Tincin de Gram

La tincin de Gram es usada para clasificar bacterias sobre la base de sus formas, tamaos, morfologas celulares y reaccin Gram (color). Las bacterias se tien gram positivas (+), gram negativas () o no se tien debido a sus diferencias en la composicin de su pared y arquitectura celular. Las bacterias gram (+)se visualizan de color moradas tienen una gruesa capa de pptidoglucano y gran cantidad de cidos teicicos que no son afectados por la decoloracin con alcohol y/o acetona, reteniendo el colorante inicial acomplejado con iodo y visualizndose en distintos grados de tonos desde el violeta al azul claro, dependiendo de si la naturaleza de su pared celular est intacta o daada (por tratamientos antibiticos, edad celular). Las bacterias gram ()se visualizan de color rosa o rojo o grosella, tienen en su pared celular una delgada capa de peptidoglucano ligada a una membrana externa por molculas de lipopolisacridos. Esta membrana externa es daada por el alcohol y/o acetona de la decoloracin, permitiendo que el primer colorante acomplejado con iodo escape y sea reemplazado por el contracolorante. Clsicamente los reactivos utilizados para la realizacin de la tincin de Gram han sido el cristal violeta como colorante inicial, la solucin de lugol para acomplejar a ste, el alcohol y/o acetona para la decoloracin y la safranina o fucsina bsica como contracolorante.

OBJETIVOS Conocer la tcnica de tincin de Gram., conocer el procedimiento y observar las bacterias en microscopio clasificndolas en Gram. Positivas y Gram. Negativas. Utilizar correctamente los materiales en esta tcnica de tincin.

MATERIALES Soluciones de, cristal violeta, yodo lugol, acetona, safranina. Microscopio mecheros Aceite de inmersin Asas bacteriolgicas Agua destilada Vaso de precipitado de 50 ml Cajas petri con medio de cultivo Campo de esterilizacin Papel secante Torundas de algodn Metodologa: Recoger muestras. Hacer el extendido en espiral. Dejar secar a temperatura ambiente. Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado 3 veces aprox.) Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar 1 min. Todas las clulas gram positivas y gram negativas se tien de color azul-purpura. Enjuagar con agua. Agregar lugol y esperar entre 1 minuto. Enjuagar con agua. Agregar acetona y/o alcohol y esperar 4 segundos (parte critica de la coloracion) Enjuagar con agua. Tincin de contraste agregando safranina o fucsina bsica y esperar 1-2 min Este tinte dejar de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.