Cultivo de virus

Cultivo de virus

Incapacidad

de reproducirse independientemente de

clulas vivas Mtodos distintos de cultivo de clulas procariotas y eucariotas

 Inoculacin Inoculacin

de huspedes animales de huevos embrionados (fertilizados)

Cultivos celulares

 Huevos

Incubados durante 6-8 das despus de la puesta

Observar

en el ovoscopio si el huevo es frtil o infrtil

la edad del embrin

Determinar

Localizar la cmara de aire y marcarla

Marcar el embrin
Limpiar la cscara con alcohol yodado Hacer el orificio en la parte donde se vaya a inocular con un taladro estril (Saco vitelino, cavidad alantoidea, cavidad amnitica, cavidad corioalantoidea)

Inocular

el virus Cubrir el orificio con gelatina o parafina Incubar el huevo

 Se colectan los virus Se atenan y se remueven los antgenos HA y NA utilizando un detergente. Se mezclan los antgenos de todas las cepas y se obtiene la vacuna

Image from National Institute of Allergy and Infectious Diseases (NIAID)

 La produccin de la vacuna de la gripe en EU: todas se fabrican a partir de huevos embrionados Un huevo ~ Una dosis

Limitaciones de la produccin internacional de vacunas gripales

Los huevos embrionados tardan ~ 6 meses desde que se piden hasta que se obtienen Tiempo de produccin ~ 6 meses
(Proceso de produccin de vacunas es largo y complicado) Suministro de huevos Inoculacin de lotes

Eficiente multiplicacin en huevos

Eficiente expresin de antgenos (H y N)

Problemas del cultivo de virus en huevos

Un virus aviar virulento puede afectar a ponedoras o embriones; obligando a su sacrificio para evitar o retrasar una epizootia.

Puede presentarse:
Variabilidad gentica (Mutaciones pueden afectar la antigenicidad: cambios en el receptor de la hemaglutinina; podra afectar el gen de la hemaglutinina (HA), la neuraminidasa (NA) o cualquier otra protena del virus.) Seleccin de variantes antignicas (virus menos representativos del virus humano y por lo tanto menos adecuados para vacunacin).

Cultivo de virus de animales en cultivo de tejidos (clulas en monocapa).

Desarrollo de medios de cultivo para clulas animales Uso de agentes antimicrobianos que evita contaminacin por bacterias y hongos
Placas o calvas

Se prepara una capa de clulas Se aaden la suspensin viral a la placa Se cubren las clulas con una fina capa de agar para limitar la dispersin de viriones

Cambio del cultivo en huevo embrionado por cultivo en clulas

La produccin de vacunas en cultivo celular supone: Menor variabilidad antignica Mejor disponibilidad Mayor flexibilidad de produccin

Lneas celulares para la produccin de vacunas antigripales (mamferos e insectos):

En investigacin y desarrollo Spodoptera frugiperda (cogollero del maz) (SF9) Vero (rin de mono) Baxter Per.C6 (retina fetal humana) Crucell, Sanofi MDCK (Madin-Darbin Canine Kidney) Solvay, Nobilon,GSK
Aprobadas y en uso MDCK en suspensin (Novartis) Probadas para no crecimiento de virus contaminantes

Ventajas de vacunas procedentes de cultivos celulares

Las clulas congeladas a -70 C se consiguen en un plazo muy breve El cultivo celular es modulable, flexible, de elevado volumen Biorreactores en vez de millones de huevos Sin derivados animales ni antibiticos Sin conservadores (tiomersal) Las vacunas celulares antigripales son una alternativa para alrgicos al huevo

Ventajas de vacunas procedentes de cultivos celulares

Clulas sin virus contaminantes (prueba por PCR). Vacuna sin protenas de pollo Mayor disponibilidad en emergencia pandmica Mayor coincidencia entre cepas vacunales y virus circulantes Buena inmunogenicidad sin reactogenicidad Adecuada para alrgicos al huevo

Cultivo de virus en orugas o clulas de orugas