Facultad de medicina humana

BIOLOGIA CELULAR
TEMA: DISTRIBUCIN DE ENZIMAS EN LOS COMPARTIMIENTOS CELULARES DOCENTE: Dr. Jaime Salazar Zuloeta Dr. Nestor Rodrigues Alayo MSc Leoncio Pacherres Mogollon Dra. Ingrid Quezada Nepo INTEGRANTES: Burga Perez Vidauro De la Cruz Montalvan Daz Delgado Luis Enrique Hinostrosa Huaman Alex Mateo Pacora Jimmy Damian Quintana Cubas Jean Pando Snchez Hctor C. Rioja Veja Marco Antonio Rojas Sanchez Deivi

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Suclupe Chero Deivi H. CICLO: I Ciclo Lambayeque, 21 de Julio del 2009

INTRODUCCIN

Todas las reacciones metablicas que ocurren en nuestro organismo se hayan mediados por enzimas, estas en su mayora son de naturaleza proteica (algunas son ARN). Puede definirse a las enzimas como catalizadores, capaces de acelerar las reacciones qumicas en ambos sentidos, sin consumirse en ella, ni formar parte de los productos. La diferencia fundamental es que tienen gran especificidad de reaccin o sea por el sustrato sobre el cual actan. En la clula las enzimas pueden encontrarse en el lquido celular (citosol) o bien pueden estar fijadas a determinadas organelas (ej. Adheridas a las mitocondrias), es as que en la presente exposicin se hablara de la distribucin de las enzimas en los compartimientos celulares.

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INDICE I. OBJETIVOS II. GENERALIDADES II.1. II.2. II.3. II.4. II.4.1. II.4.2. II.4.3. II.4.4. II.4.5. II.4.6. II.5. ENZIMAS IMPORTANCIA BIOMDICA DE LAS ENZIMAS CARACTERSTICAS DE LAS ENZIMAS PROPIEDADES ENZIMATICAS Las enzimas tienen un enorme poder cataltico. Las enzimas poseen especificidad La actividad de algunas enzimas es regulable Las enzimas transforman diferentes clases de energa La mayora de enzimas requiere de cofactores Sensibilidad de la actividad enzimtica MODELOS DE LA INTERACCIN SUSTRATO ENZIMA

II.5.1. Modelo de la llave cerradura II.5.2. Modelo del ajuste inducido II.6. NOMENCLATURA Y CLASIFICACIN DE LAS ENZIMAS

2.6.1. Las oxido-reductasas 2.6.2. Las transferasas 2.6.3. Las Hidrolasas 2.6.4. Las Liasas 2.6.5. Las Isomerasas 2.6.6. Las Ligasas II.7. MECANISMOS ENZIMATICOS

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II.8.

FACTORES QUE INFLUYEN EN ACTIVIDAD ENZIMATICA

LA REGULACION DE LA

II.8.1. Temperatura II.8.2. pH II.8.3. Tiempo II.8.4. Concentracin de la enzima ( pH y T se mantienen constante) II.8.5. Concentracin del sustrato II.8.6. Activadores

III. DISTRIBUCION CELULARES III.1.

ENZIMTICA

EN

LOS

COMPARTIMIENTOS

ENZIMAS EN MEMBRANA

III.1.1. Transferencia de informacin a travs de la membrana plasmtica III.1.2. Principales enzimas III.1.2.1. ADENILATOCICLASA III.1.2.2. FOSFODIERASAS III.1.2.3. Proteincinasas (protein kinasas) III.1.2.4. CINASAS (kinase) III.1.2.5. LA FOSFATASA ALCALINA (FAL) III.1.2.6. NADPH OXIDASA: III.2. ENZIMAS E EL CITOPLASMA

III.2.1. ENZIMAS DEL ESPACIO SOLUBLE. III.2.2. Deshidrogenasa de lactato: III.2.3. Malato Deshidrogenasa III.2.4. Isocitrato Deshidrogenasa III.2.5. La Aconitasa III.3. ENZIMAS EN ORGANELOS

III.3.1. Enzimas en Peroxisomas III.3.1.1. Catalasa Peroxidasa

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III.3.1.2. Oxidasas Flavinicas: III.3.1.3. Urato-Oxidasa III.3.1.4. Superxidos Dismutasa: III.3.1.5. Nucleasas III.3.2. Enzimas en Cloroplastos. III.3.3. Enzimas en la mitocondria III.3.3.1. Enzimas en la membrana externa de la mitocondria III.3.3.2. Enzimas en el espacio intramembranoso III.3.3.3. Enzimas de la membrana interna III.3.3.4. Enzimas de la matriz mitocondrial III.3.4. Enzimas en Lisosomas III.3.5. Enzimas en Retculo Endoplasmtico III.3.6. Enzimas en el Aparato de Golgi III.3.7. Enzimas en el Glioxisoma

III.4.

ENZIMAS EN EL NCLEO

III.4.1. Enzimas enlazadas a Cromatina III.4.2. Enzimas enlazadas al Nuclolo IV. CONCLUSIONES V. ANEXOS VI. BIBLIOGRAFIA

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I.
1.

OBJETIVOS Reconocer la distribucin de las enzimas en los compartimientos celulares (citoplasma, organelos y ncleo).
2.

Reconocer la clasificacin de las enzimas de acuerdo a la reaccin que catalizan.

3. Entender la importancia biolgica de la presencia de enzimas en las clulas. 4. Conocer las caractersticas generales de las enzimas, as como su mecanismo de accin.

II.

GENERALIDADES: II.1. LAS ENZIMAS

Derivan del vocablo griego enzyme, que significa fermento, trmino

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propuesto por Kuhne en 1887. Las enzimas son protenas globulares producidas por el tejido vivo que actan como biocatalizadores, es decir, aceleran las reacciones qumicas en los seres vivos sin modificarse. Al acelerar las reacciones disminuyen la energa de activacin y tiempo de reaccin. Cada clula y cada tejido tienen su actividad propia, lo que comporta continuos cambios en su estado bioqumico, en la base de la cual estn las enzimas. Los propios genes son reguladores de la produccin de las enzimas; por tanto, genes y enzimas pueden ser considerados como las unidades fundamentales de la vida. Este concepto, se ha desarrollado y concretado cada vez ms, y constituye un componente esencial de diversas disciplinas: la microbiologa, la fisiologa, la bioqumica, la inmunologa y la taxonoma, formando adems parte del campo aplicado, en gran variedad de industrias. El conjunto de enzimas constituye el grupo de biomolculas ms extenso y ms especializado del organismo. La vida es, en sntesis, una cadena de procesos enzimticos, desde aquellos que tienen por sustratos los materiales ms simples, como el agua (H20) y el anhdrido carbnico (C02), presentes en los vegetales para la formacin de hidratos de carbono, hasta los ms complicados que utilizan sustratos muy complejos. La formacin de las protenas, los glcidos y los lpidos es un ejemplo tpico: Son a la vez degradados y reconstruidos por otras reacciones enzimticas, produciendo energa a una velocidad adecuada para el organismo, sin el gasto energtico que exigen los mtodos qumicos de laboratorio.

II.2.

IMPORTANCIA BIOMDICA DE LAS ENZIMAS

Sin enzimas, no sera posible la vida que conocemos. Intervienen en la biocatlisis que regula la velocidad a la cual tienen
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lugar los procesos fisiolgicos. Las enzimas llevan a cabo funciones relacionadas con salud y la

enfermedad. En tanto que, en la salud todos los procesos fisiolgicos ocurren de una manera ordenada y se conserva la homeostasis, durante los estados patolgicos. Su importancia es tal que puede considerarse la vida como un "orden

sistemtico de enzimas funcionales". Cuando este orden y su sistema funcional son alterados de algn modo, cada organismo sufre ms o menos gravemente y el trastorno puede ser motivado tanto por la falta de accin como por un exceso de actividad de enzima.

II.3.

CARACTERSTICAS DE LAS ENZIMAS

Se sintetizan a nivel intracelular. Qumicamente son protenas, excepto los ribozimas que es un ARN. Se necesitan en nfimas cantidades para su accin. No son destruidas por la reaccin que catalizan, son rehusables. Pueden actuar a nivel intracelular, es decir, en la clula donde se formo

o a nivel extracelular. Se denomina sustrato a toda molcula sobre la que acta una enzima.

Esquema de una reaccin enzimtica:

E Donde:

ES

E+P

E: Enzima S: Sustrato ES: Complejo enzima sustrato P: Productos

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Son catalizadores de naturaleza protenica con un peso molecular

bastante elevado y con propiedades catalticas especificas.

Presentan gran difusibilidad en los medios lquidos, la mayora solubles

en agua.

II.4.

PROPIEDADES ENZIMATICAS:

II.4.1. Las enzimas tienen un enorme poder cataltico. Las enzimas aceleran las reacciones multiplicando su velocidad por un milln de veces o ms. Gracias a la energa libre emitida al formar los mltiples enlaces dbiles e interacciones entre la enzima y su sustrato Por ejemplo: el perxido de hidrogeno (H2O2) se descompone con gran lentitud si la reaccin no es catalizada, pero una sola molcula de la enzima catalasa ocasiona la descomposicin de cinco millones de molculas de H2O2 por minuto a 0 C. La catalasa protege las clulas, porque el perxido de hidrogeno es un subproducto toxico de varias reacciones celulares.

II.4.2.

Las enzimas poseen especificidad

Dado que existe una relacin estrecha entre la forma del sitio activo y la forma del sustrato, la mayora de las enzimas son altamente especficas. Casi todas son capaces de catalizar solo unas pocas reacciones qumicas estrechamente relacionadas o, en muchos casos, una sola reaccin. Por ejemplo, la enzima ureasas, que descompone la urea en amoniaco y dixido de carbono, no acta en ningn otro sustrato. De igual modo, la enzima sacarasa desdobla solo la sacarosa, sin actuar en la maltosa ni la lactosa. Unas cuantas enzimas son especficas solo en el sentido de requerir un sustrato con determinado tipo de enlace qumico. Por ejemplo, la lipasa que secreta el pncreas rompe los enlaces ster que conectan el glicerol y los cidos grasos en una amplia variedad de grasas.

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II.4.3. La actividad de algunas enzimas es regulable La especificidad de las enzimas est bajo control fisiolgico. La sntesis de la lactosa es un ejemplo adecuado, lactato sintetasa, la enzima que cataliza la sntesis de lactosa consta de una subunidad cataltica y otra su unidad modificadora.

II.4.4. Las enzimas transforman diferentes clases de energa En muchas reacciones de bioqumica la energa de las sustancias reaccionantes se convierte en una energa diferente con una eficiencia muy elevada, por ejemplo en la mitocondria en las molculas pequeas derivadas de los alimentos se convierte en un tipo de energa diferente, el adenosin trifosfato (ATP).

II.4.5. La mayora de enzimas requiere de cofactores Muchas enzimas requieren cofactores. Por ejemplo la pepsina, secretada por el estomago, consisten solo en protenas, en tanto que otras tienen dos componentes, una protena llamada apoenzima y otro componente qumico adicional, el cofactor. Ni la apoenzima ni el cofactor por si solos tiene capacidad cataltica; slo cuando ambos se combinan puede funcionar la enzima. El cofactor puede ser una molcula inorgnica u orgnica. Algunas enzimas requieren como cofactor un ion metlico especfico. Dos cofactores inorgnicos muy comunes son los iones Magnesio y los iones Calcio. La mayora de los oligoelementos (como hierro, cobre, zinc y manganeso, necesarios en cantidades mnimas) funcionan como cofactores. Un compuesto orgnico no polipeptdico que se une a la apoenzima y sirve como cofactor se denomina coenzima. La mayora de las coenzimas pueden

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clasificarse como agentes de transferencia - esto es, agentes que transfieren algn componente de una molcula a otra-. Algunos ejemplos de coenzimas que transportan electrones son el NADH, NADPH y FADH2, el ATP acta como coenzima, ya que se encarga de transferir grupos fosfatos. Otra coenzima muy conocida es la coenzima A, la cual participa en la transferencia de grupos derivados de cidos orgnicos. La mayora de las vitaminas (compuestos orgnicos que los organismos requieren en pequeas cantidades pero no pueden sintetizar por si mismos) son coenzimas o componentes de coenzimas. Las vitaminas B hidrosolubles aportan componentes importantes de numerosas coenzimas Vitamina B1 o Tiamina: su derivado, el pirofosfato de tiamina es esencial para el metabolismo energtico de los glcidos.

Vitamina B2 o Riboflavina: sus derivados son nucletidos coenzima ticos con gran poder reductor como el FAD y el FMN. Vitamina B3 o Niacina: sus derivados son nucletidos coenzimticos con gran poder reductor como el NAD+ o el NADP+. Vitamina B5 o cido Pantotnico: su principal derivado es la coenzima A (Co-A), con gran importancia en diversos procesos metablicos. Vitamina B6 o Piridoxina. Sus principales derivados son los coenzimas PLP (fosfato de piridoxal) y PMP (fosfato de Piridoxamina), esenciales en el metabolismo de los aminocidos. Vitamina B7 o Biotina (vitamina H). Su derivado, la Biocitina, es esencial para el funcionamiento de numerosas carboxilasas (enzimas). Vitamina B9 o Acido flico (vitamina M). Su derivado, el FH4 es esencial en la sntesis de purinas. Vitamina B12 o Cianocobalamina: coenzima B12.

El mecanismo de accin de una coenzima es el siguiente: 1.-La coenzima se une a una enzima, 2.-La enzima capta su sustrato especfico,

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3.-La enzima ataca a su sustrato arrancndole algunos de sus tomos, 4.-La enzima cede a la coenzima dichos tomos, 5.-La coenzima acepta dichos tomos y se desprende de la enzima, 6.-La coenzima no es el aceptor final de estos tomos, sino que debe liberarlos, 7.-La coenzima transporta dichos tomos y acaba cedindolos, recuperando as su capacidad para aceptar nuevos tomos.

II.4.6. Sensibilidad de la actividad enzimtica Algunas sustancias qumica inhiben (disminuyen la actividad) a muchas enzimas o incluso las destruyen. Esta inhibicin puede ser reversible o irreversible:
a)

Inhibicin reversible: esta inhibicin ocurre cuando un inhibidor forma enlaces qumicos dbiles con la enzima. Puede ser competitiva o no competitiva. En la inhibicin competitiva, el inhibidor compite con el sustrato normal por la unin con el sitio activo de la enzima. Dicho inhibidor suele ser estructuralmente similar al sustrato normal, de modo que se ajusta al sitio activo y se combina con la enzima. Sin embrago, tal similitud no basta para sustituir por completo al sustrato en la reaccin qumica, de manera que la enzima no puede atacarlo para formar productos de

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reaccin. El inhibidor competitivo ocupa los sitios activos solo por un tiempo y no produce daos permanentes en las enzimas. En la inhibicin competitiva, un sitio activo es ocupado por el inhibidor parte del tiempo y por el sustrato normal otra parte. Si la concentracin del sustrato se eleva respecto a la del inhibidor, por lo comn el sitio activo ser ocupado por el sustrato. Esta forma de inhibicin puede reconocerse experimentalmente por el hecho de que puede revertirse incrementando la concentracin de sustrato. En la inhibicin no competitiva, el inhibidor se une con la enzima en un sitio que no es el activo, esto hace que se inactive la enzima por modificacin de su forma, debido a lo cual el sitio activo no puede unirse con el sustrato. Muchos inhibidores no competitivos de importancia son sustancias metablicas que regulan la actividad enzimtica al combinarse con la enzima de manera reversible. La inhibicin no competitiva comparte algunas caractersticas con la inhibicin alostrica.

b)

En la inhibicin irreversible: el inhibidor se combina con un grupo funcional de la enzima y la desactiva o destruye en manera permanente. Muchos venenos son inhibidores irreversibles. Por ejemplo, los metales pesados como mercurio y plomo se unen irreversiblemente a muchas protenas, incluso enzimas, y las desnaturalizan. Algunos gases nerviosos atrofian la enzima acetilcolinesterasa, de importancia en el funcionamiento de nervios y msculos. Diversos insecticidas y medicamentos son inhibidores enzimticos. Tambin puede ocurrir inhibicin enzimtica irreversible si una protena es desnaturalizada debido al calor o solventes orgnicos.

II.5.
II.5.1.

MODELOS DE LA INTERACCIN SUSTRATO ENZIMA Modelo de la llave cerradura:

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Enunciado: La enzima y el sustrato tienen una interaccin semejante a la llave con la cerradura, es decir la enzima tiene un sitio rgido para el sustrato Este modelo fue propuesto por Fisher en 1894. Llamado modelo rgido.

II.5.2. Modelo del ajuste inducido: Enunciado: El sustrato induce un cambio conformacional en la enzima, de esta manera el o los sitios activos de la enzima es complementario del sustrato. Este modelo fue propuesto por Kosland. Llamado modelo ameboide. Es el modelo aceptado actualmente.

II.6.

NOMENCLATURA Y CLASIFICACIN DE LAS ENZIMAS

Las enzimas reciben nombre y se clasifican de acuerdo a las reacciones que catalizan. La mayor parte de las enzimas tienen un nombre que se forma adicionando el sufijo asa al nombre del sustrato sobre el cual actan o a un trmino que describe las reacciones que cataliza. As, la ureasa tiene la urea como sustrato. La alcohol deshidrogenasa cataliza la remocin de hidrgenos de los alcoholes (es decir, cataliza la oxidacin de los alcoholes). A pesar de ello, algunas enzimas como la tripsina o la quimiotripsina, aun se reconocen por sus nombres histricos. Un comit de la Unin Internacional de Bioqumica publico un esquema de

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clasificacin que asigna un nmero a cada enzima y clasifica a las enzimas en seis grupos importantes de acuerdo a la clase general de reacciones qumicas que catalizan. II.6.1. Las oxido-reductasas Son las enzimas relacionadas con las oxidaciones y las reducciones biolgicas que intervienen de modo fundamental en los procesos de respiracin y fermentacin. Las oxidorreductasas son importantes a nivel de algunas cadenas metablicas, como la escisin enzimtica de la glucosa, fabricando tambin ATP, verdadero almacn de energa. Extrayendo dos tomos de hidrgeno, catalizan las oxidaciones de muchas molculas orgnicas presentes en el protoplasma; los tomos de hidrogeno tomados del sustrato son cedidos a algun aceptor. La mayor parte de estas enzimas se conocen como deshidrogenasas, pero algunas de ellas reciben el nombre de oxidasas, peroxidasas, oxigenasas, o reductasas. II.6.2. Las transferasas Catalizan reacciones de transferencia de grupos (obtenidos de la rotura de ciertas molculas) a otras sustancias receptoras. Muchas de ellas requieren de la existencia de coenzimas. Estas enzimas o sus coenzimas son sustituidas en forma covalente por una porcin de la molcula del sustrato. Suelen actuar en procesos de interconversin de azucares, de aminocidos, etc. Ejemplo: transaldolasas, Transcetolasas, Transaminasas. II.6.3. Las Hidrolasas Son una clase especial de transferasas, el agua les sirve como un receptor del grupo transferido. Verifican reacciones de hidrlisis con la consiguiente obtencin de monmeros a partir de polmeros. Suelen ser de tipo digestivo, por lo que normalmente actan en primer lugar. Las ms importantes son: las Esterasas, carbohidrasas, protidasas, lipasas y fosfatasas. II.6.4. Las Liasas

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Son enzimas que regulan reacciones en las cuales se rompen enlaces con prdida de grupos y con la aparicin generalmente de dobles enlaces. En la direccin inversa, una liasa cataliza la adicin de un sustrato a un doble enlace de un segundo sustrato. Una liasa que cataliza una reaccin de adicin en las clulas se denomina con frecuencia sintetasa. Entre algunos ejemplos de liasas estn las aldolasas, descarboxilasas. II.6.5. Las Isomerasas Transforman ciertas sustancias en otras ismeras, es decir, de idntica formula emprica pero con distinto desarrollo. Son las enzimas que catalizan diversos tipos de isomerizacin, sea ptica, funcional, de posicin, etc. Debido a que estas reacciones tienen un solo sustrato y un producto, son lo por regular reacciones enzimticas ms sencillas. Suelen actuar en procesos de interconversin. Por ejemplo: Isomerasas de azcar, epimerasas, multasas. II.6.6. Las Ligasas Catalizan la ligadura o unin de dos sustratos en reacciones sintticas que requieren el ingreso de la energa qumica potencial de un nucleosido trifosfato, como el ATP. La accin de estas enzimas se manifiesta con la formacin de enlaces entre tomos de carbono y oxigeno de diversas molculas, o bien entre carbono y azufre, carbono y nitrgeno y carbono y carbono. A este grupo pertenecen enzimas de gran relevancia reciente, como las aminocido ARTt ligasas conocidas habitualmente con el nombre de sintetasas de aminocidos ARTt o enzimas activadoras de aminocidos que representan el primer paso en el proceso biosinttico de las protenas, y que forman uniones C-O, A-sintetasa, que forma acetil coenzima. A las ligasas se les da el nombre de sintetasas. Ejemplo: carboxilasas, pptidosintetasas. II.7. MECANISMOS ENZIMATICOS

Los mecanismos son los eventos atmicos o moleculares que ocurren durante las reacciones. Los mecanismos individuales de las enzimas se han deducido a partir de experimentos y ms recientemente a partir de estudios estructurales

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de las enzimas, en particular por la cristalografa con rayos X. Se procede de la siguiente manera:

Orienta a los sustratos: parte de la energa de activacin se utiliza para que los sustratos roten y se enfrenten con los tomos correctos para formar los enlaces.

Agregan carga a los sustratos: las cadenas laterales de (R) de los aminocidos de las enzimas pueden participar directamente haciendo a los sustratos qumicamente mas reactivos.

Inducen la deformacin del sustrato: cuando una sustancia se une al sitio activo, la enzima puede causar que los enlaces se estiren, ponindolo en un estado de transicin estable.

Cambio de forma de la enzima al unirse al sustrato: este cambio por la unin al sustrato se denomina ajuste inducido.

La actividad de la enzima depende en parte de la disposicin o arreglos de los aminocidos y grupos prostticos en determinada regin de la protena. II.8. FACTORES QUE INFLUYEN EN ACTIVIDAD ENZIMATICA La actividad de una enzima depende de un cierto nmero de factores, entre los cuales estn la temperatura, el pH, la concentracin de sustratos, los activadores y los inhibidores. II.8.1. Temperatura Si se suministra a una reaccin enzimtica energa en forma de calor, al ser captada por las molculas es transformado en energa cinetica. Ello favorece la actividad de la enzima, pero si la temperatura es excesiva la enzima se desnaturaliza por tanto la actividad enzimtica cesa. II.8.2. pH LA REGULACION DE LA

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Todas las enzimas tienen dos valores lmites de pH entre los cuales son efectivas. Traspasados estos valores, la enzima se desnaturaliza y deja de actuar. Entre estos dos valores extremos se sita un pH en el cual la enzima alcanza una efectividad mxima: es el llamado pH ptimo. Cada reaccin tendr su pH optimo, por ejemplo, la pepsina es mas efectiva sobre la hemoglobina a pH=2.2 y sobre la albumina a pH=1.5. II.8.3. Tiempo A medida que se consume el sustrato y la reaccin se acerca al equilibrio, la velocidad de la reaccin misma disminuye hasta cero. II.8.4. Concentracin de la enzima ( pH y T se mantienen constante) En presencia de exceso de sustrato la velocidad de la reaccin es directamente proporcional a la concentracin de la enzima. II.8.5. Concentracin del sustrato En toda reaccin enzimtica, si se incrementa la concentracin del sustrato se produce un aumento de la velocidad de formacin del producto. En este proceso la enzima no vara. Si la concentracin del sustrato es excesiva, la velocidad de reaccin no aumentar, debido a que todas las enzimas estn en forma de complejo E-S. II.8.6. Activadores Algunos iones favorecen la unin de la enzima con el sustrato, por ejemplo: la enzima fosfolirasa, que regula la formacin de ATP a partir de ADP y el grupo fosfato (Pi), se ve activa por la presencia de iones Mg++.

III.

DISTRIBUCION CELULARES III.1.

ENZIMTICA

EN

LOS

COMPARTIMIENTOS

ENZIMAS EN MEMBRANA

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III.1.1.

Transferencia de informacin a travs de la membrana plasmtica

Cmo puede una hormona extracelular u otra molcula regulatoria transmitir informacin al interior de la clula sin cruzar fsicamente la membrana plasmtica? Casi todas las molculas sealizadoras dependen de la interaccin del sistema de protenas integrales de membrana para transmitir informacin por traduccin de seales. Luego que el ligando (una hormona seal, como una hormona u otra molcula regulatoria) se une al receptor de membrana, la seal es transmitida a travs de una serie de protenas. La molcula sintetizadora a veces se denomina primer mensajero. A menudo, en la va participan cinasas de protena, enzimas que transfieren grupos fosfatos del ATP a determinadas protenas integrales de membrana, llamadas protenas G, as llamadas porque su forma activa se une a un trifosfato de guanosina (GTP) una molcula similar al ATP pero que contiene la base nitrogenada guanina en lugar de adenina. La protenas G catalizan la hidrlisis de GTP a GDP, un proceso exotrmico. En una serie compleja de sucesos, una protena G transfiere el mensaje del receptor a una enzima como la ciclasa del adenililo, que cataliza la produccin de un segundo mensajero, a menudo a AMPc (adenosin monofosfato cclico). Tpicamente el segundo mensajero activa cinasas de protenas, enzimas que a su vez, activan a determinadas protenas fosforilndolas. Esta secuencia de reacciones, que comienza con el enlace de la molcula sealizadora con el receptor, ocasiona un cambio en alguna funcin celular. Las protenas G participan en varias traducciones de seales importantes, que incluyen la accin de muchas hormonas. Algunas protenas G regulan conductos que permiten que los iones crucen la membrana plasmtica y otras ms tienen funciones importantes en los sentidos de la vista, el olfato y el gusto. Se piensa que las protenas Ras, un grupo de protenas de unin a GTP que actan de modo un tanto similar a como lo hacen las protenas G, son

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importantes en la traduccin de seales necesarias para muchas actividades celulares. Los fibroblastos (un tipo de clula del tejido conectivo) requieren de la presencia de dos factores de crecimiento (factor de crecimiento derivado de las plaquetas) para la sntesis de ADN sin embargo, cuando los investigadores desactivaron protenas Ras inyectando en los fibroblastos anticuerpos dirigidos contra ellas, el factor de crecimiento dejo de ser eficaz. Los resultados de estos experimentos y otros similares llevaron a concluir que la protena Ras es importante en la traduccin de seales en que participan factores de crecimiento con una clase de enzimas llamadas cinasas de serina. Los bilogos celulares han demostrado que cuando determinados ligamentos se unen a integrinas (protenas transmembranosas que conectaban las clulas con la matriz extracelular) en la membrana plasmtica, se activan vas de sealizacin de dentro hacia fuera, influyen en que tan selectivas son las integrinas respecto de las molculas a las cuales se unen y que tan fuertemente se une a ellas.
III.1.2.

Principales enzimas ADENILATOCICLASA

III.1.2.1.

Se encuentra en la cara interna de la membrana plasmtica. Es una enzima que cataliza la sntesis de adenosin monofosfato cclico (AMPC), que es un segundo mensajero que se encuentra tambin dentro de la clula, a partir del ATP. Es un compuesto que se activa en el mecanismo de accin de una hormona hidrosoluble cuya secuencia es la siguiente:

La hormona hidrosoluble difunde desde la sangre, por el lquido intersticial

y se une a su receptor en la membrana plasmtica de las clulas blanco. Esto activa otra protena membranosa, la protena G, que a su vez activa a la adenilato ciclasa.

La adenilato ciclasa convierte el ATP en adenosin monofosfato cclico

(AMPC), en el citosol.

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El

AMPC o segundo mensajero activa una o ms protencinasas

(enzimas), que pueden estar libres en el citosol o unidos a la membrana plasmtica. Una nica hormona unida al receptor supone la sntesis de muchas molculas de AMPC. Se encuentran tambin las protenas G inhibidoras, dependientes de receptores inhibidores, en este caso la seal interacciona con el Pi (fsforo inorgnico) y ste acta sobre la protena G, mecanismo semejante al anterior solo que en este caso con tendencia inhibitoria.

III.1.2.2.

FOSFODIERAS AS

Las fosfodiesterasas o nucleasas son enzima hidrolizas que catalizan la ruptura de los enlaces fosfodiester como por ejemplo los que se establecen en los cidos nucleicos entre la pentosa de un nucletido y el grupo fosfato de otro. Su accin regula la concentracin dentro de las clulas del AMP cclico y del GMP cclico. Estn descitas 5 isoenzimas. En la actualidad hay frmacos usados como inhibidores de las fosfodiesterasas. Estas enzimas se clasifican segn el tipo de acido nucleico y el tipo de enlace hidrolizan. III.1.2.3. PROTEINCINASAS (PROTEIN KINASAS) Enzima de la clase tranferasa que cataliza la reaccin:

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ATP + protena =ATP + fosfoprotenas La reaccin fosforiliza grupos de serina, treonina y tirosina en enzimas y otras protenas. Proteincinasas especficas regulan enzimas que catalizan reacciones claves en procesos tales como la renovacin del glicgeno, biosntesis del colesterol y transformaciones de aminocidos. Otras producen la casena secretadas en la leche. La proteincinasa A, una enzima dependiente del AMP-c, fosforila las protenas intracelulares a travs de su activacin y realiza una importante labor mediadora en diversas funciones fisiolgicas cerebrales.
III.1.2.4.

CINASAS (kinasa)

Subclase de transferasas que comprende a las enzimas que catalizan la transferencia de un grupo de alta energa desde un donador, por lo general trifosfato de adenosina, hacia algn receptor, y de los nombres diversos segn este ltimo (por ejemplo: cinasa de la creatina, fructosinasa, galactosinasa, exocinasa, etc.).
III.1.2.5.

LA FOSFATASA ALCALINA (FAL)

Es una enzima hidrolasa responsable de eliminar grupos de fosfatos de varios tipos de molculas como nucletidos, protenas y alcaloides. El proceso de eliminar el grupo fosftico se denomina desfosforilacin. Como sugiere su nombre, las fosfatasas alcalinas son ms efectivas en un entorno alcalino. La fosfatasa alcalina recibe el nombre de orto-fosfrico-monoster hidrolasa. Estas enzimas proceden de la ruptura normal de las clulas sanguneas y de otros tejidos, muchas de ellas no tienen un papel metablico en el plasma excepto las enzimas relacionadas con la coagulacin y con el sistema del complemento. Las fosfatasas alcalinas son enzimas que se encuentran presentes en casi todos los tejidos del organismo, siendo particularmente alta

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en huesos, hgado, placenta, intestinos y rin. Tanto el aumento, as como su disminucin en plasma tienen significado clnico. Las causas de un aumento de FAL:

Enfermedad

sea

de

Paget,

obstrucciones

hepticas,

hepatitis,

hepatoxicidad por medicamentos y osteomalacia. Las causas de una disminucin de FAL:

Cretinismo y dficit de vitamina C

III.1.2.6. NADPH OXIDASA: Enzima flavoprotena que cataliza la reduccin monovalente del oxgeno utilizando NADPH como fuente de Electrones para formar un anin superxido (SUPERXIDOS). Enzima de la clase oxido-reductasa que cataliza la reaccin: NADPH + O2 = NADPH+ + 2 O2 La reaccin forma parte del aumento brusco y repentino del consumo de oxigeno de los fagocitos neutrfilos, eosinfilos y mononucleares .Produce aniones superxidos como oxidantes en el sistema fagoctico microbicida. La enzima depende de distintos citocromos. Defectos en la produccin de iones superxidos por Enzimas como la NADPH Oxidasa dan lugar a Enfermedad Granulomatosa Crnica. III.2. ENZIMAS EN EL CITOPLASMA III.2.1. ENZIMAS DEL ESPACIO SOLUBLE. Enzimas glicolticas: Gliclisis: La gluclisis o gliclisis (del griego glycos: azcar y lysis: ruptura), es la va metablica encargada de oxidar o fermentar la glucosa y as obtener
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energa para la clula. sta consiste de 10 reacciones enzimticas que convierten a la glucosa en dos molculas de piruvato la cual es capaz de seguir otras vas metablicas y as continuar entregando energa al organismo. Reaccin global de la gluclisis

La va principal de degradaciones del catabolismo tiene tres funciones principales: 1. La generacin de molculas de alta energa (ATP y NADH) como fuente de energa celular en procesos de respiracin aerbica (presencia de oxgeno) y anaerbica (ausencia de oxgeno). 2. La generacin de piruvato que pasar al Ciclo de krebs, como parte de la respiracin aerbica. 3. La produccin de intermediarios de 6 y 3 carbonos que pueden ser ocupados por otros procesos celulares. III.2.1.1. Deshidrogenasa de lactato: Enzima tetrmero que se encuentra en corazn, hgado, msculo,

eritrocitos, plaquetas y ndulos linfticos. Se sintetiza desde dos genes individuales distintos, que originan polipptidos estructuralmente diferentes pero con la misma actividad cataltica.

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Corresponde a la categora de las oxidorreductasas dado que cataliza una reaccin redox, en la que el piruvato es reducido a lactato gracias a la oxidacin de NADH a NAD+. Dado que la enzima tambin puede catalizar la oxidacin de hidroxibutirato, ocasionalmente es conocida como Hidroxibutirato Deshidrogenasa (HBD). Participa en el metabolismo energtico anaerobio, reduciendo el piruvato (procedente de la gluclisis) para regenerar el NAD+, que en presencia de glucosa es el sustrato limitante de la va glucoltica. Hay cinco forma isoenzimticas distintas codificadas por genes distintos. Su funcin es la de reducir reversiblemente el piruvato a lactato. Est relacionada con el infarto de miocardio, hemlisis y enfermedades del parnquima heptico. III.2.1.2. Malato Deshidrogenasa La enzima Malato deshidrogenasa cataliza la reaccin de oxidacin del (S)malato a oxaloacetato utilizando NAD+ como aceptor de electrones. S-malato + NAD+ oxaloacetato + NADH

Esta enzima tambin oxida otros cidos 2-hidrocarboxlicos. La malato deshidrogenasa (MDH) participa en el ciclo del cido ctrico y existe en todos los organismos aerobios. Mientras que los organismos procariotas tienen una sola forma de MDH, en las clulas eucariotas hay dos isozimas: una de ellas localizada en la matriz mitocondrial y otra en el citoplasma. Los hongos y las plantas tambin tienen una forma glioxisomal que es usada en la ruta del glioxilato. En los cloroplastos de las plantas hay una forma adicional de MDH dependiente del NADP, malato deshidrogenasa (NADP+), que es esencial para la fotosntesis universal C3, ciclo de Calvin, y para la ruta C4 ms especializada.
III.2.1.3.

Isocitrato Deshidrogenasa

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Enzima alostrica, de PM 380 kD, formada 8 subunidades. Requiere de Mn2+ y Mg2+. La enzima cataliza la descarboxilacin oxidativa del isocitrato a

-cetoglutarato. En un primer paso cataliza la oxidacin del isocitrato a una cetona (oxalsuccinato), y posteriormente, la descarboxilacin del carboxilato en posicin b con respecto a la cetona. En esta reaccin sale el primer CO2 del ciclo.

En los eucariotas existen al menos tres isozimas de la IDH: a) b) c) IDH1 - Isocitrato deshidrogenasa dependiente del NADP+ citoplasmtica IDH2 - Isocitrato deshidrogenasa dependiente del NADP+ mitocondrial, IDH3 - Isocitrato deshidrogenasa dependiente del NAD+, en los

humanos formada por las subunidades alfa, beta y gamma.

III.2.1.4.

La Aconitasa

Posee en su centro activo un centro de (4Fe-4S) encargado de coordinar el OH del citrato, para facilitar su eliminacin .Convierte al citrato en isocitrato a travs de una reaccin de isomerizacin. La aconitasa es una enzima que se

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llama enzima de tres puntos tiene tres sitios activos que se unen al CH, COO, y la Acetil CoA queda muy lejos sea queda en una posicin en que no podra formar el complejo enzima-sustrato y por lo tanto no se puede transformar. Entonces la enzima lo que hace es que va a quitar ese oxidrilo por un H y forma una molcula de HO pero la enzima se queda con ella y luego deja un doble enlace y se llama cis-aconiato. La aconitasa tiene fierro ferroso que es el que sostiene a la molcula de HO y tambin tiene como cofactor al glutatin. Llegamos al Isocitrato y tenemos la primera reaccin oxidativa del ciclo. CITRATO ISOCITRATO

Aconitasa

III.3.
III.3.1.

ENZIMAS EN ORGANELOS Enzimas en Peroxisomas

Los peroxisomas son orgnulos citoplasmticos muy comunes en forma de vesculas que contienen oxidasas y catalasas. Estas enzimas cumplen funciones de detoxificacin celular. Como todos los orgnulos, los peroxisomas

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solo se encuentran en clulas eucariontes. Los peroxisomas son pequeas vesculas provistas de membrana plasmtica semipermeable, que contienen varias enzimas que producen o utilizan perxido de hidrgeno (agua oxigenada, H2O2); se ha identificado ms de 50 enzimas en los peroxisomas de diferentes tejidos. Se forman por gemacin al desprenderse del retculo endoplasmtico liso, aunque por s mismos pueden abulatar cierta porcin de su membrana produciendo nuevos peroxisomas sin derramar su contenido en el citoplasma. Dicha membrana protege la clula de los efectos dainos del interior del peroxisoma. Las partculas de su interior suelen estar cristalizadas. Los peroxisomas tienen un papel esencial en el metabolismo lipdico, en especial en el acortamiento de los cidos grasos de cadena muy larga, para su completa oxidacin en las mitocondrias, y en la oxidacin de la cadena lateral del colesterol, necesaria para la sntesis de cidos biliares; tambin interviene en la sntesis de glicerolpidos, steres lipdicos del glicerol (plasmgenos) e isoprenoides; tambin contienen enzimas que oxidan aminocidos, cido rico y otros sustratos utilizando oxgeno molecular con formacin de agua oxigenada: RH2 + O2 R + H2O2

El agua oxigenada es un producto txico, que se degrada rpidamente dentro del propio peroxisoma por la enzima oxidativa catalasa en agua y oxgeno usando como intermediarios de ciertas sustancias orgnicas (en la ecuacin la variable R'). H2O2 + R'H2 R' + 2H2O

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III.3.1.1.

Catalasa Peroxidasa

En animales, el perxido de hidrgeno s destoxifica mediante las actividades de la catalasa y la glutatin peroxidasa. Aunque la catalasa no es esencial para algunos tipos de clulas en condiciones normales, tiene un importante papel en la adquisicin de tolerancia al estrs oxidativo en la respuesta adaptativa de las clulas. La catalasa captura el H2O2 antes de que pueda escapar de la clula y lo convierte en oxgeno molecular. La catalasa es la enzima encargada de neutralizar el agua oxigenada, puede tambin neutralizar el perxido de hidrogeno generado en mitocondrias, en el retculo endoplasmatico y en el citosol. La presencia de catalasa y peroxidasa son las que usan los peroxisomas en el hgado para descomponer las molculas de alcohol en sustancias que puedan ser eliminadas del organismo.
III.3.1.2.

Oxidasas Flavinicas:

Oxidan sustratos formando agua oxigenada. El 25% de los cidos grasos se degradan en los peroxisoma por un proceso de beta oxidacin que va a dar lugar a la Acetil CoA. La diferencia con la mitocondria es que la primera reaccin de oxidacin en el peroxisoma produce agua oxigenada, pues es catalizada por una oxidasa flavnica. Las oxidas participan en reacciones metablicas de oxidacin utilizando el oxigeno molecular y produciendo perxido de hidrogeno.

III.3.1.3.

Urato-Oxidasa

El urato oxidasa es una enzima homotetramrica que contiene cuatro sitios activos idnticos situados en la interfacia entre sus cuatro subunidades. Est compuesto de un nmero variable de aminocidos (segn la especie) siendo alrededor de 300 residuos de los mismos, con un peso molecular 33438 Dalton.

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El urato oxidasa es una enzima de la clase de las oxidoreductasas, que est presente en varios organismos tanto unicelulares como multicelulares, notndose sin embargo su ausencia en los seres humanos y algunos primates, presentndose activa en el catabolismo de la purina. Esta enzima cataliza la oxidacin del cido rico a 5-hidroxiisourato, siendo el producto de la reaccin inestable transformndose espontneamente en alantona. cido rico ++O2 + H2O 5-hidroxiisourato + H O alantona +CO2 cido rico O2 + H2O 5-hidroxiisourato + H2O2 alantona + CO2 2 2

III.3.1.4.

Superxidos Dismutasa:

Enzima antioxidante natural del cuerpo que tiene la capacidad de neutralizar un destructivo radical libre, el anin superxidos producidas en las reacciones de oxidacin de las mitocondrias, retculo endoplasmatico y citosol. Es la primera lnea de defensa contra los radicales libres en el cuerpo humano. III.3.1.5. Nucleasas Las nucleasas son enzimas que producen la rotura de los enlaces fosfodiester de la cadena polinucleotdica de los cidos nucleicos. Los cidos nucleicos son degradados en sus constituyentes por medio de las nucleasas especificas, primero en nucletidos y luego en bases nitrogenadas. Las nucleasas se pueden emplear en el tratamiento de enfermedades producidas por virus, hongos, bacterias y algunos tipos de cncer. Si el grupo cataltico est unido a un oligonucletido anti sentido pueden producir la rotura del ARNm respectivo.
III.3.2.

lo cual impide la sntesis de la protena codificada por el gen

Enzimas en Cloroplastos.

Los cloroplastos son orgnulos con forma de disco. Aparecen en mayor cantidad en las clulas de las hojas, lugar en el cual parece que pueden orientarse hacia la luz. Es posible que en una clula haya entre cuarenta y cincuenta cloroplastos, y en cada milmetro cuadrado de la superficie de la hoja hay 500.000 cloroplastos. Cada cloroplasto est recubierto por una membrana

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doble. El cloroplasto contiene en su interior una sustancia bsica denominada estroma, la cual est atravesada por una red compleja de discos conectados entre s, llamados lamelas. Muchas de las lamelas se encuentran apiladas como si fueran platillos; a estas pilas se les llama grana. Los cloroplastos desempean una funcin an ms esencial que la de las mitocondrias: en ellos ocurre la fotosntesis; esta funcin consiste en utilizar la energa de la luz solar para activar la sntesis de molculas de carbono pequeas y ricas en energa, y va acompaado de liberacin de oxgeno. Los cloroplastos producen tanto las molculas nutritivas como el oxgeno que utilizan las mitocondrias. Principales enzimas Enzima Caracterstica El complejo ATP sintetasa es una enzima situada en la membrana de los tilacoides de los cloroplastos , encargada de sintetizar ATP a partir de ADP y un grupo fosfato y la energa suministrada por un chorro de protones (H+). Responde a la sntesis de ATP de Mitchell. La sntesis de ATP gracias a esta enzima se denomina fosfoliracin oxidativa del ADP. Esta enzima est compuesta de dos subunidades. Una anclada a la mitocondria o al tilacoide llamada FO (CFO en el caso de los tilacoides) y otras que sobresalen por la cara interna de la estructura llamada F1(CF1 en el caso de los tilacoides). Es un enzima que contiene como centro redox una molecula de FAD (Dinucleotido de nicotinamida y adenina) y, cuya funcin es catalizar la transferencia de electrones de forma secuencial desde dos molculas de Ferrodoxina (transportador de un electrn) a una molecula de NADP+, con objeto de

ATP SINTETASA

FERRODOXINA NADP + REDUCTASAS A (FRN) FOTOSINTETICA

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almacenar

la

energa

luminosa

captada

durante la fotosntesis en poder reductor en forma de NADPH. Rubisco es la forma abreviada con que normalmente se designa a la enzima cuyo nombre completo es ribulosa 1,5 difosfato carboxilasa oxigenasa. Esta enzima tiene un doble RUBISCO comportamiento que justifica su nombre, catalizando dos procesos opuestos. Primero la fijacin del CO2 a una forma orgnica, lo que justifica su clasificacin como carboxilasa. Segundo la fotorrespiracion, en la que acta como oxigenasa del mismo sustrato. Rubisco es la protena mas abndate de la atmosfera.

III.3.3. Enzimas en la mitocondria Mitocondria, diminuta estructura celular de doble membrana responsable de la conversin de nutrientes en el compuesto rico en energa trifosfato de adenosina (ATP), que acta como combustible celular. Por esta funcin que desempean, llamada respiracin, se dice que las mitocondrias son el motor de la clula. Se encuentran mitocondrias en las clulas eucariotas (clulas con el ncleo delimitado por membrana). El nmero de mitocondrias de una clula depende de la funcin de sta. Las clulas con demandas de energa particularmente elevadas, como las musculares, tienen muchas ms mitocondrias que otras. Por su acusado parecido con las bacterias aerbicas (es decir, que necesitan oxgeno), los cientficos creen que las mitocondrias han evolucionado a partir de una relacin simbitica o de cooperacin entre una bacteria aerbica y una clula eucariota ancestral. La mayora de las enzimas mitocondriales guardan relacin con la produccin de energa, con las reacciones oxidativas que proporcionan la fuerza de

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induccin necesaria para muchas funciones celulares. III.3.3.1. Enzimas en la membrana externa de la mitocondria La membrana externa posee enzimas capaces de modificar a los acidos grasos para que estos puedan atravesar la membrana interna e ingresar en la matriz mitocondrial donde son degradados. En la membrana externa encontramos pocas enzimas entre las que ms destacan: Reductasas de citocromos b5 Amina oxidasa Sintetaza de acil CoA Aceltransferrasa de colina Fosfotransferrasa de colina Quinasa de adenilato Hexoquinasa Fosfolipasa A2 III.3.3.2. Enzimas en el espacio intramembranoso Dada la presencia de la porina en la membrana externa su contenido de solutos es similar al del citosol.

Las principales enzimas son: Quinasa de adenilato Quinasa de adenilato Quinasa de nuclesido difosfatado Quinasa de nuclesido monofosfatado Reductasa de xilulosa

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III.3.3.3. Enzimas de la membrana interna La membrana interna contiene ms protenas, carece de poros y es altamente selectiva; contiene muchos complejos enzimticos y sistemas de transporte transmembrana, que estn implicados en la translocacin de molculas. Esta membrana forma invaginaciones o pliegues llamadas crestas mitocondriales, que aumentan mucho la superficie para el asentamiento de dichas enzimas. En la mayora de los eucariontes, las crestas forman tabiques aplanados perpendiculares al eje de la mitocondria, pero en algunos protistas tienen forma tubular o discoidal. En la composicin de la membrana interna hay una gran abundancia de protenas (un 80%), que son adems exclusivas de esta organela. Las principales enzimas son: Dehidrogenasa de succinato Dehidrogenasa de NADH Sintasa de ATP Dehidrogenasa de 3-hidroxibutarato Palmitoiltransferasa de carnitina Dehidrogenasa de glicerol-3-fosfato Hexoquinasa Oxidasa de citocromo c

III.3.3.4. Enzimas de la matriz mitocondrial En la matriz mitocondrial tienen lugar diversas rutas metablicas clave para la vida, como el ciclo de Krebs y la beta-oxidacin de los cidos grasos; tambin se oxidan los aminocidos y se localizan algunas reacciones de la sntesis de urea y grupos hemo. Molcula Enzima Tipo de Reactivos Productos/

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/ reaccin I. Citrato II. cis-Aconitato III. Isocitrato IV. Oxalosuccinato V. -cetoglutarato VI. Succinil-CoA VII. Succinato VIII. Fumarato IX. L-Malato X. Oxaloacetato 1. Aconitasa 2. Aconitasa 3.Isocitrato deshidrogenasa 4.Isocitrato deshidrogenasa deshidrogenasa 6.Succinil-CoA sintetasa 7.Succinato deshidrogenasa 8.Fumarato Hidratasa 9.Malato deshidrogenasa 10. Citrato sintasa Deshidratacin Hidratacin Oxidacin Descarboxilaci n NAD+ + CoA-SH GDP + Pi FAD H2O NAD+ NADH + H+ NADH + H+ + CO2 GTP + CoA-SH FADH2 n oxidativa Hidrlisis Oxidacin Adicin (H2O) Oxidacin Condensacin H2O NAD+ NADH + H+ Coenzima Coenzima s H2O

5.-cetoglutarato Descarboxilaci

III.3.4.Enzimas en Lisosomas Saco delimitado por una membrana que se encuentra en las clulas con ncleo (eucariotas) y contiene enzimas digestivas que degradan molculas complejas. Los lisosomas abundan en las clulas encargadas de combatir las enfermedades, como los leucocitos, que destruyen invasores nocivos y restos celulares. El tamao de los lisosomas es muy variable, pero suele oscilar entre 0,05 y 0,5 micrmetros de dimetro. Cada uno est rodeado por una membrana que protege la clula de las enzimas digestivas del lisosoma. Las protenas de la

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membrana protegen la actividad de las enzimas manteniendo la acidez interna adecuada; tambin transportan los productos digeridos fuera del lisosoma. Las enzimas lisosmicas se fabrican en el retculo endoplasmtico rugoso y se procesan en el aparato de Golgi. Se distribuyen englobadas en sacos llamados vesculas de transporte que se funden con tres tipos de estructuras envueltas por membranas: endosomas, fagosomas y autofagosomas. En todos los casos, las enzimas digestivas suministradas por los lisosomas digieren los objetos envueltos en membranas y los reducen a compuestos sencillos que se envan al citoplasma como nuevos materiales de construccin celular. Las alteraciones de las enzimas lisosmicas pueden causar enfermedades. Los nios nacidos con la enfermedad de Tay-Sachs carecen de una enzima que degrada un lpido complejo llamado ganglisido. Cuando se acumula en el organismo, daa el sistema nervioso central, provoca retraso mental y causa la muerte a los cinco aos. La inflamacin y el dolor asociados con la artritis reumatoide y la gota tienen relacin con la fuga de enzimas lisosmicas. a) Enzimas proteolticas: Catepsinas B, D, G, L Elastasa Colagenasa b) Hidrlisis de esteres: Deoxiribonucleasa II Ribonucleasa II c) Hidrlisis de glucsidos: Glucoronidasa Acetil hexosaminidasa Hialuronoglucosaminidasa

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Lisosima Neuraminidasa d) Hidrlisis de lpidos: Fosfolipasa A1 y A2 Esterasa de colesterol FOSFATASA ACIDA La enzima fosfatasa cida pertenece a la clase hidrolasa. Las fuentes principales de la fosfatasa cida son la glndula prosttica, plaquetas, el baso, los riones y los glbulos rojos. Estas fosfatasas tienen actividad ptima por debajo de un PH 7,0. La fosfatasa cida prosttica es de mayor inters clnico ya que puede encontrarse en concentraciones sricas elevadas de enzimas que produce en pacientes con carcinoma prosttico con metstasis. La fosfatasa cida es considerada un marcador lisosmico. Esta enzima se encuentra en polimorfo nucleares, neutrfilos, macrfagos, fibroblastos y linfocitos. Tambin fue relacionada con procesos de lisis celular, queratinizacin, metabolismo de huesos, inflamacin y en la sntesis y degradacin de colgeno. III.3.5. Enzimas en Retculo Endoplasmtico Tambin llamado retculo endoplsmico, sistema de membranas que fabrica y transporta materiales dentro de las clulas con ncleo (clulas eucariotas). El RE est formado por tbulos ramificados limitados por membrana y sacos aplanados que se extienden por todo el citoplasma (contenido celular externo al ncleo) y se conectan con la doble membrana que envuelve al ncleo. Hay dos tipos de Retculo Endoplasmtico: liso y rugoso. a) Enzimas en Retculo Endoplasmtico Liso

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El RE liso (REL) desempea varias funciones Interviene en la sntesis de casi todos los lpidos que forman la membrana celular y las otras membranas que rodean las dems estructuras celulares, como las mitocondrias. Las clulas especializadas en el metabolismo de lpidos, como las hepticas, suelen tener ms RE liso. Liberacin de glucosa a partir de Glucosa 6-fosfato va Glucosa 6fosfatasa. El RE liso tambin interviene en la absorcin y liberacin de calcio para mediar en algunos tipos de actividad celular. En las clulas del msculo esqueltico, por ejemplo, la liberacin de calcio por parte del RE activa la contraccin muscular. Adems el RE liso participa en los procesos de detoxificacin celular, siendo el lugar donde son metabolizadas una gran cantidad de drogas como fenobarbital, alcaloides, hidrocarburos aromticos. La detoxificacin tiene lugar por una serie de enzimas oxigenasas entre las que se encuentra el citocromo P450 que dada su inespecificidad son capaces de detoxificar miles de compuestos hidrfobos transformndolos en hidrfilos, ms fciles de excretar.

Enzimas principales: ENZIMA CITOCROMO P -450 FUNCIN Realizan la desintoxicacin en el hgado de diversos compuestos orgnicos. Estas enzimas se caracterizan por su falta de especificidad de sustrato y pueden oxidar miles de compuestos hidrfobos distintos y convertirlos en sustancias mas hidroflicas y ms fciles de excretar. Los efectos no siempre son positivos. Por ejemplo, el compuesto relativamente inocuo venzo pireno que se forma cuando se requema la carne en una parrilla se convierte en un carcinogenopotente por efecto de las enzimas desintoxicantes del REL. Las enzimas del citocromoP-450

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GLUCOSA 6FOSFATASA

metabolizan muchos medicamentos prescritos y la variacin gentica en estas enzimas en los seres humanos explican la diferencia en la efectividad y acciones colaterales de muchos frmacos entre unas personas y otras. Cuando se requiere energa esta enzima convierte el glucgeno en glucosa 6-fosfato luego retiran el grupo Fosfato, lo que genera molculas de glucosa en la sangre, que las lleva a los tejidos del cuerpo. Esta enzima activada por el Mg+2 se encuentra en la cara luminar del (RE) de los hepatocitos y clulas renales sta enzima no se encuentra en el msculo ni en el cerebro por lo que la gluconeognesis no se da en estos tejidos. La glucosa 6 fosfatasa es una enzima de membrana y est localizado en su centro activo dentro del retculo endoplasmatico (RE). La glucosa-6fosfato se transporta hacia el interior del RE por una protena T1, all eshidroglucosa ms Pi por la glucosa 6 - fosfatasa, y entonces la glucosa pasan de nuevo al citosol por las protenas T3 la glucosa 6 fosfatasa est estabilizada por una protena asociada unida a Ca2 La relacin catalizada por la glucosa 6 fosfatasa no requiere de sntesis de ATP si no que es una simple hidrlisis de un ster fosfato. Glucosa 6 fosfato + agua glucosa Pi - 138 K/ mol La deficiencia de la enzima glucosa 6 fosfatasa se denomina enfermedad de von Gienke o glucogenosis de tipo I.

b) Enzimas del Retculo Endoplasmtico Rugoso Presentan ribosomas en su superficie externa adheridos a protenas denominadas riboforinas. Se ubica cerca del ncleo, el retculo endoplasmtico rugoso es el punto inicial de la va biocintica: es el punto donde se sintetizan las protenas, cadenas de carbohidratos y fosfolpidos que viajan por los compartimientos membranosos de la clula. Funciones: Es responsable de la sntesis y segregacin de protenas no citoslicas.

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Sntesis de protenas en ribosomas unidos con la membrana o con ribosomas libres.

Sntesis de protenas secretoras, lisosmicas o vacuolares vegetales en los ribosomas unidos a membranas. Procesamiento Endoplasmtico. de protenas recin sintetizadas en el Retculo

Sntesis de protenas integrales de membrana en los ribosomas unidos a la membrana. Principales enzimas en el Retculo Endoplasmtico rugoso: Enzima Funcin Agrega los carbohidratos a las protenas nacientes y junto con la peptidasa de seal son protenas integrales de la membrana que estn prximas a la translocacin y actan sobre las protenas nacientes conforme entra la luz del retculo Endoplasmtico, trasfiere unos monosacridos especficos de un donador de azcar apropiado a un aceptor de azcar apropiado. La molcula donadora siempre es el azcar de nucletido y la receptora es el extremo creciente del carbohidrato. Retira la porcin N-terminal de la mayora de los polipeptidos nacientes que contiene el pptido de seal. Cataliza la conversin de la fructuosa 6fosfato en manosa 6 fosfato, una reaccin crucial en la va que hace que la manosa este disponible para incorporarla a los oligosacaridos. La afeccion puede tratarse con complementos orales de manosa. Al principio el tratamiento se probo que sufria de hemorragias

OLIGOSACARIL TRANSFERRASAS

PEPTIDASAS DE SEAL ISOMERASAS DE FOSFOSFOMANOSA

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gastrointestinal intolerable, una de las complicaciones frecuentes de la enfermedad. Unos meses despus de iniciar el complemento de manosa el nio lleva una vida normal. Cataliza la unin entre los enlaces de ISOMERASA DE DISULFURO DE PROTEINA (PDI) disulfuro y los residuos de cisterna de las cadenas polipeptidicas. Los enlaces de disulfuro tienen una funcin esencial en el mantenimiento de la estabilidad de las protenas.

III.3.6. Enzimas en el Aparato de Golgi La principal funcin del aparato de Golgi es la secrecin de las protenas producidas en los polisomas del RE rugoso, las cuales se incorporan por la cara cis procedentes de las vesculas de transicin. A continuacin atraviesan la zona media y emigran a la cara trans; desde aqu pasan a las vesculas secretoras para ser eliminadas por un proceso de exocitosis al medio extracelular. En este proceso, las membranas de las vesculas se fusionan con la membrana plasmtica, de tal forma que esta se regenera. Algunas vesculas secretoras que contienen enzimas hidrolticas se

transforman en lisosomas. Adems, en este orgnulo ocurre la glucosilacin de protenas y lpidos para producir glicoprotenas y glicoesfingolpidos. Los azcares, oligosacridos que ya se haban unido a protenas y lpidos en el RE, son eliminados y sustituidos por otros nuevos en el aparato de Golgi. Algunos de los productos que se secretan intervienen en la formacin de la pared celular de las clulas vegetales. Principales enzimas

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ENZIMA

FUNCIN EN EL APARATO DE GOLGI Participan en el proceso de glucosilacin. Y dentro de estas est la transferasa de sialilo (que coloca un acido silico en la posicin terminal de la cadena en clulas animales. Se localiza en extremo trans de la pila de Golgi. Entre otras tenemos a: sialiltransferasa, galactosiltransferasa, N-acetilglucosaminiltransferasa,

galactosiI-N-acetilglucosamina transferasa, etc. (estas GLUCOSIL ltimas enzimas estn involucradas en la transferencia cido CMP-neuramnico (CMP-NANA), UDPgalactosa y UDP-acetilglucosamina a los oligosacridos precursores, las cuales estn altamente concentradas en la fraccin de Golgi de hgado de rata) Una enzima residente de las cisternas mediales del aparato de Golgi. La enzima aparece en una vescula y las cisternas. Se presume que la vescula marcada MANOSIDASA II transporta la enzima en sentido retrgrado para compensar el movimiento de avance de la enzima como resultado de la maduracin de las cisternas. TRANSFERASAS de

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El Aparato de Golgi tambin presenta enzimas que se hallan en el Retculo endoplasmtico, como NADH citocromo b5 reductasa, NADH citocromo c reductasa y 5-nucleotidasa. Adems el Aparato de Golgi se encarga de ensamblar las enzimas que se van encontrar presentes en el lisosoma. GLUCOSIL TRANFERASAS Dentro de estas tenemos: Participan en el proceso de glucosilacin Involucradas en la transferencia de Lipasa Fosfolipasa A1, A2 Fosfatasa cida (varios tipos)
GALACTOSIL-N

Fosfoprotena - fosfatasa Fosfodiesterasa Fosfolipasa e Antisulfatasa A y B Lisozima (Muramidasa) Neuraminidasa Glucosidasa Glucosidasa Galactosidasa Glucoronidasa Hialuronidasa Carboxipeptidasa Catepsina A

Hidrolasas

que

actan

sobre

compuestos glucsidos

Hidrolasas que actan sobre uniones peptdicas

Carboxipeptidasa cida Dipeptidasa Catepsina Bl, B2, C, D, E Colagenasa

Enzimas que actan sobre uniones anhidrido - cido en anhidridos que tienen fosforilo Enzimas que actan sobre las uniones P -N
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Pirofosfatasa Arilfosfatasa

Fosfamidasa

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III.3.7. Enzimas en el Glioxisoma Son organelos que se encuentran en las clulas eucariota, particularmente en los tejidos de almacenaje de lpidos de las semillas, y tambin en los hongos filamentosos. Los glioxisomas son peroxisomas especializados que convierten los lpidos en carbohidratos durante la germinacin de las semillas. En los glioxisomas, los cidos grasos se hidrolizan a acetil-CoA mediante las enzimas -oxidacin peroxisomiales. Adems, contienen las enzimas clave del ciclo del glioxilato (isocitrato liasa y malato sintasa). As realizan la ruptura de los cidos grasos y producen los productos intermedios para la sntesis de azcares por gluconeognesis. Principales enzimas del Glioxisoma ENZIMA Isocitrato liasa. Malato sintasa. FUNCIN Enzima clave del ciclo del glioxilato. Enzima clave del ciclo del glioxilato.

III.4.
III.4.1.

ENZIMAS EN EL NCLEO Enzimas enlazadas a Cromatina Enzima ARN Funcin ARN polimerasa II, localizada en el ncleoplasma Sintetiza precursores de ARN mensajero. Esta
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POLlMERASA II

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polimerasa es el tipo ms estudiado, y se requieren factores de trascripcin para que se una a los promotores del ADN. Produce ARN heterogneo nuclear (ARN-hn) que tras el procesamiento da lugar a los ARN mensajeros protenas. Las ARN polimerasas o transcriptasas, a diferencia de lo que ocurre con las ADN polimerasas, carecen de funcin "correctora de pruebas". Esta diferencia se debe en primer lugar a que los transcritos son cortos y la probabilidad de que uno de los ARN posea una alteracin es baja, y en segundo lugar a que la vida media de los ARN es corta y pronto se vuelve a sintetizar otro ARN nuevo. Por consiguiente el que exista un ARN con una alteracin no es grave ya que durar poco y ser remplazado pronto por otro nuevo sin la alteracin. Sin embargo, un error en la replicacin del ADN puede transmitirse a todas las clulas que deriven por divisin de la clula afectada. (ARN-m) que se traducen a

ARN POLlMERASA III

Las ARN polimerasas III sintetizan ARN de transferencia, ARN ribosmico de 5S y otros pequeos ARN encontrados en el ncleo celular y en el citoplasma. Las ARN polimerasas estn constituidas de al menos 10 subunidades, ciertas de entre ellas son comunes a las 3 enzimas mencionadas. Las ms grandes subunidades de cada polimerasa son homlogas entre ellas y entre sus sub-unidades a, b y b' al ARN polimerasa de la E.coli.

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Los complejos enzimticos de las polimerasas eucariontes son separables en columnas de intercambio inico y sus actividades catalticas de polimerizacin son distinguibles unas de otras por su sensibilidad relativa a la droga alfa amanitina. As se tiene que el tipo enzimtico ms sensible es la ARN polimerasa II (que transcribe ARN mensajeros) y la enzima menos sensible, o relativamente resistente, es la ARN polimerasa I (que transcribe ARN ribosomal). La ARN polimerasa III presenta una sensibilidad intermedia a la droga. Una enzima que cata liza la hidrlisis de nuclesidos trifosfatos a nuclesidos difosfatos. Tambin nucletidos difosfatos TRIFOSFATASA DE NUCLEOSIDO y puede catalizar El la hidrlisis de trifosfatos, FAD. difosfatos, nuclesido tiamina trifosfato

fosfohidrolasas I y II son subtipos de la enzima y se encuentran principalmente en virus. Tambin cumple otra funcin, tal como

transportar Ca2+a travs de la membrana. Estas enzimas pueden ser dependientes de Ca2+, Mg2+, aniones, H+, o ADN. ADN POLIMERASA La ADN polimerasa es una enzima que cataliza la sntesis de ADN a partir de desoxirribonucletidos y de una molcula de ADN plantilla o molde que es la que ser "copiada". Tras la accin de la ADN polimerasa I y una vez que se han eliminado y aadido alrededor de unas 10 bases, interviene la enzima ADN ligasa, que une los extremo libres del fragmento recin formado con el resto de la cadena, recuperando as el ADN su estructura normal. Esta enzima interviene en dos procesos: Por un lado, en la duplicacin del ADN en forma

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de cromatina para dar a cada clula hija una copia del ADN original en el proceso de la mitosis. En este caso, la enzima copia la cadena de nucletidos de forma complementaria (A por T, C por G). Por otro lado, en el proceso de transcripcin del ADN, copiando el ADN de de una de las cadenas de nucletidos, pero esta vez, la copia se realiza en forma de ARN, tambin de forma complementaria (A por U, C por G). La propiedad de las ADN polimerasas para replicar hebras de ADN se utiliza para la reaccin en cadena de la polimerasa, conocida como PCR por sus siglas en ingls, para obtener un gran nmero de copias de un fragmento de ADN particular, amplificndolo para propsitos de investigacin. En cada horquilla de replicacin, la ADN polimerasa y otras enzimas sintetizan dos nuevas cadenas de ADN que son complementarias respecto a las 2 cadenas originales. Durante este proceso, la ADN polimerasa reconoce una base nucleotdica no apareada de la cadena original y la combina con un nucletido libre que tiene la base complementaria correcta. Luego, la ADN polimerasa cataliza la formacin de nuevos enlaces covalentes que ligan el fosfato del nucletido libre entrante con el azcar del nucletido previamente. III.4.2. Enzimas enlazadas al Nucleolo Enzima METILASAS DEL RNA Funcin Es una enzima que cataliza la metilacin de bases o ribosa en las molculas de ARN. Otros tipos de metilasas: DAM La metilasa dam pone un metilo sobre el nitrgeno 6 (m6N) del adnine en la

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secuencia GATC. El ADN listo a partir de clulas dam + contendr Gm6ATC y no ser cortando por enzimas bloqueadas por este modo de metilacin (Mbo I y Bam HI). DCM Las metilasas dcm ponen un metilo sobre el carbono 5 del citosina (m5C) en la secuencia CCAGG o CCTGG. El ADN listo a partir de clulas dcm + contendr Cm5(A/T)GG y no ser cortando por enzimas bloqueadas por este modelo de metilacin (Bst OI). La funcin de la quinasa en la clula Las quinasas incluyen en un gran nmero de enzimas que regulan la actividad de otras protenas y, ms indirectamente, las actividades de las clulas. Todas las quinasas aaden grupos de fosfato a otras molculas, a menudo otras protenas, en la clula. La fosforilacin de las protenas, la adicin de un grupo de fosfato a una cadena del aminocido, es una accin regulatoria muy importante. Por la razn de que cada grupo de fosfato lleva consigo dos cargas negativas, la adicin de un fosfato puede alterar la forma de la protena. La forma alterada de una protena es a menudo relacionada con la actividad alterada de la protena. La habilidad de cambiar la conformacin de una protena entre dos formas diferentes permite un control regulatorio sobre la actividad de la protena. La fosforilacin (la adicin de un grupo de fosfato a una protena) por las quinasas es un proceso reversible, y las protenas pueden ser desfosforiladas (removimiento de un grupo de fosfato) por enzimas que se conocen protena-fosfatasa. Estos dos grupos de enzimas a menudo trabajan juntas para "apagar" y "encender" las seales celulares. Las quinasas juegan un papel muy importante en varios procesos de sealizacin

QUINASA DE PROTENAS

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intracelular, incluyendo aquellos que controlan el crecimiento y la divisin celular. Las quinasas y el cncer El crecimiento celular y los procesos del ciclo celular se encuentran activados constitutivamente en las clulas cancerosas. Las funciones normales ejercidas por las quinasas y las fosfatasas ya no sirven. Una caracterstica clave de las clulas cancerosas es su habilidad de reproducirse en la ausencia de seales externas tales como los factores de crecimiento. En el proceso normal, los factores de crecimiento que son emitidos por otras clulas se ligan a los receptores en la superficie celular, estimulando a que la clula se divida. Las clulas cancerosas encienden estos procesos en la ausencia de un factor de crecimiento. Esto puede ocurrir por una mutacin en un gen de una quinasa o de una fosfatasa. En un ejemplo, la leucemia crnica mieloide, una translocacin cromosomal en particular (llamado el cromosoma Philadelphia) ha sido identificada que crea una quinasa nueva que se encuentra "encendida" todo el tiempo. Los procesos que esta quinasa controla permanecen, efectivamente, siempre activos. Esto resulta en la proliferacin de clulas cancerosas. GHGKGHJJ Ha sido implicada en diferentes facetas de la funcin celular. En mamferos, es una de las principales fosfatasas de serina/treonina y modula muchas protenas involucradas en transduccin de seales, incluyendo molculas de superficie que funcionan como receptores, PQ citoslicas y factores de transcripcin. Adems, modifica protenas de importancia en la regulacin del ciclo celular y en la transformacin, crecimiento y

QUINASA DE PROTENAS

FOSFATASA DE LA FOSFOPROTEINA

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divisin celular. Las ribonucleasas (RNasas), pertenecientes a la superfamilia Ribonucleasa A, son enzimas que participan en varios procesos fisiolgicos, que van desde el procesamiento alternativo del RNA hasta la angiognesis. Estas enzimas son expresadas por diferentes tejidos y exhiben especificidades variables contra diferentes sustratos de RNA. El potencial teraputico de las RNasas se ha sugerido en procesos oncognicos; adicionalmente, se ha descrito que tienen actividad antiviral directa y el potencial de activar clulas del sistema inmune innato induciendo su maduracin y la produccin de citoquinas proinflamatorias. Nuestro grupo de investigacin ha realizado estudios que sealan la capacidad de cuatro RNasas recombinantes: EDN, -4EDN, RNasa A y angiogenina de inhibir la replicacin del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 en linfocitos T de sangre perifrica activados. En este artculo se revisar la clasificacin de las ribonucleasas que constituyen la superfamilia RNasa A y se describir, en forma detallada, lo que se conoce de la funcin biolgica, accin antiviral y mecanismo de accin de las RNasas a las que se les ha reportado actividad antiviral.

RIBONUCLEASAS

IV.

CONCLUSIONES

Prcticamente todas las reacciones qumicas dentro de las clulas son

catalizadas por las enzima.

Las enzimas incrementan la velocidad de las reacciones uniendo

sustratos en la posicin adecuada, alterando la conformacin de los

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sustratos para aproximarlos al estado de transicin y participando directamente en las reacciones qumicas.

Las enzimas son muy importante a que seran la clave de todos los procesos vitales y fisiolgicos que rigen los fenmenos de la vida.

Todas las actividades de las enzimas son reguladas para cubrir las necesidades esenciales de la clula.

La actividad enzimtica puede ser controlada a travs de la unin de molculas pequeas, de interaccin con otras protenas y de modificaciones covalentes.

Las coenzimas trabajan junto con las enzimas para transportar grupo bioqumicos entre sustratos.

V.

ANEXO

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ENZIMAS Y MANIPULACIN GENTICA La investigacin gentica necesita la manipulacin de ADN para poder construir teoras sobre los mecanismos que suceden en las clulas in vivo y elucidar la estructura del genoma y su organizacin (intrones, exones, elementos de regulacin), tambin para poder desarrollar tcnicas nuevas de curacin y terapia mediante la caracterizacin de los genes teraputicamente interesantes, y para la fabricacin de plantas y animales de las caractersticas deseadas, con un mayor rendimiento agrcola y ganadero. Es importante mantener siempre en el pensamiento que la manipulacin gentica sirve un fin muy determinado, que a veces se difumina cuando se entra en profundidades tcnicas. Tcnicas bsicas: Hay que tener en cuenta que toda la manipulacin gentica implica un aislamiento del medio celular, por lo que las condiciones de experimentacin son todas in vitro, y no tienen nada que ver con el metabolismo de las cidos nucleicos. Con esta premisa en mente, los resultados que se pudieran obtener mediante estas tcnicas siempre debern ser contrastados y verificados antes de extrapolarlos a la situacin de un organismo vivo. Estas tcnicas utilizan las enzimas presentes en las clulas como herramientas para poder cortar, empalmar, duplicar, amplificar y recombinar los fragmentos de ADN con los que se trabaja; en suma, las enzimas efectan las mismas funciones que en el medio fisiolgico, pero libres de todo factor de regulacin, para hacer su actividad ms predecible y permitir una manipulacin al antojo del experimentador. sta es la principal diferencia entre los sistemas in vivo e in vitro.

Mtodos enzimticos.

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Las tcnicas de manipulacin enzimtica de los cidos nucleicos son mucho ms finas y especficas que las anteriores, por lo que se puede hablar de diseccin gnica. Las enzimas, llamadas nucleasas, se extraen de diversos organismos, generalmente microscpicos, y hay de todos los tipos: endo- y exonucleasas, ADN o ARNasas, especficas de secuencia o no, especficas de hebra sencilla o de doble hebra, y todas las combinaciones entre ellas. En la siguiente lista se detallan algunas de las ms utilizadas. ADNasa I. Es una endonucleasa de E. coli que corta ADNds y ADNss, sin especificidad de secuencia, pero preferentemente detrs de pirimidinas. El corte al azar sobre ADNds se realiza en distintos sitios en cada hebra si el medio tiene Mg2+, pero si el catin es Mn2+ los dos cortes estn generalmente en el mismo sitio. El uso indiscriminado (al azar) de esta enzima permite determinar zonas de actividad de la cromatina mediante la mayor abundancia de cortes, lo que significara que el ADN est ms expuesto al corte. Exonucleasa III. Otra enzima de E. coli que elimina nucletidos uno por uno desde los extremos 3'-OH. Acta sobre todos los tipos de ADNds que tengan esos extremos (lineal y circular con una muesca), y en los ADNds se utiliza para fabricar extremos cohesivos (extremos de una molcula de ADNds en los que una de las hebras sobresale un poco sobre la otra). ADN polimerasa I. Es la reina de la fiesta por excelencia. Se obtiene de E. coli y fue una de las primeras en estudiarse y caracterizarse. Como todas las ADN polimerasas conocidas, tiene tres actividades diferenciadas: ADN polimerasa 5'-3' (necesita empezar por un extremo 3'-OH libre), exonucleasa 5'-3' (para eliminar cebadores in vivo), y ADN exonucleasa 3'-5' (Actividad correctora de errores). La actividad exo5'-3' se utiliza para sustituir una hebra en un ADNds con una

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muesca (producida por la ADNasa I) por otra exactamente igual, pero marcada, en lo que se llama marcaje por desplazamiento de la mella. Sin embargo, esta actividad es tan potente que puede significar un problema, al eliminar cualquier hebra con un extremo 5'-fosfato, por lo que se ha diseado una ADN polimerasa especial, llamada ADN polimerasa Klenow (que slo consta de la subunidad con ese mismo nombre, el ncleo), en la que falta la actividad exonucleasa 5'-3'. Estas ADN polimerasa especiales no pueden hacer traslado de la mella, sino slo rellenar huecos o eliminar extremos cohesivos al alargar el extremo ms corto sobre el ms largo (rellenar los huecos generados con Bal31). Otra funcin de esta polimerasa es la tcnica de polimerizacin con iniciacin al azar (random priming), en la que un oligo pequeo (4 6 nt) se une ms o menos inespecficamente a un fragmento de ADN desnaturalizado (la unin inespecfica se obtiene suavizando las condiciones de hibridacin). El oligo presenta el extremo 3'-OH necesario para comenzar la sntesis, que ha de hacerse a un pH ligeramente cido (6,6) para minimizar el efecto de la actividad correctora de errores, que evitara la polimerizacin sobre el oligo, al no aparear exactamente ste con el ADN molde.

VI.

BIBLIOGRAFA
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DE ROBERTIR E.H. Biologa Celular y Molecular 12 Edicin. Buenos

Aires El Ateneo 2005.

H. ROBERT HORTON. Bioqumica. Editorial Prentice Hall. Mxico.

C. A. SMITH & E. J. WOOD. Molculas Biolgicas. Editorial Addison Wesley Iberoamericana. Mxico.

Bioqumica,

Capitulo

6:

ENZIMAS

CONCEPTOS

BSICOS

CINTICA-Pag 103-116

MONTGOMERY Clula 3 Edic.Editorial Harcourt Brace PAG-69-72

HARPER bioqumica ilustrada 16 edic.

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