Control de la expresin gnica a nivel postranscripcional.

Traduccin y estabilidad del ARN

Ribosoma

El ARNt tambin se procesa

Longitud promedio de 75 a 80 nt. Se sintetizan por la ARNpolimerasa III Precursor ms largo (pre ARNt) Modificaciones de bases. (10%) Eliminacin del extremo 5 Eliminacin de intrn catalizado por protenas, no por ARN Regin especfica (anticodn) que se une a l ARNm (codn)

La aminoacil ARNt sintetasa reconoce a su aminoacil-ARNt especfico a travs de extensas interacciones entre la enzima y varias partes del ARNt: Tallo aceptor Tallo D bucle anticodn La enzima tambin reconoce al aminocido correcto y excluye a los aminoacidos incorrectos

Aminoacil-tRNA sintetasas

Une los aa al correcto tRNA 20 enzimas diferentes Requiere ATP

Reconocimiento del tARNt: puntos de contacto entre tRNA y sitio activo de protena (15 sitios, muchas veces incluye anticodon)

Ribosomas 4 sitios de binding mRNA-binding site A site (aminoacyl) P site (peptidyl) E site (exit)

40S subunit

Procariotas : subunidades 30s y 50s

Traduccin (panorama general)

3 fases Iniciacin Elongacin

Terminacin
y Reciclado

INICIACION Procariotas Eucariotas

Tanscripcin- traduccin acopladas Iniciacin en mRNAs que se estn transcribiendo

Iniciacin citoplasmtica Estrategias diferentes para interaccin mRNA-RNAr Traduccin Cap-dependiente (Scanning) Traduccin Cap-independiente (IREs) 13 factores diferentes

Reconocimiento de sitio de iniciacin

Reconocimiento de sitio de inicio (Secuencia Shine-Dalgarno) 3 Factores de iniciacin (IF1,IF2,IF3)

En la Iniciacin
Hay factores proteicos que segn la etapa en que participen se llaman IF, EF y RF (con e delante si son eucariotas). Participan tres factores: - IF1 e IF3: estabilizan la subunidad pequea separada de la grande.

Los mensajeros de procariotas tienen el codon de iniciacin AUG (con menor frecuencia GUG y ms raramente UUG) y corriente abajo tienen una secuencia (Shine-Dalgarno) muy conservada rica en purina complementaria de la secuencia del RNA de la subunidad pequea (16S).
Secuencia Shine- Dalgarno (Procariotas) 5'--UAAGGAGG(5-10 bases)AUG mRNA 3'--AUUCCUCC........ 16S rRNA

Secuencia Kozak (Eucariotas)

5'--ACCAUGG- mRNA

En procariotas el codn de inicio de la traduccin est inmediatamente despus de la secuencia Shine-Dalgarno

secuencia del ARNr 16S complementaria a la Secuencia Shine-Dalgarno

Inicio de la traduccin en procariotas

1. Unin de factores de iniciacin a la subunidad 30S. 2. Unin del primer tRNA y el ARNm a la subunidad pequea.

3. Unin de la subunidad 50S. Hidrlisis de GTP unido a IF2 y liberacin de IF2-GDP del complejo.

IF2:
Permite que el primer aminoacil-tRNA se una al sitio P, asociado a IF2 que ha de estar en forma activa (uniendo un nucletido GTP) y es esencial. Es el nico aminoacil-tRNA que se une cuando slo est la subunidad pequea. La metionina est formilada en el a -amino (formilmetionina). Cuando se une la subunidad grande se disocian todos los factores proteicos. IF1 e IF3 salen pero IF2 ha de hidrolizar el GTP para salir.

El inicio de la traduccin en eucariotas es un proceso ms complejo

- Hay muchos ms factores de iniciacin.
- No hay secuencias de Shine-Dalgarno. - Metionina no formilada.

En la mayora de casos, en eucariotas, la traduccin depende de Cap y ocurre por un mecanismo de Scanning
El modelo de escaneo fue propuesto por Marilyn Kozak (1978) - Reconocimiento m7G-cap en extremo 5 - Unin de subunidad 40s

- scanning hasta AUG iniciador (ACCAUGG)

Inicio de la traduccin en eucariotas (Cap dependiente)

El ARNm es reconocido y dirigido hacia el ribosoma por los factores eIF-4

El capuchn del extremo 5 es reconocido por eIF-4E, que forma un complejo con eIF-4A y eIF4G. eIF-4G se une a la protena de unin a poli A Estos factores de iniciacin de la traduccin, asociados a los extremos 5y 3del ARNm dirigen a ste hacia la subunidad ribosmica 40S.

Inicio de la traduccin en eucariotas (Cap dependiente)

1. 2. 3. Formacin del complejo de preiniciacin 43 S (eIF1, eIF1A, eIF3, eIF5, subunidad 40S) . Unin del iniciador tRNAiMet a la subunidad menor (participa eIF2-GTP). Unin del ARNm al complejo (participan los factores eIF4, que interactan con Cap y cola poli A).

4.
5.

Localizacin codn de iniciacin (scanning).

Unin de la subunidad mayor del ribosoma. eIF5 desencadena la hidrlisis del GPT unido a eIF2 y ste se libera como eIF2-GDP; los otros factores tambin.

Inicio de la traduccin en eucariotas (Cap dependiente)

La subunidad 40S, unida al metionil tRNA y a los eIF chequea al ARNm hasta encontrar un codn AUG

La hidrlisis del GTP unido a eIF-2 producida por eIF-, provoca la liberacin de los factores de iniciacin, incluso eIF-2 unido a GDP.

La subunidad 60S se une a la subunidad 40S para formar el complejo de iniciacin 80S, inicindose la traduccin.

Inicio de la traduccin en eucariotas (Cap dependiente)

Inicio de la traduccin en eucariotas (Cap dependiente)

La elongacin es similar en procariotas y eucariotas Hay tres factores de elongacin: EF-Tu eEF-1a EF-Ts eEF-1bg EF-G eEF-2

EF-Tu: Media la entrada del amino acil tRNA

EF-G: Translocacin del ribosoma EF-Ts: Media liberacin de EF-Tu-GDP y regeneracin de EF-TU-GTP

Enlongacin
Participan factores de enlongacin unidos a GTP, que guan al aminoacil tRNA hacia el ribosoma (eEF1a y GTP estn unidos al segundo aminoacil tRNA). El ribosoma selecciona el segundo aminoacil tRNA mediante el centro decodificador ubicado en la subunidad pequea del ribosoma.

Enlongacin

Una vez que se libera eEF1a, el ribosoma (la subunidad mayor) cataliza la formacin del enlace peptdico. La translocacin est mediada por eEF2 y la hidrlisis de GTP. El ribosoma se desplaza tres nucletidos sobre el ARNm.

La enlongacin requiere de eEF1a unido a GTP. eEF-1bg participa en el proceso de regeneracin de eEF1a unido a GTP.

Terminacin
Uno de los tres codones (UAA, UAG, UGA) se colocan en el sitio A.

Un factor de liberacin reconoce a estos codones en el sitio A.

El factor de liberacin se une al codn de terminacin. La cadena polipeptdica se libera, seguida de la disociacin del ARNt y el ARNm del ribosoma

- GGQ CCA acceptor stem

ARNt

eRF1 humano

anti-codon loop

anticodon-like site -TASNIKS-

termina la traduccin

eRF1

reconoce a los tres codones STOP

Facilita la hidrlisis de la unin pptido-tRNA

 El inicio de la traduccin dependiente del extremo 5 es estimulado por la protena de unin a poli A (Pabp1p), que interacciona con eIF4G. Esta interaccin circulariza al ARNm y facilita la formacin del complejo de iniciacin. Este mecanismo asegura que solo el ARNm intacto sea traducido.

POLISOMA

POLISOMA

Estructuras del ARNm en el extremo 5 no codificante

Estructura de tallo y bucle

AUG

m7Gppp

Estructuras del ARNm en el extremo 3 no codificante

Elementos ricos en A/U (AREs)
stop

- sitios de unin para protenas estabilizadors o desestabilizadoras

AAAAAAAAAAAAA

orf

Elementos de localizacin del ARNm

- sitios de unin para protenas que interaccionan con el citoesqueleto - sitios de unin para protenas (localizadas en lugares especficos del citoplasma) y que anclan al ARNm en esa regin.

Regulacin de la traduccin
Unin de protenas represoras que bloquean la traduccin. Ejemplo: regulacin de la sntesis de ferritina (protena que almacena hierro como reserva y protege a la clula contra la toxicidad del Fe libre.

Regulacin de la traduccin
La misma protena que regula la traduccin del ARNm de la ferritina, controla la degradacin del ARNm de la transferrina.

La misma protena que regula la traduccin del ARNm de la ferritina, controla la degradacin del ARNm de la transferrina.

Regulacin de la traduccin
Unin de protenas represoras que bloquean la traduccin mediante la unin a secuencias reguladoras del extremo 3. Estas protenas son responsables de la localizacin del ARNm en regiones especficas de la clula.

Regulacin de la traduccin
Modelo del control de la poliadenilacin citoplasmtica e inicio de la traduccin.
En ovocitos inmaduros, la protena de unin al elemento de poliadenilacin citoplasmtico rico en U., reprime la traduccin de los ARNm

Cuando se produce la maduracin, se activa una proteina quinasa que fosforila a CPEB, liberando al represor. El alargamiento de la cola poli A permite la unin a sta de la protena de unin a poli A citoplasmtica.

Control de la estabilidad del ARN

La estabilidad de los ARNm es un factor determinante en la eficiencia de la expresin gnica.

Vas de degradacin del ARNm en eucariotas

Eliminacin del casquete (independiente de desadenilacin) Dependiente de desadenilacin Endonucleoltica

ARN reguladores
La interferencia por ARN fue descubierta por primera vez en C. elegans en 1998, cuando Andrew Fire, Craig Mello y col. Encontraron que la infeccin de ARN de doble cadena inhiba la expresin de un gen con una secuencia de ARNm complementaria

ARN reguladores
Regulacin de la traduccin por micro ARN
Los miRNA desempean un importante papel en la regulacin gnica , tanto durante el desarrollo embrionario temprano, desarrollo del sistema nervioso, musculatura, corazn. Se ha demostrado que muchos miRNA regulan la proliferacin y supervivencia de la clula

ARN reguladores
Un miRNA se genera a partir de un precursor (pre-ARNmi) que fue transcripto por la RNA pol II. El precursor puede codificar para ms de un miARN. Drosha se une al RNA de doble cadena y lo corta en la base del tallo, liberando un premiARN de 60 a 70 nuclotidos. ste es transportado hacia el citoplasma. En el citoplasma, Dicer se une al pre-miRNA y lo recorta, dando lugar al miRNA. Por ltimo, los miARN dirigen al complejo RISC hacia un ARN homlogo para inducir su degradacin (complementariedad perfecta) o la inhibicin de la traduccin, desadenilacin y degradacin del ARNm (complementariedad imperfecta)

ARN reguladores

Los ARNi pueden tambin inhibir la transcripcin.

Inducen modificaciones de histonas que provocan condensacin de cromatina y formacin de heterocromatina

Otro mecanismo de regulacin de la traduccin en clulas eucariotas es mediente la modulacin, por fosforilaciones, de la actividad de factores de iniciacin como eIF2 y eIF4e.

Algunos ARNm eucariotas poseen sitios internos para el ingreso de los ribosomas internal ribosome entry site (IRES); stos estn alejados del extremo 5que contiene el cap. En estos casos es posible que la traduccin ocurra sin el mecanismo de scanning. Esta estrategia es aprovechada por algunos virus, ya que tienen ARNm policistrnicos Traduccin cap-independiente (1988-Picornavirus)

Unin directa de subunidad ribosomal 40s en sitio IRES del ARNm.

 Protenas que participan en el inicio de la traduccin Picornavirus clivan el extremo Nterminal de eIF4G, impidiendo la interaccin con eIF4E. eIF4G sigue siendo funcional para la iniciacin ya que interacciona con eIF3 y probablemente mediante la interaccin de una protena de unin a IRES. La unin de Pab1p produce la circularizacin del ARNm - proteje al ARN de la degradacin - Selecciona ARNm intactos. - Los ribosomas pueden realizar mltiples ciclos de traduccin sin disociarse.

Modificaciones postraduccionales
Plegamiento de protenas Procesamiento de protenas Escisin de protenas Glicosilacin Anclaje delpidos
N-miristoilacin Prenilacn Palmitoilacin

Fosforilacin Ubiquitinacin