Fisiologia Vegetal

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Introduo
Senescncia o processo natural de envelhecimento ao nvel celular ou o conjunto de fenmenos associados a este processo. Ocorre por meio de uma programao gentica que envolve deteriorao dos telmeros e ativao de genes supressores tumorais. As clulas que entram em senescncia perdem a capacidade proliferativa aps um determinado nmero de divises celulares. Senescncia no o destino inevitvel de todos os organismos. Uma variedade de organismos, incluindo alguns animais de sangue frio, tem a senescncia mnima. Se a velhice como um processo biolgico pode ser abrandada, interrompida ou mesmo revertida, um assunto de especulao cientfica e de investigao actual. O tempo de vida das folhas pode variar desde algumas semanas a alguns anos. A longevidade de uma folha ento determinada por um processo de senescncia, conduzindo finalmente morte. Tal processo tambm condicionado, por exemplo, por alteraes do fotoperodo e da temperatura. As citocininas constituem um grupo de hormonas vegetais responsvel pela regulao de diversos processos de desenvolvimento da planta que incluem, entre outros, as divises celulares, a senescncia foliar, a diferenciao de cloroplastos e a expanso de folhas e cotildones. Estas so produzidas nas razes e transportadas, pelo xilema, para todas as partes da planta. Citocininas, como por exemplo a benziladenina e a cinetina, atrasam a senescncia foliar, atrasando a degradao de vrios constituintes celulares, nomeadamente clorofilas. Ao nvel do mercado, as citocininas adiam o envelhecimento, o amarelecimento e a perda de qualidade dos produtos vegetais. Neste trabalho laboratorial, procedeu-se observao do efeito de uma citocinina, a benziladenina (BA), na senescncia foliar.

Material e Mtodos
Material Biolgico
Utilizaram-se 14 plantas de P. vulgaris de tamanho semelhante, com o 1 par de folhas desenvolvido e a 1 folha trifoliada com cerca de 1,5 cm.
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Preparao e Tratamento das Plantas

A partir de 2 plantas, congelou-se 0,10 g de material vegetal do 1 par de folhas para posterior quantificao do teor inicial de clorofilas a e b. s restantes 12 plantas eliminou-se o sistema radicular (fonte endgena de citocininas), deixando a mesma poro de caule abaixo do 1 par de folhas e retirou-se os cotildones (reservas de nutrientes). Em cada um dos 5 recipientes cheios com gua destilada e 1 contendo 9 de gua destilada e 9 de soluo nutritiva, colocaram-se 2 plantas (das 12). Estas foram ento sujeitas aos seguintes tratamentos: Grupos de plantas 1 2 3 4 5 6

Tratamento Plantas controlo, sem aplicao de BA Plantas controlo, sem aplicao de BA, mantidas em soluo nutritiva BA aplicado em ambas as folhas do 1 par BA aplicado a uma das folha do 1 par e deixar a outra folha por tratar BA aplicado na metade direita de cada folha do 1 par e deixar a metade oposta por tratar BA aplicado nos fololos da 1 folha trifoliada, deixando o 1 par de folhas por tratar

Tabela 1: Condies experimentais dos vrios grupos de plantas.

Nota: Aplicao de BA na pgina superior das folhas; as folhas tratadas foram identificadas com um cordel; soluo de BA (6-benzilaminopurina) de concentrao 30 mg/dm3.

Duas vezes por semana, durante cerca de 15 dias, a gua destilada e a soluo nutritiva foram renovadas e as razes adventcias removidas. Os tratamentos de BA foram repetidos uma vez por semana.

Extraco e Quantificao de Clorofilas

Utilizando amostras de 0,10 g para cada extraco/quantificao, seguiu-se o seguinte procedimento: Num almofariz com pilo, procedeu-se homogeneizao do extracto, na presena de acetona a 80% e areia de quartzo. Transferiu-se o extracto para um tubo de centrfuga, lavando-se o almofariz at perfazer um volume final de acetona de 7 ou
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10 mL (ou mais), consoante o grupo de plantas. Depois da calibrao dos tubos procedeu-se sua centrifugao (10 min a 5000 rpm), recolhendo-se ento o sobrenadante e medindo o seu volume final. Com recurso a um espectrofotmetro determinou-se a absorvncia a 645 e 663 nm.

Resultados
Os procedimentos anteriormente referidos permitiram o preenchimento das seguintes tabelas e grficos:
Grupos de plantas 3 4T 4 NT 0,1 0,1 0,1 10,0 10,0 7,0 0,2591 0,3443 0,1462 0,5195 0,6707 0,3620 5,90 3,50 0,940 7,59 4,74 1,23 4,20 1,65 0,410

Leituras Peso (g) Volume (mL) =645 nm =663 nm Clor.a (mg/dm3) Clor.b (mg/dm3) Clor.a+b (mg/gpf)

0 0,1 7,0 0,3598 0,6630 7,45 5,14 0,881

1 0,1 7,0 0,2239 0,4887 5,60 2,84 0,591

2 0,1 10,0 0,5022 0,7958 8,76 7,78 1,65

5T 0,1 10,0 0,3509 0,6708 7,58 4,90 1,25

5 NT 0,1 7,0 0,2234 0,4969 5,71 2,79 0,595

6 0,1 7,0 0,0265 0,0545 0,621 0,352 0,0681

Tabela 2: Resultados experimentais obtidos e respectivas concentraes de clorofila (a, b e a+b), calculadas a partir das frmulas fornecidas pelo docente; Aos valores de absorvncia apresentados j foram subtrados os valores dos respectivos brancos.

Exemplo de clculos para o grupo 1:

[Cl a] = 12,7 x A 663nm 2,69 x A 645nm = 12,7 x 0,4887 2,69 x 0,2239 = 5,60 mg/dm3 [Cl b] = 22,9 x A 645nm 4,68 x A 663nm = 22,9 x 0,2239 12,7 x 0,4887 = 2,84 mg/dm3

[Cl a+b] = 5,60 + 2,84 = 8,44 mg/dm3 [Cl a+b] =

" "' # "#

8,44 x 0,007 = 0,0591 mg

= 0,591 mg/gpf

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EFEITO ANTI-SENESCENTE DAS CITOCININAS SENESCENTE

1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 (inicial) 1 2 3 4T 4NT 5T 5NT 6

Concentrao (mg/gpf)

Teor de clorofilas

Tratamentos
Grfico 1: Concentrao de clorofilas (Y) em funo do tratamento efectuado (X No grupo de controlo 1 o (X); o teor clorofilino diminuiu em relao ao inicial, enquanto no grupo de controlo 2, mantido em soluo nutritiva, orofilino , o mesmo aumentou de forma acentuada. No grupo 3 este valor manteve se praticamente igual. As folhas ntou manteve-se tratadas no grupo 4 apresentam um valor muito mais elevado de concentrao clorofilina (superior ao i inicial) do que as no tratadas. O mesmo acontece no grupo 5 para a metade da folha que foi tratada e para a que no foi. Finalmente, o grupo 6 manifesta um teor muito reduzido em relao ao inicial.

Fig.1: Grupo de plantas 1. Primeiro . par de folhas verde-escuro e fololos escuro bem desenvolvidos.

Fig.2: Grupo de plantas 2. Primeiro par de folhas verde-claro, com menores sinais de senescncia que no grupo 1.

Fig.3: Grupo de plantas 3. Presena de folhas verde verde-claro e verde-escuro, no sendo possvel a observao de fololos.

Fig.4: Grupo de plantas 4. Folha sem tratamento de cor amarela e folha tratada com BA de aspecto mais esverdeado.

Fig.5: Grupo de plantas 5. Metade da folha sem tratamento apresenta sintomas de senescncia (zona amarela) enquanto a metade tratada est mais verde.

6. Fig.6: Grupo de plantas 6 Folhas do primeiro par sem sintomas de senescncia e fololos mais desenvolvidos que no grupo 1. Presena de razes no caule.

Fisiologia Vegetal Grupos de plantas 3 3,7 BA em ambas as folhas do 1 par

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1 Comprimento mdio dos fololos (cm) Tratamento 5,8 Plantas controlo (sem tratamento)

6 7,3 BA nos fololos da 1 folha trifoliada

Tabela 3: Valores do comprimento mdio dos fololos disponibilizados pelo docente e respectivo tratamento para cada grupo de plantas; Os fololos do grupo 6 mostram o maior comprimento mdio, tendo crescido mais comparativamente com o grupo controlo. As plantas do grupo 3 possuem os fololos muito pouco desenvolvidos, havendo um menor crescimento em relao ao grupo controlo.

Discusso
O teor inicial de clorofila (0) permite uma comparao com os restantes grupos de plantas. Assim, a diferena do teor de clorofilas do grupo de controlo 1 em relao ao grupo de controlo 2, pode ser explicada pois o ltimo foi mantido em soluo nutritiva, sendo continuamente alimentado e desenvolvendo as suas folhas sem qualquer limitao. No grupo 1 ocorreu ento a mobilizao dos nutrientes para a folha trifoliada. As plantas do grupo 3 tambm continuaram o seu desenvolvimento uma vez que foram tratadas com a soluo de BA, tendo ocorrido um aumento do teor clorofilino pela mobilizao dos nutrientes para o primeiro par de folhas tratadas com BA. Para os grupos 4 e 5, as diferenas entre o teor clorofilino para as folhas (ou partes de folhas) no tratadas relativamente s tratadas tambm explicado pela presena de BA, sendo que a mobilizao dos nutrientes se deu das folhas (ou partes de folhas) no tratadas para as que sofreram tratamento. No grupo 6, era de esperar que ocorresse senescncia no primeiro par de folhas, o que no se verifica muito provavelmente devido presena de razes no caule, sendo que a diminuio do teor de clorofilas pode ser explicado pela mobilizao dos nutrientes das folhas do primeiro par para os fololos da folha trifoliada. Os resultados finais obtidos para o teor de clorofilas a+b foram concordantes com os esperados, excepo dos dois ltimos, referentes aos grupos de plantas 5NT, que deveria ser mais baixo e 6, que deveria ser mais elevado. Estes dois valores tambm deveriam ser prximos um do outro. Uma explicao possvel ser a ocorrncia de erros experimentais que podero ter afectado a concentrao final do extracto preparado: perda de extracto na passagem para os tubos de centrfuga, medio incorrecta do volume final de extracto, entre outros.

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Respeitante aos comprimentos dos fololos foram igualmente os esperados uma vez que o tratamento com BA nos fololos do grupo 6 potenciou o seu desenvolvimento enquanto os fololos do grupo 3, na ausncia de BA, sofreram um desenvolvimento muito reduzido. Posto isto, podem ser mencionadas algumas limitaes na realizao deste trabalho e portanto ser importante referir que as plantas preparadas pela turma no sobreviveram, possivelmente devido a alteraes nas condies ambientais, por isso, na fase da quantificao de clorofilas e posterior clculo do teor clorofilino, foram utilizadas amostras de plantas preparadas pelo docente. Tambm o valor do teor clorofilino inicial foi fornecido pelo docente. Ainda assim, de um modo geral, os resultados obtidos permitiram-nos concretizar o objectivo inicial e concluir acerca da influncia da BA na senescncia foliar. Esta citocinina no s atrasa a senescncia foliar como tambm potencia o desenvolvimento e crescimento da planta.

Bibliografia e Sites Consultados

http://pt.wikipedia.org/wiki/Senesc%C3%AAncia http://en.wikipedia.org/wiki/Senescence http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1469-8137.1967.tb05426.x/pdf Lincoln Taiz and Eduardo Zeiger, 2010. Plant Physiology. Sinauer Associates, Incorporated. GUIA DOS TRABALHOS PRTICOS Apontamentos das aulas