UNIDAD 1. PARASITOLOGA.

1.7. Mtodos de conservacin, fijacin y tincin tiles en parasitologa.

Extensiones sanguneas

Muestra de heces

Aspirados Esputo

RECOLECCIN DE MUESTRAS Material sigmoideo Tracto urogenital

Materiales perianales

Biopsias

Los pasos a seguir son: Obtencin. Conservacin. Fijacin. *Deshidratacin. *Aclaramiento. Tincin. *Hidratacin. Montaje . Observacin. Identificacin.

Tipos de Conservadores
Conservadores Fsicos Conservadores qumicos
Permiten la conservacin de muestras durante un tiempo mayor sin deformacin ni destruccin de formas parasitaras.

Las heces bien formadas pueden examinarse de 24-48 hrs despus de la evacuacin.

Temperaturas bajas de 10 C

*Solucin de formalina al 10% o al 5% *Solucin de mertiolate-yodoformaldehido (MIF) *Fijador de fenol alcohol y formol (PAF) *Fijador de Shaudinn *Fijador de alcohol polivinilico (PVA)

 La mayora de los fijadores son venenos citoplasmticos y actan mas rpido en caliente. Un buen fijador es aquel que entra rpidamente a la estructura parasitaria, detiene su metabolismo y le provoca poco o nulos cambios morfolgicos.

Fijador

Componentes

Funcin

Utilidad

Formol

puentes de metileno en protenas. Amortiguador

Quistes, ooquistes, microsporidia (5%), huevos y larvas (10%)

Schaudinn

combinacin con los grupos cidos de las protenas. desnaturaliza y precipita las protenas. fija las nucleoprotenas por precipitacin

Quistes, trofozoitos, huevos y larvas

Fijador

Componentes

Funcin

Utilidad

Acido actico glacial. Glicerina,

fija las nucleoprotenas por precipitacin. Aclarador

Quistes y trofozoitos.

Solucin de Schaudinn Alcohol polivinlico Conservador MIF (Mertiolato-yodoformaldehdo) Tambin llamado TIF (timerosal-yodoformaldehdo Desnaturalizacin de protenas puentes de metileno en protenas. Aclarador de los huevos de helmintos. Determina la presencia de glucgeno Quistes, trofozoitos, huevos y larvas

Fijador

Componentes

Funcin

Utilidad

Bouin

cido pcrico

Formaldehido

Acido actico glacial

demuestra la presencia de glucgeno. Coagula protenas puentes de metileno en protenas. fija las nucleoprotenas por precipitacin.

Helmintos

PAF (fenol-alcholformaldehido)

Fenol Solucin salina Etanol Formaldehido Desnaturaliza y precipita las protenas. puentes de metileno en protenas.

Quistes, trofozoitos, huevos y larvas

Fijador

Componentes

Funcin

Utilidad

AFA

Etanol Formaldehdo

Desnaturaliza y precipita Forma puentes de metileno Fija las nucleoprotenas por precipitacin.

Cestodos Trematodos

Agua destilada
cido actico glacial

 Paso previo al montaje. Blsamo no se mezcla con el agua. Alcoholes graduales (30%, 50%, 70%, 96% y absoluto).

 Miscible con etanol y blsamo. Sirve de indicador de una buena deshidratacin (oscurecimiento). Aceites esenciales con transparencia (terpineol).

 Resinas (balsamo de Canada). Transparencia. ndice de refraccin cercano a vidrio de cubre y porta. Durabilidad.

 Preparaciones permanentes Nematodos Gelatina-----------------------8.0ml Agua destilada---------------52.0ml Glicerina-----------------------50.0ml Fenol (cristales)--------------0.1ml

Tinciones parsitos.
Lugol. Ziehl-Neelsen. Tincin de Hematoxilina y eosina. Hematoxilina frrica Heidenhain. Tincin tricrmica de Gomori. Tincin de Noble. Coloracin de Giemsa. Tincin de Wright.

Fundamento Identificacin de estructuras por reaccin del iodo con el glucgeno contenido en las estructuras
Utilidad Para quistes y huevos

FUNDAMENTO Afinidad que demuestran las clulas y sus componentes a los distintos colorantes incluidos en el colorante de Giemsa.

UTILIDAD Para identificar parsitos (protozoarios de la sangre y los tejidos), espiroquetas, levaduras y hongos (Chlamydia).

 Tincin de Ziehl-Neelsen (Modificada para observacin de coccidias: Cryptosporidium y otros).

FUNDAMENTO: Las paredes celulares de los parsitos contienen cidos grasos que les confieren la propiedad de resistir la decoloracin con alcohol-cido

FUNDAMENTO Permite colorear las estructuras internas de los protozoos para su caracterizacin.

UTILIDAD
Estudio de Entamoeba, Giardia, Balantidium, Cyclospora y otros protozoarios.

FUNDAMENTO La Hematoxilina se asocia con mordientes para actuar como un colorante bsico, por lo cual se asocia y colorea estructuras aninicas UTILIDAD Colorea protozoarios, principalmente amebas y flagelados.

Tincin de Carmn clorhdrico

Fundamento Caracteriza el ADN, aunque el carmn tiene carga positiva, con la adicin del cido clorhdrico se hace de carga negativa; se deposita en los grupos fosfatos del ADN

Utilidad Coloracin de ncleos de especmenes adultos o segmentos para el estudio de cestodos y trematodos

Fundamento La hematoxilina, que por ser catinica o bsica tie los nucleos celulares La eosina tie componentes bsico como el citoplasma
Utilidad utilizado en histologa y medicina diagnostica para diferenciar estructuras en parsitos