Faculdade de Farmcia da Universidade de Coimbra Mestrado Integrado em Cincias Farmacuticas Qumica Orgnica I 2010/2011

Cromatografia em camada fina (CCF/TLC)

Ana Rita Sequeira; Elma Corveira; Simonetta Borsini PL 3

Cromatografia
Processo fsico que permite a separao dos componentes de uma mistura, permitindo uma anlise qualitativa e quantitativa de uma amostra; Est fundamentada na migrao diferencial dos componentes, que ocorre devido a diferentes interaces entre a fase estacionria e a fase mvel, nomeadamente, a diferena de adsortividades na primeira e a diferena de solubilidades na fase mvel.

Tipos de cromatografia

Em Coluna (CC) Em Camada Fina (CCF/TLC)

Gs Lquido (GC)

Cromatografia

Flash

Lquida de alta presso (HPLC)

Kroma + graphia = registo da cor

Cromatografia em Camada Fina

uma tcnica simples e de grande importncia para a separao rpida e anlise quantitativa de pequenas quantidades de material. usada para: Determinar o nmero de compostos de uma mistura Determinar a pureza do composto Identificar componentes de uma dada mistura comparando-os com padres Acompanhar o curso de uma reaco pelo aparecimento dos produtos e desaparecimento dos reagentes Isolar compostos de uma mistura. Compreende duas fases: a fase estacionria e a fase mvel.

Fase estacionria: remete para a forma fsica do sistema onde ser aplicada a mistura que se pretende separar. Consistem, normalmente, em placas de vidro, metal ou de plstico revestidas por gel de slica, xido de alumnio ou celulose. Fase mvel: remete para o solvente ou mistura de solventes escolhidos. Revelao: a visualizao dos compostos pode ser feita de diversas formas, dependendo das caractersticas dos mesmos: Directamente, no caso de compostos corados; Solues com reagentes que reagem com os compostos a separar formando compostos corados (ex: cido fosfomolibdco) Luz UV 254 nm Vapores de iodo

Procedimento: Dissolver a amostra num solvente orgnico voltil (1-2%) Aplicar a amostra com um tubo capilar a cerca de 1 cm da base da placa (linha de base) a mancha no deve ter mais do que 2 3 mm de dimetro.

Secar amostra

Aplicao da amostra

 Desenvolvimento do cromatograma (em cmara saturada, sendo que o solvente deve estar abaixo da linha de base)

Retirar a placa assim que a frente de solvente atingir cerca de 0,5 - 1 cm da parte superior da placa e marcar a linha de solvente a lpis. Secagem e revelao, pelo mtodo mais adequado, do cromatograma

Determinao do valor de Rf (Factor de Reteno)

Condies experimentais que podem interferir com o Rf:

-

Tipo de adsorvente Solvente de desenvolvimento Tipo de cmara de desenvolvimento Mtodo de revelao Espessura da placa TLC Quantidade de material aplicado na placa TLC

No caso de duas substancias terem o mesmo Rf, pode no tratar-se da mesma ATENO!! substncia. O valor de Rf deve apenas ! ser tomado como guia, visto que existem vrios compostos com o mesmo Rf. Deste modo, outras anlises devem ser efectuadas (como IV) para confirmar a natureza do composto.

Bibliografia

http://pessoal.utfpr.edu.br/poliveira/arquivos/auladecromatografiapa pelecamadafina.pdf http://pt.wikipedia.org/wiki/Cromatografia http://www.ff.ul.pt/paginas/constant/tl/tecnicas/tlc.htm Pombeiro, A. J. L. O., Tcnicas e Operaes Unitrias em Qumica Laboratorial, Fundao Calouste Gulbenkian, 4 Ed., 2003 http://www.qmc.ufsc.br/qmc5230/aula02/destsimples.html http://pt.wikipedia.org/wiki/Cromatografia Slides das aulas laboratoriais