AMBIENTAL

Biorremediacin Monitoreo Control de la ambiental polucin

AGROPECUARIO

Rendimiento de Calidad de cosechas alimentos Salud animal

APLICACIONES UTILES Diagnstico

Vacunas

MEDICINA

Teraputica

Biosensores Bioprocesos

Cultivo de clulas y tejidos Ingeniera gentica Anticuerpos monoclonales

HERRAMIENTAS BIOTECNOLOGICAS
Antisentido Ingeniera de protenas

Bioqumica
Ingeniera Bioqumica Microbiologa

Biologa Celular
Inmunologa

CONOCIMIENTO Computacin CIENTIFICO

Gentica Fisiologa

Biologa Molecular

Nos encontramos frente a una nueva Revolucin Industrial llamada Biotecnologa, no basada en hierro y acero sino en microbios que, en manos de cientficos, se convierten en minsculas fbricas para producir frmacos, compuestos qumicos industriales, combustibles o alimentos.

El prefijo BIO se refiere a bacterias, levaduras y otras clulas vivas, as como a componentes de estas clulas.
La TECNOLOGIA consiste en relucientes depsitos de acero, llenos de microbios, conectados a sus fuentes de alimentacin y oxgeno mediante una intrincada red de vlvulas que se cierran y abren segn los ritmos que marca una computadora.

DEFINICION

Segn la Organizacin de Cooperacin y Desarrollo Econmicos:

Es la aplicacin de los principios cientficos y de la ingeniera al procesamiento de materiales por agentes biolgicos para proveer bienes y servicios.

PRINCIPIOS CIENTIFICOS Y DE LA INGENIERIA: Conjunto muy amplio de disciplinas que ponen especial nfasis en la Microbiologa, Bioqumica, Biologa Molecular, Gentica, Inmunologa e Ingeniera Bioqumica y Qumica.

MATERIALES:

Incluye a aquellos orgnicos e inorgnicos, en tanto los agentes biolgicos son, en general, catalizadores biolgicos; en particular, microorganismos, clulas animales, clulas vegetales, virus y enzimas.

BIENES: Todos los productos (alimentos, productos farmacuticos, recuperacin de metales, etc.) SERVICIOS: Lo relacionado especficamente con las prestaciones tales como purificacin de agua o tratamiento de efluentes y extraccin de derrames de petrleo.

AREAS TEMATICAS PRIORITARIAS

SALUD: Vacunas (desarrollo de vacunas por procedimientos que utilicen ingeniera gentica). Reactivos de diagnstico: Desarrollo de reactivos por tcnicas inmunolgicas (enzimo-inmunoensayos o por ingeniera gentica).

AREA AGRICOLA: Diagnstico de fitopatgenos en plantas de inters econmico. Desarrollo de agentes de control biolgico y plantas. Desarrollo de plantas transgnicas Mtodos de mejoramiento de especies a travs de tcnicas no convencionales. Aceleracin en la obtencin de hbridos.

Utilizacin de marcadores moleculares.

Identificacin y caracterizacin de genes de inters.

AREA PECUARIA:

SANIDAD ANIMAL:
Desarrollo de mtodos para el diagnstico de enfermedades animales. Produccin de nuevas vacunas virales, bacterianas y parasitarias por tcnicas de avanzada. PRODUCCION ANIMAL: Manipulacin y sexado de embriones. Hormonas para mejoramiento de produccin animal. el la

PRODUCCION DE INSUMOS INDUSTRIALES: Mejoramiento y control de calidad de las industrias de alimentos, incluyendo derivados lcteos, vinos y cervezas. Tratamiento biolgico de efluentes.

Entrando ya en tema

El desarrollo de un proceso de produccin a gran escala, en forma exitosa, es el resultado de acelerar e intensificar un concepto original, generalmente un procedimiento de laboratorio o a pequea escala.

La actividad de desarrollo se concentra en tres reas principales:

Desarrollo de los organismos. Desarrollo del medio de cultivo.

Ingeniera de fermentacin.

EL FERMENTADOR

DEFINICION OPERATIVA:

Contenedor en el que se mantiene un medio ambiente favorable para la operacin de un proceso biolgico deseado.

En cuanto al biorreactor: Para cada proceso biotecnolgico, el sistema de contencin ms apropiado debe disearse para brindar el mejor medio ambiente, optimizado para el crecimiento celular y actividad metablica.

Equipos accesorios.
Vlvulas de seguridad
Manmetros Vlvulas de control Tuberas Control de temperatura Control de pH Control de espumas Puntos de muestreo

El medio ambiente puede considerarse en tres aspectos:

BIOLOGICO QUIMICO

FISICO

Fermentacin
Para el cultivo de microorganismos en condiciones ptimas, as como para la produccin por microorganismos de los metabolitos o las enzimas deseados deben ser desarrollados procedimientos de fermentacin

Tipos de fermentadores
Air lift: al medio del cultivo se le inyecta aire para ser agitado, el cual tambin sirve como fuente de oxigeno para el crecimiento microbiano. Tanque agitado: el medio de cultivo es movido interior por medios mecnicos.

Columna de aire

.Sistemas

de aireacin y agitacin

La agitacin es necesaria para: 1- incrementar la velocidad de transferencia de oxgeno desde las burbujas de aire al medio lquido; los microorganismos no pueden utilizar oxgeno gaseoso, sino solamente el que se encuentra en disolucin.

2- aumentar la velocidad de transferencia de oxgeno y nutrientes desde el medio a las clulas. Debido al movimiento se evita que las clulas creen reas estancadas con bajos niveles de oxgeno y nutrientes. 3- impedir la formacin de agregados celulares.

4- aumentar la velocidad de transferencia de productos metablicos de las clulas al medio.

5- aumentar la tasa o la eficiencia de la transferencia de calor entre el medio y las superficies de refrigeracin del fermentador.

Tipos de agitadores.

Tipos de fermentacin:
Crecimiento en suspensin: los organismos estn sumergidos y dispersados en el medio nutritivo y su movimiento sigue al medio

Crecimiento con soporte: los organismos crecen como una mono capa o pelcula sobre una superficie en contacto con un medio nutritivo.

TECNOLOGIA DE BIOPROCESOS FERMENTACION

Las etapas en la manufactura de productos en la tecnologa de bioprocesos son, esencialmente, similares independientemente del organismo utilizado, del medio elegido y del producto buscado.

En todos los ejemplos, se cultiva gran nmero de clulas en condiciones controladas. Los organismos deben cultivarse y motivarse para formar el producto deseado, mediante un sistema de contencin tcnica y fsica (el biorreactor) y un medio correcto en su composicin y parmetros reguladores del crecimiento, tales como temperatura y aireacin.

PRINCIPIOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO

El crecimiento de microorganismos puede verse como el incremento en el material celular, expresado en trminos de masa o nmero de clulas.

El incremento en biomasa puede determinarse gravimtricamente o numricamente para sistemas unicelulares.

Tiempo de duplicacin: Se refiere al tiempo requerido para duplicar el peso de la biomasa.

Tiempo de generacin:
Se refiere al tiempo necesario para duplicar el nmero de clulas.

En un proceso biotecnolgico, existen tres formas de hacer crecer a los microorganismos en un biorreactor: -Por lotes o discontinua (batch) -Semi-continuo (fed-bach) -Continuo

Modos de operacin de los fermentadores:

Operacin por lotes: puede ser considerada como un sistema cerrado. A tiempo cero, la solucin esterilizada de nutrientes se inocula con microorganismos y permite que se lleve acabo la incubacin en condiciones optimas de fermentacin.

La composicin del medio de cultivo, la concentracin de biomasa y la concentracin de metabolitos cambia generalmente en forma continua como resultado del metabolismo de las clulas

La naturaleza compleja del crecimiento de microorganismos por lotes, se muestra tal como sigue:

La fase 1 o lag, es un tiempo de aparente no crecimiento, pero estudios bioqumicos demuestran actividad metablica, indicando que las clulas estn en proceso de adaptacin a las condiciones ambientales y que un nuevo crecimiento comenzar, eventualmente.

Existe, luego, una fase de aceleracin transitoria cuando el inculo comienza a crecer que es seguida, rpidamente, por una fase de crecimiento exponencial. En la fase exponencial, el crecimiento microbiano ocurre a la mxima velocidad posible para ese microorganismo, con nutrientes en exceso, parmetros de crecimiento ideales y ausencia de inhibidores.

Sin embargo, en cultivos por lote, el crecimiento exponencial es de duracin limitada y, a medida que las condiciones nutricionales cambian, la velocidad de crecimiento disminuye y se entra en la fase de deceleracin, seguida de la fase estacionaria, donde el crecimiento global no se obtiene, por falta de nutrientes.

La fase final del ciclo es la fase de muerte, cuando la velocidad de crecimiento ha cesado. La mayora de los procesos biotecnolgicos por lotes se detiene antes de esta fase, debido a la disminucin en el metabolismo y a la lisis celular.

Algunos medios para prolongar la vida de un cultivo por lotes: -Adicin gradual de componentes nutritivos concentrados (carbohidratos), aumentando el volumen del cultivo (utilizado para produccin industrial de levadura). -Adicin de medio al cultivo (perfusin) y extraccin de un volumen igual de medio usado, libre de clulas (utilizado para cultivos de clulas animales).

Ventajas de un proceso por lotes:

Las principales son: menor riesgo de contaminacin, flexibilidad operacional cuando los fermentadores se utilizan para distintos productos, un control ms cercano de la estabilidad gentica del organismo, una mejor coordinacin con estadios del proceso entre lotes previos y posteriores.

Desventajas del proceso por lotes:

La principal es la alta proporcin de tiempo improductivo en la operacin del fermentador, dificultad de diseo y la operacin de procesos que no estn en estado estacionario y la variabilidad entre lotes. Los fermentadores deben ser vaciados, limpiados, esterilizados y recargados antes de cada fermentacin, operaciones todas esenciales pero no productivas.

En procesos por lotes, estas operaciones pueden tomar tanto tiempo como la fermentacin misma. En un proceso continuo, por el contrario, una corrida puede durar semanas o meses, es decir que el tiempo no productivo es, en proporcin, pequeo.

Fermentacin alimentada (fed-batch): en los procesos alimentados los sustratos se aaden escalonadamente a medida que progresa la fermentacin Fermentacin continua: se establece un sistema abierto. La solucin nutritiva se aade continuamente al biorreactor y una cantidad equivalente de solucin utilizada de los nutrientes, con los microorganismos, se saca simultneamente del sistema.

 Biorreactor mezclado homogneamente: Este se utiliza como un quimiostato o como un turbidostato. En el quimiostato en edo. De equilibrio, el crecimiento de las clulas se controla ajustando la concentracin de un sustrato. Cualquier sustrato que se requiera (CHO, N2, sales, O2) puede ser utilizado como sustrato limitante.

En el turbidostato el crecimiento de las clulas se mantiene constante utilizando la turbidez para controlar la concentracin de biomasa y la velocidad de alimentacin de la solucin de nutrientes se ajusta de forma apropiada.

Reactor de flujo de tapn: En este tipo de fermentacin continua la solucin de cultivo fluye a travs de un reactor tubular sin mezclado.

Intercambiadores de calor
Esterilizacin:
Esterilizacin de fermentadores. En el laboratorio, el mtodo estndar de esterilizacin es el calor: 120C de calor hmedo durante 15 min o 160C de calor seco durante, al menos, 1 hora. A escala industrial, el calor seco es prohibitivamente caro, salvo en casos muy especiales y se utiliza, habitualmente, la esterilizacin por calor hmedo.

Esterilizacin del fermentador y el medio conjuntamente.

El calentamiento consigue mediante:

se

Inyeccin de vapor en el medio, por lo que el medio se prepara ligeramente ms concentrado para compensar la dilucin por el vapor condensado. El medio se calienta por conduccin, haciendo pasar vapor por la camisa de termostatizacin.

Esterilizacin por separado del fermentador y el medio.

Este sistema ofrece ventajas ya que reduce el tiempo en el que el recipiente de fermentacin es improductivo: un fermentador vaco se esteriliza con relativa rapidez.

Pasos a tener en cuenta: -Cambio de escala -Diseo de medios para procesos de fermentacin -Fermentacin slidos en sustratos

-Tecnologa de cultivos de clulas de plantas y animales -Procesamiento posterior de la muestra

Procesamiento posterior de la muestra. Purificacin.

El diseo y la operacin eficiente de los procesos de purificacin, son elementos vitales para obtener los productos deseados para uso comercial. Deberan reflejar la necesidad de no perder ms que lo absolutamente necesario del producto final.

Este procesamiento final involucrar, principalmente, la separacin inicial de la mezcla de cultivo hacia una fase lquida y una slida, con la subsecuente concentracin y purificacin del producto deseado.

El procesamiento involucrar ms de una etapa: -Destilacin -Centrifugacin

-Filtracin
-Ultrafiltracin -Extraccin con solventes

-Adsorcin
-Tamices moleculares -Electroforesis

-Cromatografa de afinidad
-Liofilizacin

TECNOLOGIA UTILIZANDO ENZIMAS

La tecnologa de enzimas involucra la produccin, aislamiento, purificacin, uso en forma soluble y, finalmente, la inmovilizacin de las enzimas para su utilizacin en gran variedad de biorreactores.

La utilizacin de sistemas enzimticos libres de clulas, presenta ventajas respecto de los procesos qumicos que involucran un nmero de reacciones secuenciales.

En fermentacin, el uso de microorganismos como catalizadores puede presentar las siguientes limitaciones:

1. Una alta proporcin del sustrato ser utilizada para convertirse en biomasa 2. Pueden ocurrir reacciones secundarias intiles 3. Las condiciones para el crecimiento de los microorganismos pueden ser diferentes de las requeridas para la formacin del producto 4. El aislamiento y purificacin del producto deseado, a partir de la mezcla de fermentacin, puede ser dificultoso.

INGENIERIA GENETICA E INGENIERIA PROTEICA DE ENZIMAS

La utilizacin de estas tcnicas ha posibilitado producir enzimas industriales con muy buena calidad y pureza.

Crecimiento de microorganismos conteniendo la enzima de utilidad

Purificacin de la enzima Determinacin de la secuencia parcial de aminocidos Sntesis de oligonucletidos

Purificacin de mARN total

mARN

ADN

Clonacin del ADN en E. coli

Identificacin de clones
Transformacin de microorganismos Produccin industrial de enzima

Objetivos en la preparacin de enzimas modificadas: 1. Aumentar la actividad de las enzimas 2. Mejorar la estabilidad 3. Permitir que funcionen en un ambiente diferente 4. Cambiar el pH o temperatura ptimos 5. Cambiar la especificidad para que utilice un sustrato diferente

6. Cambiar la reaccin catalizada

7. Aumentar la eficiencia de un proceso

ENZIMAS INMOVILIZADAS

El uso de enzimas en forma soluble o libre, debe considerarse como un posible derroche dado que, en general, la enzima no puede recuperarse al final de la reaccin. Una nueva rea de tecnologa enzimtica es la relacionada con la inmovilizacin de las enzimas en polmeros insolubles, tales como membranas o partculas, actuando como portadores de la actividad enzimtica.

Las ventajas de los catalizadores inmovilizados:

1. Permite el reuso de las enzimas 2. Ideal para operaciones continuas 3. Los productos enzima estn libres de

4. Permite un mejor control de los procesos catalticos 5. Mejora la enzimas estabilidad de las

6. Permite el desarrollo de sistemas de reaccin multienzimticos 7. Ofrece un potencial considerable en uso mdico e industrial 8. Reduce los problemas tratamiento de efluentes de