PRUEBAS RAPIDAS PARA HIV

STALIN TELLO VERA RESIDENTE PATOLOGIA CLINICA

PRUEBAS DE LABORATORIO

Mtodos Directos:

Evidencian/cuantifican la presencia de antgenos en la muestra.

PCR cualitativa, PCR cuantificada cultivo y aislamiento viral, antigenemia P-24)

 PRUEBAS DE LABORATORIO
Mtodos

Indirectos:

Evidencian la presencia o ausencia de anticuerpos totales en la muestra. Son los ms utilizados.

Pruebas rpidas ELISA

Diagnstico de VIH

Se usan dos niveles de prueba serolgicas: Pruebas de Tamizaje: Ensayos inmunoenzimticos Test de aglutinacin Test de deteccin rpida Tienen alta sensibilidad. La posibilidad de tener falsos negativos es bajo.


Uni-Gold Recombigen

Pruebas rpidas disponibles en el mercado Multispot HIV-1/HIV-2

OraQuick Advance

Reveal G2

PRUEBAS DE ELISA:

Primera Generacin: Los antgenos utilizados provienen del lisado viral de un cultivo Segunda Generacin: Los antgenos corresponden a protenas recombinantes o Pptidos sintticos. Tercera Generacin: Pptidos recombinantes sintticos de VIH-1, 2, 0. Cuarta Generacin: Se adicion el p24.
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Continuacin 7

Pruebas de confirmacin: Tienen alta especificidad Western Blot Inmunofluorescencia Indirecta. Radioinmunoprecipitacin

PUEDEN SER UTILIZADAS PARA DISMINUIR LA POSIBILIDAD DE OBTENER RESULTADOS FALSO POSITIVO.

Western Blot

Prueba de confirmacin Principio: Ensayo

inmunoenzimtico Detecta anticuerpos contra protenas especficas del VIH 1 Interpretacin: visual Muestras: suero y plasma Volumen: 20 l Tiempo: 3.5 hrs Sensibilidad: 100% Especificidad: 100%
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Nomenclatura de las bandas en Western Blot

Denominacin CDC gp160 gp160 gp120 gp41 p55 p40 p24 p17 p66 p51 p32
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Gen Protena env Precursora de la envoltura Glucoprotena externa Glucoproteina transmembrana gag Precursora del core Precursora del core Protena principal Protena de la matriz pol Transcriptasa inversa Transcriptasa inversa Endonucleasa

OMS Al menos 2 bandas

gp120

p24

Ventajas de las pruebas rpidas de VIH

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Versatilidad

y existencia de diferentes principios inmunolgicos as como en las muestras biolgicas que se pueden utilizar. No necesitan un laboratorio muy sofisticado para utilizarlas. La realizacin y la interpretacin de los resultados obtenidos es fcil. Los resultados preliminares se obtienen en poco tiempo, y cuando se combinan los resultados definitivos los podemos obtener en menos de una hora Personal a nivel tcnico las puede realizar con la debida capacitacin y supervisin de un profesional con experiencia.

Fortalezas de las pruebas rpidas de VIH

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Algunas se pueden almacenar a temperatura

ambiente. Se optimiza el uso de los recursos y el tiempo comparado con el ELISA. Los resultados obtenidos son igual de confiables que los resultados del ELISA y con menos limitaciones tcnicas. Algunas requieren poca inversin econmica.

Debilidades de las pruebas rpidas de VIH

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El costo comparado de estas pruebas con el ELISA

puede a veces ser mayor. Presencia de falsos positivos por lo que necesitan confirmacin de los resultados obtenidos. El periodo de ventana es mas largo por lo que podemos tener resultados falso negativo comparado con el ELISA de cuarta generacin.

Causas de resultado falso-positivo:

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Relativas al suero:

Relativo a la calidad y manipulacin de la muestra:

Calidad, extraccin, almacenamiento y contaminacin de la misma, estabilidad y calidad de los reactivos.

Relativas a la presencia de auto anticuerpos: Presencia de enfermedades autoinmunes (AR, LES).

Relativas a otras condiciones:

Vacunaciones, Enf. Virales, I Renal, Cirrosis, Enfermedades hemato -oncolgicas, alcoholismo, embarazo, etc.

Causas de resultado falso- negativo:

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Periodo de ventana Tratamiento con inmunosupresores Procesos malignos Trasplante de mdula sea Disfunciones de las Clulas B Factores reumatoides Prdida de estabilidad de los reactivos Reactivos que detectan principalmente p24 Pobre respuesta inmune

Seleccin de pruebas rpidas de VIH apropiadas

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Es necesario tomar en cuenta tres factores:

El objetivo de hacer la prueba. Sensibilidad y especificidad de la prueba. Prevalencia de la infeccin de VIH en la poblacin que ser tamizada con las pruebas.

rpidas de Eleccin de Pruebas VIH

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Los tres objetivos para hacer un tamizaje

de anticuerpos contra VIH son: Tamizaje de donadores de sangre u rganos. Para fines epidemiolgicos Diagnstico de personas infectadas.

Sensibilidad y especificidad de la prueba

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Estos dos factores son crticos para diferenciar entre una

y especificidad >95% preferiblemente validadas en nuestra poblacin.

persona infectada y una que no est infectada. Pruebas alta mente sensibles disminuyen la posibilidad de obtener resultados falsos negativo. Las pruebas altamente especficas disminuyen la posibilidad de tener resultados falsos positivo. La mejor eleccin depender del objetivo de hacer la pruebas. Los estndares mnimos son: Sensibilidad >99%


Resultados De la prueba

Sensibilidad y especificidad de las pruebas

a Verdaderos Positivos c Falsos negativos a+c b Falsos positivos d Verdaderos negativos b+d a+b

c+d

Sensibilidad = a / (a + c) VPP = a / (a + b)

Especificidad = d / (b + d) VPN = d/ (c + d)


Pruebas de Tamizaje
Sensibilidad

Deteccin de anticuerpos contra el VIH

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Pruebas de Confirmacin

Especificidad

Falsos negativos es bajo

Falsos positivos es bajo

Prevalencia de la infeccin de VIH

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Definicin: Casos positivos * 100%

poblacin total La prevalencia puede variar de poblacin a poblacin o en un hospital de servicio a servicio. A > prevalencia > VPP y < VPN A < prevalencia < VPN y > VPP

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Tamizaje en labor y partos

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Fase preanalitica: Antes de realizar la prueba

Se ha hecho pruebas de VIH anteriormente

Tenemos los insumos y el personal necesarios Que tan cerca esta del momento del parto

Que muestra usare para hacer la prueba

Sistema de identificacin de muestras

Tamizaje en labor y partos

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Fase analitica: proceso de realizacion de la

prueba:

Es suficientemente sensible Que tan rpido tendremos el resultado Necesitamos equipo muy complejo para hacer la prueba Que nivel de especializacion tiene que tener la persona que realiza las pruebas Ayudar nuestro trabajo a disminuir el riesgo de trasmisin materno fetal

Tamizaje en labor y partos

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Fase Post analitica: Despus de realizar la

prueba Registro adecuado de resultados en libro de trabajo. A quin le doy el resultado, al medico, a la paciente. Tengo otras pruebas para confirmar resultados positivos.

Bioline VIH 3.0 Estndar Diagnostic

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Principio: Anlisis

Inmunocromatogrfico Prueba de 3ra. generacin Interpretacin:Visual Muestras: Suero, plasma y sangre (EDTA) Volumen de muestra:10l Tiempo:20 minutos Sensibilidad: 100.0% Especificidad: 99.4%

Experiencias
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Performance of a Rapid Immunochromatographic Screening Test for Detection of Antibodies to Human Immunodeficiency Virus Type 1 (HIV-1) and HIV-2: Experience at a Tertiary Care Hospital in South India
Theophilus-Sunder Vijayakumar, Shoba David, Kavitha Selvaraj, Thiruppavai Viswanathan, Rajesh Kannangai, and Gopalan Sridharan*
Department of Clinical Virology, Christian Medical College, Vellore, Tamil Nadu PIN 632004, India *Corresponding author. Mailing address: Department of Clinical Virology, Christian Medical College, Vellore 632 004, Tamil Nadu, India. Phone: 91-416-2282312. Fax: 91 (416) 2232035. E-mail: g_sridharan/at/yahoo.com . Received March 16, 2005; Revised May 9, 2005; Accepted May 16, 2005.


Oraquick Instanscreen Determine

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DETERMINE: Prueba rpida Caractersticas:

Principio: Anlisis

Inmunocromatogrfico Interpretacin:Visual Muestras: Suero, plasma y sangre (EDTA) Volumen de muestra:50l Tiempo:30-35 minutos Sensibilidad: 99.6% Especificidad: 99.4%

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Principio: Ensayo

Immunocomb II Caractersticas:

inmunoenzimtico Indirecto. Interpretacin:Visual Muestras: suero y plasma Volumen:50l Tiempo: 60 minutos Sensibilidad: 100% Especificidad: 99.4% No necesita equipo automatizado
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ORAQUICK Caractersticas
Principio: Anlisis

Inmunocromatogrfico Interpretacin:Visual Muestras: Suero, plasma y sangre completa y fludo oral. Tiempo:30-35 minutos Sensibilidad: 99.6% Especificidad: 99.4%

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PROCESAMIENTO DE LAS MUESTRAS

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Uso de bata Uso de guantes

Recomendaciones de bioseguridad
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Orden en la mesa de trabajo

Recipiente especial para transporte de muestras de

sangre. NO TRANSPORTAR MUESTRAS EN GUANTES. Descarte adecuado de desechos (agujas, jeringas y tubos)

Diagnostico de casos de VIH positivos

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2 pruebas de tamizaje: diferente

principio inmunolgico con resultados iguales.

Prueba Rpida + ELISA ELISA + Prueba Rpida ELISA + ELISA Prueba Rpida + Prueba Rpida

Recomendacin: OMS

Consideraciones Especiales del Diagnstico de VIH

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Nios < de 18 meses hijos de madre VIH positiva:

Todas las pruebas de anticuerpos dan resultados Positivos. Un resultado positivo con pruebas de anticuerpos no siempre indica infeccin por VIH. El diagnostico se establece con mtodos directos de diagnstico y sospecha clnica. Se debe dar seguimiento con pruebas de anticuerpos hasta los 18 meses

Carga Viral y apoyo al diagnostico de VIH

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La sensibilidad es alta La especificidad:

Neonato: < 97%: (4 sem)

Tomar en consideracin cargas virales > 30,000 Y no se deben tomar decisiones medicas con una sola determinacin de CV

Ejemplo: Para 1000 personas Especificidad del Test: 99.6%

4/1000
Para una prevalencia de VIH del 10%

Verdaderos Positivos = 10 Falsos positivos = 4 Valor predictivo positivo = 100/104 = 96% Para una prevalencia de VIH del 0.4%:
Verdaderos Positivos = 4 Falsos positivos = 4

Valor predictivo positivo = 4/8 = 50%

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