Sntesis de frmacos mediante enzimas unidas a matrices

Jos Alejandro Molina Protenas recombinantes y biotecnologa

 Frmaco: Sustancia qumica purificada utilizada en la prevencin, diagnstico, tratamiento y cura de una enfermedad; para evitar o promover la aparicin de un proceso fisiolgico especficos.
Modo obtencin del Frmaco
2% 12% 13% 73%

Sint. Orgnica Biotecnolgico

Semisntesis Natural

To Market, to Market Ann. Rep. Medicinal Chem. 1990-2007

 Retos de la Industria Farmacutica hoy: 1. Reducir la produccin de residuos por kilogramo de producto. 2. Desarrollar frmacos donde las dosis sean menores (dosis actuales de mg al nivel de g)
Desarrollo de procesos de sntesis ms eficaces y selectivos, utilizando mejores catalizadores. Por ello la Biocatlisis y las Biotransformaciones estn adquiriendo un papel importante en el diseo de las nuevas sntesis de frmacos

Biocatlisis v/s catlisis Biotransformaciones

Biotecnologa blanca => Procesos Limpios

ESTABILIZACIN DE ENZIMAS
Enzimas aisladas son capaces de discriminar de un modo especfico y selectivo nicamente uno de los ismeros posibles de una mezcla racmica, logrando el producto deseado de forma enantiopura (eutmero y distmero)
La reutilizacin de enzimas implica como paso previo la estabilizacin del biocatalizador, existiendo diversas tcnicas

a) Inmovilizacin de enzimas.
b) Modificacin qumica. c) Ingeniera proteica por mutagnesis dirigida. d) Ingeniera del medio de reaccin

Mtodos de inmovilizacin
Consiste en mantener la biomolcula unida o atrapada en un soporte fsico, conservando su actividad cataltica y permitiendo el flujo de sustratos y productos
Enlaces covalentes Entrecruzamiento

Irreversibles
Atrapamiento (inclusin y microencapsulacin)

Adsorcin Quelacin Formacin de enlaces disulfuro

Reversibles

Enlaces covalentes
Enlace entre un grupo funcional reactivo de la enzima (amino, tiol, hidroxil,imidazol, -COOH) y el soporte (Monocapas tiol , oro, CNBrSepharosa)

Entrecruzamiento
Enlace directo entre enzimas. Se aade un agente de bajo MW: dialdehdos, diiminosteres, diisocianatos,diaminas, sales de bisdiazonio

Atrapamiento
Por inclusin Matriz de gel: Silica gel, poliacrilamida, agarosa, carragenatos. micro-encapsulacin Un agente encapsulador (nano partculas de slice, polihidrocloruro de alilamina o poliestirensulfonato) Soportes porosos y Micelas

Adsorcin
Soportes: celulosa, gel de slica, colgeno, hidroxiapatita, Acetato Interacciones inicas o fuerzas dbiles

Quelacin
Sales de metales de transicin o hidroxidos depositados en la superficie de soportes orgnicos (celulosa, quitina, acido algnico y bases de slice)

Formacin de enlaces disulfuro.

Ventajas
Gran aumento de la estabilidad de la enzima o clula inmovilizada. Evita formacin de agregados Reutilizacin aumenta la productividad enzimtica Aumenta la facilidad de recuperacin y purificacin de los productos. Se aumenta la facilidad de operacin y control del proceso, al trabajar en condiciones ms suaves.

Desventajas
Generalmente se disminuye la actividad enzimtica. La alteracin de la conformacin de la enzima respecto de su estado nativo. El biocatalizador es ms caro que la enzima nativa. La gran heterogeneidad del sistema enzima-soporte

Aplicacin de Enzimas en la obtencin de frmacos

Omapatrilato: antihipertensivo. Es un inhibidor de la enzima convertidora de la angiotensina

D-Aminoxidasa T. variabilis

Pichia pastoris PDH FDH

Antagonistas del tromboxano A2 (TxA2): Vasoconstrictor con

actividad antiagregatoria de plaquetas,

 Acilacin de Purina: compuesto obtenido es ms soluble por lo que aumenta la biodisponibilidad. Esta transformacin es prcticamente imposible de realizar por una acetilacin qumica

Befloxaton (37): Antidepresor

GDH

Produccin de antibiticos -lactmicos

Penicilina G es transformada en cido 6-aminopenicilnico (6-APA), el cual se utiliza para sntesis de penicilinas semisintticas 6-APA puede expandirse para la sntesis de cefalosporinas, como el cido 7-aminodesacetoxicefalospornico (7-ADCA)

Expandasa

1 Kg de 6-APA 20 Kg de reactivos por mtodo Qco.

1 Kg de 6-APA 0,02 Kg de NH3 y 2 L de agua por Biotransformacin

 Insercin de cadenas laterales.

o D-aminocido oxidasa y glutaril-acilasa

Conclusiones
El uso de enzimas permite a la industria farmacutica generar nuevos mtodos de sntesis ms eficientes, selectivos y limpios Inmovilizar una enzima unindola a una matriz le confiere gran Estabilidad y facilita que al final de la reaccin la enzima sea fcilmente recuperada y Reutilizada Con el uso de enzimas, los frmacos producidos son cada vez ms puros, permitiendo mejorar su actividad teraputica, dosis y riesgo de toxicidad El desafo en lo futuro es mejorar cada vez ms las tcnicas de inmovilizacin, y ampliar la gama de enzimas utilizables, creando incluso Reactores Enzimticos