Inmunología

Manual de Prcticas de Inmunologa
6 de enero de 2009
MANUAL DE PRCTICAS DE INMUNOLOGA

D-RS-05-18-03
Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia
Universidad Autnoma de Tamaulipas
Fecha de terminacin: 6 de enero de 2009
Elaborador: Dr. Jess Genaro Snchez Martnez, Bil, M.Sc., Ph.D.
Revisor: Recepcin por el H. Consejo Tcnico:
Tcnico Laboratorista: Micaela Alcocer P.

REV.1.
Dr. Jess Genaro Snchez Martnez
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Directorio Institucional
Rector M.E.S. JOSE Ma. LEAL GUTIERREZ Secretaria General DRA. OLGA HERNANDEZ LIMON Subsecretario Acadmico ING. JOSE ANDRES SUAREZ FERNANDEZ Subsecretario Administrativo ING. MARCO ANTONIO DELGADO BARRIO
Directorio FMVZ Director M.C. JORGE LUIS ZERTUCHE RODRIGUEZ Secretario Acadmico MVZ. FRANCISCO GUZMN SENZ Secretario Administrativo MVZ. ERNESTO LERMA DORIA.
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INDICE
DIRECTORIO INSTITUCIONAL ............................................................................. 2 I N D I C E ............................................................................................................... 3 PRCTICAS DE INMUNOLOGA........................................................................... 4 COMPETENCIAS PROFESIONALES .................................................................... 4 NIVELES DE DESEMPEO ................................................................................... 4 PROGRAMA DEL SISTEMA DE PRCTICAS ...................................................... 6 PRCTICAS GENERALES DE SEGURIDAD. REGLAMENTOS Y PROCEDIMIENTOS GENERALES ........................................................................ 8 BIOSEGURIDAD ................................................................................................. 8 NORMAS BASICAS PARA PREVENIR ACCIDENTES EN EL LABORATORIO 8 REGLAMENTO DEL LABORATORIO DE VIROLOGA E INMUNOLOGA ..... 9 CRITERIOS DE DESEMPEO COMUNES A TODAS LAS PRCTICAS ........... 10 EVIDENCIAS PARA CADA CRITERIO DE DESEMPEO .................................. 11 BIBLIOGRAFA COMN A TODAS LAS PRCTICAS ....................................... 11 PRACTICA NO. 1 RESISTENCIA NATURAL INESPECIFICA .......................... 12 PRACTICA NO. 2 PODER BACTERICIDA DEL SUERO NORMAL ................. 17 PRACTICA NO. 3 TITULACION DE UN ANTIGENO DE SUPERFICIE ............ 23 PRCTICA NO. 4 PURIFICACION DE LA SANGRE POR EL SISTEMA RETICULO ENDOTELIAL. ................................................................................... 28 PRCTICA NO. 5 CONTEO DIFERENCIAL LEUCOCITARIO.......................... 33 PRCTICA NO. 6 ANTGENOS DE SUPERFICIE CELULAR .......................... 39 PRCTICA NO. 7 PREPARACION DE UNA BACTERINA ............................... 44 PRCTICA NO. 8: DIAGNOSTICO DE BRUCELOSIS (PRUEBA DE AGLUTINACION EN TUBO)................................................................................. 51 PRCTICA NO. 9 DIAGNOSTICO DE BRUCELOSIS (PRUEBA DE AGLUTINACION EN TARJETA). ......................................................................... 57 SISTEMA DE EVALUACIN. ............................................................................... 61 INSTRUCCIONES PARA EL FORMATO GENERAL DE LOS REPORTES POR ESCRITO .............................................................................................................. 62
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Prcticas de Inmunologa Presentacin

Las ltimas dcadas han sido testigo de grandes avances en el desarrollo de los conocimientos de los mecanismos moleculares que permiten el funcionamiento exacto del sistema inmune, derivado de la aplicacin de tcnicas y mtodos antiguos y recientes. Este Manual de Practicas de Inmunologa recopila mltiples tcnicas que son tiles para diferentes reas de la inmunologa. Este manual, como complemento del curso de Inmunologa, te permitir como alumno comprender las bases de la respuesta inmune, as como la obtencin de muestras que te servirn para diagnstico. Las prcticas sobre obtencin de antgenos, preparacin de inmungenos y tcnicas de inmunizacin van ligadas a la obtencin de efectores de la respuesta inmune humoral: obtencin de antisueros y precipitacin de gamma-globulinas. Una vez que como alumno hayas adquirido estos conocimientos, los emplears endiferentes mtodos de deteccin de sistemas antgeno-anticuerpo, realizando precipitaciones y aglutinaciones. Includas en estas prcticas se encuentran tcnicas de aplicacin clnica, resaltando las de aplicacin veterinaria.
Competencias Profesionales Este manual de prcticas contribuye a tu formacin profesional ayudndote a comprender los mtodos de defensa de los diferentes organismos y a hacer uso de mtodos serolgicos para la realizacin de diagnsticos presuntivos durante tu desarrollo profesional.
Niveles de Desempeo Al terminar el desarrollo durante el semestre de ste manual de prcticas sers capaz de tener un nivel de desempeo de Nivel 3, ya que podrs trabajar solo o en equipo durante el desarrollo de actividades complejas de laboratorio, como titulacin de antgenos, produccin de bacterinas, y diagnstico de enfermedades, despus de recibir instrucciones, trabajando con un grado
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moderado de responsabilidad, y desarrollando un nivel importante de toma de decisiones.
Nivel 1.- Se realizan funciones rutinarias de baja complejidad. Se reciben instrucciones. Se requiere baja autonoma. Nivel 2.- Se realizan un conjunto significativo de actividades de trabajo, variadas y aplicadas en diversos contextos. Algunas actividades son complejas y no rutinarias. Presenta un bajo grado de responsabilidad y autonoma en las decisiones. A menudo requiere colaboracin con otros y trabajo en equipo. Nivel 3.- Se requiere un importante nivel de toma de decisiones. Tiene bajo su responsabilidad recurso materiales con los que opera su rea. As como control de recursos financieros para adquisicin de insumos, responsabilidades comparables. Nivel 4.- Se desarrollan un conjunto de actividades de naturaleza diversa, en las que se tiene que mostrar creatividad y recursos para conciliar intereses. Se debe tener habilidad para motivar y dirigir grupos de trabajo. Nivel 5.- Se desarrollan un conjunto de actividades de naturaleza diversa, en las que se tiene que mostrar un alto nivel de creatividad, as como buscar y lograr la cooperacin entre grupos e individuos que participan en la implantacin de la solucin a un problema de magnitud institucional.
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PROGRAMA DEL SISTEMA DE PRCTICAS

Tema Prctica o prcticas programadas mbitos de desarrollo Duracin en horas para cada prctica, y semana del semestre en que se realizar
1 hora por sesin. Semanas 2, 3 y 5. 1 hora. Semana 4. 1 hora por sesin. Semanas 6, 7 y 8 1 hora por sesin. Semanas 9 y 10.
Inmunidad Innata Antgenos y Antigenicidad Inmunidad Especfica Tcnicas de Diagnstico
1, 2, y 4
Laboratorio
Laboratorio
5, 6 y 7
Laboratorio
8y9
Laboratorio
Nombre de la Prctica
Tiempo
Nivel de Desempeo 2 2 2 2
Prctica no. 1: RESISTENCIA NATURAL INESPECIFICA Prctica no. 2: PODER BACTERICIDA DEL SUERO NORMAL Prctica no. 3: TITULACION DE UN ANTIGENO DE SUPERFICIE Prctica no. 4 PURIFICACION DE LA SANGRE POR EL SISTEMA
1 Hora 1 Hora 1 Hora 1 Hora
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RETICULO ENDOTELIAL Prctica no. 5: CONTEO DIFERENCIAL LEUCOCITARIO Prctica no. 6: GRUPOS SANGUINEOS. ERITROCITICOS Prctica no. 7: PREPARACION DE UNA BACTERINA Prctica no. 8: DIAGNOSTICO DE BRUCELOSIS PRUEBA DE AGLUTINACION EN TUBO Prctica no. 9: DIAGNOSTICO DE BRUCELOSIS (PRUEBA DE AGLUTINACION EN TARJETA) Total de horas 1 Hora 1 Hora 1 Hora 1 Hora 2 3 3 3
1 Hora
Ho ras
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PRCTICAS GENERALES DE SEGURIDAD. REGLAMENTOS Y PROCEDIMIENTOS GENERALES

BIOSEGURIDAD
La bioseguridad es el manejo tcnico adecuado en un laboratorio cuya eficiencia en gran parte refleja el entrenamiento del personal, adems de significar la proteccin individual. La observancia de sus lineamientos repercute en la calidad de los resultados del laboratorio. El trabajo que se realiza en los laboratorios siempre implica riesgos especiales de contagio de enfermedades infecciosas para el personal que labora en ellos. Es por ello que cada laboratorio debe implementar medidas de bioseguridad correspondientes a la peligrosidad de los agentes que maneja, y tener un control estricto para que estas medidas se lleven a cabo.
NORMAS BASICAS PARA PREVENIR ACCIDENTES EN EL LABORATORIO

a).- No debes pipetear con la boca b).-No te est permitido comer, beber, fumar, almacenar alimentos, aplicarte cosmticos etc., en el rea de trabajo de laboratorio. c).-Debes mantener el laboratorio libre de materiales no relacionados con la prctica en curso. d).-Debers lavarte las manos despus de manipular agentes infecciosos y no infecciosos, animales, material contaminado, y cuando abandones el laboratorio. e).-Mantendrs la superficie de trabajo de trabajo individual (mesas) descontaminada, para lo cual usars un papel absorbente esponja o gasa humedecida con un desinfectante al iniciar y finalizar cada prctica. f).-Realizars todos los procedimientos cuidadosamente para evitar contaminacin y obtener los resultados correctos. g).-Descontaminars todo residuo contaminado lquido y slido mediante esterilizacin (autoclave) antes de ser desechado. h).-Debers utilizar guantes durante aquellos procedimientos que impliquen contacto directo con material infeccioso. EN CASO DE EMERGENCIA DEBERS RECURRIR AL RESPONSABLE DEL AREA.
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REGLAMENTO DEL LABORATORIO DE VIROLOGA E INMUNOLOGA

1.- Los alumnos debern entrar al laboratorio utilizando una bata blanca limpia y debidamente abrochada. 2.- No se permite introducir o ingerir bebidas y alimentos en el laboratorio. 3.- Los alumnos debern presentarse a sus prcticas con su manual del laboratorio correspondiente y materiales que se les haya solicitado previamente. 4.- Los alumnos no podrn entrar al laboratorio despus de 5 minutos de haberse iniciado la prctica. 5.- Una vez en el laboratorio, los alumnos no podrn salir del mismo hasta que finalice la prctica salvo por indicacin expresa del instructor. 6.- Durante la realizacin de la prctica los alumnos debern respetar el rea de trabajo de los diferentes equipos y guardar un buen comportamiento. 7.- Al concluir la prctica, los alumnos debern limpiar debidamente su rea de trabajo y dejar los instrumentos y reactivos ordenados. 8.- La basura orgnica, inorgnica o contaminada resultante de la prctica deber ser depositada en el recipiente correspondiente. 9.- El alumno que sea sorprendido manchando o rayando las mesas de trabajo o las paredes del laboratorio se har acreedor al pago correspondiente para su reparacin. 10.- Cuando la prctica involucre la utilizacin de algn animal vivo, los alumnos debern tratarlos humansticamente y evitar el maltrato de los mismos. 11.- Solamente el coordinador del edificio y el jefe del laboratorio podrn autorizar el uso del laboratorio. Cualquier sancin por el incumplimiento del reglamento ser aplicado por el jefe del laboratorio, el coordinador del edificio o la administracin de la facultad segn sea requerida. Dr. Andrew Charles Snydelaar H. Jefe del laboratorio de Virologa Multidisciplinario II y de Inmunologa. M.C. Jaime Rbago Castro. Coordinador del Edificio
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CRITERIOS DE DESEMPEO COMUNES A TODAS LAS PRCTICAS
Cuando: (criterios de desempeo) Leers las instrucciones y los procedimientos a realizar durante la prctica. Llegars 5 minutos antes del inicio de la prctica al laboratorio. Te presentars con la indumentaria y el material adecuado Antes requerido por la prctica. Acomodars el material necesario para la prctica en tu mesa de laboratorio de acuerdo a las instrucciones del facilitador.
Durante
Despus
Limpiars tu rea de trabajo. Dispondrs de los desechos en los lugares indicados por el instructor. Entregars un reporte con las observaciones y discusiones generadas durante la prctica. En las prcticas que lo requieran, entregars un dictamen del resultado de la prctica. Guardars tus prcticas revisadas y firmadas por el facilitador para conformar tu portafolios de evidencias.
tem
Resultados Esperados Entregars un reporte de la prctica.
Tiempo de trmino 2 das despus de la prctica.
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EVIDENCIAS PARA CADA CRITERIO DE DESEMPEO

Criterio de desempeo Te informars de las instrucciones y los procedimientos a realizar durante la prctica. Llegars 5 minutos antes del inicio de la prctica al laboratorio. Te presentars con la indumentaria y el material adecuado requerido por la prctica. Acomodars el material necesario para la prctica en tu mesa de laboratorio de acuerdo a las instrucciones del facilitador. Limpiars tu rea de trabajo Evidencia propuesta (descripcin) Estars familiarizado con los procedimientos de la prctica. Estars en tu lugar de trabajo cuando el facilitador inicie la prctica. Tendrs tu bata de laboratorio puesta y tu material de trabajo sobre la mesa. Tu material estar acomodado de manera que te facilite el desarrollo de la prctica.
Tu rea de trabajo estar limpia al terminar la prctica Dispondrs de los desechos en Los desechos estarn en los lugares los lugares indicados por el correspondientes. instructor Entregars un reporte con las Reporte por escrito de la prctica. observaciones y conclusiones de la prctica Presentars las evidencias de Anexars evidencias al reporte de prctica. desempeo especificadas en cada prctica. Presentars tu portafolios de Entregars el portafolios de evidencias con evidencias al finalizar el curso todas tus practicas calificadas.
BIBLIOGRAFA COMN A TODAS LAS PRCTICAS

Tizard. Inmunologa Veterinaria. 6 Edicin McGraw-Hill.
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Abbas, A.K. y Lichtman, A.H. Inmunologa celular y molecular. 5 Edicin. Saunders
PRACTICA No. 1 RESISTENCIA NATURAL INESPECIFICA

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Dr. Jess Genaro Snchez Martnez.
Lisozima
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Nmero de profesionales en formacin por unidad de prctica: 5/equipo
Introduccin
En muchas enfermedades el desenlace de la misma comnmente es decidida antes de que los anticuerpos puedan producir una accin efectiva. Los mecanismos de resistencia involucrados no son completamente entendidos en la actualidad pero indudablemente vara en relacin al agente, el hospedador y la va de entrada.
Objetivo de la prctica
Demostrars la presencia de lisozimas en exudados lagrimales para determinar la presencia de inmunidad innata no especfica en lquidos corporales.
Criterios de desempeo durante la prctica

Manejars con cuidado y de acuerdo a las instrucciones del facilitador el cultivo bacteriano. La obtencin de secrecin lagrimal se realizar teniendo cuidado de no causar dao al sujeto de estudio, segn la metodologa establecida en el desarrollo de la prctica. Mantendrs condiciones de esterilidad durante la prctica. Discutirs con tu equipo y en grupo los resultados obtenidos. tem Resultados Esperados Entregars un reporte de la prctica. Tiempo de trmino Un da despus de la prctica.
Normas de seguridad especficas de la prctica.

Tipo de peligro Contaminacin bacteriana Como evitarlo Mantener esterilidad Esterilizar el asa bacteriolgica antes y despus de usarla. Como proceder en caso de un accidente Informar al facilitador. Lavar con agua y jabn el rea afectada
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Cuadro de disposicin de desechos

Tipo de desechos Biolgicos Como descartarlos Esterilizacin por autoclave Tipo de contenedor Bolsas para desechos biolgicos
Desarrollo de la prctica
Esta prctica se desarrollar en 4 momentos Primer Momento: Toma de lista y revisin de la indumentaria adecuada y materiales para la prctica. Segundo Momento: Procedimiento de la prctica. Tercer Momento: Discusin en equipo y en grupo de los resultados de la prctica Cuarto Momento: Entrega de reporte con evidencia de desempeo.
Materiales.
Solucin salina fisiolgica Tubos de ensaye con tapn de rosca estriles Hisopos estriles 2 Solucin salina fisiolgica Cultivo de Micrococos luteus Papel filtro, una tira Asa bacteriolgica Una placa de agar soya tripticasena Mecheros Gradilla Pipetas de 5ml.
Procedimiento.
1.- Aade 5ml de suero fisiolgico a un tubo estril. 2.-Con la punta de un hisopo estril obtn una muestra de un cultivo con Micrococos luteus y mzclala en la solucin salina, la turbidez producida en el tubo ser notoria 3.-De esta solucin turbia pon un ml en cada uno de dos tubos. 4.-Humedece con secreciones lagrimales una pequea tira de papel de filtro estril, poniendo un extremo en el saco conjuntival inferior, y cerrando el parpado encima de l.
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5.-Corta la porcin humedecida de la tira y djalo caer en uno de los tubos. 6.- En el otro tubo corta y deja caer una porcin no tratada del papel filtro para que este sirva de testigo. 7.-Agita bien los tubos y obsrvalos en 30 minutos. 8.-Toma un hisopo estril, sumerje la punta en una solucin original de M. luteus y realiza una siembra en una caja de petri con agar de soya tripticasena. 9.-Divide en dos partes una placa de agar soya tripticasena y en un lado de la placa pon una tira de papel filtro con lisozima, al otro lado ponga una tira no tratada como testigo. Observaciones El tubo con lisozima continuara turbio mientras que el que contiene lisozima se volver totalmente transparente. El lado testigo de la caja de petri tendr micrococos creciendo en todo su alrededor, mientras que el lado de la caja con la lisozima tendr mostrar un rea limpia y clara a su alrededor debido a la accin inhibidora de la lisozima.
Medidas de bioseguridad. Mantener la esterilidad en todo momento.
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Evidencias de desempeo:
Reportars por escrito* los resultados obtenidos en la prctica 2 das despus de la misma. En tu reporte describirs de manera sucinta y clara el objetivo de la misma, la metodologa usada y los resultados obtenidos. Documentars con una foto la ausencia de contaminacin en las placas de Petri. Adems analizars y discutir las observaciones hechas durante la prctica y describirs la manera como stas impactan en tu formacin. Al final de tu reporte por escrito, contestars el siguiente cuestionario de evaluacin: 1. Qu es la lizosima? 2. Qu funcin tiene la inmunidad innata en la proteccin de un organismo? 3. Por qu no hubo crecimiento bacteriano en la mitad de la placa con el papel filtro impregnado de lgrimas? 4. Que otros ejemplos de imnunidad innata puede mencionar? *Ver instrucciones para el formato general de los reportes por escrito al final de este manual de prcticas.
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PRACTICA No. 2 PODER BACTERICIDA DEL SUERO NORMAL

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Introduccin
El suero normal fresco contiene sustancias capaces de matar microorganismos. Esta habilidad vara con la especie y el tipo de microorganismo, con certeza algo de esta actividad es debido a anticuerpos normales pero hay otros factores humorales tambin involucrados. Por ejemplo suero fresco no sometido a tratamiento trmico contiene una sustancia conocida como complemento la cual bajo ciertas condiciones juega un papel en la destruccin de microorganismos. Esta sustancia puede ser destruida si previamente es sometido el suero a un tratamiento trmico (56 durante 30 minutos). El propedn (una globulina presente C en el plasma sanguneo) es otro ejemplo de un conocido factor humoral que contribuye a la inmunidad innata.
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Reconocers los efectos que las sustancias bactericidas presentes en el suero normal tienen sobre patgenos bacterianos, para determinar la presencia o ausencia de factores de la inmunidad innata como el complemento en el suero.

Manejars con cuidado y de acuerdo a las instrucciones del facilitador el cultivo bacteriano. Mantendrs condiciones de esterilidad durante la prctica. Realizars diluciones de suero sanguneo. Demostrars los efectos de la inmunidad innata del suero en bacterias siguiendo la metodologa establecida en el desarrollo de la prctica. Discutirs en equipo y en grupo las observaciones obtenidas. tem Resultados Esperados Entregars un reporte de la prctica. Tiempo de trmino 2 das despus de la prctica.

Tipo de peligro Contaminacin bacteriana Como evitarlo Mantener esterilidad Esterilizar el asa bacteriolgica antes y despus de usarla. Manejar con cuidado pipetas, cajas de Petri y tubos de ensaye. Como proceder en caso de un accidente Informar al facilitador. Lavar con agua y jabn el rea afectada
Cortadura por Vidrios Rotos.
Lavar herida con agua y jabn. Informar al facilitador. Aplicar desinfectante y cubrir herida.

Tipo de desechos Biolgicos Como descartarlos Esterilizacin por autoclave Tipo de contenedor Bolsas para desechos biolgicos
Esta prctica se desarrollar en 4 momentos Primer Momento: Toma de lista y revisin de la indumentaria adecuada y
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materiales para la prctica. Segundo Momento: Procedimiento de la prctica. Tercer Momento: Discusin en equipo y en grupo de los resultados de la prctica Cuarto Momento: Entrega de reporte con evidencia de desempeo.
Materiales:
a).-Cultivos en caldo de E. coli y Staphylococos aureus b).-Solucin salina fisiolgica c).-Tubos de ensaye de 16 x 150 con tapn de rosca d).-Pipetas de 10 ml estriles e).-Pipetas de 1ml estriles 1/100 f).-Cajas de petri g).-Agar h).-Gradilla i).- Suero normal j).- Suero tratado con calor.
Procedimiento:
1.-Pon en una gradilla 5 tubos de ensayo. 2.-Prepara 5 diluciones de cada microorganismo en solucin salina estril de la manera siguiente a).-0.1 ml de cultivo en 9.9 ml de solucin salina estril 1:100 b).-0.1 ml de 1:100 en 9.9 de soluc8in salina estril 1:10,000 c).-1.0ml de 1:10,000 en 9.9mlde s0lucin salina estril -1:100,000 d).-1.0ml de 1:100,000 en 9.9 ml de solucin salina estril -1:1,000,000 e).-1.0ml de 1:1 milln en 9.9ml de solucin salina estril 1:10,000,000
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Nota: Utiliza una pipeta distinta para cada dilucin. 3.-Utilizando tcnicas aspticas, prepara 3 tubos para cada una de las 3 diluciones mayores de los dos microorganismos de la siguiente manera: a) 0.5 ml de suero sin tratamiento trmico + 0.5ml Dilucin del cultivo 1:100,000 b) 0.5 ml de Suero normal con tratamiento trmico + 0.5 ml Dilucin del cultivo 1:100,000 c) 0.5 ml de solucin salina estril + 0.5ml de Dilucin del cultivo 1:100,000 4.-Repite la operacin para las diluciones de cultivo de 1:1,000,000 y la de 1:10,000,000. 5.-Agita bien el contenido de todos los tubos(nueve por microorganismo) incuba a 37 en bao mara durante 1 hora. C 6.-Despus de incubar, pon el contenido de cada tubo en una caja de Petri estril debidamente rotulada. 7.-Agrega 10ml de agar (medio de cultivo) en cada caja de petri y agita suavemente de tal forma que se produzca una distribucin uniforme de microorganismos en el medio 8.-Despus de que el agar se haya solidificado, incuba a 37 durante 36 a 48 C horas. 9.-Despus de la incubacin realiza cuidadosamente conteos en las cajas de petri.
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Compara y explica los resultados: Organismo Nmero de organismos vivos restantes Suero tratado Suero sin tratar
Medidas de bioseguridad:
Asegurar que se trabaja de manera asptica en todo momento.
Reportars por escrito* los resultados obtenidos en la prctica 2 das despus de la misma. En tu reporte describirs de manera sucinta y clara el objetivo de la misma, la metodologa usada y los resultados obtenidos.
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Documenta la ausencia de contaminacin en tus placas con diluciones, y la exactitud de tus diluciones mediante una foto. Adems analizars y discutir las observaciones hechas durante la prctica y describirs la manera como stas impactan en tu formacin. Al final de tu reporte por escrito, contestars el siguiente cuestionario de evaluacin: 1. Qu es una dilucin seriada? 2. Que sucede al calentar elsuero? 3. Explique las diferencias que observa en la cantidad de colonias crecidas con los 2 tipos de suero. 4. Cules son los factores que existen en el suero que inhiben el crecimiento de las bacterias? 5. De qu manera ocurre la inhibicin del crecimiento bacteriano?
*Ver instrucciones para el formato general de los reportes por escrito al final de este manual de prcticas.
PRACTICA No. 3
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TITULACION DE UN ANTIGENO DE SUPERFICIE

Introduccin
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El propsito de esta prctica es ilustrar el significado de titulacin de una sustancia. Una titulacin es la determinacin de la actividad o contenido de un reactivo. Aunque no ser utilizado suero en esta prctica el mismo mtodo en general es usado para la dilucin del contenido de anticuerpos en un suero.
Realizars correctamente la titulacin de un antgeno de superficie para conocer su concentracin.

Manejars con cuidado y de acuerdo a las instrucciones del facilitador las saponinas que se facilitarn. Mantendrs condiciones de esterilidad durante la prctica. Hars diluciones adecuadas de acuerdo al procedimiento del desarrollo de la prctica Titulars un antgeno basado en el grado de hemlisis observado. tem Resultados Esperados Entregars un reporte de la prctica. Tiempo de trmino 2 das despus de la prctica.

Tipo de peligro Irritacin por contacto Cortadura por Vidrios Rotos. Como evitarlo Usar guantes Manejar con cuidado pipetas, cajas de Petri y tubos de ensaye. Como proceder en caso de un accidente Informar al facilitador. Lavar con abundante agua el rea afectada Lavar herida con agua y jabn. Informar al facilitador. Aplicar desinfectante y cubrir herida.

Tipo de desechos Reactivos Como descartarlos Inactivacin Tipo de contenedor Bolsa reactivos no biolgicos.
Esta prctica se desarrollar en 4 momentos
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Primer Momento: Toma de lista y revisin de la indumentaria adecuada y materiales para la prctica. Segundo Momento: Procedimiento de la prctica. Tercer Momento: Discusin en equipo y en grupo de los resultados de la prctica Cuarto Momento: Entrega de reporte con evidencia de desempeo.
Materiales:
a) b) c) d) e) f) Tubos serolgicos Gradillas Solucin salina fisiolgica Saponina Pipetas Eritrocitos
Procedimiento:
1.- Pon una serie de tubos serolgicos en una gradilla.
2.-Aade 0.5ml de solucin salina fisiolgica en los tubos 2 al 10 3.-Aade 0.5 ml. De una dilucin de 1.50 de saponina a los tubos 1 y 2. 4.-Mezcla el contenido en el tubo 2 y transfiere 0.5ml al tubo 3,mezcla y transfiere 0.5ml al tubo 4 etc. hasta el tubo 9 includo, 5.-Elimina 0.5ml despus de mezclar el contenido del tubo 9
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6.-Agrega 0.5ml de eritrocitos al 2% a cada tubo 7.-Mezcla y luego incuba a 37C en bao mara durante 30 minutos. 8.-Registra la hemlisis con el parmetro de +2 +3 y +4. 9.-El ttulo es la dilucin ms alta del reactivo que proporciona cualquier evidencia de la reaccin deseada.
Hemlisis
Reportars por escrito* los resultados obtenidos en la prctica 2 das despus de la misma. En tu reporte describirs de manera sucinta y clara el objetivo de la misma, la metodologa usada y los resultados obtenidos. Adems analizars y discutir las observaciones hechas durante la prctica y describirs la manera como stas impactan en tu formacin. Documentar la titulacin del antgeno con una fotografa de los tubos con diferentes concentraciones de saponinas y eritrocitos. Al final de tu reporte por escrito, contestars el siguiente cuestionario de evaluacin: 1. Qu es la hemlisis? 2. Qu entiendes por titulacin?
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3. En qu dilucin se observ menor titulacin de l antgeno? Explique su respuesta. *Ver instrucciones para el formato general de los reportes por escrito al final de este manual de prcticas.
PRCTICA No. 4
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PURIFICACION DE LA SANGRE POR EL SISTEMA RETICULO ENDOTELIAL.
Introduccin
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La inmunidad innata tambin es influenciada grandemente por factores celulares en el cuerpo animal. El ms importante de estos es la fagocitosis (engullido de partculas forneas) por los leucocitos y otras clulas del sistema retculo endotelial. Los aspectos celulares de la inmunidad se encuentran ntimamente asociados con los aspectos mediados por anticuerpos. Adems de la asociacin por anticuerpos, las clulas y tejidos del sistema retculo endotelial constituyen un aparato basto y muy diseminado que filtra partculas extraas de la sangre con eficiencia a medida que la sangre pasa por los rganos con tejido retculo endotelial. En sta prctica, bacterias vivas sern utilizadas como indicador para determinar en que lugar del cuerpo son extradas de la circulacin estas partculas.
Describirs el efecto purificante del sistema retculo endotelial de los animales, para comprender el destino de los antgenos cuando invaden el cuerpo de un animal.

Mantendrs un ambiente de profesionalidad al trabajar con un organismo vivo (conejo). Sacrificars de una manera humana y sin dolor al conejo. Realizars diluciones de muestras de suero y rganos de acuerdo a la metodologa establecida en el procedimiento de la prctica. Cuantificars el nmero de colonias bacterianas en crecimiento en diferentes diluciones y tiempos despus de la infeccin. Trabajars en condiciones de esterilidad. tem Resultados Esperados Entregars un reporte de la prctica. Tiempo de trmino 3 das despus de la prctica.

Tipo de peligro Contaminacin con bacterias Cortadura por Vidrios Rotos. Como evitarlo Usar guantes / Trabajar en condiciones de esterilidad. Manejar con cuidado pipetas, cajas de Petri y tubos de ensaye. Como proceder en caso de un accidente Informar al facilitador. Lavar con abundante agua y jabn el rea afectada Lavar herida con agua y jabn. Informar al facilitador. Aplicar desinfectante y cubrir herida.

Tipo de desechos Biolgicos
Como descartarlos Esterilizacin por
Tipo de contenedor Bolsas para desechos

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autoclave
biolgicos
Materiales:
1 Un conejo 1 Cepa de E. Coli 2 Jeringas con aguja de 3 ml 2 Tubos vacutainer con EDTA 5 Tubos serolgicos 5 Pipetas de 1 ml 5 Cajas de petri 1 Microscopio 1 Gradilla 1 Pipeteador 1 Mortero Solucin salina estril Papel filtro Agar para mtodos Standard 1 Contador de colonias Anestsico Procedimiento: Anestesia al conejo. Inyecta de manera intravenosa una solucin que contenga 100 millones de bacterias. 1.- Determina el nmero de bacterias presentes en la sangre de un conejo inmediatamente despus de una inyeccin intravenosa con 100 millones de bacterias (E.coli).
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a) Prepara diluciones de la muestra sangunea de 1:1000, 1:10,000, y 1:100,000. b) Prepara 4 cajas de Petri utilizando 1 ml de las diluciones arriba sealadas. 2.- Determina el nmero de bacterias presentes en la sangre de un conejo 30 minutos despus de la inyeccin a) Pon diluciones de la muestra sangunea de 1:10, 1:100, y 1:1,000. b) Prepara 4 cajas de Petri utilizando 1 ml de las diluciones anteriores. 3.- Determina el nmero de bacterias presentes en la sangre de un conejo 60 minutos despus de la inyeccin a) Prepara diluciones de la muestra sangunea 1:10 y 1:100. b) Prepara 4 cajas de Petri usando 1ml de las diluciones sealadas y 1 ml de la sangre entera. 4.- Determina el nmero de bacterias presentes en el hgado, pulmn, bazo y corazn del conejo 60 minutos despus de la inyeccin. a) Pon 1 g de cada rgano en un mortero estril individual y macere perfectamente el tejido. Agregue 100 ml de solucin salina estril y filtre la suspensin para eliminar las partculas mayores. b) Prepara diluciones 1:100. 1:1,00 y 1:10,000, de cada rgano en suspensin. c) Prepara 4 cajas de Petri utilizando 1 ml de las soluciones anteriores arriba sealadas. Permte al medio en las cajas solidificar e incuba a 37C durante 48 hr. Despus de la incubacin realiza conteos por caja y registra la informacin en el siguiente cuadro.
MUESTRA Sangre Sangre

TIEMPO Inmediatamente 30 minutos
Organismos/ml
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Sangre Corazn Hgado Pulmn Bazo
60 minutos 60 minutos 60 minutos 60 minutos 60 minutos
Asegurar que se trabaja de manera asptica en todo momento. Usar guantes y bata.
Reportars por escrito* los resultados obtenidos en la prctica 2 das despus de la misma. En tu reporte describirs de manera sucinta y clara el objetivo de la misma, la metodologa usada y los resultados obtenidos. Adems analizars y discutir las observaciones hechas durante la prctica y describirs la manera como stas impactan en tu formacin. Documentars mediante fotografas la esterilidad de tus cultivos y el nmero de colonias que crecen a diferentes tiempos despus de la infeccin. Al final de tu reporte por escrito, contestars el siguiente cuestionario de evaluacin: 1. Cul es la capacidad del sistema retculo endotelial para eliminar sustancias extraas de la sangre? 2. Qu clulas son las que se encargan de eliminar estas sustancias? 3. En que rganos se observaron ms / menos bacterias despus de la inyeccin intravenosa de stas?
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PRCTICA No. 5
CONTEO DIFERENCIAL LEUCOCITARIO
Introduccin
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En la sangre circulante pueden encontrarse una gran variedad de leucocitos. Solo ciertos tipos de estos son fagocticos, estas clulas se clasifican primordialmente de acuerdo a su morfologa y sus reacciones a la tincin de Wright. Con frecuencia hay que saber si hay un incremento o una disminucin en el por ciento de los tipos celulares del individuo ya que esta informacin es indicativa de ciertos procesos patolgicos, contando 100 leucocitos representativos y registrando la incidencia de los tipos de leucocitos especficos estos conteos son obtenidos sin mayor dificultad.
Aplicars la tcnica de Wright, para reconocer y contabilizar las diferentes clulas sanguneas.

Hars un frotis de sangre de acuerdo con la metodologa descrita en el desarrollo de la prctica. Identificars y cuantificars los diferentes tipos de leucocitos presentes en la sangre. Discutirs en equipo y en grupo las observaciones obtenidas. tem Resultados Esperados Entregars un reporte de la prctica. Tiempo de trmino 2 das despus de la prctica.

Tipo de peligro Cortadura por Vidrios Rotos. Como evitarlo Manejar con cuidado pipetas, cajas de Petri y tubos de ensaye. Como proceder en caso de un accidente Lavar herida con agua y jabn. Informar al facilitador. Aplicar desinfectante y cubrir herida.

Tipo de desechos Biolgicos Vidrio o Cristal Como descartarlos Esterilizacin por autoclave Tipo de contenedor Bolsas para desechos biolgicos Disponer en el contenedor adecuado.
Esta prctica se desarrollar en 4 momentos
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Primer Momento: Toma de lista y revisin de la indumentaria adecuada y materiales para la prctica. Segundo Momento: Procedimiento de la prctica. Tercer Momento: Discusin en equipo y en grupo de los resultados de la prctica Cuarto Momento: Entrega de reporte con evidencia de desempeo.
Materiales:
1.- 10 ml de sangre completa fresca 2.-Portaobjetos limpios 3.-Colorante de Wright 4.-Microscopio
Procedimiento:
1.-Pon una pequea gota (0.5ml) de sangre completa fresca en un extremo de una laminilla limpia. 2.-Con rapidez haz un frotis, tocando con el extremo de otro portaobjetos limpio la gota de sangre, y movindolo hacia el extremo opuesto, haciendo que esta gota deje una pelcula fina con el uso del segundo portaobjetos
. 3.-Despus de que seque tie con el colorante de Wright. 4.-Examina microscpicamente los frotis con el objetivo de inmersin. -Los lugares ms aptos son aquellos en los que la extensin de los glbulos se ha conseguido en una sola capa, estn bien teidos y no se han producido precipitados de los colorantes. Cuando se observe una zona apta, pasar a aumentos ms fuertes.
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5.-Cuenta 100 leucocitos de reas representativas de la laminilla y registre la incidencia de cada uno de los siguientes tipos: LINFOCITOS MONOCITOS NEUTOFILOS EOSINOFILOS BASOFILOS ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Total 100
1. En el campo del microscopio, se vern con un dominio predominante los glbulos rojos, hemates o eritrocitos , teidos en color rojo. No tienen ncleo y son ms delgados por el centro que por los bordes. Los glbulos blancos o leucocitos de identifican fcilmente por la presencia de ncleo. Hay varias clases de glbulos blancos: o los linfocitos algo mayores que los glbulos rojos, con un ncleo muy voluminoso que ocupa casi todo el glbulo, aparece fuertemente teido en color violeta oscuro. o los monocitos son los leucocitos mayores, poco frecuentes normalmente, hay que desplazarse por la preparacin para encontrar alguno. Tienen un ncleo muy grande y redondeado que aparece teido en color violeta.(Es bueno que recuerdes su funcin que es la de fagocitosis). o los polinucleares presentan el ncleo como fragmentado o con aspecto arrosariado. o los eosinfilos, con granulaciones abundantes de color rojizo y el ncleo teido de color azul marino. Estos glbulos aumentan su nmero en caso de parasitosis o procesos alrgicos. o los basfilos presentan un ncleo teido de rojo y las granulaciones del citoplasma de color muy oscuro. o Las plaquetas aparecen como pequeos fragmentos teidas de color violeta. Estas clulas intervienen en el proceso de coagulacin sangunea. 2. El nmero promedio de glbulos rojos en el hombre es de 5.000.000 por mm3 de sangre. La cifra media de glbulos blancos es de 7.000 a 8.000 por mm3. Hay por tanto un glbulo blanco por cada 600 700 glbulos rojos. Por lo tanto para ver todos los tipos de glbulos blancos debes buscarlos en distintos campos de la preparacin. El nmero de plaquetas es de unas 250,000 por mm3
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CELULAS Neutrfilos
TAMAO 9 -12 m
FORMA 2 a 5 lobulos unidos por filamentos delgados y bandas anchas. Generalmente de 2 lbulos. Forma de roseta o ligeramente polimrficos Forma de frijol Redondo u ovalado ralo o fuertemente indentado.
Eosinfilos Basfilos Monocitos Linfocitos
9 12 m 9 12 m 14 18 m 7 13m
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Reportars por escrito* los resultados obtenidos en la prctica 2 das despus de la misma. En tu reporte describirs de manera sucinta y clara el objetivo de la misma, la metodologa usada y los resultados obtenidos. Adems analizars y discutir las observaciones hechas durante la prctica y describirs la manera como stas impactan en tu formacin. Al final de tu reporte por escrito, contestars el siguiente cuestionario de evaluacin: 1. Para que sirve el conteo diferencial leucocitario? 2. Que significa un incremento de monocitos en la sangre? 3. Cules son los valores normales de los diferentes leucocitos en las diferentes especies de animales domsticos?
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PRCTICA No. 6
ANTGENOS DE SUPERFICIE CELULAR
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Introduccin
Los antgenos de superficie celular se encuentran en todas las clulas de un animal, un ejemplo clsico para demostrar la presencia de antgenos de superficie es diferenciando entre los diferentes grupos sanguneos. La membrana celular de los glbulos rojos contiene en su superficie diferentes protenas, las cuales son las responsables de los diferentes tipos de sangre. Existen principalmente dos tipos de protenas que determinan el tipo de sangre, la protena A y la B. TIPOS DE GRUPOS DE SANGRE Segn las diferentes combinaciones de las protenas de la superficie de los glbulos rojos dan como resultado los 4 grupos sanguneos existentes:

Grupo A: Tiene protena A en la superficie del glbulo rojo. Grupo B: Tiene protena B en la superficie del glbulo rojo. Grupo AB: Tiene ambas protenas A y B. Grupo O: No tiene ninguna (A o B) en la superficie del glbulo rojo.
El Rh es otra protena que si est presente en la superficie del glbulo rojo ser rh positivo y si est ausente, es rh negativo. De esta forma una persona debe de tener un grupo sanguneo formado por la protena A, B las dos y adems ser Rh positivo o negativo.
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Determinars la presencia de antgenos de superficie, para diferenciar entre los diferentes grupos sanguneos mediante pruebas serolgicas.

Te hars una puncin en tu dedo, siguiendo mtodos aspticos, para evidenciar la existencia de antgenos de superficie. Identificars tu tipo sanguneo siguiendo la metodologa expuesta en el desarrollo de la prctica. Discutirs en equipo y en grupo los resultados obtenidos. tem Resultados Esperados Entregars un reporte de la prctica. Tiempo de trmino 2 das despus de la prctica.

Tipo de peligro Cortaduras Como evitarlo Manejar con cuidado las lancetas y portaobjetos. Como proceder en caso de un accidente Lavar herida con agua y jabn. Informar al facilitador. Aplicar desinfectante y cubrir herida.
Asegurar que se trabaja de manera asptica en todo momento. Asegurarse de usar lancetas diferentes para cada alumno.

Esta prctica se desarrollar en 4 momentos Primer Momento: Toma de lista y revisin de la indumentaria adecuada y
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materiales para la prctica. Segundo Momento: Procedimiento de la prctica. Tercer Momento: Discusin en equipo y en grupo de los resultados de la prctica Cuarto Momento: Entrega de reporte con evidencia de desempeo.
Materiales:
a).-Suero Anti- A B).-Suero Anti-B C).-Suero Anti Rh D).-Portaobjetos, E).- 3 Palillos F).- Una lanceta estril G).- Torundas con alcohol.
Procedimiento:
1.-Desinfectarse con alcohol la yema de un dedo y puncionar con una lanceta.
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2.-Coloca 3 gotas de sangre sobre el portaobjetos 3.-Coloca en la primera gota el suero anti A en la segunda el suero anti-B y en la tercera el suero anti-Rh 4.-Mezclar con los palillos por separado y esperar 2 minutos para la lectura. 5.-Observar y leer. INTERPRETACION: 1.-Aglutinacion en la primera gota A 2.-Aglutinacion en la segunda gota ...B 3.-Aglutinacion en la 1 y 2 gotas.AB 4.-Aglutinacion en la 3 gotaRH+ 5.-Sin aglutinacin en la 1 y 2 gotas.O 6.-Sin aglutinacin en la tercera gotaRH-
Reportars por escrito* los resultados obtenidos en la prctica 2 das despus de la misma. En tu reporte describirs de manera sucinta y clara el objetivo de la misma, la metodologa usada y los resultados obtenidos. Adems analizars y discutir las observaciones hechas durante la prctica y describirs la manera como stas impactan en tu formacin. Documentars tus resultados mediante una fotografa. Al final de tu reporte por escrito, contestars el siguiente cuestionario de evaluacin: 1. Que significa que se aglutine la gota A? 2. Una persona con tipo de sangre A, puede recibir una transfusin de una persona con tipo de sangre B? O? 3. A que se deben los diferentes tipos sanguneos? 4. Qu es el factor Rh? *Ver instrucciones para el formato general de los reportes por escrito al final de este manual de prcticas.
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PRCTICA No. 7 PREPARACION DE UNA BACTERINA

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Introduccin
Las explotaciones avcolas, bovina, porcinas, etc., especialmente las explotaciones domsticas, con frecuencia se ven diezmadas en su poblacin por enfermedades que que en la mayora de las veces son resultado de la accin combinada de 1 o ms patgenos como las bacterias, e.g. Clera y Tifoidea aviar causada por una una pasteurelosis combinada con salmonellas. Algunas veces, el carcter extremadamente sobreagudo de algunas de estas enfermedades no permite a veces realizar un tratamiento curativo satisfactorio, ya que las muertes se presentan sin una sintomatologa aparente. Como la incidencia de algunas de estas enfermedades es especialmente en las pocas de cambios ambientales de invierno a verano y viceversa, es preferible anticiparse haciendo una vacunacin preventiva que en la prctica se observa con mucha efectividad. La vacunacin entonces, se hace utilizando una bacterina contra estas enfermedades es la forma ms idnea para mantener sin problema una explotacin comercial. La preparacin de bacterias vivas atenuadas o muertas de una o varias especies, suspendida en un lquido que se inyecta para estimular los mecanismos especficos contra las infecciones determinadas por bacterias de la misma clase reciben el nombre de bacterinas. Tambin se preparan vacunas antibacterianas con fracciones antignicas de la bacteria: p.ej., con cpsulas (antineumoccica, antimeningoccica), lipopolisacrido de la pared (antipseudomonas), etc.
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Fabricars un producto biolgico (bacterina), para determinar la inocuidad y esterilidad del mismo, para su uso animal.

Manejars con cuidad y en condiciones de esterilidad el cultivo bacteriano Realizars la inactivacin de la bacterina siguiendo las instrucciones del facilitador, de acuerdo a la metodologa descrita en el desarrollo de la prctica. Manejars con cuidado al ratn, para que ste no sufra demasiado estrs. Describirs en equipo y en grupo los resultados obtenidos. Reportars la inocuidad de la bacterina mediante un informe profesional anexado al reporte de la prctica. tem Resultados Esperados Entregars un reporte de la prctica. Tiempo de trmino 2 das despus de la prctica.

Tipo de peligro Cortaduras Contaminacin bacteriana Como evitarlo Manejar con cuidado las lancetas, jeringas y portaobjetos. Usar guantes, mantener esterilidad. Como proceder en caso de un accidente Lavar herida con agua y jabn. Informar al facilitador. Aplicar desinfectante y cubrir herida. Lavar herida con agua y jabn. Informar al facilitador. Aplicar desinfectante y cubrir herida

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Materiales:
1.-Cultivo de (Salmonella gallinarum) de 18 horas en fase logartmica. 2.-Frasco con formol al 10% 3.-Bao Mara. 4.-Nefelmetro de MacFarland, hemocitmetro y/o espectofotmetro 5.-Pipetas estriles de 1ml cada una 1/100. 6.-Solucin salina fisiolgica (SSF) como diluyente. 7.-Medios de cultivo para la prueba de esterilidad: Caldo tioglicolato, Caldo triptosa, agar inclinado. 8.-Jeringas de tuberculina estriles con aguja No. 27 9.-Ratones para la prueba de inocuidad. 10.-Equipo para tincin de Gram.
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Procedimiento:
1.-Efectuar un frotis y hacer la tincin de Gram* para observar la exclusiva presencia del microorganismo
Bacterias Gram negativas 2.-Cosecha del germen 3 ml.
Bacterias Gram positivas
3.-Agregar 0.15ml de formol al 10% para obtener la concentracin final de 0.5% 4.-Inactivar por calentamiento a 56 /30 minutos en bao mara. C 5.-Centrifugar a 1500 rpm/30 min a 3000 rpm/15 min. 6.-Descartar el sobrenadante y obtener el paquete celular. 7.-Estandarizacin del germen con el nefelmetro de MacFarland. 8.-La estandarizacin se lleva a cabo aadiendo SSF al paquete celular hasta que se obtiene la concentracin deseada. El resultado se expresa en nmero de bacterias por ml. INTERPRETACION: a).-Realizar la prueba de esterilidad sembrando en uno de los medios de cultivo una gota (0.03 ml), se identificara y se observarn en 7 das. El resultado ideal ser que no exista crecimiento en ninguno de los medios de cultivo. b).-Inoculacin de ratones va intraperitoneal (IP) con 0.1 ml. Tambin se observar durante 7 das.
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Asegurar que se trabaja de manera asptica en todo momento. Bata y guantes.
Reportars por escrito* los resultados obtenidos en la prctica 2 das despus de la misma. En tu reporte describirs de manera sucinta y clara el objetivo de la misma, la metodologa usada y los resultados obtenidos. Adems analizars y discutir las observaciones hechas durante la prctica y describirs la manera como stas impactan en tu formacin. Al final de tu reporte por escrito, contestars el siguiente cuestionario de evaluacin: 1. Qu es una bacterina? 2. Por qu se inocula el ratn IP en la prueba de inocuidad? 3. Que resultados esperara en la prueba de inocuidad? 4. Cmo comprobaras la eficacia de la bacterina que hiciste? *Ver instrucciones para el formato general de los reportes por escrito al final de este manual de prcticas. *Tincin de Gram Dejar secar a temperatura ambiente Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado 3 veces aprox.)
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Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar 1 min. Este tinte dejar de color morado las bacterias Gram positivas. Enjuagar con agua. Agregar lugol y esperar 30 segundos Enjuagar con agua. Agregar alcohol acetona y esperar 15 s Enjuagar con agua. Agregar safranina y esperar 1 min Este tinte dejar de color rosado las bacterias Gram negativas. Enjuagar con agua.
Para observar al microscopio ptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersin
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PRCTICA No. 8: DIAGNOSTICO DE BRUCELOSIS (PRUEBA DE AGLUTINACION EN TUBO)

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Introduccin
Seroglutinacin en tubo o placa con pocillos, enfrenta diluciones crecientes del suero problema a una cantidad constante de B. abortus. Este antgeno reacciona tanto con anticuerpos de esa especie como frente a los de B. melitensis y B. suis, que son las tres especies responsables en la prctica de la totalidad de enfermos con brucelosis. El ttulo positivo de 1/160 se considera, en un pas endmico, el punto de corte en el diagnstico de la enfermedad, no siendo raros los ttulos de 1/640 o superiores en las fases iniciales de la enfermedad. Su interpretacin requiere conocer los antecedentes del enfermo y valorar las caractersticas clnicas presentes puesto que, al inicio de la enfermedad o en casos muy avanzados de la misma, la prueba puede ser, como el Rosa de Bengala, negativa. Debido a que los anticuerpos responsables de la seroaglutinacin son fundamentalmente de la clase IgM, lo habitual es que vayan descendiendo en el transcurso de 3-6 meses, con o sin curacin de la enfermedad. Esta es una prueba satisfactoria y de gran confiabilidad en la deteccin de infecciones en procesos evolutivos.
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Determinars la presencia de anticuerpos especficos a Brucella sp., para hacer un diagnstico de la presencia de la enfermedad. .
Manejars con cuidado y en condiciones de esterilidad el antgeno bacteriano Realizars las diluciones como te lo indique el facilitador. Discutirs en equipo y en grupo las observaciones que se tengan. Emitirs un dictamen de los resultados obtenidos. tem Resultados Esperados Entregars un reporte de la prctica. Tiempo de trmino 2 das despus de la prctica.


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Materiales:
1.-Tubos de vidrio pirex de 13 x 100 mm 2.-Gradilla 3.-Pipetas de Bang (0.02ml) graduadas 4.-Jeringa automtica de 2.0 ml 5.-Antgeno de B. abortus al 0.045% de concentracin celular diluido en solucin salina fenolada al 0.5% 6.-Suero sanguneo.
Procedimiento:
1.-Antes de iniciar la prueba se retira el suero y el antgeno del refrigerador y se expone a temperatura ambiente durante 30 a 60 minutos 2.-Por cada muestra deben utilizarse 5 tubos que correspondern a las diluciones 1/25 1/50 1/100 1/200 1/400. 3.-El primer tubo se identificar con el nmero de la muestra del suero. 4.-Con una pipeta de bang se obtiene el suero problema y se ajusta a la marca 0.0 aplicando la pipeta contra el fondo del tubo. Se deposita 0.08ml de suero en el primer tubo, en el segundo 0.04ml,en el tercer tubo 0.02ml en el cuarto 0.01ml y 0.005ml en el ltimo tubo 5.-Con una jeringa automtica se depositan 2ml de antgeno dentro de cada tubo resultando las diluciones 1/25 1/50 1/100 1/200 y 1/400
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6.-Agitar los tubos para lograr la homogenizacin de las mezclas 7.-Incubarlos a 37 / 48 horas. C
Mtodo de dilucin mltiple (Para determinar el ttulo final):

1.-Dejar el suero y el antgeno a temperatura ambiente durante 30 a 60 minutos antes de iniciar la prueba. 2.-Se utilizan 5 o ms tubos por muestra de suero. 3.-Identificar el primer tubo por cada muestra de suero. 4.-Con una pipeta bang se obtiene el suero y se afora al menisco en la parte superior de la pipeta. 5.-En el fondo del primer tubo se depositan 0.16ml del suero y 4.0 ml de antgeno diluido. 6.-En los siguientes tubos se colocan exclusivamente 2.0 ml de antgeno. 7.-Con una pipeta de 2.0ml se trasladan 2.0 ml del primero al quinto tubo.
Observaciones.
Nunca se utilizar una pipeta dos veces para efectuar la misma operacin.
Lectura:
Aglutinacin completa: Clarificacin total del lquido sobrenadante,y al agitar el tubo levemente los conglomerados formados no desaparecen. Aglutinacin incompleta: Clarificacin parcial del lquido sobrenadante y no desaparicin de los conglomerados formados al agitar el tubo. No hay reaccin: No hay clarificacin alguna del lquido sobrenadante,y al agitar los tubos los conglomerados desaparecen.
Interpretacin.
Se efecta en la misma forma que la prueba de aglutinacin en placa. Positivo: Presencia de grumos rodeados por lquido sobrenadante. Negativo: No hay alteracin en los reactivos
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Reportars por escrito* los resultados obtenidos en la prctica 2 das despus de la misma. En tu reporte describirs de manera sucinta y clara el objetivo de la misma, la metodologa usada y los resultados obtenidos. Documentars con fotografas la aglutinacin observada y la usars para emitir tu dictamen. Emitirs un dictamen firmado sobre la presencia o ausencia de Brucelosis en las muestras experimentales. Adems analizars y discutir las observaciones hechas durante la prctica y describirs la manera como stas impactan en tu formacin. Al final de tu reporte por escrito, contestars el siguiente cuestionario de evaluacin: 1. 2. 3. 4. Que significa la aglutinacin observada? Que ventajas considera que tiene la prueba realizada? Que podra ocasionar una falla en la prueba de deteccin? Cmo te aseguraras que no hubiera falsos positivos o negativos?
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PRCTICA No. 9 DIAGNOSTICO DE BRUCELOSIS (PRUEBA DE AGLUTINACION EN TARJETA).

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Introduccin
Prueba rpida, sencilla y muy sensible, es positiva mucho antes que la prueba de aglutinacin y aun antes que con las dems pruebas complementarias, debe efectuarse por lo menos 2 veces al ao, en los hatos bajo vigilancia.
Realizars e interpretars la prueba de aglutinacin en tarjeta utilizada para el diagnstico de la brucelosis.

Manejars con cuidado y en condiciones de esterilidad el antgeno bacteriano Realizars la aglutinacin en tarjeta como te lo indique el facilitador, de acuerdo al procedimiento especificado en el desarrollo de la prctica. Interpretars los resultados que obtengas y emitirs un dictamen de los mismos. tem Resultados Esperados Entregars un reporte de la prctica. Tiempo de trmino 2 das despus de la prctica.

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Materiales:
1.- Antgeno de B. abortus 1119-S a una concentracin del 8% teido con rosa de bengala y un PH de 3.65. 2.- Placa de vidrio 3.- Suero problema o plasma 4.- Palillos
Procedimiento:
1.-Sobre la placa de vidrio se distribuyen volmenes iguales de suero y antgeno (0.03ml) 2.-Se mezclan con palillos 4 minutos y se efecta la lectura. INTERPRETACION: POSITIVO: Presencia de grumos rodeados por lquido sobrenadante claro NEGATIVO: No hay alteraciones en los reactivos.
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Reportars por escrito* los resultados obtenidos en la prctica 2 das despus de la misma. En tu reporte describirs de manera sucinta y clara el objetivo de la misma, la metodologa usada y los resultados obtenidos. Documentars los resultados obtenidos mediante una fotografa de la prueba de tarjeta. Emitirs un dictamen firmado profesional sobre los resultados obtenidos de las muestras experimentales. Adems analizars y discutir las observaciones hechas durante la prctica y describirs la manera como stas impactan en tu formacin. Al final de tu reporte por escrito, contestars el siguiente cuestionario de evaluacin: 1. Describa la apariencia de los sueros usados. 2. A que se debe la aglutinacin? 3. Que otros mtodos similares a la prueba de tarjeta existen? 4. Que ventajas poseen los mtodos serolgicos para la deteccin de antgenos? *Ver instrucciones para el formato general de los reportes por escrito al final de este manual de prcticas.
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ANEXOS SISTEMA DE EVALUACIN.

a) Evidencia de desempeo: Las descritas de manera general para el manual de prcticas y de manera particular para cada prctica. b) Evaluaciones intermedias: Habr una evaluacin intermedia no calificatoria al final de la semana 6. Ser una evaluacin oral, por equipo, acerca de las tcnicas y eventos cubiertos por las diferentes prcticas.
c) Mtodo de asignacin de calificaciones:
1. Asistencia: 15% 2. Criterios de desempeo: 15% 3. Reporte por escrito en tiempo y forma: 70% d) Portafolios de evidencias: Al final del curso entregars un
portafolios con todas las prcticas entregadas y revisadas.
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INSTRUCCIONES PARA EL FORMATO GENERAL DE LOS REPORTES POR ESCRITO

El reporte es un escrito sencillo donde con tus propias palabras describirs el proceso de diseccin del pez. Este debe contener lo siguiente: Introduccin. Es una breve descripcin sobre la historia de las disecciones, su uso, importancia, utilizacin, etc. Recuerda que es la forma de atraer la lectura hacia tu trabajo, por lo que debes mantenerla CORTA y SUSTANCIOSA. Objetivo. Es el propsito, la razn o motivo del por qu realizaste la diseccin. Metodologa. Es la descripcin sobre lo que hiciste durante la prctica. Puedes escribirla en forma de relato o como si fuera una receta de cocina. Resultados. Es la parte medular de tu reporte. Aqu agrega los cuadros comparativos que realizaste junto con tus compaeros. Seala lo que te llam la atencin. Es conveniente que anexes tablas, dibujos, fotografas o esquemas de lo que observaste durante la prctica. Discusin. Esta es la parte ms difcil de escribir, pero es la ms importante. Aqu debes sealar las diferencias y similitudes que hallaste sobre los rganos internos de los peces que disectaste y los de otros animales que conozcas. Puedes utilizar cuadros comparativos u otra herramienta que te sea til para presentar la informacin. Bibliografa. Debes citar SIEMPRE la fuente de donde obtuviste la informacin, ya sea escrita o visual. Puedes utilizar revistas, libros o Internet.
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Lista de Cotejo para el Alumno.

Evaluacin Actividad profesional Evaluacin en formacin Utilizaste la bata de laboratorio de manera adecuada? Trajiste el Material completo? Trajiste el Equipo de diseccin? Utilizaste los guantes durante la prctica? Realizaste la prctica conforme a las instrucciones? Al final de la prctica limpiaste tu rea de trabajo? Dispusiste de los desechos de cmo indica el manual? Mantuviste las condiciones de esterilidad necesarias? Te comportaste con la profesionalidad requerida? instructor Final Observaciones
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Dictamen de Brucelosis
Apellido Paterno Domicilio Apellido Materno Nombre(s) Telfono Estado
Poblacin y municipio
Nombre del Rancho
Ubicacin
Fecha de muestreo
Fecha de prueba anterior
Se prob la totalidad del hato:
Tipo(s) de Prueba Realizadas ( ) Tarjeta ( ) Aglutinacin en tubo ( ) Otra.
Fecha de Prueba
Fecha de Prueba Prxima Firma Fecha
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Manual de Prcticas de Inmunologa

MANUAL DE PRCTICAS DE INMUNOLOGA

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia

Universidad Autnoma de Tamaulipas

Fecha de terminacin: 6 de enero de 2009

Elaborador: Dr. Jess Genaro Snchez Martnez, Bil, M.Sc., Ph.D.

Revisor: Recepcin por el H. Consejo Tcnico:

Tcnico Laboratorista: Micaela Alcocer P.

Dr. Jess Genaro Snchez Martnez

Manual de Prcticas de Inmunologa

Dr. Jess Genaro Snchez Martnez

Manual de Prcticas de Inmunologa

Manual de Prcticas de Inmunologa

Prcticas de Inmunologa Presentacin

Dr. Jess Genaro Snchez Martnez

Manual de Prcticas de Inmunologa

moderado de responsabilidad, y desarrollando un nivel importante de toma de decisiones.

Dr. Jess Genaro Snchez Martnez

Manual de Prcticas de Inmunologa

PROGRAMA DEL SISTEMA DE PRCTICAS

Inmunidad Innata Antgenos y Antigenicidad Inmunidad Especfica Tcnicas de Diagnstico

1 Hora 1 Hora 1 Hora 1 Hora

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Dr. Jess Genaro Snchez Martnez

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PRCTICAS GENERALES DE SEGURIDAD. REGLAMENTOS Y PROCEDIMIENTOS GENERALES

NORMAS BASICAS PARA PREVENIR ACCIDENTES EN EL LABORATORIO

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REGLAMENTO DEL LABORATORIO DE VIROLOGA E INMUNOLOGA

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CRITERIOS DE DESEMPEO COMUNES A TODAS LAS PRCTICAS

Resultados Esperados Entregars un reporte de la prctica.

Tiempo de trmino 2 das despus de la prctica.

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EVIDENCIAS PARA CADA CRITERIO DE DESEMPEO

BIBLIOGRAFA COMN A TODAS LAS PRCTICAS

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Abbas, A.K. y Lichtman, A.H. Inmunologa celular y molecular. 5 Edicin. Saunders

PRACTICA No. 1 RESISTENCIA NATURAL INESPECIFICA

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Manual de Prcticas de Inmunologa

Nmero de profesionales en formacin por unidad de prctica: 5/equipo

Criterios de desempeo durante la prctica

Normas de seguridad especficas de la prctica.

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Cuadro de disposicin de desechos

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Medidas de bioseguridad. Mantener la esterilidad en todo momento.

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PRACTICA No. 2 PODER BACTERICIDA DEL SUERO NORMAL

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Nmero de profesionales en formacin por unidad de prctica: 5/equipo

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Criterios de desempeo durante la prctica

Normas de seguridad especficas de la prctica.