Biosntesis de Nucletidos Dentro de la biosntesis de los nucletidos al igual que en los aa, existe una biosntesis De Novo (desde

0) y un rescate de cidos nuclecos desde los procesos catablicos, ya que al igual que el metabolismo de los aa, el metabolismo de nucletidos requiere mucha energa. Se sintetizan nucletidos de Purinas (2 anillos A y G) y Pirimidinas (1 anillo C, T y U). Los nucletidos son los precursores del ADN Y el ARN, son transportadores de energa qumica (ATP y GTP), actan como segundos mensajeros en la sealizacin celular (AMPc y GMPc), forma parte de diversos cofactores: NAD y FAD (poder reductor), S-adenosilmetionina (dador de metilos) y Coenzima A (activador de procesos biosintticos) y compone intermediarios metablicos: UDP-Glucosa (Hidratos de carbono), para iniciar la sntesis de Glucgeno se necesita activar la Glucosa y CDP- Diacilglicerol (lpidos). Estructura: Nucletido Base Nitrogenada Azcar Grupo Fosfato (En el carbono 5 de la Ribosa, de grado variable (monofosfato, bifosfato o trifosfato)) Estructura: Nuclesido Base Nitrogenada Azcar El azcar es la Ribosa y la Ribofuranosa, proveniente del Ciclo de la Pentosa, forma parte del ARN y se transforma en Dexosirribosa o Dexosirribofuranosa para formara ADN. Las bases nitrogenadas son Pirimidinas un Heterociclo Aromtico y Purinas una Pirimidina combinada con un anillo Imidazol, tambin es aromtico. El N para las bases proviene del ciclo de la urea. La regulacin de la biosntesis de nucletidos es crucial, al igual que los aa, ya que se necesitan en pequeas cantidades, tienen cargas por lo que es necesario mantener el balance electroqumico, para que no varen los potenciales de membrana y las concentraciones osmticas dentro del citosol. La concentracin de nucletidos (excepto ATP) es muy baja, incluso menor a la necesaria para sintetizar DNA, por lo que pueden ser un factor limitante en la replicacin y transcripcin blanco farmacolgico Por lo tanto la sntesis de cidos nuclecos esta limitada por la sntesis de nucletidos. Muchas veces los procesos de replicacin y transcripcin se enlentecen debido a que no hay nucletidos disponibles. Dato importante para la farmacologa por las enfermedades con una alta tasa de replicacin. Biosntesis De Novo: Alto costo energtico, se necesita ATP y NADPH (Para reacciones que necesitan alta energa se necesita poder reductor) y GTP, para algunas reacciones. Los principales dadores de amoniaco dentro de la clula son los aa Glutamato, Glutamina y Aspartato. Como dador de azcar tenemos la Ribosa 5 Fosfato, en forma de un precursor que se llama fosforibosilpirofosfato (PRPP). Tambin hay aporte de carbono (CO2) y Nitrgeno (NH3). Precursor de las Pirimidinas es el aa Aspartato y el precursor para las Purinas es Glicina.

Biosntesis de Salvamiento o Recuperacin: Tiene un bajo costo energtico, recicla bases libres y nuclesidos liberados de la degradacin de cidos nuclecos, principalmente intermediarios del ciclo de la urea, las bases libres no son intermediarios del la biosntesis De Novo. Biosntesis De Novo PURINAS (AMP y GMP) A partir de PRPP, dador de azcar y Glutamina, dador del grupo amino. Primero la clula toma la Ribosa (desde PRPP) y va fabricando sobre ella el anillo de Purina, hasta formar un intermediario llamado IMC (Inocina monofosfato), intermediario principal para la formacin de nucletidos definitivos AMP Y GMP. PRPP: Punto de inicio La formacin de PRPP, es uno de los puntos ms regulados. La enzima Sintetasa de PRPP, realiza una pirofosforilacin de la ribosa y utiliza ATP como dador de fosfato y libera AMP. Las fosforilaciones sirven para activar procesos, como un enlace de alta energa, los ataques nucleoflicos o las reacciones se dirijan hacia una molcula o tomo determinado. Los enlaces fosfato son negativos, por lo tanto alteran cualquier molcula orgnica que est presente. Mientras ms fosfato ms espontnea (exergnica) ser la reaccin, por lo tanto se va a favorecer mucho ms la formacin del producto. 1 Reaccin: El PRPP va a activar la transferencia de un grupo amino desde la Glutamina al carbono uno del PRPP, formando una Fosforibosilamina. La enzima que lleva a cabo esta reaccin es la Glutamina PRPP Amidotransferasa. A partir de este nitrgeno se empieza a construir el anillo imidazol de purina unido a una ribosa. Este producto es altamente reactivo, lo que produce que interacte con la Glicina. 2 Reaccin: La Glicina no es un a muy reactivo, pero es un donante de tomos de C. Por lo tanto la formacin del intermediario Fosforibosilamina, permite que se le sumen dos tomos de C y un amino, con gasto de ATP. La enzima que participa en esta reaccin es la GLicinamida Ribonucletido sintetasa (GAR Sintetasa). 3 Reaccin: El ltimo C, para completar el primer anillo es donado por el Tetrahidrofolato, a diferencia de la biosntesis de lpidos y glcidos, en la biosntesis de a y nucletidos las carboxilaciones mediadas por el Tetrahidrofolato, quien reacciona con CO2, formando el Forniltetrahidrofolato y este fornil, que tiene el C, se va a unir a la cadena de Purina en formacin. Se agrega un grupo formil (-CHO) al grupo amino libre, por la enzima GAR Transformilasa 4 Reaccin: Por lo tanto ya tenemos todos los tomos para formar el anillo imidazol y lo nico que falta es cerrar el ciclo. En esta reaccin (cerrar el ciclo) ocurren dos pasos, el primero es la adiccin del grupo amino desde la glutamina hacia el anillo pirrlico, con gasto de ATP, para comenzar a formar el segundo ciclo, lo que genera una reactividad en el grupo amino. Glutamina dona un segundo N para empezar a formar el anillo pirimidina de la purina (antes de cerrar el anillo imidazol) Consumo 1ATP, la enzima de la reaccin es la FGAR Amidotransferasa.

5 Reaccin: La enzima AIR Sintetasa, forma el aminoimidazol ribonucletido, que es el imidazol cerrado ms un amino unido a la ribosa. La reaccin gasta ATP y sufre una deshidratacin, por lo que la enzima es una Sintetasa. Con esto ya est formado el anillo pirrlico y faltan 3 tomos para formar el anillo de Pirimidina. 6 y 7Reaccin: Sumar carbono, la adicin de C ocurre en forma secuencial en bacterias y en un solo paso en eucariontes. La reaccin es mediada por CAIR, que en un proceso dependiente de CO2 va a sumar un cido carboxlico al AIR, disminuyendo el consumo de ATP y haciendo ms eficiente la reaccin. Bacterias y hongos: grupo carboxilo (COO-) proveniente de bicarbonato al amino (paso 6, 1ATP) y por reordenamiento se transfiere al C del imidazol (paso 7). Eucariontes: Carboxilacin directa del imidazol en 1 paso (6a). Lo que viene es seguir sumando N y C. 8 y 9 Reaccin: El N proviene del Aspartato, en un proceso dependiente de ATP, en consecuencia se libera fumarato. Aspartato dona grupo amino en 2 pasos: -formacin enlace amida (1ATP) -eliminacin del esqueleto de C del aspartato (como fumarato) Las enzimas de estas reacciones son SAICAR Sintetasa y SAICAR Liasa. 10 Reaccin: El ltimo C tambin proviene del Formiltetrahidrofolato y ya se puede formar el ciclo de 6 tomos. La enzima que participa es la AICAR Transformilasa. 11 Reaccin: Esta es la ltima reaccin, la reaccin de cierre del ciclo, catabolizada por la enzima IMP Sintasa. Se cierra el anillo pirimidina, purina queda con los dos anillos completos IMP (inositol monofosfato o Inosinato). Es el primer intermediario. Una sintasa no requiere ATP. El Inositol monofosfato es la purina base, a partir de esta purina se forma el A y G. Resumen Biosntesis de Novo Dos C proviene del formato (Tetrahidrofolato), dos aminas que provienen de la Glutamina y otro que proviene del Aspartato, un esqueleto carbonado que viene de la Glicina (junto al otro N) y un C que proviene del CO2. Adems se forma Fumarato como intermediario metablico. Sntesis de AMP (producto final) a partir de IMP: (Adenilato) Es un proceso dependiente de energa pero no utiliza ATP, utiliza GTP como dador de energa. La diferencia entre un Inositol y el Adenilato es el cambio de un carbonilo por una amina. La formacin de Adenilato ocurre en dos pasos, primero la formacin de Adenilosuccinato por la enzima Adenilosuccinato Sintetasa, en el segundo paso una Adenilosuccinato Liasa corta el esqueleto de tomos de C, proveniente del Aspartato liberando Fumarato. Aspartato dona grupo amino en 2 pasos: -formacin enlace amida (1GTP) -eliminacin del esqueleto de C del aspartato (como fumarato) Similar que pasos 8 y 9 de sntesis de IMP.

Sntesis de GMP (producto final) a partir de IMP. Para sintetizar GMP se utiliza ATP, este paso necesita una oxidacin por la diferencia entre el Inositato y el Guanilato; oxidacin de CH a C=O y adicin de grupo amino. La Oxidacin de C2 de IMP requiere NAD+ por lo que se forma NADH y la Adicin del grupo amino requiere ATP. Adems se forme un intermediario llamado Santilato, intermediario del ciclo de la urea. La Glutamina es el dador de N. Regulacin: Inhibicin por retroalimentacin (Inhibicin por producto)

1 reaccin Formacin de PRPP-NH2 Glutamina PRPP amidotransferas a

II
Formacin de Xantilato IMP deshidrogenasa IMPGMP Formacin de Adenilsuccinato adenilsuccinato sintasa IMPAMP

GTP para formar AMP ATP para formar GMP

III

IV
Sntesis de PRPP Ribosa fosfato pirofosfoquinasa

(-) GMP (-) Inhibida por: IMP, AMP y GMP (-) AMP Inhibicin directa del producto que se forma

Arreglo recproco para balancear la sntesis de ambos

(-) ADP y GDP (-) metabolitos de otras vas que empiezan con PRPP

III: Nivel de regulacin para los nucletidos trifosfato. Por ejemplo si queremos aumentar la sntesis de GMP, necesitamos aumentar los niveles de ATP y si queremos aumentar la sntesis de AMP, se requiere aumentar los niveles de GTP. Al contrario si queremos disminuir la sntesis de AMP, reducimos las concentraciones de GTP. Por Lo tanto si necesitamos energa para otras funciones por ejemplo, biosntesis de lpidos o de glcidos, contraccin muscular o movimiento del citoesqueleto, vamos a gastar ms ATP, por lo que la formacin de GMP se va a ver reducida. Si reducimos estos mononucletidos, se van a reducir los Trinucletidos y por lo tanto se va a reducir la sntesis de ADN o ARN. El ltimo punto de regulcin es la sntesis propia de PRPP a partir de ribosa 5Pi (primera reaccin). Se regula por ADP y GTP y metabolitos de otras vas que requieren PRPP, como la biosntesis de algunos a, principalmente los aromticos. Conversin de nucletidos monofosfato a nucletidos Trifosfato Adenilato quinasa: Esta enzima entrega fosfato. Utiliza ATP como donador de fosfato y AMP como sustrato. ATP + AMP = 2ADP

 Enzimas glicolticas, fosforilacin oxidativa: Tambin va de las pentosas, B- Oxidacin, etc. ADP ATP Nuclesido monofosfato quinasas (especifica para base, no azcar): Para otros nucletidos que no sean ATP, como GTP (desde GMP), Aqu N representa cualquier base nitrogenada, tanto prica como pirimdica. Tenemos un nucletido monofosfato X en presencia de ATP y la enzima Nuclesido monofosfato quinasa va a generar ADP ms otro nucletido difosfato, como GDP. ATP + NMP = ADP + NDP Nuclesido difosfato quinasas (inespecfica para base y azcar): Para formar un nucletido trifosfato, existe esta enzima. Donde va a haber un nucletido trifosfato dador como ATP, GTP o el que este en exceso y el nucletido difosfato aceptor que est en menor []. Por lo tanto la Reaccin es una transferencia de grupo fosfato, en donde el dador al perder un fosfato, se va a transformar en un nucletido bifosfato y el aceptor al ganar un fosfato, se va a transformar en un nucletido trifosfato. Si tenemos mucho ATP, podemos formar G, C, U y T trifofato. NTPD + NDPA = NDPD + NTPA (ATP) D: donador de fosfato; A: aceptor de fosfato Biosntesis De Novo PIRIMIDINAS (CTP y UTP) Se forman a partir de Aspartato, PRPP y Carbamoil Fosfato (intermediario del ciclo de la urea). En el caso de las Pirimidinas primero se forma el anillo y despus se pega el azcar, para formar nucletidos trifosfatados. Reaccin: Formacin de carbamoil fosfato, parte del ciclo de la urea, sintetizado en la mitocondria, este carbamoil fosfato no se ocupa, se ocupa el que se forma en el citosol, que est sintetizado por una carbamoil sintetasa II, la cual tiene la misma va de formacin a partir de bicarbonato y ATP, formando Carbamato, como intermediario y en un proceso dependiente de ATP se va a formar el carbomoil fosfato que en presencia de Aspartato, se convierte en el intermediario llamado L- Dihidroorotato, de 6 tomos, intermediario que se va a ciclar. En bacterias este proceso ocurre con tres enzimas distintas la carbamoil fosfato Sintetasa, destinada a cidos nuclecos, la Aspartato Carbamoilasa que condensa ambas molculas y la Dihidroorotato. En eucariontes slo existe una enzima multifuncional llamada CAD, que realiza la accin de estas tres enzimas. A partir del Dihidroorotato se forma el orotato, el cual se va a unir a la ribosa que va a estar en la forma de PRPP, y se va a formar la orotidilato, Pirimidina base, desde aqu se van a formar la uridina monofosfato por una descarboxilacin, luego se va a fosforilar y se transforma en uridina trifosfato, que por adicin de una amida desde la Glutamina, se transforma en citidina trifosfato (CTP), por lo tanto en la biosntesis de las Pirimidinas no tenemos nucletidos monofosfatos, sino que inmediatamente se obtiene nucletidos trifosfatos.

REGULACIN: Inhibicin alostrica por CTP Inhibe la CAD. El problema respecto a la regulacin en comparacin con las purinas es que la inhibicin en este caso provoca que no se sintetice ninguna Pirimidina, en cambio en la purinas dependiendo del tipo de regulacin, podamos mantener la sntesis de una u otra purina. El CTP, es un regulador alostrico, genera un cambio conformacional que evita que el sustrato entre al sitio activo y el ATP evita el cambio conformacional en CAD, inducido por GTP. Retornando la enzima a los valores normales. Si hay bajo ATP va a haber bajo GMP y por lo tanto GTP, por lo que no se podrn formar cidos nuclecos, al no haber purinas, para que no se acumulen las Pirimidinas baja el ATP y hay una cantidad suficiente de CTP para inhibir a las Pirimidinas. De esa forma podemos esperar que haya una cantidad suficiente de purinas, para transcribir o traducir el ADN o ARN. RIBONUCLETIDO DEOXIRRIBONUCLETIDO Las biosntesis de novo eran todas de ribonucletidos, porque partan de la ribosa-5Pi. A continuacin deben perder un O2, para convertirse en Desoxirribonucletidos y as formar ADN. Esta transformacin requiere una reduccin mediada por la enzima llamada Ribonucletido Reductasa que reduce C2 de D-ribosa para formar el derivado 2-deoxi, va a eliminar un hidroxilo en forma de agua, el hidruro lo va a donar el NADPH (2 H), transportados por la protena inermediaria Tioredoxina o Glutaredoxina. As se transforma una ribosa difosfato en una desoxiribosa difosfato. El NDPH va a transferir los protones al glutatin, el cual lo traspasa a una protena llamada Glutaredoxina, que va a ser el dador final de estos hidrgenos, es decir en su forma reducida va a entregar sus protones a la enzima Ribonucletido reductasa, que pasa de una forma oxidada a una reducida, por lo que el traspaso de estos protones permite formar el desorribonucletido y agua. Es una cadena de transporte de hidrgeno. Las clulas eucariontes y las que tienen mucho Glutatin, ocupan Glutaredoxina. Las clulas sin glutatin ocupan otra enzima, protena dadora llamada Tioredoxina, aqu la transferencia de H depende de FAD. REGULACIN DE RIBONUCLEOTIDO REDUCTASA: actividad y especificidad por su sustrato Tenemos los 4 ribonucletidos difosfato (ADP, CTP, UTP y GTP). Hay una regulacin alostrica positiva por ATP y una regulacin alostrica negativa por dATP. La presencia de ATP favorece la formacin de desoxirribonucletido y la presencia de dATP inhibe su formacin. Tambin hay una regulacin sustrato especfica o una regulacin en los sitios activos de la enzima. La regulacin por dGTP inhibe la sntesis de si mismo (regulacin por producto) y favorece sntesis de dATP. El dTTP se va a inhibir asi mismo, inhibicin por sustrato y va a activar la formacin de dGDP. El dATP va a favorecer la sntesis de Pirimidinas, desoxipirimidinas y fosfato, dCDP y dCTP. Formacin de deoxinucletido de Timina (timidilato) Se necesita para la sntesis de ADN, se forma a partir de UDP o CDP. El intermediario comn es dUTP, que se va a desfosforilar y la enzima timidilato sintasa transforma el dUMP en dTMP.

Recuperacin de purinas y Pirimidinas Existen varias formas de reciclar los nucletidos uno es por la enzima Adenosina Fosforibosiltransferasa, que recicla la Adenina libre, de la degradacin de nucletidos y la fosforiliza, utilizando PRPP, obteniendo AMP y 2Pi. En el reciclaje de los cidos nuclecos se degradan hasta un punto donde estn las bases nitrogenadas libres y de ah entran a procesos catablicos para transformarse en intermediarios del ciclo de la urea. Las alteraciones en el catabolismo de los nucletidos forma enfermedades como la gota, acumulacin de cristales de urea, por un alto consumo de protenas o por dficit de la enzima que recicla nucletidos, que genera deficiencia en el reciclaje de nucletidos por lo que la cantidad de urea aumenta y se cristaliza, principalmente en las articulaciones. Sindrome de Lesch-Nyhan Carencia gentica de Hipoxantina-guanina fosforibosiltransferasa La cual al reciclar permite la formacin de GMP. La enzima se forma por PRPP, si la enzima no se sintetiza los altos nivele de PRPP, producen una sobreproduccin de novo, lo que genera una alta concentracin de cido rico, por lo tanto se forma la gota. Los altos niveles de cido rico generan una dao neurolgico en los nios con este sntoma. Bases sintticas para farmacologa Ejemplos: 5-yodo-2-desoxiuridina(anlogo de timidina) queratitis heptica 5-fluorouracilo (anlogo de timina) infecciones virales y cancer 6-mercaptopurina usados en trasplantes de rganos Alopurinol (anlogo de purinas) hiperuricemia y gota Se necesita inhibir la sntesis de cidos nuclecos para el transplante de rganos, para inhibir la formacin de anticuerpos (Inmunosuprecin).