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NUTRIO MICROBIANA

Roseana Florentino roseanaflorentino@hotmail.com

NUTRIO MICROBIANA
Todos os seres vivos para crescer e manter suas necessidades
metablicas necessitam : - Energia

- Nutrientes
- Fatores fsicos no cultivo: temperatura, pH, exigncias atmosfricas

NUTRIO MICROBIANA
Uma clula viva requer energia e nutrientes para realizar diferentes tipos de trabalho, incluindo: Biossntese das partes estruturais da clula, tais como paredes celulares, membrana ou apndices externos;

Sntese de enzimas, cidos nucleicos, polissacardeos, fosfolipdeos e outros componentes qumicos da clula;
Reparo de danos e manuteno da clula em boas condies; Crescimento e multiplicao; Armazenamento de nutrientes e excreo de produtos de escria; Mobilidade

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Tabela 1. Classificao nutricional das bactrias e outros organismos


Grupo nutricional Fonte de carbono Fonte de energia Exemplos

Quimioautotrficos

CO2

Compostos inorgnicos

Bactrias nitrificantes, do ferro, hidrognio e enxofre


Algas, plantas e cianofceas Muitas bactrias, fungos, protozrios e animais Bactrias prpuras e vedes noenxofradas

Fotoautotrficos Quimioheterotrficos

CO2 Compostos orgnicos Compostos orgnicos

Luz Compostos orgnicos Luz

Fotoheterotrficos

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Para o cultivo laboratorial (in vitro) so utilizados meios de cultura que simulam e at melhoram as condies naturais.
So necessrios: MACROnutrientes: - Em grande quantidade. - Papel importante na estrutura e metabolismo. MICROnutrientes: - Em quantidades mnimas. - Componentes de protenas e co-fatores de enzimas
Uma clula tpica

C N H P, S, K, Na ...
Matria seca gua

Componentes necessrios s clulas - Macronutrientes


Carbono - Todos os organismos requerem alguma forma de carbono - Esqueleto das 3 maiores classes de nutrientes orgnicos: lipdeos, carboidratos e protenas. Fornecem energia para o crescimento e servem como unidade bsica para a biossntese - Heterotrficos utilizam compostos orgnicos como fonte de carbono - Autotrficos utilizam o CO2 como fonte de carbono. Fontes: Simples: monossacardeos (glicose, frutose), dissacardeos (sacarose, maltose, lactose) ou polissacardeos (amido, celulose, glicognio), etanol, glicerol etc Complexas: extrato-de-carne, melao, caldo-de-cana, milho, mandioca

Componentes necessrios s clulas - Macronutrientes

Nitrognio elemento mais abundante depois do C, cerca de 12% Parte essencial dos aminocidos e cidos nuclicos Em geral, compostos orgnicos de nitrognio: aminocidos e peptdeos Podem utilizar o N2 (fixao biolgica), nitratos, nitritos e sais de amnia

Componentes necessrios s clulas - Macronutrientes

Hidrognio
- Principal elemento dos compostos orgnicos e de diversos inorgnicos (gua, sais e gases) Funo do H: Manuteno do pH Formao de ligaes de H entre molculas Serve como uma fonte de energia nas reaes de oxi-reduo da respirao

Oxignio
- Elemento comum encontrado nas molculas biolgicas (aminocidos, nucleotdeos, glicerdeos ...) - obtido a partir das protenas e gorduras. Na forma de oxignio molecular (O2), requerido por muitos para os processos de gerao de energia.

Componentes necessrios s clulas - Macronutrientes


Outros macronutrientes: P S K Snese de cidos nuclicos, ATP; Estabilidade de aminocidos, componente de vitaminas; Atividade de enzimas;

Mg Estabilidade dos ribossomos; Ca Estabilidade da parede celular Na Requerido em maior quantidade por micro-organismos marinhos; Fe Papel-chave na respirao, componente dos citocromos e das protenas envolvidas no transporte de eltrons.

Requisitos nutricionais - Micronutrientes

Metais so em quantidades muito pequenas (trao) necessrios na composio de um meio de cultura: Zn, Cu, Mn, Ni, Se, Cr, Co, Mo e B

- Co-fatores de enzimas - Nem sempre sua adio necessria, presentes na gua. - Meios sintticos com compostos de alto grau de pureza e gua ultra pura podem apresentar deficincias desses elementos.

gua e outros aditivos


gua - Componente essencial para os micro-organismos: absoro de nutrientes dissolvidos Laboratrio: destilada, filtrada, deionizada

Outros aditivos Funes: evitar precipitao de ons, controlar a espuma, provocar inibio, estabilizar o pH. Quelantes: na autoclavagem ocorre a precipitao dos fosfatos metlicos Ex.: EDTA, cido ctrico, polifosfatos

Outros aditivos

Tampes - Carbonato de clcio: usado quando o pH est abaixo de 5,0

- Fosfatos: controlam o pH na faixa de 6,4 a 7,0 - Protenas (peptona)

Outros aditivos
Agentes solidificantes: usados em meios de cultura solidificados ou semisolidificados Tabela 2. Tipos de agentes solidificantes para meio de cultura
Componente Agar ou Agar-Agar Composio Polissacardeo, extrado de algas marinhas Polissacardeo Caractersticas Difcil hidrlise por micro-organismos, solidifica a 45oC, 12-20g/L a pH>5,0 Facilmente hidrolisvel por bactrias, solidifica de 15 a 20oC, 150200g/L No pode ser hidrolisado por micro-organismos, difcil manuseio

Gelatina

Slica-gel

Inorgnica

Classificao dos meios de cultura


Meios de Cultura
Conjunto de substncias, formuladas de maneira adequada, capazes de promover o crescimento bacteriano, em condies de laboratrio. A maioria das bactrias pode ser cultivada em laboratrio, utilizando-se meios nutrientes; - Diferentes espcies de bactrias, variam extensivamente quanto as exigncias mnimas de substncias nutrientes;

Classificao dos meios de cultura


1- Contedo qumico
Sintticos (sais, compostos orgnicos purificados, gua) Complexos (utilizam hidrolisados casena, carne, soja, levedura)

2- Finalidade:
Meios para Bactrias: caldo simples, gua peptonada, caldo glicosado, gelose simples com agar-agar, meio com tioglicolato de sdio (para anaerbias), meio de leite , meio com lcool etc. Meios para Leveduras: Gelose Sabouraud, caldo glicosado, caldo melaoamnia, Godoy.

Meio para Bolores: Czapeck, Malte-agar.

Classificao dos meios de cultura


Introduo

3- Quanto ao estado fsico


Lquidos ou caldos: crescimento indiscriminado com turvao do meio

Slidos: crescimento de colnias isoladas, muito utilizado para culturas puras


Semi-slido: adio de menor quantidade de gar, mobilidade bacteriana

Classificao dos meios de cultura


Introduo

4- Meio de Enriquecimento:
Geralmente lquido, de composio qumica rica em nutrientes, com a finalidade de permitir que as bactrias contidas em uma amostra clnica aumentem em nmero.

Ex.: Caldo Infuso de crebro e corao(BHI)

Classificao dos meios de cultura


5- Meio de Transporte:
Consiste em um meio isento de nutrientes, contendo um agente redutor
(Tioglicolato ou cistena). Geralmente mantm o pH favorvel, previne a desidratao de secrees durante o transporte e evita a oxidao e auto-

destruio enzimtica dos patgenos presentes.


Ex.: Meio de Stuart, Meio de Cary-Blair e Caldo Tioglicolato.

Classificao dos meios de cultura


Introduo

6- Meio Seletivo
A finalidade deste tipo de meio selecionar as espcies que se deseja isolar e
impedir o desenvolvimento de outros germes (adio de corantes, antibiticos e outras substncias com capacidade inibitria para alguns germes.

Ex.: Agar Manitol Salgado e Agar SS

Classificao dos meios de cultura


Introduo

7- Meio Diferencial
Possibilita a distino entre vrios gneros e espcies de micro-organismos, por
possuir substncias que permitem uma diferenciao presuntiva, evidenciada na mudana de colorao ou na morfologia das colnias.

Ex.: Agar Eosin Methilene Blue (EMB), Agar McConkey e Agar Hektoen.
EMB

McConkey

Influncia dos fatores fsicos


Temperatura, oxignio, pH e Presso osmtica __________________________________________________ Efeito da temperatura no crescimento microbiano

Figura. Relao entre a taxa de crescimento e a temperatura

Efeito da temperatura no crescimento microbiano

Os micro-organismos no possuem qualquer mecanismo de controle interno deste fator, o que pode afetar as reaes qumicas da clula.
Termfilos extremos

Figura 2. Curva de crescimento caracterstica de diferentes micro-organismos

Figura. Classificao segundo a temperatura de crescimento

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Efeito da temperatura no crescimento microbiano

Psicrfilos:

Temperatura tima: 15C; Encontrados em oceanos e regies da rtica; Temperatura tima: 20 a 30C; crescem em temperatura de refrigeradores (4C);

Psicrotrficos:

Mesfilos:

Temperatura tima: 25 a 40C (mais encontrados); Corpo de animais (temperatura da pele); Bactrias patognicas: temp. tima 37C; Degradam alimentos e so patognicos; Temperatura tima: 50 a 60 C Ambiente de guas termais (no crescem em temp. <45C) Material estocado (altas temp.) = compostagem.

Termfilos:

Efeito do oxignio no crescimento microbiano

Aerbio

Anaerbio Facultativo Microaerfilo

Anaerbio aerotolerante

Efeito do oxignio no crescimento microbiano


Micro-organismos aerbios 21% de oxignio fungos filamentosos e bactrias do gnero Mycobacterium e Legionella; Micro-organismos facultativos presena do ar ou anaerobiose Enterobacteriaceae e leveduras.

Micro-organismos anaerbios podem ser mortos pelo oxignio, no crescem em presena do ar e no utilizam oxignio para reaes de produo de energia;
Cmara de anaerobiose ou jarra de anaerobiose.

Micro-organismos microaerfilos no resistem a nveis normais de oxignio (1 a 15%).


Micro-organismo aerotolerante no requer oxignio e cresce melhor na sua ausncia, mas pode sobreviver em atmosferas que contenham o mesmo

Acidez ou Alcalinidade (pH):

Diferentes gneros de micro-organismos tm tolerncias diferentes de pH mas a maioria dos micro-organismos cresce melhor perto da neutralidade (pH 6,5 7,5). - Bactrias: 4 a 9; - Bolores e leveduras: timo de 5 a 6; - Protozorios: 6,7 a 7,7; - Algas: 4 a 8,5.

Cultivo de micro-organismos no laboratrio


I - CULTIVO DE AERBIOS a) Aerao pelo aumento da exposio dos meios atmosfera Com Recipientes Especiais: Frasco de Kolle (a), Garrafa de Roux (b), Frasco de Fernbarch(c).

Frasco de Kolle

Garrafa de Roux

Fernbarch
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Cultivo de micro-organismos no laboratrio


b) Aerao pela agitao dos meios lquidos em equipamentos especficos

Mesas agitadoras
c) Adio forada de ar esterilizado: atravs de compressor
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Cultivo de micro-organismos no laboratrio


II - CULTIVO DE ANAERBIOS a) Adio ao meio de substncia qumica que reaja com o oxignio (tioglicolato, carbonato) b) Supresso do oxignio atravs de meios mecnicos seguido de adio de substncia inerte (N2, CO2) c) Utilizando sistemas geradores de atmosfera inerte Exemplo: SISTEMA GASPAK

O sistema Gaspak Plus H2 + CO2 produz uma atmosfera de hidrognio e dixido de carbono (uma atmosfera anaerbia enriquecida com dixido de carbono).

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