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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO ESCOLA DE QUMICA INTRODUO METODOLOGIA CIENTFICA

Desenvolvimento de Nanopartculas Lipdicas Slidas e sua Aplicao na Indstria de Frmacos


Carolina Pereira Felipe Rocha Lorraine Greco Matheus Patrcio Thais Quintela

Sistemas carreadores de frmacos Nanopartculas Nanopartculas lipdicas slidas (SLN) Uso das SLNs como carreador de frmacos Objetivos (HUANG, et al., 2013) Metodologia (HUANG, et al., 2013) Resultados (HUANG, et al., 2013) Concluses (HUANG, et al., 2013) Bibliografia

Desenvolvimento de frmacos
Doena Custo Frmaco

Sistema carreador

Destino

Sistemas carreadores de frmacos


Objetivo
Liberao controlada e especfica no destino; Otimizao da velocidade de cedncia;

Regime de dosagem apropriado;


Biocompatibilidade com organismo; Nanocarreadores Nanopartculas polimrica, lipossomas, niossomas, nanopartculas magnticas, nanopartculas lipdicas slidas

Nanopartcula
Caracterizam-se por partculas dispersas, quando em

suspenso, ou por partculas slidas, quando secas, com


tamanho mdio de 10-1000nm.

O princpio ativo (frmaco, material biolgico) pode ser


disperso, encapsulado ou suportado nas nanopartculas.

Nanoesfera

Nanocpsula

Nanopartcula Lipdica Slida


As SLNs so constitudas do lipdeo slido, emulsificante,
gua/solvente. Vantagens


SLN

tamanho na escala nanomtrica; rea superficial grande; No produz metabolitos txicos; Baixa mobilidade dos ativos inconporados;
Desvantagens

Capacidade moderada de incorporar ativos; Baixo perodo de estocagem

Nanopartcula Lipdica Slida


2007 2008 2009 2010 2011 2012 2013 0 200 400 600 800 1000

Fig.1- Produo cientfica em SLNs (elaborado a partir da busca na base de dados do site Science Direct em 30/09/2012).

Atuao das SLNs como carreadores de frmacos


O destino das SLNs no organismo depender da rota de administrao e distribuio. As enzimas de degradao mais importantes das SLNs so lipases, que esto presentes em vrios rgos e tecidos. As rotas de admistrao mais utilizadas so: oral, tpica, intravenosa (MUKHERJEE et al., 2008). As principais aplicaes de SLNs tm sido nos tratamentos: Neoplasma; Cncer de mama; Tuberculose; Linfoma;

HUANG, X.; Chen, Y.-J.; Peng,D.-Y.; Li, Q.-L.; Wang, X.-S.; Solid lipid nanoparticle as delivery systems for Gambogenic acid. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. (102) p. 391 397, 2003.

O uso do cido gambognico (GNA) como agente inibidor da proliferao de tumores foi alvo de estudos promissores.
(YAN et al., 2011) (CHENG et al., 2010)

A limitao clnica a baixa solubilidade do cido em sistemas aquosos, tempo de meia-vida, e a incompatibilidade com a administrao via intravenosa.
Necessidade de uma nova formulao para empregar o GNA Testar o potencial de SNL para carrear o GNA, reduzindo a sua toxidez e melhorando sua eficincia teraputica.

Fruto Gamboge

GNA

Objetivo
Desenvolver uma nanopartcula lipdica slida carreadora de GNA que possa atuar como agente anticancergeno no organismo.

Objetivos Especficos
Preparar a SLN-GNA Analisar a morfologia da SLN-GNA Medir o tamanho de partcula e a distribuio (PI) da SLN-GNA Caracterizar a Calorimetria Diferencial de Varredura (DSC) da SLN-GNA Testar a estabilidade da SLN-GNA Determinar a eficincia do encapsulamento e carregamento do ativo da SLN-GNA Determinar a cintica e farmacocintica da SLN-GNA Testar a segurana

Metodologia
Extrao do GNA a partir do fruto gamboge e preparo da SLN-GNA pelo mtodo de preparo da emulso com glicerilmonoestearato (GMS) seguido da evaporao do solvente (DAI et al., 2010).
Fase orgnica SOLUO 1 GNA ACETONA GMS LCOOL LECITINA SOLUO 2 Fase aquosa F68 GUA BIDESTILADA Tween 80

Adicionar a Soluo1 a 70oC Soluo2 sob agitao de 1000 RPM.

Agitar por 1hr. Evaporar dos solventes orgnicos. (SLN 1). Congelar as
nanopartculas por 16hr. a -20oC e liofilizar por 48hr. a -45oC. (SLN 2).

Morfologia
Utilizou-se microscopia eletrnica de transmisso (TEM) para caracterizar as SLN-GNA obtidas.

SLN1
Partculas esfricas sem aglomerados superfcies regulares

SLN2
Partculas quase esfricas sem aglomerados superfcies irregulares

Morfologia
Utilizou-se Zetasizer para caracterizar o dimetro de partcula

(MD) e distribuio de tamanho (PI) das SLN-GNA obtidas.


MD 163,3nm PI 0,203 MD 173nm PI 0,253

SLN1
Tamanhos uniformes PI estreito

SLN2
Aumento do MD PI estreito

Calorimetria Diferencial de Varredura (DSC)


Utilizou-se o DSC para caracterizar o fluxo de energia calorfica

associado a transies dos materiais em funo da temperatura.


No termograma da SLN-GNA (C) no aparece o pico do PF do GNA indicando que no ocorreu cristalizao do GNA dentro da SLN;

A- GMS B- GNA C- SLN-GNA D- Mistura dos componentes SLN1 E- Referncia

O sistema SLN-GNA apresenta menor PF indicando menor ordem comparado aos componentes;

Estabilidade
Testou-se a estabilidade trmica da SNL-GNA a 4, 25 e 40oC por 40 dias cada em termos de mudana de tamanho da partcula (MD). Foi determinada tambm a porcentagem de carga de GNA (E%). O aumento de MD foi 40oC >25oC>4oC indicando que o aumento de temperatura diminui a estabilidade da SNL-GNA; A reduo de E% foi 40oC >25oC>4oC indicando que o aumento de temperatura diminui a carga de GNA encapsulada na SNL-GNA;

Estudos cinticos
Testou-se a liberao do GNA por 96hr. para avaliar o potencial de

controle da liberao da SNL-GNA usando tcnica de difuso com


balo de dilise em tampo fosfato (PBS pH7,4). 67,83% do GNA livre foi liberado em apenas 2 horas; Foi observado um perfil de liberao bifsico para as SLN (Liberao rpida 40,86% em 8hr., Liberao lenta e estvel 89,46% em 96 hr.); No houve alterao de comportamento entre a SLN1 E SLN2.

GNA SLN1 SLN2

Farmacocintica
Testou-se a farmacocintica do GNA num grupo de 12 ratos divididos

em dois grupos: a um grupo foi administrado GNA livre e a outro o


GNA-SNLs. Utilizou-se uma dose de 2,5mg/Kg. Aps a administrao, foram coletadas amostras de sangue de 0 a 720 min. E foram analisadas por cromatografia lquida de alta eficincia (HPLC). A concentrao plasmtica de GNA foi maior com a administrao de GNA-SLN; A velocidade de degradao da SLN in vivo foi relativamente alta comparada com os ensaios in vitro;

Estudo da Segurana
Utilizou-se microscopia de fluorescncia para avaliar a morfologia das

veias.

SLN-GNA

GNA livre

Na imagem A no h degenerao da parede da veia nem necrose; Na imagem B pode-se ver que a parede foi comprometida, h formao de trombos e sinais de necrose;

Concluses
Foram obtidas nanopartculas lipdicas slidas carreadoras do cido gambognico via produo de emulso seguida da evaporao do solvente orgnico; Foram obtidos tanto a suspenso das SLN-GNA (SLN1) como as nanopartcluas secas por liofilizao (SLN2); Nos testes in vitro ambas (SLN 1 e SLN2) mostraram potencial para controle da liberao; Nos testes in vivo foi obtido uma rpida degradao da SLN, em trabalhos futuros pretende-se investigar outros tipos de SLN para carrear o GNA;

Referncias Bibliogrficas
FINKE, J.H.; SCHUR, J.; RICHTER, C.; GOTHSCH, T.; KWADE, A.; BTTGENBACH, S.; MLLER-GOYMANN, C., The influence of customized geometries and process parameters on nanoemulsion and solid lipid nanoparticle production in microsystems. Chemical Engineering Journal. v.209, p. 126-137, 2012. HUANG, X.; CHEN, Y.-J.; PENG,D.-Y.; LI, Q.-L.; WANG, X.-S.; Solid lipid nanoparticle as delivery systems for Gambogenic acid. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. v. 102, p. 391397, 2003. KHAN, S., Solid Lipid nanoparticles: A Review. World Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Science v. 1, n. p. 96-115, 2012. LIU, J.; HU, W.; CHEN, H., NI, Q.; XU, H.; YANG, X., Isotretinoin-loaded solid lipid nanoparticles with skin targeting for topical delivery. Int J Pharm. v. 328, p. 191-195, 2007. MEHNERT, W.; MADER, K., Solid lipid nanoparticles Production, characterization and applications. Advanced Drug Delivery Reviews, v. 47, p.16596, 2001. MISHRA, B.; BHAVESH, B.; TIWARI, S., Colloidal nanocarriers: a review on formulation technology, types and applications toward targeted drug delivery. Nanomedicine: Nanotechnology, Biology, and Medicine. v.6, p. 924, 2010. MUKHERJEE, S.; RAY, S.; THAKUR, RS., Solid lipid nanoparticles: A modern formulation approach in drug delivery system. Indian J Pharm Sci. v.71, n.4, p. 349-358, 2009. SILVA, A.; KUMAR, A.; WILD, W.; FERREIRA, D.;SANTOS, D.; FORBES, B.; Long-term stability, biocompatibility and oral delivery potential ofrisperidone-loaded solid lipid nanoparticles. International Journal of Pharmaceutics. v.436, p.798 805, 2012. STREBHARDT, K.; ULLRICH, A., Paul Ehrlich's magic bullet concept: 100 years of progress. Nat. Rev. Cancer v.8,p. 473480, 2008. YAN, F.; WANG, M., CHEN, H.; SU, J.; Gambogenic acid mediated apoptosis through the mitochondrial oxidative stress and inactivation of Akt signaling pathway in human nasopharyngeal carcinoma CNE-1 cells.Eur. J. Pharmacol. v. 652, p.23-32, 2011.