CONTROL DEL DESARROLLO

DE LOS MICROORGANISMOS

Agentes fsicos Temperatura Desecacin Ondas sonoras Radiaciones Filtracin

Agentes qumicos Desinfectantes Antispticos Quimioterapeticos Agentes biolgicos Antibiticos

Debido a su pequeo tamao y a su estilo de vida individual, las clulas procariticas sufren los cambios ambientales de un modo mucho ms directo e inmediato que las clulas de los organismos pluricelulares Los microorganismos que habitan medios que los humanos consideramos como extremos reciben el calificativo de extremfilos.

Modifican la velocidad de crecimiento, provocando cambios que pueden llegar a ocasionar la muerte de microorganismos. Condicionan la distribucin de los microorganismos en sus ecosistemas y hbitats naturales. Permiten a los humanos controlar el crecimiento microbiano.

No todos los microorganismos toleran del mismo modo un determinado factor ambiental. As, unas determinadas condiciones pueden ser nocivas para una especie bacteriana, y en cambio ser neutras o beneficiosas para otra.

Agentes fsicos Temperatura Desecacin Radiaciones Ondas sonoras Presin hidrosttica Presin osmtica pH

Agentes qumicos Desinfectantes y antispticos Quimioterpicos de sntesis Antibiticos

La temperatura es uno de los parmetros ambientales ms importantes que condicionan el crecimiento y la supervivencia de los microorganismos.

Temperatura mnima: por debajo de ella no hay crecimiento; Temperatura mxima: por encima de ella tampoco existe crecimiento; Temperatura ptima: permite la mxima tasa de crecimiento

MICROORGANISMOS PSICRFILOS (-5 y 5C)

MICROORGANISMOS MESFILOS (25-40C y mximas entre 35 y 47C). MICROORGANISMOS TERMFILOS (ptimos a 50-75C y mximos entre 80 y 113C)

Tiempo trmico mortal: es el tiempo mnimo requerido para que mueran todas las bacterias de una determinada suspensin a una determinada temperatura. tiempo de reduccin decimal: es el tiempo requerido para reducir al 10% la densidad de la suspensin, a una determinada temperatura (tambin llamado valor D);

Punto trmico mortal: es la temperatura mnima que mata a todas las bacterias en un tiempo determinado (normalmente el tiempo de referencia empleado es de 10 min).

punto trmico mortal 55oC 60oC 120oC

Especies Escherichia coli Mycobacterium tuberculosis endosporas de especies muy resistentes de Bacillus.

Dependiendo de la temperatura y el tiempo a que sometamos un material a tratamiento trmico, lograremos inactivacin parcial de la poblacin microbiana (es decir, queda una fraccin de clulas viables) o bien esterilizacin (=inactivacin total).

Esterilizacin es todo tratamiento de un material con un agente fsico (como el calor) o qumico, que acarrea la eliminacin de toda forma de vida en l. Una vez estril, el material sigue estril indefinidamente con tal de que est encerrado en un compartimento sellado y libre del contacto con microorganismos del ambiente exterior. La inactivacin parcial o la esterilizacin se pueden lograr por calor hmedo o por calor seco.

Microorganismo La mayora de clulas vegetativas, de bacterias, levaduras y hongos Bacilo tuberculoso Bacilo tuberculoso

condiciones 80oC , 5-10 min 58oC , 30 min 59oC , 20 min

Bacilo tuberculoso
Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis

65oC , 2 min
60oC , 60 min

La mayora de esporas de bacterias patgenas

esporas del patgeno Clostridium botulinum esporas de Clostridium y Bacillus saprofitos esporas de Clostridium y Bacillus saprofitos

100oC , pocos min

100oC , 5,5 horas 100oC , muchas horas 120oC , 15 minutos

Autoclave: Es un aparato que permite calentar muestras por calor hmedo a temperaturas superiores a las de ebullicin del agua. Los parmetros de esterilizacin suelen ser: temperatura 121C y 10-15 min. Tindalizacin: Es un mtodo de esterilizacin fraccionada para materiales que se inactivan o estropean a ms de 100C. Consiste en someter el material a varios ciclos (normalmente 3 4) de dos fases sucesivas cada uno:

a) En la primera fase el material se calienta a una temperatura entre 50 y 100C, durante 1 2 horas.
b) En la segunda fase el material se incuba en una estufa, a 30-37C durante 24 horas.

La esterilizacin por calor seco necesita recurrir a mayores temperaturas que la efectuada por el calor hmedo, Aplicaciones del calor seco: El horno de Pasteur, mediante calentamiento a 160-170C durante 2-3 horas permite esterilizar materiales inertes de laboratorio resistentes al calor: material de vidrio y metlico, aceites. Flameado a la llama (hasta el rojo) de asas metlicas de siembra, con las que se inoculan las bacterias. Incineracin de materiales de desecho.

Las bajas temperaturas (por debajo de la temperatura mnima) no son tiles para la esterilizacin, ya que, aunque existen algunas bacterias que mueren por congelacin (p. ej., especies patgenas de Neisseria), el efecto de este tratamiento sobre otras muchas es, sobre todo, bacteriosttico. Cuando una bacteria se enfra rpidamente a 35C se producen cristales de hielo que provocan daos cuando la muestra se descongela. La descongelacin lenta es ms letal que la rpida, ya que aumenta el volumen de cristales de hielo.

Durante las fases de tipo a) mueren todas las clulas vegetativas de la muestra, pero permanecen viables las esporas. Durante las fases de tipo b) se produce la germinacin de las esporas activadas.
Esterilizacin por filtracin: Consiste de hacer pasar una solucin a travs de una membrana o filtro de un tipo de material (normalmente nitrato de celulosa) que presenta poros de un tamao inferior al de cualquier clula bacteriana (dimetro de poro =0,22 m).

En la prctica cotidiana del laboratorio de microbiologa, en la esterilizacin de medios de cultivo y soluciones. En la esterilizacin de material quirrgico. En la esterilizacin o inactivacin parcial, en las industrias alimentarias (conservas, leche y derivados).

En la industria lctea se emplean como mtodos de esterilizacin la llamada uperizacin. La uperizacin consiste en un tratamiento de calor hmedo donde se emplean temperaturas muy altas durante unos pocos segundos (p. ej.: 135-150C durante 1-2 seg). La pasteurizacin (en honor a Pasteur, que la introdujo en los aos 1860) consiste en tratar la leche a 63oC durante 30 min, tras los cuales se enfra y envasa rpidamente. La pasteurizacin instantnea se logra calentando a 72C durante slo 15 segundos, tras de lo cual la muestra se enfra rpidamente. Esta tcnica es la ms usada actualmente, ya que: mata ms rpidamente; mata mejor organismos ms resistentes altera menos el sabor; acta en flujos continuos (y permite procesar grandes volmenes de leche).

Tratamiento Ebullicin Ebullicin intermitente

Temperatura 100o 100o

Efectividad 30 minutes de ebullicin mata patgenos y formas vegetativas, pero no esporas 3 intervalos 30-minutos efectivo contra esporas

Tratamiento Ebullicin Ebullicin intermitente Tindalizacin Autoclave (vapor a presin))

Temperatura 100o 100o 100 121o/15 minutos a presin 1,5 Atmosf

Efectividad 30 minutes de ebullicin mata patgenos y formas vegetativas, pero no esporas 3 intervalos 30-minutos efectivo contra esporas Efectivo contra esporas Elimina toda forma de vida incluyendo esporas.

Tratamiento Ebullicin Ebullicin intermitente Tindalizacin Autoclave (vapor a presin))

Temperatura 100o 100o 100

Efectividad 30 minutes de ebullicin mata patgenos y formas vegetativas, pero no esporas 3 intervalos 30-minutos efectivo contra esporas Efectivo contra esporas Elimina toda forma de vida incluyendo esporas.

121o/15 minutos a presin 1,5 Atmosf

63o/30 minutos

Pasteurizacin

Mata la mayora de las clulas vegetativas incluyendo patgenos como Streptococcus, Staphylococcus y Mycobacterium tuberculosis
Similar al anterior. En leche, a nivel industrial, es preferible por la calidad lctea.

Pasteurizacin rpida

72o/15 segundos

Tratamiento

Temperatura

Efectividad

Ebullicin
Ebullicin intermitente

100o
100o

30 minutes de ebullicin mata patgenos y formas vegetativas, pero no esporas

3 intervalos 30-minutos efectivo contra esporas

Tindalizacin
Autoclave (vapor a presin))

100
121o/15 minutos a presin 1,5 Atmosf 63o/30 minutos

Efectivo contra esporas

Elimina toda forma de vida incluyendo esporas. Mata la mayora de las clulas vegetativas incluyendo patgenos como Streptococcus, Staphylococcus y Mycobacterium tuberculosis

Pasteurizacin Pasteurizacin rpida

72o/15 segundos

Similar al anterior. En leche, a nivel industrial, es preferible por la calidad lctea.

Para materiales que deben permanecer secos y los cuales no se destruyen a TC entre 121o y 170o . Vidrios y metales. No plsticos y goma. Igual que el anterior. Al aumentar 20C el tiempo de esterilizacion se acorta en 50%.

Calor seco

160o/2 hrs 170o/1 h

Calor seco

Tratamiento Ebullicin Ebullicin intermitente Tindalizacin Autoclave (vapor a presin))

Temperatura 100o 100o 100 121o/15 minutos a presin 1,5 Atmosf 63o/30 minutos

Efectividad 30 minutes de ebullicin mata patgenos y formas vegetativas, pero no esporas 3 intervalos 30-minutos efectivo contra esporas Efectivo contra esporas

Elimina toda forma de vida incluyendo esporas.

Mata la mayora de las clulas vegetativas incluyendo patgenos como Streptococcus, Staphylococcus y Mycobacterium tuberculosis Similar al anterior. En leche, a nivel industrial, es preferible por la calidad lctea. Para materiales que deben permanecer secos y los cuales no se destruyen a TC entre 121o y 170o . Vidrios y metales. No plsticos y goma. Igual que el anterior. Al aumentar 20C el tiempo de esterilizacion se acorta en 50%. Vaporiza material orgnico en superficies noinflamables (destruccin de varios materiales y sustancias)

Pasteurizacin

Pasteurizacin rpida

72o/15 segundos

Calor seco

160o/2 hrs 170o/1 h >500o

Calor seco

Incineracin

AGENTES ESTERILIZANTES QUMICOS

1. Oxido de etileno 2. Glutaraldehdo 3. Formaldehdo

DESINFECTANTES y ANTISPTICOS
Lister (1867) A. INORGNICOS 1. Metales 2. cidos y lcalis 3. Comp inorgnicos oxidantes 4. Halgenos (Cloro, Yodo) B. ORGNICOS 1. Alcoholes 2. Fenol y derivados

C. PRESERVANTES

Segn su accin

Coagulacin de las proteinas:

Fenol, Formalina, Alcoholes, en general

Desnaturalizacin proteica:
cidos orgnicos no disociables, Cloro, Yodo, cidos y alcalis fuertes

Lesin pared celular o membrana citoplasmtica:

1) Detergentes: catinicos, aninicos, no inicos. Compuestos de Amonio cuaternario 2)Compuesto fenlicos: fenol, cresoles, difenilos halogenados, alquilsteres del para-hidroxibenzoico, aceites esenciales de plantas 3)Alcoholes:etanol, isopropanol

Inhibicin de enzimas:
1) Metales pesados:mercuriales, compuestos de plata, compuestos de cobre 2) Agentes oxidantes: halgenos, cloro, yodo, agua oxigenada, permanganato potsico, cido peractico, 3) Colorantes: derivados de la anilina, derivados de la acridina (flavinas) 4) Agentes alquilantes: formaldehido, glutaraldehido, xido de etileno, propionil-lactona

Qumico Etanol (50-70%) Isopropanol (50-70%)

Accin Denaturaliza proteinas y solubiliza lpidos

Usos Antiseptico usado en piel Antiseptico usado en piel

Denaturaliza proteinas y solubiliza lipidos

Qumico Etanol (50-70%) Isopropanol (50-70%) Formaldehido (8%) Tintura de Iodina (2% I2 en 70% alcohol) Clorina (Cl2) gas

Accin Denaturaliza proteinas y solubiliza lpidos Denaturaliza proteinas y solubiliza lipidos Reacciona con grupos NH2, SH y COOH

Usos Antiseptico usado en piel Antiseptico usado en piel Desinfectante, mata endosporas

Inactiva proteinas
Forma c.hipocloroso (HClO), fuerte agente oxidante

Antiseptico usado en piel

Desinfectante general

Qumico

Accin Denaturaliza proteinas y solubiliza lpidos Denaturaliza proteinas y solubiliza lipidos

Usos

Etanol (50-70%)
Isopropanol (50-70%) Formaldehido (8%) Tintura de Iodina (2% I2 en 70% alcohol) Clorina (Cl2) gas Nitrato de Plata (AgNO3) Cloruro de mercurio

Antiseptico usado en piel

Antiseptico usado en piel Desinfectante, mata endosporas Antiseptico usado en piel Desinfectante general Antiseptico general Desinfectante y a veces antisptico usado en piel

Reacciona con grupos NH2, SH y COOH

Inactiva proteinas Forma c.hipocloroso (HClO), fuerte agente oxidante Precipitata proteinas Inactiva proteinas por reaccin con grupos sulfitos

Qumico Etanol (50-70%) Isopropanol (50-70%) Formaldehido (8%)

Accin

Usos Antiseptico usado en piel Antiseptico usado en piel Desinfectante, mata endosporas

Denaturaliza proteinas y solubiliza lpidos

Denaturaliza proteinas y solubiliza lipidos Reacciona con grupos NH2, SH y COOH

Tintura de Iodina (2% I2 en 70% alcohol)

Clorina (Cl2) gas Nitrato de Plata (AgNO3)

Inactiva proteinas
Forma c.hipocloroso (HClO), fuerte agente oxidante Precipitata proteinas Inactiva proteinas por reaccin con grupos sulfitos Destruye membrana celular

Antiseptico usado en piel

Desinfectante general Antiseptico general Desinfectante y a veces antisptico usado en piel Antiseptico piel y desinfectante

Cloruro de mercurio
Detergentes (comp. de amonio cuaternario)

Qumico

Accin Denaturaliza proteinas y solubiliza lpidos Denaturaliza proteinas y solubiliza lipidos Reacciona con grupos NH2, SH y COOH Inactiva proteinas Forma c.hipocloroso (HClO), fuerte agente oxidante Precipitata proteinas Inactiva proteinas por reaccin con grupos sulfitos Destruye membrana celular

Usos

Etanol (50-70%)
Isopropanol (50-70%)

Antiseptico usado en piel

Antiseptico usado en piel

Formaldehido (8%)
Tintura de Iodina (2% I2 en 70% alcohol)

Desinfectante, mata endosporas

Antiseptico usado en piel

Clorina (Cl2) gas

Nitrato de Plata (AgNO3) Cloruro de mercurio Detergentes (comp. de amonio cuaternario) Componentes Fenolicos (c.carboloico, lisol, hexilresorcinol, hexaclorofeno) Oxido Etileno gas

Desinfectante general
Antiseptico general Desinfectante y a veces antisptico usado en piel Antiseptico piel y desinfectante

Denaturaliza proteinas y rompe membrana celular

Agente alquilante

Antiseptico a baja concentracin Desinfectante a alta concentracin

Desinfectante de plsticos y goma

Existen ciertas sustancias qumicas que influyen negativamente sobre las bacterias, pudiendo ejercer dos tipos de efectos diferentes:

bacteriostticos: cuando impiden el crecimiento bacteriano; bactericidas: cuando destruyen (matan) las bacterias.

Agentes esterilizantes son aquellos que producen la inactivacin total de todas las formas de vida microbiana.
Agentes desinfectantes (o germicidas) son agentes (sobre todo qumicos) antimicrobianos capaces de matar los microorganismos patgenos (infecciosos) de un material. Pueden presentar efectos txicos sobre tejidos vivos, por lo que se suelen emplear slo sobre materiales inertes.

Agentes antispticos son sustancias qumicas antimicrobianas que se oponen a la putrefaccin de materiales vivos. Se trata de desinfectantes con baja actividad txica hacia los tejidos vivos donde se aplican.

Quimioterpicos son compuestos qumicos con actividad microbicida, con una toxicidad suficientemente baja como para permitir su administracin a un organismo superior, en cuyos fluidos corporales y tejidos permanece estable un cierto tiempo a concentraciones tales que los hace eficaces como antimicrobianos dentro del organismo.

Todos los das usamos agentes qumicos para controlar el crecimiento microbiano: detergentes y jabones para el cuerpo y la ropa, cloracin de las aguas potables, antispticos para la piel y el tratamiento de heridas, desinfectantes para tratar superficies en la industria y en los laboratorios, quimioterpicos y antibiticos para tratar enfermedades bacterianas.

FACTORES QUE AFECTAN LA POTENCIA DE UN DESINFECTANTE

Concentracin del agente y tiempo de actuacin . pH Temperatura Naturaleza del microorganismo y otros factores asociados a la poblacin microbiana Presencia de materiales organicos

Tanto en los laboratorios como en industrias alimentarias es necesario a menudo tratar superficies inertes (mesas, suelos, paredes, maquinaria) con desinfectantes, a ser posible con efecto microbicida. Los materiales termosensibles que no se pueden esterilizar por calor se pueden esterilizar en fro mediante ciertos agentes: En los hospitales, para esterilizar termmetros, catteres, instrumentos, se suele recurrir a un tipo de autoclave que usa el gas xido de etileno o formaldehido gaseoso (ambos son agentes alquilantes).

Pequeos objetos se pueden esterilizar en perxido de hidrgeno (agente oxidante).

El yodo es un magnfico antisptico de la piel (el mejor que se conoce). El cloro se presenta como cloro gaseoso (Cl2), hipocloritos y cloraminas. El efecto desinfectante se debe a la liberacin de cloro libre (Cl2); a su vez, el Cl2 reacciona con el agua para dar cido hipocloroso (ClOH), que a pH cido o neutro es un oxidante fuerte.

Los quimioterpicos son sustancias con actividad antimicrobiana (microbicida o microbiosttica) con toxicidad suficientemente baja como para poder ser administrados a un organismo por la va adecuada, hasta alcanzar y mantener concentraciones eficaces en los tejidos.

Que tenga toxicidad selectiva, es decir, actuar segn el principio de bala mgica que daa al microorganismo respetando al hospedador. Que sea microbicida, es decir, que mate o inactive irreversiblemente el microorganismo, provocando la prdida total de viabilidad. Los microorganismos susceptibles no deberan desarrollar resistencias al quimioterpico.

Que el quimioterpico sea efectivo contra un amplio espectro de microorganismos. Que no sea alergnico, y que no tenga efectos secundarios. Que permanezca de forma activa en plasma, tejidos, etc. durante el tiempo necesario. A ser posible, que sea soluble en agua y que alcance pronto la concentracin teraputica en los tejidos

ANTIMICROBIANOS

Son agentes quimioteraputicos que se utilizan para el tratamiento de las enfermedades infecciosas producidas por bacterias y hongos. Interfieren con el desarrollo de los microorganismos, pero se diferencian de desinfectantes y antispticos porque actan dentro del husped sin producir efectos nocivos sobre ste.

ANTIMICROBIANOS

Antibiticos Antibiticos semi sintticos Antimicrobianos Anti fngicos

ANTIBIOTICOS
Sustancias qumicas producidas por organismos vivos (bacterias, hongos o vegetales) Tienen el poder de inhibir el desarrollo o destruir microorganismos Penicilina

ANTIBIOTICOS SEMISINTETICOS

Sintetizados artificialmente una vez conocida su frmula estructural Cloramfenicol Meticilina Oxacilina Cloxacilina Ampicilina

ANTIMICROBIANOS
Productos completamente sintticos Sulfonamidas Amoxicilina Cefalosporinas de 2da y 3ra generacin (Cefalotina, Cefradina, Cefazolina, Cefoxitina)

ANTIFUNGICOS
Drogas que presentan actividad biolgica contra hongos

CLASES DE ANTIBITICOS

Beta lactmicos: Penicilinas, Cefalosporinas, etc. Glicopptidos: Vancomicina /Gram(+) Aminoglicsidos: Gentamicina /Gram (-) aerbicos Macrlidos: Azitromicina /Gram(+) y (-) Tetraciclinas: Gram(+) y (-) Quinolonas: Ciprofloxacino /Gram(+) y (-) Sulfonamidas y Trimetoprim: Septrn Simples: Cloramfenicol

MECANISMOS DE ACCION DE LOS ANTIBIOTICOS

Inhibicin de la sntesis de la pared celular Alteracin de la permeabilidad de la membrana celular Inhibicin de sntesis de protenas Inhibicin de sntesis de cidos nuclicos

ACTIVIDAD DE LOS ANTIBIOTICOS

Bactericidas o Fungicidas: son capaces de producir la muerte de los microorganismos en forma rpida
Bacteriostticos o Fungistticos: solamente impiden el crecimiento de los microorganismos

RESPUESTA DE LOS MICROORGANISMOS Susceptibles: presentan receptores especficos para el antibitico, pudiendo ste ejercer su accin. Resistentes: pueden crecer y multiplicarse en presencia del antibitico

Definiciones

Espectro antimicrobiano: Capacidad que tiene un antibitico de actuar sobre determinada cepa bacteriana Amplio espectro: actan sobre bacterias Gram (+) y Gram (-) Reducido espectro: actan sobre Gram(+)

Definiciones

Resistencia: Capacidad que poseen ciertas bacterias de crecer y multiplicarse en presencia de un antibitico Susceptibilidad: Incapacidad de crecer y multiplicarse en presencia del antibitico

Antibiograma:

Estudio in vitro de la sensibilidad o susceptibilidad del microorganismo causante de la enfermedad, frente a diversos antibiticos

Antibiograma
Utilizacin: Bacterias de rpido crecimiento Bacterias fastidiosas patgenas (algunas)

La tendencia cada vez mayor de muchas bacterias a hacerse resistentes a los antibiticos, indica que el uso inadecuado de los antimicrobianos puede conducir a graves consecuencias Importante: elegir el antibitico adecuado para tratar una determinada bacteria, con la ayuda del antibiograma

Los antibiticos son sustancias producidas por seres vivos (antibiticos naturales) o modificadas artificialmente a partir de ellas (antibiticos semisintticos), que a pequeas concentraciones tienen efectos antimicrobianos (bactericidas o bacteristaticos), tras ser administrados por va adecuada a un organismo receptor.

Se conocen unos 5.000 antibiticos distintos, y cada ao se descubre unos 300 nuevos, pero en clnica solo se usa un 1% de los descubiertos.

La mayora de los antibiticos son molculas relativamente pequeas pero complejas, con regiones hidrofbicas que facilitan el transporte al interior celular. Muchos poseen varios anillos, algunos de los cuales mejoran la interaccin de la molcula con su diana macromolecular.

Para estudiarlos es ms til agrupar a los antibiticos no por clases segn su naturaleza qumica, sino en funcin de las dianas sobre las que actan y con las que interfieren:

Antibiticos que interfieren con la biosntesis de la pared celular. Antibiticos que actan sobre la membrana celular. Antibiticos que inhiben la sntesis de protenas. Antibiticos que actan sobre la sntesis de cidos nucleicos.

Inhibidores de la sntesis de cidos nuclecos

Antibiograma:

Estudio in vitro de la sensibilidad o susceptibilidad del microorganismo causante de la enfermedad, frente a diversos antibiticos

Antibiograma
Utilizacin: Bacterias de rpido crecimiento Bacterias fastidiosas patgenas (algunas)

La tendencia cada vez mayor de muchas bacterias a hacerse resistentes a los antibiticos, indica que el uso inadecuado de los antimicrobianos puede conducir a graves consecuencias Importante: elegir el antibitico adecuado para tratar una determinada bacteria, con la ayuda del antibiograma

Mtodos para realizar Antibiogramas

Dilucin en serie del antibitico Difusin en agar del antibitico

METODO DE DILUCION EN SERIE

Mtodo cuantitativo que se realiza en medios lquidos El antibitico se distribuye diluyndolo en una serie de tubos con caldo, sembrndose la bacteria cuya sensibilidad se quiera estudiar Se incuban los tubos a 37C por 24 horas y se busca el ltimo tubo en que hay ausencia de desarrollo La concentracin del antibitico de ese tubo indica la Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI) del antibitico Mtodo caro, lento y engorroso, pero con un mayor rango de seguridad que el mtodo de difusin

Concentracin mnima inhibitoria (CMI): mnima concentracin capaz de producir inhibicin de la bacteria (efecto bacteriosttico).
Concentracin mnima bactericida (CMB): concentracin mnima para producir muerte bacteriana.

Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI)

se utiliza una cantidad estandarizada de inculo: 5x105 ufc/ml

100

50

25 12.5 6.25 3.12

1.6 0.8

0.4

Concentracin Mnima Bactericida (CMB)

100 50 25 12.5 6.25 3.12 1.6 0.8 0.4 0

CMI

METODO DE DIFUSION EN AGAR (METODO DEL DISCO)

Mtodo cualitativo: mide la capacidad de un antibitico de difundir a travs de un agar, para inhibir el crecimiento de las bacterias. Usa discos de papel impregnados con cantidades conocidas de antibiticos Existe una correlacin directa entre los dimetros de inhibicin y las CMI obtenidas por la prueba de dilucin en tubo. Mtodo rpido, sencillo y muy reproducible. Utiliza una modificacin de la tcnica de Kirby Bauer estandarizada por el NCCLS ( National Committe for Clinical Laboratory Standars )

Preparacin del inoculo (mtodo directo de suspensin de colonias)

Con un asa estril recoger 4 a 5 colonias desde un cultivo completamente puro y aislado de la cepa a investigar Transferir las colonias a 5 ml de Caldo Nutritivo y realizar una emulsin Comparar la turbidez de la emulsin con el estndar de turbidez Mc Farland 0.5 Si la emulsin queda ms turbia que el estndar, se debe diluir con el mismo caldo utilizado Si la emulsin tiene menor turbidez, se debe agregar mayor cantidad de colonias

Estndar Mc Farland 0,5

Estndar de turbidez que equivale a una concentracin de 108 bacterias/ml

Inoculacin de las placas

Introducir una trula de algodn estril en el caldo Elevar la trula sobre la superficie del caldo y presionarla contra las paredes interiores del tubo para eliminar el exceso de inoculo Frotar la superficie del agar con la trula en forma densa, en 3 direcciones ( horizontal, vertical y diagonal ) y cubriendo toda la superficie de la placa Dejar secar la placa por 5 10 minutos

Colocacin de los sensidiscos

Elegir los antibiticos a utilizar de acuerdo a la identificacin de la cepa Colocar los discos de sensibilidad con pinza esterilizada a la llama y previamente enfriada Presionar suavemente los discos para asegurar su implantacin a la superficie del agar Colocar los discos suficientemente separados. No ms de 6 a 8 por placa Una vez colocado un disco, nunca se debe mover, ya que el antibitico comienza a difundir casi instantneamente Incubar la placa a 37C por 18 24 horas

Dispensador de sensidiscos

Medicin de los halos

Las zonas de inhibicin se miden con una regla y se expresan en milmetros. El dimetro de los halos se compara con una tabla estandarizada que fija los lmites entre sensibilidad, sensibilidad intermedia y resistencia.