ENZIMAS

Propiedades de las enzimas

Catalizadores biolgicos, elevan la velocidad de las reacciones

Actan en pequea cantidad Alta especificidad

No se modifican como resultado de la accin cataltica.

No llevan a cabo reacciones energticamente desfavorables No modifican el sentido de los equilibrios qumicos.

Enzimas
ENZIMAS SIMPLES ENZIMAS CONJUGADAS (Holoenzimas)

Porcin proteca (Apoenzima)

Cofactor

Metal (unin covalente y no covalente)

Coenzima (unin no covalente)

Grupo prosttico (unin covalente)

Ribozimas Enzimas conformadas por RNA cataltico. nica enzima no protica

Clasificacin de las enzimas

N 1 2 3 4 Clase Oxidoreductasas Transferasas Hidrolasas Liasas Tipo de reaccin Transfiere electrones Transfiere grupos

International Union of Biochemistry (IUB)

Reacciones de hidrlisis (transferencia de grupos al agua) Adicin de grupos a dobles enlaces o formacin de dobles enlaces por eliminacin de grupos Transferencia de grupos dentro de la molcula

Isomerasas

Ligasas

Formacin de enlaces C-C, C-S, C-O y C-N por reacciones acopladas al ATP

Nomenclatura de las enzimas

1) Nombre del sustrato (s) que interviene en la reaccin, seguido del sufijo asa.
Isocitrato + NAD+ Alfa-cetoglutarato + NADH + H+
Isocitrato: NAD oxidorreductasa

2) Segn la Comisin de Nomenclatura de las Enzimas:

Enzyme Commission (EC)

Nmero clave

EC 1.1.1.41
Sustratos: Isocitrato y NAD+

Clase: Oxidorreductasa Subclase: grupo donador de electrones Sub-subclase: grupo aceptor de electrones

Iones metlicos como cofactores:

Coenzimas
Coenzima
NAD+ y NADH Coenzima A cido tetrahidroflico Filoquinona (K1) Menaquinona (K2) Menadiona(K3)* cido ascrbico

Vitamina
Niacina (B3)

Grupo qumico transferido

Electrones Grupo acetilo y otros grupos acilo Grupos metilo, formilo y metileno

cido pantotnico (B5)

cido flico (B9) Vitamina K Vitamina C

Grupo carbonilo y electrones Electrones

FAD, FMN

Riboflavina (B2)

Electrones

Propiedades de las enzimas

S
ENZIMA

Desolvatan al sustrato desorganizando el agua del entorno.

S
ENZIMA

Sitio activo de la enzima

Es tridimensional.
Es parte del volumen total de la enzima.

Son hendiduras o grietas.

El sustrato se enlaza a la enzima por atracciones dbiles. La especificidad de enlace depende de arreglos de tomos en el sitio activo.

Sitio activo de la enzima

Modelo de llave cerradura (Emil Fisher, 1891)

Modelo de encaje inducido (Linus Pauling, 1946)

Modelo Obsoleto

Modelo Actual Aceptado

Tipos de reacciones qumicas:

Segn el calor liberado: exotrmicas y endotrmicas. Segn G : exergnicas (G < 0) y endergnicas (G > 0) . Segn efecto metablico: catablicas y anablicas.

Principio de Le Chatelier:

Si en un sistema en equilibrio se modifica algn factor (presin, temperatura, concentracin,..) el sistema evoluciona en el sentido que tienda a oponerse a dicha modificacin.

Introduccin a conceptos bsicos

P
Aceleran una reaccin qumica (>106-1012). No alteran el equilibrio qumico.

Reaccin catalizada por enzima

E+S

ES

EP

E+P

CINTICA ENZIMTICA Es la rama de la qumica que se encarga del estudio de la velocidad de las reacciones y aquellos factores que la modifican.
[S] [E] Temperatura pH Inhibidores enzimticos Moduladores alostricos

Velocidad de reaccin

Es el nmero de molculas de SUSTRATO que se transforman en PRODUCTO por unidad de TIEMPO. Es proporcional a la [S] y a una constante de velocidad ().

V = k S]

Efecto de la concentracin de enzima S+E E+P

Velocidad de reaccin (M/min)

Concentracin de enzima (mM)

Efecto del pH en la actividad enzimtica

Efecto del pH en la actividad enzimtica

Efecto del pH en la actividad enzimtica

Lisosoma

Efecto de la temperatura en la actividad enzimtica

Efecto de la temperatura en la actividad enzimtica

20

40

60

T (C)

Grfico de Michaelis-Menten

Definicin de Vmx La Vmx se define como la velocidad a la cual la enzima se saturada por su sustrato y entonces alcanza su velocidad mxima. La reaccin no se detiene sino que la velocidad no puede incrementar ms (se mantiene constante).

Definicin de Km (Constante de Michaelis-Menten)

El Km se define como la concentracin de sustrato a la cual la enzima se encuentra activa a la mitad de su velocidad mxima. Est relacionada con la afinidad de la enzima por su sustrato.

Significado de la Constante de MichaelisMenten (KM)

Ejm: Hexoquinasa Isoenzima Hexoquinasa I (eritrocitos) Hexoquinasa IV (hgado) KM 0,05 mM 5-6 mM

Significados de Vmax y kcat

kcat N de recambio

kcat se refiere al nmero de molculas de sustrato procesadas por la enzima por unidad de tiempo. A mayor kcat mayor velocidad de accin de la enzima.

Inhibidores

Inhibicin Competitiva

sustrato

enzima
Inhibidor competitivo

Inhibicin Competitiva en el Grfico de Michaelis-Menten

La adicin del inhibidor reduce la velocidad inicial y altera el Km, pero no la Vmax.
Km app= Km aparente cuando se coloca el inhibidor

Inhibicin Competitiva
Intoxicacin con Metanol, Etanol como antdoto

El consumo de Metanol es txico debido a que cuando es procesado por la enzima, lo transforma en compuestos txicos. En este caso el Etanol acta como inhibidor competitivo de la reaccin evitando la intoxicacin

Inhibicin No competitiva

Inhibicin No competitiva

Km no se afecta, mientras que Vmax disminuye debido a que la enzima no es tan eficiente catalticamente en presencia del inhibidor.

-I = sin inhibidor +I = con inhibidor

REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

La actividad enzimtica puede estar modulada o regulada por:

Compartamentalizacin Formacin de complejos enzimticos Cambios en el pH Concentraciones de sustratos y productos finales (retroalimentacin) Isoenzimas

Induccin de la sntesis o produccin (transcripcin) de la

enzimas o de su degradacin Modulacin alostrica (positiva o negativa)

Modulacin covalente
Activacin por proteolisis (zimgenos) Interaccin con otras protenas (chaperonas)

COMPLEJOS ENZIMATICOS
Glucosa

1. Las velocidades de reaccin estn limitadas por la frecuencia de colisin entre molculas. 2. Provee un medio para la canalizacin de intermediarios metablicos entre enzimas sucesivas a travs de una ruta metablica. 3. Las reacciones catalizadas por un complejo enzimtico pueden ser controladas de manera coordinada.

Piruvato Deshidrogenasa

Control por retroalimentacin

Modulacin Alostrica (Enzimas alostricas) - Mltiples subunidades

- Mltiples sitios activos - Cooperatividad de unin al sustrato - Regulacin por molculas efectoras

CINETICA DE UNA ENZIMA ALOSTERICA Curva Sigmoidea

v
ATP = modulador positivo (aumenta la actividad de la enzima) CTP = modulador negativo (disminuye la actividad de la enzima)

Sustrato: Aspartato (mM)

Modulacin covalente (ej. Fosforilacin)

Enzimas Quinasas
Fosforilacin

Desfosforilacin

Enzimas Fosfatasas

Regulan numerosos procesos metablicos

Enzima-OH

Fosfatasa

Quinasa

Enzima-OPO3-

Activacin de zimgenos
(protelisis) Pro-Enzimas (Zimognos)
corte proteoltico

Enzima activa

Isoenzimas
Catalizan la misma reaccin en diferentes tejidos

Diferentes secuencias de aminocidos

Diferentes cadenas Diferentes KM

Lactato desidrogenasa - LDH

NAD+ NADH

Lactato

Piruvato

Isoenzimas

H4 H3M H2M2 HM3 M4

Enzima (induccin de transcripcin gnica o degradacin) Isoenzimas

Rotura de zimgeno

Regulacin enzimtica

Concentracin de sustrato

Enzimas alostricas Modificacin covalente

Inhibicin reversible (competitiva, no competitiva y acompetitiva)

Interaccin protena- protena