TEMA DE REVISIN Instituto de Oncologa y Radiobiologa

La apoptosis: sus caractersticas y su papel en la transformacin maligna de la clula

Dra. Mara del Carmen Arango Prado,1 Lic. Leticia Llanes Fernndez,2 Dr. Toms Daz Romn1 y Dra. Mara Elena Faxas Garca1 RESUMEN La apoptosis o "muerte celular programada" es una forma de suicidio celular genticamente definida, que ocurre de manera fisiolgica durante la morfognesis, la renovacin tisular y en la regulacin del sistema inmunitario. Determinados hechos celulares pueden ser explicados por trastornos en la regulacin de los genes responsables de la apoptosis, como es el caso de la transformacin y la progresin tumorales. En este trabajo revisamos las caractersticas fundamentales de este mecanismo de muerte celular, sus variaciones morfolgicas, bioqumicas, los genes involucrados y su papel en el desarrollo de malignidades, entre otros aspectos de inters. Descriptores DecS: APOPTOSIS/inmunologa; APOPTOSIS/gentica; TRANSFORMACION CELULAR NEOPLASICA. Los mecanismos que regulan la muerte celular son esenciales para el normal desarrollo y mantenimiento de la homeostasia. Las clulas crecen controladamente gracias a la expresin de nuevos genes que inducen seales de muerte en estadios definidos de diferenciacin y en respuesta a estmulos fisiolgicos determinados.1,2 En los aos 803 se introduce el trmino griego de apoptosis que significa "cada de las hojas de un rbol o de los ptalos de una flor", para definir las caractersticas morfolgicas particulares de un tipo de muerte celular fisiolgica, programada genticamente, que difiere de la muerte celular patolgica o necrosis celular.4,5 Se considera a la apoptosis como un mecanismo fisiolgico de muerte (inherente al desarrollo celular), que se desencadena por diversas seales, las cuales pueden ser fisiolgicas, o por estimulaciones exgenes ambientales. Estas seales pueden actuar sobre receptores de superficie y causar la activacin en cascada de

protenas citoplasmticas; ello trae como resultado la activacin de un programa gentico que conduce, generalmente, a la nucleolisis por la accin de las endonucleasas.6 Este mecanismo de muerte celular interviene en importantes fenmenos fisiolgicos como: embriognesis, mantenimiento de la homeostasia, renovacin tisular y desarrollo y funcionamiento del sistema inmunitario.7 Los trastornos en la regulacin de la apoptosis por diferentes vas, estn presentes en la etiopatogenia de diversas enfermeddes autoinmunes, neurodegenerativas, y tambin se sugiere que participen en el Sndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA).7,8 Debido a que la apoptosis puede considerarse como un proceso de eliminacin de clulas defectuosas, la desregulacin de los genes que codifican las protenas relacionadas con la apoptosis, puede ser la causa del desarrollo de diversos tumores.9 CARACTERSTICAS MORFOLGICAS DE LA APOPTOSIS Las caractersticas de la clula apopttica difieren de las observadas en las clulas que sufren necrosis. En este ltimo fenmeno la muerte es un proceso "pasivo" que no requiere de sntesis proteica, y es causado por la prdida de la homeostasia. Se caracteriza por dao mitocondrial, rotura de la membrana, lisis celular y liberacin de su contenido al medio extracelular. 3,10 Contrariamente, la apoptosis es un proceso activo que implica sntesis proteica, en el cual la clula sufre una condensacin nuclear y citoplasmtica. Sus caractersticas morfolgicas revelan condensacin de la cromatina nuclear, desintegracin nucleolar, disminucin del tamao nuclear, compactacin del citoplasma y de organelo (excepto mitocondrias y ribosomas), alteraciones del citoesqueleto y aspecto de burbuja de la membrana, aunque no se rompa. Durante el proceso final ocurre fragmentacin del DNA debido a una ruptura internucleosomal del DNA y se forman fragmentos nucleares recubiertos de membrana (cuerpos apoptticos), que son fagocitados sin evidencia de reaccin inflamatoria.11,12 RECEPTORES DE MEMBRANA CELULAR QUE MEDIAN APOPTOSIS Un avance importante para la investigacin de la apoptosis se logr cuando se indentific un antgeno (Ag) de membrana celular capaz de inducir seales de apoptosis. Este receptor se denomin Fas o Apo-1, cluster de diferenciacin (CD) 95, y es una protena transmembrana tipo II glicosilada de aproximadamente 43

kD que se expresa constituitivamente en gran variedad de tejidos normales y lneas tumorales.13 El inters en este receptor aument cuando se demostr, en modelos murinos, que las mutaciones en el gen que codifica a este receptor, se relacionan con trastornos linfoproliferativos por la incapacidad de producir apoptosis.14 El Fas/Apo-1 es miembro de la superfamilia de los Factores de Necrosis Tumoral (TNF), entre los que se encuentran los Receptores TNF tipo I y II, el receptor del factor de crecimiento neuronal (NGF), CD40 y CD27.15,16 El ligando del Fas/Apo-1 es una protena de membrana tipo II de 40 kD miembro de la familia del TNF que est altamente expresado en linfocitos activados.17 La unin del Ag de membrana Fas/Apo-1 con su ligando y con anticuerpos antagonistas, es una de las vas de inicio de seales para la apoptosis.18 Existe una relacin estrecha entre la participacin del ligando Fas y la citotoxicidad mediada por los linfocitos T CD8+, mecanismo efector de gran importancia en la respuesta inmune antitumoral.19 El papel de la interaccin Fas/Apo-1 y su ligando en cncer no est bien establecido; sin embargo, su papel en la apoptosis sugiere su participacin como supresores del tumor. Por ejemplo, la inactivacin de las seales va Fas debido a la baja expresin de este Ag en la membrana, puede llevar a la clula a una supervivencia anormal y contribuir al desarrollo y progresin de malignidades. 20 MECANISMOS BIOQUMICOS DE LA APOPTOSIS Las vas bioqumicas involucradas en la apoptosis se encuentran actualmente en investigacin. Se conoce que los linfocitos y la mayora de las clulas nucleadas experimentan ruptura internucleosomal del DNA mediante endonucleasas Ca2+ Mg2+ dependiente, entre las que se encuentran la NUC-18, la DNAsa I y la DNAsa II. Sin embargo, existen mltiples evidencias de apoptosis en clulas enucleadas, por tanto el mecanismo apopttico puede no interesar al ncleo. Ciertos experimentos realizados en clulas enucleadas de nematodos que sufren apoptosis, han evidenciado la existencia de ms de una va de apoptosis, donde los cambios citoplasmticos pueden ser decisivos. En esta especie se han definido varios genes que codifican protenas citoplasmticas relacionadas con la apoptosis, como la Ced-3 (ICE-enzima convertidora de IL1 b), Ced-4 y la Ced-9. En los mamferos existe la proteasa "ICE like" que forma una familia de proteasas suicidas y es homloga a la protena Ced-3 de nematodos, tambin se

observa homologa entre los genes Ced-9 nematodos y bcl-2 de mamferos, ambos inhibidores de la apoptosis.5,21 GENES INVOLUCRADOS EN LA APOPTOSIS FAMILIA DE GENES bcl-2 El bcl-2 (B cell leukemia/lymphoma 2 genes) fue el primer proto-oncogen detectado y fue asociado con procesos malignos de las clulas B. Durante la maduracin de las clulas B puede ocurrir una traslocacin cromosomal 14,18 en el gen bcl-2; ello provoca un aumento en la expresin de la protena citoplasmtica Bcl-2, que origina inhibicin de la apoptosis en clulas B y da por resultado la supervivencia de la clula transformada.22 Est demostrado que la sobreexpresin del gen bcl-2 en linformas inducidos experimentalmente, se asocia con la proliferacin neoplsica por los efectos inhibitorios de Bcl-2 sobre las vas de apoptosis.23 Este gen facilita el aumento de la supervivencia de la clula transformada y de este modo aumenta la posibilidad de futuras aberraciones genticas que pueden conducir a la progresin maligna.24,25 La expresin de este gen en algunos tipos de cncer es un marcador de mal pronstico.26 El gen bcl-2 forma parte de una familia de genes que intervienen en la regulacin de la supervivencia de la clula. Los miembros de la familia Bcl-2 estn integrados por: Bcl-2, Bax, Bad, Bcl-X1, Bcl-Xs, Mcl-1. El destino de una clula de morir o sobrevivir est determinado por las diferencias en la expresin de estas protenas, actuando algunas como promotoras y otras como inhibidoras de las seales de apoptosis.27-29 La figura 1 nos muestra la regulacin de la apoptosis por la familia Bcl-2. Debe observarse como el heterodmero Bcl-2Bax y la variante Bcl-X1 tienen efecto inhibitorio de la muerte celular, al impedir la accin de las proteasas cistenas que median seales de apoptosis. Sin embargo, la formacin de homodmeros BaxBax, as como elevados niveles de Bax o Bcl-Xs, pueden favorecer la muerte programada de la clula.4,29

FIGURA 1. Regulacin de la apoptosis por la familia Bol-2.

Es importante destacar que Bcl-2 no confiere proteccin a la clula contra la apoptosis, ni en la seleccin negativa de clulas autorreactivas del timo, ni en los mecanismos citotxicos de los linfocitos T citotxicos (CTL). Tampoco se aprecia su efecto protector sobre las clulas B inmaduras que sufren apoptosis por entrecruzamiento IgM ni en la activacin de la clula va receptor Fas/TNF.26 El bcl-2 se expresa de manera importante durante estadios muy tempranos de la diferenciacin de clulas B y T, y tambin est altamente expresado en la etapa de diferenciacin final de los linfocitos; es por ello que las clulas en estadios intermedios de desarrollo son ms susceptibles a la muerte celular. 4 OTROS GENES Es conocido que ciertos oncogenes y genes supresores de tumor influyen en el mecanismo de muerte celular programada; tal es el caso de los genes c-myc y nur-77,26,30 que a pesar de estar asociados con la progresin del ciclo celular participan en la induccin de apoptosis en algunas clulas, tambin se encuentra el gen bcl-2 que como ya ha sido descrito, bloquea la apoptosis cuando es sobreexpresado23 y el gen p53, cuyo requerimiento se produce en casos de dao genmico.26 La expresin de estos genes puede inducir a algunos tipos de cncer a la apoptosis. Esto sugiere que la muerte celular programada es un mecanismo de defensa contra la transformacin maligna.31 El gen p53 ha sido llamado guardin del genoma por ser el encargado de bloquear la divisin celular cuando las clulas han sufrido dao en su material gentico. Este bloqueo lo lleva a cabo deteniendo las clulas en la fase G1 del ciclo celular, con el objetivo de que se produzca la reparacin del DNA antes de que se replique.32,33 Este gen mantiene la integridad del genoma ya que estimula la apoptosis en las clulas en las que el dao en el DNA ha sido sustancial.34 En diversos tipos celulares incluyendo los linfocitos, la sobreexpresin de p53 conduce directamente a la apoptosis.4 La prdida de la funcin normal del gen p53 puede conducir al desarrollo de neoplasias malignas; de hecho son muy frecuentes las alteraciones en este gen en una variedad de cnceres humanos (ms del 50 % de los tumores humanos estn asociados a mutaciones en p53).4,33 Hay evidencias que hacen pensar que el alto riesgo de la transformacin maligna en ausencia de p53 funcional, probablemente origina una oportunidad reducida de reparar el DNA y una incapacidad de eliminar por apoptosis la clula daada no reparada. Aunque es desconocida la base real de la apoptosis inducida por este gen.35

Los timocitos de ratn que pierden copias funcionales del p53 son incapaces de desarrollar apoptosis luego de ser irradiados; estas clulas responden normalmente a glucocorticoides y a seales a travs del receptor. 34 Se ha evidenciado que los genes involucrados en una va de apoptosis no necesariamente juegan una importante funcin en otra va. As por ejemplo nur77 se requiere para la apoptosis mediada por el receptor de clulas T (TCR), no siendo importante en la muerte celular por glucocorticoides o radiacin ionizante. A pesar de esto, se ha observado en ratones deficientes de nur77, muerte celular mediada por el receptor, sugirindose que, o bien este gen no es requerido in vivo para la apoptosis, o existe un gen estrechamente relacionado con l que puede compensar su deficiencia.36 Estudios anteriores sugieren la influencia de la expresin de nur77 en la proliferacin o la diferenciacin celular.26 El producto de nur77 es una protena que pertenece a la familia del receptor nuclear de hormonas esteroides y su efecto en la apoptosis est dado porque acta como un factor de transcripcin que regula la expresin de genes involucrados en la muerte celular.30 Otro regulador fisiolgico del ciclo celular que participa en la apoptosis es la protena Myc, que es producto del proto-oncogen c-myc. La sobreexpresin del gen c-myc pudiera resultar en mitosis o apoptosis en dependencia de la disponibilidad de otros factores que estimulan el crecimiento celular. 32 De esta forma la expresin incrementada de Bcl-2 en presencia de un aumento de c-myc prococa una inhibicin de la apoptosis mediada por c-myc, lo que explica la cooperacin que se produce entre ambos genes en el origen de las neoplasias.4 Adems del papel que juega la apoptosis en el origen del cncer, su modulacin tambin pudiera influir en el tratamiento de esta enfermedad. 31 PAPEL DE LA APOPTOSIS EN EL SISTEMA INMUNITARIO La muerte celular programada es muy importante para el desarrollo y funcionamiento del sistema inmunitario, debido a que interviene en los eventos de formacin del repertorio de clulas T y B, en los mecanismos de tolerancia central y perifrica, en la eliminacin de clulas autorreactivas, en el establecimiento de la memoria inmunolgica y en los mecanismos citolticos de clulas asesinas naturales y linfocitos T citotxicos.36

Es conocido que el 95 % de los timocitos son eliminados en el timo por mecanismos de apoptosis, proceso denominado seleccin negativa (delecin clonal), el cual elimina la existencia de clones T autorreactivos. 37 Tambin en la mdula sea existe un proceso similar de delecin de clones B, autorreactivos en el estadio B inmaduro por entrecruzamiento de la inmunoglobulina de superficie en ausencia de seales coestimulatorias.38 No obstante, la apoptosis no se restringe a las clulas inmaduras.

FIGURA 2. Factores que regulan la ruta de las clulas T activadas, despus del reencuentro con el Aq. Tambin los linfocitos T maduros, bajo ciertas condiciones, pueden sufrir apoptosis, lo que corrobora su papel inmunorregulador. Entre los factores que pueden inducir apoptosis en clulas maduras estn: los glucocorticoides y las radiaciones gamma, la estimulacin del complejo TCR/CD3 por anticuerpos monoclonales,26 Ags nominales y superantgenos y la estimulacin de los receptores CD2, Fas/Apo-1 y TNF.16,18 Se ha demostrado que la sensibilidad para lograr la apoptosis es ms lenta en clulas maduras y requiere previa activacin. La ruta que siguen los linfocitos T al ser estimulados depende de una serie de elementos que determinan si la clula prolifera, o si muere por apoptosis. La figura 1 muestra los diversos factores que influyen en dicha decisin.39,40 SUMMARY The apoptosis or "programmed cell death" is a form of genetically defined cell suicide which occurs in a physiological way during morphogenesis, the tissue renovation, and in the regulation of the immune system. Certain cellular facts may be explained by disorders in the regulation of the genes responsible of apoptosis, as in the cases of tumoral transformation and progression. In this paper, the fundamental characteristics of this mechanism of cell death is revised, as well as its morphological, biochemical variations, the genes involved and their role in the development of malignant process among other aspects of concern.

Subjetc headings: APOPTOSIS/immunology; APOPTOSIS/genetics; NEOPLASTIC CELL TRANSFORMATION. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS Ellis RE, Yuan J, Horvitz HR. Mechanisms and functions of cell death. Annu Rev Cell Biol 1991;7:663. 2. Martn SJ. Apoptosis: suicide, execution or murder?. Trens in cell biology 1993;3:141-44. 3. Wyllie AH, Kerr JFR, Curri AR. Cell death: The significance of apoptosis. Int Rev Cytol 1980;68:251. 4. Cory S. Regulation of lymphocyte survived by the Bcl-2 gene family. Ann Rev, Immunol 1995;13:513-43. 5. _____ . Fascinating death factor. Nature 1994:367(6461):317-8. 6. Silvestri F, Ribatti D, Nico B, Silvestri N, Romito A, Dammacco F. Apoptosis or programmata cell death: regulatory and pathophysiological mechanisms (editorial). Ann Ital Med Int 1995;10(1):7-13. 7. Onishi Y, Kizaki H. Apoptosis and diseases. Hum. Cell 1994:7(1):27-32. 8. Ameisen JC. Programmed cell death and AIDS: From hypothesis to experiment. Immunol Today 1992;13:388. 9. Korsmeyer SI. Bcl-2 initiates a new category of oncogenes: Regulator of cell death. Blood 1992;80:879. 10. Raff MC. Social controls on cell survival and cell death. Nature 1992;356:397. 11.Cohen J. Apoptosis. Immunol. Today 1993;14:126. 12. Wyllie AH, Morris RG, Smith AL, Dunlop D. Chromatin Cleavage in apoptosis: association with condensed chromatin morphology and dependence on macromolecular synthesis. J Pathol 1984;142:67. 13. Tucek-Scabo C, Andjelic S, Lacy E, Elkon KB, Nikolic-Zingic J. Surface T cell Fas Receptors/CD95 Regulation, in vivo Activation and Apoptosis. J. Immunl. 1996;156(1):192-00. 14. Clement MV, Stamenkovic I. Fas and Tumor Necrosis Factor Receptormediated cell death: Similarities and distintions. J Exp Med 1994;180:55767. 15. Itoh N, Yonehara S, Ishii A. The polypeptide encoded by the cDNA for humancell surface antigen Fas can mediate apoptosis. Cell 1991;6:233-43. 16.Oehm A, Behrmann I, Falk W. Purification and molecular cloning of the Apo-1 cell antigen, A 17. Suda T, Takahashi T, Golstein P, Nagata S. Molecular cloning and expresion of the Fas ligannd, a novel member of the tumor necrosis factor family. Cell 1993;75:1169-78.
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NECROSIS

APOPTOSIS

CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS Prdida Integridad de Membrana Disgregacin de la Cromatina Edema Celular y Lisis Desintegracin de Organelos CARACTERISTICAS BIOQUIMICAS Alteracin Homeostasis Celular No Dependiente de la Energa Digestin DNA azar Formaciones Ampulares Compactacin de la cromatina Condensacin Celular Formacin Cuerpos Appticos CARACTERISTICAS BIOQUIMICAS Proceso Altamente Regulado Dependiente de la Energa Fragmentacin DNA

Caspasas El mecanismo central de la maquinaria de muerte en cualquier clula est constituido por una familia de proteasas, a las que se han denominado "caspasas", por ser Cisten-proteasas que hidrolizan a su sustrato junto a un residuo de cido Asprtico. Las caspasas responden al estmulo apopttico mediante activacin de una cascada intracelular proteoltica que ocasiona la activacin o inactivacin de diferentes sustratos celulares y provoca la muerte celular En el nemtodo Caenorhabditis elegans hay dos genes que son esenciales para la ejecucin de la muerte celular programada (PCP), estos genes son el ced-3 y el ced-4. El gen ced-4 codifica para una protena de 544 residuos, la cual se une a

la protena Ced-3 y la activa; recientemente un homologo del gen ced-4 ha sido encontrado en humanos, se conoce como el Apaf-1. En contraste el ced-3 codifica para una protena de 503 residuos, con una regin intermedia rica en serina y con las regiones laterales carentes del mismo aminocido, las cuales estn muy conservadas en los nemtodos. Una pista importante acerca de la funcin del gen ced-3, proviene de la observacin de que este codifica una protena homologa a la enzima convertidora de interleukina- 1beta, enzima conocida como ICE, la cual es una nueva cistena-proteasa que lleva a cabo la ruptura de la pro-interleukina1beta entre los residuos Asp 116 y Ala 117 para generar la citokina madura. Sobretodo, Ced-3 e ICE humana son 29% idnticas. La regin ms conservada (43% idnticas) entre estas dos protenas se encuentra en el extremo c-terminal: los aminocidos del 246 al 360 en la Ced-3, y del 166 al 287 en la ICE. Importante porque las protenas contienen un pentapptido QACRG en esta regin que incluye el sitio activo con la cistena 285, el cual es esencial en ICE para la funcin proteoltica. Adems, la ICE es activada por un proceso proteoltico en cuatro sitios de ruptura Asp-X, dos de los cuales han sido conservados en la Ced-3. Tambin, la vasta mayora de fallas en las mutaciones del gen ced-3, alteran residuos de aminocidos que se conservan en la ICE humana. Las similitudes entre la Ced-3 y la ICE han implicado una nueva familia de cistena-proteasas, involucradas en la PCD de organismos tan diversos como los gusanos y los seres humanos, y ha sugerido fuertemente que el aparato que lleva a cabo la PCD ha sido marcadamente conservado durante el proceso evolutivo. Esta familia de protenas con funcin de proteasas, la cual ha crecido bastante con el tiempo, se le ha dado el nombre de caspasas (cistena-proteasas con sustrato especfico de cido asprtico). Las caspasas se clasifican en tres sub-familias: Sub-familia-1: posee las caspasas 1, 4, 5 y 11 Sub-familia-2: posee las 2 y 9. Sub-familia-3: posee las 3, 7, 6, 8,10. PAPEL DE LAS CASPASAS EN LA PCD A. LA SOBEEXPRESION DE LAS CASPASAS INDUCE LA PCD. Para comenzar, la expresin de ADN de las caspasas de forma pasajera, induce cambios morfolgicos y bioqumicos que sealan la aparicin de la apoptsis ( por ejemplo, una condensacin entre la clula y el ncleo, y la fragmentacin del ADN del nucleosoma) en mamferos o en insectos. B.LAS CASPASAS SON ACTIVADAS DURANTE LA PCD.

Alguna evidencia acerca del rol que juegan las caspasas en la apoptosis proviene de la observacin de que algunas de estas proteasas son proteoliticamente procesadas y activadas durante la PCD. La proenzima caspasa p45 (procaspasa ) es rota en sus subunidades activas p20 y p10 durante la induccin de la apoptosis por la remocin de la matriz extracelular y por la granzima B. Desde el proceso proteoltico de la pro-IL-1beta que es una funcin especfica de la caspasa , la deteccin de la IL-1 beta madura puede ser usado como un indicador de la actividad de la caspasa . La pro-caspasa (p32) es proteoliticamente procesada en sus subunidades activas p20/17 y p12durante la induccin de la apoptosis por una variedad de agentes, incluidos el anti-Fas mAb, TNF-alfa, el amplio espectro del inhibidor de protenquinasas conocido como estaurosporina, el inhibidor de la fosfatidilinositol -quinasa, el agente daador de ADN conocido como etoposide y por la granenzima B. De manera similar. La caspasa , la caspasa y la caspasa , muestran todas haber sido procesadas a sus subunidades activas durante la induccin de la PCD por una variedad de estmulos. Igualmente importante, el procesamiento de estas proenzimas precede o coincide con la fisura de los sustratos apoptticos como el

PARP y la aparicin de formas morfolgicas de la apoptosis, por consiguiente, la activacin de las proteasas ocurre durante la puesta en marcha de la apoptosis y por esos juega un rol en su ejecucin sistemtica. C. LOS INHIBIDORES DE LAS CASPASAS PREVIENEN LA PCD. Inhibidores virales: La observacin de que algunas caspasas son activadas durante la apoptosis, solamente las implica a ellas en la ejecucin de este proceso. Evidencia concluyente de que ellas juegan un papel esencial en la PCD proviene de una multitud de estudios los cuales demuestran que los inhibidores especficos de estas proteasas previenen o retrasan el amplio espectro de la PCD. Algunas expresiones de genes virales han sido identificadas como inhibidores de pasos clave en la maquinaria de la PCD. Estas protenas antiapoptticas permiten engrandecer la replicacin viral y su supervivencia por la prevencin de la apoptosis en clulas husped infectadas con el virus. El gen crmA codifica una serfina (serpin) la cual es un potente inhibidor de la caspasa , adems un activador de los inhibidores de otras caspasas como la caspasa . El gen crmA tambin inhibe a la granenzima B e inhibe tambin una serinproteasa en los linfocitos Tcitotxicos. (7) Pptidos Inhibidores Pptidos inhibidores especficos de las caspasas han tambin demostrado que estas proteasas juegan un papel crtico en la apoptosis de los mamferos. Como se not anteriormente, los pptidos inhibidores son modelados luego de que los residuos P1-P4 se anclan a la zona de ruptura de la pro-IL-1beta y a la PARP, de ese modo proveen alguna selectividad contra la caspasas-1 y la caspasa-3,

respectivamente Los pptidos con secciones aldehdo son inhibidores competitivos reversibles de las caspasas , mientras que los correspondiente pptidos con secciones cetona son inhibidores irreversibles los cuales modifican covalentemente el sitio de anclaje a la cistena, y penetran a la clula ms rpidamente.(7) Apoptsis y Enfermedades La apoptsis es una funcin biolgica muy importante en la patogenia de varias enfermedades estudiadas hasta el momento. Podemos destacar el cncer, malformaciones, trastornos metablicos, neuropatas, lesiones miocrdicas y trastornos del sistema inmunitario. La desregulacin de la apoptsis puede tomar dos formas: A. Un incremento de la sensibilidad hacia la apoptsis, marcada por una muerte celular excesiva B. Una resistencia hacia la apoptsis, resultando en una muerte celular deficiente Desordenes caracterizados por un incremento en la apoptosis incluyen desordenes neurodegenerativos como el Alzheimer, la enfermedad de Huntigton, esclerosis amiotrofica lateral, atrofia de la espina muscular y otras. Tambin incluye enfermedades vasculares y el sida. En contraste, las enfermedades caracterizadas por una deficiente o inadecuada apoptsis incluyen el cncer, desordenes autoinmunes (como el Lupus, artritis reumatoide, y otras) e infecciones virales crnicas. Debido a que las caspasas juegan un papel muy importante en la muerte celular por apoptosis, ellas parecen tener una importante actividad en la patognesis de estas enfermedades. En algunas enfermedades asociadas con un exceso en la apoptsis, la activacin de las pro-caspasas juega un papel fundamental. Por ejemplo, en la isquemia (una insuficiencia vascular), se ha encontrado un ligamen entre la activacin del mecanismo de la apoptosis con la aparicin de seales como el aumento de los radicales libres, el incremento en los niveles de calcio y la aparicin de citokinas. Algunas evidencias indican que las caspasas son mediadores importantes de la apoptosis durante la isquemia. Primero, la isquemia cerebral y sus sub-secuentes repercusiones han sido asociadas con la rpida produccin de IL-1beta madura. Dado que la caspasa-1 es la nica proteasa conocida que puede convertir pro-IL1beta en su forma madura, esto sugiere que la caspasa-1 es activada durante la repercusin de la isquemia. Segundo, la caspasa-1 y otras caspasas son proteolticamente procesadas durante la repercusin de la isquemia cerebral. Finalmente, la sobreexpresin del gen crmA protege a la clula de la muerte celular por hipoxia, en los cultivos de tejido con modelo de isquemia. En contraste enfermedades asociadas con una apoptosis deficiente, pueden ser caracterizadas por una inhibicin o un decrecimiento en la actividad de las caspasas. Por ejemplo, las clulas cancergenas adquieren una disminucin en la sensibilidad hacia la apoptosis como resultado del dao gentico acumulado. Una

ilustracin dramtica de la importancia de dicha resistencia hacia la apoptosis en la patognesis del cncer, proviene del estudio del gen bcl-2, un gen de los mamferos que es homologo del gen ced-9 de los nemtodos. El gen bcl-2 fue clonado en virtud de su translocacin del cromosoma 18 al 14 en los linfomas foliculares, un evento que condujo a su sobreexpresin y que dio como resultado la resistencia a la muerte celular por apoptosis. El gen bcl-2 es un regulador negativo de las caspasas: la sobreexpresin del gen bcl-2 en clulas tumorales, las protegen a estas mismas de la induccin de la apoptosis por una variedad de estmulos y previene de la activacin de la cascada proteoltica de las caspasas. Ms recientemente, la sobreexpresin de un inhibidor endgeno de algunas caspasas, el llamado FLIP, el cual es una protena, se ha demostrado su aparicin en melanomas malignos. Dado el importante papel que juegan las caspasas en la regulacin de la apoptosis en estas patologas y en muchas ms, estas proteasas parecen ser candidatas para la manipulacin teraputica (7) Apoptsis y Neuropatas En el desarrollo del sistema nervioso, las neuronas se generan a partir de clulas precursoras que una vez diferenciadas no se dividen ms. Antes de emitir dendritas y axones, las neuronas inmaduras o las precursoras emigran desde el lugar de nacimiento en busca de la localizacin definitiva usando como camino el sistema glial. Esta migracin tiene, adems, como objetivo lograr las conexiones interneuronales correctas. Si ello no se efecta la neurona no recibe la accin de factores de crecimiento secretados por la clula receptora a que pertenece el axn conectado y la clula que hizo la conexin equivocada muere por apoptosis. Cualitativamente, en estudios realizados en la formacin de la va ptica en la rata, por oligodendrocitos que milienizan axones, mueren por apoptosis alrededor del 50 % de ellos debido a conexiones errneas. De esta manera contribuye la apoptosis en el desarrollo correcto del sistema nervioso.(1) Apoptsis y Cncer. La muerte celular programada o apoptsis es dirigida por genes que justamente, llevan la informacin para la sntesis de protenas que desencadenan la destruccin del interior celular. Una de ellas es una protena llamada p53. La informacin para su fabricacin se encuentra en un gen (una seccin de todo el ADN de la clula). Este gen se llama "gen supresor de tumores p53". Esta protena "frena" la clula en una fase de su ciclo de vida impidindole ni dividirse ni replicar su material gentico. Adems, se ha encontrado que el aumento de concentracin de la protena p53 lleva a la apoptsis celular. El objetivo es controlar la existencia de daos en el ADN. Si la clula se encuentra generando clulas hijas y los daos que ha sufrido su ADN son peligrosos para stas (ya que conllevan errores genticos que no han podido ser "reparados" por la primera), la clula progenitora es eliminada por la misma protena p53 que desencadena la apoptosis (o sea, la muerte celular programada)

Este "fusible" biolgico evita que el material gentico de esa clula acumule mutaciones (cambios qumicos a nivel de la inmensa molcula de ADN) de forma tal que en un momento dado sta llegue a descontrolarse y se trasforme en cancerosa. Por eso, se sabe bien que algunas clulas de la piel, cuando se han expuesto al sol, muestran aspecto de clulas apoptticas. Si el mismsimo gen que guarda la informacin para que se sintetice la protena p53 es el que se daa (por irradiacin o exposicin solar reiterada con alto grado de UVB), y sufre cambios fatales (mutacin), las clulas perdern este mecanismo de control, y continuarn viviendo y multiplicndose, "juntando" daos en su ADN y transmitindolo generacin tras generacin. Se genera as una saga celular que va acumulando mutaciones en su genoma (informacin total de cmo construir un organismo contenida en la qumica del ADN) y si stas afectan los genes que controlan la multiplicacin celular, entonces podra desembocarse en cncer Este mecanismo se postula fuertemente como responsable del cncer de piel no melanmico. (5)