Cromatografia

Profa. Dra. Sonia Ap. de Andrade sonia_andradebr@yahoo.com

Objetivos:
Bases tericas da cromatografia e suas aplicaes; Apresentar os constituintes bsicos de um sistema cromatogrfico e cuidados especiais no sistema operante; Discutir as principais tcnicas de preparo de amostras para anlises cromatogrficas; Discutir os principais reagentes, solventes e modos de injeo utilizados nos diferentes sistemas cromatogrficos; Acoplamento dessa tcnica espectrometria de massas e sua importncia na elucidao estrutural de compostos; Demonstrar os principais parmetros de validao analtica utilizados em anlises cromatogrficas.

Contedo Programtico: Bases tericas da cromatografia Introduo anlise cromatogrfica; Diferentes sistemas cromatogrficos e suas aplicaes cromatografia lquida de alta eficincia; cromatografia gasosa; acoplamento entre tcnicas cromatogrficas e a espectrometria de massas; Tcnicas de preparo de amostras biolgicas, ambientais e alimentos para anlises cromatogrficas; Validao de mtodos cromatogrficos.

Metodologia: Aulas expositivas. Estudo de artigos cientficos que utilizam as tcnicas estudadas. Interpretao de cromatogramas. Resoluo de problemas. Visita a um laboratrio de Pesquisa nessa rea.

Cronograma:
22/10 - Princpios e Aplicaes de cromatografia 29/10 cromatografia lquida de alta eficincia/artigos 05/11 - Aula Prtica - Instrumental 12/11 cromatografia gasosa/artigos 19/11 Aula Prtica Cromatografia Lquida 26/11 acoplamento entre tcnicas cromatogrficas e a espectrometria de massas 03/12 - Avaliao Terica/prtica 10/12 - Resultados Avaliao e Discusso

Histrico: 1906 o botnico russo Mikhail Tswett descreveu suas experincias na separao dos componentes de extratos de folhas. (coluna de vidro c/CaCO3) Substncias separadas = Bandas coloridas (chroma cor e graphein escrita)

Aplicaes:
Identificao de compostos, por comparao com padres previamente existentes; Purificao de compostos, separando-se as substncias indesejveis; Separao dos componentes de uma mistura;

 A cromatografia um mtodo fsico-qumico de separao que se fundamenta na migrao diferencial dos componentes de uma mistura devido a diferentes interaes entre duas fases imiscveis: fase mvel (gs, lquido ou um fluido supercrtico) e fase estacionria (fixa, colocada em uma coluna ou numa superfcie slida).

Transporte dos componentes de uma amostra por uma fase mvel atravs de uma fase estacionria

 Classificao dos Mtodos Cromatogrficos

Cromatografia planar; Cromatografia em coluna;

 Classificao dos Cromatogrficos:

Mtodos

Modo de separao: Adsoro, partio, troca inica, excluso ou misturas desses mecanismos.

 Classificao Cromatogrficos:

dos

Mtodos

Fase mvel empregada: Cromatografia lquida Clssica (CLC): fase mvel - fora da gravidade; Cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE): fases estacionrias de partculas menores - bomba de alta presso;

 Classificao dos Cromatogrficos:

Mtodos

Cromatografia gasosa simples (CG) Cromatografia gasosa de alta resoluo (CGAR) colunas capilares

 Classificao dos Cromatogrficos:

Mtodos

Cromatografia supercrtica (CSC) - vapor pressurizado (acima da sua temperatura crtica).

 Classificao dos Cromatogrficos:

Mtodos

Fase estacionria utilizada: fase estacionrias slidas, lquidas e quimicamente ligadas.

Cromatografia em Papel
Compostos hidrossolveis, cidos orgnicos e ions metlicos Princpio: partio (solubilidade) Quantidade de amostra necessria 10-3 a 10-6 g F.M. - Sistema de solventes F.E. - gua retida na celulose (papel Whatman) Mtodos de deteco: fsico-qumicos Anlise qualitativa: Rf (fator de reteno) problema : reprodutibilidade

Cromatografia (CCD)

em

camada

delgada

Adsoro lquidoslido.
Separao - migrao diferencial sobre uma camada delgada de adsorvente, fixo numa superfcie plana, por meio de uma fase mvel (um lquido ou misturas de lquidos). Adsorventes: slica, alumina, diatomcea e poliamida. celulose, terra

 Mtodo simples, econmico. Aplicaes:

rpido,

visual

acompanhamento de reaes orgnicas, purificao de substncias identificao de fraes coletadas em cromatografia lquida clssica.

 fator reteno

de (Rf):

Razo entre a distncia percorrida pela substncia em questo e a distncia percorrida pela fase mvel. Valores ideais para Rf esto entre 0,4 e

 Utiliza-se pequena quantidade de amostra (microgramas a miligramas). Revelao: UV, vapores de iodo, solues de cloreto frrico e tiocianoferrato de potssio, fluorescncias, radioatividade, etc.

 Cromatografia em Camada Delgada Preparativa A CCD pode ser usada tanto na escala analtica quanto na preparativa.

 Cromatografia em Coluna:
A cromatografia em coluna uma tcnica usada para a separao de muitos compostos orgnicos. Essa tcnica fundamenta-se basicamente na polaridade relativa das molculas envolvidas.

 Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE) O principal mecanismo de separao da cromatografia lquida baseia-se na partio dos componentes de uma amostra entre a fase mvel lquida e a fase estacionria slida.

 Aplicao em CLAE:
Vrias reas da cincia; no acompanhamento de snteses; no isolamento de produtos naturais e sintticos; produo e controle de qualidade de medicamentos, dentre tantas outras aplicaes

 Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE) A versatilidade desta tcnica reside no grande nmero de fases estacionrias existentes, as quais possibilitam anlises e separaes de uma ampla gama de compostos com alta eficincia

 Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE)

a) reservatrio da fase mvel; b) bomba de alta presso; c) vlvula de injeo; d) coluna; e) detector e f) registrador.

Foras intermoleculares
A atrao entre molculas uma fora intermolecular. Foras intermoleculares so muito mais fracas do que as foras intramoleculares (por exemplo, 16 kJ mol-1 versus 431 kJ mol-1 para o HCl); Quando uma substncia funde ou entra em ebulio, foras intermoleculares so quebradas (no as ligaes covalentes).

Foras Intermoleculares

Foras de disperso Foras Polares Foras Inicas

Foras de disperso de London

A mais fraca de todas as foras intermoleculares. O ncleo de uma molcula (ou tomo) atrai os eltrons da molcula adjacente (ou tomo). Por um instante, as nuvens eletrnicas ficam distorcidas. Nesse instante, forma-se um dipolo (denominado dipolo instantneo).

Foras de disperso de London

Um dipolo instantneo pode induzir outro dipolo instantneo em uma molcula (ou tomo) adjacente. As foras entre dipolos instantneos so chamadas foras de disperso de London

Em biotecnologia, interaes dispersivas hidrofbicas

Interaes Dispersivas

Tipicamente ocorre entre hidrocarbonetos

Interaes Dispersivas
Biotecnologia: ID=Hidrofbicas

Foras Polares

Foras dipolo-dipolo As foras dipolo-dipolo existem entre molculas polares neutras. Mais fracas do que as foras ondipolo.

Foras dipolo-dipolo

H uma mistura de foras dipolo-dipolo atrativas e repulsivas quando as molculas se viram; Se duas molculas tm aproximadamente a mesma massa e o mesmo tamanho, as foras dipolo-dipolo aumentam com o aumento da polaridade.

 A energia de interao (UP) entre dois dipolos moleculares;

onde =polaridade da molcula = momento dipolo da molcula r= distncia entre as molculas

Ligao de hidrognio
Caso especial de foras dipolo-dipolo. A partir de experimentos: os pontos de ebulio de compostos com ligaes H-F, H-O e H-N so altos. Foras intermoleculares so fortes. A ligao de H necessita do H ligado a um elemento eletronegativo (mais importante para compostos de F, O e N). Os eltrons na H-X (X = elemento eletronegativo) encontramse muito mais prximos do X do que do H. O H tem apenas um eltron, dessa forma, na ligao H-X, o H d+ apresenta um prton quase descoberto. Conseqentemente, as ligaes de H so fortes.

Ligao de hidrognio

Interaes Polares: Interaes Dipolo-Dipolo

Interaes Dipolo Dipolo induzido

Interaes Polares: Interaes Dipole-Dipolo Induzido

 compostos hidrocarbonetos aromticos podem ser separados com base nas interaes dispersiva; GC: fase hidrocarboneto estacionria -

Ou por combinao interaes polarinduzido e interaes dispersivas LC: fase estacionria IPI - slica gel Fase mvel ID- : n-heptano

Foras Inicas

Interaes Inicas e Dispersivas

Foras Moleculares e Cromatografia

Separao Baseada em Interaes Dispersivas

Cromatograma de Hidrocarbonetos da Gasolina utilizando uma fase estacionria Dispersiva

Separao Baseada em Interaes Polares

Separao de Hidrocarbonetos Aromticos e Aromticos

Separao Baseada em Interaes Inicas

A Separao de ctions por cromatografia de troca inica

 Controle dos Parmetros de Cromatografia: Fase Estacionria (Vs)

 fase estacionria:

O recheio da coluna reteno

X tempo de

Fase estacionria especfica X aumento na resoluo e reduo no tempo de anlise. Reduo do recheio X preveno de desnaturao de protenas, por exemplo.

 fase estacionria: Molculas de forma especial molculas com formas complementares Cromatografia de molculas Quirais: Fase estacionria consiste em um especfico enantiomero.

 fase estacionria: diferentes tamanhas de poros

Cromatografia por excluso de tamanho separao por massa molecular

Separao de Molculas Quirais

Separao dos Enantiomeros do Acido Halocarboxilico

Separao de uma Mistura por Cromatografia de Excluso

Separao de uma Mistura por Cromatografia de Excluso

Consideraes Gerais

Fase Mvel: Importncia e Preparao

Cerca de 50% de todos os problemas de anlise.... Reagentes inadequados... Solventes devem ser grau de pureza HPLC...

So inadequados: gua mono destilada: orgnicos volteis; contaminao

gua deionizada comum: orgnicos ; gua de Osmose reversa: ons orgnicos de baixo peso molecular e

gua deve ser grau HPLC

- livre de bactrias gua esterilizada na sada por membrana de 0,22 m. - Resistividade > 18 megohm. (teor de ons) - Anlise normais: teor de orgnicos <20 ppb.

Fase Mvel: Aditivos

Grau P.A: grande variao de qualidade entre diferentes marcas; Baixas quantidades contaminam a coluna; de orgnicos

Sais, cidos, tampes, e reagentes (PIC)

 Fase Mvel: Preparo

Preparar diariamente
Medir os componentes separadamente e depois misturar, antes da filtrao;

Cuidados!
Temperatura do frasco Erro de 1% no teor de orgnico pode causar uma mudana de 5-15% no tempo de reteno dos picos

Preparo da Fase Mvel;

 Fase Mvel
Ajuste de pH- acertar o pH do tampo aquoso antes de misturar com a parte orgnica Partculas em suspenso riscar selos e pistes da bomba Filtrao da fase mvel: para evitar entupimento dos filtros (2m) da coluna deve-se filtrar a fase por membrana de 0,45

Compatibilidade Qumica Membranas steres de celulose Teflon (TFE) Polipropileno hidrfilo PDVF Nylon

 Desgaseificao Reprodutibilidade do fluxo (bolhas...) Estabilidade da linha de base (entrada de bolhas no detector...) O2 absorve <215 nm

Mtodos de Gasgaseificao
Ultra-som; muito lento, pouco eficiente Vcuo: lento (mnimo 20 minutos pode alterar a composio da fase mvel

Vcuo + ultra-som + agitao simultaneamente: total de 2-5 min. Suficiente para a maioria das separaes isocrticas. Replicar de 12 em 12 horas. Eficiente!

Reservatrio da Fase Mvel

Vidro Pirex para anlise de Plsticos para anlise de ons orgnicos;

O reservatrio de fase mvel deve ficar pelo menos 15 cm acima do ponto de entrada da fase na bomba

Avaliao do Cromatograma

Equao de Resoluo
Avaliao do grau de separao atravs do cromatograma.

V= volume de eluio = volume da fase mvel bombeado atravs do sistema desde o ponto de injeo at a sada do pice do pico (independe

Tempo de reteno do pico (tR) = tempo corrido entre o ponto de injeo at a sada do pice do pico (dependente do fluxo)

Volume de Coluna Vo
Vo= volume de eluio (tempo de reteno) de um pico no retido pela coluna. o volume mnimo que a bomba precisa bombear para qualquer amostra chegar at o detector. O volume de coluna (Vo) , tambm, o volume de fase mvel contido no sistema entre o injetor e o detector, inclusive dentro dos poros. A coluna responsvel por 90-95% deste volume

Vo (em L) pode ser estimado para colunas de recheios esfricos de 3-10 m (com erro de 10-20%) usando o seguinte frmula: Vo (0,5). (volume interno da coluna vazia) Vo (L) ( x r2 x C)/2 r=raio interno em mm C=comprimento em mm.

Quaisquer picos ou grupos de picos que saem no Vo: No interagiram com a coluna No podem ser reconhecidos pelo tempo de reteno No podem ser quantificados
Vo normalmente ( mas nem sempre!) a 1 perturbao da linha de base...

System Suitability e Vo
O System Suitability do computador pode calcular os parmetros de avaliao do cromatograma; k, , N, assimetria, cauda, etc.... Para isso o analista deve informar o tempo do Vo..

Reteno (K)

Reteno afetada/controlada por:

-Polaridade da fase mvel; isto pela % dos componentes da fase - Polaridade da fase estacionria - Temperatura da coluna

Seletividade

Seletividade :
capacidade do sistema qumico (coluna e fase mvel) de diferenciar entre os componentes de interesse

Seletividade afetada/controlada por: Caractersticas qumicas da fase mvel Caractersticas estacionria qumicas da fase

pH da fase mvel, quando se trata de compostos ionizados

Eficincia (N)

Eficincia N
Diluio da banda de um componente sofrida ao passar pelo sistema (~~alargamento do pico)

Fatores que influenciam N

Diferena no comprimento de percurso

 Fatores que influenciam N

Efeito de transferncia de massa

Fatores usados para maximizar N

Usar uma coluna bem empacotada Usar recheios esfricos Usar recheios de partculas pequenas (5m) Usar um sistema sem problemas de volumes mortos (injetor, detector, tubulaes, conexes, etc)

N (nmero de pratos tericos) Medida da qualidade do empacotamento da coluna e serve para detectar defeitos e degradao do leito do recheio.

A eficincia afetada/ controlada por fatores fsicos Temperatura Forma e tamanho da partcula de recheio Comprimento da coluna Fluxo Volume e massa de amostra injetada

Parmetros de Separao

Principais Fatores de Controle Reteno k Polaridade da fase mvel Polaridade da fase estacionria rea superficial do suporte (m2/g) Tamanho do poro em A (1A= 10-10m)

Principais Fatores de Controle dos Parmetros de Separao - Seletividade Caractersticas qumicas da fase mvel Caractersticas qumicas da fase estacionria pH da fase mvel, quando se trata de compostos ionizados

Seletividade alterada pela Fase Mvel

Seletividade controlada pelo pH da soluo

Seletividade Alterada pela Coluna

Seletividade controlada pela coluna

Os principais fatores de Controle dos Parmetros de Separao Eficincia N

Tamanho mdio das partculas do recheio (m) Temperatura da coluna Comprimento da coluna Viscosidade da fase mvel

Efeito do tamanho mdio da partcula Eficincia (N)

Comprimento e Dimetro da Coluna

O nmero de pratos tericos geralmente proporcional ao comprimento da coluna. Uma coluna de dimetro menor aumenta a altura do pico, mas no necessariamente a resoluo

Os Principais Fatores de Controle dos Parmetros de Separao Eficincia N

Fluxo da fase mvel Carga (massa) de amostra injetada Volume de injeo Polaridade do diluente da amostra Efeitos extra-coluna (tubos, etc..)

Efeito do fluxo sobre N

Comparao de fluxos diferentes em coluna C18 com amostra de Parabenos

Mudanas de Fluxo/Presso Aumentar fluxo gradativamente (passos de 0, 1 ou 0,2 mL/min; deixar a presso estabilizar.

Sobrecarga de Massa de Amostra N e K (cauda/ombro)

Volume Mximo de Injeo

Para manter toda a eficincia da coluna o volume de injeo deve ser, no mximo, 1% do volume interno da coluna vazia. Exemplo de clculo do volume mximo Para uma coluna de 4,6 mmx 250 mm o volume mximo de injeo sem perda de eficincia (N) : (3,14)(2,3 mm)2(250mm)(0,01)=41 mm3=41

Efeito do volume de injeo sobre N

A polaridade do diluente da amostra Dissolver amostra ou na fase mvel ou em algo mais fraco

Amostra injetada em um solvente mais forte que a fase mvel >> N + K.

A Polaridade do diluente da Amostra Sempre quando possvel dissolver amostra na fase mvel ou numa fase mais fraca (fase reversa: % menor de orgnico ou orgnico + fraco = + polar)

Errado:
Fase mvel 30% metanol; coluna C18 Amostra dissolvida em 100% metanol A mostra dissolvida em 30% acetonitrila

Correto;
Fase mvel 30% metanol Amostra dissolvida em 0-30% metanol

Filtrao da Amostra

Para no entupir o filtro de entrada da coluna e leitos com partculas 4 m usar filtros descartveis de 0,45 m. Para colunas com partculas menores de 4 m interessante usar filtros de 0,22 m. Obs; Compatibilidade das

Pr-Coluna A pr-coluna se usa em linha e protege a coluna analtica contra partculas e contaminantes dissolvidos.

Filtro de Linha (In Line Filter)

Um filtro de linha contem um filtro de ao inox sintetizado de 2m parecido com o da entrada da coluna. usado em linha entre o injetor e a coluna analtica protegendo somente contra partculas em suspenso.

Anlise Quantitativa
Comparao da altura ou da rea do pico do analito com a de um ou mais padres

Anlise baseada na altura de Pico Variveis a serem controladas: Temperatura da coluna Vazo do eluente Velocidade de injeo da amostra

Anlise baseada nas reas de pico A medida das reas dos picos, normalmente, o mtodo preferido para quantificao. Computadores ou integradores; Manual; para picos simtricos multiplique a altura do pico pela sua largura a meia altura

Calibrao e Padronizao Preparao de uma srie de solues padro; Os cromatogramas para os padres so, ento, obtidos, e as alturas ou as reas dos picos so lanadas num grfico em funo de concentrao

Incertezas; Volume de amostra Velocidade de injeo da amostra

Mtodo da Padronizao Interna Padres internos Vantagens: evita-se incertezas produzidas pela injeo da amostra Padro interno+ padro + analito Razo entre as reas ou alturas = varivel analtica

Mtodo da normalizao da rea Considera-se que ocorre a eluio completa dos componentes da amostra; As reas so computadas e corrigidas considerando as diferentes respostas do detector A concentrao do analito obtida multiplicando se a sua rea pelo fator resposta

Cromatografia Gasosa

Histrico

Aplicabilidade

uais misturas podem ser separadas por C

 Misturas de constituintes volteis; Pontos de ebulio at 300C;

Cromatgrafo a Gs
1. Reservatrio de gs e controle de vazo/presso 2. Injetor (vaporizador de amostra 3. Coluna cromatogrfica e Forno da coluna 4. Detector 5. Amplificador de sinal 6. Registro de sinal

Instrumentao
CG: Fase Mvel: No interage com a amostra apenas a carrega atravs da coluna (Gs de arraste)

Requisitos
Inerte Puro Compatvel com o Detector;

Linha de gs

1. 2. 3. 4. 5. 6.

Cilindro de gs Regulador de Presso primrio Traps para eliminar impurezas Regulador de presso secundrio Regulador de vazo Medidor de vazo

Dispositivos de Injeo de Amostra

Os dispositivos para injeo (INJETORES ou VAPORIZADORES) devem prover meios de introduo INSTANTNEA da amostra na coluna cromatogrfica

Injetor on-column Convencional

1 - Septo (silicone) 2 - Alimentao de gs de arraste) 3 - Bloco metlico aquecido 4 - Ponta da coluna cromatogrfica

 TEMPERATURA DO INJETOR; Deve ser suficientemente elevada para que a amostra vaporize-se imediatamente, mas sem decomposio Regra Geral: Tinj = 50oC acima da temperatura de ebulio do componente menos voltil

VOLUME INJETADO Depende do tipo de coluna e do estado fsico da amostra

Slidos: convencionalmente se dissolve em um solvente adequado e injeta-se a soluo

Colunas: Definies Bsicas

EMPACOTADA = 3 a 6 mm L = 0,5 m a 5 m

CAPILAR = 0,1 a 0,5 mm L = 5 m a 100 m

Temperatura da Coluna
Alm da interao com a FE, o tempo que um analito demora para percorrer a coluna depende de sua PRESSO DE VAPOR (p0).

tR = Tempo de Reteno (tempo decorrido entre a injeo e o pice do pico cromatogrfico) tM = Tempo de Reteno do Composto No-Retido (tempo mnimo para um composto que no interaja com a FE atravesse a coluna) tR = Tempo de Reteno Ajustado (tempo mdio que as molculas do analito passam sorvidas na FE)

VOLUME DE RETENO AJUSTADO (VR)

VR = Volume de Reteno (volume de gs de arraste necessrio para eluir um analito) VM = Volume de Fase Mvel (volume de gs de arraste contido na coluna; volume morto) VR = Volume de Reteno Ajustado (volume de gs de arraste consumido enquanto o analito est sorvido na FE)

Constante de Distribuio (KC) Coluna cromatogrfica: srie de estgios independentes onde acontece o equilbrio entre o analito dissolvido na fase estacionria e no gs de arraste

FATOR DE RETENO, k: razo entre as massas de analito contidas na FE (Ws) e gs de arraste (WM)

RAZO DE FASES: razo entre volumes de FE e gs de arraste na coluna

O fator de reteno k depende da constante termodinmica de distribuio KC e da razo de fases da coluna

Razo de fases ()
Depende das DIMENSES da coluna:

Relaes entre VR, KC e VR pode ser definido em funo de KC e

VR depende diretamente da constante de distribuio do soluto entre a FE e o gs de arraste e das dimenses da coluna.

Eficincia de Sistemas Cromatogrficos

A migrao um analito pela coluna provoca inevitavelmente o alargamento da sua banda:

Efeitos do alargamento excessivo de picos

Separao deficiente de analitos com retenes prximas. Picos mais largos e menos intensos = menor detectabilidade

EFICINCIA
Capacidade de eluio com o mnimo de disperso do analito.

Quantificao da Eficincia
Supondo a coluna cromatogrfica como uma srie de estgios separados onde ocorre o equilbrio entre o analito, a FE e o gs de arraste:

Otimizao da Eficincia
O nmero de pratos tericos de uma coluna (N) pode ser calculado por: N= 16. (tR/Wb)2

Otimizao da Eficincia
A altura equivalente a um prato terico funo da velocidade linear mdia do gs de arraste u:

 O valor de H pode minimizado otimizando-se vazo de gs de arraste

ser a a

 FASES ESTACIONRIAS Caractersticas de uma FE ideal

FE Seletiva: separao adequada dos constituintes da amostra

FE pouco Seletiva: m resoluo mesmo com coluna de boa eficincia

Regra geral a FE deve ter caractersticas tanto quanto possvel prximas das dos solutos a serem separados (polar, apolar, aromtico ...)

 Caractersticas de uma FE ideal

Ampla faixa de temperaturas de uso: flexibilidade na otimizao da separao; maior

Boa estabilidade qumica e trmica maior durabilidade da coluna, no reage com componentes da amostra; Baixa viscosidade: colunas mais eficientes (menor resistncia transferncia do analito entre fases); Elevado grau de pureza: ausncia de picos fantasma nos cromatogramas.

FASES ESTACIONRIAS FE Slidas: Adsoro

O fenmeno fsico-qumico responsvel pela interao analito + FE slida a ADSORO

A adsoro ocorre na interface entre o gs de arraste e a FE slida

FE Slidas
Caractersticas Gerais: Slidos finamente granulados (dimetros de partculas tpicos de 105 m a 420 m). - Grandes reas superficiais (at 102 m2/g). Mais usados: Polmeros Porosos Porapak (copolmero estireno-divinilbenzeno), Tenax (polixido de difenileno) Slidos Inorgnicos Carboplot, Carboxen (carves ativos grafitizados),

 Principais Aplicaes:
Separao de gases fixos Compostos leves Sries homologas

Famlias de FE Lquidas
POLIGLICIS Muito polares; sensveis a umidade e oxidao; ainda muito importantes. Principal: Polietilenoglicol comerciais: Carbowax, Supelcowax, HP-Wax, etc.) (nomes DB-Wax,

FE Lquidas: Absoro
O fenmeno fsico-qumico responsvel pela interao analito + FE lquida a ABSORO

A absoro ocorre no interior do filme de FE lquida (fenmeno INTRAfacial)

Coluna: CP-Sil 5 (25 m x 0,32 mm x 0,12 m) TCOL:195oC (6,5 min) / 195oC a 275oC (10oC.min-1) Gs de Arraste: He @ 35 cm.min-1 Detector: FID Amostra: 2L de soluo dos pesticidas on-column

 Separao de piridinas

 ANLISE QUALITATIVA
Conceitos Gerais Identificao individual contidas na amostra

das

espcies

Determinao da identidade da amostra propriamente dita

 Fontes de Informaes Qualitativas

RETENO - Uso de dados de reteno de um analito para sua identificao DETECO Detectores que fornecem informaes estruturais sobre as substncias eludas

 Tempos de Reteno

Comparao de cromatogramas da amostra e de uma soluo padro do analito suspeito

Tempos de Reteno Identificao por tR muito pouco confivel:

Bibliografia bsica
1- COLLINS, C.H., BRAGA, G.L E BONATO,P.S Introduo Mtodos Cromatogrficos Editora da Universidade Estadual de Campinas. So Paulo (2006) 5a edio. 2- SKOOG, D. A.; NIEMAN, T. A. Princpios de Anlise Instrumental, 5. ed. So Paulo: Editora Bookman, 2002.

Bibliografia Complementar
1. HARRIS, Daniel C. Anlise Qumica Quantitativa, 6. ed. Rio de Janeiro: Livros Tcnicos e Cientficos, 2001 2. Artigos Cientficos da rea

Bibliografia bsica
1- COLLINS, C.H., BRAGA, G.L E BONATO,P.S Introduo Mtodos Cromatogrficos Editora da Universidade Estadual de Campinas. So Paulo (2006) 5a edio. 2- SKOOG, D. A.; NIEMAN, T. A. Princpios de Anlise Instrumental, 5. ed. So Paulo: Editora Bookman, 2002.

Bibliografia Complementar
1. HARRIS, Daniel C. Anlise Qumica Quantitativa, 6. ed. Rio de Janeiro: Livros Tcnicos e Cientficos, 2001 2. Artigos Cientficos da rea

Cromatografia em Papel
Compostos hidrossolveis, cidos orgnicos e ons metlicos Princpio: partio (solubilidade);Quantidade de amostra necessria 10-3 a 10-6 g F.M. - Sistema de solventes F.E. - gua retida na celulose (papel Whatman) Mtodos de deteco: fsico-qumicos Anlise qualitativa: Rf (fator de reteno)

Cromatografia (CCD)

em

camada

delgada

Adsoro lquidoslido. Separao - migrao diferencial sobre uma camada delgada de adsorvente, fixo numa superfcie plana, por meio de uma fase mvel (um lquido ou misturas de lquidos). Adsorventes: slica, alumina, celulose, terra diatomcea e poliamida.

Aplicaes acompanhamento orgnicas, de reaes

purificao de substncias

identificao de fraes coletadas em cromatografia lquida clssica.

fator de reteno (Rf): Razo entre a

distncia percorrida pela substncia em questo e a distncia percorrida pela fase mvel. Valores ideais para Rf esto entre 0,4 e 0,6

Utiliza-se pequena quantidade (microgramas a miligramas).

de

amostra

Revelao: UV, vapores de iodo, solues de cloreto frrico e tiocianoferrato de potssio, fluorescncias, radioatividade, etc.

Cromatografia Preparativa

em

Camada

Delgada

A CCD pode ser usada tanto na escala analtica quanto na preparativa.

Cromatografia em Coluna
A cromatografia em coluna uma tcnica usada para a separao de muitos compostos orgnicos. Essa tcnica fundamenta-se basicamente na polaridade relativa das molculas envolvidas.

Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE) O principal mecanismo de separao da cromatografia lquida baseia-se na partio dos componentes de uma amostra entre a fase mvel lquida e a fase estacionria slida.

Aplicao em CLAE
Vrias reas da cincia; Acompanhamento de snteses; Isolamento de produtos naturais e sintticos; Produo e controle de qualidade de medicamentos, dentre tantas outras aplicaes

Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE) A versatilidade desta tcnica reside no grande nmero de fases estacionrias existentes, as quais possibilitam anlises e separaes de uma ampla gama de compostos com alta eficincia

Cromatografia - Classificao

Aplicaes
Separao Identificao qualitativa (investigao espectral ou qumica dos componentes isolados) Determinao quantitativa