) fino, medindo 6,24 x 3,89 cm de dimetro, de colorao marrom-avermelhada na maturidade. Cada fruto possui uma semente com endosperma homogneo e duro. Plntulas com folhas palmadas (Figura 01). (MIRANDA & RABELO, 2008)

Figura 01- a) Aspecto geral de uma palmeira do buriti; b) inflorescncia em plantas masculinas; c) flores masculinas; d) folha jovem tipo costapalmada; e) fruto maduro inteiro e seccionado com suas partes (Epicarpo, Mesocarpo, Endocarpo e Endosperma). FONTE: Ceclia Carvalho

3.1.3 Distribuio geogrfica

No Brasil ocorre no Par, Amazonas, Tocantins, Maranho, Piau, Cear, Bahia, Gois e So Paulo. Palmeira predominante em solos arenosos encharcados de florestas abertas (savanas), florestas inundadas periodicamente de igaps, nos diversos igaraps no interior da floresta de terra firme e alguns remanescentes da floresta natural nos centros urbanos (MIRANDA & RABELO, 2008).

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muito comum tambm encontrarmos essa palmeira ao longo das margens de rodovias espalhadas por toda a regio Amaznica. O buriti possui grande mecanismo de disperso por meio principalmente da gua, ocasionando, nesses ecossistemas, extensas populaes de buritizais (MIRANDA & RABELO, 2008).

3.1.4 Composio centesimal da polpa do buriti

Segundo Ribeiro (2008), a composio centesimal da polpa do fruto de buriti descrita no Quadro 01, em termos percentuais, comparando vrias referncias (g/100 g de polpa). tambm verificado um teor significativo de vitamina C (cido ascrbico), entre 19,8 e 26 mg, e de clcio, entre 113 e 156 mg por 100 g de polpa de buriti, alm do altssimo teor de vitamina A derivado das concentraes presentes de -caroteno.

Quadro 01- Composio centesimal obtida da polpa do fruto do buriti, segundo Ribeiro, 2008.

Componentes gua Protena Lipdios Carboidratos Cinzas

FONTE: Ribeiro, 2008

Mariath et al (1989) 64,2 1,8 8,1 25,2 0,7

Tavares et al (2009) 67,2 1,5 3,8 26,1 1,4

Santos (2005) 49,77 2,82 19,8 26,76 0,85

Manhes (2007) 62,93 2,1 13,85 20,18 0,94

3.1.5 Caractersticas Gerais de Mauritia flexuosa L. f. O buriti (Mauritia flexuosa L.) uma das palmeiras presentes em maior proporo na regio Amaznica do Brasil, que fornece materiais para uma variedade de aplicaes, como frutos para produzir licores, vinhos e at razes para uso medicinal (DURES et al., 2006).

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Da polpa do fruto, obtm-se matria-prima para preparao de sorvetes, sucos concentrados e doces; extrai-se tambm um leo com caractersticas organolpticas de sabor e aroma agradveis com grande quantidade de -caroteno (SILVA, 2002). Esse leo tem ainda um variado nmero de aplicaes nas indstrias de cosmticos e de produtos alimentcios. Na medicina caseira, o leo da polpa do buriti utilizado contra queimaduras, provocando alvio imediato e cicatrizao rpida (MIRANDA & RABELO, 2008).

3.1.6 leo de Buriti

O leo extrado da polpa do fruto de buriti de grande interesse, devido suas propriedades fsicas e qumicas, revela uma alta concentrao de tocoferis e carotenides (FRANA, et al., 1999). Dentre os carotenides, -caroteno o que se encontra em maior quantidade (Tabela 01), sendo responsvel pela cor alaranjada do leo (DURES et al., 2006).
Tabela 01- Concentrao de carotenides encontrados no leo do fruto de buriti.

Carotenide Fitoflueno -caroteno 13 cis--caroteno trans--caroteno 9-cis--caroteno - caroteno -zeacaroteno - caroteno

Concentrao (ppm) 150 8 61 359 672 150 39 38 11 7 27 10 18 3 1 1

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Mutacromo -10-apo-caroteno Zeaxantina Carotenides totais

45 70 13 98

1 3 1 4

FONTE: Dures, 2006

O leo do buriti possui ainda na sua composio qumica alta concentrao de cido olico estando este na maioria das vezes sob a forma de triglicerdeos (DURES et al., 2006; ALBUQUERQUE et al., 2005). Apresenta um alto teor de cidos graxos insaturados, muito semelhantes ao azeite de oliva (Olea europaea) e leo de abacate (Persea americana) (Quadro 02) (SILVA, 2002).

% 12:0 14:0 16:0 18:0 20:0 16:1 18:1 18:2 18:3

Quadro 02- Perfil de cidos graxos de alguns frutos oleaginosos. cidos graxos Buriti Tucum Oliva Abacate Lurico Mirstico Palmtico Esterico Araqudico Palmitoleico Oleico Linoleico Linolnico ---------0,1 17,3-19,3 1,86-2,0 ------------------73,3-78,7 2,4-3,9 2,17-2,2 -----------------13,86 9,80 0,82 0,17 46,81 26,13 0,93 ----------0,67 10-11,7 2,15 0,48 1,45 73,8-78 7-9,8 -----------------0,02-0,13 19,8-22,7 0,5-1,0 ---------3,9-5,6 60-71 7,1-15,3 0,37-1,03

Dend 0,1-1,0 0,9-1,5 41,8-46,8 4,2-5,1 0,2-0,7 0,1-0,3 37,3-40,8 9,1-11 0-0,6

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FONTE: Silva, 2002

3.2 EXTRAES DE LEOS

Muitas frutas e sementes contm componentes de alto valor compondo a estrutura de suas clulas, por exemplo, coco, soja, semente de girassol, oliva, que produzem leos e gorduras. A extrao de leos vegetais pode ser atravs de diferentes processos de extrao como: artesanal (fervura), prensagem hidrulica mecnica (hidrulica e contnua), por solvente e outros. Antes da extrao necessrio o preparo da amostra, que inclui

descascamento, limpeza, secagem, desintegrao, floculao e condicionamento ou aquecimento. Estas operaes dependem do tipo e da qualidade da matria-prima (BRENNAN et al., 1990; TANDY, 1991).

3.2.1 Extrao Artesanal De uma forma geral na extrao artesanal a polpa do fruto submetida a um cozimento intensivo com gua, separando o leo sobrenadante. Em seguida, o leo seco em fogo baixo, utilizando um recipiente metlico (panela de alumnio) ou separado por centrifugao at perda da opacidade devido umidade. O leo obtido filtrado em papel de filtro de uso caseiro (DEUS, 2008).

3.2.2 Extrao Mecnica A extrao mecnica a operao de separao de lquidos de slidos pela aplicao de foras de compresso, e geralmente usada nas indstrias de alimentos e bebidas. Normalmente so necessrios pr-tratamentos de despolpamento, reduo de tamanho e

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aquecimento antes da separao do lquido para aumentar o rendimento (BRENNAN et al., 1990). A principal finalidade desta operao a mxima separao de leo, o que significa mnima matria graxa no resduo e perdas mnimas posteriores na purificao (RITTNER, 1996). O lquido extrado o produto de maior valor, no entanto, em alguns casos, o resduo slido da operao relevante para o uso em alimentao animal ou para a obteno de protena, que pode ser utilizada como suplemento nutritivo na alimentao humana (ex.: protena da soja). de extrema importncia que se evite a desnaturao das protenas e a presena de solventes no resduo slido, sendo a prensagem hidrulica uma alternativa adequada neste caso (ORDEZ et al., 2005). Para isto so utilizados equipamentos desde os rudimentares at instalaes industriais. Nestas so conhecidos (RITTNER, 1996):

a) prensas hidrulicas, mais utilizadas em instalaes menores que no justificam a prensagem hidrulica contnua; b) prensas contnuas tipo expeller, que possuem maior capacidade, requerem menor investimento e menor mo-de-obra.

3.2.2.1 Prensas Hidrulicas So equipamentos constitudo por um pisto, acionado hidraulicamente, que comprime o material contido em um cesto provido de um orifcio de sada para o lquido prensado, em ciclos de tempo e presses definidas Variam quanto operao (manual ou motorizada); quanto ao movimento dos pistes (ascendente ou descendente); quanto ao dimetro e

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comprimento dos cestos; quanto proporo entre dimetro do cesto e curso do pisto; quanto automatizao de ciclos de operao (RITTNER, 1996). A eficincia das prensas manuais influenciada diretamente pelo pr-tratamento a que a matria-prima submetida, j que nesse tipo de instalao a operao de esterilizao (aquecimento) realizada a presso atmosfrica e a desintegrao mecnica, sem aquecimento. As prensas automticas so muito mais eficientes e de maior capacidade (RITTNER, 1995). A prensagem hidrulica um mtodo que, por no utilizar solvente ou algum tipo de gs, obtm-se um produto com suas propriedades naturais preservadas. No entanto, normalmente realizada em combinao com a extrao por solvente, pela sua menor eficincia na retirada de leo, a menos que seja aplicada alta presso, o que reduziria o contedo de leo residual na torta a at 5%, dispensando o subseqente uso do solvente (MORETTO & FETT, 1998).

3.2.2.2 Prensas contnuas

A prensa de parafusos, ou expeller um tipo de prensa contnua em que polpa do fruto ou sementes alimenta um cilindro de paredes espessas contendo um parafuso rotativo polido de tamanho decrescente (BRENNAN et al., 1990). O material colocado entre o parafuso e o interior do cilindro passa atravs dele com uma taxa de fluxo que reduz gradualmente, realizando uma fora compressora. As paredes do cilindro contm finas perfuraes ou fendas cobertas por telas ajustveis, atravs das quais o lquido drenado da torta. Esta sai da unidade por uma porta de descarga. O consumo de

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energia alto e dissipado na frico e pode aumentar consideravelmente a temperatura do produto (BRENNAN et al., 1990). O risco de degradao trmica em materiais termossensveis pode ser reduzido por parafusos resfriados por gua. A intensidade da compresso pode ser regulada ajustando-se a porta de descarga e variando a velocidade de rotao do parafuso. Consegue boa separao com produo de at 8500 kg/h (200 t/dia), com a torta contendo de 4 a 5% de lquido residual (BRENNAN et al., 1990). Com certos frutos pode haver problemas com a passagem de partculas finas com o lquido, sendo necessria a clarificao por centrifugao ou filtrao (BRENNAN et al., 1990). A prensagem um mtodo que, por no utilizar solvente ou algum tipo de gs, obtmse um produto com suas propriedades naturais preservadas. No entanto, normalmente realizada em combinao com a extrao por solvente, pela sua menor eficincia na retirada de leo, a menos que seja aplicada alta presso, o que reduziria o contedo de leo residual na torta a at 5%, dispensando o subseqente uso do solvente (MORETTO ; FETT, 1998).

3.2.3 Extrao por Solvente Uma das primeiras aplicaes da extrao por solvente foi a separao de misturas orgnicas em grupos de compostos de caractersticas qumicas similares, como na remoo ou produo de substncias aromticas. Posteriormente este mtodo foi aplicado tambm para a produo de frmacos e em processos ambientais, constituindo uma etapa durante a qual uma fase orgnica est em contato com uma fase aquosa ou outra fase orgnica imiscvel (WENNERSTEN, 1992).

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A separao de compostos de produtos naturais pode ser conseguida pela transferncia destes de uma fase para outra (slido-lquido, lquido-lquido) dentro de um processo industrial. A extrao por solvente utiliza as diferenas em interaes intermoleculares na fase lquida (WENNERSTEN, 1992). No processamento industrial, muitos produtos so separados de sua estrutura natural original por extrao slido-lquido, como por exemplo, na produo de leos vegetais, utilizando solventes orgnicos, tais como hexano, acetona e ter. Na extrao por solvente, duas fases esto em contato ntimo e o(s) soluto(s) pode(m) se difundir do slido para a fase lquida, resultando na separao dos componentes contidos originalmente no slido (GEANKOPLIS, 2003). O material a ser submetido extrao previamente triturado e laminado a fim de facilitar a penetrao do solvente, uma vez que, deste modo, alm de estar contido no interior das clulas (sendo removido por difuso), tambm estar em forma de uma camada em volta das partculas do material, sendo removido por simples dissoluo (MORETTO & FETT, 1998). Isto significa que o processo constitui-se em duas etapas: uma primeira, rpida e fcil, de dissoluo, e outra mais demorada, de difuso, e por isso, considerada a etapa limitante. Como resultado, tem-se uma extrao com velocidade elevada no incio e em seguida, decrescente, no se atingindo uma remoo completa, na prtica (MORETTO & FETT, 1998). A extrao por solvente uma operao de transferncia de massa amplamente utilizada na indstria de alimentos para retirar o leo de sementes/e ou polpas oleaginosas. Aps terem seu tamanho reduzido, estas sementes so colocadas em contato com o solvente,

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de maneira que ocorra a transferncia do leo da fase slida para a fase lquida (PERRY & CHILTON, 1986). O sistema de extrao pode ser em leito fixo ou mvel, o ltimo sendo o mais empregado para produo de leos vegetais de sementes oleaginosas, tais como algodo, amendoim e soja. As sementes so submetidas pr-tratamentos, como descascamento, s vezes cozimento, parcial desidratao e moagem. Por isto o extrato resultante, composto de soluto e solvente, pode conter algumas partculas slidas finamente divididas, que podem ser retiradas por filtrao ou centrifugao. Para a remoo do solvente necessria a operao adicional de evaporao (GEANKOPLIS, 2003). Na operao de prensagem hidrulica, mesmo que realizada em dois estgios, a torta apresenta ainda cerca de 5-6% de leo residual. Pela extrao de leo desta torta por solvente consegue-se reduzir esta quantidade para menos de 1%. Na extrao por solvente com prprensagem hidrulica, portanto, a prensa operada para gerar uma torta com 15-18% de leo, e o restante, extrado por solvente. As partculas tm seu tamanho novamente reduzido antes de serem levadas ao extrator por solvente. O resduo modo e comercializado para alimentao animal (TANDY, 1991).

3.3 LEOS VEGETAIS

Consistem principalmente de acilgliceris, isto , steres de glicerol e cidos graxos. leos vegetais comestveis so compostos principalmente por triacilgliceris, formados por uma molcula de glicerol com trs cidos graxos esterificados (Figura 02) (HUI, 1996). Na maioria das vezes so lquidos temperatura ambiente, devido presena de cidos graxos insaturados (WATKINS et al., 1996). Em geral, acilgliceris e fosfolipdios so

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os principais compostos lipdicos na natureza. Entretanto, os lipdeos normalmente contm pequenas quantidades de vrios componentes minoritrios, muitos dos quais tm impacto significativo sobre suas propriedades fsicas e qumicas (HUI, 1996).

Figura 02- Estrutura qumica dos principais Triacilgliceris. FONTE: Hui, 1996

Por isso, os leos vegetais so classificados segundo a composio em termo dos principais cidos graxos, como mostra a Tabela 02. Os trs principais cidos graxos presentes no reino vegetal so o palmtico, o olico e o linolico, acompanhados algumas vezes do cido esterico e linolnico (GUNSTONE, 2005) Atualmente, a procura por leos mais ricos em cidos graxos insaturados tem aumentado, em detrimento s gorduras saturadas. Embora seja conveniente classificar os leos por sua composio em cidos graxos, importante lembrar que este no o nico indicador de seu valor nutricional e estabilidade oxidativa, sendo importantes tambm os componentes minoritrios do leo bruto e os compostos remanescentes aps o refino (GUNSTONE, 2005).

Tabela 02- leos vegetais por classificao em termos dos principais cidos graxos cidos Lurico Palmtico leos Vegetais coco e palma palma e algodo

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Olico/Linolico Alto teor de Olico Linolnico

girassol, gergelim, algodo, canola, soja oliva, girassol, canola, soja linhaa, canola, soja

FONTE: Gunstone, 2005

Dentre os compostos nutricionais, destacam-se os cidos graxos essenciais e as vitaminas lipossolveis, como A, D, E e K (KITTS, 1996). Inevitavelmente, a etapa de extrao promove a formao e/ou remove da polpa/semente oleaginosas, compostos indesejveis como cidos graxos livres, hidrocarbonetos, metais pesados, glicolipdios, fragmentos de protenas, resinas e mucilagens. As etapas de refino tm o objetivo de remover estes compostos, com o menor dano possvel aos triacilgliceris e menor perda dos compostos nutricionais (DE GREYT & KELLENS, 2005). leos e gorduras so misturas complexas de cidos graxos, steres de cidos graxos, mono-, di- e triglicerdeos e componentes minoritrios, tais como vitaminas, esteris, fosfolipdeos, pigmentos e hidrocarbonetos. Os componentes lipdicos minoritrios constituem a frao insaponificvel, que determinada por mtodos baseados na extrao do resduo de saponificao de leos e gorduras (GL-STNDAG & TEMELLI, 2004).

3.3.1 Componentes majoritrios dos leos vegetais

3.3.1.1 cidos graxos

Os cidos graxos so os blocos construtores de vrias classes de lipdeos, incluindo acilgliceris, fosfogliceris, glicolipdios, esteris e algumas ceras. Todos os cidos graxos

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consistem em uma cadeia hidrocarbnica e um grupo terminal carboxlico. Eles variam no comprimento da cadeia e no nmero, posio e configurao de suas duplas ligaes (HUI, 1996). Os cidos graxos so cidos carboxlicos, geralmente monocarboxlicos, que podem ser representados pela forma RCOOH. Na maioria das vezes, o grupamento R uma cadeia carbnica longa, no ramificada, com nmero par de tomos de carbono, podendo ser saturada ou conter uma ou mais insaturaes. O grupo carboxila constitui a regio polar e a cadeia R, a regio apolar da molcula (GRAZIOLA et al.,2002). Os cidos graxos mais freqentes possuem de 4 a 22 carbonos, sendo os mais comuns aqueles com 16 e 18 carbonos, dentre eles os saturados palmtico (C16: 0) e esterico (C18:0), e os insaturados olico (C18:1), linolico (C18:2) e linolnico (C18:3) (SCRIMGEOUR, 2005). Para efeito de comparao, a Tabela 03 apresenta os teores de cidos graxos monoinsaturados, poliinsaturados e saturados de alguns leos vegetais. Pode-se observar que o leo de buriti apresenta teor de cidos graxos monoinsaturados ligeiramente superiores ao azeite de oliva e ao leo de castanha do Par, reconhecidos pelo valor na preveno do colesterol LDL (Low Density Lipoprotein) e de doenas cardiovasculares (CHRISTIE, 2003).

Tabela 03- Composio em cidos graxos de alguns leos vegetais

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FONTE: Christie, 2003

Monoinsaturados (%) Azeite de Oliva Buriti Canola Castanha do Par Girassol Milho leo de Palma Soja 72,3 76,0 65,3 73,6 18,7 27,6 38,0 23,5

Poliinsaturados (%) 11,5 4,6 27,9 5,1 68,7 57,9 9,7 61,0

Saturados (%) 16,2 19,4 6,8 21,3 12,6 14,5 51,4 15,5

Por outro lado, o teor de cidos graxos saturados comparvel ao azeite de oliva, leo de soja e castanha do Par. Seu reduzido teor de cidos graxos poliinsaturados confere a este leo uma maior estabilidade oxidativa. Nos leos vegetais, a maior parcela dos cidos graxos se encontra esterificada (triacilgliceris). A presena de grandes quantidades de cidos graxos no-esterificados (cidos graxos livres) um indicativo de que algum dano permanente ocorreu ao lipdeo (CHRISTIE, 2003).

3.3.1.2 Acilgliceris

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Acil-steres de glicerol constituem os principais lipdeos de armazenamento em plantas e na maioria dos animais. Aproximadamente 98% dessas gorduras so constitudas de misturas de triacilgliceris, isto , molculas de glicerol, cada uma esterificada com trs cidos graxos (HUI, 1996). Os leos vegetais caracterizam-se por terem ponto de fuso menor que 20C, o que se deve elevada proporo de cidos graxos insaturados formando seus triglicerdeos constituintes, com pequenas excees, como o leo de palmiste e o de coco (leos tropicais), que tm cadeias variando de curta a mdia, altamente saturadas, fazendo com que estas fontes sejam slidas temperatura ambiente (WARTHESEN & MUEHLENKAMP, 1997). Alm dos triglicerdeos, os leos vegetais tambm podem conter em menores propores, mono-, di-glicerdeos e fosfatdeos (ex.: lecitina), ceras, pigmentos (ex.: carotenides, clorofila), esteris, tambm chamados de matria insaponificvel (ex.: tocoferis que podem agir como antioxidantes naturais protegendo esses leos ricos em cidos graxos insaturados contra a oxidao) (MORETTO & FETT, 1998).

3.3.2 Componentes minoritrios dos leos vegetais

Os leos vegetais contm os seguintes componentes minoritrios hidrocarbonetos, fosfolipdios, esteris, clorofilas, tocoferis e carotenides.

3.3.2.1 Tocoferis So importantes constituintes minoritrios da maioria dos leos vegetais; em gorduras animais esto em pequenas quantidades ou ausentes. Os tocoferis so antioxidantes, auxiliando na preveno de rancidez oxidativa, e so tambm fontes de vitamina E. So

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parcialmente removidos pelo calor durante o processamento e podem ser adicionados depois, para melhorar a estabilidade oxidativa dos leos (VACLAVIK & CHRISTIAN, 2003). Importante fonte de tocoferis, o leo de buriti, em estudos realizados por Albuquerque et al. (2005) apresentou 800 mg/kg de tocoferis em sua composio. Frana et al. (1999), atravs da extrao supercrtica por CO2, encontraram 19300 mg/kg de tocoferis no leo extrado.

3.3.2.2 Carotenides

Os carotenides esto entre os pigmentos naturais mais abundantes, uma vez que a maioria das plantas pode sintetiz-los como proteo contra processos foto-oxidativos. Tambm podem ser encontrados em animais e microrganismos, embora as principais fontes sejam as frutas e hortalias (OLIVER & PALOU, 2000). A estrutura dos carotenides confere inmeras propriedades, que caracterizam suas diversas funes e aes nos organismos vivos. So essenciais para a fotossntese e para a vida em uma atmosfera que necessita de oxignio. Os carotenides so hidrocarbonetos polinicos, formados por at oito unidades de isoprenides (tetraterpenos), lipoflicos e que possuem um esqueleto com 40 tomos de carbono, conferindo cor amarela, laranja ou vermelha (BELITZ & GROSH, 1992). Eles so, talvez, mais familiares para ns no dia-a-dia, como pigmentos predominantes em muitas razes, frutas e flores. Cenoura, tomate e pimentas vermelhas e ptalas de cravo so os exemplos mais comuns (BARTON et al., 1999). Devido ao seu sistema conjugado de duplas ligaes, os carotenides so altamente instveis, sensveis ao calor, luz, cidos, oxignio e enzimas como lipoxigenase, podendo levar a alteraes ou parcial destruio dos pigmentos e perda da atividade pr-vitamina A.

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Isto resultado da isomerizao da forma trans, mais estvel, cis, que pode ocorrer durante o processamento e armazenamento do produto que contm estes carotenides (BELITZ & GROSH, 1992). Na natureza so conhecidos 600 carotenides, sendo apenas cerca de 40 regularmente consumidos pelo homem, e poucos apresentam atividade pr-vitamina A na dieta. O caroteno (Figura 03) o que possui este maior potencial pr-vitamnico (1/6 da atividade do retinol, enquanto os outros fornecem apenas 1/12 de atividade da vitamina A).

Figura 03- Estrutura do -caroteno. FONTE: Thane & Reddy, 1997

A deficincia de vitamina A se espalha em pases em desenvolvimento e leva a danos no funcionamento celular, xeroftamia, retardo no crescimento, elevao na suscetibilidade infeco e, s vezes, cegueira (THANE; REDDY, 1997). Alm da caracterstica citada acima, os carotenides podem apresentar importante funo antioxidante, auxiliando na preveno de doenas degenerativas (KAUR & KAPOOR, 2001). Em material seco, os -carotenos so melhores extrados de sua matriz vegetal com solventes imiscveis em gua, como ter dietlico ou ter de petrleo. A solubilidade do caroteno, varia com o solvente orgnico utilizado, sendo vinte vezes mais solvel em hexano (600 mg/L) do que em etanol, e trs vezes mais que em acetona. Entretanto, solventes aquosos, tais como etanol e acetona, quando utilizados em material mido, agem ao mesmo

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tempo como desidratantes e como solventes de extrao (GL-STNDAG & TEMELLI, 2004). O buriti uma fonte rica de pr-vitamina A, com valores mais altos que alimentos muito consumidos pelos brasileiros, como goiaba, pitanga, mamo, maracuj e cenoura (RODRIGUEZ-AMAYA, 1996). O -caroteno, carotenide com maior atividade de vitamina A, representa mais de 90 % dos carotenides do buriti. A Tabela 04 apresenta alguns valores de teor de carotenides encontrados na literatura. Observe que, por ser uma matria-prima de origem vegetal, a sua composio pode variar com a safra, local e condies de crescimento da palmeira (MARIATH et al., 1989).

Tabela 04- Teor de carotenides do fruto de Buriti. Poro Autor Analisada Teor (mg/Kg) Unidade

ALBUQUERQUE et al.; 2005 FRANA et al.; 1989 MARIATH et al.; 1989 RODRIGUEZ-AMAYA, 1996 FONTE: Mariath et al., 1989

leo leo leo Polpa

1707 1043 3380 64,9

Carotenides Totais Carotenides Totais Carotenides Totais Retinol equivalente

3.4 PROPRIEDADES FSICO-QUMICAS

A qualidade de um leo vegetal ditada por uma srie de parmetros fsicos e qumicos e depende tanto da espcie que lhe deu origem, como das condies climticas e de cultivo (SHAHIDI, 2005). Somente a partir de um leo vegetal bruto de boa qualidade possvel a obteno de um bom leo refinado.

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3.4.1 ndice de Acidez (I.Ac.)

A determinao da acidez pode fornecer um dado importante na avaliao do estado de conservao do leo. Um processo de decomposio, seja por hidrlise, oxidao ou fermentao, altera quase sempre a concentrao dos ons hidrognio. A decomposio dos glicerdeos acelerada por aquecimento e pela luz, sendo a rancidez quase sempre acompanhada pela formao de cidos graxos livres. Estes so frequentemente expressos em termos de ndice de acidez, podendo ser tambm em mL de soluo normal por cento ou em g do componente cido principal, geralmente o cido olico (LUTZ, 1985).

3.4.2 ndice Saponificao (I.S.)

O ndice de saponificao uma medida dos cidos graxos livres e combinados que existem no leo e diretamente proporcional massa molar mdia (MMM). Quanto menor esta MMM, maior ser o I.S. Vale ressaltar, que o ndice de saponificao pouco prtico, ou seja, praticamente todos os leos lquidos possuem o mesmo ndice. (SCRIMGEOUR, 2005).

3.4.3 ndice Perxido (I.P.)

O ndice de perxido uma medida do oxignio ligado aos leos em forma de perxido. Este mtodo determina todas as substncias, em termos de miliequivalentes de perxido por 1000 g de amostra, que oxidam o iodeto de potssio nas condies do teste. Estas substncias so geralmente consideradas como perxidos ou outros produtos similares

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resultantes da oxidao da gordura. E aplicvel a todos os leos e gorduras normais, incluindo margarina e creme vegetal, porm suscetvel e, portanto qualquer variao no procedimento do teste pode alterar o resultado da anlise (LUTZ, 1985).

3.4.4 ndice de Refrao (I.R.)

O ndice de refrao caracterstico para cada tipo de leo, dentro de certos limites. Est relacionado com o grau de saturao das ligaes, mas afetado por outros fatores tais como: teor de cidos graxos livres, oxidao e tratamento trmico. Este mtodo aplicvel a todos os leos normais e gorduras lquidas (LUTZ, 1985). Tem grande utilidade no controle dos processos de hidrogenao, visto que os leos
possuem poderes de refringncia diferentes; assim, o ndice de refrao de um leo aumenta com o comprimento da cadeia hidrocarbonada e com o grau de insaturao dos cidos graxos constituintes dos triglicerdeos. Esse ndice muito usado como critrio de qualidade e identidade desses leos (CECCHI, 2003).

3.5 MICRORGANISMOS E ANTIMICROBIANOS Dentre os diferentes grupos de patgenos causadores de infeces hospitalares esto fungos, vrus e bactrias. No entanto, o grupo que mais se destaca o das bactrias que constituem a flora humana e que normalmente no trazem riscos a indivduos saudveis, embora possam causar infeces em indivduos com estado clnico comprometidos. 3.5.1 Microrganismos 3.5.1.1 Bactrias

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As bactrias so seres procariticos relativamente simples, e a grande diversidade de espcies desses microrganismos pode ser diferenciada por diversos fatores como morfologia, composio qumica, as necessidades nutricionais, atividades bioqumicas e a fonte de energia. A membrana citoplasmtica situada no interior da parede celular tem como funo servir como uma barreira seletiva, produo de energia por transporte de eltrons, duplicao do DNA e secreo de enzimas. (TRABULSI, et al., 2004). Envolvendo a parede celular pode ocorrer uma terceira camada, a cpsula. No interior da clula, alm do citoplasma, encontra-se uma regio correspondente ao ncleo, chamada nucleide, e grnulos diversos. Frequentemente ocorrem prolongamentos filamentosos que partem da superfcie bacteriana, so os flagelos e as fmbrias (JUNQUEIRA & CARNEIRO, 2005). A parede celular uma estrutura complexa, semi-rgida responsvel pela morfologia da clula (bacilo ou bastonetes, cocos e espiraladas). Tem como funo prevenir a ruptura da clula bacteriana devido entrada de gua, alm de ser essencial para a diviso e o crescimento celular (BLACK, 1996). As bactrias podem ser divididas em Gram-positivas e Gram-negativas, de acordo com a constituio da parede celular, e o que as diferencia so as propriedades de permeabilidade e os componentes de superfcie (SCHAECHTER et al., 2002). Nas bactrias Gram-positivas, a parede consiste de muitas camadas de peptideoglicana, formando uma estrutura espessa e rgida, e contm cidos teicicos (formados a partir de glicerol e ribitol) (TORTORA et al., 2005). Em contrapartida, a parede de bactrias Gram-negativas mais complexa que a das Gram-positivas, sendo formada de poucas camadas de peptidoglicanas e uma membrana

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externa, sendo esta formada por uma dupla camada lipdica: uma camada interna composta de fosfolipdeos e uma externa contendo lipopolisacardeos e protenas (TORTORA et al., 2005). A membrana externa das bactrias Gram-negativas hidroflica, mas componentes lipdicos das molculas constituintes conferem propriedades hidrofbicas tambm. A membrana externa forma uma barreira adicional entrada de algumas substncias, como antibiticos (SILVA et al., 2007; TRABULSI et al.,2004). Para manter o metabolismo celular a membrana externa permevel a algumas substncias hidroflicas como: acares, aminocidos, e certos ons. Para isso, protenas de membrana denominadas purina formam canais de entrada destas substncias (TORTORA et al., 2005; PELCZAR et al., 1996). O que separa a membrana externa da plasmtica o espao periplasmtico composto de camada de peptideoglicana e diversas protenas que participam do transporte de soluto para dentro das clulas, alm de enzimas (proteases, lipases, nucleases) a qual a membrana impermevel. Tambm apresentam enzimas como a - lactamases, responsvel pela

inativao de algumas drogas, que fazem com que microrganismos se tornem resistentes a muitos antimicrobianos (SCHAECHTER et al., 2002).

Staphylococcus aureus (S. a.) O gnero Staphylococcus apresenta-se na forma de cocos Gram-positivos, isolados ou agrupados em cachos. So anaerbios facultativos, no formadores de esporos, imveis e catalase positivos, so bactrias mesfilas, com temperatura de crescimento variando entre 7 a 47,8 C, com produo de enterotoxina entre 10 a 46 C (FRANCO & LANDGRAF, 1996). Dentre as espcies desse gnero, S. aureus considerada a mais importante em funo da sua maior patogenicidade ao homem (VON EIFF et al., 2001). Praticamente qualquer sistema de rgos est propenso a infeco pelo S. aureus. As infeces mais importantes so

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a bacteremia, endocardites e infeces do trato respiratrio (KANAFANI & FOWLER, 2006). As bacteremias e endocardites so frequentemente associadas a srias complicaes e alta taxa de morte (PETTI & FOWLER, 2003). Na dcada de 30, o uso de sulfanilamidas parecia ter solucionado o problema de contaminao e de doenas infecciosas por Staphylococcus aureus. Mas nas dcadas de 50 e 70, surtos epidmicos freqentes provocados por contgio por este microrganismo trouxeram novamente a preocupao quanto a sua resistncia agora a penicilina e o surgimento de linhagens multirresistentes (MRSA) (SILVA, 2007).

Escherichia coli (E. c.) Pertence famlia Enterobacteriaceae, encontrado no trato intestinal de seres humanos e animais, e faz parte da microbiota normal, embora esteja relacionada a diversas infeces. Escherichia coli apresenta uma diversidade patognica por produzirem enterotoxinas e so classificadas em cinco categorias: enteroxignica -ETEC, enteroinvasora EIEC, enteropatognica EPEC, ntero-hemorrgica EHEC e enteroagregativa - EaggEC, de acordo com o grau de invasibilidade celular distintas por causarem enterites e gastrenterites por mecanismos diferentes (KONEMAN et al., 2008; MIMS et al.,1999). Alm ser considerada a causa mais comum de infeco no trato urinrio, meningite, e outras infeces extra-intestinais e a infeces hospitalares (JAWETZ et al., 2007).

Klebsiella pneumoniae (K. p.)

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Klebsiella pneumoniae geralmente presente no intestino, est tambm relacionado a infeces do aparelho urinrio, endocardites e vrios tipos de infeces ps-cirrgicas, alm de causar pneumonia (TRABULSI et al., 2004). Um dos maiores problemas relacionados contaminao por Klebsiella pneumoniae ocorre em unidades peditricas com crianas imunodeprimidas. A incidncia de cepas de Klebsiella pneumoniae produzindo enzimas betalactamases de espectro expandido (ESBLs), nos Estados Unidos situa-se em torno de 5%. Na Europa, esta prevalncia pode situar em torno de 14% a 16% (MENEZES et al., 2006). As ESBLs so geralmente transmitidas atravs de plasmdios. Como os plasmdios so facilmente transmitidos entre diferentes membros das enterobactrias, a acumulao de genes de resistncia resulta em cepas que possuem plasmdios que codificam para multirresistncia. As ESBLs produzidas por Klebsiella pneumoniae so a principal causa de aumento da resistncia s cefalosporinas normalmente utilizadas para o tratamento de indivduos (MENEZES et al., 2006).

Pseudomonas aeruginosa (Ps. a.)

Segundo Trabulsi (2004), Pseudomonas aeruginosa encontrado normalmente em solo, plantas e em ambiente hospitalares (gua, equipamentos, utenslios, desinfetantes). Sua ampla distribuio ambiental resultado de poucas exigncias para seu crescimento. um microrganismo natural da microbiota do intestino e da pele, embora se comporte como oportunista em pacientes imunocomprometidos (SOUZA et al., 2007). Por apresentar diversos fatores estruturais e toxinas que estimulam sua virulncia um microrganismo de grande importncia clnica, estando envolvido em vrias implicaes clnicas em ambiente hospitalar. Indivduos imunocomprometidos com neutropenia, diabetes

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mellitus, queimaduras extensas, em indivduos com processo respiratrio comprometido, que tenham passado por processos invasivos e que faam uso de ventilao mecnica, so muito suscetveis a infeces por P. aeruginosa (TORTORA et al., 2005). Uma das caractersticas das Pseudomonas a capacidade de substituir o oxignio por nitrato como o aceptor final dos eltrons. Este processo de respirao anaerbica fornece tanta energia quanto a respirao aerbica, e causa perda significativa do nitrognio presente nos fertilizantes e no solo. Sua habilidade de utilizar protenas e lipdeos contribui para degradao de alimentos (TORTORA et al., 2005).

3.5.1.2 Fungos Os fungos so microrganismos que constituem um grupo diversificado e abundante na natureza. So caracterizados por estruturas unicelulares ou multicelulares e classificados de acordo com sua morfologia em filamentosos, leveduras e dimrficos (PRADO, 2007). So seres eucariticos, isto , apresentam uma membrana nuclear que envolve os cromossomos e o nuclolo. So classificados como seres heterotrficos por no possurem pigmentos fotossintticos. (SIDRIM & ROCHA, 2004). Os fungos causam doenas em animais e vegetais, destroem a madeira e materiais sintticos e compartilham com as bactrias um importante papel na decomposio de restos orgnicos do solo (MENDES-GIANINNI & MELHEM, 1996). As infeces causadas por fungos, denominadas micoses, parecem ser acidentais, ou seja, sua grande maioria no contagiosa, mas adquirida por exposio do indivduo a uma fonte natural de ocorrncia do fungo. Existem na natureza mais de 250 mil espcies fngicas conhecidas atualmente. Dentre elas, apenas trezentas aproximadamente foram identificadas, em processos patolgicos em seres humanos ou animais (SIDRIM & ROCHA, 2004).

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Candida albicans O gnero Candida composto por fungos leveduriformes hialinos, que apresentam duas formas de reproduo: assexuada ou anamorfa, atravs da formao de blastocondios, pseudo-hifas e, ocasionalmente, hifas verdadeiras e sexuadas ou teleomorfa.

Taxonomicamente so enquadradas dentro do grupo dos ascomicetos, visto que, a reproduo sexuada caracterizada pela produo de ascos (SIDRIM & ROCHA, 2004). Para a identificao das espcies do gnero Candida muitos aspectos so levados em considerao, como morfologia, capacidade de formar tubo germinativo, assimilao de carboidratos, assimilao de nitrognio e fermentao de carboidratos (SIDRIM & ROCHA, 2004). As leveduras do gnero Candida so microrganismos integrantes da microbiota bucal do homem desde o nascimento (BIRMAN, 1998). Esta condio microbiolgica propicia comumente uma relao de equilbrio entre parasita-hospedeiro, diante da manuteno da integridade das barreiras teciduais, relao harmnica da microbiota e funcionamento adequado do sistema imunolgico humano, havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme, permanncia equilibrada da capacidade de aderncia e da produo de enzimas e toxinas (CALDERONE & FONZI, 2001).

3.5.2 Antimicrobiano 3.5.2.1 Mecanismo de Ao

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Mesmo com a ao diversificada dos antimicrobianos, a exposio excessiva aos frmacos por longos perodos contriburam para o desenvolvimento de diversos mecanismos de resistncias bacterianas (WRIGHT, 2005). Os agentes antimicrobianos so classificados de acordo com a estrutura qumica, mecanismo de ao, espectro de ao, entre outros (RANG et al., 2007). De acordo com o mecanismo de ao, os antimicrobianos podem ser classificados em: antibacterianos e antifngicos.

3.5.2.1.1 Antibiticos Os antibiticos so produtos de enorme importncia no apenas na rea de sade, como tambm na economia. O crescente problema em relao ao surgimento de espcies bacterianas resistentes aos diferentes antibiticos, talvez seja o principal desafio dos pesquisadores, visto que a multirresistncia vem se tornando diariamente mais disseminada nas populaes microbianas, sejam patognicas ou no. Vrios so os possveis alvos para os agentes antimicrobianos. O conhecimento dos mecanismos de ao destes agentes (Figura 05) permite entender sua natureza e o grau de toxicidade seletiva de cada droga (TORTORA et al., 2005).

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Figura 05- Mecanismo de ao dos antibiticos. FONTE: Adaptado de Madigan et al., Brock Biology of Microorganisms, 2004

Inibidores de Sntese de Parede celular:

Antibiticos de parede celular atuam produzindo uma parede celular bacteriana com defeitos estruturais e atuam sobre o processo de replicao celular. Para a inibio de sntese de parede celular so utilizados penicilinas, cefalosporinas, bacitracinas e vancomicina (TORTORA et al., 2005).

Inibidores de Sntese de Protenas: A sntese protica sofre interferncias durante os seguintes processos: na formao do RNA-mensageiro, na fixao do RNA-mensageiro ao ribossoma, por alteraes no ribossoma e na fixao do RNA-transportador ao ribossoma, ou seja, inibio da traduo e transcrio

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do material gentico. Entre os antibiticos que interferem a sntese protica esto o cloranfenicol, a eritromicina, estreptomicina e as tetraciclinas (TORTORA et al., 2005).

Inibidores da Sntese de cidos Nucleicos: Alguns antibiticos interferem nos processos de replicao e transcrio do DNA dos microrganismos. Algumas drogas com esse modo de ao apresentam uso limitado devido interao com o DNA e o RNA dos mamferos. Outras so mais utilizadas na quimioterapia porque tm maior grau de toxicidade seletiva. Para a inibio da sntese de cidos nuclicos so utilizadas na quimioterapia rifampicinas e quinolonas por apresentarem maior grau de toxicidade seletiva (TORTORA et al., 2005).

Inibidores da Membrana Citoplasmtica: Quando as molculas dos antibiticos se intercalam na membrana provocam sua desorganizao alterando sua permeabilidade seletiva com a sada de elementos vitais da clula como fosfatos, ons, purinas, e cido nuclicos ou a entrada de substncias nocivas ao metabolismo bacteriano, resultando em morte celular (RANG et al., 2007; TRABULSI et al., 2004). Os frmacos utilizados podem ser classificados em: - Frmacos que desorganizam a membrana celular citoplasmtica: tirociclina, polimixinas. - Frmacos que produzem poros na membrana citoplasmtica: gramicidina.

Inibidores do Metabolismo dos Folatos: Alguns agentes que interferem no metabolismo de folato na clula bacteriana por competitividade, bloqueando a biossntese de tetrahidrofolato, o qual atua como carregador de

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fragmentos do carbono-um e necessrio para o trmino da sntese do DNA, RNA, e protenas da parede celular (TORTORA et al., 2005). - Inibidor da sntese do cido pterico: sulfonamidas - Inibidores da dihidrofolato redutase: trimetoprim

3.5.2.1.2 Antifngicos

Agentes antifngicos so frmacos empregados contra infeces causadas por fungos, podendo ser classificados como fungistticos ou fungicidas. Agentes fungitxicos tm ampla aplicao na clnica humana e veterinria, podendo ser utilizados no tratamento de plantas, sementes, solos, pinturas, conservadores de produtos industriais e etc (NOGUEIRA et al., 2009). Com os triazlicos de segunda gerao surgem uma nova perspectiva para pacientes portadores de infeces fngicas graves. As drogas mais antigas, muito txicas, verdadeiras facas de dois gumes, como a anfotericina B, tendem a ser substitudas gradativamente por novas substncias que apresentam menos reaes adversas e espectro antimictico expandido (Figura 06). A grande vantagem dos triazlicos de 2 gerao a atuao no ergosterol, alvo seletivo da membrana citoplasmtica da clula fngica, com menor interferncia em componentes celulares humanos, como acontecia com as drogas mais antigas (NOGUEIRA et al., 2009).

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Figura 06- Mecanismo de ao dos antifngicos de 1a gerao. FONTE: Adaptado de Madigan et al., Brock Biology of Microorganisms, 2003

Com o aumento de resistncia microbiana aos medicamentos normalmente indicados para tratamento e controle de diversas infeces, medidas defensivas a serem tomadas incluem o controle do uso de antimicrobianos, pesquisas que ajudem a compreender os mecanismos de resistncia microbiana (NASCIMENTO et al., 2000), e a busca por novas drogas com ao antimicrobiana. Produtos naturais de origem vegetal tm sido investigados por diversos pesquisadores em todo mundo, como uma estratgia para obteno de novos compostos com propriedades teraputicas, drogas sintticas ou naturais que possam auxiliar ou controlar a disseminao desses microrganismos (SCHAECHTER et al., 2002).

3.6 MTODOS DE ATIVIDADE ANTIMICROBIANA Vrias pesquisas vm sendo desenvolvidas e direcionadas no descobrimento de novos agentes antimicrobianos provenientes de extratos de plantas e outros produtos naturais, para

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serem aplicados em produtos farmacuticos e cosmticos. Existem vrios mtodos para avaliar a atividade antibacteriana e antifngica dos extratos e leos vegetais. Os mais conhecidos incluem mtodo de difuso em gar e mtodo de diluio em caldo: macrodiluio e microdiluio (OSTROSKY et al., 2008).

3.6.1 Mtodo de Difuso em gar

O teste de difuso em gar, tambm chamado de difuso em placas, um mtodo fsico, no qual um microrganismo desafiado contra uma substncia biologicamente ativa em meio de cultura slido e relaciona o tamanho da zona de inibio de crescimento do microrganismo desafiado com a concentrao da substncia ensaiada (PINTO et al., 2003). A avaliao comparativa frente a um padro biolgico de referncia (controle positivo) e a zona ou o halo de inibio de crescimento medida partindo-se da circunferncia do disco ou poo, at a margem onde h crescimento de microrganismos. De acordo com a dimenso do halo os microrganismos podem ser classificados como: (BARRY & THORNSBERRY, 1991). Sensveis: o dimetro da zona de inibio maior ou no mais do que trs mm menos que o controle positivo; Moderadamente sensveis: halo maior que dois mm, porm, menor que o controle positivo de mais de trs mm; Resistentes: dimetro igual ou menor que dois mm. No controle positivo empregado um quimioterpico padro, e como controle negativo o solvente utilizado para a dissoluo dos extratos e leos (KARAMAN et al., 2003).

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As placas devero ser incubadas em temperaturas que variam de 35-37 C para bactrias durante 24 a 48 horas e para fungos de 25 a 27 C por 48 a 72 horas (AYRES et al., 2008). As tcnicas de aplicao da substncia antimicrobiana no mtodo de difuso so por meio de disco, cilindros de ao inoxidvel ou vidro e perfurao em gar (PINTO et al., 2003).

3.6.2 Mtodo de Diluio em Caldo

O mtodo de diluio em caldo considera a relao entre a proporo de crescimento do microrganismo desafiado no meio lquido e a concentrao da substncia ensaiada. A avaliao comparada frente a um padro biolgico de referncia. Entende-se por proporo a densidade da turbidez provocada pelo crescimento microbiano (PINTO et al., 2003). O mtodo fornece resultados quantitativos e no influenciado pela velocidade de crescimento dos microrganismos. Sua desvantagem a dificuldade na deteco de contaminao no caso de teste de materiais clnicos. Como controle positivo, utiliza-se o caldo com o quimioterpico padro com a suspenso padronizada de microrganismo em teste, e como controle negativo o meio de cultura com o solvente usado para dissoluo da amostra e a suspenso microbiana. Duas metodologias podem ser empregadas: macro e microdiluio. (SAHM & WASHINGTON II, 1991).

Macrodiluio

A macrodiluio envolve testes em tubos de ensaio, com volume de meio de cultura variando de 1 e 10 mL. Por ser laborioso, consumir muito tempo, requerer muito espao no

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laboratrio e gerar grande quantidade de resduos usado pequeno nmero de rplicas (SAHM & WASHINGTON II, 1991; ZGODA & PORTER, 2001).

Microdiluio

A microdiluio utiliza micro placas com 96 poos, com volume de meio de cultura entre 0,1 e 0,2 mL. O mtodo de micro placas barato, tem reprodutibilidade, 30 vezes mais sensvel que outros mtodos usados na literatura, requerem pequena quantidade de amostra, pode ser usado para um grande nmero das mesmas, deixa um registro permanente (OSTROSKY et al., 2008).

3.7 FATORES QUE INTERFEREM NOS MTODOS

De acordo Ostrosky et al. (2008), diversos so os fatores que afetam a suscetibilidade do mtodo de difuso e de diluio, sendo necessrio ter um conhecimento das condies experimentais e padronizao rigorosa na execuo do teste. Os fatores importantes a serem considerados so: Meio de cultura, pH, disponibilidade de oxignio, inoculo e condies de incubao.

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4 METODOLOGIA

4.1 REA DE ESTUDO A Reserva de Desenvolvimento Sustentvel do Tup (RDS Tup) foi criada em 2005, atravs do decreto n 8044, est localizada a margem esquerda do rio Negro aproximadamente 25 km de Manaus, possuindo uma rea de 11.973 ha (SCUDELLER, et al., 2005). Na RDS Tup esto inseridas seis comunidades, das quais o Projeto Biotup atua em duas: So Joo do Tup e Julio. Este projeto teve como objetivo o estudo do meio fsico, da diversidade biolgica e sociocultural da RDS Tup-AM. (SCUDELLER, et al., 2005) (Figura 07).

Figura 07- ( ) Trilha; ( )) Permetro; ( ) Comunidades. Limites e localizao das comunidades existentes na RDS Tup (1. Agrovila, 4. Julio, 6. Livramento, 7. So Joo do Tup, 8. Central, 9. Tatulndia) e no seu entorno (2. So Sebastio, 3. Ebenezr, 5. Ftima, 10. Arara, 11. Bela Vista). A comunidade do Julio (4) foidefinida como local de amostragem. FONTE: Scudeller, 2005

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4.2 COLETA DO MATERIAL BOTNICO

Os frutos de Mauritia flexuosa L.f. foram adquiridos na RDS do Tup, na Comunidade do Julio, (03 0153 S e 60 2054W), nos meses de setembro e outubro de 2010. Em cada coleta foi retirado um cacho inteiro de buriti e a pesagem realizada em campo. Na Figura 08 possvel visualizar algumas etapas da coleta.

Figura 08- Etapas da coleta do buriti na Comunidade do Julio, localizada na RDS do Tup. 1- A caminho da reserva do Tup; 2- Escolha da palmeira e retirada do cacho de buriti; 3-Transferncia do cacho para o bote; 4Transporte do cacho para o local de pesagem e embalagem. FONTE: Ceclia Carvalho

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Atravs do mtodo de comparao a exsicata do material botnico foi identificada pela MSc. Ieda Leo do Amaral, botnica do Instituto de Pesquisas da Amaznia INPA, e o material testemunho encontra-se depositado na coleo de referncia do Biotup, no laboratrio de Botnica/UFAM (Figura 09).

Figura 09- Exsicata de Mauritia flexuosa L.f., proveniente da coleta feita na RDS Tup, depositada no Laboratrio de Botnica/UFAM. a) folha jovem tipo costapalmada; b) flores masculinas; c) inflorescncia em plantas masculinas; d) desenho do fruto inteiro do buriti. FONTE: Ceclia Carvalho

Os frutos de buriti foram transportados em sacos de polietileno preto at o Laboratrio de Qumica Analtica - CPPN INPA para a execuo da parte experimental.

4.3 PROCESSO DE HIGIENIZAO A metodologia de higienizao dos frutos usada para separao da polpa e extrao do leo de buriti foi modificada com base em estudos realizados por Yuyama et al. (2008). Os

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frutos selecionados e pesados foram submetidos a um processo de higienizao com gua e detergente, em seguida colocados em uma soluo de gua e hipoclorito a uma concentrao de 400 ppm/L por 30 minutos, em seguida foram lavados e colocados em baldes com gua destilada at o total amolecimento por aproximadamente 24 horas.

4.4 PROCESSAMENTO DA POLPA DE BURITI

Aps a etapa de higienizao dos frutos de buriti, atravs de processo manual com uma faca de ao inoxidvel, a polpa foi separada das cascas e sementes e todas as fraes pesadas. A polpa da primeira coleta (3399 g) foi acondicionada em recipiente plstico e colocada em refrigerao de 2 a 8C. A polpa da segunda coleta (3357 g) foi acondicionada em sacos de polietileno preto protegida da luz e oxignio atmosfrico, que depois de hermeticamente fechados foram estocados em freezer comercial a uma temperatura de -20C. A polpa obtida na primeira coleta foi dividida em trs partes com pesos iguais (1133 g) cada. Duas partes foram colocadas em estufa de ventilao em temperatura de 50C por um perodo determinado de 48 horas, tanto para as polpas a serem extradas por prensagem hidrulica, como as por solvente. A outra parte foi mantida mida para o processo artesanal. Com material da segunda coleta, antes do processo de extrao pelos trs mtodos, os sacos de polpa congelados foram retirados com antecedncia para o degelo e homogeneizao. Em seguida a mesma foi dividida em trs partes (1119 g) cada. Duas partes foram colocadas em estufa de ventilao a uma temperatura 40C, sendo o tempo de secagem determinado somente quando a polpa obteve o peso constante, o que representou cerca de 20 horas na estufa. Para o resultado das mdias dos frutos e das partes constituintes do buriti utilizou-se o seguinte clculo:

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Mdia: (x+y)/2 Onde: x= dados da primeira coleta y= dados da segunda coleta

4.5 MTODOS DE EXTRAO DO LEO DE Mauritia flexuosa L.f.

Os leos da polpa e sementes de frutos oleaginosos podem ser extrados de diversas formas. Em todos os casos, busca-se maximizar a produo e obter leo bruto de boa qualidade. As extraes dos leos de buriti foram feitas atravs de trs mtodos diferentes: extrao artesanal, extrao por prensagem hidrulica e extrao por solvente. Para o resultado de comparao dos rendimentos entre os mtodos de extrao do leo do buriti, primeiramente calculou-se as mdias da polpa seca, torta e leos obtidas nas duas coletas atravs da frmula:

Mdia= (a+b)/2 Onde: a= dados da primeira coleta b= dados da segunda coleta

Com o resultado das mdias avaliou-se o rendimento de cada extrao, expressos em gramas e porcentagem, usando os seguintes clculos. Os mesmos no foram expressos em mL em razo das perdas (cilindro, frasco, vidraria) que ocorrem durante o processo de extrao.

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Clculo do rendimento: m2-m3= rendimento de leo em gramas (g) (m2-m3)/m1 = rendimento em porcentagem (%)

Onde: m1= polpa mida m2= polpa seca m3= torta

4.5.1 Extrao Artesanal

A metodologia usada para extrao do leo de buriti pelo mtodo artesanal foi modificada com base em estudos realizados por Vale (2008), na comunidade So Joo do Jaburu, Gurup no Par. Adicionou-se a um becker de 1000 mL a polpa mida (1126 g) e 1L de gua destilada, levou-se a uma chapa aquecedora em temperaturas que variaram de 50 a 900C. O leo sobrenadante foi extrado durante aproximadamente 24 horas intercaladas (Figura 10).

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Figura 10- Processo de extrao do leo da polpa mida do fruto de buriti pelo mtodo artesanal. FONTE: Ceclia Carvalho

A quantidade de gua foi sendo acrescentada durante o processo de extrao. Em seguida o leo extrado foi centrifugado em 16500 rpm, durante 15 minutos para a separao das fases lquida (gua e leo) e slida (torta). Com ajuda de uma pipeta automtica de 1000l o leo foi separado, acondicionado em frasco mbar hermeticamente fechado, pesado e armazenando sob refrigerao (2 a 8C) em geladeira comercial. A torta foi pesada e armazenada em temperatura ambiente.

4.5.2 Extrao por Prensagem Hidrulica

Atravs do mtodo de extrao mecnica por prensagem hidrulica descontnua a polpa desidratada foi pesada e colocada em um cilindro de ao inox e levado a prensa sob uma presso de 10 toneladas, durante aproximadamente 02 horas (SARTORI, 2007). O leo bruto retirado foi pesado e armazenado em frasco mbar hermeticamente fechado, sob refrigerao

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(2 a 8C), em geladeira comercial. A torta resultante da extrao foi pesada e armazenada em temperatura ambiente (Figura 11).

Figura 11- Extrao do leo da polpa seca do fruto de buriti por prensagem hidrulica. 1- peas de inox do cilindro de extrao; 2- Extrao do leo com a polpa colocada no cilindro sob presso de 10 toneladas; 3 - leo de buriti sendo extrado em frasco volumtrico ao abrigo da luz e do ar; 4- leo de buriti armazenado em frasco mbar hermeticamente fechado. 5- torta resultante da polpa de buriti prensada. FONTE: Ceclia Carvalho

4.5.3 Extrao por Solvente A extrao do leo com solvente foi feita atravs da metodologia modificada com base em estudos feito por Silveira et al. (2005) utilizando como solvente o Hexano P.A. A polpa desidratada foi colocada em cartuchos papel de filtro e levada ao extrator Soxhlet acoplado a uma manta aquecedora (Figura 12).

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Figura 12- Processo de extrao do leo de buriti por solvente ( hexano) utilizando o aparelho o extrator Soxhlet.
FONTE: Ceclia Carvalho

Em seguida foi adicionado o solvente na parte superior do aparelho para entrar em contato com o material contendo o leo a ser extrado. O solvente liberado da extrao, ao atingir seu ponto de ebulio, entra em contato com a parede fria do condensador acoplado, fica lquido e retorna para o material a extrair. Este processo ocorre at a polpa perder sua colorao, levando aproximadamente 12 horas descontnuas. O sistema foi aquecido a 70C, temperatura de ebulio do solvente. O material extrado, coletado no balo, foi levado ao evaporador rotativo para separao do solvente por evaporao. O leo foi pesado, armazenado em frasco mbar, hermeticamente fechado e colocado sob refrigerao (2 a 8C) em geladeira comercial. A torta resultante do processo de extrao do leo foi pesada e armazenada em temperatura ambiente. Para melhor entendimento a Figura 14 apresenta o fluxograma proposto para os experimentos de extrao, indicando as etapas a serem seguidas.

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Figura 13- Fluxograma de todas as etapas do processo de extrao dos leos da polpa dos frutos de buriti

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4.6 AVALIAO DOS CONSTITUINTES DA POLPA A avaliao dos constituintes da polpa (gua, biomassa e leo) foi feita utilizando-se as mdias das polpas mida, seca e extrada, encontradas anteriormente, fazendo-se o seguinte clculo:

Umidade= (m1-m2/m1) x 100 (%) leo= (m2-m3/m1) x 100 (%) (pelo mtodo de extrao com solvente) Biomassa= (m3/m1) x 100 (%) (peso da torta proveniente da extrao) Onde: m1= polpa mida m2= polpa seca m3= torta (polpa ps-prensagem)

4.7 CARACTERIZAO FSICO-QUMICA DOS LEOS DE BURITI

As anlises fsico-qumicas das trs amostras do leo de buriti extradas pelos trs mtodos (artesanal prensagem e solvente) foram realizadas no Laboratrio da Central Analtica do Centro de Biotecnologia da Amaznia (CBA), localizado no Distrito Industrial em Manaus AM. As propriedades fsico-qumicas analisadas foram ndice de acidez, ndice de refrao, ndice de perxido, ndice de saponificao. As metodologias oficiais utilizadas foram Official Methods of Analysis - A.O.A.C., (2005) e Normas do Instituto Adolfo Lutz (1985). Todos os testes foram realizados em triplicatas.

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4.7.1 ndice de acidez O ndice de acidez foi determinado seguindo as normas analticas do Instituto Adolfo Lutz (1985), que determinou a quantidade de cidos graxos livres presentes nas amostras de leo durante o processo de extrao lquido-lquido. O mtodo de titulao envolvido baseouse em pesar 2 g de leo de buriti e adicionar a 25 mL de uma soluo de ter e lcool etlico (2:1), em constante agitao at total dissoluo do leo. Adicionou-se duas gotas do indicador fenolftalena. Em seguida titulou-se com uma soluo de hidrxido de sdio 0,1N. Atravs do seguinte clculo aps a titulao foi possvel determinar o ndice de acidez em cido olico do leo de buriti: I.ac.= V f 100 0,0282 P Onde: V= n de mL de soluo de hidrxido de sdio 0,1N gasto na titulao f= fator de correo da soluo de hidrxido de sdio P= n de gramas da amostra

4.7.2 ndice de refrao O ndice de refrao caracterstico para cada tipo de leo e est relacionado com o grau de insaturao das cadeias, compostos de oxidao e tratamento trmico (Moretto & Fett, 1998). O ndice de refrao foi determinado em refratmetro da Abb (Marca Optronics), temperatura de 20C, utilizando-se 10 microlitros de cada amostra (AOAC, 2005).

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4.7.3 ndice de perxido Indica o grau de oxidao do leo, determinando todas as substncias que oxidam o iodeto de potssio, devido a sua forte ao oxidante (Zambiazi, 2007). A anlise foi realizada utilizando-se a metodologia da A.O.A.C., (2005). Foi pesado 5g de cada amostra, acrescentado 30 mL da soluo de cido actico: clorofrmio (3:2) e adicionado 0,5 ml de soluo saturada de KI e 30 ml de gua. As amostras foram tituladas com a soluo de tiossulfato de sdio a 1M at que a cor amarela tenha quase desaparecido. Foram acrescentados 0,5 mL de soluo indicadora de amido e a titulao continuou at o desaparecimento da colorao azul. O ndice de perxido foi obtido pela seguinte frmula:

I.P.= (A-B) x M x 1000/P

Onde: A: mL de tiossulfato de sdio 1M gasto na titulao da amostra B: mL de tiossulfato de sdio 1M gasto na titulao do branco P: nmero de gramas da amostra M: molaridade da soluo de tiossulfato de sdio

4.7.4 ndice de saponificao

Foram utilizados 5g de cada amostra em bales volumtricos e acrescentou-se 50 mL de soluo de KOH (4%). Os bales volumtricos contendo o material foram conectados a condensadores e aquecidos em banho-maria (Marca GFL) at a completa saponificao do leo. Aps a retirada das amostras do sistema de aquecimento, foi utilizado como soluo de

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titulao HCL 0,5 a M, usando fenolftalena como indicador. O ndice de saponificao foi obtido pela seguinte frmula: I.S.= 28,05 x (B - A) /P

Onde: B: mL de HCL a 0,5 M gasto na titulao do branco A: mL de HCL a 0,5 M gasto na titulao da amostra P: nmero de gramas da amostra

4.8 ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DOS LEOS DE BURITI

A atividade antimicrobiana foi realizada no Instituto Lenidas e Maria Deane Fiocruz da Amaznia, nos Laboratrios de Micologia e Bacteriologia. Foram selecionadas cepas da Coleo de Bactrias da Amaznia (CBAM) de Staphylococcus aureus CBAM 324, Pseudomonas aeruginosa CBAM 232, Escherichia coli CBAM 02, Klebsiella pneumoniae CBAM 382 e da Coleo de Fungos da Amaznia (CFAM) de Candida albicans CFAM 1285. Para a avaliao do teste suscetibilidade das trs amostras de leos extrados pelos mtodos artesanal, prensagem hidrulica e por solvente, foram empregadas duas metodologias, difuso em placa pela tcnica de spread-plate, com os leos puros e diludos (HU et al. 2004) e difuso em caldo (microdiluio) baseando-se na metodologia modificada de Silveira et al. (2005). As amostras foram diludas em Tween 80 a 5%. O meio de cultura utilizado para bactrias foi o gar Meller-Hinton e para levedura o gar Sabouraud. Como controle positivo para bactrias Clorafenicol a 0,05g/10 mL de DMSO e para levedura

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Itraconazol 0,05g/10 mL de DMSO, no controle negativo Tween 80. Os experimentos foram realizados em triplicatas e em cmara de segurana biolgica, sob condies asspticas.

4.8.1 Difuso em placas Preparao dos meios de cultura

gar Mueller-Hinton (1000 mL): Meller-Hinton..........................21 gramas gar....21 gramas gua destilada.....q.s.p

Agar Sabouraud (500 mL): Dextrose.......................................15gramas gar.............................................15 gramas Peptona.......................................15 gramas gua destilada............................q.s.p

As substncias foram pesadas e colocadas uma por vez em um erlermayer com gua destilada at total solubilizao, em seguida foram lacradas e levadas para autoclave por 15 minutos a 121C.

Atividade antimicrobiana

Em placas de Petri contendo meios de cultura especficos para cada microrganismo padro foram feitos repiques. Estas foram incubadas por 24 horas para as bactrias e 48 horas

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para a levedura, ambos a 37 C. Aps a confirmao do crescimento microbiano, retiraram-se alquotas de cada placa, que foram transferidas para tubos de ensaio com 10 mL de gua destilada, at a formao de uma concentrao de 108 UFC/mL de acordo com a escala de turbidez a 0,5 de Macfarland. Com ajuda de uma pipeta automtica foram inoculados 25 l das pr-culturas em placas de Petri contendo meios de cultura esterilizados e especficos para cada microrganismo e utilizando-se swabs estas alquotas foram espalhadas no meio. Aps a secagem, fez-se quatro pocinhos (Figura 14) com aproximadamente oito mm de dimetro e dentro de trs colou-se 150 L das amostras puras e no outro colocou-se 150 L do controle positivo.

Figura 14- Desenho esquemtico da placa perfurada com quatro pocinhos de oito mm, em triplicata. FONTE: Ceclia Carvalho

A mesma metodologia foi adotada para as amostras diludas em Tween 80 a 5%. Utilizou-se 150l de cada amostra. Como controle positivo usou-se 150l de Clorafenicol e Itraconazol e no controle negativo 150l Tween 80. As placas foram incubadas em estufa bacteriolgica a 37 C por 24 horas para bactrias e 48 horas para levedura. Aps este perodo

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as placas foram analisadas, as que apareceram halo de inibio, tiveram seus dimetros medidos e foram considerados sensveis a ao de microrganismos (Figura 15).

Figura 15- Esquema da tcnica de difuso em placa das amostras A, B e C, do leo de buriti. 1- Repique das bactrias e levedura; 2- Placas com o crescimento dos microrganismos; 3- Preparao das pr-culturas; 4Comparao com a escala de 0,5 Macfarland; 5,6 Alquota e inoculao da pr-cultura nas placas; 7- Inoculao com o swab; 8- Placas inoculadas esperando secagem para fazer os pocinhos; 9,10- Amostras sendo colocadas; 11- Controle positivo; 12- Panorama das placas na incubadora. FONTE: Ceclia Carvalho

4.8.2 Diluio em Caldo (Microdiluio) Preparao dos meios de cultura Caldo Sabouraud (50 mL):

Dextrose..........................1,5 gramas Peptona...........................0,5 gramas gua Destilada...............q.s.p.

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Caldo Mueller-Hinton (200 mL): Mueller-Hinton..4,2 gramas gua Destilada......q.s.p.

As substncias foram pesadas e colocadas uma por vez em um erlermayer com gua destilada at total solubilizao, em seguida foram lacradas e levadas para autoclave por 15 minutos a 121C.

Atividade Antimicrobiana

Utilizando 10 mL de soluo salina, cepas dos microrganismos de referncia foram transferidas para os tubos de ensaio at a formao da concentrao de 108 UFC/mL de acordo com a escala 0,5 de turbidez de Macfarland. As amostras de leo foram diludas com Tween 80 a 5%. Cada poo da placa Sensititre Microtiter foi preenchido com 100 l das amostras diludas (Twenn 80 a 5%) e do meio de cultura, 25 l da pr-cultura e do revelador cloreto trifeniltetrazlio (TCC) a 1%, que permite a observao do crescimento bacteriano atravs das cores, se a cor da amostra permanecer a mesma significa ausncia de crescimento e se apresentar cor vermelha presena. Como controle positivo utilizou-se 100 l de Clorafenicol e como controle negativo 100 l de Tween 80. As placas foram seladas com parafilme e incubadas a 37 C. Aps este perodo as leituras foram feitas em 12 e 24 horas. Os poos da placa que apresentaram ausncia de mudana de cor foram interpretados como positivos frente a ao dos microrganismo testes (Figura 16).

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Figura 16- Etapas da atividade antimicrobiana da metodologia de microdiluio. 1- Repique das bactrias; 2Preparao da pr-cultura; 3- Comparao com a escala 0,5 Macfarland; 4- Pr-culturas prontas; 5-Colocando as amostras; 6- Placa de mltiplos poos; 7- Colocando a pr-cultura; 8- Colocando o revelador; 9- Visualizao da placa pronta; 10- Placa na incubadora.
FONTE: Ceclia Carvalho

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5. RESULTADOS E DISCUSSES
5.1 COLETA E SEPARAO DOS FRUTOS DE BURITI.

Foram realizadas duas coletas de frutos de buriti e os valores obtidos podem ser visualizados na Tabela 05, que apresenta a mdia e o desvio padro dos frutos de buriti e de suas partes constituintes.
Tabela 05: Valores das mdias e desvio padro e percentual, em massa, dos frutos de buriti e suas partes provenientes dos processos das duas coletas. D.P.= desvio padro

Com base nestes dados pode-se perceber que no houve grandes variaes entre os frutos e suas fraes (polpas, sementes e cascas) nas duas coletas. O maior percentual 54,40% foram para as sementes, 23,58% para a polpa e 22,03% para as cascas. Acredita-se que o alto valor atribudo ao peso das sementes deve-se a estrutura das mesmas e por terem sido pesadas junto com o endocarpo, endosperma e fibras. Apesar de os frutos das coletas terem sidos obtidos da mesma palmeira no apresentaram diferenas aos resultados apresentados por Barbosa et al. (2010), que avaliaram a variabilidade biomtrica entre

diferentes palmeiras de buriti nas savanas do estado de Roraima cujo valores foram de 22,07% para as cascas, 24,25% para a polpa, 21,03% para fibra e 32,65% semente (endosperma/endocarpo).

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O mesmo tambm pode ser constatado por Becker et al. (2006) em estudo sobre os frutos de buriti, onde os resultados para as cascas foram de 21,57%, para a polpa de 24%, sementes (endosperma/endocarpo) 45,33 % e fibra 8,48%. E por Carvalho & Mller (2005), cuja pesquisa apresentou um percentual de 22,2% para cascas, 25% para polpa, 37,1 para a semente e 15,7% para outras estruturas, sendo o fruto do buriti classificado dentro de um grupo de espcies frutferas mais consumidas na Amaznia, que apresentam um baixo rendimento de polpa (21% a 40%). Apesar dos estudos Barbosa et al. (2010) indicarem uma variabilidade morfomtrica entre os frutos de uma mesma localidade, os resultados apresentados nesta pesquisa apresentam-se dentro dos limites mtricos comparveis a outras regies da Amaznia. No entanto, esta variabilidade serve para refletir nos atributos de quantidade e qualidade das partes de cada fruto de buriti.

5.2 AVALIAO DOS CONSTITUINTES DA POLPA De todas estas partes do fruto de buriti, a polpa, rica em carotenides, fibras, vitaminas, clcio e outros constituintes, alm de conter tambm leo e gua. Na Figura 17 esto expressos os valores dos seus constituintes (leo, gua e biomassa), utilizando-se o mtodo por solvente. Observa-se que o maior percentual 49, 20% foi para a umidade, 27, 25% para biomassa e 23, 55% para o leo.

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Figura 17- Determinao do percentual, em massa, dos constituintes da polpa dos frutos de buriti. Umidade 49,20%, biomassa 27,25% e leo 23,55%, obtido atravs do mtodo com solvente, utilizando-se o hexano.

O rendimento de leo encontrado nesta pesquisa pode ser considerado baixo quando comparado a outros resultados como aos mostrados por Serruya et al., (1980), de 35,70% e FAO (1986) de 31%. No entanto, este rendimento s considerado baixo quando apenas o subproduto (leo) aproveitado dos frutos. Quando se considera que os demais subprodutos como a torta, cascas, sementes tambm podem ser aproveitados, a utilizao desta espcie torna-se bastante interessante, pois se agregam valores e viabiliza-se sua utilizao em diversas outras reas como nutrio, agricultura, cosmetologia e farmacologia.

5.3 EXTRAO E RENDIMENTO DOS LEOS DE BURITI

A comparao entre os trs mtodos de extrao dos leos da polpa dos frutos de buriti apresentada na Tabela 06.

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Tabela 06- Mdias, desvio padro e percentual, em massa, das polpas secas, tortas e leos obtidos durante as duas coletas.

De acordo com os resultados expostos, a extrao com solvente foi a que apresentou maior rendimento (23,55 %), seguido pela extrao por prensagem hidrulica (21,50%) e mtodo artesanal (4,01%) de leo extrado. A metodologia por solvente apresentou o maior rendimento, entretanto um processo que produz resduos qumicos, utiliza energia e gera aquecimento tanto no leo quanto na torta. No mtodo artesanal, o produto obtido apresentou-se opaco, com alta umidade, baixo rendimento e para evitar o processo de oxidao em poucos dias, o mesmo teve que ser centrifugado para retirar a umidade. Mesmo assim, este mtodo, muito utilizado na regio Amaznica pelos moradores de comunidades ribeirinhas e rurais. O uso justificado devido

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aos costumes tradicionais que passam de pai para filho, as baixas condies de renda e a falta de projetos juntos a estas comunidades visando implementao de tcnicas de extrao que estejam de acordo com a realidade local e que seja de fcil execuo. O processo por prensagem em relao aos demais mostrou-se uma tima alternativa a ser empregada nestas localidades. um procedimento que no utiliza energia eltrica, solventes e no gera aquecimento nem no leo e na torta, sendo necessrio apenas uma prensa e um cilindro extrator. Quando todas as etapas deste mtodo so respeitadas (coleta, higienizao, conservao e principalmente a secagem) a polpa apresenta as condies ideais quanto a umidade e viscosidade, para que a fora exercida (10 toneladas) no momento da extrao seja o suficiente para extrair somente o leo, em quantidades satisfatrias e bem prximas a obtida quando usa-se solvente. Em relatos feitos por Ungaro, (2001), o leo quando extrado a frio em mini-prensas tem diversas aplicaes, desde uso domstico, na propriedade rural e mercados locais, produo de biodiesel, produtos farmacuticos e cosmticos. Alm disto, apresenta uma torta gorda quando comparada com a torta magra obtida pelo mtodo com solvente. De acordo com Cmara & Martins (2001) a torta ou farelos, resultantes da extrao de leo, possuem elevado valor comercial, podendo ser destinado alimentao animal ou como adubo orgnico em culturas perenes. Alm disso, avaliao dos teores de protena, lipdeos e carboidratos destas tortas, gera a possibilidade da utilizao das mesmas na alimentao humana.

5.4 CARACTERIZAO FSICO-QUMICA DOS LEOS DE BURITI

O Quadro 03 apresenta os resultados dos parmetros fsico-qumicos dos leos de buriti obtidos atravs de trs mtodos (artesanal, prensagem hidrulica e solvente),

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comparando as duas coletas, a primeira com temperatura de armazenamento da polpa mida a 2-8C e a segunda com temperatura de -20C.

Quadro 03- Anlises fsico-qumicas do leo da polpa de buriti referentes s coletas na RDS Tup, a partir de trs mtodos de extrao artesanal; prensagem hidrulica e por solvente, utilizando temperaturas de armazenamento de -20 C e 2 a 8C. I. Ac.= ndice de acidez, I. Ac. Olico = ndice de cido Olico, I. R.= ndice de Refrao, I. S.= ndice de Saponificao e I. P.= ndice de Perxido. n.a = ndices no analisados *Valores de referncia RDC n 270 e Normas do Codex Alimentarius FAO/OMS.

Desta forma, pode-se observar que em temperatura de armazenamento da polpa mida a -20C todos os valores dos leos adquiridos atravs dos trs mtodos apresentam-se dentro dos limites estabelecidos pelas legislaes vigentes. De acordo com ANVISA (2005) os parmetros estipulados pela Resoluo RDC n 270, o ndice de acidez (I.AC.) e o ndice de perxido (I.P.) destes leos no devem ultrapassar o limite mximo de 4,0 mgNaOH/g e 15 meq/Kg, respectivamente. A resoluo ressalta ainda, que a identidade de leos vegetais, incluindo azeites de oliva, e de gorduras vegetais deve atender tambm aos requisitos de composio determinados

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em Normas do Codex Alimentarius - FAO/OMS, que estabelece parmetros de I.Ac. de 4,0 mgNaOH/g e I.P. de at 10 meq/Kg, para leos prensados a frio e no refinados. O mesmo no pode ser observado, quanto ao ndice de acidez e cido olico, quando se utilizou a temperatura de armazenamento da polpa mida foi de 2-8C. Estes valores apresentaram-se bem acima do que determina legislao e em consonncia aos encontrados por Albuquerque & Regiane (2006) cujo ndice de acidez foi de 7,47 mgKOH/g e de Faria et al. (2009) 7,63% para o ndice de cido olico. De acordo com relatos de Albuquerque & Regiane (2006), o alto ndice de acidez pode ser decorrente da degradao da polpa do buriti, um reflexo do tempo decorrido entre a coleta e o processamento dos frutos. Nogueira (1992), discorre ainda que estas propriedades fsicoqumicas de leos podem ser alteradas pela temperatura, levando rancificao e alterando pigmentos, tais como os carotenides. Outro fator importante a ser comentado o armazenamento, pois de acordo com Aquino et al. (2009), as temperaturas de congelamento e refrigerao contribui para a reduo das atividades microbianas e das alteraes qumicas e enzimticas caractersticas das hortalias e frutas. Dessa forma, a seleo das condies de operao (tipo de secagem e tempo) que minimizam essas alteraes importante para obteno de produtos de qualidade. A secagem constitui uma etapa prvia para aumentar a recuperao do leo e sua qualidade, sendo objeto de otimizao na extrao de leos de sementes oleaginosas, entretanto pode provocar efeitos adversos sobre sua qualidade. Altas temperaturas, longo tempo de exposio a tratamentos trmicos, irradiaes e alta concentrao de oxignio, levam oxidao lipdica e afetam suas propriedades fsico-qumicas (RAMESH et al., 1995). Fatores como ndice de perxido, refrao e saponificao tornam-se tambm importantes parmetros, pois de acordo com Moretto & Fett (1998), fornecem o grau de

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oxidao em que a gordura ou o leo se encontram, sendo uma das principais formas de deteriorao e responsvel pelo aparecimento de alguns sabores e odores estranhos. Alm de danificar a qualidade nutricional e possivelmente produzindo substncias txicas. Em pesquisas realizadas por Albuquerque et al. (2005), o leo de buriti classificado como um leo olico, mesma classificao dada ao azeite de oliva, ao leo de canola e amendoim, devido a elevada quantidade deste cido graxo, cerca de 75%. O Quadro 04 apresenta uma comparao das propriedades fsico-qumicas das amostras do leo de buriti, em temperatura de -20C, com estes leos, cujos valores foram determinados pela Resoluo RDC n 482 (ANVISA, 1999). Os resultados apresentados confirmam a similaridade do leo de buriti com os leos de canola, amendoim e oliva relatados na literatura.
Quadro 04- Comparao das propriedades fsico-qumicas dos leos da polpa dos frutos de buriti (artesanal, prensagem hidrulica e solvente) com os leos de canola, amendoim e oliva.

Conforme o exposto acima as propriedades fsico-qumicas de leos vegetais tm uma relao importante com o tempo decorrido entre a coleta e o processamento dos frutos. Quando as condies de armazenagem no so adequadas pode ocorrer o aumento na

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temperatura, aumentando a acidez do leo, escurecimento, alteraes no sabor e odor e alteraes estruturais (ALBUQUERQUE & REGIANE, 2006; MORETTO & FETT, 1998). Quando a temperatura de armazenamento da polpa mida do presente estudo foi alterada, pde-se perceber que ocorreram alteraes significativas nas propriedades fsicoqumicas dos leos extrados da polpa dos frutos de buriti (vide quadro 03). Portanto, a condio de armazenamento da polpa mida torna-se importante condio para a manuteno destes parmetros e para a boa qualidade do leo extrado.

5.5 ATIVIDADE ANTIMICROBIANA H muitos anos leos e extratos de plantas vm sendo utilizados para diversas aplicaes na medicina popular, entre elas, a produo de anti-spticos tpicos. Esta realidade serviu de base para diversas investigaes cientficas com vista na confirmao da atividade antimicrobiana destes vegetais (ALMEIDA et al., 2006). Os resultados do mtodo por difuso em gar foram expostos na Tabela 07 e mostram que os leos puros no apresentaram halo de inibio frente aos microrganismos testados, entretanto o mesmo no foi observado quando se utilizou as amostras diludas (20l/mL), onde as zonas de inibio formadas frente a Pseudomonas aeruginosas, apresentaram dimetros de 11 mm para amostra A e de 12 mm para as amostras B e C.

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Tabela 07- Atividade antimicrobiana (halos de inibio= mm) dos leos puros e diludos da polpa do fruto de buriti, pelos mtodos de difuso em placas, 24 e 48 horas aps a incubao. Amostras: extrao tradicional; prensagem hidrulica e extrao por solvente. Microrganismos: Staphylococcus aureus (S.a), Escherichia coli (E.c.); Pseudomonas aeruginosa (P.a); Klebsiella pneumoniae (K. p.) e Candida albicans (C.a.). * Valores dos halos de inibio das amostras de leos que apresentaram resultados positivos para Pseudomonas aeruginosa (P.a). (-) Amostras que apresentaram resultados negativos.

De acordo com Hood

et al. (2003), as substncias normalmente testadas pelos

mtodos propostos tm natureza hidrfila sendo padronizados para esta condio. Como os leos so viscosos, insolveis em gua e complexos, podem formar suspenso turva que impede a determinao visual da eficcia antimicrobiana, devido interferncia da dissoluo insuficiente dos componentes testados. Outro problema observado quando se utiliza a tcnica de difuso em gar a concentrao desigual do leo no meio, pois a difuso irregular dos componentes lipoflicos resulta em concentraes desiguais causando a formao de regies com atividade antimicrobiana varivel e, finalmente, a determinao de um nmero de bactrias viveis remanescentes, aps a adio do leo (SETZER et al., 2004).

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Os autores supracitados, Hood et al. (2003) e Setzer et al. (2004), acreditam que os resultados negativos encontrados nos trabalhos que utilizam o teste de difuso em gar para analisar o potencial antimicrobiano de leos brutos podem ser decorrentes do impedimento de observao dos halos de inibio. Isto ocorre devido a dificuldade que a substncia tem em se difundir no meio em razo das diferenas de polaridade entre os meios. Acredita-se que os resultados positivos para Pseudomonas aeruginosas quando se utilizou amostras de leos diludas, se deu pelo uso do agente emulsificante, Tween 80, a uma concentrao de 5%, que facilitou a disperso das mesmas no meio gar. No entanto, faz-se necessrio que o uso destes agentes emulsificantes obedea s concentraes determinadas, 0,5% a 20%, de forma a no interferirem, antagnica ou sinergicamente, na possvel atividade biolgica destes leos (TAKARADA et al., 2004). Em razo do exposto o mtodo por difuso em gar por ser um teste com vantagens limitadas, apresentando dados somente qualitativos, podendo sofrer interferncia de vrios fatores como condies de cultivo, meio de cultura, concentrao das substncias testadas, disperso e emulsificao dos agentes utilizados (RIOS; RECIO, 2005), torna-se necessrio ento a utilizao de testes quantitativos para uma confirmao dos resultados sobre uma possvel atividade antimicrobiana. Os resultados para o mtodo de microdiluio podem ser observados na Figura 18. Nota-se que as amostras utilizadas (artesanal. prensagem e solvente) apresentaram uma possvel atividade bactericida para S. aureus, em razo da cor do leo que se manteve inalterada durante o perodo e 12 e 24 horas, mesmo sobre a presena do revelador TTC (Cloreto de Trifenil-tetrazlio), substncia que quando oxidada pelo microrganismo muda de colorao.

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Entretanto, ao se observar a mesma figura nota-se que as amostras frente a E. coli e Ps. Aeruginosas, no perodo de 12 e 24 horas no mantiveram suas cores iniciais, porm no realizaram a total virada para a cor vermelha, sendo sugestivo a uma ao bacteriosttica. Como estes microrganismos so de fcil e rpida multiplicao, estes leos podem ter uma ao na fase log impedindo seu crescimento (ao bacteriosttica), mas sem ao bactericida.
Figura 18- Atividade antimicrobiana em caldo por microdiluio. A) Leitura em 12 horas. B) Leitura em 24 horas das amostras de leo da polpa dos frutos de buriti, provenientes dos processos de extrao tradicional; prensagem hidrulica e por solvente, frente aos microrganismos Escherichia coli (E.c.); Staphylococcus aureus (S.a.); Klebsiella pneumoniae (K.p.); Pseudomonas aeruginosa (P.a). Colorao amarela significando resultado positivo de uma possvel ao bactericida para S.a. e resultados parciais para E.c e Ps.a., pois observa-se que no houve a total virada para cor vermelha mesmo na presena do revelador (TCC), demonstrando uma possvel ao bacteriosttica.

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Em estudos feitos por Silveira et al. (2005), com extratos etanlico e hexnico dos frutos de buriti, os mesmos mostraram-se ativos contra S. aureus e Ps. Aeruginosas,entretanto no sendo capaz de inibir significativamente E. coli. De acordo com os autores, a presena de cidos graxos saturados e insaturados no leo de buriti pode ter contribudo para a atividade antimicrobiana observada contra cepas Gram-positivas e, especificamente, contra Gramnegativas. Estando em consonncia com os resultados exposto pelo presente estudo. Os resultados obtidos foram bastante satisfatrios em razo da possvel atividade antimicrobiana de Mauritia flexuosa L.f. frente a microrganismos patognicos e por est em consonncia com outros estudos antimicrobianos sobre esta espcie. Entretanto, preciso que em trabalhos futuros testes quantitativos sejam feitos para que se possa confirmar realmente tal atividade antimicrobiana.

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6 CONCLUSO
Das partes dos frutos de buriti o maior percentual 54,40% foram para as sementes, 23,58% para a polpa e 22,03% para as cascas, no ocorrendo muita diferena entre estes constituintes nas duas coletas.

A anlise dos componentes das polpas mostrou o maior percentual 49, 20% para a umidade, 27, 25% para biomassa e 23, 55% para o leo.

Dos trs mtodos de extrao o por solvente foi a que apresentou maior rendimento (23,55 %), seguido pela extrao por prensagem hidrulica (21,50%) e mtodo artesanal (4,01%) de leo extrado. Apesar da extrao por solvente ter apresentado o maior rendimento, um processo que produz resduos qumicos, utiliza energia e gera aquecimento tanto no leo quanto na torta. No mtodo artesanal, o produto obtido apresentou-se opaco, com alta umidade, baixo rendimento. O processo por prensagem em relao aos demais se mostrou uma tima alternativa a ser empregada na RDS Tup. No utiliza energia eltrica, solventes e no gera aquecimento nem no leo e na torta, sendo necessrio apenas uma prensa e um cilindro extrator. Em temperatura de armazenamento -20C todos os valores dos leos adquiridos atravs dos trs mtodos apresentam-se dentro dos limites estabelecidos pelas legislaes vigentes RDC n 270 e Normas do Codex Alimentarius - FAO/OMS para leos prensados a frio e no refinados.

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O mesmo no foi observado quanto ao ndice de acidez e cido olico, quando se utilizou a temperatura de 2 a 8C. Estes valores estavam bem acima do que determina s legislaes. Quando as temperaturas de armazenamento foram alteradas de -20C para 2-8C ocorreram mudanas significativas em seus parmetros fsico-qumicos onde a mdia do ndice de acidez passou de 1,41 para 11,53 mg/g. O tempo e as condies de armazenamento da polpa mida, bem como a temperatura de secagem da mesma, so os provveis fatores de alterao das propriedades fsicoqumicas. O mtodo de extrao artesanal, prensagem ou solvente no interferem nas propriedades fsico-qumicas, pois independentes da metodologia adotada estes parmetros permanecem dentro dos limites estipulados pela legislao vigente para leos prensados a frio e no refinados. Avaliao da atividade antimicrobiana dos leos puros no apresentou halo de inibio frente aos microrganismos testados. As amostras diludas em agentes emulsificantes formaram zonas de inibio frente bactria Pseudomonas aeruginosas, com dimetros de 11 mm para o mtodo artesanal e de 12 mm para as amostras por prensagem e solvente. O mtodo por difuso em gar por ser um teste com vantagens limitadas apresentou somente dados qualitativos. As amostras utilizadas apresentaram uma possvel atividade bactericida para S. aureus, em razo da cor do leo que se manteve inalterada durante o perodo e 12 e 24 horas, mesmo sobre a presena do revelador TTC (Cloreto de Trifenil-tetrazlio).

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As amostras frente a E. coli e Ps. Aeruginosas, no perodo de 12 e 24 horas no mantiveram suas cores iniciais, no ocorrendo no entanto, a total virada de cor, sendo sugestivo a uma ao bacteriosttica. Os resultados obtidos quanto possvel atividade antimicrobiana de Mauritia flexuosa L.f. frente a microrganismos patognicos, foram bastante satisfatrios.

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