Patologia del ARN Maria Isabel Giraldo El ARN se define como una molcula que dirige las etapas

intermedias de la sntesis proteica., el ADN no puede actuar solo, se vale del ARN para transferir informacin vital durante la sntesis de protenas (produccin de las protenas que necesita la clula para sus actividades y su desarrollo). Un paso clave en el origen de la vida fue la evolucin de esta molcula que puede copiarse a s misma, como tambin llevar informacin y causar reacciones qumicas (como las requeridas para copiar una molcula). Se hipotetiza que en la historia temprana de la vida, el ARN ocupa el centro del ciclo y realiza diversas tareas dentro de la clula, almacenando informacin gentica, copindose as misma, y funciones bsicas metablicas. La fraccin del genoma que es transcrito excede la fraccin que codifica para protenas, teniendo en cuenta la gran cantidad de transcritos no codificantes, la diversidad estructural, propiedades catalticas y regulatorias del RNA, hay mutaciones que se presentan en regiones que no codifican para protenas tericamente tiene el potencial de producir ARNs que tienen una funcin similar a los efectos de algunas protenas mutantes. Ejemplos claros en que esto puede ocurrir es cuando se involucran unas secuencias repetitivas en el ARN no codificante (ARNnc) con lo cual se van a producir algunas anomalas que conllevan a la manifestacin de algunas enfermedades ARN dominantes. En este captulo, se discutirn involucran el ARN. algunas enfermedades que

Distrofia miotonica La distrofia miotnica (DM) o enfermedad de Steinert es un trastorno multisistmico con manifestaciones que involucran el msculo, cerebro, corazn, ojos, tracto

gastrointestinal, glndulas endcrinas y esqueleto. La edad de comienzo ms frecuente oscila entre la tercera y la cuarta dcadas y la expresividad es sumamente variable.

Fig.1 Estructura del gen DMPK localizado en el cromosoma 19. Contiene 15 exones (color azul) que codifican para la protena DMPK. La flecha indica el sitio de inicio de la transcripcin del gen. Cuando la regin 3-no traducida (3-UTR), la cual contiene los repetidos CTG, sobrepasa las 40 repeticiones se comienzan a observar manifestaciones clnicas de la distrofia miotonica.

Se pueden encontrar distrofias miotnicas originadas por anomalas genticas diferentes: - la distrofia miotnica de tipo 1 se debe a una anomala gentica situada en el cromosoma 19 (regin 19q13.2-13-3). Se trata de un triplete de nucletidos (CTG), repetido de 50 a ms de 3.000 veces. (figura 1) - la distrofia miotnica de tipo 2 est causada por una anomala gentica situada en el cromosoma 3 (regin 3q13.3-q24). Se trata de un cuadriplete de nucletidos (CCTG), repetido entre 75 y ms de 11.000 veces. La anomala presente en las dos enfermedades conlleva a una disfuncin del metabolismo de los ARN mensajeros. Los ARN portadores de una gran amplificacin

CUG (DM1) o CCUG (DM2) se acumulan en el ncleo y perturban la expresin de las protenas que se producen en ellos. Ha sido difcil entender cmo una mutacin que no afecta a la protena producto del gen DMPK podra causar la DM1. Sin embargo, durante los ltimos siete aos se han realizado una serie de estudios utilizando lneas celulares de origen muscular y ratones transgnicos para la DM1 que han permitido establecer las bases moleculares de esta patologa en el msculo. [1,2] Se ha evidenciado la presencia de un nmero anormal de repeticiones del triplete CTG que le confiere al RNA mensajero (RNAm) del gen DMPK una conformacin anormal que le impide ser transportado hacia el citoplasma para ser traducido, provocando su acumulacin anormal en el ncleo de las clulas musculares. La presencia abundante del ARNm mutante da lugar a interacciones aberrantes entre este transcripto y diferentes protenas nucleares, lo que afecta otras funciones celulares bsicas, como son la maduracin alternativa de transcritos y la activacin de la transcripcin. Asimismo se ha encontrado que el transcrito mutante altera la funcin de protenas que regulan el ciclo celular (p21) y el programa de diferenciacin muscular (MyoD y miogenina), provocando finalmente la inhibicin de la diferenciacin muscular. [3, 4] (figura 2)

Fig. 2. Modelo de la inhibicin de la diferenciacin muscular por la expresin de la repeticion CTG. El RNA mensajero (RNAm) mutante del gen DMPK adquiere una conformacin anormal que le impide ser transportado al citoplasma. Su presencia abundante en el ncleo secuestra a factores involucrados en la maduracin alternativa de transcritos (CUGBP1) y en la activacin de la transcripcin (Sp1); asimismo, altera la funcin de las protenas que regulan la diferenciacin muscular (MyoD y miogenina) y el ciclo celular (p21), lo cual finalmente impide la diferenciacin muscular en los pacientes con distrofia miotnica (DM1).

Protenas que participan en la patologa de DM Mediante el uso de la biologa molecular se conoce el mecanismo por el cual la interaccin de secuencias de ARN con expanciones de tripletes CUG o CCUG con protenas de unin que conlleva a la regulacin anormal del empalme alternativo de un selecto grupo de pre-mARNs [5, 6]. Se han identificado varias protenas de unin a estas secuencias repetitivas entre ellas se encuentra: Las protenas CELF, una familia de protenas unidas al ARN que regulan diversos aspectos de biognesis de ARNm, incluyendo el empalme alternativo, transporte y estabilidad [7]. Dentro de esta familia esta CUG-BP1, fue la primera en identificarse por unirse a la expanicion de oligonucleotidos CUG in vitro [8]. Las protenas p21 y MEF2A son relevantes en la DM porque participan en la diferenciacin del msculo esqueltico. Se ha propuesto que CUG-BP1 es el sustrato de la fosforilacin normal para la DMPK kinasa [12] y que la prdida de la actividad DMPK en clulas con DM1 conducira a una acumulacin de CUG-BP1 hipofosforilada en el ncleo disminuyendo la traduccin de la protena p21 [13, 14]

Otras protenas implicadas son las MBNL que fueron inicialmente descritas como una protenas requeridas para los fotorreceptores y desarrollo del musculo en Drosophila [15, 16], y en mamferos, homlogos tienen la funcin de regular el empalme alternativo [17]. En mamferos hay tres genes MBNL, MBNL1y MBNL2 que estn expresados en el musculo esqueltico, corazn y cerebro, y MBNL3 esta expresado principalmente en placenta [18, 19]. Las protenas MBNL contienen cuatro motivos de dedos de zinc del tipo Cys3His por los cuales se unen a cidos nucleicos. El RNA con >20 repeticiones

CUG forma horquillas de RNA de doble cadena conteniendo los pares de bases G-C y los residuos U desparejados [20, 21]. MBNL tiene una fuerte afinidad por este RNA de doble cadena con repeticiones CUG in vitro y se colocaliza con los foci nucleares que contienen RNA con repeticiones CUG y CCUG en clulas con DM [20, 22, 23, 24]

ATAXIA ESPINOCEREBELAR TIPO 8, 10 y 12 Y ENFERMEDAD DE HUNTINGTON TIPO 2 (HDL2) Expansiones de las repeticiones CAG en regiones que codifican para protenas de diversos genes conlleva a diferentes tipos de ataxia espinocerebelar y enfermedad de Huntington [25]. El tamao de las expansiones son usualmente de 42 a 200 repeticiones. En comn en ARN con expansiones repetitivas de los tripletes CUG, CGG y CAG se han observado que son propensos a formar bucles (harpins) [26], activa la proteina kinasa [27], y causa redistribucin de MBNL1 en clulas [28], aumentando la posibilidad de que la secuencia repetitiva exponencial de CAG en la regin del ARN que codifica la protena pueda tener un papel importante en la patognesis [29], pero en estudios realizados en modelos murinos y en moscas no evidencia el papel patognico de la secuencia expansin repetitiva CAG del ARN excepto que sirve como molde directo de la sntesis de protenas [30, 31].

La ataxia espinocerebelar tipo 8 se encuentra dentro de un grupo heterogeneo de desordenes neurodegenerativos, en el cual la neurona se degenera progresivamente y la presencia de gliosis afecta el cerebelo y estructuras relacionadas con el sistema nerviosa central. En algunos de estos desordenes los nervios perifricos, msculos, o

nervios del sistema autnomo son tambin afectados. Se han realizado diversas investigaciones para clasificar este grupo, pero solo se conoce la patologa clnica. Resientes estudios en gentica molecular han determinado el loci y las mutaciones responsables de este desorden. [32]

SCA8 es causado por la expansin de repetitiva de triplete CTG esta expresada en ARNnc, se sita en la regin 3UTR. La localizacin de la expansin no es en una regin exnica, del gen localizado en 13q21, [33]. En algunos casos de ataxias hereditarias no se conoce la funcin de las protenas codificadas por los genes responsables. En el caso de la SCA8 se sabe que el gen codifica para una protena de 748 aminocidos, de localizacin citoplasmtica, y se postula que tiene una funcin de organizacin del citoesqueleto celular [34]. La ataxia espinocerebelar tipo 10 la mutacin es causada por la expansin de la repeticin de un pentanucleotido ATTCT dentro del intron 9 del gen E46L que codifica para la protena citoplasmtica ataxin 10 (ATX10) de 475 aminoacidos de funcin no conocida [35, 36], este gen se expresa ampliamente en cerebro, testculo, ri;on, corazn y musculo esqueletico [36,37] [figura 3]. Esta mutacin es una de las mas grandes, con tamaos que comprende de 800 a 4500 repeticiones las cuales involucran disfuncin cerebelar y convulsiones con variable expresin de la poli neuropata, signos piramidales, asi como tambin dao cognitivo y neurosiquiatrico [35, 38].

Figura 3. Mutations causing known and potential RNA gain-of-function effects. Noncoding microsatellite expansion disorders. Schematic diagram showing position and relative sizes of disease-associated microsatellite repeat expansions that are located, or can be located, within noncoding portions of their respective genes. Schematic depiction of various regions of theoretical gene: black lines represent promoter (left) and intron (right), shaded blue boxes represent 5_ and 3_ untranslated regions, and solid blue boxes represent protein coding regions. The locations of the repeat expansions for SCA12 and HDL2 differ depending on the start site or alternative splicing pattern of those genes.

Ataxia espino cerebelar tipo 12. Es causado por la expancion repetitive no codificante de CAG en la regin 5 del gen PPP2R2B [Figura 3]. Este gen codifica una subunidad especifica de la proteina de la holoenzima PP2A fosftasa. Los pacientes con ataxia espinocerebelar presentan afecciones tales como temblores, disfuncin cerebelar, hiperreflexia, y algunas caractersticas Parkinsonianas y demencia [39 , 40].

Dependiendo del sitio de iniciacion de la transcripcion, la repeticion CAG puede estar localizada en la region UTR 5 o en la region promotora corriente arriba del gen sin

evidencia de datos de que la repeticin este localizada dentro del fragmento abierto de lectura o que codifique para una protena. Se ha demostrado que que los efectos de las repeticiones sobre la expresin de un reporter demostro que las expanciones repetitivas causo un incremento en la expresin [41]. Por lo tanto investigadosres sugieren que la expansin puede causar la expression de PPP2R2B, el cual a su vez puede alterar la actividad PP2A, causando cambios en la fosforilacion de la protena.

Enfermedad de huntington La enfermedad de Huntington tipo 2 es otra enfermedad neurodegenerativa, Este desorden esta caracterizado por anormalidad en el movimiento, demencia y problemas siquiatricos [42] la neuropatologa muestra atrofia cortical y striatal, y la presencia de inclusiones intranucleares [43]. Es un desorden causado por una expansin repetitiva CTG en el gen junctophilin 3 (JPH3) en el cromosoma 16q24.3. La funcin de la junctophilin 3 permanece sin resolverse, pero el papel de esta protena esta en la estructura junctional de la membrana y en la regulacin del calcio intracelular. En esta sndrome dependiendo del empalme alternativo del transcripto JPH3, la expansin repetitiva de CUG podra ser en un intron o en la regin UTR-30, dependiendo del modelo de empalme alternativo (Figure 3), o podra codificar una polileucina o una poliadenina. Potencialmente la polileucina patogna o los tractos de poliadenina se prev que el resultado de las dos formas de empalme alternativo, y la expresin de la expansin CUG de los transcriptos puede desencadenar

la desregulacin de genes, lo que resulta en un efecto txico del ARN [42].

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